Получение анатоксинов Actinobacillus pleuropneumoniae и изучение их свойств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Лебедев, Никита Викторович

• Лебедев, Никита Викторович
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Лебедев, Никита Викторович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения об актинобациллезной плевропневмонии свиней

1.2. Возбудитель болезни

1.2.1. Общие свойства возбудителя

1.2.2. Патогенность и вирулентность

1.2.3. Диагностика актинобациллезной плевропневмонии свиней

1.3. Бактериальные токсины и их свойства

1.4. Анатоксины и их применение в ветеринарии

1.5. Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ

2.1.1. Штаммы и изоляты микроорганизмов

2.1.2. Растворы и реактивы

2.1.3. Оборудование

2.1.4. Питательные среды

2.1.5. Краски для микроскопических исследований

2.1.6. Подопытные животные

2.1.7. Адьюванты

2.2. МЕТОДЫ

2.2.1. Культивирование бактерий

2.2.2. Световая микроскопия

2.2.3. Определение числа живых микроорганизмов

2.2.4. Биохимические свойства

2.2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле

2.2.6. КАМП-тест

2.2.7. Получение токсинов А. р1еигорпеитотае

2.2.8. Приготовление эритроцитов

2.2.9. Определение гемолитической активности штаммов

А.р1еигорпеитотае

2.2.10. Реакция гемолиза и реакция нейтрализации гемолизина

2.2.11. Получение первичной культуры альвеолярных

макрофагов свиньи

2.2.12. Определение титра цитотоксина

2.2.13. Получение нормальной и специфической сывороток крови лабораторных животных

2.2.14. Определение антигенной и иммуногенной активности экспериментального образца анатоксина против актинобациллезной плевропневмонии свиней

2.2.15. Статистика

2.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.3.1. Разработка лабораторного метода получения экзотоксинов АсйпоЪасШиь р1еигорпеитотае и изучение их биологических свойств

2.3.1.1. Определение гемолитической активности различных серотипов А.р1еигорпеитотае

2.3.1.2. Изучение динамики накопления гемолизина в процессе культивирования штамма АТСС 27088 А.р1еигорпеитотае первого серотипа

2.3.1.3. Гемолитическая активность штаммов АТСС 27088 (1 серотип) и 27089 (2 серотип) А.р1еигорпеитотае с эритроцитами барана и кролика

2.3.1.4. Влияние концентрации хлористого кальция на активность гемолизина А.р1еигорпеитотае

2.3.1.5. Влияние различных физических и химических факторов на сохранение гемолитической активности гемолизинов А.р1еигорпеитотае 1 серотипа

2.3.1.6. Определение наличия у бактерий А.р1еигорпеитотае ко-гемо лизина

2.3.1.7. Выделение экзотоксина сульфатом аммония

2.3.1.8. Цитотоксическая активность штаммов АТСС 27088 (1 серотип) и 27089 (2 серотип) A.pleuropneumoniae

2.3.1.9. Выделение экзотоксинов методом двухступенчатой ультрафильтрации

2.3.2. Разработка схемы получения анатоксина Actinobacillus

pleuropneumoniae

2.3.2.1. Схема получения актинобациллезного анатоксина

2.3.3. Изучение иммунобиологических свойств анатоксина Actinobacillus pleuropneumoniae

2.3.3.1. Реакция диффузионной преципитации сывороток иммунизированных кроликов с экстрактами токсинов A. pleuropneumoniae, St. aureus и Е. coli

2.3.3.2. Получение экспериментального образца анатоксина Actinobacillus pleuropneumoniae в смеси с адьювантом

2.3.3.3. Определение безвредности и реактогенности полученного экспериментального образца анатоксина на лабораторных животных и свиньях

2.3.3.4. Изучение антигенных и иммуногенных свойств экспериментального образца анатоксина на лабораторных животных и свиньях

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

4. ВЫВОДЫ

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

7.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение анатоксинов Actinobacillus pleuropneumoniae и изучение их свойств»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Актинобациллезная плевропневмония - инфекционное контагиозное заболевание свиней, характеризующееся септикотоксемией, геморрагической и гнойно-некротизирующей пневмонией, а также серозно-фибринозным плевритом, перикардитом и артритами.

Возбудителем болезни являются бактерии семейства Pasteurellaceae, рода Actinobacillus, вида Actinobacillus pleuropneumoniae. Это мелкие грамотрицательные, неподвижные коккобактерии и палочки. Спор не образуют; вирулентные штаммы имеют капсулу; обладают выраженным тропизмом к легочной ткани. Штаммы A. pleuropneumoniae разделяют на 15 серовариантов по капсульному антигену. Эти бактерии продуцируют четыре типа экзотоксинов - Apxl, ApxII, ApxIII, ApxIV. Некоторые исследователи склонны полагать, что экзотоксины играют доминирующую роль в патогенности бактерий A. pleuropneumoniae. Токсины возбудителя губительно действуют на альвеолярные макрофаги, нейтрофилы и лимфоциты свиней, а также вызывают коагуляционный некроз тканей.

Актинобациллезная плевропневмония свиней была впервые зарегистрирована в свиноводческих хозяйствах Великобритании, США, Швейцарии и Аргентины в 1957-1964 гг., а возбудитель болезни был выделен в 1963 году. В последующие десятилетия это заболевание было установлено в большинстве стран мира с развитым свиноводством.

Экономический ущерб от этой инфекции складывается из затрат от падежа и вынужденного убоя, снижения продуктивности животных, качества получаемой продукции, затрат, связанных с проведением профилактических и оздоровительных мероприятий. Ежегодно страны Евросоюза тратят один миллиард евро на проведение лечебно-профилактических мероприятий в борьбе с данным заболеванием.

В настоящее время актинобациллезная плевропневмония свиней широко распространена в Канаде, США, Франции, Великобритании, Италии, Дании, Финляндии, Голландии, Японии, Греции, Австралии, а также в странах Южной Африки.

Согласно последним данным на территории Российской Федерации циркулирует около 8 серовариантов A. pleuropneumoniae, но в связи с все большей глобализацией торгово-экономических отношений, вступлением нашего государства во Всемирную Торговую Организацию (ВТО), ростом миграции, увеличением импортно-экспортных торговых операций повышается вероятность появления других серовариантов возбудителя этого заболевания [52]. Из этого возникает проблема, решение которой напрямую зависит от наличия у животноводов эффективных средств специфической профилактики [12, 13, 16, 37, 44]. Все известные в мире противоактинобациллезные вакцины подразделяют на корпускулярные и субъединичные (токсоидные). Наиболее распространенными являются корпускулярные вакцины. В состав таких вакцин включают штаммы серотипов, преимущественно доминирующих в конкретном географическом регионе, а создание вакцины содержащей в своем составе антигены всех 15 серовариантов достаточно проблематично и скорее всего такая вакцина будет обладать низкой иммуногенностью.

Исходя из вышеизложенного, наиболее перспективными являются бактерин-токсоидные и субъединичные вакцины. Разработка фирмой Intervet вакцины «PORCILIS АРР», свидетельствует о возможности создания высокоэффективного препарата, имеющего в своем составе инактивированные формальдегидом экзотоксины (Apxl, ApxII, АрхШ) и очищенные белки внешней мембраны, который защищает животных против 14 серовариантов A. pleur opneumoniae.

Таким . образом, проведение работ по получению анатоксинов A.pleuropneumoniae и изучению их биологических свойства, является

актуальной задачей, имеющей важное научное и практическое значение для ветеринарии.

Степень разработанности. Несмотря на то, что актинобациллезная плевропневмония свиней не относится к особо опасным или трансграничным инфекционным заболеваниям животных, а считается лишь факторной инфекцией, ей посвящено большое число научных исследований. Существенный вклад в изучение проблемы актинобациллезной плевропневмонии свиней внесли зарубежные ученые: Shope, Nakai, Nielsen, и Frey [104, 114, 159, 186]. Их работы содержат фундаментальные основы эпизоотологии данного заболевания. В последние годы данной тематике уделяли внимание Dubreuil и Gottschalk [63, 120]. В Российской Федерации изучением актинобациллезной плевропневмонии, занимались М.А. Сидоров и Д.А. Скородумов [41, 42, 43, 45, 46, 47, 48, 49], а также научные сотрудники лаборатории профилактики болезней свиней и рогатого скота ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Цели и задачи исследования. Целью данных исследований было получение анатоксинов A.pleuropneumoniae и изучение их основных биологических свойств.

Для достижения поставленной цели, необходимо было решить следующие задачи:

изучить биологические свойства имеющихся штаммов A.pleuropneumoniae и отобрать гиперпродуценты экзотоксинов;

- разработать метод получения экзотоксинов A.pleuropneumoniae;

- изучить биологические свойства экзотоксинов A.pleuropneumoniae;

- разработать схему получения анатоксина;

изучить иммунобиологические свойства анатоксина A.pleuropneumoniae на лабораторных и естественно-восприимчивых животных.

Научная новизна. Научная новизна работы состоит в том, что в результате проведенных исследований:

- отработан метод получения и концентрирования экзотоксинов А ,р1еигорпеитотае;

- изучены биологические свойства экзотоксинов А.р1еигорпеитотае;

- разработана схема получения анатоксина;

изучены иммунобиологические свойства анатоксина А.р1еигорпеитотае\

разработан метод оценки иммуногенности полученного экспериментального образца анатоксина.

Теоретическая и практическая значимость. На основании экспериментальных данных разработаны, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», «Методические указания по определению антигенной активности анатоксин-вакцины против актинобациллезной плевропневмонии свиней».

Методология и методы исследования. Методологической и теоретической основой диссертационной работы послужили труды зарубежных и отечественных исследователей в областях эпизоотологии и профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней, токсикологии и вакцинологии.

Положения, выносимые на защиту.

- динамика накопления экзотоксинов А.р1еигорпеитотае\

- биологические свойства экзотоксинов А.р1еигорпеитотае\

условия хранения и способ консервации экзотоксинов А.р1еигорпеитотае\

технология получения и концентрирования экзотоксинов А.р1еигорпеитотае;

- схема получения актинобациллезного анатоксина;

- иммунобиологические свойства анатоксина А.р1еигорпеитотае в опытах на лабораторных животных и свиньях.

Степень достоверности и апробация результатов. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» в 2010-2013 гг., а также доложены и опубликованы в материалах конференции «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 30-летию создания СМУ ФГБУ «ВНИИЗЖ». По теме диссертации опубликовано 4 научных работы, в том числе две работы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основной объём исследований проведен автором самостоятельно. Отдельные этапы работы выполнены совместно с к.в.н. Потехиным A.B., к.в.н. Фроловцевой A.A. и к.б.н. Бьядовской О.П., за что автор выражает им искреннюю благодарность.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ ОБ АКТИНОБАЦИЛЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ

Актинобациллезная плевропневмония (АПП) - инфекционное контагиозное заболевание свиней. К болезни восприимчивы свиньи всех возрастов, но наиболее чувствительны поросята 2-4 месячного возраста. Такие факторы как скученность и плохой микроклимат в помещениях для животных, играют важную роль в распространении заболевания [1, 5, 6, 12, 14, 15,159].

Возбудитель болезни обладает выраженным тропизмом к тканям воздухоносных путей свиньи. Передача возбудителя может идти как вертикальным путем, от матки к поросенку, так и горизонтальным от больных животных здоровым [63, 145, 151, 159]. Вертикальная передача данного возбудителя происходит в более поздние сроки, чем у других патогенов, это объясняет успех в ликвидации заболевания при раннем отъеме поросят [151].

Передача возбудителя в стадах возможна воздушно-капельным путем. Экспериментально установлено, что воздушно-капельным путем заражение удается на расстоянии до 1 метра [64], при использовании актинобацилл 1 серотипа и до 2,5 метров при использовании 9 серотипа [106]. Наличие А. pleuropneumoniae в пробах воздуха, подтверждалось с помощью ПЦР диагностики [103]. Некоторые исследователи сообщают о возможности передачи A. pleuropneumoniae 1 и 2 серотипа воздушно - капельным путем на расстояния от 150 до 500 м [85, 98]. Данный феномен авторы связывают с сильным ветром [85].

Эпидемиологические исследования при актинобациллезной плевропневмонии базируются в основном на серотипировании возбудителя. Географическая распространенность различных серотипов возбудителя и их превалентность сильно варьирует в разных странах [170]. Наиболее распространенными и клинически значимыми в США являются 1, 5 и 7

серотипы, в Европе 2 и 9, а недавно описанный 15 серотип является одним из наиболее распространенных и вирулентных штаммов в Австралии [63, 73, 151]. Сообщения о выделении 15 серотипа также приходили из Канады, США, Мексики, Бразилии и Аргентины [119, 170]. В настоящее время в России циркулирует широкий спектр серотипов, включающий 2, 3, 5, 6, 8, 9 и 10. Обращает на себя внимание тенденция к увеличению числа хозяйств, неблагополучных по актинобациллезной плевропневмонии свиней. Если в 2007г. актинобациллезная плевропневмония была выявлена только в 3 хозяйствах из 82 обследованных, то в 2008г. - в 5 из 74, а в 2009г. заболевание было диагностировано уже в 21 из 102 обследованных хозяйств. Резкое увеличение числа хозяйств, неблагополучных по актинобациллезной плевропневмонии, объясняется, главным образом, двумя обстоятельствами. Во-первых, за последние годы в РФ ввезено много племенных свиней из Западной Европы и Канады, при этом актинобациллезная плевропневмония не входит в список инфекций, от которых, согласно ветеринарным требованиям, должны быть свободны ввозимые в РФ живые свиньи [10]. За счет импортного поголовья было сформировано много новых свиноводческих хозяйств, а некоторые, ранее функционировавшие в России свинокомплексы, провели полную или частичную замену поголовья. Большинство хозяйств, в которых обнаруживалась актинобациллезная плевропневмония, относились к одной из этих двух категорий. Вторая причина распространения актинобациллезной плевропневмонии - торговые операции между российскими хозяйствами: многие «старые» свинокомплексы закупают ремонтных свиней в «новых» хозяйствах, сформированных из импортных племенных животных [52]. Распространенность и превалирование серотипов А. pleuropneumoniae в разных странах мира показана в таблице 1.

Таблица 1.

Страна Циркулирующие серотипы Превалирующие серотипы Источник данных

Австралия 1,2,3,7, 12, 15 1 Eaves and Blackall et al., 1988; Gottschalk, 2007

Аргентина 1,2,3,5, 12 1 Vena et al., 1997, 1988

Бельгия 2,3,6, 7, 8, 9,11 3 Hommez et al., 1988,1990

Бразилия 1,3,4,5,7,9 3, 5 Piffer et al., 1997

В еликобритания 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 10 2,3,8 Hunter etal., 1983; Brandreth and Smith, 1985; McDowell and Ball, 1994

Венгрия 1, 2, 3, 5, 6, 7, 9, 10, И, 12 2,3,7 Fodor et al., 1989; Molnar, 1990, 1992

Венесуэла 1, 2, 3, 4, 6, 7 1 Pinda et al., 1996

Германия 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10 2, 7,9 Schimmel and Hass, 1983; Muller et. al., 1986 Kielstein and Wuthe, 1988

Голландия 1,2,3,5,7, 8, 9, 11 2, 9,11 Kamp etal., 1987

Дания 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12 2 Nielsen, 1982, 1987

Ирландия 3 3 Power etal., 1983

Испания 1,2,3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12 .2, 4, 7 Ferri et al., 1990; Gutierrez etal., 1995

Италия 1,2,3,4, 5,7 5 Dubreil et al., 2000

Канада 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 15 5,7,1,12 Rosendal etal., 1981b; Mittal et al., 1982, 1992, 1998; Gottschalk, 2007

Корея 2,3,5,7 2,5 Yeh, 1990

Мексика 1,2,3,4, 5, 6, 7, 8,9 1,8 Ciprian et al., 1988; Diazi et al., 1988; Ontiveros-Corpus etal., 1995

Норвегия 2 2 Falk et al., 1991

Польша 1,2,5,9 1,9 Molenda, 1988; Tarasiuk et al., 1991

США 1,3,5,7, 8, 9,15 1,5 Schultz et al., 1983; Hoffman et al., 1985; Rapp et al., 1985; Fales et al., 1989; Gottschalk, 2007

Таиланд 1,3,5,6, 9, 11 5, 11 Assavacheep et al., 2003

Тайвань 1,2,3,5 1,5 Hung etal., 1991; Chang and Chang, 1994

Франция 2, 3, 7, 8, 9 9 M. Kobisch, personal communication 1990

Хорватия 2, 7, 8, 9 2,9 Habrun et al., 1998

Чехия 1,2, 4, 5, 7, 12 2, 9,11 Skollova and Gois, 1987; Kucerova et al, 2005

Чили 1,5 1,5 Olivares and Morgado, 1988

Швейцария 2, 3, 7, 9 2 Nicolet, 1988, 1992

Швеция 2,3,4 2 Gunnarsson, 1978

Япония 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 15 1,2,5 Chan et al., 1978; Kume et al., 1986; Fukuyasu et al, 1991; Koyoma et al, 2007

Актинобациллезная плевропневмония может протекать в сверхострой, острой, подострой и хронической форме [63]. Клиническое проявление заболевания может зависеть от возраста, состояния иммунной системы животного, условий окружающей среды и вирулентности возбудителя [164, 185]. В пораженном стаде могут проявляться все формы течения заболевания [151].

При сверхострой форме течения заболевания, происходит внезапное ухудшение состояния животного, и повышение температуры тела до 41,5° С. Оно может сопровождаться учащением дыхания, чиханием, кашлем, рвотой, поносом, анорексией и атаксией [59]. Также могут проявляться сосудистая недостаточность и цианоз [159]. В отсутствии лечения болезнь прогрессирует достаточно быстро, и смерть может наступить в течение нескольких часов. В терминальной стадии животные принимают сидячее положение («поза сидячей собаки»), дышат через рот, а температура тела резко снижается. Пенистые кровянистые истечения из ротовой и носовой полостей, свидетельствуют о прогрессирующем отеке легких и скорой гибели [191]. Также возможна внезапная смерть, без каких-либо клинических признаков [180].

При острой форме течения болезни животные угнетены, отказываются от воды и корма, а температура тела повышается до 40,5 - 41° С [194]. Прогрессируют дыхательная и сосудистая недостаточности. Исход заболевания может быть как благоприятным, так и неблагоприятным [159].

Хроническая форма заболевания чаще всего развивается у животных переживших острую форму [159]. Хроническое течение характеризуется кратковременным повышением температуры тела, кашлем, одышкой и

поражением суставов. Хронически больные животные отстают в росте и развитии и очень чувствительны к секундарным инфекциям [63, 119]. В большинстве случаев данная форма заболевания протекает бессимптомно, а уточнение диагноза происходит на бойне [185].

Патологоанатомические изменения при сверхострой форме наблюдаются главным образом в грудной клетке. Носовая полость и трахея наполнены кровянистой жидкостью. В легких наблюдается гиперемия и сильный отек, затрагивающий сильно утолщенную соединительную ткань. Некоторые участки легких отличаются от воздушных, хоть и сильно наполненных кровью легких - очень интенсивной темно-красной окраской и толстой, безвоздушной консистенцией. Как правило, обнаруживается фибринозное воспаление плевры, которая покрыта желтым, иногда окрашенным кровью фибрином. Очаги воспаления имеют неодинаковую форму, выступают или рассеяны по всем легким, но чаще всего находятся в верхушечных и сердечных долях. На срезе они разделены расширенной соединительной тканью на вторичные участки и имеют хрупкую консистенцию (острая и подострая форма). Воспаленная ткань подвержена некрозу. При хронической форме в легких наблюдают бугорки имеющие разную форму и локализованные чаще всего в верхушечных долях. Они плотно окружены соединительной тканью, а их содержимое напоминает гной. Фибринозное воспаление плевры является переходным моментом к срастающемуся воспалению плевры и перикарда [23, 30, 34, 119].

Трахея и миндалины павших животных могут содержать пенисто-кровавый выпот. У свиней, которые переболели пневмонией, изменения в легких исчезают и остаются только очаговые участки сращений плевры.

При переболевании актинобациллезной плевропневмонией свиньи приобретают стойкий сероварспецифический иммунитет, но на долгий период времени могут оставаться субклиническими носителями возбудителя [135, 147, 149, 163, 165, 200]. Актинобациллезная плевропневмония - это

дозозависимая инфекция, и при низкой дозе возбудителя возможно бессимптомное течение инфекции [180].

Колостральный иммунитет длится до 3 месяцев [60, 84]. Но, не смотря на это, поросята с высоким уровнем антител также могут подвергаться заражению, то есть колостральный иммунитет не защищает животных от колонизации легких бактериями [60].

Основными методами по контролю возникновения и распространения актинобациллезной плевропневмонии являются: поддержание высокой санитарной культуры на свинокомплексах, вакцинация, а также антибиотикотерапия [60]. Для сохранения отрицательного статуса фермы, очень важно изолировать ее и исключить возможность попадания туда инфицированных животных. Новые животные должны приобретаться в благополучных хозяйствах и перед введением в стадо подвергаться карантинированию и исследованию [118, 149, 191]. С этой целью широко применяются серологические методы, которые используются как для мониторинга за A. pleuropneumoniae, так и для обнаружения скрыто больных животных перед перегруппировками [181]. Статус носительства может быть подтвержден, выделением бактерий A. pleuropneumoniae из патматериала, а также обнаружением с помощью ПЦР [86]. Рядом зарубежных исследователей [191] показано, что использование методики «пусто-занято», по сравнению с непрерывным циклом, в целом благоприятно отражается на здоровье и росте свиней, а также снижает распространение и тяжесть пневмоний среди свиней всех возрастов [124]. K.L. Clark в 2000 году сообщил, что ранний отъем поросят в 14-ти дневном возрасте и перевод их в другую группу препятствует заражению животных от инфицированной матки [83]. Кроме того, профилактическая иммунизация значительно снижает смертность. Тем не менее, вакцинация не препятствует заражению и бактерионосительству среди животных [57, 60, 109].

1.2. ВОЗБУДИТЕЛЬ БОЛЕЗНИ 1.2.1. Общие свойства возбудителя

Возбудителем актинобациллезной плевропневмонии является Actinobacillus pleuropneumoniae - грамм - отрицательная, неподвижная, не спорообразующая плеоморфная коккобактерия, являющаяся факультативным анаэробом. Вирулентные штаммы имеют капсулу. Возбудитель болезни относится к семейству Pasteurellacea, который включает следующие роды Actinobacillus, Haemophilus и Pasteurella. Первые изоляты А. pleuropneumoniae были выделены в 60-е годы 20-го века в Великобритании, США (штат Калифорния) и Аргентине [152, 185]. На тот момент они были классифицированы как Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus parahaemolyticus и Haemophilus pleuropneumoniae. Затем с помощью биохимических тестов, на возможность сбраживания различных Сахаров, было установлено, что это различные микроорганизмы. В 1983 году по результатам ДНК гибридизации, было установлено, что между этими тремя видами бактерий нет выраженной гомологии, и в то же время она присутствовала между Н. pleuropneumoniae и Actinobacillus lignieresii. По результатам этих исследований было предложено отнести данный микроорганизм к роду Actinobacillus и следовательно изменить номенклатуру с Н. pleuropneumoniae на Actinobacillus pleuropneumoniae [196].

А. pleuropneumoniae растет на кровяном агаре с добавлением НАД или V-фактора [1, 38, 167]. Его источником может быть Staphylococcus sp. используемый в качестве бактерии-кормилки [167]. На кровяном агаре А. pleuropneumoniae образует гемолитичные колонии диаметром 0,5-1 мм [191]. В связи с продукцией когемолизина и цитотоксинов Apxl, ApxII и ApxIII дает положительную КАМП - реакцию при сателитном росте с ß - гемолитичным St. aureus [112, 144]. В таблице 2 указаны биохимические свойства А. pleuropneumoniae используемые для идентификации микроорганизма.

По НАД - зависимости А. р1еигорпеитотае разделены на 2 биотипа. К первому биотипу относятся НАД - зависимые штаммы, а ко второму штаммы способные синтезировать НАД из специфических пиридин нуклеотидов или их прекурсоров [59]. На данный момент известны 15 серотипов А. р1еигорпеитотае, к 1 биотипу относятся все серотипы с 1 по 12 и15,а13и14 отнесены ко второму биотипу. Отмечено, что атипичные штаммы 2, 4, 7 и 9 серотипов, выделенные в Европе, могут проявлять себя как представители 2 биотипа [119]. Таблица 2.

Биохимические свойства А. р1еигорпеитотае

Тест Результат

НАД - зависимость (V - фактор) +

Гемолиз +

КАМП - тест +

Катал аза -

Уреаза +

Продукция индола -

Лизин-декарбоксил аза -

Орнитин-декарбоксилаза -

Р-галактозидаза +

Восстановление нитратов +

Глюкоза +

Маннит +

Инозит -

Сорбит -

Рамноза -

Сахароза +

Ь-арабиноза -

Галактоза +

Эскулин -

1.2.2. Патогенность и вирулентность

Многие исследователи считают, что A. pleuropneumoniae обладает несколькими факторами патогенности такими как поверхностные полисахариды [68, 138, 197], Арх токсины [111, 131], системы железо поглощения [58, 66, 138], формирование биопленок [142], компоненты анаэробного метаболизма [67, 68, 69, 77, 97, 128, 141], и белки внешней мембраны [168].

Все 15 серотипов A.pleuropneumoniae способны вызвать заболевание, но их вирулентность различна [137]. Вирулентность зависит от структуры капсулы, набора липополисахаридов и токсигенности [190, 191, 201]. Иммунный статус животного и эпизоотическое благополучие стада также играют роль в вирулентности конкретного штамма [119]. Ниже описаны три наиболее изученных фактора патогенности A. pleuropneumoniae и их роль в патогенезе.

Капсульные полисахариды (КПС)

Капсульные полисахариды A. pleuropneumoniae, являются серотип -специфичными структурами, отвечающими за антигенную характеристику всех 15 серотипов [193]. Капсула является основным компонентом защиты микроорганизма, от факторов неспецифического иммунитета, таких как фагоцитоз и система комплемента, и играет важную роль в вирулентности [63]. Капсулы имеют отрицательный заряд и состоят из единичных олигосахаридов, полимеров тейхоевой кислоты соединенных диэфир фосфатными цепями или полимеров олигосахаридов соединенных фосфатными цепями [190]. При росте на плотной питательной среде капсула A. pleuropneumoniae выглядит как блестящая кайма окружающая колонию [135]. Структура и состав КПС обуславливают различие вирулентности штаммов [63, 68]. То есть чем больше и прочнее капсула, тем вирулентней штамм [139].

Капсула A. pleuropneumoniae имеет очень низкую иммуногенную активность [109, 132]. Очищенная капсула не активирует систему комплемента и не демонстрирует токсичности [109, 202]. При внутрибронхиальном введении свиньям очищенной капсулы, ни каких клинических симптомов или поражений легких не отмечается [109]. Не смотря на то, что очищенная капсула не способна вызвать заболевание или поражение легких свиньи, она играет очень важную роль в вирулентности А. pleuropneumoniae, так как помогает бактерии противостоять факторам неспецифического иммунитета хозяина [63].

Липополисахариды (ЛПС)

Липополисахариды (ЛПС) - это неотъемлемые структурные компоненты клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Эти структуры отвечают за колонизацию клеток органов дыхания свиньи бактериями А. pleuropneumoniae и играют важную роль в вирулентности и патогенезе. ЛПС сформированы из трех основных частей: липида - А, центрального олигосахаридного участка и О-специфического полисахарида [63]. Каждый серотип имеет свой особенный состав и структуру О-специфического полисахарида [78, 109]. Тем не менее, у некоторых серотипов со схожими О-специфическими полисахаридами можно наблюдать перекрестную иммунологическую реактивность [109]. Перекрестную реактивность можно наблюдать у 1, 9 и 11 серотипов, 3, 6 и 8, а также у 4 и 7 [63]. Очищенные липополисахариды могут повреждать легочную ткань, однако сами по себе они не могут вызвать геморрагические и некротические изменения в легких характерные для данной болезни [198].

Токсины

У различных серотипов A. pleuropneumoniae описано наличие четырех токсинов, получивших обозначение: Арх I, Арх II, Арх III и Арх IV [60, 68, 81, 112, 129, 144]. Токсигенность различных серотипов А. pleuropneumoniae

показана в таблице 3 [111]. Основные поражения, вызываемые А. pleuropneumoniae связаны с действием этих токсинов [139]. Арх I это сильный гемолитичный и цитотоксичный белок массой 105-110 кДа, выделяемый in vivo и in vitro, и секретируемый наиболее вирулентными серотипами включая 1, 5, 9, 10 и 11 [81, 113, 129]. Арх II это белок массой 103-105 кДа, обладающий слабым гемолитическим и умеренным цитотоксическим действием, он продуцируется всеми серотипами за исключением 10 [81]. Арх III это белок массой 120 кДа, секретируемый 2, 3, 4, 6 и 8 серотипами. Его отличие от двух других токсинов в том, что он не проявляет ни какой гемолитической активности и в тоже время обладает сильным цитотоксическим действием [81]. Арх IV это сравнительно недавно описанный токсин А. pleuropneumoniae. Это слабый гемолитик продуцируемый всеми серотипами и только in vivo [81]. Хотя роль токсина Арх IV в патогенезе актинобациллезной плевропневмонии все еще требует уточнения, зарубежными исследователями показано, что удаление гена Арх IV А, приводит к ослаблению вирулентности штаммов. Токсин Арх IV является высоко специфичным для A. pleuropneumoniae, что делает его хорошим маркером для выявления больных животных [131]. Таблица 3.

Токсигенность различных серотипов A. pleuropneumoniae [81].

Серотип Apxl Арх II Арх III Арх IV

1 + + - +

2 - + + +

3 - + + +

4 - + + +

5 + + - +

6 - + + +

7 - + - +

8 - + + +

9 + + - +

10 + - - +

11 + + - +

12 - + - +

13 - + - +

14 - + - +

15 - + - +

1.2.3. Диагностика актинобациллезной плевропневмонии свиней

Диагноз на актинобациллезную плевропневмонию ставится на основании комплекса исследований: эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

В настоящее время в Российской Федерации лабораторная диагностика актинобациллезной плевропневмонии свиней проводится в соответствии с «Временными методическими указаниями по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии».

Согласно данным методическим указаниям для бактериологического исследования используют легкие, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы от павших и вынужденно убитых свиней. Однако, по мнению зарубежных авторов выделение возбудителя данным методом может быть затруднено, по причине контаминации проб миндалин комменсальной микрофлорой, представленной в верхних дыхательных путях [91].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Лебедев, Никита Викторович, 2013 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Андросик H.H., Букин A.B. Биологические свойства возбудителя актинобациллярной (гемофилезной) плевропневмонии свиней // Ветеринарная наука - производству. - 1998. - Вып. 33. - С. 91-94.

2. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

3. Бейли Н. Статистические методы в биологии. - М.: Изд-во иностр. лит., 1962.-С. 124-135.

4. Беляков В.Д., Семененко Т.А. Вакцинология и эпидемиология в их историческом развитии // Журн. микробиологии. - 1996.- № 5. С. 114-117.

5. Биохимические и антигенные свойства изолятов Actinobacillus pleuropneumoniae / О.И. Ручнова, О.В. Прунтова, B.C. Русалеев, В.М. Гневашев // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных: материалы Междунар. науч. конф. молодых ученых.- Владимир, 2004.- С.43-45.

6. Болезни свиней / В.И. Сидоркин, В.Г. Гавриш, A.B. Егунова, С.П. Убираев. - М.: Аквариум, 2007. - С. 137.

7. Вакцины и вакцинация: национальное руководство / под ред. В.В. Зверева, Б. Ф. Семенова, Р. М. Хаитова. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2011. —880 с.

8. Варбанец Л.Д. Эндотоксины грамотрицательных бактерий: структура и биологическая роль // Микробиол. журн - 1994. —Т. 56, №3. —С. 7697.

9. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение // Журн. микробиологии. — 1996. — № 3. — С. 4346.

10. Ветеринарные требования при импорте в РФ племенных и пользовательских свиней. URL:mcxpx.ru/base gvc/vetzac/document/351 .html/.

11. Воробьёв А.А, Кривошеин Ю.С., Широбоков В.П. Медицинская и санитарная микробиология. - М.: Академия, 2003. - 464 с.

12. Воронин И.Е. Усовершенствование профилактики актинобациллезной плевропневмонии свиней: дис. канд. вет. наук. - М., - 1996.

13. Гаффаров Х.З., Романов Е.А. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними. - Казань: Школа; Шестой континент, 2003. - 200 с.

14. Гласкович A.A., Дремач Г.Э., Зайцев В.В. Гемофилезная плевропневмония свиней учебно-методическое пособие. - Витебск: ВГАВМ, 2003.-25 с.

15. Душук Р.В. Респираторные болезни свиней. - М.: Колос, 1982. -272с.

16. Иммунопрофилактика гемофилезной плевропневмонии свиней / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, И.А. Логинов // Ветеринария. -1985. - №12. - С. 37.

17. Инфекционные болезни животных / Б. Ф. Бессарабов, А. А. Ватутин, Е. С. Воронин [и др.]; под ред. А. А. Сидорчука. — М.: КолосС, 2007.— 671 с.

18. Калашников Н.В. Особенности поражения бактерий формальдегидом // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 1986. - №6. - С. 35-42.

19. Книрель Ю.А., Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. 3. Структура О-специфических липополисахаридов // Биохимия. - 1994. - Т. 59, №12. - С. 17841851.

20. Ковалевская (Андреева) Ж.И. Выделение и характеристика гемолизина II Bacillus cereus: дис. канд. биол. наук. - М., 2007. -156 с.

21. Костина Г.И. К вопросу о механизмах химической инактивации микроорганизмов // ЖМЭИ. - 1981. - №8. - С. 25-32.

22. Красильников О.В., Сабиров Р.З., Терновский В.И. Белки, ионные каналы и регуляция транспорта ионов через мембраны. - Ташкент: Фан, 1991.-208с.

23. Куриленко А.Н., Крупальник B.J1. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных: учеб. пособие для вузов. - М.: Колос, 2000. - С. 55-60.

24. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции / под ред. Б.И. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1986.- 352 с.

25. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / под ред. А.А. Воробьёва. - М.: Мед. инфор. агентство, 2006. - 691 с.

26. Медуницын Н.В. Аллергия и вакцинация // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2009. - № 1.- С. 5-8.

27. Медуницын Н.В. Вакцинология. - 2-е изд., перераб. доп. - М.: Триада-Х, 2004. - 448 с.

28. Медуницын Н.В., Покровский В.И. Основы иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных болезней. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 528 с.

29. Мицаев Ш.Ш. Культуральные и гемолитические свойства Haemophilus parahaemolyticus (pleuropneumoniae) // Бюллетень ВИЭВ. - 1982. - №48. - С. 20-21.

30. Мишанин Ю.Ф. Гемофилезы // Справочник по инфекционным болезням животных. - Ростов н/Д., 2002. С. 390-395.

31. Моргунов И.Н. Бактериальные токсины и анатоксины. - Киев: Здоровье, 1959,- 384 с.

32. Определитель бактерий Берджи. В 2т. Т.1 / под ред. Дж. Хоулта [и др.]. - М.: Мир, 1997. - С.202.

33. Орляикин Б.Г., Алипер Т.И., Непоклонов Е.А. Инфекционные респираторные болезни свиней // Ветеринария. - 2005. - №11. -С.3-6.

34. Патологоанатомическая диагностика болезней свиней / A.A. Авроров, A.B. Акулов, Л.Г. Бурба [и др.]. - М.: Колос, 1984. - 335 с.

35. Петрухина А.Т., Блинова Е.А. Бактерийные и вирусные препараты. - М.: Академия естествознания, 2010.-241 с.

36. Русалеев B.C., Прунтова О.В., Гневашев В.М. Роль бактерий семейства Pasteurellaceae в респираторной патологии свиней // РацВетИнформ. - 2004. - №5. - С. 15.

37. Русалеев B.C., Гневашев В.М., Прунтова О.В. Бактериальные вакцины в свиноводстве // Ветеринария. - 2001. - № 6. - С. 18-21.

38. Санеблидзе C.B. Потребность Haemophilus pleuropneumoniae в специфических ростовых факторах // Бюллетень ВИЭВ. - 1985. -№57. - С. 39-40.

39. Селиванов A.B., Кириллов Л.В., Борисович Ю.Ф. Современные требования к живым и инактивированным бактерийным вакцинам и анатоксинам // Сборник науч. тр. ВГНКИ.- М., 1978. - Т.27. - С.3-10.

40. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Гумбатов Ю.К. Роль бактерий рода Haemophilus в инфекционной патологии животных // Ветеринария. - 1978. - №5. - С. 102-107.

41. Сидоров М.А., Скородумов Д.И. Гемофилезы животных. - М.: Агропромиздат, 1986. - 176 с.

42. Сидоров М.А., Мицаев Ш.Ш., Скородумов Д.И. Патогенность Haemophilus pleuropneumoniae для животных // Ветеринария. - 1989. -№11.-С. 39-41.

43. Сидорчук А. А. Инфекционные болезни животных. - М.: Колос, 2007. - С. 254.

44. Скородумов Д.И. Актинобациллезная пневмония свиней // Ветеринария с.-х. животных. — 2008. - № 12. -С. 10-13.

45. Скородумов Д.И. Патогенные свойства культур возбудителя гемофилезной плевропневмонии свиней // Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных: сб. науч. тр. -М, 1995. -С.104-106.

46. Скородумов Д.И. Свойства гемолизинов возбудителя актинобациллезной плевропневмонии свиней // Инфекционные болезни молодняка с.-х. животных: тез. докл. Всерос. науч. конф. -М., 1996.- С.50-52.

47. Скородумов Д.И., Костенко Т.С. Методы хранения культур Н. parasuis и А. pleuropneumoniae в лабораторных условиях // Современные аспекты диагностики, профилактики и лечения инфекц. и инваз. болезней животных: сб. науч. тр. - М., 1998. - С. 68.

48. Скородумов Д.И., Костенко Т.С. Реактогенные свойства инактивированных антигенов A.pleuropneumoniae II Современные аспекты диагностики, профилактики и лечения инфекционных и инвазионных болезней животных: сб. науч. тр. - М., 1998. - С. 12-16.

49. Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии: монография. - 3-е изд. - М.: Вузовская книга, 2010. - 376 с.

50. Татаринцев Н.Т., Нестифорова М.В. Основные показатели качества оценки анатоксинов и инактивированных вакцин против бактериальных и вирусных болезней животных // Сборник науч. тр. ВГНКИ.-М., 1996.-Т.59.-С.13-18.

51. Таточенко В.К., Озерецковский Н.А., Федоров A.M. Вакцинопрофилактика. - М.: Медицина, 1995. - 189 с.

52. Тимина A.M., Бирюченкова М.В., Щербаков А.В. Генодиагностика актинобациллезной плевропневмонии свиней // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2010. - Т. 8. - С. 114-122.

53. Ульянкина Т.И. Зарождение иммунологии. - М.: Наука, 1994 . - 319 с.

54. Эпизоотология с микробиологией / под ред. И.А. Бакулова. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Агрохимиздат, 1987. - 415 с.

55. A multiplex PCR that can distinguish between immunologically cross-reactive serotype 3, 6 and 8 Actinobacillus pleuropneumoniae strains / L. Zhou, S.C.P. Jones, O.Angen [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2008. -Vol.46.-P.800-803.

56. A PCR assay used to study aerosol transmission of Actinobacillus pleuropneumoniae from samples of live pigs under experimental conditions / C. Savoye, J.L. Jobert, F. Berthelot-Herault [et al.] II Vet. Microbiol. - 2000. - Vol.73. - P.337-347.

57. A novel strategy for protective Actinobacillus pleuropneumoniae subunit vaccines: detergent extraction of cultures induced by iron restriction / R. Goethe, O.F. Gonzales, T. Lindner, G.F. Gerlach // Vaccine. - 2001. -Vol.19. -P.966-975.

58. Actinobacillus pleuropneumoniae infections in pigs: the role of virulence factors in pathogenesis and protection / F. Haesebrouck, K. Chiers, I. Van Overbeke, R. Ducatelle // Vet. Microbiol. - 1997. - Vol.58. -P.239-249.

59. Actinobacillus pleuropneumoniae: Pathobiology and pathogenesis of infection / J.T. Bossé, H. Janson, B.J. Sheehan [et al.] II Microbes Infect. - 2002. - Vol.4. - P.225-235.

60. Actinobacillus pleuropneumoniae infections in closed swine herds: infection patterns and serological profiles / K. Chiers, E. Donné, I. Van Overbeke [et al.] II Vet. Microbiol. - 2002. - Vol.85. - P.343-352.

61. Actinobacillus pleuropneumoniae RTX toxins: uniform designation of haemolysins, cytolysins, pleurotoxin, and their genes / J. Frey, J.T. Bossé, Y.F. Chang [et al.] II J. Gen. Microbiol. - 1993. - Vol.139. -P.1723-1728.

62. Actinobacillus sp. biochemically and phenotypically similar to Actinobacillus pleuropneumoniae can be differentiated by genomic

fingerprinting, toxin profiling, and sequencing of the 16S rRNA gene / S. Oliveira, K. Rossow, K. Olsen, J. Collins // Proc. 50th Am. Assoc. Vet. Lab. Diagnosticians Annual Meeting. - Reno, 2007. - P. 136.

63. Actinobacillus pleuropneumoniae surface polysaccharides: their role in diagnosis and immunogenicity / J.D. Dubreuil, M. Jacques, K.R. Mittal, M. Gottschalk // Anim. Health Res. - 2000. - Vol.2. - P.73-93.

64. Airborne transmission of Actinobacillus pleuropneumoniae and porcine reproductive and respiratory syndrome virus in nursery pigs / M. Torremorell, C. Pijoan, K. Janni [et al.] II Am. J. Vet. Res. - 1997. -Vol.58.-P.828-832.

65. An Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 3 specific PCR / L. Zhou, S.C.P. Jones, 0. Angen [et al.] II Vet. Ree. - 2008. - Vol.162. - P.648-652.

66. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to Actinobacillus pleuropneumoniae serovar 7 in pig serum / J. Klausen, L. Ekeroth, J. Grondahl-Hansen, L.O. Andresen // J. Vet. Diagn. Invest. - 2007. - Vol.19. - P.244-249.

67. Analysis of the Actinobacillus pleuropneumoniae HlyX (FNR) regulon and identification of iron-regulated protein B as an essential virulence factor / F.F. Buettner, I.M. Bendalla, J.T. Bossé [et al.] II Proteomics. -2009. - Vol.9. - P.2383-2398.

68. Association of Actinobacillus pleuropneumoniae capsular polysaccharide with virulence in pigs / A.B. Bandara, M.L. Lawrence,

H.P. Veit, T.J. Inzana II Infect. Immun. - 2003. - Vol. 71. - P. 33203328.

69. Baltes N., N'diaye M., Jacobsen I.D. Deletion of the anaerobic regulator HlyX causes reduced colonization and persistence of Actinobacillus pleuropneumoniae in the porcine respiratory tract / // Infect. Immun. — 2005. - Vol. 73. P. 4614 - 4619.

70. Bernheimer A.W., Linder R., Avigad L.S. Nature and mechanism of action of the CAMP protein of group B streptococci // Infect. Immun. -1979. - Vol. 23, № 3. - P. 838-844.

71. Bertram T.A. Intravascular macrophages in lungs of pigs infected with Haemophilus pleuropneumoniae II Vet. Pathol. - 1986. - Vol. 23 - P. 681-691.

72. Bhakdi S., Tranum-Jensen J. Alpha-toxin of Staphylococcus aureus // Microbiol. Rev. — 1991. — Vol. 55, № 4. — P. 733-751.

73. Blackall P.J., Rapp-Gabrielson V., Hampson D.J. Serological characterization of Haemophilus parasuis isolates from Australian pigs // Aust. Vet. J. - 1996. - Vol. 73. -P.93-95.

74. Boehm D.F., Welch R.A., Snyder I.S. Calcium is required for binding of Escherichia coli hemolysin (HlyA) to erythrocyte membranes // Infect. Immun. - 1990. -Vol.58. - P. 1951-1958.

75. Boehm D.F., Welch R.A., Snyder I.S. Domains of Escherichia coli hemolysin (HlyA) involved in binding of calcium and erythrocyte membranes II Infect. Immun. - 1990. - Vol.58. - P. 1959-1964.

76. Bossé J.T., Johnson R.P., Rosendal S. Serodiagnosis of pleuropneumoniae using enzyme-linked immunosorbent assay with capsular polysaccharide antigens of Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1, 2, 5 and 7 // Can. J. Vet. Res. - 1990. - Vol.54. - P.427-431.

77. Buettner F.F., Maas A., Gerlach G.F. An Actinobacillus pleuropneumoniae arcA deletion mutant is attenuated and deficient in biofilm formation // Vet. Microbiol. - 2008. - Vol.127. - P. 106-115.

78. Byrd W., Kadis S. Structures and sugar compositions of lipopolysaccharides isolated from seven Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes // Infect. Immun. - 1989. - Vol.57. -P.3901- 3906.

79. Chang Y., Young R., Struck K. Cloning and characterization of a hemolysin gene from Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae II DNA. - 1989. - Vol.8. - P. 635-647.

80. Chang Y., Young R., Struck K. The Actinobacillus pleuropneumoniae hemolysindeterminant: unlinked appCA and appBD loci flanked by pseudogenes // J. Bacteriol. - 1991. - Vol.173. - P.5151-5158.

81. Characterization of apxIVA, a new RTX determinant of Actinobacillus pleuropneumoniae / A. Schaller, R. Kuhn, P. Kuhnert [et al.] Il Microbiology (Reading, England), 1999. - Vol.145. - P.2105-2116.

82. Characterization of monoclonal antibodies that recognize common epitopes located on O antigen of lipopolysaccharide of serotypes 1, 9 and 11 of Actinobacillus pleuropneumoniae / B.J.I. Rodriguez, M.C.B.

Gutierrez, R.I. Tascon [et al.] // FEMS Immunol. Med. Microbiol. -1996.-Vol.16.-P.173-181.

83. Clark K.L. Mycoplasmal pneumonia control strategies // Proc. AD Leman Swine Conf. - 2000. - P.87-91.

84. Convalescent pigs are protected completely against infection with a homologous Actinobacillus pleuropneumoniae strain but incompletely against a heterologous- serotype strain / T. Cruijsen, L.A. Van Leengoed, M. Ham-Hoffies, J.H. Verheijden // Infect. Immun. - 1995. - Vol.63. -P.2341-2343.

85. Desrosiers R., Moore C. Indirect transmission of Actinobacillus pleuropneumoniae //Swine Health Prod. - 1998. - Vol.6. - P.263-265.

86. Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae by PCR on field strains from healthy and diseased pigs / C.S. Klein, I.A. Piffer, S.C. da Silva [et al.] // Curr. Microbiol. - 2003. - Vol.46. - P.443-447.

87. Detection of antibodies to Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 12 in pig serum using a blocking enzyme-linked immunosorbent assay / L.O. Andresen, J. Klausen J., K. Barfod, V. S0rensen // Vet. Microbiol. -2002.-Vol. 89, №1.-P. 61-67.

88. Detection and subtyping of Actinobacillus pleuropneumoniae strains by PCR-RFLP analysis of the tbpA and tbpB genes / V.A. De la Puente-Redondo, N.G. Del Blanco, C.B. Gutierrez-Martin [et al.] // Res. Microbiol. - 2000. - Vol.151, № 8. - P.669-681.

89. Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in cultures from nasal and tonsillar swabs of pigs by a PCR assay based on the nucleotide sequence of a dsbE-like gene / K. Chiers, I. Van Overbeke, E. Donné [et al.] II Vet. Microbiol. - 2001. - Vol.83, № 2. - P. 147-159.

90. Detection and identification of Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1, 2 and 8 by multiplex PCR / J.A. Schuchert, T.J. Inzana, 0. Angen, S.G. Jessing // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol.42. - P.4344-4348.

91. Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in the porcine upper respiratory tract as a complement to serological tests / M. Sidibé, S. Messier, S. Lariviere [et al.] H Can. J. Vet. Res. - 1993. - Vol.57. -P.204-208.

92. Development and evaluation of a mixed-antigen ELI SA for serodiagnosis of Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1, 5, and 7 infections in commercial swine herds / J. T. Bossé, R. Friendship, S. Rosendal, B.W. Fenwick // J. Vet. Diagn. Invest. - 1993. - Vol.5. -P.359-362.

93. Development and evaluation of a mixed long-chain lipopolysaccharide based ELISA for serological surveillance of infection with Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 2, 6 and 12 in pig herds / J. Grondahl-Hansen, K. Barfod, J. Klausen [et al.] II Vet. Microbiol. -2003. - Vol.96, № 1. - P.41 -51.

94. Development and use of a multiplex polymerase chain reaction assay based on Apx toxin genes for genotyping of Actinobacillus

pleuropneumoniae isolates / N. Rayamajhi, S.J. Shin, S. G. Kang [et al.] // J. Vet. Diagn. Invest. - 2005. - Vol.17, № 4. - P.359-362.

95. Development of an immunomagnetic method for selective isolation of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 from tonsils / A. Gagné, S. Lacouture, A. Broes [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol.36, № 1. -P.251-254.

96. Development of two real-time PCR assays for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae in clinical samples / C.R. Dubosson, C. Conzelmann, R. Miserez [et al.] II Vet. Microbiol. - 2004. - Vol.102, № 1-2. - P.55-65.

97. Enzymes involved in anaerobic respiration appear to play a role in Actinobacillus pleuropneumoniae virulence / I. Jacobsen, I. Hennig-Pauka, N. Baltes [et al.] // Infect. Immun. - 2005. - Vol.73. - P.226-234.

98. Evaluation and application of ribotyping for epidemiological studies of Actinobacillus pleuropneumoniae in Denmark / V. Fussing, K. Barfod, R. Nielsen [et al], // Vet. Microbiol. - 1998. - Vol.62. - P. 145-162.

99. Evaluation and field validation of PCR tests for detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in subclinically pigs / N. Fittipaldi, A. Broes, J. Harel [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol.41, № 11. -P.5085-5093.

100. Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for serological surveillance of infection with Actinobacillus pleuropneumoniae serotype

5 in pig herds / J. Klausen, L.O. Andresen, K. Barfod, V. S0rensen // Vet. Microbiol. - 2002. - Vol.88. - P.223-232.

101. Evaluation of long chain lipopolysachharides (LC-LPS) of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 for the serodiagnosis of swine pleuropneumoniae / M. Gottschalk, F.D. Lasalle, S. Radacovici, J.D. Dubreuil // Vet. Microbiol. - 1994. - Vol.38. - P.315-327.

102. Evaluating antibody isotype-specific ELISA, complement fixation, and Apxl hemolysin neutralization tests to detect serum antibodies in pigs infected with Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 / J.A. Montaraz, B. Fenwick, H. Hill, M. Rider // Swine Health Prod. - 1996. - Vol.4. -P.79-83.

103. Evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of antibodies to the Apx toxins of Actinobacillus pleuropneumoniae / R. Nielsen, F. van den Bosch, T. Plambeck [et al.] // Vet. Microbiol. - 2000. - Vol.71. - P.81-87.

104. Evaluation of heat-sensitive, neutrophil-toxic, and hemolytic activity of Haemohilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae / S. Rosendale, J. Devenish, J.I. Maclnnes [et al.] II Am. J. Vet. Res. - 1988. - Vol.49. -P.1053-1068.

105. Evaluation of a saline boiled extract, capsular polysaccharides and long-chain lipopolysaccharides of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 as antigens for the serodiagnosis of swine pleuropneumoniae / M. Gottschalk, E. Altman, N. Charland [et al.] // Vet. Microbiol. - 1994. -Vol.42.-P.91-104.

106. Experimental aerosol transmission of Actinobacillus pleuropneumoniae to pigs / J.L. Jobert, C. Savoye, R. Cariolet [et al.] // Can. J. Vet. Res. -2000.-Vol.64.-P.21-26.

107. Felmlee T., Welch R.A. Alterations of amino acids repeats in the Escherichia coli hemolysin affect cytolytic activity and secretion // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. - 1988. - Vol.85. - P.5269-5273

108. Fenwick B.W., Henry S. Porcine pleuropneumoniae // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1994. - Vol.204. - P. 1334-1340.

109. Fenwick B.W., Osburn B.I. Immune responses to the lipopolysaccharides and capsular polysaccharides of Haemophilus pleuropneumoniae in convalescent and immunized pigs // Infect. Immun. - 1986. - Vol.54. - P.575-582.

110. Finlay B., Falkow S. Common themes in microbial pathogenicity revisited // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 1997. - Vol. 61, № 2. - P. 136 -169.

111. Frey J. Virulence in Actinobacillus pleuropneumoniae and the RTX toxins // Trends in Microbiol. - 1995. - Vol.3. - P.257-261.

112. Frey J., Beck M., Nicolet J. RTX-toxins of Actinobacillus pleuropneumoniae // Bacterial protein toxins / ed. J. Frey [et al.]. -Stuttgart, Germany, 1994. - P.322-332.

113. Frey J., Nicolet J. Hemolysin patterns of Actinobacillus pleuropneumoniae//! Clin. Microbiol. - 1990. - Vol.28. - P.232-236.

114. Frey J., Nicolet J. Purification and partial characterization of a hemolysin produced by Actinobacillus pleuropneumoniae type strain 4074 // FEMS Microbiol. Lett. - 1988. - Vol.55. - P.41-46.

115. Frey J., Nicolet J. Regulation of hemolysin expression in Actinobacillus

2+

pleuropneumoniae serotype 1 by Ca // Infect. Immun. - 1988. -Vol.56. - P.2570-2576.

116. Frey J., Nicolet J. Immunological properties of Actinobacillus pleuropneumoniae hemolysin I // Vet. Microbiol. - 1991. - Vol.28. -P.61-73.

117. Frey J., Perrin J., Nicolet J. Cloning and expression of a cohemolysin, the CAMP factor of Actinobacillus pleuropneumoniae II Infect. Immun. -1989. - Vol.57, № 7. - P.2050-2056.

118. Gilbride K.A., Rosendal S. Evaluation of a selective medium for isolation of Haemophilus pleuropneumoniae // Can. J. Comp. Med. -1983. -Vol.47. -P.445-450.

119. Gottschalk M., Taylor T. Actinobacillus pleuropneumoniae II Diseases of Swine / ed. B.E. Straw [et al.]. - 9th ed. - Oxford, UK. - 2007. -P.563-576.

120. Gottschalk M. Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes, pathogenicity and virulence // American Association of Swine Veterinarians. - 2007. - P.381-384.

121. Gottschalk M. Diagnosis of sub-clinical infections // American Association of Swine Practitioners. - 1999. - P.358-363.

122. Gram T., Ahrens P. Improved diagnostic PCR assay for Actinobacillus pleuropneumoniae based on the nucleotide sequence of an outer membrane lipoprotein // J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol.36, № 2. -P.443-448.

123. Hannan P.C.T., Bhogal B.S., Fish J.P. Tylosin tartrate and tiamutilin effects on experimental piglet pneumonia induced with pneumonic pig lung homogenate containing mycoplasmas, bacteria and viruses // Res. Vet. Sci. - 1982. - Vol.33. - P.76-88.

124. Health and growth performance of barrows reared in all-in/all-out or continuous flow facilities with or without a chlortetracycline feed additive / A.D. Ice, A.L. Grant, L.K. Clark [et al.] II Am. J. Vet. Res. -1999.- Vol.5. -P.603-608.

125. Hoffman L. Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae: use of coagglutination and complement fixation to determine the relationship between presence of organism and antibody titer in slaughterhouse pigs II J. Vet. Diagn. Invest. - 1989. - Vol.1. - P. 12-15.

126. Identification of Actinobacillus pleuropneumoniae strains of serotypes 7 and 4 using monoclonal antibodies: Demonstration of common LPS O-chain epitopes with Actinobacillus lignieresii / A. Lebrun, S. Lacouture, D. Côté [et al.] II Vet. Microbiol. - 1999. - Vol.65. - P.271-282.

127. Identification and detection of Actinobacillus pleuropneumoniae by PCR based on the gene apxIVA / A. Schaller, S.P. Djordjevic, G.J. Eamens [et al.] II Vet. Microbiol. - 2001. - Vol.79. - P.47-62.

128. Identification of dimethyl sulfoxide reductase in Actinobacillus pleuropneumoniae and its role in infection / N. Baltes, I. Hennig-Pauka, I. Jacobsen II Infect. Immun. - 2003 - Vol. 71. - P. 6784-6792.

129. Identification of hemolytic and cytotoxic proteins of Actinobacillus pleuropneumoniae by using monoclonal antibodies / E.M. Kamp, J.K. Popma, J. Anakotta, M.A. Smits // Infect. Immun. - 1991. - Vol.59. -P.3079-3085.

130. Immunization of pigs against Actinobacillus pleuropneumoniae with two recombinant protein preparations / A. Rossi-Campos, C. Anderson, G.F. Gerlach [et al.] // Vaccine. - 1992. - Vol.10. - P.512-518.

131. In vivo induced RTX toxin ApxIVA is essential for the full virulence of Actinobacillus pleuropneumoniae / J. Liu, X. Chen, C. Tan [et al.] // Vet. Microbiol. - 2009. - Vol.137. - P.282-289.

132. Inzana T.J., Mathison B. Type-specificity and immunogenicity of the capsular polymer of Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae II Infect. Immun. - 1987. - Vol.55. - P.1580-1587.

133. Inzana T.J., Mathison B. Serotype specificity and immunogenicity of the capsular polymer of Haemophilus pleuropneumoniae serotype 5 // Infect. Immun. - 1987.-Vol.56.-P. 1880-1889.

134. Inzana T.J., Fenwick B. Serologic detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in swine by capsular polysaccharide-biotin-streptavidin enzyme-linked immunosorbent assay // J. Clin. Microbiol. -2001. - Vol.39, № 4. - P. 1279-1282.

Inzana T.J. Virulence properties of Actinobacillus pleuropneumoniae II Microbiol. Pathol. - 1991. - Vol.11. - P.305-316.

136. Jacobsen M.J., Nielsen J.P. Development and evaluation of a selective and indicative medium for isolation of Actinobacillus pleuropneumoniae from tonsils // Vet. Microbiol. - 1995. - Vol.47. - P. 191-197.

137. Jacobsen M.J., Nielsen J.P., Nielsen R. Comparison of virulence of different Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes and biotypes using an aerosol infection model // Vet. Microbiol. - 1996. - Vol.49. - P. 159168.

138. Jacques M. Surface polysaccharides and iron-uptake systems of Actinobacillus pleuropneumoniae II Can. J. Vet. Res. - 2004. - Vol.8, № 2. - P.81-85.

139. Jensen A.E., Bertram T.A. Morphological and biochemical comparison of virulent and avirulent isolates of Haemophilus pleuropneumoniae serotype 5 II Infect. Immun. - 1986. - Vol.51. - P.419-424.

140. Jessing S.G., Angen O., Inzana T.J. Evaluation of a multiplex PCR test for simultaneous identification and serotyping of Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 2, 5, and 6 // J. Clin. Microbiol. - 2003. -Vol.41.-P.4095-4100.

141. Kaplan J.B., Mulks M.H. Biofilm formation is prevalent among field isolates of Actinobacillus pleuropneumoniae II Vet. Microbiol. - 2005. -Vol.108.-P.89-94.

142. Kielstein P., Rapp-Gabrielson V.J. Designation of 15 serovars of Haemophilus parasuis on the basis of immunodiffusion using heat-stable antigen extracts II J. Clin. Microbiol. - 1992. - Vol.30. - P.862-865.

143. Kilian M., Biberstein E. Haemophilus // Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 1 / ed. N. Krieg, J. Holt. - Baltimore, MD, 1984. -P.558-569.

144. Knockout mutants of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 that are devoid of RTX toxins do not activate or kill porcine neutrophils / R. Jansen, J. Briaire, H.E. Smith [et al.] II Infect. Immun. - 1995. - Vol.63. - P.27-37.

145. Kume K., Nakai T., Sawata A. Isolation of Haemophilus pleuropneumoniae from the nasal cavities of healthy pigs // Jpn. J. Vet. Sei. - 1984. - Vol.46. - P.641-647.

146. Le Vine H., Cuatrecasas P. An overview of toxin-receptor interactions. // Pharmacology of Bacterial Toxins / ed. F. Dorner, J. Drews. - Oxford, UK, 1986.-P.31-76.

147. Lo T.M., Ward C.K., Inzana T.J. Detection and identification of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 by multiplex PCR // J. Clin. Microbiol. - 1998. - Vol.36. - P. 1704-1710.

148. Lombin L.H., Rosendal S., Mitchell W.R. Evaluation of the complement fixation test for the diagnosis of pleuropneumonia of swine caused by Haemophilus pleuropneumoniae // Can. J. Comp. Med. - 1982. -Vol.46. -P.109-114.

149. Maclnnes J.I., Rosendal S. Prevention and control of Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae infection in swine: a review // Can. Vet. J. - 1988. - Vol.29. - P.572-573.

150. Mackay I.M. Real-time PCR in the microbiology laboratory // Clin. Microbiol. Infect. - 2004. - Vol.10. - P. 190-212.

151. Marsteller T.A., Fenwick B. Actinobacillus pleuropneumoniae disease and serology // Swine Health Prod. - 1999. - Vol.7. - P.161-165.

152. Matthew P.R., Pattison I.H. The identification of a Haemophilus-like organism associated with pneumonia and pleurisy in the pig // J. Comp. Pathol. - 1961. - Vol.71. - P.44-52.

153. MEGA4: Molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) software version 4.0. / K. Tamura, J. Dudley, M. Nei, S. Kumar // Mol. Biol. Evol. - 2007. - Vol.24. - P.1596-1599.

154. Mittal K.R., Higgins R., Lariviere S. A 2-mercaptoethanol tube agglutination test for diagnosis of Haemophilus pleuropneumoniae infection in pigs // Am. J. Vet. Res. - 1984. - Vol.45. - P.715-719.

155. Molecular cloning and sequencing of the aroA gene from Actinobacillus pleuropneumoniae and its use in a PCR assay for rapid identification / M.C. Hernanz, S.A. Cascon, S.M. Sanchez [et al.] // J. Clin. Microbiol. -1999. - Vol.37, № 5. _ p.1575-1578.

156. Moller K., Killian M. V-factor dependent members of the family Pasteurellaceae in the porcine upper respiratory tract // J. Clin. Microbiol. - 1990. - Vol.28. - P.2711-2716.

157. Mycobacterium paratuberculosis DNA in Crohn's disease tissue / J.D. Sanderson, M.T. Moss, M.L. Tizard, J. Taylor II Gut. - 1992. - Vol.33. -P.890-896.

158. Nakai T., Sawata A., Kume K. Characterization of the hemolysin produced by Haemophilus pleuropneumoniae II Am. J. Vet. Res. - 1983.

- Vol.44, № 2. - P.344-347

159. Nicolet J. Actinobacillus pleuropneumoniae // Diseases of Swine / ed A.D. Leman [et al.] - Ames, Iowa, 1992. - P.401-408.

160. Nicolet J., Krawinkler M., Baumgartner A. An enzyme-linked immunosorbent assay, using an EDTA-extractacted antigen for the serology of Haemophilus pleuropneumoniae // Am. J. Vet. Res. - 1981. -Vol.42.-P.2139-2142.

161. Nielsen R. Serology of Haemophilus {Actinobacillus) pleuropneumoniae serotype 5 strains. Establishment of subtypes a and b // Acta Vet. Scand.

- 1986,-Vol.27.-P.49-58.

162. Nielsen R. Serological characterization of Haemophilus pleuropneumonia (Actinobacillus pleuropneumoniae) strains and proposal of a new serotype: serotype 9 // Acta Vet. Scand. - 1985. -Vol.26.-P.501-512.

163. Nielsen R., O'Connor P.J. Serological Characterization of 8 Haemophilus pleuropneumoniae Strains and Proposal of a New Serotype: Serotype 8 II Acta Vet. Scand. - 1984. - Vol.25. - P.96-106.

164. Nielsen R. Haemophilus pleuropneumoniae infection in pigs: thesis / National Veterinary Serum Laboratory. - Copenhagen, 1982.

165. Nielsen R. Haemophilus parahaemolyticus serotypes serological response II Nord. Vet. Med. - 1979. - Vol.31. - P.401-406.

166. Non-pathogenic Actinobacillus isolates antigenically and biochemically similar to Actinobacillus pleuropneumoniae: a novel species? / M. Gottschalk, A. Broes, K.R. Mittal [et al.] // Vet. Microbiol. - 2003. -Vol.92, № 12. -P.87-101.

167. Optimalization of the detection of NAD dependent Pasteurellaceae from the respiratory tract of slaughterhouse pigs / K. Moller, L. Vraa-Andersen, G. Christensen, M. Kilian // Vet. Microbiol. - 1993. - Vol.36. - P.261-271.

168. Outer membrane proteome of Actinobacillus pleuropneumonias. LC-MS/MS analyses validate in silico predictions / J.W. Chung, C. Ng-Thow-Hing, L.I. Budman [et al.] // Proteomics. - 2007. - Vol.7. -P. 1854-1865.

169. PCR-based identification of serotype 2 isolates of Actinobacillus pleuropneumoniae biovars I and II / D. Hussy, Y. Schlatter, R. Miserez [et al.] // Vet. Microbiol. - 2004. - Vol.99. - P.307-310.

170. Proposal of a new serovar of Actinobacillus pleuropneumonias, serovar 15 / P.J. Blackall, H.L. Klaasen, H. van den Bosch [et al.] // Vet. Microbiol. - 2002. - Vol. 84. - P.47-52.

171. Protective local and systemic antibody responses of swine exposed to an aerosol of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 / J.T.Bosse, R.P. Johnson, M. Nemec, S. Rosendal // Infect. Immun. - 1992. - Vol.60. -P.479-484.

172. Radacovici S., Gottschalk M., Dubreuil J.D. Recovery of long-chain lipopolysaccharides from liquid culture of Actinobacillus pleuropneumoniae (serotype 5) for ELISA serodiagnosis // Vet. Res. -1995. -Vol.19. -P.63-67.

173. Radacovici S., Gottschalk M., Dubreuil J.D. Lipopolysaccharides of Actinobacillus pleuropneumoniae (serotype 1): a readily attainable antigen for ELISA serodiagnosis of pig pleuropneumoniae // Vet. Microbiol. - 1994. - Vol.39. - P.219-230.

174. Real time quantitative PCR / C.A. Heid, J. Stevens, K.J. Livak, P.M. Williams // Genome. Res. - 1996. - Vol.6, № 10. - P.986-94

175. Rosendal S., Mitchell W.R. Epidemiology of Haemophilus pleuropneumoniae infection in pigs: A survey of Ontario pork producers, 1981 // Can. J. Comp. Med. - 1983. - Vol.47. - P. 1-5.

176. Rosendal S., Boyd D.A. Haemophilus pleuropneumoniae serotyping // J. Clin. Microbiol. - 1982. - Vol.16. -P.840-843.

177. Satran. P., Nedbalcova K., Kucerova Z. Comparison of protection efficacy of toxoid and whole-cell vaccines against porcine pleuropneumoniae caused by endotracheal infection with Actinobacillus pleuropneumoniae II Acta. Vet. Brno. - 2003. - Vol.72. - P.213-219.

178. Schlessinger D., Schaechter M. Bacterial toxins. // Mechanisms of Microbial Disease / ed. M. Schaechter [et al.]. - 2nd ed. - Baltimore, 1993. -P.162-175.

179. Schmitt C.K., Meysick K.C., O'Brien A. Bacterial toxins: friends or foes? // Emerging Infectious Diseases. - 1999. - Vol. 5, № 2. - P.224 -234.

180. Sebunya T.K., Saunders J.R. Haemophilus pleuropneumoniae infections in swine: A review // J. Am. Vet. Med. Assoc. - 1983. - Vol.182. -P.1331-1337

181. Serotyping Actinobacillus pleuropneumoniae by the use of monoclonal antibodies / S. Lacouture, K.R. Mittal, M. Jacques, M. Gottschalk // J. Vet. Diagn. Invest. - 1997. - Vol.9. - P.337-341.

182. Serological characterisation of Actinobacillus pleuropneumoniae isolated from pigs in 1993 to 1996 / P.J. Blackwell, R. Bowles R, J. L. Pahoff, B.N. Smith // Aust. Vet. J. - 1999. - Vol. 77 - P.39-43.

183. Serological characterization of Actinobacillus pleuropneumoniae strains isolated from pigs in Quebec / K.R. Mittal, R. Higgins, S. Lariviere, M. Nadeau // Vet. Microbiol. - 1992. - Vol.32. - P. 135-148.

184.

Shewen P.E., Wilkie B.N. Cytotoxin of Pasteurella haemolytica acting on bovine leukocytes // Infect. Immun. - 1982. - Vol.35, № 1. - P.91-94.

185. Shope R.R. Porcine contagious pleuropneumonia I. Experimental transmission, etiology and pathology // J. Exp. Med. - 1964. - Vol.1119. -P.357-358.

186. Smith C.J., Osborn A.M. Advantages and limitations of quantitative PCR (Q-PCR)-based approaches in microbial ecology // FEMS Microbiol. Ecol. - 2009. - Vol.67. - P.6-20.

187. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-O and Escherichia coli hemolysin: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins / S. Bhakdi,

H. Bayley, A. Valeva [et al.] // Arch. Microbiol. - 1996. - Vol. 165, №

I.-P. 73-79.

188. Stenbaek E.I., De LaSalle F., Gottschalk M. Detection of antibodies against Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5 using an inhibition enzyme immunoassay // Can. J. Vet. Res. - 1997. - Vol.61. - P. 1-7.

189. Structure of staphylococcal alpha-hemolysin, a heptameric transmembrane pore / L. Song, M. Hobaugh, C. Shustak [et al.] // Science. - 1996. - Vol. 274, № 14. - P. 1859-1866.

190. Structural characteristics of the antigenic capsular polysaccharide and lipopolysaccharide involved in serological classification of Actinobacillus pleuropneumoniae strains / M.B. Perry, E. Altman, J.R. Brisson, L.M. Beynon // Serodiag. Immun. Infect. Dis. - 1990. - Vol.4. -P.299-308.

191. Taylor D.J. Actinobacillus pleuropneumoniae. II In B. E. Straw, S. D'Allaire, W. I. Mengeling, and D. J. Taylor (ed.), Diseases of Swine / ed B.E. Straw [et al.]. - 8th ed. - Ames, Iowa, 1999. - P.343-354.

192. The comparative pathogenicity of four serovars of Actinobacillus (Haemophilus) pleuropneumoniae / R.J. Rogers, L.E. Eaves, P.J. Blackall, K.F. Truman II Australian Vet. J. - 1990. - Vol.67. - P.9-12.

193. The genetic organisation of the capsule biosynthesis region of Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1, 6, 7, and 12 / S.G. Jessing, P. Ahrens, T.J. Inzana, O. Angen // Vet. Microbiol. - 2008. -Vol.22.-P.350-359.

194. The —pharmacokinetics of Oxytetracycline following intravenous administration in healthy and diseased pigs / A. Pijpers, E.J. Schoevers, H. Van Gogh [et al.] // J. Vet. Pharmacol. Ther. - 1990. - Vol.13. -P.320-326.

195. The structure of iron Pseudomonas ovalis complexed with the inhibitor azide / M. L. Ludwig, A.L. Metzger, K.A. Pattridge, W. C. Stallings // J. Mol. Biol. - 1991. - Vol.219. -P.335-358.

196. Transfer of Haemophilus pleuropneumoniae and Pasteurella haemolytica-like organism causing porcine necrotic pleuropneumonia to the genus Actinobacillus (Actinobacilluspleuropneumoniae comb, nov.) on the basis of phenotypic and deoxyribonucleic acid relatedness / S. Pohl, H.U. Bertschinger, W. Frederiksen, W. Mannheim // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1983. - Vol.33. - P.510-514.

197. Truncation of the lipopolysaccharide outer core affects susceptibility to antimicrobial peptides and virulence of Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 1 / M. Ramjeet, V. Deslandes, F. St Michael [et al.] II J. Biol. Chem. - 2005. - Vol.280. - P.39104-39114.

198. Udeze F.A., Latimer K.S., Kadis S. Role of Haemophilus pleuropneumoniae lipopolysaccharide endotoxin in the pathogenesis of porcine Haemophilus pleuropneumoniae // Am. J. Vet. Res. - 1987. -Vol.48.-P.768-773.

199. Ueda Y., Ohtsuki S., Narukawa N.: 1995. Efficacy of florfenicol on experimental Actinobacillus pleuropneumonia in pigs // J. Vet. Med. Sei. - 1995. - Vol.57. - P.261-265.

200. Use of recombinant ApxIV in serodiagnosis of Actinobacillus pleuropneumoniae infections, development and prevalidation of the ApxIV ELISA / A. Dreyfus, A. Schaller, S. Nivollet [et al.] II Vet. Microbiol. - 2004. - Vol.99, № 3-4. - P.227-238.

201. Ward C.K., Inzana T.J. Identification and characterization of a DNA region involved in the export of capsular polysaccharide by Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 5a II Infect. Immun. — 1997. -Vol.65.-P.2491-2496.

202. Ward C.K., Inzana T.J. Resistance of Actinobacillus pleuropneumoniae to bactericidal antibody and complement is mediated by capsular polysaccharide and blocking antibody specific for lipopolysaccharide // J. Immunol. - 1994. - Vol. 153.-P.2110-2121.

203.

Welch R.A. Pore-forming cytolysins of gram-negative bacteria // Mol. Microbiol. - 1991. - Vol.5. -P.521-528.