Биологические свойства вирулентных штаммов вируса болезни Марека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Чичерина, Екатерина Александровна

• Чичерина, Екатерина Александровна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Чичерина, Екатерина Александровна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ 5

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ' 11

1.1 Общая характеристика болезни 11

1.2 Классификация и номенклатура 13

1.3 Устойчивость вируса к воздействию физико-химических факторов

1.4 Эпизоотологические особенности возбудителя 18

1.5 Патогенез болезни Марека 20

1.5.1 Клиническая картина болезни 27

1.5.2 Патологоанатомические изменения 28

1.5.3 Гистопатологические изменения 32

1.6 Иммунитет 38

1.7 Диагностика 45

1.8 Заключение по обзору литературы 47

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 50

2.1 Материалы исследований 50

2.1.1 Вирусы и вируссодержащий материал 50

2.1.1.1 Изолят вируса болезни Марека 50

2.1.1.2 Штамм «Мс15» вируса болезни Марека 51

2.1.1.3 Штамм «3004» ВБМ 51

2.1.1.4 Вакцина «Марек-3» 51 2.1.1.5В акцина «Бимарек» 5 2 2.1.1.6 Вакцина «Тримарек» 52

2.1.2 Куриные эмбрионы 52

2.1.3 Растворы и реактивы для культивирования клеток 53

56

57

2.1.4 Сосуды и аппараты ' 53

2.1.5 Лабораторные животные 53

2.2 Методы исследования 53

2.2.1 Приготовление культуры клеток 53

2.2.2 Культивирование вируса болезни Марека 55

2.2.2.1 Культивирование вируса на культуре клеток 55

2.2.2.2 Культивирование вируса при заражении куриных эмбрионов на хориоаллантоисную оболочку

2.2.2.3 Культивирование вируса .при заражении куриных эмбрионов в желточный мешок

2.2.3 Определение инфекционной активности вируса 57

2.2.4 Контроль на стерильность 58

2.2.5 ' Контроль отсутствия контаминации посторонними вирусами

2.2.6 Определение генетической принадлежности штамма с помощью ПЦР и нуклеотидного секвенирования

2.2.7 Вскрытие птиц и отбор проб ' 60

2.2.8 Количественный анализ копий генома вируса болезни Марека с помощью полимеразной цепной реакции в реальном

60

времени

2.2.9 Статистическая обработка полученных результатов 61

2.3 Результаты собственных исследований 62

2.3.1 Выделение вирулентного изолята ВБМ из органов больной птицы различными способами

2.3.2 Контроль стерильности и отсутствия контаминации посторонними вирусами

58

59

62

2.3.3 Определение генетической принадлежности штамма с

¿/Г

помощью ПЦР и нуклеотидного секвенирования

2.3.4 Культивирование изолята «Уогз-07» вируса болезни Марека в различных культурах клеток 67

2.3.5 Культуральные свойства изолята «Уогз-07» 70

2.3.6 Проявление патогенных свойств изолята «Уогз-07» ВБМ

73

птиц

2.3.7 Сравнение патогенных свойств-изолята «Уогз-07» и референтного вирулентного вируса БМ штамма «Мс15» "78

2.3.8 Депонирование штамма «Уогз-07» 82

3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 84

4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 89

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 91

6 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 92

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 94

8 ПРИЛОЖЕНИЯ " 113

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические свойства вирулентных штаммов вируса болезни Марека»

ВВЕДЕНИЕ 1.1 Актуальность темы

Болезнь Марека (БМ) - высококонтагиозная вирусная болезнь кур и индеек, проявляющаяся в 2-х формах: классической (с поражениями периферической и центральной нервной системы) и острой (с развитием злокачественных лимфом в висцеральных органах).

Наиболее восприимчивы куры и особенно цыплята в первые 2 недели жизни [15, 119]. Ежегодно экономический ущерб от БМ оценивают в 1 - 2 млрд. долларов [119].

В 2011г. в разных странах с целью совершенствования профилактики и контроля был проведен опрос для оценки распространения болезни Марека. Отмечалось, что распространение болезни Марека среди птиц различных направлений выращивания возросло с 2000 по 2010 гг. почти в 50% стран, принявших участие в опросе. Большинство этих стран находятся в франкоговорящей части Африки, Восточной Европе, Восточной Азии и Южной Америке [93].

Лишь 18 стран (16%) указали на то, что всё большее распространение

ч

болезни Марека, вероятно, вызвано повышением вирулентности штаммов, в то время как основным объяснением являлись другие иммунодепрессивные болезни. В качестве наиболее вероятной причины снижения количества случаев болезни Марека в 49 странах (42%) называлось возросшее использование вакцины СУ1988/Шзреп8. В США процент заболеваемости продолжал снижаться в течение последних 10 лет и достиг рекордного минимума в 2007г. (0.0008%) [93].

Методов лечения БМ не существует, в связи с чем борьба с заболеванием направлена на улучшение условий содержания, изоляцию молодняка птиц от источника инфекции, использование генетически устойчивых линий кур, и самое главное, на применение вакцинации [27].

На протяжении последних лет зарегистрированы вспышки БМ, вызванные высоковирулентными вирусами, в том числе в стадах вакцинированных птиц. Для

профилактики болезни используют вакцины, изготовленные из штаммов трех серотипов вируса в различных комбинациях [27].

За последние годы отмечено повышение вирулентности возбудителя болезни Марека (ВБМ) [104, 130, 180]. Основная причина изменения патогенности вируса БМ заключается в мутациях специфических вирусных генов, изменяющих время индукции опухолей, снижающих скорость репликации in vitro и т.д. Данная эволюция ВБМ, возможно, является результатом иммунологического процесса, вызванного систематической поголовной вакцинацией, а также возможной рекомбинацией с другими вирусами [42, 50]. Биологические свойства циркулирующих на территории Российской Федерации (РФ) вирулентных вирусов птиц остаются недостаточно изученными.

Все перечисленные вопросы являются актуальными для птицеводства и требующими своего решения, что послужило основной предпосылкой для изучения биологических свойств современных вирулентных изолятов ВБМ в РФ.

Поэтому целью наших исследований стало изучение биологических свойств новых вирулентных штаммов вируса, циркулирующих на территории РФ, и сравнение их с известными референтными штаммами.

1.2 Степень разработанности проблемы

Вопросам выделения изолятов вируса болезни Марека посвящены исследования отечественных авторов [7, 20, 30, 46], тем не менее в предыдущие годы определить и сравнить вирулентность штаммов не представлялось возможным из-за отсутствия соответствующих методик.

Оценкой вирулентности полевых изолятов в последнее десятилетие занимались в Лаборатории онкологических болезней птиц (ADOL, США), где был разработан «золотой стандарт». Это метод патотипирования вирусов болезни Марека, основан на оценке их способности вызывать лимфо-пролиферативные изменения у птиц с различной степенью иммунной защиты против БМ. Было предложено использовать референтные вакцинные штаммы и полевые изоляты разной вирулентности для заражения генетически чувствительной к вирусу БМ линии птицы [68]. В ADOL для этих исследований использовали специально

выведенную линию кур, чувствительную к ВБМ, что затрудняло широкое использование этого метода. В ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН в методе патотипирования «Best Fit» также использовали восприимчивую птицу [15].

1.3 Цель и задачи исследования

Цель диссертационной работы заключалась в изучении биологических свойств полевых изолятов ВБМ. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- отработать способы выделения полевых вирусов болезни Марека;

- подобрать чувствительную культуру клеток для репродукции полевых изолятов;

- изучить культуральные свойства изолятов;

- изучить патогенные свойства полученных изолятов на птице;

- оценить степень патогенности полевых вирусов болезни Марека в сравнении с референтным высоковирулентным штаммом ВБМ.

, 1.4 Научная новизна результатов исследования

В результате проведенных работ подобран способ выделения полевых изолятов вируса болезни Марека.

Получен новый российский вирулентный штамм «Vors-07», относящийся к 1 серотипу вируса болезни Марека.

Подобрана система культивирования полевых вирусов болезни Марека на примере штамма «Vors-07», и изучены его культуральные свойства.

Изучено патогенное действие штамма «Vors-07» и оценена степень его патогенности в сравнении с референтным штаммом «Md5» ВБМ.

1.5 Теоретическая и практическая значимость исследования

По результатам проведенных исследований предложен контрольный штамм «Vors-07». Проведено его депонирование в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ». В ходе выполнения научно-исследовательских работ по теме

диссертации разработаны, комиссионно проверены, одобрены и утверждены ученым советом ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие методики:

1. «Методические рекомендации по выделению высокопатогенных изолятов вируса болезни Марека»;

2. «Методические указания по дифференциации вакцинных штаммов «3004» и «ИлБрепБ» вируса болезни Марека серотипа 1 от полевых вариантов с помощью полимеразной Цепной реакции»;

3. «Методические рекомендации по определению титра антител к вирусу болезни Марека в сыворотках крови кур в непрямом варианте иммуноферментного анализа».

Разработан комплект научной документации на контрольный штамм «Уогб-07» ВБМ.

1.6 Основные положения диссертационной работы, выносимые на

защиту

- оптимальный способ первичного выделения полевых вирусов БМ;

- результаты сравнитёльной оценки чувствительности различных культур клеток для культивирования штамма «Уогб-07» ВБМ;

- культуральные свойства штамма «Уогз-07», инфекционная активность, размер фокусов, оптимальное время культивирования;

- сходство российского штамма «Уогб-07» с высоковирулентным референтным штаммом «Мс15» по степени патогенности для цыплят.

1.7 Соответствие диссертации паспорту научной специальности

В соответствии с формулой специальность 06.02.02. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» представляет собой' область науки, изучающую систематику, структуру, физиологию, биохимию, генетику, экологию патогенных микроорганизмов (бактерий, вирусов, грибов), имеющих ветеринарное значение, эпизоотологические и экологические закономерности возникновения, распространения инфекционных болезней и иммунологию сельскохозяйственных,

домашних и диких животных, изучающую и разрабатывающую методы, средства и организационные основы диагностики, лечения, профилактики и ликвидации этих болезней. В диссертационной работе приведены результаты исследований по разработке методов выделения полевых изолятов ВБМ из патматериала, полученного от больной птицы, изучению их биологических и патогенных свойств.

Результаты научного исследования -соответствуют пунктам 1, 3, 4, 5, 6 паспорта специальности.

1.8 Степень достоверности и апробация результатов исследования

Достоверность полученных результатов подтверждается их статистической обработкой, рекомендованной С. Гланцем [9]. Материалы диссертационной работы были представлены на конференции, посвященной 50-летию ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2008 г., на XI Международном симпозиуме по болезни Марека и герпесвирусам птиц в Берлине в 2012 г. и на ученых советах ФГБУ «ВНИИЗЖ» с 2007 по 2012 гг. . '

1.9 Публикации научных исследований

По теме диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 4 работы в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

1.10 Структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 125 страницах компьютерного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы, методы, собственные исследования, обсуждение, выводы и практические предложения. Список литературы включает 180 источников, в том числе 46 - на русском языке. Работа иллюстрирована 6 рисунками и 7 таблицами.

1.11 Место выполнения работы

Исследования по теме диссертационной работы выполнены в 2006-2015 гг. на базе лаборатории профилактики болезней птиц (сектор культуральных вакцин) и референтной лаборатории вирусных болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ».

1.12 Личный вклад автора Основной , объем • исследований выполнен автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены при консультативной и методической помощи сотрудников лаборатории профилактики болезней птиц и референтной лаборатории вирусных болезней птиц. Автор выражает искреннюю признательность сотрудникам, оказавшим методическую и консультативную помощь при выполнении отдельных разделов диссертационной работы.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Общая характеристика болезни

Болезнь Марека является наиболее распространенным лимфо-пролиферативным заболеванием кур, которое характеризуется развитием злокачественных лимфом в висцеральных органах (острая форма) и поражением нервов (классическая форма). В естественных условиях к болезни Марека наиболее чувствительны куры. Отчетливо проявляется возрастная устойчивость птицы. Наиболее восприимчивы цыплята в первые 2 недели жизни. Поголовное инфицирование происходит к 8-20-недельному возрасту. Заболеваемость у невакцинированного поголовья при острой форме болезни может достигать 60-80 % [3, 5,43, 119].

Раньше не было четкой характеристики заболевания. В зависимости от места локализации поражений БМ весьма разнообразна по клиническим признакам и патологоанатомическим проявлениям. Это привело к появлению множества терминов, применяющихся для идентификации болезни.

Инфильтрация одноядерных клеток в периферических нервах ведет к их увеличению и вызывает паралич. Воспалительный характер некоторых поражений периферических нервов был определен названием полиневрит. Впоследствии стали применять синонимы этого названия, такие, как неврит,

< ч

нейролимфоматоз птиц и птичий паралич.

Инфильтрация одноядерных клеток в радужной оболочке вызывает различные изменения, от депигментации до помутнения. На этой основе появилось много терминов, таких, как слепота, серый глаз, ирит, увеит и глазной лимфоматоз.

Опухолевые поражения внутренних органов и мышц часто называют просто висцеральным лимфоматозом, а поражения кожных покровов — колен ым лейкозом.

В 1961 г. Biggs [54]-предложил использовать термин болезнь Марека, чтобы провести четкое различие между этим состоянием и другими этиологически

отличными лимфопролиферативными заболеваниями. Этот термин получил широкое распространение.

БМ, являясь наиболее распространенной болезнью кур, встречается во всех странах мира. В России заболевание впервые отмечено в 30-40-е г. XX века. В 1970 г. в СССР обнаружили острую форму болезни Марека [20]. Вскоре отечественные исследователи обнаружили большое количество птицеводческих хозяйств, неблагополучных по БМ [14, 22]. В связи с этим возросла необходимость в изучении данного заболевания, разработке мер контроля и борьбы с ним [7, 19, 20].

. БМ наносит существенный ущерб промышленному птицеводству. Однако определить истинный уровень заболеваемости сложно, т.к. в различных странах существуют разные системы отчетности.

До появления вакцин уровень заболеваемости был нестабильным, что было связано, в основном, со случаями эпизоотического распространения в определенных географических зонах. Потери были особенно велики в тех местах, где интенсивно выращивали бройлеров. У кур риск заболеваемости остается самым высоким, даже после вакцинации. Имеется несколько сообщений, на основании которых можно предположить существование исключительно вирулентных штаммов вируса болезни Марека [94, 136, 145, 177, 179].

За последние 50 лет после изоляции вируса изменилось вызываемое им заболевание. Со временем инфекция становится все более острой, тяжелой. Увеличилось количество хозяйств, не благополучных по БМ. Основная причина изменения ■ патогенности вируса болезни Марека заключается в мутациях специфических вирусных генов, отвечающих за время индукции опухолей, снижение скорости репликации in vitro и т.д.

Данная эволюция возбудителя болезни Марека, возможно, является результатом приспособления к иммунологическим процессам, вызванного систематической поголовной вакцинацией, а также возможной рекомбинацией с другими вирусами [42].

• 13

H.G. Purchase [139] отмечал сезонность заболевания. В зимние месяцы потери от болезни выше, чем в летние. Есть предположение, что это связано со снижением циркуляции воздуха в зимний период.

До широкого применения вакцин против болезни Марека в странах с развитым промышленным птицеводством из каждых 20 кур одна погибала от болезни Марека [139]. В настоящее время вакцинация не обеспечивает 100% защиту, поэтому потери продолжаются.

1.2 Классификация и номенклатура

. Вирус, вызывающий болезнь Марека — это герпесвирус, относящийся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Marek's disease-likeviruses, которые характеризуются выраженным тропизмом к Т-лимфоцитам [42]. Вирус болезни Марека является прототипным вирусом группы ВБМ и обозначается как серотип 1.

У индеек и кур, соответственно, были выделены две дополнительные группы неонкогенных герпесвирусов. Их также относят к группе ВБМ. Неонкогенные штаммы вируса обозначаются как ВБМ серотипа 2. А герпесвирусы индеек, названные ВГИ (вирус герпеса индеек) на основе ранее принятой терминологии [ПО], обозначаются как вирусы серотипа 3. Классификация по серотипам для штаммов ВБМ и вируса герпеса индеек [57, 58] базируется на признании общих и индивидуальных антигенных эпитопов для каждого серологического типа. Если не оговорено иным образом, под термином вирус болезни Марека понимаются вирусы первого серотипа.

Морфология и морфогенез вируса болезни Марека рассмотрены в работах S. Kato и К. Hirai [114] и К.А. Schat [39]. В целом вирусные частицы аналогичны тем, которые описаны для других вирусов герпеса. Вирионы обычно присутствуют в ядрах клеток. Гораздо реже они встречаются в цитоплазме или внеклеточном гтространстве. Различия у в размерах вирионов обусловлены различием в углеводном компоненте [160].

В тонких срезах инфицированных клеточных культур наблюдаются шестиугольные безоболочечные частицы или нуклеокапсиды диаметром 85-100 нм и частицы, покрытые оболочкой, диаметром 150-160 нм [4].

Вирусные частицы, наблюдавшиеся исследователями в негативно окрашенных препаратах лизированного эпителия перьевых фолликул (ЭПФ), имели размер 273-400 нм. Они были покрыты суперкапсидной оболочкой и обладали неоднородной аморфной структурой [43, 62, 86]. Препараты тонких срезов эпителия перьевых фолликулов показывают большое количество частиц вируса герпеса с цитоплазматической оболочкой в ороговевающих клетках.

Вирусные частицы в клетках эпителия перьевых фолликулов образуют осмиофильные включения в цитоплазме клеток и состоят из электронноплотного материала [64]. Капсид вириона состоит из 162 капсомеров, они представляют собой полые цилиндры длиной 9-12 нм. Сердцевина кольцеобразного нуклеокапсида представлена 2-мя круглыми пересекающимися пластинками, края которых электронноплотные. Центр нуклеокапсида светлый.

Спонтанная рекомбинация среди трех известных в настоящее время серотипов вируса болезни Марека до сих пор не была выявлена. Вероятнее всего она встречается редко, хотя сопутствующие инфекции в тех же тканях или клетках [100] достаточно часты. Однако у всех трех серотипов при последовательном пересеве in vitro быстро изменяются молекулярные или биологические характеристики [78, 153, 174, 176].

Были описаны чувствительные к температуре ts-мутанты вируса болезни Марека [176] и мутант вируса герпеса индеек, резистентный к ингибированию фосфонацетатом. Описано увеличение вирулентности и изменения биологических свойств вируса болезни Марека во время обратного переноса in vivo [175] Описаны рекомбинации генетического, материала с другими вирусами. Культивирование вируса болезни Марека вместе с ретровирусом птиц in vitro приводит к спонтанному включению в геном вируса болезни Марека LTR-последователыюстей провирусов у ретровирусов [142].

Первый cepomim ВБМ

Штаммы этого серотипа значительно различаются по патогенности: от авирулентных до сверхвирулентных изолятов. Увеличение вирулентности штаммов ВБМ прослеживается в течение всего XX века. Многие годы болезнь Марека была классической болезнью, вызываемой вирусами умеренной вирулентности. Однако в 80-90 годы XX века в хозяйствах стали обнаруживать высоковирулентные штаммы вирусов болезни Марека (названные «особо вирулентными») в стадах кур, длительное время вакцинированных препаратами ВГИ [172]. В настоящее время отмечено появление «более вирулентных» штаммов, например, штамм 684А.

В связи с этим R.L. Witter [171] предложил классифицировать вирулентные штаммы 1 серотипа ВБМ на три патотипа: «вирулентные», «особовирулентные» и «особовирулентные +».

Смертность птицы от БМ после заражения штаммами 1 серотипа варьирует от 0,2 до 79,9%.

«Особовирулентные» штаммы вируса болезни- Марека RB-1B, А1а-8

■к

вызывают значительный отход от БМ как у невакцинированной, так и вакцинированной ВГИ птицы. Вирулентные вирусные штаммы серотипа 1, такие как Jm, GA и HPRS-16 вызывают значительный отход от болезни Марека со сравнительно коротким инкубационным периодом только у чувствительной к болезни птицы.

Слабовирулентные или классические штаммы HPRS-17 и Сопп-1 индуцируют опухоли только у незначительного числа цыплят. В основном они вызывают поражения нервов. Наименьшей онкогенностыо среди вирусов 1 серотипа обладают штаммы, подобные CU-2, которые крайне редко индуцируют опухоли, или вызывают только изменения в нервных клетках. .

Второй серотип ВБМ

Вирусы, изолированные от клинически здоровой птицы и первоначально описанные как апатогенные и низкопатогенные штаммы ВБМ, впоследствии на основе данных реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и реакции диффузной

преципитации в агаровом геле (РДПГ) были выделены в отдельный серотип вируса герпеса кур (ВГК).

Штамм SB-1 ВГК не вызывает неопластических поражений у иммунной и иммунодепрессивной птицы. Отмечены небольшие литические поражения у иммунодепрессивной птицы, в связи с чем вирус более точно был определен как неонкогенный, чем апатогенный. Описано образование лимфом внутренних органов у 2 из 48 цыплят, привитых штаммом HPRS-24 ВБМ [175]. Вирусы этого серотипа легко распространяются воздушным путем.

После введения суточным цыплятам вирус может быть выделен на 5-6 день. Вирус достигает наивысшего титра в пределах 2-4 недель и персистирует в течение длительного периода. Антитела образуются быстро и сохраняются длительное время.

Третий серотип ВБМ

Антигенно-родственный вирусу болезни Марека вирус герпеса индеек изолировали Witter et al. [110] при исследовании домашних индеек как возможного промежуточного хозяина и резервуара возбудителя болезни Марека в природе.

Третий серотип включает апатогенные, неонкогенные штаммы вируса герпеса индеек и имеет широкое распространение в коммерческих индюшиных стадах. Кроме того, сообщалось о выделении вируса герпеса индеек у диких индеек. Среди кур вирус также становится широко распространенным из-за его применения суточным цыплятам в вакцинах для предотвращения болезни Марека.

У индеек вирус быстро распространяется среди зараженных стад; все индейки становятся инфицированными й вырабатывают антитела в течение нескольких недель. Вирус созревает в эпителии перьевых фолликулов и выбрасывается в окружающую среду с ороговевшим эпителием. Вертикальную передачу вируса не наблюдали. В экспериментальных условиях вирус может передаваться от индеек курам, однако такая передача, вероятно, редка в полевых условиях [178].

Fabricant et al. [168] сравнили ранний патогенез вируса герпеса индеек у кур и индеек. У кур инфекцию, вызванную вирусом герпеса индеек, не обнаружили, тогда как у индеек, зараженных вирусом герпеса индеек, обнаружили в тимусе положительные по вирусному антигену клетки на 4-14 день после заражения, однако цитолитическую инфекцию в тимусе или бурсе не наблюдали.

Вирус герпеса индеек можно обнаружить у инфицированных кур в течение длительного времени, а антитела — в течение всей жизни.

1.3 Устойчивость вируса к воздействию физико-химических факторов

ВБМ и ВГИ существуют в клеточно-ассоциированном или клеточно-свободном состояниях и различаются по устойчивости к воздействию внешних факторов.

Клеточно-ассоциированные штаммы вируса болезни Марека или вируса герпеса индеек могут храниться при низких температурах (минус 196°С) с использованием стандартных методов {61]. Однако инфекционность таких вирусов напрямую связана с жизнеспособностью клеток, содержащихся в этих препаратах. При идеальных условиях период выживания вируса в разбавленных вакцинах на основе клеточно-ассоциированных вирусов может составлять 2-6 часов.

Клеточно-свободные препараты вируса болезни Марека, полученные из кожных покровов инфицированных кур, становились неактивными при обработке в течение 10 минут при рН ниже 3 или рН выше 11 или хранении в течение 2 недель при + 4 °С, 4 дней — при + 25 °С, 18 часов — при + 37 °С, 30 минут — при + 56 °С и 10 минут — при-+ 60 °С. Свободные от клеток вирусы болезни Марека из кожных покровов и/или ассоциированный с клетками вирус герпеса индеек, выращенный в культуре клеток, можно хранить при температуре минус 70 °С или лиофилизировать [64].

Перхоть, подстилка и перья от инфицированных кур инфекционны. Предполагают, что они содержат клеточно-свободный вирус из эпителия перьевых фолликулов, связанных с продуктами распада клеток. Инфекционность таких материалов сохранялась в течение 4-8 месяцев при комнатной температуре

и, по крайней мере, в течение 10 лет при +4 °С. Тем не менее инфекционность пропадала при 10-минутной обработке химическими дезинфицирующими средствами [66, 106]. На выживание вируса в подстилке оказывает неблагоприятное воздействие повышенная влажность.

На эффективность вакцин на основе клеточно-ассоциированных или клеточно-свободных вирусов может оказывать неблагоприятное воздействие температура хранения, метод восстановления, выбор разбавителя, а также время хранения и температура разбавленного препарата [27].

1.4 Эпизоотологические особенности возбудителя

Естественные н экспериментальные хозяева

БМ в природе обнаруживали у кур, индеек, перепелов, фазанов, лебедей, уток и куропаток. Устойчивыми к лабораторному заражению ВБМ-1 являются японские перепела (Cotumix cotumix Japónica) [69], голуби [5], воробьи и млекопитающие, в том -числе хомяки, крысы, игрункообразные и обезьяны

S

(макаки-резус, индийский макак и другие) [83, 105].

Куры являются основными природными хозяевами ВБМ.

Пути передачи инфекгрш

Распространение вируса происходит при прямом или непрямом контакте птиц, преимущественно воздушным путем [56]. Эпителиальные клетки в слое кератинизации перьевых фолликулов являются местом репликации полностью инфекционного вируса и служат источником заражения окружающей среды. Вирус, связанный с перьями и перхотью, является инфекционным [62]. Зараженная пыль птичников остается инфекционной в течение, по крайней мере, нескольких месяцев при температуре + 20-25 °С и в течение нескольких лет при температуре + 4 °С [71].

Многие клинически здоровые птицы являются носителями инфекции, способными передавать ее. Инфекция сохраняется, вероятно, в течение всей жизни [117]. Широкое распространение инфекции объясняют наличием латентной инфицированной птицы и устойчивостью вируса.

Исследования, касающиеся передачи инфекции и носительства вируса болезни Марека, рассмотрены R.L. Witter [173]. Известно, что жуки-чернотелки (Alphitobiiis diaperinus) являются пассивными носителями вируса, тогда как живущие в подстилке клещи, москиты и кокцидийные ооцисты не связаны с передачей инфекции. *

Что касается вертикальной передачи вируса болезни Марека, то есть сведения, что цыплята, полученные из яиц кур неблагополучных хозяйств и выращенные в изоляции, не заболевали. Кроме того, передача вируса от матери потомству в результате наружного заражения яиц также маловероятна из-за плохой выживаемости вируса при температуре и влажности выведения цыплят в инкубаторе [66].

На экспериментальную передачу инфекции суточным цыплятам оказывает влияние вид вводимого вирусного материала, а именно инокуляция в организм (крови, суспензий опухолевых тканей или клеточно-свободных вирусов) или заражение прямым или непрямым контактом с инфицированными птицами. Интратрахеальное введение или ингаляция с использованием клеточно-свободного вируса также является очень эффективным способом экспериментальной передачи инфекции. При инокуляции суспензий с опухолевыми клетками всегда есть опасность индуцирования опухолей за счет трансплантации клеток. Однако трансплантация не является обычной причиной развития поражений у экспериментальных птиц.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Чичерина, Екатерина Александровна, 2015 год

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Адаптация штамма Md5 вируса болезни Марека к культуре фибробластов эмбрионов кур / Е. А. Чичерина, Е. В. Курненкова, М. И. Шульпин [и др.] // Рос. вет. журн. С.-х. животные. Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". - 2008. - Сент. - С. 73-74.

2. Афонюшкин, В.Н. Поиск ПЦР-системы, оптимальной для скринпнговых технологий контроля болезни Марека / В.Н. Афонюшкин, B.C. Городов, Ю.Г. Юшков//БИО.-2005, № 1.-С. 12-13.

3. Болезнь Марека http://www.vetexpert.ru/ content/articles-15.php (дата обращения 25.05.2012)

4. Баринский, И.Ф. Герпесвирусы / И.Ф Баринский // Медицинская вирусология / под общ. ред. Д.К. Львова - М., 2008. - С. 260-266.

5. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина // М: ВНИТИБП, 1998. - 928.

6. Волкова, О.В. ' Основы гистологии с гистологической техникой / О.В. Волкова, Ю.К. Елецкий // М.: «Медицина», 1971.-271 с.

7. Выделение от индеек вируса герпеса, антигенно родственного вирусу болезни Марека / C.B. Лавров, Н.П. Мазуренко, И.Ю. Черкаховская [и др.] // Физико-химические и биологические свойства некоторох онкогенных вирусов". -Рига, 1975.-С. 186-193.

8. Выявление вируса болезни Марека трех серотипов с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции / М.И. Шульпин, E.H. Чернышева, И.А. Чвала [и др.] // 1-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству. - М., 2005. - с. 161-163.

s

9. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц; Пер. с англ. под ред. H. Е. Бузикашвили и Д.В. Самойлова - М., «Практика», 1999. - 460 с.

10. Госманов, Р.Г. Ветеринарная вирусология / Р.Г. Госманов, •М.Н. Колычев // М: КолосС, 2006. - 304 с.

11. Демкин Г.П. Патоморфология, патогенез и диагностика болезней сельскохозяйственных животных. К патоморфологии острой болезни Марека у кур. / Г.П. Демкин // М.: Колос, 1980. - С. 207-208.

12. Деревлева, Т.А. Применение вирус-вакцины против болезни Марека / Т.А. Деревлева, P.A. Зубцова // Ветеринария. - 1976. - № 6. - С. 53-54.

. 13. Диагностика инфекционного энцефаломиелита птиц / В.Н. Ирза, В.А. Лобанов, A.B. Борисов [и др.]. // Ветеринария с.-х. животных. - 2005. - № 10. - С. 39-43.

14. Дроздов Б.И. Некоторые эпизоотологические особенности острой формы болезни Марека: автореф. дис. ... канд. биол. Наук - Тарту, 1975. - 22 с.

15. Дудникова, Е.К. Патотипирование полевых изолятов вируса болезни Марека, выделенных на территории РФ в 2001-2005 гг. методом «Best fit» / E.K. Дудникова, С.Н. Норкина, Т.И. Алипер [и др.] // Вопросы вирусологии. - М.: 2009.-№1.-С. 36-41.

. 16. Как распознать болезнь Марека? http://ptitcevod.ru/bolezni-ptic/virusnye-bolezni/kak-raspoznat-bolezn-mareka.html (дата обращения 12.01.2013)

17. Клинико-морфологическая дифференциация неопластических заболеваний у птиц / И.И. Барабанов, О.Н. Виткова, В.В. Михайлова, И.В. Копылова // Ветеринария в птицеводстве. - 2005, № 1. - С. 4 - 15.

18. Коровин, Р.Н. Биологический контроль вирус-вакцины против болезни Марека / Р.Н. Коровин // Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. по вет. Вирусологии. -М.: 1973.-С. 150-151.

19. Коровин, Р.Н. Опухолевые, болезни птиц / Р.Н. Коровин,

B.П..Зеленский // М.: Колос,-1984. - С. 134г205.

20. Коровин, Р.Н. Проблемы экспериментальной онкологии и лейкозов человека и животных / Р.Н. Коровин // Современное состояние исследований в области эпизоотологии и иммунологии болезни Марека. - 1979. - С. 217-223.

21. Коровин, Р.Н. Производственные испытания отечественной вирус-вакцины против болезни Марека / Р.Н. Коровин // Ветеринария. - 1974. - № 12. -

C. 54-55.

22. Коровин, Р.Н. Характеристика штаммов вирусов острой формы болезни Марека / Р.Н. Коровин // Ветеринария. - 1973. - № 11. - С. 47-49.

23. Королев, A.M., Патоморфологическая диагностика болезни Марека у цыплят / A.M. Королев, Р.Н Коровин // Совершенствование технол. приемов и вет.-сан. мероприятий а птицеводстве: сб. науч. Тр. / Всесоюз. научно-исслед. И технол. ин-т птицеводства - Сергиев посад, 1978. - Т. 46. - С. 84-90.

24. Кудрявцев, Ф.С. Аэрозольная вакцинация цыплят при болезни Марека // 3-ей Всесоюз. конф. По аэрозолям. - Ереван, 1977. - Т. 3. - С. 60.

25. Культивирование вакцинных штаммов вируса болезни Марека / LLLK. Куляшбекова, A.A. Гусев, В.И. Давыдова, JI.H. Чучвага [и др.] // Пробл. инфекц. Патологии с.-х. ж-ных: Тез. докл. конф. - Владимир, 1997. - С. 145-146.

26. Культивирование штамма Md5 вируса болезни Марека на различных культурах клеток куриных эмбрионов / Ё. В. Курненкова, Ш.К. Куляшбекова, Е.А. Кулакова [и др.] // Вет. патология. - 2007. - № 4(23). - С. 154-157.

27. Куляшбекова Ш.К., Борисов A.B., Дрыгин В.В. Болезнь Марека. -Владимир: Транзит-ИКС, 2008. - 214 е., ил.

28. Куляшбекова Ш.К., Мельников В.П., Курненкова Е.В. Методические рекомендации по приготовлению клеточно-ассоциированного вируса болезни Марека. - Владимир, 2000. - 10 с.

29. Лукина, В.А., Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии / В.А. Лукина, И.А. Хорьков // Промышленное производство отечественной культуральной вирус-вакцины против болезни Марека // Актуальные вопросы вет. Вирусологии тез. докл. 5-ой Всесоюз. вет. Вирусолог, конф. - Казань, 1980. - С. 125."

30. Мазуренко, Н.П. Изучение некоторых герпесвирусов птиц и человека / Н.П. Мазуренко//Вирус рака и лейкоза. - М., - 1974.-С. 171-182.

31. Метод выявления вируса болезни Марека серотипа 1 с помощью ПЦР в режиме реального времени / М.И. Шульпин, A.A. Пяткина, Т.И. Ерошина, Н.С. Мудрак // Молекулярная диагностика - 2010: сб. тр. VII Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием. - М., 2010. - Т. 2. - С. 200-202.

32. Методические указания по выявлению генома и штаммовой дифференциации вируса ньюкаслской болезни с использованием ПЦР и прямого секвенирования / JT.O. Щербакова, И.П. Пчелкина, В.В. Дрыгин [и др.] // ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир. 2007.

33. Методические указания по индикации вируса инфекционной анемии кур с использованием полимеразной цепной реакции / В.А. Лобанов, В.В. Дрыгин, A.B. Борисов [и др.]. // ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир. 2007 г.

34. Методические указания по индикации вируса синдрома снижения яйценоскости с использованием полимеразной цепной реакции и секвенирования фрагмента гена фибера / В.А. Лобанов, В.В. Дрыгин, A.B. Борисов[и др.]. // ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир. 1997 г.

35. Методические указания по индикации генома вируса болезни Марека птиц различных серотипов методом полимеразной цепной реакции и

ч

секвенированием фрагмента гена GB / C.B. Полехин, А.Г. Аминев, В.Г. Андреев [и др.]. // ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир: 1997 г.

36. Методические указания по индикации генома и дифференциации штаммов и изолятов птичьего ортореовируса с использованием полимеразной цепной реакции / Д.Б. Андрейчук, С.Н. Колосов, В.В. Дрыгин [и др.]. // ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир. 2007 г.

37. Методические указания по индикации генома и штаммовой дифференциации вируса инфекционного бронхита кур методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и.секвенированием вариабельной области S1 гена / Ю.В. Бочков, В.В. Дрыгин, A.B. Борисов [и др.].7/ ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир. 1997 г.

38. Методические указания по индикации генома и штаммовой дифференциации вируса инфекционной бурсальной болезни методом полимеразной цепной реакции и секвенированием вариабельной области гена VP2 / Л.О. Щербакова, В.В. Дрыгин, A.B. Борисов [и др.] // ФГУ ВНИИЗЖ. -Владимир. 1997 г.

39. Никитин, Е.Е. Опыт приготовления вакцины против болезни Марека кур в промышленных условиях / Е.Е. Никитин // Тез. докл. Всесоюз. межвуз. науч. конф. По вет. вирусологии. - М., 1973.-ч. 1.-С. 148-149.

40. Профилактика болезни Марека. Вакцины от болезни Марека http://meduriiver.com/Medical/Microbiology/1016.html (дата обращения 20. 10. 2012)

41. Проявление патогенных свойств штамма MD5 вируса болезни Марека у цыплят / Е.А. Чичерина, Ш.К. Куляшбекова, А.В. Борисов [и др.] // Ветеринарная патология. - 2010. - №2. - С. 3 8-41.

42. Семейство герпес-вирусов -на современном этапе. - URL: http://www.lvrach.ru/2004/05/4531295/ (дата-обращения 12.01.2011).

43. Семейство Herpesviridae http://mgavm.ru/upload/medialibrary/ld8/ sxirroofswqrxulzvg%20Heфesviridae%20idehuokciqaqctolkfazlt.pdf (дата обращения 25.03.2012)

44. Соотношение величины инфекционного титра и интенсивности ПЦР для вируса болезни Марека / А.А. Пяткина, М.П. Шульпин, Ш.К. Куляшбекова, А.В. Борисов // Актуальные проблемы инновац. развития вет. науки и практики. Т. 56. Сборник науч. тр., посвящ. 105-летию ин-та / ТОО «КазНИВИ». - Казань, 2010. — С. 285-289.

45. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., 'Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных: справочник. - М.: Агропромиздат, 1991. - 526 е.: ил.

46. Яковлева, Л.Д. Изучение свойств штамма Кекава вируса болезни Марека в опытах на цыплятах / Л.Д. Яковлева, Н.П. Мазуренко, В.И. Виноградов // Вопросы вирусологии. - 1973. - № 5. - С. 588-594.

47. Absolute quantitation of Marek's disease virus genome copy number in chicken feather and lymphocyte samples using real-time PCR / Baigent S.J., Petherbridge L.J., Howes K. [et al] // J. Vir. Meth. - 2005. - Vol. 123. - P. 53-64.

48. Absolute quantification of a very virulent Marek's disease virus dynamic quantity and distributions in different tissues'/ Z. Zhang, S. Liu, C. Ma [et al.] // Poult Sci.-2015 Mar 31.

\

49. A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens. Marek's disease / ed. D.E. Swayne, J.R. Glin, M.W. Jackwood; Am. Assoc. Avian Pathologists. - 1998. - P. 116-124.

50. A recombinant field strain of Marek's disease (MD) virus with reticuloendotheliosis virus long terminal repeat insert lacking the meq gene as a vaccine against MD / S.Su, N. Cui,Y.Zhou [et al.] // Vaccine. - 2015. - Vol. 33. - P. 596-603.

51. An enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies to Marek's disease virus / Y.-Q. Cheng, L.F. Lee, E.J. Smith [et al.] // Michigan. - 1984. -Vol. 28, №4. -P. 900-910.

52. Antin, P.B., Isolation and characterization of an avian miogenic cell line / P.B.Antin, C.P. Ordahl // Devel. Biology - 1991. - № 143 - P. 111-121.

53. Benton, W.J. The increased incidence of visceral lymphomatosis in broiler and replacement birds / W.J. Benton, M.S. Cover // Avian Dis. - 1957. - Vol. 1. -P. 320327.

54. Biggs, P.M. A discussion on the classification of the avian leucosis complex and fowl paralysis / P.M. Biggs // Br. Vet. J. - 1961. - Vol. 117. - P. 326-334.

55. Biggs, P.M. Marek's disease / P.M. Biggs // The Herpesviruses / ed. A.S. Kaplan. - NY, 1973. - P. 557-594.

56. Biggs, P.M. Spread of Marek's disease / P.M. Biggs // Marek's Disease / ed. L.N. Payne. Boston, MA, 1985.-P. 329-340.

57. Bulow, V.V. Differentiation between strains of Marek's disease virus and turkey herpesvirus by immunofluorescence assays / V.V .Bulow, P.M. Biggs // Avian Pathol. - 1975. - Vol. 4. - P. 133-146.

58. Bulow. V.V. Precipitating antigens associated with Marek's disease viruses and a herpesvirus of turkeys / V.V .Bulow, P.M. Biggs // Avian Pathol. - 1975. - Vol. 4. -P. 147-162.

59. Burgess S.C. A quantitative duplex PDR technique for measuring amounts of

\

cell-associated Marek's disease virus: differences in two populations of lymphoma cells / S.C. Burgess, T.F. Davison // J. Virol. Methods. - 1999. - Vol. 82. - P. 27-37.

60. Buscaglia, С. Maintenance of Marek's disease herpesvirus latency in vitro by a factor found in conditioned medium / C. Buscaglia, B.W. Calnek // J. Gen. Virol. -1988. - Vol. 69. - P. 2809-2818.

61. Calnek, B.W. Болезнь Марека / B.W. Calnek, R.L. Witter // Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц: пер. с англ. под общ. ред. Б.У.Калнека. 2003.-С. 426-465.

62. Calnek, B.W. Feather follicle epithelium: A source of enveloped and infectious cell-free herpesvirus from Marek's disease / B.W. Calnek, H.K. Adidinger, D.E. Kahn // Avian Dis. - 1970. - Vol. 14. - P. 219-233.

63. Calnek, B.W. Genetic Resistance / B.W. Calnek // Marek's disease / ed. L.N. Payne. - Boston, MA, 1985. - P. 293-328.

64. Calnek, B.W. Lyophilization of cell-free Marek's disease herpesvirus and a herpesvirus .from turkeys / B.W. Calnek, S.B. Hitchner, H.K. Adidinger // Appl. Microbiol. - 1970. - Vol. 20. - P.723-726.

65. Calnek, B.W. Localization of viral antigen in chickens infected with Marek's disease herpesvirus / B.W. Calnek, S.B. Hitchner // J. Natl Cancer Inst. - 1969. - Vol. 43.-P. 935-949.

66. Calnek, B.W. Survival and disinfection of Marek's disease virus and the

7 ч

effectiveness of filters in preventing airborne dissemination / B.W. Calnek, S.B. Hitchner // Poultry Sci. - 1973. - Vol. 52. - P. 35-43.

67. Calnek, B.W. Influence of age at exposure on the pathogenesis of Marek's disease / B.W. Calnek // J. Natl Cancer Inst. - 1973. - Vol. 51. - P. 929-939.

68. Calnek, B.W. Pathogenesis of Marek's disease virus-induced local lesions. 2. Influence of virus strain and host genotype / B.W. Calnek, B. Lucio, K.A. Schat // Advances in Marek's Dis. Res. / ed. S. Kato, T. Horiuchi, T. Mikami, K. Hirai; Jap. Assoc. Marek's Dis. - Osaka, Japan, 1989. - P. 324-330.

69. Calnek, B.W. Marek's disease / B.W. Calnek [et al.] // In Diseases of Poultry, Iowa, 1972. - P. 470.

70. Calnek, B.W. Marek's disease: a model for herpesvirus oncology / B.W. Calnek // CRC Crit. Rev. Microbiol. - 1986. - Vol. 12. - P. 293-320.

71. Calnek, B.W. Marek's disease virus and lymphoma / B.W. Calnek // Oncogenic Herpesviruses / ed. P. Rapp. - Boca Raton, FL, 1980. - P. 103-143.

72. Calnek, B.W. Establishment of Marek's disease lymphoblastoid cell lines from transplantable versus primary lymphomas / B.W. Calnek, K.K. Murthy, K.A. Schat // Intern. J. Cancer. - 1978. - Vol. 21. - P. 100-107.

73. Calnek, B.W. Modification of Marek's disease pathogenesis by in ovo infection or prior vaccination / B.W. Calnek, K.A. Schat, J. Fabricant // Viruses in Naturally Occurring Cancers. / ed. M. Essex, G. Todaro, H. zur Hausen - NY, 1980. Vol. 7.-P. 185-197. v

74. Calnek, B.W. Marek's disease / B.W. Calnek, R. L. Witter // Diseases of Poultry. - Ames, Iowa, 1991. - P. 342-385.

75. Characterization of cytotoxicity-related gene expression in response to virulent Marek's disease virus infection in the bursa of Fabricius / Chen C.Y., Xie Q.M., Xue Y., [et al] // Research in Veterinary Science. - 2013, Vol. 94, P. 496-503.

76. Characterization of Marek's disease virus-infected lymphocytes: Discrimination between cytolytically and latently infected cells / W.R. Shek, B.W. Calnek, K.A. Schat, C.-L.H. Chen // J. Natl Cancer Inst. - 1983. Vol. 70. - P. 485-491.

77. Chronological change of feather pulp lesions during the course of Marek's disease virus-induced lymphoma formation in field chickens / R. Moriguchi, M. Oshima, F. Mori [et al.] // Advances in Marek's Disease Research / ed. S. Kato [et al.]; Jap. Assoc. Marek's Dis: - Osaka, Japan, 1989. - P. 338-343.

78. Classification of Marek's disease virus according to pathotype - philosophy and methodology / R.L. Witter, B.W. Calnek, Buscaglia C. [et al.] // Avian Pathol. -2005.-Vol. 31.-P. 525-538.

79. Colwell, W.M. Studies on acute Marek's disease. VI. Body temperatures of infected chickens / W.M. Colwell, S.C. Schmittle // Avian Dis. - 1968. - Vol. 1 - P. 716-723. *

80. Comb lesions and mortality patterns in white leghorn layers affected by Marek's disease // H.E. Ekperigin, A.M. Fadly, L.F. Lee [et al.]. Avian Dis. - 1983. -Vol. 27.-P 503-512.

81. Comparison of different methods for the detection of Marek's disease virus / K. Krol, E. Samorek-Salamonowicz, W. Kozdrun, G. Wozniakowski // Med.weter. -2009; Vol.65, №2.-P. 99-101

82. Comparison of glycoprotein D (gD) genes of Marek's disease virus and herpesvirus of turkeys / V. Zeinik, L.J.N. Ross, G.D. Smith [et al.] // Proc. 4th Intern. Symp. Marek's Dis. / ed. G. de Boer, S.H.M Jerissen. - Wageningen, Amsterdam, The Netherlands, 1992.-P. 114-117.

83. Control of Marek's disease in the Netherlands. I. Isolation of an avirulent Marek's disease virus (strain CVI988) and its use in laboratory vaccination trials / B.H. Rispens, H.J. Van Vloten, N. Mastenbroek [et al.] // Avian Dis. - 1972. - Vol. 16. - P. 108-125.

84. Delecluse, H.-J. Status of Marek's disease virus in established lymphoma cell lines: Herpesvirus integration is common / H.-J. Delecluse, W. Hammerschmidt // J. Virol. - 1993. - Vol. 67. - P. 82-92.

85. Delecluse, H.-J. Marek's disease virus can be activated from its chromosomally integrated state in herpesvirus-transformed lymphoma cells / H.-J. Delecluse, S. Schuller, W. Hammerschmidt // Eur. Mol. Biol. Organ. J. - 1993. -Vol. 12.-P. 3277-3286.

86. Denesvre, C. Marek's Disease Virus Morphogenesis / C. Denesvre // Avian Dis. - 2013, Vol. 57, P. 340-350.

87. Depression of vaccinal immunity to Marek's disease by infection with chicken anaemia agent / Y. Otaki, T. Nunoya, M. Tajima [et al.] // Avian Pathol. -1988.-Vol. 17.-P. 333-347.

88. Detection of identical B alleles in different strains of chickens: Association with resistance to Marek's disease / F. Pazderka, B.M. Longenecker, G.R.J. Law [et al.] //Anim. Blood Groups Biochem. Genet. - 1974. - Vol. 5. - R 18.

89. Development, Application, and Results of Routine Monitoring of Marek's Disease Virus in Broiler House Dust Using Real-Time Quantitative PCR / Walkden-Brown S.W., Islam A.F., Groves P.J. [et al] // Avian Dis - 2013, Vol. 57, P. 544-554.

90. DiFronzo, N.L., Schiennan L.W. Transplantable Marek's disease lymphomas. III. Induction of MHC-restricted tumor immunity by lymphoblastoid cells in F1 hosts. -Intern. J. Cancer. - 1989. - Vol. 44. - P. 474-476.

91. DNA of a chicken herpesvirus is associated with at least two chromosomes in a chicken lymphoblastoid cell line / S.K. Hughes, E. Stubblefield, K. Nazerian, H.E. Vannus // Virology. - 1980. - Vol. 105. - P. 234-240.

92. Dukes, T.W. Avain ocular neoplasia-A description of spontaneously occurring cases / T.W. Dukes, J.R. Pettit // Can. J. Comp. Med. - 1983. - Vol. 47. - P. 33-36.

93. Dunn, J.R. Current Status of Marek's Disease in the United States and Worldwide Based on a Questionnaire Survey / J.R. Dunn, I.M. Gimeno // Avian Dis. -2013, Vol. 57, P. 483-490.

94. Eidson, C.S. Effactivanass of cell-free or cell associated turkey herpesvirus vaccine against Marek's disease in chickens as influenced by maternal antibody, vaccine dose, and time of exposure to Marek's disease virus / C.S. Eidson, R.K. Page, S.H. Klevan // Avian Dis. - 1978. - Vol. 22. - P. 583-597.

• 95. Expression of a putative tumor-associated antigen on normal versus Marek's disease virus-transformed lymphocytes / K. McColl, B.W. Calnek, W.V. Harris [et al.] // J. Natl Cancer Inst. - 1987. - Vol. 79. - P. 911-1000.

96. Field trials to test the efficacy of polyvalent Marek'ss disease vaccines in broilers / R.L. Witter, J.M. Sharma, L.F. Lee [et al.] // Avian Dis. - 1984. - Vol. 28. -P. 44-60.

97. Further characterization of Marek's diseas virus-infected lymphocytes. I. in vivo infection / B.W. Calnek, K.A. Schat, L.J.N. Ross [et al.] // Intern. J. Cancer. -1984.-Vol. 33.-P. 289-398.

- 98. Generation of a permanent cell line* that supports efficient growth of Marek's disease virus (MDV) by constitutive expression of MDV glycoprotein E / D. Schumacher, B.K. Toscher, J.P. Teifke [et al.] // J. Gen. Virol. - 2002. - Vol. 83. -P. 1987-1992.

99. Goodchild, W.M. Some observations on Marek's disease (fowl paralysis) / W.M. Goodchild // Vet. Rec. - 1969. - Vol. 84. - P. 87-89.

100. Growth of MDV II in MDCC-MSB1 -41C / S. Nii, M. Yamada, M. Yoshida [et al.] //Advances in Marek's Dis. Res. Jap. Assoc. of Marek's Dis. / ed. S Kato [et al.] - Osaka, Japan, 1989.-P. 197-203.

101. Haq, K. Immunity to Marek's disease: Where are we now? / K. Haq , K.A. Schat , S. Sharif // Developmental & Comparative Immunology - 2013, Vol. 41, p. 439-446.

102. Herpesvirus infection enhances cholesterol and cholesteryl ester accumulation in cultured arterial smooth muscle cells // C.G. Fabricant, D.P. Hajjar, C.R. Minick, J. Fabricant // Am. J. Pathol. - 1981. - Vol. 105.-P. 176-184.

103. Higgins, D.A. Fowl immunoglobulins: Quantitation in birds genetically resistant and susceptible to Marek's disease / D.A. Higgins, B.W. Calnek // Infect Immun. - 1975. - Vol. 12. - P. 360-363.

104. Hildebrandt, E. Characterizing in vivo stability and potential interactions of a UL5 helicase-primase mutation previously shown to reduce virulence and in vivo replication of Marek's disease virus / E. Hildebrandt, J. Dunn, H.H. Cheng // Virus Res. -2015.

105. Hlozanek, L. Lack of pathogenicity of Marek's disease herpesvirus and herpesvirus of turkeys for mammalian hosts and mammalian cell cultures / L. Hlozanek, V. Sovova // Polia Biol. - 1974. - Vol. 20. - P. 51-58.

106. Identification and sequence analysis of the homologs of the herpes simplex virus type 1 glycoprotein H in Marek's disease virus and the herpesvirus of turkeys / S.D. Scott, G.D. Smith, L.J.N. Ross, M.M. Binns // J. Gen. Virol. - 1993. - Vol. 74. -

P. 1185-1190. ' .

■k

107. Immune complex-mediated glomerulopathy in Marek's disease / H.K. Pradhan, G.C. Mohanty, W.Y. Lee [et al.] // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1988. -Vol. 19. - P. 165-171.

108. Inverted repeat nucleotide sequences in the genomes of Marek's disease virus and the herpesvirus of the turkey / J. Cebrian, C. Kaschka-Dierich, N. Berthelot, P.Sheldrick // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 1982. - Vol. 79. - P. 555-558.

109. In vitro infection of T-lymphoblasts with Marek's disease virus / B.W. Calnek, K.A. Schat, E.D. Heller, C. Buscaglia // Proc. Int. Symp. Marek's Dis. / ed. B.W. Calnek, J.L. Spencer; Am. Assoc. Avian Pathologists. - Kennett Square, PA, 1985.-P. 173-187.

110. Isolation from turkeys of a cell-associated herpesvirus antigenically related to Marek's disease virus / R.L. Witter, K. Nazerian, H.G. Purchase, G.H. Burgoyne // Am. J. Vet. Res. - 1970. - Vol. 31. - P. 525-538.

111. . Isolation, identification, and whole genome sequencing of reticuloendotheliosis virus from a vaccine againstMarek's disease / J. Li, X. Dong, C. Yang [et al.] // Poult Sci. - 2015. Vol. - 94. - P. 643-649.

112. Jeurissen, S.H.M. Chicken anaemia virus influences the pathogenesis of Marek's disease in experimental infections depending on the dose of Marek's disease virus / S.H.M. Jeurissen, de G.P. Boer//Vet Q - 1993. - Vol. 14. - P. 81 - 84.

113. Jungherr, E.L. The avian leucosis complex / E.L. Jungherr, W.F. Hughes // Diseases of Poultry / ed. H.E. Biester, L.H. Schwarte. - 5th ed. - Ames, IA, 1965. - P. 512-567.

114. Kato, S. Marek's disease virus / S. Kato, K. Hirai // Adv. Virus Res. - 1985. -Vol. 30.-P. 225-277.

115. Lapen, R.F. Distribution of gross cutaneous Marek's disease lesions / R.F. Lapen, S.G. Kenzy // Poultry Sci. - 1972. - Vol. 51. - P. 334-336.

116. Lawn, A.M. Chronological study of ultrastructural changes in the peripheral nerves in Marek's disease / A.M. Lawn, L.N.,Payne // Neuropathol. Appl. Neurobiol. -1979.-Vol. 5.-P. 485-497.

117. Long term studies of Marek's disease infection in individual chickens / R.L. Witter, J.J. Solomon, L.R. Champion, K. Nazerian // Avian Dis. - 1971. - Vol. 15. - P. 346-365. .

118. Lymphoma induced by herpesvirus: Resistance associated with a major histocorqpatibility gene / B.M. Longenecker, F. Pazderka, J.S. Gavora [et al.] // Immunogenetics. - 1976. - Vol. 3. - P. 401-407.

119. Marek's disease: An evolving problem / ed. F. Davidson, V. Nair. - London: Elsevier Acad. Press, 2004. - 212.

120. Marek's disease as a model for the Landry-Barre Syndrome: Latent viral infection in nonneuronal cells is accompanied by specific immune responses to peripheral nerve and myelin / J.S. Pepose, J.G. Stevens, M.L. Cook, P.W. Lamport // Am. J. Pathol. - 1981.-Vol. 103.-P. 309-320.

121. Marek's disease in turkeys: The induction of lesions and establishment of lymphoid cell lines / P.C. Powell, K. Howes, A.M. Lawn [et al.] // Avian Pathol. -1984.-Vol. 13.-P. 201-214.

122. Marek's disease virus-induced transient paralysis: Clinical and electrophysiologic finding in susceptible and resistant lines of chickens / J.N. Komegay,

E.J. Gorgacz, M.A. Parker [et al.] // Am. J. vet. Res. - 1983. - Vol. 44. - P. 1541-1544.

\

123. Marek's disease virus isolates with unusual tropism and virulence for ocular tissues: Clinical findings, challenge studies and pathological features / M.D. Ficken, M.P. Nasisse, G.D. Boggan [et al.] // Avian Pathol. - 1991. - Vol. 20. - P. 461 -474.

124. Moscovici, C. Continuous tissue culture cell lines derived from chemically induced tumors of Japanese quail / C. Moscovici, M.C. Lai // Cell. - 1977. - Vol. 11.— P. 95-103.

125. Nature of genetic resistance to Marek's disease in chickens / L.F. Lee, P.C. Powell, M. Rennie [et al.] // J. Natl Cancer Inst. - 1981. - Vol. 66. - P. 789-796.

126. Nazerian, K. Pathiogenesis of Marek's disease.in turkeys / K. Nazerian, J.M. Sharma // Proc. Intern. Symp. Marek's Dis. / ed. B.W. Calnek, J.L. Spencer; American Association of Avian Pathologists; Kennett Square, PA, 1985. - P. 262-267.

127. Nicholls, T.J. Marek's disease in sixty week-old laying chickens / T.J. Nicholls // Aust Vet J. - 1984. - Vol. 61. - P. 243.

128. Ocular manifestations of Marek's disease / T.W. Smith, D.M. Albert, N. Robinson [et al.] // Invest. Ophthalmol. - 1974. - Vol. 13. - P. 586-592.

129. Pappenheimer, A.M. A study of fowl paralysis (neurolymphomatosis gallinarum) / A.M. Pappenheimer, L.C. Dunn, V. Cone // Storrs. Agric. Exp. Stn. Bull. -1926.-Vol. 143.-P. 187-290.

130. Pathogenic characteristics ofMarek's disease virus field strains prevalent in China and the effectiveness of existing vaccines against them / Y.P. Zhang, Z.J. Li, K.Y. Bao [et al.] // Vet Microbiol. - 2015 Jan

131. Pathogenesis of infection with attenuated Marek's disease virus strains / K.A. Schat, B.W. Calnek, J. Fabricant, D.L. Graham // Avian Pathol. - 1985. - Vol. 14. -P. 127-146.

132. Pathogenesis of Marek's disease virus-induced local lesions. !. Lesion characterization and cell line establishment / B.W. Calnek, B. Lucio, K.A. Schat, H.S. Lillehoj // Avian Dis. - 1989. - Vol. 33. - P. 291-302.

133. Payne, L.N. Studies on Marek's disease. II. Pathogenesis / L.N. Payne,

P.M. Biggs // J. Natl Cancer Inst. - 1967. - Vol. 39. - P. 28 N302.

\

134. Payne, L.N. Pathogenesis of Marek's disease / L.N. Payne, J.A. Frazier, P.C. Powell // Intern. Rev. Exp. Pathol. - 1976. - Vol. 16. - P.59-154.

135. Payne, L.N. Response of B and T lymphocytes and other blood leukocytes in chickens with Marek's disease / L.N. Payne, P.C. Powell, M. Rennie // Cold Spring Hard. Symp. Quant.Biol. - 1974. - Vol. 39. - P. 817-826.

136. Powell, P.C. Isolation of very virulent pathotypes ofMarek's disease virus from vaccinated chickens in Europe / P.C. Powell, F. Lombardini // Vet. Rec. - 1986. -Vol. 118.-P. 688-691.

137. Pratt, W.D. Characterization of reticuloendotheliosis virus-transformed

%

avian T-lymphoblastoid cell lines infected with Marek's disease virus / W.D. Pratt, R.W. Morgan, K.A. Schat // J Virol. - 1992. - Vol. 66. - P. 7239-7244.

138. Purchase, H.G. Characterization of five isolates of Marek's disease / H.G. Purchase, P.M. Biggs // Res. Vet. Sci. - 1967. - Vol. 8. - P. 440-449.

139. Purchase, H.G. Clinical disease and its economic impact / H.G. Purchase // Marek's Disease / ed. L.N. Payne - Boston, MA, 1985. - P. 17-24.

140. Quere, P. Suppression mediated in vitro by Marek's disease virus-transformed T-lymphoblastoid cell lines: Effect on lymphoproliferation / P. Quere // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1992. - Vol. 32. - P. 149-164.

141. Replication kinetics and shedding.of very virulent Marek's disease virus and vaccinal Rispens/CVI988 virus during single and mixed infections varying in order and interval between infections / T. Islam , S.W. Walkden-Brown , K.G. Renz [et al.] // Vet Microbiology. -2014. Vol. 173. - P. 208-223

142. Retroviral insertions into a herpesvirus are clustered at the junetions of the short repeat and short unique sequences / D. Jones, R. Isfort, R. Witter [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1993. - Vol. 90. - P. 3855-3859.

143. Rziha, H.J. Circular forms of viral DNA in Marek's disease virus-transformed lymphoblastoid cells / H.J. Rziha, B. Bauer // Arch. Virol. - 1982. - Vol. 72. - P. 211-216.

. 144. Schat, K.A., Characterisation of two highly oncogenic strains of Marek's disease virus / K.A. Schat, B.W. Calnek, J. Fabricant // Avian Pathol. - 1982. - Vol. 11. -P. 593-605.

145. Schat, K.A. Influence of oncogenicity of Marek's disease virus on evaluation of genetic resistance / K.A. Schat, B.W. Calnek, J. Fabricant // Poultry Sci. -1981.-Vol. 60.-P. 2559-2566.

146. Schat, K.A. Characteristics of the virus / K.A. Schat // Marek's Disease / ed. L.N. Payne, Boston, MA, 1985. - P. 77-112.

147. Schumacher, D. Generation of a .permanent cell line that supports efficien growth of Marek's disease • virus (MDV) by constitutive expression of MDV glycoprotein E / D. Schumacher [et al.] // J Gen Virol. - 2002. - № 83. - P. 1987- 1992.

148. Schwahn, D.J. Pathology in practice. Marek's disease / D.J. Schwahn, M.S. W. Rassette // J Am Vet Med Assoc. - 2013, Vol. 242, P. 1495-1497.

149. Settnes, O.P. Marek's disease - A common naturally herpesvirus-induced lymphoma of the chicken/ O.P. Settnes // Nord Veterinaenned. Suppl. - 1982. - P. 11132.

150. Sevoian, M. Avian lymphomatosisi. II. Experimntal reproduction of the ocular form / M. Sevoian, D.M. Chamberlain // Vet. Med. - 1962. - Vol. 57. - P. 608609.

151. Sevoian, M. Avian Lymphomatosis. I. Experimental reproduction of the neural and visceral forms / M. Sevoian, D.M. Chamberlain, F.T. Counter // Vet. Med. -1962.-Vol. 57.-P. 500-501.

152. Shih, J.C.H. Discovery of noninfectious viral genes complementary to Marek's disease herpes virus in quail susceptible to cholesterol-induced atherosclerosis /J.C.H. Shih, R. Pyrzak, J.S. Guy//J. Nutr. - 1989. - Vol. 119.-P. 294-298.

153. Silva, R.F. Restriction endonuclease analysis of Marek's disease virus DNA: Differentiation of viral strains and determination of passage history / R.F. Silva, J.C. Bamett // Avian Dis. - 1991. - Vol. 35. - P. 487-495.

154. Smith, M.W. High virulence Marek's disease virus infection in chickens previously infected with low-virulence' virus / M.W. Smith, B.W. Calnek // J. Natl Cancer Inst. - 1974. - Vol. 52. - P. 1595-1603.

155. Studies on the etiology of Marek's disease. I. Propagation of the agent in cell culture / J.J. Solomon, R.L. Witter, K. Nazerian, B.R. Burmester // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1968.-Vol. 127.-P. 173-177.

156. Surface antigens on Marek's disease lymphoblastoid tumor cell line / K.A. Schat, C.-L.H. Chen, W.R. Shek, B.W. Calnek // J. Natl Cancer Inst. - 1982. - Vol. 69. -P. 715-720.

157. Swayne, D.E. Marek's disease virus-induced transient paralysis in chickens: Alterations in brain density / D.E. Swayne, O.J. Fletcher, L.W. Schiennan // Acta Neuropathol. - 1988. - Vol. 76. - P. 287-291.

158. Swayne, D.E. Marek's disease virus-induced transient paralysis in chickens: Demonstration of vasogenic brain oedema by an immunohistochemical method / D.E. Swayne, O.J. Fletcher, L.W. Schiennan // J. Comp. Pathol. - 1989. - Vol. 101. - P. 451-462.

159. Syngeneic and allogeneic cell-mediated cytotoxicity against Marek's disease lymphoblastoid tumor cell lines / Schat K.A., Shek W.R., Calnek B.W. [et al] // Int J Cancer - 1982.-Vol. 29.-P. 187-194.

160. The glycoprotein B genes of Marek's disease virus serotypes 2 and 3: Identification and expression by recombinant fowlpox viruses / S. Yoshida, L.E. Lee, N. Yanagida, K. Nazerian // Virology. - 1994. - Vol. 200. - P. 484-493.

161. The occurrence of chicken foetal antigen after infection with Marek's disease virus in three strains of chicken / P.C. Powell, K.J. Hartley, B.M. Mustill, M. Rennie // Oncodev. Biol. Med. - 1983. - Vol. 4. - P. 261-271.

162. The relationship between the alternative exon 7 splice variant of the BF gene and MHC-related Marek's diseaseresistance in chickens / Y.C. Jin, L. Huang, X.X. Wei [et al.] // Scand J Immunol. - 2014. Vol. - 80. - P. 323-326.

163. Theis, G.A. Subpopulations of suppressor in chickens infected with cells of a transplantable lymphoblastic leukemia / G.A. Theis // Infect. Immunity - 1981. - Vol. 34.-P. 526-534.

164. Tillotson, J.K. Accumulation of viral transcripts coding for a DNA binding protein in Marek's disease tumor cells / J.K. Tillotson, L.F. Lee, H.J. Kung // Advances in Marek's Disease Research / ed. S. Kato [et al.]; Jap. Assoc. Marek's Dis. - Osaka, Japan, 1989.-P. 128-134.

165. Transformation of T-lymphocyte subsets by Marek's disease herpesvirus / K.A. Schat, C.L. Chen, B.W. Calnek, D. Char // J. Virol. - 1991. - Vol. 65. - P. 14081413.

166. Vaccination and reduced cohort duration can drive virulence evolution: marek's disease virus and industrialized agriculture / Katherine E.A., Andrew F.R., Nicholas J.S. [et al] // Islam, AFM Fakhrul; Walkden-Brown, Stephen W.; Woolhouse, Mark E. J. Evolution. 2013, Vol. 67, P. 851-860.

167. Venugopal, K. Molecular pathogenesis of Marek's disease - Recent development / K. Venugopal, L.N. Payne // Avian Pathol. - 1995. - Vol. 24. - P. 597609.

168. Virus-induced atherosclerosis // C.G. Fabricant, J. Fabricant, M.M. Litrenta, C.R. Minick // J. Exp. Med. - 1978. - Vol. 148. - P. 335-340.

169. Virus-induced atherosclerosis // D.P.Hajjar, C.G. Fabricant, C.R. Minick, J. Fabricant // Am. J. Pathol. - 1986. - Vol. 122,- P. 62-70.

170. Wight, P.A.L. The histopathology of the central nervous system in fowl paralysis / P.A.L. Wight // J. Comp. Pathol. Ther. - 1962. - Vol. 72. - P. 348-359.

171. Witter, R.L. Characteristics of Marek's disease viruses isolated from vaccinated commercial chicken flocks: Association of viral pathotype with lymphoma frequency / R.L. Witter //Avian Dis. - 1983. - Vol. 27. - P. 113-132.

172. Witter, R.L. Classification of Marek's disease virus according to pathotype -philosophy and methodology / Witter R.L. [et al.] // Avian Pathology. - 2005. - № 31.-P. 525-538.

173. Witter, R.L. Epidemiology of Marek's disease - A review. Oncogenesis and Herpesviruses / R.L. Witter // ed. P.M. Biggs, G. de The, L.N. Payne. - Lyon, France, 1972.-P. 111-122.

174. Witter, R.L. Biologikal diversity among serotype 2 Marek's disease viruses / R.L. Witter, L.P. Lee, J.M. Sharma // Avian Dis. - 1990. - Vol. 34. - P. 944-957.

175. Witter, R.L. New serotype 2 and attenuated serotype 1 Marek's disease vaccine viruses: Comparative efficacy / R.L. Witter // Avian Dis. - 1987. - Vol. 31. - P. 752-765.

176. Witter, R.L., Offenbecker L. Nonprotective and temperature-sensitive variants of Marek's disease vaccine viruses / R.L. Witter // J. Natl Cancer Inst. - 1979. -Vol. 62. - P. 143-151.

177. Witter, R.L. Review: Vaccines and vaccination against Marek's disease // Proc. Intern. Symp. Marek's Dis. / ed. B.W. Calnek, J.L. Spencer; Am. Assoc. Avian Pathologists. - Kennett Square, PA, 1985. - P. 482-500.

178. Witter, R.L. Experimental infection of turkeys and chickens with a herpesvirus of turkeys (HVT) / R.L. Witter, J.J. Solomon // Avian Diseases. - 1972. -Vol. 16. - P. 34-44.

179. Witter, R.L. Pathogenicity of variant Marek's disease virus isolants in vaccinated and unvaccinated chickens / R.L. Witter, J.M. Sharma, A.M. Fadly // Avian Dis. - 1980. - Vol. 24. - P. 210-232.

180. Wozniakowski, G. Molecular evolution of Marek's disease virus (MDV) field strains in a 40-year time period / G. Wozniakowski, A.E. Samorek-Salamonowicz // Avian Dis. -2014/ Vol. 58. - P. 550-557.

8 ПРИЛОЖЕНИЯ

Полная последовательность гена Meq референтных штаммов «3004», Md5 и изолята «Vors - 07» вируса болезни Марека

10 20 30 40 50 60

3004 CTTTCGGGTCTGTGGGTGTTGCTTTTTTAATTATTATTTTGGTTCGGGGAGGTTGGTGCT

Md5 .......................................;......•..............

\

Vors - 07 ..............

70 80 90 100 110 120

3004 GGAATGTTAAGAATAAATTCCGCACACTGATTCCTAGGCAGGCGTCTCTTGCAGGTGTAT

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

130 140 150 ' 160 170 180

3004 ACCAGGGAGAAGGCGGGCACGGTACAGGTGTAAAGAGATGTCTCAGGAGCCAGAGCCGGG

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

190 200 210 220 230 240

3004 CGCTATGCCCTACAGTCCCGCTGACGATCCGTCCCCCCTCGATCTTTCTCTCGGG1CGAC Md5 ............................................................

Vors -

07

250 • 260 270 280 ' 290 300

3004 TTCGAGACGGAAAAAAAGGAAAAGTCACGACATCCCCAACAGCCCCTCCAAACACCCCTT

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

310 320 330 340 350 360

3004 с с с t g ас ggcctatct gaggaggagaaacagaagc т ggaaaggaggagaaaaaggаат с g

Md5 ................................'............................

Vors -07 ...........................■.....'............................

370 380 390 400 410 420

3004 TGACGCCTCTCGGAGAAGACGCAGGGAGCAGACGGACTATGÏA GACAAACTCCATGAAGC

Md5 .......G.................A..................................

Vors - 07 .......G..........................T.........................

430 440 450 460 470 480

3004 ATGTGAAGAGCTGCAGAGGGCCAATGAACACCTACGTAAGGAAATTCGAGATCTAAGGAC

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

490 500 510 520 530 540

3004 TGAGTGCACGTCCCTGCGTGTACAGTTGGCTTGÏCATGAGCCAGTTTGCCCTATGGCGGT

Md5 ............................................................

550 560 570 580 590 600

3004 ACCCCTAACGGTGACCCTTGGACTGCTTACCACCCCGCACGATCCCGTTCCTGAACCTCC

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................. . . .'............................

610 620 630 640 650 660

3004 CATTTGCACTCCTCCACCTCCCTCACCGGATGAACCTAACGCTCCACATTGCTCCGGTTC

Md5

Vors - 07 ............................................................

670 680 690 700 710 720

3004 CCAACCTCCTATCTGTACCCCCCCTCCTCCCGATACGGAGGAACTTTGCGCCCAGCTCTG

\

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

730 740 750 760 770 780

3004 CTCGACCCCACCTCCCATCTCTACTCCCCATATTATCTACGCTCCGGGGCCTTCCCCCCT

Md5

Vors - 07

790 800 ' 810 ' 820 830 840

3004 CGAACCTCCTATCTGTACCCCCCCTCCTCCCGATGCGGAGGAGCTTTGCGCCCAGCTCTG

Md5

3004 Md5

Vors - 07

910 920 930 940 950 960

3004 GACCCCACCACCTCCCATCTCTACTCCCCATATTATCTACGCTCCGGGGCCTTCCCCCCT

Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

970 980 990 ' 1000 1010 1020

3004 CCAACCTCCTATCTGTACCCCCCCTCCTCCCGATGCGGAGGAGCTTTGCGCCCAGCTCTG

Md5 ......................G.....................................

Vors - 07 ......................G.....................................

1030 1040 1050 1060 1070 1080

----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I----I

3004 CTCGACCCCACCACCTCCCATCTGTACTCCCCATTCCCTCTTCTGCCCTCCCCAGCCTCC Md5 ............................................................

Vors - 07 ............................................................

1090 1100 1110 1120 1130 1140

3004 ATCTCCGGAGGGCATCTTCCCTGCATTGTGTCCTGTTACCGAGCCGTGTACCCCTCCATC

Md5 ............................................................

850 860 870 880 890 900

CTCGACCCCACCACCTCCCATCTCTACTCCCCATATTTTCTACGCTCCGGGGCTCTGCTC

3004 Md5

Vors - 07

1210 1220 1230 1240 1250 1260

3004 TCCCCCACATCCGGCTCCGGAGCCGGAGAGGCTTTATGCTCGTCTTACCGAGGATCCCGA

Md5 ................................'............................

Vors — 07 .................................4............................

1270 1280 1290 1300 1310 1320

3004 ACAGGATTCCTTGTATTCGGGCCAGATTTATATTCAGTTTCCCTCGGATATTCAGTCTAC

Md5 ................................С.................С.........

Vors - 07 ..................................................С.........

1330 1340 1350 1360 1370 1380

3004 GGTCTGGTGGTTTCCAGGTGACGGGAGACCCTGATGATCCGCATTGTGACTCTCAGCAGC Md5 ...............

Vors - 07 ............................................................

1390 1400 1410 1420 1430

3004 ACATCGTCTATGCCCCATGTTTCTTCTCCCCTAGTTATATATAATAGTTTTCATAG

Md5

1150 ■ 1160 1170 1180 • 1190 1200

GCCGGGGACGGTTTACGCTCAGCTTTGTCCTGTTGGCCAGGCTCCCCTTTTTACCCCATC .........................................T..................

ч

Номера последовательностей референтных штаммов в базе данных вепВапк:

1) штамм «3004»-ЕЙ 032468.1

2) штамм Мё5 - АБ 243438.

Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору Федеральное государственное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ» }

4

СОГЛАСОВАНО " УТВЕРЖДАЮ

Заместитель директора по НИР ' Директор ФГУ"ВНИИЗЖ"

-"В, В. Борисов ^ Е, В, Белик

•>, г. 2008г. 1 " V " ( 2008г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

по определению титра антител к вирусу болезни Марека в сыворотках крови кур в непрямом варианте иммуноферментного анализа

Авторы:

М А Волкова, вне лаб М И Шульпин с н с лас МЛ 1 Н С Мудрак, зав лзб №1" Ш К Куляшбекова зав лаб N->3 Е В Курнечкова с и с лаб N. 3 Е А Чичерина ветврзн лаЗ N¿3 8 В Дрыгин зам директооа по НИР

Рассмотрены и одобрены методкомиссиеи протокол № sV oi л < 2008 г

V теерждеиы ученым советом

протокол № от г / /008 г

Фелср.ки.шш 1м%жбд по ие1еринлрш>м\ и фи Iосашпарном\ ии.иор\ Фелералыюс П)С\ шрсшсппос > чроклсипс «(федеральный цеп 1 р охраны í шроньн /киношы\» (ФГУ «ВЛИП ГЛС»)

( ()Г. I ЧСОВДЛО

им лпр.'чюрл

не ПИР

А

чкшнюри 'I ^

(< / //* ,> <- /,>

с

Ьормлж В В

2010 I

У I ВЕРЖДАЮ

Ырс^ор Ф1 У <<В1 НП 1 Г/К"« :11с шк, в

2010 1

<< с /<

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

НО ВЫД! Л ПИК) ВЫСОКО!! МОП.ИНЫХ ПЮЛЯГОВ ВИРУС \ ЬО.ИЛИИ М \Р1 к \

\itiopi.i Чичерина I \

КЧ онлоекона III.К. К> рнепконл 1-.В.

111> ......... МЛ

Ьоржов \ В.

Расемшрено и о юбрено

М(. ¡О 1К4>МЯ1_и1К*Н

прОЮгчО 1 .V"

' • , ' с , 20 1)

Риесмофеио и \ жер/члеио

\ ченым «.очеым Л

про юкол .V; о! V'/" :<•

:ою I

г

Вла и мир 2010"

16

Федеральная иплГм по веюринарномч н фиюсашпарном\ надюр\ федеральное i ос\дари ьенное бюд/кеиюе > чреждеиие «Федеральный нешр очраны здоровья живошых» (ФГЬУ «ВИПИЗЖ»)

СОГЛАСОВАНО

^ I

зам директора

по i И IP Ь развитию

В Б Дрыпш

2/ 2012i

« (sf>1

У ГВЕРЖДАК)

Ззм,дирекз.ора по качесшч - ^ / *.' С К. Старов

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ДИФФРРН1ЦИАЦШ! ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ 3004 И R1SPFNS BHPVLAbOJll ЗИП MAPI 1С \ П РОШПЛ 1 G1 ГЮЛНЗЫХ ВАРИА1 НОВ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЬРАЗНОЙ ЦН 11 ЮН РЬАКЦИИ

Авюрьг П1)лышн М И Г.рошина 1 И 11яткина А.А. Чичерина h А М> драк I I С

Рассмофено и одобрено меюдкомиссиеи Протокол j\\i /

01

С /

201

Рассмофено >ченым совеюм и рекомендовано к у ыерждению

ПрОЮКОЛ jNi!_/

от " " О/ ' 2012 г

<1>1 ир 1 II 11.1,1 I И/Ы" 1 III 1ц. н [ЩИ 1( ним» и ф,| |м П1 и 1 а5>и | 1 (и|!\

(¡Ч){(1 ПЛО!И\,|ЮГ) федеральное I осгдарсгвенное ию гж-п нос учреждение «Федеральный нешр охраны здоровья животы»

(ФГБУ «ВШШТЖ»)

ми» н ( и и 1>| I р1 п I п I I I 111 \1 Н> 1н > яшч IЬ н I р М Нч т», о| |>\ тичипи ишмнн! т м шк | икн и 1 <>н I [и. Ш * <• н ин и л щи | ш I\ 1 |я , 1 р щ Вт I оч и и & н¡»ии I Цннр1 п пои V .к н » 5 м, нч I I м

И* ф. 31 I III III 1Н II I [I Ф ЧО П»> НЛП I Ч I III I I ]1 Гн ¡Ь Н I р I П III н \ ли II И ? 1 I I лит 1 нр I ни»

(V п<И' Ро^и ! И м шмлрекля ( . I пимпр мкр Юрьсчл! Iс 1 (4922) 2"-!'6-1 I ге! факс 26 i-nv.il лт! « л рлЬ п

.КН.. Ф(.ЛЛра.иЛ1ЫП ШкЬП Л проЧЬИГ 1СЧН0П

соои синаи1 (ФИ1К ) Роспагсша "7 1 Москва. Ьсрол,новЛ\ля на' . >0

! [ СЧ1-5

1 -m.il¡: а 1 »ptd.ru

С. НР \ ПК \.У» 41 И-4

0 депонировании штамма бн/)ии

Но и- иш Мареки (Р>1> М) <'1 о/•>-()">> (ыттро 1ьпог<>}

\ВЮПЫ ПрМ НИ ЧнЧСрИ",! [ Ч Ч|>Л I ! 11 \ МО РЛЬ'КОЬ В II Кчрилнышл 1 В ОтчоклС'В

П'ымч ВЬ"! '<\о.ч-07> |мч|||чмып1111 р. л с «.*с ць!1. ¡я<-ороп юрор Пили про с мл оо.лип н 2(!0~ I IV Ф1 1Л ВП11Ш/1. 1411441.1 ¡пк" л ! нч.л.л» к

!ч_| 1,1Ч|'0-1рЛ ¡1![~0(!,.П.|()Л к\ !,.1%рч. К СОК | Пороо ! { ! 1Ф м'рИРНО) I чр (КК

Ф'Ж), пре 1ен н ни (с 5 плисала с г 2 > 07 О1?

ПИлчм ВЬ\1 -УтуО"! (кошронл!! Ю яП!ЛС|1 к 1С\Ч1Ч!н\ 1 и и 4(1 иемели в. -I '/)/,£/<',,//ч'м и пш ро 1\ /Л. /'д п/п вм ¡\ !/./<!./ V г/;м <л< -г'п г о см s 1СриПИ1\ 1

Пк1 л.'.ич к пидчь'рчиш'о { и рит-ллиш ППРии^.л 1.1 ¡нн ¡иь'чнил! Н.|\ПШ |'!1'Р0И?И0 иП44_1ЫЬ.\ 1НКЛ1МО» В.Л1 \10!0 |ОМ ар/мою мрлл спил

Рилир N. (авюр нлп%ч тчмипе! пплмм ВЬМ < \ о!\С I к чиро чли.и1)

Мч.мн! чр. тльи ипомЛ) он.ь ио VI ,л лмма ВЬМ \o.---U7 |Кошро I пищ оиро (с юна Ко 1 кышя нпаччоь мпкроор. лил то ' Ф1 1Л Ф ч.ра ьнн.! тшр очрлоы

1 юроиьн лап* л. ныч ' (<1>1 Ь! ВШПНЖо ми . ]р<.^\ Ро^ея Н м ш\пч\ . ы иоики, В 1алим|1» мкп ¡Орьллсц

Лил 11.чо д1ронд|'лч лпре!я2(!Р

лирски>рд Ф! Ь^ <В1Ш11 Г/К > но клч^сп(,\ Р\коьо пне к. Ко ! гемши шыммон \!И1,роор|анц^моп

.гт

Г т

^ л л.

У

( К С |Д,чч,

\П1 Гама юн

/>(!И'>01 Рицин В шми[К1, ш по 1,к I ь, три 1 15 ы мцяриулнн; Юры«» и

и I . (4922) 26-0Л-14. н I ф.п.1. ^22) 21.-3^-7'^ -

I -пин!. ш,п1 1 .им,¡И й| V»,