Биоаффинный метод на основе ДНК для изучения функционирования, взаимодействия с эффекторами и определения в многокомпонентных системах биологически активных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, доктор химических наук Бабкина, Софья Сауловна

• Бабкина, Софья Сауловна
• доктор химических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор химических наук Бабкина, Софья Сауловна

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ДНК С НИЗКО- И ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫМИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ И ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЕ БИОАФФИНЫЕ МЕТОДЫ ИХ ОПРЕДЕЛЕНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК (Литературный обзор)

1.1. Взаимодействие ДНК с низкомолекулярными эффекторами -ионами металлов и их комплексами

1.1.1. Влияние переходных металлов на ДНК и функционирование организма

1.1.2. Взаимодействие ДНК с платиновыми металлами. Противоопухолевая активность комплексов металлов платиновой группы.

1.2. Взаимодействие ДНК с высокомолекулярными эффекторами - белками и антителами. Биоаффинные методы определения антител к ДНК

1.3. Электрохимические методы изучения взаимодействия ДНК с тяжелыми металлами

1.4. Электрохимические биосенсоры на основе нуклеиновых кислот и биоаффинные методы определения ДНК и ее эффекторов с их использованием

1.4.1. Иммобилизация нуклеиновых кислот и их фрагментов

1.4.2. Аналитические возможности электрохимических биосенсоров на основе нуклеиновых кислот 71 2. АППАРАТУРА, ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

2.1. Объекты исследования и приготовление растворов

2.2. Приборы и техника измерений

2.3. Получение биосенсорной части аффинных биосенсоров

2.3.1. Иммобилизация ДНК

2.3.2. Иммобилизация олигонуклеотидов

2.3.3. Иммобилизация холинэстеразы 95 2.3.4 Изготовление биосенсорной части иммуноферментного сенсора

2.4. Получение конъюгатов фосфорорганическое соединение

• ДНК

2.4.1 Конъюгат бис(оксиметил)фосфиновой кислоты с д-ДНК

2.4.2 Конъюгат хлорофос — д-ДНК

2.5. Получение антител к аймалину

2.6. Обработка данных по комплексообразованию металл - ДНК

2.7 Построение изотерм адсорбции ионов тяжелых металлов с помощью амперометрического ДНК-содержащего биосенсора

3. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ДНК С НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫМИ ЭФФЕКТОРАМИ - ТЯЖЕЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ. ИЗУЧЕНИЕ ИХ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЯ С РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ ДНК И БИОАФФИННОЙ СОРБЦИИ НА ДНК-СОДЕРЖАЩЕЙ МЕМБРАНЕ

3.1. Комплексообразование тяжелых металлов с различными формами ДНК

3.2. Биоаффинная сорбция тяжелых металлов на ДНКсодержащей мембране

3.3. Определение констант связывания ионов тяжелых металлов с иммобилизованной денатурированной ДНК

4. . РАЗРАБОТКА БИОАФФИННЫХ МЕТОДОВ НА ОСНОВЕ

АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИХ ДНК-СОДЕРЖАЩИХ БИОСЕНСОРОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ЭФФЕКТОРОВ ДНК 131 4.1. Разработка способа иммобилизации ДНК

4.2. Метод определения ионов тяжелых металлов с помощью ам-перометрического биосенсора, содержащего денатурированную ДНК, с использованием комплексообразования в системе металл-комплексон III

4.3. Метод определения комплексов Pt(II) и Pt(IV) на основе ам-перометрического биосенсора, содержащего денатурированную ДНК

4.4. Метод определения аймалина с помощью амперометрического биосенсора, содержащего нативную ДНК

5. БИОАФФИННЫЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ; ПРИМЕНЕНИЕ РАЗРАБОТАННЫХ АФФИННЫХ АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИХ БИОСЕНСОРОВ В ИММУ-НОАНАЛИЗЕ И В КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКЕ ЕГО СПЕЦИФИЧНОСТИ

5.1. Метод определения антител к аймалину на основе иммуно-ферментного анализа

5.2. Использование разработанного амперометрического ДНК-содержащего иммуноферментного сенсора для определения антител к ДНК

5.3. Иммуноферментный анализ с применением модуляторов ферментов и ферментного сенсора для определения антител к ДНК

5.4. Аффинный амперометрический ДНК-содержащий биосенсор в иммуноанализе антител к ДНК

5.5. Константы связывания биоспецифического взаимодействия

ДНК - аутоантитела

6. БИОАФФИНЫЕ МЕТОДЫ НА ОСНОВЕ АМПЕРО

МЕТРИЧЕСКОГО ИММУНОСЕНСОРА И ДНК-ЗОНДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК И ЕЕ ФРАГМЕНТОВ И НА ОСНОВЕ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ СО СПЕКТРО-ФОТОМЕТРИЧЕСКОЙ И ВИЗУАЛЬНОЙ РЕГИСТРАЦИЕЙ АНАЛИТИЧЕСКОГО СИГНАЛА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИЗКО- И ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

6.1. Иммуносенсор для определения денатурированной ДНК; ДНК-зонд для определения последовательности нуклеотидов в процессе гибридизации

6.2. Иммуноферментные тест-системы для определения аймалина и антител к ДНК

6.3. Сравнительная характеристика разработанных биоаффинных методов определения антител к ДНК

7. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОАФФИННЫХ МЕТОДОВ НА ОСНОВЕ ДНК ДЛЯ АНАЛИЗА РЕАЛЬНЫХ ОБЪЕКТОВ

7.1. Методы на основе амперометрических ДНК-содержащих биосенсоров и спектрофотометрической тест-системы для определения низкомолекулярных эффекторов ДНК - тяжелых металлов и противоопухолевых препаратов

7.1.1. Тяжелые металлы в пищевых, экологических и биологических объектах

7.1.2. Ппатиносодержащие противоопухолевые препараты в сыворотке крови

7.1.3. Аймалин в сыворотке крови и фармпрепаратах

7.2. Методы на основе амперометрических биосенсоров и спектрофотометрической тест-системы для определения высокомолекулярных эффекторов ДНК - аутоантител и диагностики аутоиммунных заболеваний

7.2.1. Диагностика алеутской болезни норок с помощью амперо-метрического ДНК-содержащего иммуноферментного сенсора

7.2.2. Диагностика алеутской болезни норок с помощью биоаффинного метода на основе ингибиторного иммуноферментного анализа с участием ДНК

7.2.3. Диагностика алеутской болезни норок с помощью биоаффинного метода с использованием амперометрического ДНК-содержащего биосенсора

7.2.4. Диагностика алеутской болезни норок с помощью биоаффинного метода с использованием иммуноферментной тест-системы на основе нитроцеллюлозной мембраны, модифицированной ДНК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биоаффинный метод на основе ДНК для изучения функционирования, взаимодействия с эффекторами и определения в многокомпонентных системах биологически активных веществ»

Актуальность работы.

Острота стоящих перед цивилизацией экологических проблем, потребность в своевременной и высокоспецифичной диагностике генетических и аутоиммунных заболеваний и контроле лечения сильнодействующими препаратами приводят к необходимости разработки новых высокочувствительных, специфичных и экспрессных методов определения биологически активных веществ (БАВ). Решение этой задачи базируется на объединении подходов и достижений биохимии, медицины, аналитической, бионеорганической химии, физико-химических методов анализа. Именно таким мульти-дисциплинарным подходом является разработка биоаффинных методов (БАМ) анализа, использующих высокую специфичность лиганд-рецепторного связывания, характерную для процессов биохимического распознавания с участием природных рецепторов - нуклеиновых кислот, ферментов, антител и т.д. Реализация возможностей БАМ в аналитической химии, в том числе для решения задач исследования механизма действия БАВ, во многом определяется системой распознавания, усиления и регистрации сигнала.

БАМ с электрохимической и спектрофотометрической регистрацией отличаются простотой аппаратурного оформления, достаточно высокой чувствительностью и универсальностью в отношении регистрируемых биохимических процессов, что позволяет использовать их для оценки количественных параметров аффинных взаимодействий и моделирования в исследовательских и прикладных целях. БАМ с использованием электрохимических биосенсоров (БС) дают возможность исследовать процессы на границе раздела фаз мембрана - водная среда, характерные для биологических систем, и решать задачи моделирования биохимических реакций, оценки фармакоки-нетики и процессов миграции и биотрансформации экотоксикантов в живых организмах. Не случайно, судя по публикациям в отечественных и международных научных изданиях и по количеству регулярно проводимых симпозиумов, БАМ с электрохимической регистрацией сигнала являются превалирующим направлением исследования в области биохимических методов анализа. Вместе с тем, потенциальные возможности электрохимических биосенсоров реализованы в связи с определением лишь ряда субстратов ферментов в биологических жидкостях и ингибиторов холинэстеразы в эколого-аналитическом контроле.

Значительно менее изучены аффинные взаимодействия с участием нуклеиновых кислот, особенно денатурированной односпиральной дезокси-рибонуклеиновой кислоты (д-ДНК), хотя ее значение как биоспецифического аналитического реагента трудно переоценить. Благодаря многообразию функциональных групп и взаимодействий, ДНК и д-ДНК могут быть с успехом использованы для изучения взаимодействий и определения низкомолекулярных эффекторов, многие из которых относятся к основным экотокси-кантам (тяжелые металлы), лекарственным препаратам (противоопухолевые средства на основе комплексов металлов и алкалоидов), и высокомолекулярных эффекторов - биомаркеров иммунодефицитных состояний (антитела к ДНК). Уже это перечисление показывает, насколько универсальны возможности БАМ на основе соответствующих биосенсоров. При этом следует учитывать, что система эффектор - денатурированная ДНК наиболее адекватно моделирует процессы, происходящие в организме под действием денатурирующих агентов. Результаты таких исследований могли бы помочь в предсказании механизма такого воздействия, что, в свою очередь, актуально не только для аналитической химии, но и для фармации (фармакокинетика, направленный индивидуальный выбор противораковых лекарственных препаратов) и экотоксикологии (ускоренное тестирование мутагенной и онкогенной активности загрязнителей, проблемы нормирования их поступления в окружающую среду и последствий техногенных выбросов). ДНК-содержащий биосенсор может стать новым и, возможно, наиболее эффективным средством экологического контроля.

Большое значение для увеличения чувствительности биохимического анализа имеет дальнейшее развитие новых эффективных способов усиления сигнала биоаффинного взаимодействия, основанных на использовании ферментативных реакций и каталитических электрохимических процессов.

Для повышения экспрессности биоанализа и проведения массовых анализов актуальна разработка простых высокопроизводительных тест-систем на основе изучения биоаффинных взаимодействий на твердых поверхностях, которое само по себе представляет фундаментальный интерес для развития биосенсорной технологии.

В настоящее время интенсивное развитие получило новое научное направление по созданию ДНК-зондов. В рамках данного научного направления актуальна разработка новых электрохимических биосенсоров на основе биоаффинного распознавания комплементарных оснований ДНК и создание соответствующих БАМ для определения повреждений структуры молекулы ДНК, диагностики генетических заболеваний, решения задач судебной медицины и обнаружения патогенных микроорганизмов.

Хотя значение указанных задач и потенциальной сферы применения молекул ДНК как биоаффинных элементов распознавания очевидно, исследования в данной области не носят системного характера и не отвечают потребностям современной науки. Применение ДНК в составе биосенсоров носит фрагментарный характер и не позволяет в полной мере сформулировать закономерности, определяющие аналитические характеристики разрабатываемых БАМ, выявить факторы, влияющие на селективность и чувствительность определения низко- и высокомолекулярных соединений, и найти способы управления ими для решения конкретных аналитических, медицинских и экотоксикологических задач.

Целью настоящего исследования является развитие фундаментальных и прикладных основ биоаффинного метода анализа с использованием нового биоспецифического аналитического реагента - ДНК в денатурированной односпиральной и нативной формах, развитие подходов к оценке количественных параметров биоаффинного взаимодействия между биологически активным веществом и его эффектором и создание на этой основе амперометрических биосенсоров и тест-систем со спектрофотометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала для высокочувствительного, специфичного и экспрессного определения низко- и высокомолекулярных биологически активных веществ в многокомпонентных системах.

Для достижения данной цели были поставлены и успешно решены следующие задачи:

- изучение комплексообразования ионов тяжелых металлов с различными формами ДНК, установление состава комплексов и констант их устойчивости; обоснование выбора формы ДНК по критериям эффективности аффинного взаимодействия для последующей разработки БАМ;

- обоснование выбора носителя биолиганда и рабочих условий формирования биоспецифической поверхности, обеспечивающих наилучшие характеристики БАМ на основе биосенсоров и тест-систем для экспрессного контроля аффинных взаимодействий с визуальной и спектрофотометрической регистрацией сигнала;

- разработка различных аффинных ДНК-содержащих биосенсоров с амперометрической регистрацией сигнала и БАМ на их основе; изучение специфической адсорбции и использование биоспецифического мембранного концентрирования биологически активных веществ на биосенсоре, определение их операционных и аналитических характеристик и констант аффинного связывания низкомолекулярных соединений (тяжелых металлов, противоопухолевых препаратов на основе комплексов платины и интеркалятора ДНК аймалина);

- разработка новых путей повышения избирательности определения низкомолекулярных биологически активных веществ, основанных на направленной их модификации для повышения сродства к биолиганду, и увеличения чувствительности анализа за счет использования ферментативных и иммунохимических биоаффинных взаимодействий;

- разработка ДНК-содержащих иммуно- и иммуноферментных сенсоров (ИФС), ДНК-зондов и тест-систем с усилением сигнала за счет каталитических процессов для высокочувствительного и специфичного определения высокомолекулярных биологически активных веществ (антител, полинуклео-тидов), количественной оценки специфичности их взаимодействия и диагностики заболеваний.

- оптимизация условий практического использования разработанных БАМ определения биологически активных веществ в сыворотке крови, в природных и пищевых объектах при экомониторинге; изучение влияния компонентов анализируемой системы на регистрируемый сигнал и результаты определения.

Научная новизна:

- сформулированы научные и методические подходы к разработке и применению биоаффинного метода анализа низко- и высокомолекулярных биологически активных веществ на основе амперометрических биосенсоров и тест-систем со спектрофотометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала;

- предложены новые подходы к оценке количественных параметров биоаффинного взаимодействия, основанные на комплексном изучении механизма, термодинамики, кинетики данного взаимодействия, а также сорбци-онных процессов на биоспецифических модифицированных нитроцеллюлоз-ных мембранах;

- количественно обосновано использование денатурированной ДНК, иммобилизованной в составе нитроцеллюлозной мембраны, для биоспецифического мембранного концентрирования в биоаффинных методах анализа биологически активных веществ, в том числе при совместном присутствии, с электрохимической, спектрофотометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала;

- предложены принципы создания систем распознавания биоаффинного взаимодействия, учитывающих природу участвующих в нем компонентов, с использованием ферментов, их субстратов и эффекторов, комплексов тяжелых металлов. Показана эффективность использования стерического экранирования одного из компонентов системы распознавания в случае биоаффинного взаимодействия ДНК с аутоантителами;

- предложены и оптимизированы условия применения систем каталитического усиления сигнала биоаффинного взаимодействия и систем его детектирования на основе разработанных амперометрических биосенсоров, использующих новые способы иммобилизации биомолекул;

- разработан алгоритм создания и использования ДНК-содержащих биосенсоров, позволяющий целенаправленно получать системы с наилучшими операционными характеристиками для решения широкого круга сложных аналитических задач;

- предложено и на конкретных примерах продемонстрировано использование ДНК как универсального элемента биохимического распознавания и как универсального биоспецифического аналитического реагента, а амперо-метрических биосенсоров и тест-систем на ее основе как новых современных аналитических инструментов для биохимического, медицинского, ветеринарного и экологического анализа многокомпонентных систем;

- впервые с помощью амперометрического ДНК-содержащего биосенсора установлена гетерогенность состава аутоантител по специфичности к денатурированной ДНК; установленные значения констант связывания ДНК-аутоантитела доказывают высокую специфичность аутоантител к денатурированной ДНК, что позволяет использовать их в качестве маркеров при диагностике аутоиммунных заболеваний;

- на основе изучения влияния природы носителя биомолекул, влияния сопутствующих элементов в многокомпонентных биологических и экологических объектах на аналитический сигнал впервые разработаны универсальные БАМ высокочувствительного, селективного и экспрессного определения лекарственных препаратов (аймалин, цисплатин, оксоплатин), ионов тяжелых металлов (Cu(II), Pb(II), Cd(II), Fe(III)), антител к ДНК и специально синтезированных антител к аймалину и для определения ДНК и нуклеотидных последовательностей.

Практическая значимость.

Выявлены и обоснованы новые области применения разработанных

БАМ на основе биосенсоров и тест-систем с электрохимической, спектрофо-тометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала в биохимическом анализе в медицине и ветеринарии, в анализе объектов системы санитарно-эпидемиологического контроля и в экоаналитическом мониторинге объектов окружающей среды. Все методики просты, относительно дешевы, требуют очень малый объем образцов.

Предложены высокочувствительные, селективные и экспрессные методики, не требующие пробоподготовки, для определения тяжелых металлов (Pb, Cd, Fe и Си) на основе их взаимодействий с ДНК в составе разработанного аффинного амперометрического ДНК-содержащего биосенсора в сыворотке крови человека при интоксикации. Определение Fe и Си в сыворотке крови человека с помощью данного ДНК-содержащего биосенсора использовано для диагностики анемии и определения ее типа. Результаты, полученные с помощью разработанных методик, согласуются с данными стандартных методов анализа, используемых в клинических лабораториях отделений токсикологии больниц №6 и №12 г. Казани.

С помощью разработанного БАМ на основе амперометрического ДНК-содержащего биосенсора для анализа тяжелых металлов и оптимизированных методик их определения в пищевых объектах и объектах окружающей среды осуществлен аналитический контроль содержания данных металлов в образцах, предоставленных Санитарно-эпидемиологической станцией г. Казани. Правильность предложенных методик анализа установлена независимыми спектральными и электрохимическими методами. Использование этих методик позволяет определять токсиканты на уровне ПДК и меньших концентраций и судить об их потенциальной мутагенной и канцерогенной активности, при этом сам амперометрический ДНК-содержащий БС является новым эффективным средством экологического контроля.

С использованием амперометрических ДНК-содержащих биосенсоров разработаны высокочувствительные, экспрессные и селективные методики определения противоопухолевых лекарственных препаратов на основе комплексов платины (цисплатина и оксоплатина) и алкалоидов (аймалина) в лекарственных формах при контроле качества в процессе фармпроизводства и в сыворотке крови пациентов Республиканского онкологического диспансера (г. Казань) в процессе терапевтического мониторинга.

Предложен новый способ получения конъюгата индольного алкалоида аймалина с бычьим сывороточным альбумином (БСА), иммунизация которым позволила получать высокоспецифичные AT к аймалину в высокой концентрации и с устойчивой иммунологической активностью. Разработаны высокоселективные и чувствительные спектрофотометрические методики им-муноферментного определения антител к аймалину и аймалина, и экспрессная тест-система определения алкалоида, которые могут быть испольлзованы как на стадии выделения из растительного материала, так и при лекарственном мониторинге данного антиаритмического кардиопрепарата. Методики были апробированы в лаборатории иммунохимии кафедры биохимии Казанского государственного университета и в НПК «Биохим» Казанского гос.университета.

Разработаны высокочувствительные, высокоселективные и значительно более экспрессные по сравнению с традиционным спектрофотометриче-ским иммуноферментным анализом (ИФА) на полистирольных планшетах варианты БАМ на основе ДНК и твердофазного иммуноанализа с электрохимической регистрацией сигнала, без разделения иммунокомпонентов, для определения аутоантител к ДНК с использованием: (1) - ингибиторного ме-диаторного ИФА; (2) - иммуноферментного сенсора на основе ДНК и холи-нэстеразы (ХЭ); и (3) - ДНК-содержащего БС и комплекса платины. Данные методы использованы для количественного контроля содержания аутоантител в сыворотке крови норок и для диагностики вирусного заболевания - алеутской болезни норок (АБН) и апробированы в лаборатории иммунохимии кафедры биохимии Казанского государственного университета.

Для проведения массовой диагностики аутоиммунных заболеваний разработана простая, экономичная, экспрессная биоаффинная тест-система твердофазного ИФА на основе ДНК-содержащих нитроцеллюлозных мембран для определения аутоантител со спектрофотометрической регистрацией аналитического сигнала. Для качественной характеристики результатов диагностики разработана система ее визуальной оценки. Нитроцеллюлозные мембраны после проведения диагностики могут храниться длительное время как документальные материалы тестирования. На основе тест-системы созданы иммуноферментные наборы для экспресс-диагностики АБН на модифицированной нитроцеллюлозной мембране в ветеринарии в условиях зверосовхозов. Методика диагностики АБН на основе тест-системы апробирована и внедрена в зверосовхозах «Бирюлинский», «Раифский», «Тойминский» (Республика Татарстан) и в зверосовхозе «Гамовский» (Приморский край), а иммуноферментные диагностикумы на основе разработанной тест-системы были представлены на международной выставке биопрепаратов (г.Казань, ГИДУВ, 1992 г.).

Новый аффинный амперометрический ДНК-зонд на основе олигонук-леотидов использован для высокоспецифичного и чувствительного определения ДНК и последовательности ее нуклеотидов и апробирован в Лаборатории биофизической химии и молекулярной онкологии Института биофизики АН Чешской Республики (г.Брно).

Состав биосенсорной части иммуноферментного сенсора, его использование в иммунодиагностике и способ медиаторного определения антител в сыворотке крови защищены авторскими свидетельствами. Способ получения конъюгата аймалина с БСА, получение на его основе AT к аймалину и их определение защищены патентом РФ.

Теоретические и практические результаты диссертации используются при чтении курсов «Основы бионеорганической химии», «Химия в экологии» и «Техногенные системы и экологический риск» на химическом факультете Казанского го с.университета и нашли отражение в учебно-методической литературе.

На основании проведенных исследований разработаны теоретические, практические положения и выводы, совокупность которых можно квалифицировать как новое крупное научное достижение в в области биохимических методов анализа, а именно развитие теоретических и практических подходов к созданию новых высокочувствительных и специфичных биоаффинных методов анализа на основе ДНК как универсального элемента биохимического распознавания и аналитического биоспецифического реагента для определения и изучения биологически активных веществ с использованием биосенсоров и тест-систем.

На защиту выносятся:

- результаты исследования комплексообразования различных форм молекулы ДНК с ионами тяжелых металлов, найденные величины констант устойчивости и констант связывания; обоснование выбора денатурированной ДНК как биоспецифического аналитического реагента;

- новые способы ковалентной иммобилизации ДНК и ее фрагментов на нитроцеллюлозных мембранах и результаты разработки новых аффинных амперометрических ДНК-содержащих биосенсоров;

- результаты изучения специфической адсорбции тяжелых металлов на ДНК-содержащей мембране аффинного биосенсора как из индивидуальных растворов, так и при совместном присутствии металлов в растворе; результаты оценки относительной способности тяжелых металлов связываться с иммобилизованными молекулами денатурированной ДНК;

- результаты разработки БАМ на основе амперометрических биосенсоров и тест-систем со спектрофотометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала для определения низко- и высокомолекулярных биологически активных веществ, в том числе с использованием ДНК в качестве биоспецифического аналитического реагента;

- данные о возможности использования принципа стерического исключения компонента биореакции для распознавания биоспецифического взаимодействия, а также каталитических ферментативных реакций с участием различных ферментов, их субстратов и ингибиторов, и каталитических токов выделения водорода для усиления сигналов, полученных в результате биоаффинного взаимодействия;

- влияние различных факторов на эффективность биоаффинного распознавания при проведении анализа (природа матричных компонентов, время предварительного биоаффинного мембранного концентрирования, рН); подбор оптимальных условий для увеличения селективности, экспрессности, снижения предела обнаружения и способы реактивации биоаффинных систем для их многократного использования в анализе;

- способ получения иммуногенного комплекса аймалин-белковый носитель для получения антител к низкомолекулярному гаптену - аймалину; результаты изучения специфичности взаимодействия аймалина с антителами и ДНК с аутоантителами;

- новые аналитические методики биоаффинного электрохимического и спектрофотометрического определения с помощью биосенсоров и тест-систем низкомолекулярных биологически активных веществ (тяжелых металлов, комплексов Pt(II) и Pt(IV), аймалина) и высокомолекулярных биологически активных веществ (ДНК, олигонуклеотидов, антител к аймалину, аутоантител к ДНК) в модельных системах, сыворотке крови, пищевых объектах и объектах окружающей среды.

Работа выполнена на кафедрах аналитической химии, биохимии и неорганической химии Казанского государственного университета.

Диссертационная работа проводилась в рамках программы Министерства образования РФ по следующим направлениям: «Теоретические и экспериментальные исследования сложных реакционных систем на основе координационных соединений» № гос.регистрации 01910050241; «Координационные соединения 3d переходных платиновых и редкоземельных металлов: термодинамика и кинетика образования в различных средах, синтез, строение, свойства, направления практического использования» № гос.регистрации 01960002010 и при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проекты 94-03-09265а, 94-03-09263а, 97-03-33232а, 00-03-32389а, 03-03-33116), конкурсного центра «Университеты России» (1993-1996), гранта ES INCO Copernicus NERBIC 15СТ-98-0910 (19982001), Агентства по фантам Чешской Республики (фант No 203/02/0422) и Агентства по фантам Академии Наук Чешской Республики (фант No А1163201).

Апробация работы.

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на VI Всесоюзной конференции по аналитической химии органических веществ (Москва, 1991), Всесоюзной конференции "Аналитическая химия объектов окружающей среды"(С-Петербург, 1991), Всесоюзной конференции "Современные методы контроля качества окружающей среды и пищевых продуктов" (

Краснодар, 1991), 4th,5th, 6th, 7th, 8th , 9th European Conference on Electroanalysis (ESEAC'92,94,96,98,2000,2002) (Нордвикерхаут, Нидерланды, 1992, Венеция, Италия, 1994, Дарем, Великобритания, 1996, Коимбра, Португалия, 1998, Бонн, Германия, 2000, Краков, Польша, 2002), International Symposium "Sen-sor-Techno" (С.Петербург, 1993), XV, XVI, XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Минск, 1993, Москва, 1998, Казань, 2003), International Symposium on Electroanalysis in Biochemical, Environmental and Industrial Sciences (Лохборо, Великобритания, 1993), . European Conference "Euro-analysis VIII", "Euroanalysis IX" (Эдинбург, Великобритания, 1993, Болонья, Италия, 1996), IV, V конференции «Электрохимические методы анализа» (ЭМА-94), (ЭМА-99) (Москва, 1994, 1999), симпозиуме "Проточный анализ" (Москва, 1994), Symposium on Electroanalysis Tribute to Thomas (Кардифф, Великобритания, 1994), International Conference "Analytical quality control and reference materials" (Рим, Италия, 1994), 13th International Conference on Phosphorus Chemistry (Иерусалим, Израиль, 1995), Symposium on Ecological Chemistry (Кишинев, Молдова, 1995), Asianalysis III (Сеул, Корея, 1995), 5th International Symposium on Kinetics in Analytical Chemistry. "KAC'95". ( Москва, 1995), 24th International IUPAC Conference on Solution Chemistry (Лиссабон, Португалия, 1995), II, III, IV, V Вссийской конференции по анализу объектов окружающей среды "Экоаналитика - 96", "Экоаналитика - 98", "Экоаналити-ка - 2000", "Экоаналитика - 2003" (Краснодар, 1996, 1998, 2000, С.Петербург, 2003), XVI Международном Черняевском совещании (Екатеринбург, 1996), Academy of New York Conference "В Lymphocytes and Autoimmunity" (Прага. Чехия, 1996), 10th European Conference on Solid-State Transducers (Лювен, Бельгия, 1996), Gordon Research Conference on Biosensors (Вентура, США, 1996), International Congress on Analytical Chemistry (Москва, 1997), Giulio Milazzo School on Bioelectrochemistry (Сегед, Венгрия, 1997), Eurosensors XI, Eurosensors XII (Варшава, Польша, 1997, Саутгемптон, Великобритания, 1998), 8th European Congress On Biotechnology (Будапешт, Венгрия, 1997), VII International Conference on the Problems of Solvation and Complex Formation in Solutions (Иваново, 1998), 9th International Conference on Modern Materials and Technologies, CIMTEC'98 (Флоренция, Италия, 1998), Поволжской региональной конференции. Физико-химические методы в координационной и аналитической химии (Казань, 1999), International Confer

L iL ence «Modern Electroanalytical Methods» (Пардубице, Чехия, 1999), 8,9 International Meeting on Chemical Sensors (Базель, Швейцария, 2000, Бостон, США, 2002), Международной конференции. Сенсор-2000. Сенсоры и микросистемы. (С.Петербург, 2000), Региональной научной конференции «Методы аналитического контроля материалов и объектов окружающей среды» (Пермь, 2001), Поволжской конференции по аналитической химии (Казань,

2001), Всероссийской конференции «Актуальные проблемы аналит.химии» (Москва, 2002), Междисциплинарной конференции с международным участием «Новые биокибернетические и телемедицинские технологии 21-го века для диагностики и лечения заболеваний человека» НБИТТ-21 (Петрозаводск,

2002), 2я Российской научной конференции «Проблемы теоретической и экспериментальной аналитической химии» (Пермь, 2002), 7th World Congress on

Biosensors (Киото, Япония, 2002), XXI Международной Чугаевской конференции по координационной химии (Киев, 2003), Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2003), XVII International Symposium on Bioelectrochemistry and Bioenergetics (Флоренция, Италия, 2003), открытом научном семинаре Утрехтского университета (Нидерланды, 1992), научном семинаре Лаборатории биофизической химии и молекулярной онкологии Института биофизики АН Чешской Республики (Брно, Чехия, 2003), VI Всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа «ЭМА-2004» (Уфа, 2004), Всероссийской конференции по аналитической химии «Аналитика России-2004» (Москва, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 106 работ, из них 3 авторских свидетельства об изобретении, 1 патент на изобретение РФ, 1 обзор, 16 статей в центральных Российских журналах, 6 статей в международных научных изданиях, 4 учебно-методических пособия.

Личный вклад автора в выполненную работу заключается в теоретическом обосновании проблемы, постановке и решении основных задач исследования, проведении эксперимента, обработке и интерпретации экспериментальных результатов. Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве и включенные в диссертацию, состоит в разработке и реализации подходов к изучению функционирования и оценке количественных параметров взаимодействия биологически активных веществ, к созданию биоаффинных методов анализа на основе биосенсоров и тест-систем, в обосновании и реализации основных направлений их практического применения, а также систематизации, обобщении и анализе всех полученных результатов. В диссертации изложены результаты исследований, выполненных автором лично, а также результаты экспериментальной работы выполненной дипломниками (И.Л.Федоровой, М.Г.Вертлиб, О.В.Федосеевой, М.П.Тышлек (Кутыревой) -приготовление и стандартизация растворов, перекристаллизация веществ; Н.В.Кораблевой, Н.В.Кремлевой, З.Т.Нугаевой, Е.Е.Филюшиной — подготовка образцов, построение градуировочных зависимостей) и аспирантами (О.В.Климович — определение концентрации антител в модельных растворах ; Ю.И.Зявкиной - очистка комплексов платины, их определение в модельных растворах; Е.Н.Моисеевой — приготовление модельных систем, содержащих тяжелые металлы, и их анализ), работавшими под руководством и соруко-водством автора. Помощь в иммунизации животных и получении сыворотки крови оказывал Г.Ю.Бочкарев, неспецифические сыворотки предоставлены А.К.Галиуллиным, сравнительный анализ сывороток крови на антитела алеутской болезни норок реакцией иммуноэлектроосмофореза проведен Н.Н.Ибрагимовой. Соавторами публикаций, принимавшими участие в обсуждении ряда разделов, являются научный консультант Г.К.Будников (вольт-амперометрия с участием иммобилизованных ферментов), Э.П.Медянцева (каталитические токи выделения водорода, вольтамперометрия с участием иммунохимических реакций), В.Г.Винтер (комплексообразование ДНК с ау-тоантителами), С.А.Еремин (получение антител к низкомолекулярным соединениям), Н.А.Улахович (вольтамперометрия комплексов металлов, изучение комплексообразования с биолигандами), Ю.И.Сальников (применение метода математического моделирования к результатам комплексообразова-ния ДНК-металл), Э.Палечек, Ф.Йелен, М.Фойта (изучение гибридизации ДНК).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 305 страницах машинописного текста, состоит из списка сокращений, общей характеристики работы, 7 глав, заключения, выводов, списка литературы (302 наименования) и приложения. В работе содержатся 37 таблиц и 29 рисунков. В приложении представлены документы о внедрении и регистрации авторских прав (авторские свидетельства и патент) на разработки, выполненные по теме диссертации.

В общей характеристике работы обоснована актуальность проблемы, сформулированы цель и задачи исследования, приведены основные научные результаты и положения, выносимые на защиту, показана практическая значимость работы.

Первая глава (литературный обзор) посвящена взаимодействию ДНК с низко- и высокомолекулярными биологически активными веществами и электрохимическим биоаффиным методам их определения с использованием ДНК. Во второй главе сформулирована постановка задачи, охарактеризованы объекты исследования, приборы и техника измерений, детально описаны условия эксперимента и разработанные автором методики получения и обработки экспериментальных данных и методики получения компонентов биохимических сенсоров и биоаффинных методов анализа. Третья глава посвящена изучению взаимодействия ДНК с низкомолекулярными эффекторами - тяжелыми металлами, их комплексообразования с различными формами ДНК и биоаффинной сорбции на ДНК-содержащей мембране. В четвертой главе обсуждается разработка способа иммобилизации денатурированной ДНК и создание амперометрического ДНК-содержащего биосенсора; представлена методика определения ионов тяжелых металлов с помощью биосенсора с использованием комплексообразования металл-комплексон III. Глава также посвящена изучению взаимодействия ДНК с ее низкомолекулярными эффекторами - комплексами Pt(II), Pt(IV) и алкалоидом аймалином и их определению с помощью амперометрического ДНК-содержащего биосенсора. Пятая глава рассматривает разработанные биоаффинные методы определения высокомолекулярных биологически активных веществ - антител к ДНК и алкалоидам, а также применение аффинных амперометрических биосенсоров в иммуноанализе и в количественной оценке его специфичности. Темой шестой главы является разработка биоаффинных методов определения высокомолекулярных биологически активных веществ - ДНК и ее фрагментов на основе амперометрического иммуносенсора и амперометрического ДНК-зонда. В главе также рассмотрены биоаффинные методы определения низко-и высоко-молекулярных биологически активных веществ на основе иммуно-ферментных тест-систем со спектрофотометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала. В седьмой главе описывается использование разработанных биоаффинных методов на основе ДНК в анализе биологических объектов на содержание тяжелых металлов, противоопухолевых препаратов и антител к ДНК для диагностики аутоиммунных заболеваний и в анализе экологических объектов на содержание тяжелых металлов. В Заключении представлен предложенный автором алгоритм создания и использования ДНК-содержащего биосенсора.

Автор выражает благодарность заведующему кафедрой неорганической химии Казанского университета профессору Н.А.Улаховичу, профессору кафедры неорганической химии Ю.И.Сальникову, доценту кафедры неорганической химии В.Г.Штырлину, заведующему кафедрой аналитической химии профессору Г.К.Будникову, профессору кафедры аналитической химии Э.П.Медянцевой и профессору кафедры аналитической химии Г.А.Евтюгину за постоянную поддержку, полезные советы и замечания, высказанные в процессе обсуждения работы.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Бабкина, Софья Сауловна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе продемонстрированы примеры высокоспецифичного и чувствительного определения низко- и высокомолекулярных БАВ в сложных многокомпонентных системах с помощью разработанных БАМ с электрохимической, спектрофотометрической и визуальной регистрацией аналитического сигнала на основе взаимодействия биолигандов (ДНК, AT, AT, ферментов), способных выступать в качестве биоаналитических реагентов, с их эффекторами. При этом показаны возможности различных вариантов биоаффинного распознавания (ДНК-эффектор, ДНК-АТ, фермент-субстрат, фермент-ингибитор, последовательность ДНК - комплементарная последовательность ДНК) и эффективность различных способов усиления сигнала, полученного в результате биоаффинного взаимодействия, за счет использования каталитических процессов различной природы ( ферментативный катализ, каталитические токи выделения водорода). Полученные с помощью предложенных методов исследования количественные характеристики биоаффинного взаимодействия расширяют и позволяют систематизировать представления о функционировании биологически активных веществ. Предложенные подходы исследования биовзаимодействий и принципы разработки биоаффинных аналитических методов могут найти свое приложение к самому широкому кругу биологических объектов и биоаналитических систем.

К сожалению, в литературе отсутствует обобщение подходов к разработке конкретных БАМ для анализа заданных веществ, нет алгоритма создания БАМ для распознавания и детекции, в частности, с использованием ДНК-содержащего БС и ДНК-зондов, хотя именно такие БС являются универсальными инструментами исследования и анализа.

В представленной работе на основании всего объема проведенных исследований в области разработки биоаффинных методов анализа, в том числе с использованием ДНК-содержащих биосенсоров, проведена систематизация подходов к созданию таких сенсоров, которая позволяет оптимизировать усилия по дальнейшим разработкам биосенсоров, сделать их более целенаправленными, и получить ДНК-содержащие биосенсоры с наилучшими операционными характеристиками, позволяющие решать широкий спектр современных аналитических задач.

Алгоритм создания и использования ДНК-содержащего биосенсора

1. Оценка объекта анализа

1.1 Оценить примерное содержание в нем определяемого вещества (аналита)

1.2 Выяснить характер взаимодействия аналита с ДНК (интеркалятор, алкилирующий агент, окислитель, и т.д.)

2. Выбор формы ДНК для иммобилизации

2.1. Учесть характер взаимодействия аналита с ДНК

2.2. Изучить процесс комплексообразования аналита с ДНК.

2.3. Подобрать оптимальные рабочие условия регистрации взаимодействия ДНК-аналит

3. Выбор трансдьюсера

3.1. Учесть характер сигнала и подобрать способ его количественной оценки

3.2. Учесть диапазон определяемых концентраций аналита и необходимую чувствительность детекции

3.3. Учесть требования аналитической задачи

3.3.1. Стационарный анализ или в анализ потоке

3.3.2. Выбрать между одноразовым и многоразовым трансдьюсе-ром

3.3.3. Оценить необходимость миниатюризации трансдьюсера

4. Выбор способа иммобилизации

4.1. Выбрать время, условия адсорбции и состав исходного раствора при физической иммобилизации

4.2. Выбрать модификатор, время и условия взаимодействия с ДНК и с трансдьюсером (матрицей - носителем ДНК) при ковалентной иммобилизации

4.3. Оптимизировать состав биочувствительного слоя (раствора) для измерения

4.3.1. Оценить необходимость использования переносчика

4.3.2. Оценить необходимость соиммобилизации метки

5. Выбор системы усиления биосигнала при взаимодействии ДНК с аналитом

5.1. Использовать ферментативное усиление

5.2. Использовать модулятор активности фермента (ингибитор, активатор)

5.3. Использовать систему авидин (стрептавидин) - биотин

5.4. Использовать в качестве метки металл или его комплекс

6. Оценка операционных характеристик БС

6.1. Установить наличие вымываемости ДНК или метки в случае соим-мобилизации в процессе работы и при хранении

6.2. Оценить биологическую активность ДНК после иммобилизации и при хранении

6.3. Оценить стабильность работы БС при интенсивном использовании. Установить число рабочих циклов

6.4. Выбрать условия хранения БС

6.5. Оценить стабильность работы БС при хранении

7. Подбор рабочих условий проведения анализа

7.1. Выбрать рН

7.2. Выбрать между кинетическим или диффузионным режимом в зависимости от устойчивости комплекса ДНК-эффектор

7.3. Определить минимально необходимую продолжительность этапов анализа

7.4. Исключить неспецифическое взаимодействие с трансдьюсером и ДНК-содержащей биочувствительной частью

8. Построение градуировочного графика

9. Оценка метрологических характеристик, чувствительности детекции, чувствительности и воспроизводимости анализа

10. Оценка влияния матричных компонентов анализируемой системы

11. Адаптация метода пробоподготовки или доказательство отсутствия ее необходимости

12. Доказательство специфичности анализа (введение некомплементарных олигонуклеотидов в случае гибридизации ДНК, введение интеркаляторов или алкилирующих агентов со сходной с аналитом структурой и т.д.)

13. При отсутствии индивидуальной специфичности доказать наличие групповой специфичности анализа

14. Сравнение результатов анализа с помощью ДНК-сенсора с результатами независимых методов

1. Сформулированы научно-методические подходы к разработке и применению биоаффинных способов определения низко- и высокомолекулярных эффекторов ДНК и других биологически активных веществ на основе биосенсоров и тест-систем. Показана перспективность использования разработанных биоаффинных методов при анализе многокомпонентных систем, при диагностике заболеваний и экомониторинге.

2. Разработаны общие подходы, позволяющие оценить количественные параметры взаимодействия тяжелых металлов с ДНК. Обоснован выбор денатурированной ДНК для иммобилизации в составе нитроцеллюлозной мембраны как универсального биоспецифического аналитического реагента в биоаффинных методах. Доказана наибольшая эффективность использования иммобилизованной денатурированной ДНК для моделирования ее взаимодействия с эффекторами: тяжелыми металлами, платиносодержащими противоопухолевыми препаратами, аутоантителами, и для создания ДНК-содержащих биосенсоров, тест-систем; установленные соотношения нуклео-тид-металл в комплексах, доли их накопления в растворе и константы устойчивости для данной формы ДНК максимальны.

3. Выявлена роль адсорбции тяжелых металлов (из индивидуальных растворов и при совместном присутствии) на модицифицированной мембране в формировании аналитического сигнала ДНК-содержащего биосенсора. Высокие значения констант устойчивости комплексов металлденатурированная иммобилизованная ДНК свидетельствуют о специфичности их взаимодействия. Показана возможность селективного определения тяжелых металлов в многокомпонентных био- и экосистемах до n х 10'11 моль/л с помощью биоспецифического мембранного концентрирования на биосенсоре. Найдены рабочие условия функционирования и реактивации биосенсора для его многократного использования в зависимости от природы эффекторов ДНК.

4. Разработан биоаффинный метод определения низкомолекулярных эффекторов ДНК - противоопухолевых лекарственных препаратов на основе комплексов платины цисплатина и оксоплатина по каталитическим токам выделения водорода, возникающих при комплексообразовании платины с денатурированной ДНК в составе биосенсора с нижней границей определяемых содержаний (с„) фармпрепаратов 5,0x10"9 моль/л для цисплатина и 6,0x10"10 моль/л для оксоплатина.

5. Расширены аналитические возможности ДНК-содержащего биосенсора при определении высокомолекулярных эффекторов ДНК - аутоантител к ДНК с использованием комплекса Pt(II) в качестве метки ДНК или аутоантител. Установлена неоднородность популяции аутоантител к ДНК и определены значения аффинных констант связывания в системе ДНК-аутоантитело,

Q Я 1 которые составляют (1,25±0,02)х10 и (2,50±0,03)х10 моль" , что свидетельствует о высокой специфичности аутоантител к ДНК.

6. Обоснован принцип действия и аналитические возможности биоаффинного мембранного концентрирования интеркаляторов ДНК на примере определения индольного алкалоида аймалина в сыворотке крови и фармпрепаратах с применением биосенсора на основе стеклоуглеродного электрода и нативной ДНК, иммобилизованной в нитроцеллюлозной мембране.

7. Показаны перспективы повышения чувствительности, селективности и экспрессности иммуноанализа сыворотки крови с вольтамперометрической регистрацией при использовании различных систем биоаффинного распознавания, каталитического усиления сигнала и применения новых способов иммобилизации биомолекул на ряде примеров определения аутоантител к ДНК: с помощью ферментного сенсора на основе холинэстеразы и синтезированного конъюгата ДНК с ингибитором холинэстеразы хлорофосом (сн = о

2,0x10" моль/л); с помощью иммуноферментного сенсора на основе соиммо-билизации ДНК и холинэстеразы (сн = 5,0x10"11 моль/л).

8. Созданы биоаффинные иммуноферментные тест-системы для массового экспресс-анализа низко- и высокомолекулярных биологически активных веществ (на примере аймалина и аутоантител к ДНК) на готовых нитроцел-люлозных мембранах, модифицированных ковалентно связанными компонентами биовзаимодействия, со спектрофотометрической и визуальной регистрацией сигнала с использованием его ферментативного усиления. Достоинством предложенных тест-систем являются простота в использовании, отсутствие дополнительной пробоподготовки, экономичность, высокая специфичность, пригодность для качественной оценки и протоколирования результатов анализа.

9. Разработан амперометрический иммуносенсор на основе аутоантител и комплекса Pt(II) в качестве метки {сн = 0,5 мкг/мл) для определения денатурированной ДНК. Амперометрический ДНК-зонд с новым биодетектирую-щим слоем с ковалентно иммобилизованными олигонуклеотидами в нитро-целлюлозной мембране на поверхности стеклоуглеродного электрода предложен для изучения процесса гибридизации ДНК и определения последовательности нуклеотидов. Биоаффинный метод с ферментативным усилением сигнала при образовании комплементарного комплекса с применением в качестве метки щелочной фосфатазы и системы биотин-стрептавидин обеспечивают высокую чувствительность, селективность и возможность определения повреждений структуры ДНК под действием различных эффекторов.

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Бабкина, Софья Сауловна, 2005 год

1. Благой Ю.П. Металлокомплексы нуклеиновых кислот в растворах/ Ю.П. Благой, В.Н. Галкин, Г.О. Гладченко.- Киев: Наукова думка, 1991.- 372 с.

2. Anderson C.F. Sodium-23 NMR studies of cation-DNA interaction / C.F.Anderson, M.T.Record, P.A.Hart // Biophys. Chem.-1978.-V. 7, № 4.- P. 301-316.

3. Касьяненко H.A. Исследование молекулярного механизма взаимодействия ДНК с двухвалентными ионами/ Н.А.Касьяненко, Н.Е.Дьяконова, Э.В.Фрисман // Молекуляр. биология. 1989.-Т. 23, № 4.-С. 835-841.

4. Неорганическая биохимия/ Под.ред. Г.Эйхгорна.-М.: Мир, 1978.- Т.2.-736 с.

5. Биологические аспекты координационной химии/ Под ред. К.Б.Яцимирского.-Киев: Наукова думка, 1979. с. 267.

6. Kornilova S.V. Effect of metal ions on DNA conformation and their biological action on genetic structures of cells/ S.V. Kornilova, Yu.P. Blagoy, I.P. Moskalenko// Stud. Biophys.- 1988.-V. 123, № 2.-P. 77-84.

7. Zimmer Ch. Interaction of zinc(II) ions with native DNA/ Ch.Zimmer // Stud. Biophys.-1973.-V. 35, № 2.-P. 115-121.

8. Брегадзе В.Г. Интерпретация ультрафиолетовых дифференциальных спектров ДНК в комплексе с некоторыми ионами первого переходного ряда/ В.Г.Брегадзе// Биофизика.- 1974.-Т. 19, № 1.-С. 179-181.

9. Petri I. Application of matrix rank analysis to the binding of copper(II) ions with DNA and acridine orange with a polyphosphate/ I.Petri, W.Forster, G.Lober // Stud. Biophys.-1974.-V. 45, № l.-P. 61-74.

10. Fritzsche H. New results about the copper(II)-DNA complex/ H.Fritzsche // Stud. Biophys.-1970.-V. 21/22, № 5.-P. 315-320.

11. Sissoeff J. Studies of metal ions-DNA interactions: Specific behaviour of interactive DNA sequences/ J.Sissoeff, J.Grisvaid, E.Guite // Progr. Biophys. and Mol. Biol.-1976.-V. 31, № 2.-P. 165-199.

12. Зенгер В. Принципы структурной организации нуклеиновых кислот/ В.Зенгер. М.: Мир.-1987.-584 с.

13. Kantz G.P.P. A nuclear magnetic resonance relaxation time study of the man-ganese(II) inosine-5'-triphosphate complex in solution/ G.P.P.Kantz, G.A.Kotowyez// Biochemistry.-1975. V. 14, P. 4144-4150.

14. Андроникашвили Э.Л. Малигнизация и изменение некоторых физико-химических свойств биомакромолекул и надмолекулярных структур/ Э.Л.Андроникашвили // Биофизика.-1987.-Т. 32, № 5.-С. 782-799.

15. Eichgorn G.L. Interaction of metal ions with polynucleotides and related compounds. The relative effect of various metal ions on DNA helity/ G.L.Eichgorn, Y.A.Shin // J. Amer. Chem. Soc.-1968.-V. 90, № 26.-P. 73237328.

16. Sorokin V.A. Studies of formation of bivalent copper complexes with native and denatured DNA/ V.A.Sorokin, Yu.P.Blagoi, V.A.Valeev// J. Inorg. Bio-chem.-1987.-V. 30, № 2.- 87-101.

17. Eichhorn G.L. Interactions of metal ions with polynucleotides and related compounds. The binding of соррег(П) to nucleosides, nucleotides and deoxyribonucleic acids/ G.L.Eichhorn, P.Clark, E.D.Becker // Biochemistry.- 1976.-V. 5, № 2.- P. 246-253.

18. Кантор Ч. Биофизическая химия: в 3 т. / Ч.Кантор, П.Шиммел.- М.: Мир, 1985.- Т. 3.-536 с.

19. Venner Н. Studies on nucleic acids changes in the stability of DNA secondary structure by interaction with divalent metal ions/ H.Venner, Ch.Zimmer // Biopolymers.- 1966.-V. 4, № 2.- P. 321-335.

20. Blagoi Yu.P. Magnesium ion effect on the helix-coil transition of DNA/ Yu.P. Blagoi, V.A. Sorokin, V.A. Valeev// Biopolymers.- 1978.-V. 17, № 5.- P. 1103-1118.

21. Baxter-Gabbard K. The effects of cations and diamines on the viscosity of T-2 DNA/ K.Baxter-Gabbard, D.Freser // Biopolimers.-1974.-V. 13, № l.-P. 207216.

22. Zimmer Ch. DNA-copper(II) complex and the DNA-conformation/Ch. Zimmer, G. Luck, H. Fritzsche//J. Mol. Biol.-1983.-V. 169, № l.-P. 217-234.

23. Howard F.B. Poly(inosinic acid) helices: essential chelation of alkali metal ions/ F.B.Howard, H.T.Miles // Biochemistry.- 1982.-V. 21, № 26.- P. 67366745.

24. Fiol J.J. Some new derivatives of Ni(II) witn uracil, uridine and nucleotides/ J.J.Fiol, A.Terron, V.Moreno // Inorg. Chem. Acta.-1986.-V. 125, № 3.- P. 159-166.

25. Kim S.-H. Binding sites and stabilities of transition metal ions with nucleosides and related ligands/ S.-H.Kim, R.B.Martin // Inorg. Chem. Acta.-1981.-V. 91, № l.-P. 19-21.

26. Мартин Р.Б. Взаимодействие между ионами металлов и нуклеиновыми основаниями, нуклеозидами и нуклеотидами в растворах/ Р.Б.Мартин, Я.Х.Мариам // Ионы металлов в биологических системах/ Под ред. Х.Зигеля.-М.: Мир, 1982.-Т. 3.- С. 53-103.л I л I

27. Osipov A.N. DNA-protein cross-links in leukocytes of mice induced by Zn(II), Cd(II) and Pb(II)/ A.N.Osipov, V.D.Sypin, O.G.Polsky //Biochemistry.-1997.-V.62, N.6.-P. 681-683.

28. Clement R.M. Interaction of metallic cations with DNA. Specific binding of Mg2+ and Mn2+/R.M.Clement, J.Sturn, M.P.Daune // Biopolymers.- 1973.-V. 12, №2.- P. 405-421.

29. Fritzsche H. Interaction of DNA and metal ions. A 13C-NMR study of some nucleobides and nucleotides adding Cu(II) and Mn(II) ions/ H.Fritzsche, K.Arnold, R.Krusche // Stud. Biophys.-1974.-V. 45, № l.-P. 131-143.

30. Chen M.S. Complexes of divalent metal ions with nucleosides and nucleotides/ M.S.Chen // Inorg. Perspect. Biol. Med.-1983.-V. 1, № 3.-P. 217-222.

31. Mikulski Ch.M. Guanine complexes with first row transition metal perchlo-rates/Ch. M.Mikulski, L. Matucci, Y. Smich// Inorg. Chem. Acta.-1983.-V. 80, № 3.-P. 127-133.

32. Granol J. Interactions of DNA with divalent metal ions/ J.Granol, D.R.Kearns, J.Feigon // Biopolymers.- 1982.-V. 21, № 1 p. 203-232.

33. Shirotake S. Complexes between nucleic acid bases and bivalent metal ions. Synthesis and spectroscopic analysis of adenine zinc chloride and calcium chloride complexes/ S.Shirotake // Chem. Pharm. Bull.-1980.-V. 28, № 6.-P. 1673-1682.

34. Sander C., Tso P.O.P. Interaction of nucleic acids. Binding of magnesium ions by nucleic acid/ C.Sander, P.O.P.Tso // J. Mol.Biol. 1971.-V. 55, №1.-P.l-21.

35. Bregadze V.G. RF inductivity coupled plasma spectrometry of DNA-metal complexes: Binding constants and water desorption kinetics/ V.G.Bregadze, G.N.Berhiashvili, E.S.Gelagutashvili // Stud. Biophys.-1984.-V. 101, № l.-P. 151-152.

36. Касьяненко H.A. Исследование молекулярного механизма взаимодействия ДНК с двухвалентными ионами/ Н.А.Касьяненко, Н.Е.Дьяконова, Э.В.Фрисман // Молекуляр. биология. 1989.-Т. 23, № 4.-С. 835-841.

37. Record M.T., Double helical DNA: Conformations, physical properties and interactions with ligands/M.T. Record, S.I. Mazur, P. Melanson// Ann. Rev. Biochem.-1981.-V. 50.-P. 997-1024.

38. Clement R.M. Interaction of metallic cations with DNA. Specific binding of Mg2+ and Mn27 R.M.Clement, J.Sturn, M.P.Daune // Biopolymers.- 1973.-V. 12, №2.-P. 405-421.

39. Blagoi Yu.P. Magnesium ion effect on the helix-coil transition of DNA/ Yu.P. Blagoi, V.A. Sorokin, V.A. Valeev// Biopolymers.- 1978.-V. 17, № 5.- P. 1103-1118.

40. Forster W. Thermodynamics and kinetics of the interaction of copper(II) ions with native DNA/ W. Forster, E. Bauer, H. Schutz// Biopolymers.- 1979.-V. 18, № 3.- P. 625-661.

41. Krakauer H. A thermodynamic analysis of the influence of simple mono- and divalent cations on the conformational transitions of polynucleotide complexes/ H.Krakauer// Biochemistry.- 1974.-V. 13, № 12.-P. 2579-2589.

42. Благой Ю.П. Спектральное исследование связывания оснований ДНК с ионами магния и кальция/ Ю.П.Благой, В.А.Сорокин, В.А.Валеев // Мо-лекуляр. биология. 1980.-Т. 14, № З.-С. 595-605.

43. Willemsen A.M. Interaction of magnesium ions with poly A and poly U/ A.M.Willemsen, G.A.J.Van Os // Biopolymers.- 1971.-V. 10, № 6.- P. 945960.

44. Studnikova M. Interaction of poly A with the cations of alkaline earth metals/ M.Studnikova, H.Klukomova, J.Kovar // Stud. Biophys.-1982.-V. 92, № 2.-P. 97-98.

45. Porschke D. Thermodynamic and kinetic parameters of ion condensation to polynucleotides. Outer sphere complex formed by Mg(II) ions/ D.Porschke // Biophys. Chem.-1976.-V. 4, № 4.-P. 383-394.

46. Яцимирский К.Б. Константы устойчивости комплексов металлов с био-лигандами/ К.Б.Яцимирский, Е.Е. Крисс, В.Л.Гвяздовская -Киев: Нау-кова думка, 1979.-228 с.

47. Rifkind J.M.Cooperative disordering of singlestranded polynucleotides thruugh copper crosslinking/J.M. Rifkind, Y.A. Shin, J.M. Heim// Biopoly-mers.-1976.-V. 15,№9.-P. 1879-1902.

48. Тихонова JI.И. Изучение взаимодействия дезоксирибонуклеиновой кислоты с некоторыми ионами металлов методом кругового дихроизма/ Л.И.Тихонова, А.Ф.Русак // Журн. физ. химии.-1978.-Т. 52, № 10.-С. 2683-2685.

49. Enmanji К. Proton, phosphorus and cation nuclear magnetic relaxation studies on the interaction of polyriboadenylic acid with Mn(II)/ K.Enmanji // J. Po-lym. Sci.-1987.-V. 22. № 3.-P. 883-895.

50. Jordan F. Evidence for of guanosine cadmium(II) complex. A specific nucleoside metal interaction/ F.Jordan, B.Y.MeFarguhar // J. Amer. Chem. Soc.-1972.-V. 94, № 18.- P. 6557-6558.

51. Захаренко E.T., Мошковский Ю.Ш. Связывание ионов меди и кадмия дезоксирибонуклеиновой кислотой и продуктами ее деградации/ Е.Т.Захаренко, Ю.Ш.Мошковский // Биофизика.- 1966.- Т.9, № 6.- С. 945-950.

52. Сорокин В.А. Исследование влияния ионов двухвалентной меди на кон-формацию полирибоадениловой кислоты/В.А. Сорокин, Ю.П. Благой, В .А. Валеев// Молек. биол.-1982.- Т. 16, № 2.-С. 369-378.

53. Франк-Каменецкий М.Д. Флуктуационная подвижность ДНК/ М.Д.Франк-Каменецкий // Молек. биол.-1983.-Т. 17, № З.-С. 639-652.

54. Слоницкий С.В. Влияние ионной силы на термодинамическую жесткость молекулы нативной ДНК в водных и водно-органических растворителях/ С.В.Слоницкий, Э.В.Фрисман, А.К.Валеев, А.М.Ельяшевич // Молек. биол.-1983.-Т. 14, № З.-С. 496-506.

55. Lopez-Ortal P. DNA damage produced by Cd(II) in a human fetal hepatic cell line/ P.Lopez-Ortal, V.Souza, L.Bucio // Mutat. Res.-1999.-V. 439, № 2.-P. 301-306.

56. Karlik S.J. Interaction of aluminium species with deoxyribonucleic acid/ S.J.Karlik, G.L.Eichhorn, P.N. Lewis, D.R.Crapper // Biochemistry.- 19B0.-V. 19, № 26.- P. 5992-5998.

57. Cai Y. DNA damage in human peripheral blood lymphocyte caused by Ni(II) and Cd(II)/ Y.Cai, Z.Zhuang // Mutat. Res.-1999.-V.33, № 2.-P.75-77.

58. Devaux A. Monitoring of the chemical pollution of the river Rhone through measurement of DNA damage and cytochrome P4501A induction in chub/

59. A.Devaux, P.Flammarion, V.Bernardon // Mar. Environ. Res.-1998.-V.46, № 1-5.-P.257-262.

60. Кампанелла JI. Некоторые причины возникновения опухолей: точка зрения химика-аналитика/ Л.Компанелла// Экспер.онкология.- 2001. Т.23. - С.76-77.

61. Campanella L. Further developments in toxicity cell biosensors/ L.Campanella, G.Favero, D.Mastrofini, M.Tomassetti// Sensors Actuators. -1997.-B 44. -P.279-285.

62. Rosenberg B. Platinum compounds: a new class of potent antitumor agents/

63. B.Rosenberg, L.VanCamp, J. E.Trosko, V.H.Mansour // Nature.-1969.-V. 222.- P. 385-386.

64. Kidani Y. Antitumor activity of 1,2-diaminocyclohexane platinum complexes against Sarcoma-180 ascites form/ Y. Kidani, K. Inagaki, M.Iigo // J. Med Chem.-1978.-V. 21.-P. 1315-1318.

65. Elder R.C. Synchrotron X-ray studies of metal-based drugs and metabolites/ R.C.Elder, M.K.Eidsness // Chem. Rev.-1987.-V. 87, № 5.-P. 1035-1046.

66. Noji M. Relation of conformation to antitumor activity of platinum(II) complexes of 1,2-cyclohexanediamine and 2-(aminoethyl)cyclohexylamine isomers against Leukemia P 388/ M.Noji, K.Okamoto, Y.Kidani // J. Med. Chem.-1981.-V. 24.-P. 508-515.

67. Brown D.B. Synthesis and antitumor activity of new platinum complexes/ D.B. Brown, A.R.Khokhar, M.P. Hacker// J. Med Chem.-1982.- V. 25.- P. 952-956.

68. Barnham К. J. Ring-opened adducts of the anticancer drug carboplatin with sulfur aminoacids/K. J. Barnham, M.J. Djuran, P.S. Murdoch// Inorg. Chem.-1996.-V. 35, № 4.-P. 1065-1072.

69. Kopf-maier P. Non-platinum group metal antitumor agents: history, current status, and perspectives/ P.Kopf-maier, H.Kopf // Chem. Rev.-1987.-V.87, № 5.-P.1137-1152.

70. Ozols R.F. Chemotherapy of ovarian cancer/ R.F.Ozols, R.C.Young // Semin. Oncol.-1984.-V. 11.-P. 251-263.

71. Scovell W.M. Interaction of aquated cis-(NH3)2Ptn. with nucleic acid constituents. 1. Ribonucleosides/ W.M.Scovell, T.O'Connor // J. Amer. Chem. Soc.-1977.-V. 9, № 1.- P. 120-126.

72. Marsh K.C. Post-column reaction detector for platinum(II)antineoplastic agents/ K.C.Marsh, L.A.Sternson, A.J.Repta // Anal. Chem.-1984.-V. 56, № 3.-P.491-497.

73. Bitha P. Third generation antitumor platinum complexes/ P. Bitha, S.G. Car-vajal, R.V. Citarella// J. Med. Chem.-1989.-V. 32.-P. 2063-2067.

74. Einhorn L.H. Cis-diamminedichloroplatinum, vinblastine, andbleomycin combination chemotherapy in disseminated testicular cancer/ L.H.Einhorn, J.Donohue // Ann. Inter. Med.-1977.- V. 37.- P. 293-298.

75. Loehrer P J. Drugs five year later. Cisplatin/ P.J.Loehrer, L.H.Einhorn // Ann. Inter. Med.-1984.- V. 100.- P. 704-713.

76. Lin X.J. The role of DNA mismatch repair in cisplatin mutagenicity/ X.J.Lin, H.K.Kim, S.B.Howell //J. Inorg. Biochem. -1999.-V.77, № 1-2.-P. 89-93.

77. Jamieson E.R. Structure, recognition, and processing of cisplatin-DNA ad-ducts/ E.R.Jamieson, S.J.Lippard // Chem. Rev. -1999.-V. 99, № 9.-P. 24672498.

78. Malina J. DNA interactions of antitumor cisplatin analogs containing enantiomeric amine ligands/ J.Malina, C.Hofr, L.Maresca, G.Natile, V.Brabec// Biophysical J. 2000 - V.78. - P.2008-2021.

79. Панина H.C. Диаквадиамминные комплексы платины(П). Определение устойчивых продуктов гидролиза на основе данных квантовомеханиче-ских DTF расчетов/ Н.С.Панина, А.Н.Беляев, С.А.Симанова// Журн.общ.химии 2003. - Т.23, № 12. - С. 1937-1941.

80. Bowler В.Е. Synthesis and DNA binding and photo-nicking properties of ac-ridine orange linked by a polymethylene ether to (1,2-diaminoethane)dichloroplatinum(II)/ B.E.Bowler, S.Hollis, S.J.Lippard // J. Amer. Chem. Soc.-1984.-V.106, № 20.-P. 6102-6104.

81. Kim D.K. Synthesis and antitumor Activity of a series of 2-substituted-4,5-bis(aminoethyl)-l,3-dioxolane.platinum(II) Complexes/ D.K.Kim, G.Kim, J.Gam // J. Med. Chem.-1994.-V. 37, № 10,- P. 1471-1485.

82. Reedijk J. New clues for platinum antitumor chemistry: kinetically controlled metal binding to DNA/ J.Reedijk// PNAS. 2003 - V.100, No.7. - P.3611

83. Xing В. In vitro binding of an orally active platinum antitumor drug, JM216 to metallothionein/ B.Xing, H.Zhu, Y.Shi, W.Tang// BioMetals. 2001. -V.14. -P.51-57.

84. Стеценко А.И. Химия противоопухолевых комплексных соединений платины/ А.И.Стеценко, М.А.Преснов, А.Н.Коновалова // Успехи хи-мии.-1981.-Т. 50, № 4. С.665-669.

85. Che С.М. Platinum(II) complexes of dipyridophenazine as metallointercala-tors for DNA and potent cytotoxic agents against carcinoma cell lines/C.M. Che, M.S. Yang, K.H. Wong// Chem.Eur. J.-1999.-V. 5, № 8.-P. 3350-3356.

86. Wakelin L.P.G. Kinetics of drug-DNA interaction. Dependence of the binding mechanism on structure of the ligand/ L.P.G.Wakelin, M.J.Waring // J. Mol. Biol.-1980.-V. 144.-P. 183-214.

87. Liu J.D. Enantiomeric ruthenium(II) complexes binding to DNA: binding modes and enantioselectivity/J.D.Liu, B.H.Ye, O.L.Zhang// J.Biol.Inorg.Chem.-2000.-V. 5, № 1.-P. 119-128.

88. Lippard S.J. The structure of drug-deoxydinucleotide phosphate complex. Generalised conformational behavior of intercalation complexes with RNA and DNA fragments/ S.J.Lippard//Nucl. Acids. Res.-1980.-V. 8, № l.-P. 8597.

89. Keinwachter V. Interaction of platinum (II) coordination complexes with deoxyribonucleic acid/ V.Keinwachter // Stud. Biophys.-1978.-V. 73, № 1.- P. 1-17.

90. Mansy S. Binding of cis- and trans-dichlordiamineplatinum to nucleotides. I. Location of the Binding Sites/ S.Mansy, B.Rosenberg, A.J.Thomson //J. Am. Chem. Soc.-1973.-V. 95, № 5.- P. 1633-1640.

91. Lippard S.J. Platinum complexes: probes of polynucleotide structure and antitumor drugs/ S.J.Lippard // Acc. Chem. Res.-1978.-V. 11.- P. 211-217.

92. Chu C.Y.H. Heavy metal nucleotide interactions/ C.Y.H.Chu, R.E.Duncan, RS.Tobias//Inorg. Chem.-1977.-V. 16. -P. 2625-2636.

93. Sherman S.E. Structural aspects of platinum anticarcer drug interactions with DNA/ S.E.Sherman, S.J.Lippard // Chem. Rev.-1987.- V. 87, № 5.-P. 11631181.

94. Стеценко А.И. Комплексные соединения платины(П) с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями и их нуклеозидами/ А.И.Стеценко, К.И.Яковлев, С.А.Дьяченко // Успехи химии.-1987.-Т. 56, № 9.- С. 15331563.

95. Sigel RK.O. Pt-II coordination to guanine-N7: enhancement of the stability of the Watson-Crick base pair with cytosine/ R.K.O.Sigel, B.Lippert // Chem.Com.-1999.-V.21 .-P. 2167-2168.1. A ,

96. Pelmenschikov A. cis-Pt(NH3)2. coordination to the N7 and 06 sites of a guanine-cytosine pair: disruption of the Watson-Crick H-bonding pattern/A. Pelmenschikov, I. Zilberberg, J. Leszczynski//Chem. Phys.Let.-1999.-V.314, № 5-6.-P. 496-500.

97. Яковлев К.И. Моноядерные катионные комплексы платины(Н) с производными цитозина и изоцитозина/ К.И.Яковлев, С.Ф.Лапина, А.И.Стеценко, Г.М.Алекссева // Изв. вузов. Химия и химич. технол.-1996.-Т. 39, № 3.- С. 75-78.

98. Zaludova R. The effect of ionic strength on melting of DNA modified by platinum(II) coplexes/ RZaludova, V.Kleinwachter, V.Brabec // Biophys. Chem.-1996.-V. 60, № 3. P. 135-142.

99. Волченскова И.И. Исследование парамагнитного олигомера платины с гуанином масс-спектрометрическим методом бомбардировки быстрыми атомами/ И.И. Волченскова, С.А. Шалимов, Л.В. Кейсевич// ЖУРН. структур, химии.-1994.-Т. 35, № 4.-С. 117-122.

100. Cramer R.E.Crystal and molecular structure of cis-Pt(NH3)2(Gua)2.Cl3/2(C104)i/2x7H20 and anticancer activity of cis-[Pt(NH3)2(PyO)2]Cl2 comlexes/R.E. Cramer, P.L. Dahlstrom, M.J.T. Seu //Inorg. Chem.-1980.-V. 19, № l.-P. 148-154.

101. Borton J.K. Solid state structure, susceptibility, and single crystal ESR properties of cis-diammineplatinum a-pyridine blue/ J.K. Borton, D.J. Szalda, H.N. Rabinotitz//J. Am. Chem. Soc.-1979.-V.101, № 6.- P. 1434-1441.

102. Стеценко А.И. Физико-химические свойства и строение неэлектролитных комплексов платины (II) с аденином и аденозином/ А. И. Стеценко, И.И. Волченкова, Е.С. Дмитриева// Коорд. химия.-1980.-Т. 6, № 9.- С. 1455-1462.

103. Scovell W.M. Interaction of aquated cis-(NH3)2Ptn. with nucleic acid constituents. I. Ribonucleosides/ W.M.Scovell, T.O'Connor // J. Am. Chem. Soc.-1977.-V. 99, № 1.- P. 120-126.

104. Ш.Преснов M.A. Исследование противоопухолевой активности комплексных соединений платины(1У)/ М.А. Преснов, Н.Н. Желиговская, А.В. Бабков//ДАН СССР.-1976.-Т. 229, № 4.-С. 226-229.

105. Novakova О. DNA interactions of antitumor platinum(IV) complexes/ O.Novakova, O.Vrana, V.LKiseleva, V.Brabec // Eur. J. Biochem.-1995 .-V. 228, № 3.-P. 616-624.

106. Young T.S. Preliminary X-ray diffraction studies of ecory restriction endonu-clease-DNA complex/ T.S.Young, S.H.Kim, P.Modrich // J. Mol. Biol.-1981.-V. 145, № 2.-P. 607-610.

107. Meperson A. The structure of the gene 5 DNA unwinding protein and its complexes with oligodeoxynucleotides by X-ray diffraction/ A.Meperson, F.Jurnak, A.Wang//J. Biophys.-1980.-V. 32, № l.-P. 155-173.

108. Hyppel P.H. DNA-protein interactions/ P.H.Hyppel, J.D.Meghee //Rev. Bio-chem.-1972.-V.41 .-P.231 -245.

109. Lancelot G. Conformational study of the dipeptidearginyl glutamic acid and of its complex with nucleic bases/ G.Lancelot, R.Mayer, C.Helene // J. Amer. Chem. Soc.-1979.-V. 101.-P. 1560-1576.

110. Брусков В.И. Об узнавании оснований нуклеиновых кислот аминокислотами и пептидами с помощью водородных связей/ В.И.Брусков // Мол. биол.-1975.- Т. 9, № 1.-С. 34-39.

111. Gresh N. A theoretical study of the intercalation of guanine and cytosine with specific amino acid chains/ N.Gresh, B.Pullman // Biochem. Biophys. Acta.-1980.-V. 608, № l.-P. 47-63.

112. Narayanan P. Model compounds for protein nucleic acid interactions/ P.Narayanan, H.Berman, R.Rousseau // J. Amer. Chem. Soc.-1976.-V. 98.-P. 8472-8475.

113. Гольдфарб Д.М. Антитела к нуклеиновым кислотам/ Д.М.Гольдфарб, Л.А.Замчук М.: Наука, 1975.-С.5-249.

114. Зуев В.А. Медленные вирусные инфекции человека и животных/ В.А.Зуев М.: Медицина, 1988. - 256 с.

115. Руководство по медицине. Диагностика и терапия./ Под ред. Р. Беркоу, Э. Флетчера.- М.: Мир, 1997. С. 771-878.

116. Van Helden P.O. Autoantibodies from patients with systemic lupus erythematosus can affect DNA and RNA synthesis in cultured cells/ P.O.Van Helden, L.A.J.Bester, E.H. Van Helden, L.Van Lill / Biochim. Biophys. Acta.-1989-V. 1009, №2.-P. 137-142.

117. Иммуноферментный анализ/Под.ред. Т.Т.Нго, Г.Ленхоффа.-М.:Мир, 1988.-446 с.

118. Blake С. Use of enzymes in immunoassay techniques/ C.Blake, B.J.Gould// Analyst.- 1984. V. 109. — P.533-547.

119. Дзантиев Б.Б. Классификация и характеристика методов иммуноферментного анализа/ Б.Б.Дзантиев, А.П.Осипов// Итоги науки и техники. Биотехнология. М.: ВИНИТИ, 1987. - Т.З. - С.56-116.

120. Hertl W. Amperometric immunoassay/ W.Hertl// Bioelectrochem. and Bio-energ. 1987. - V. 17, No. 1. - P.89-100.

121. Heinemann W.R. Strategies for electrochemical immunoassay/ W.R.Heinemann, H.B.Halsall// Anal.Chem. 1985.- V.57, No.12. -P.1321A-1331A.

122. Finley P.R. Evaluation of a new homogeneous enzyme inhibitor immunoassay of serum thiroxine with use of a bichromatic analyzer/ P.R.Finley, R.J.Williams, D.A.Lichti//Clin.Chem. 1980. -V.26. - P. 1723-1726.

123. Медянцева Э.П. Ферментный датчик на основе иммобилизованной хо-линэстеразы в иммуноферментном анализе/ Э.П.Медянцева, ГК.Будников, С.С.Бабкина, М.Г.Вертлиб// Казан.ун-т. Казань , 1990,-Деп в ОНИИТЭХИМ 01.08.90, №572-хп 90.

124. Evtugyn G. Affinity biosensors based on disposable screen-printed electrodes modified with DNA/ G.Evtugyn, A.Mingaleva, H.Budnikov, E.Stoikova, V.Vinter, S. Eremin //Anal. Chim. Acta. 2003. - V.479. - P. 125-134.

125. Будников Г.К. Электрохимические ДНК-сенсоры/ Г.К.Будников, Г.А.Евтюгин, О.Э.Гольдфарб, С.В.Белякова, Т.И.Абдуллин, В.Г.Винтер/ Тез.докл. ЭМА-2004. VI Всерос.конф. по электрохим.метод.анал. Уфа, 2004. - С.266-267.

126. Palecek E. Electrochemical enzyme-linked immunoassay in a DNA hybridization sensor/ E.Palecek, R.Kizek, L.Havran, S.Billova, M.Fojta// Anal.Chim.Acta. 2002. - V.469. - P.73-83.

127. Ленинджер А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функции клеток/А. Ленинджер. М.: Мир, 1974.- 958 с.

128. Будников Г.К. Современное состояние и перспективы развития вольтам-перометрии / Г.К.Будников // Журн. аналит. химии,- 1996.- Т. 51, № 4,-С. 374-383.

129. Palecek Е. Biopolymer modified electrodes in the voltammetric determination of nucleic acids and protein at the submicrogram level/ E.Palecek, F.Jelen, C.Teijeiro // Anal. Chim. Acta.-1993.-V.273, № 1-2.-P. 175-186.

130. Palecek E. Electrochemical behaviour of biological macromolecules/ E.Palecek //Bioelectrochem.- 1986.- V. 15, № 1-2.- P. 275-295.

131. Barker G. Electron exchange between mercury and denatured DNA strands/ G.Barker//J. Electroanal. Chem.- 1986.- V. 214.- P. 373-390.

132. Palecek E. New trends in electrochemical analysis of nucleic acids/ E.Palecek //J. Electroanal. Chem.- 1988.- V. 254.- P. 179-193.

133. Fojta M. Mercury electrodes in nucleic acid electrochemistry: Sensitive analytical tools and probes of DNA structure. A review/ M.Fojta// Col-lect.Czech.Chem.Commun. 2004. - V.69. - P.715-747.

134. Fojta M. Electrode potential modulated cleavage of surface confined DNA by hydroxyl radicals detected by an electrochemical biosensor./ M.Fojta, T.Kubicarova, E.Palecek //Biosens.Bioelectron. -2000. V. 15. - P. 107-115.

135. Sistare M.F. Electrochemical studies of polynucleotide binding and oxidation by metal complexes: effects of scan rate, concentration and sequence/ M.F.Sistare, R.Holmberg // J. Phys. Chem.-1999.-V. 103, № 48.-P.10718-10728.

136. Ontko A.C. Electrochemical detection of single-stranded DNA using polymer-modified electrodes/ A.C.Ontko, P.Armistead, S.Kircus // Inorg. Chem.-1999.-V.38, № 8.- P. 1842-1846.

137. Jelen F. Osmium tetroxide reactivity of DNA bases in nucleotide sequencing and probing of DNA structure/ F.Jelen, P.Karlovsky, E.Palecek // Gen. Physiol. Biophys.-1991.-V.10.- P. 461-473.

138. Havran L. Voltammetric behavior of DNA modified with osmium tetroxide 2,2'-bipyridine at mercury electrodes/ L.Havran , M.Fojta, E.Palecek// Bio-electrochemistry. 2004. - V.63, No. 1-2. - 239-243.

139. Kauffmann J.M. Pharmaceutical and biomedical applications of electroanaly-sis/ J.M.Kauffmann, J.C.Vire // Anal. Chim. Acta.-1997.- V. 347, № 1-2.- P. 1-8.

140. Езерская H.A. Каталитические полярографические токи в растворах комплексов платиновых металлов и их применение для определения микроконцентраций этих элементов/ Н.А.Езерская, И.Н.Киселева // Журн. аналит. химии. 1984,- Т. 39, № 9.- С. 1541-1549.

141. Езерская Н.А. Вольтамперометрическое определение платины в лекарственных препаратах, биоактивных соединениях и биообъектах(обзор)/ Н.А.Езерская // Хим. фарм. журн.-1996.-Т. 30, № 6.- С. 57-61.

142. Колпакова Н.А. Определение платины методом инверсионной вольтам-перометрии в биологических материалах/ Н.А.Колпакова, Е.А.Смышляева, С.А.Тузиков, А.В.Дорошенко// Журн.аналит.химии. — 2003. Т.58, №3. - С.303-306.

143. Биосенсоры: основы и приложения/ Под ред. Э. Тернера- М.: Мир, 1991.-615 с.

144. Евдокимов Ю.М. Био датчики на основе нуклеиновых кислот/ Ю.М.Евдокимов, С.Т.Скуридин // ВИНИТИ Итоги науки и техники. Биотехнология.-1990.-Т. 26.-С. 134-161.v 282

145. Будников Г.К. Биосенсоры как новый тип аналитических устройств/ Г.К.Будников// Соросовский общеобраз.журн. 1996. - №12. — С.26.

146. Palecek Е. Electrochemical analysis of nucleic acids/ E.Palecek, M.Fojta,

147. F.Jelen, V.Vetterl// Encyclopedia of electrochemistry/ Ed. A.J.Bard, M.Stratman. Wiley-VCH Verlag GmbH, 2002. - V.9. - P.365-429.

148. Mascini M. DNA electrochemical biosensor/ M.Mascini, I.Palchetti,

149. G.Marazza// Fresenius J.Anal.Chem. 2001. - V.369. - P.15-22.

150. Chaubey A. Mediated biosensors/ A.Chaubey, B.D.Malhotra// Biosens.Bioelectron. 2002. - V.17. - P.441-456.

151. Скуридин С.Г. Биодатчики на основе жидкокристаллических дисперсий ДНК/ С.Г.Скуридин // Изв. АН СССР. Сер. физ.-1991.- Т. 55, № 9.- С. 1817-1824.

152. Pandey Р.С. Evanescent fluorobiosensor for the detection of polyaromatic hydrocarbon based on DNA intercalation/ P.C.Pandey, H.H.Wectall // Appl. Biochem. and Biotechnol A.-1995.- V. 55, № 2.- P. 87-94.

153. Marco M.P. Enviromental applications of analytical biosensors/ M.P.Marco,

154. D.Bareclo // Meas. Sci. and Technol.-1996.- V. 7, № 11.- P. 1547-1562.

155. Krull U. Towards a fiber-optic DNA biosensor for detection E. Coli/ U.Krull, P.Piunno, L.Henke //NATO ARW Smolenice.-1997.-P. 25-26.

156. Takagi M. DNA as electrochemical analyte and as electrochemical sensory material/ M.Takagi, M.Maeda, K.Nakano // Asianalysis III. The third Asian Conference on Analytical Scienes.-1997.-P. 21.

157. Wang J. Peptide nucleic acid probes for sequence-specific DNA biosensors/ J.Wang, E.Palecek, P.E.Nielsen // J. Amer. Chem. Soc.-1996.- V. 33, № 21.-P. 7667-7670.

158. Wang J. Detection of point mutation in the p53 gene using a peptide nucleic acid biosensor/ J. Wang, G. Rivas, X.H. Cai, E.Palecek// Anal. Chim. Acta.1997.-V. 344, № 1-2.-P. 111-118.

159. Fojta M. Determination of traces of RNA in submicrogram amouns of single-or double stranded DNAs by means of nucleic acid-modified electrodes/ M.Fojta, R.Doffkova, E.Palecek // Electroanalysis.-1996.- V. 8, № 5.- P. 420426.

160. Jelen F. Adsorptive stripping square-wave voltammetry of DNA/ F.Jelen, M.Tomschik, E.Palecek // J. Electroanal. Chem.-1997.-V. 423, № 1-2.-P. 141148.

161. Cai X.H. Electrochemical analysis of formation of polynucleotide complexes in solution and at electrode surfaces/ X.H. Cai, G. Rivas, H. Shirashi, E.Palecek// Anal. Chim. Acta.-1997.- V. 344, № 1-2.- P. 65-76.

162. Sun X. Immobilization of single-stranded deoxyribonucleic acid on gold electrode with self-assembled aminoethanethiol monolayer for DNA electrochemical sensor application/ X.Sun, P.He, S.Liu, L.Ye, Y.Fang// Talanta. —1998. — V.47. P.487-495.

163. Palecek E. From polarography of DNA to microanalysis with nucleic acid-modified electrodes/ E.Palecek// Electroanalysis.-1996.- V. 8, № 1.- P. 7-14.

164. Palecek E. DNA-modified electrodes: new tools in molecular recognition, detection of DNA damage and analysis of environmental pollutants/ E.Palecek, M.Fojta, M.Tomschik//NATO ARW Smolenice.-1997.-P. 82-83.

165. Wang J. DNA electrochemical biosensor for environmental monitoring/ J. Wang, G. Rivas, X.H. Cai, E.Palecek// Anal. Chim. Acta.-1997.- V. 347, № 1-2.-P. 1-8.

166. Wang J. Adsorption and detection of peptide nucleic acid at carbon paste electrodes/ J. Wang, G. Rivas, X.H. Cai, E.Palecek // Electroanalysis.-1996.- V. 9, № 2.- P. 120-124.

167. Wang J. DNA electrochemical biosensor for environmental monitoring/ J.Wang // NATO ARW Smolenice.-1997.-P. 27.

168. Brett A.M.O. Applications of an electrochemical DNA-biosensor/ A.M.O.Brett, S.H.P.Serrano, M.A.La-Scalea // NATO ARW Smolenice.-1997.-P. 28.

169. Brett A.M.O. Applications of an electrochemical DNA-biosensor to environmental problems/ A.M.O.Brett, S.H.P.Serrano, M.A.La-Scalea // Biosensors for direct monitoring on environmental pollutants in field.- Kluwer Academic Publishers, 1998.-P.78-86.

170. Fojta M. Supercoiled DNA modified mercury electrode: A highly sensitive tool for the detection of DNA damage/ M.Fojta, E.Palecek // Anal. Chim. Acta.-1997.- V. 342, № 1.- P. 1-12.

171. Jelen F. Voltammetry of native doublestranded, denatured and degraded DNAs/ F.Jelen, M.Fojta, E.Palecek // J. Electroanal. Chem.-1997.-V. 427, № 1-2.-P. 49-56.

172. Wang J. Trace measurements of RNA by potenciometric stripping analysis at carbon paste electrodes/ J.Wang, X.Cai, C.Jonsson // Anal. Chem.-1995.- V. 67, P. 4065-4070.

173. Pividori M.I. Electrochemical genosensor design: immobilization of oligonucleotides onto transducer surface and detection methods/ M.I.Pividori, A.Merko9i, S.Alegret// Biosens.Bioelectron. -2000. V.15. -P.291-303.

174. Hashimoto K. Microfabricated disposable DNA sensor for detection of hepatitis В virus DNA/ K.Hashimoto, K.Ito, Y.Ishimori// Sensors Actuators. 1998. - B46. — P.220-225.

175. Marrazza G. Disposable DNA electrochemical sensor for hybridization detection/ G.Marazza, I.Chianella, M.Mascini// Biosens.Bioelectron. 1999. -V.14. -P.43-51.

176. Avidin-biotine technology/ Ed. M.Wilchek, E.A.Bayer//Methods in enzymol-ogy/ Ed. J.N.Abelson, M.I.Simon. Academic Press, 1990. - V.184. - P.6-67.

177. Wang J. Polishable and renewable DNA hybridization biosensors/ J.Wang, J.R.Fernandes, L.T.Kubota// Anal.Chem. 1998. - V.70. - P.3699-3702.

178. Chiorcea A.M. Atomic force microscopy characterization of an electrochemical DNA-biosensor/ A.M.Chiorcea, A.M.O.Brett// Bioelectrochem. 2004. -V.63, No. 1-2. - P.229-232.

179. Ge C. Electric potential control of DNA immobilization on gold electrode./ C.Ge, J.Liao, W.Yu, N.Gu // Biosens.Bioelectron. 2003. - V. 18. - P.53-58.

180. Korbut O. Damage to DNA indicated by an electrically heated DNA-modified carbon paste electrode./ O.Korbut, M.Buckova, P.Tarapcek, J.Labuda, P.Grundler // J.Electroanal.Chem. 2001. - V.506. - P. 143-148.

181. Kerman K. Electrochemical DNA biosensor for the determination of benzoa.pyrene-DNA adducts./ K.Kerman, B.Meric, D.Ozkan, P.Kara, A.Erdem, M.Oszoz// Anal.Chim.Acta. 2001. - V .450. - P.45-52.

182. Marrazza G. Disposable DNA electrochemical biosensors for environmental monitoring/ G.Marrazza, I.Chianella, M.Mascini// Anal.Chim.Acta. 1999. -V.387. — P.297-307.

183. Guo M. Electrochemical characteristics of the immobilization of calf thymus DNA molecules on multi-walled carbon nanotubes./ M.Guo, J.Chen, D.Liu, L.Nie, S.Yao// Bioelectrochem. 2004. - V.62. - P.29-35.

184. Piedade J.A.P. Electrochemical sensing of DNA-adriamycin interactions./ J.A.P.Piedade, I.R.Fernandes, A.M.O. Brett// Bioelectrochem. 2002. - V.56. — P.81-83.

185. Jelen F. Cyclic voltammetry of echinomicin and its interaction with double-stranded and single-stranded DNA adsorbed at the electrode./ F.Jelen, A.Erdem, E.Palecek// Bioelectrochem. 2002. - V.55. - P. 165-167.

186. Munnini M. Biosensors as new analytical tool for detection of genetically modified organisms (GMOs)./ M.Munnini, S.Tombelli, E.Mariotti,

187. M.Mascini, M.Mascini// Fresenius J.Anal.Chem. 2001. - V.369. - P.589-593.

188. Palecek E. Electrochemistry of nucleic acids and development of DNA sensors./ E.Palecek, F.Jelen// Crit.Rev.Anal.Chem. 2002. - V.32, No.3. -P.261-270.

189. Abreu F.C. Detection of the damage caused to DNA by niclosamide using an electrochemical DNA-biosensor./ F.C. Abreu, M.O.F. Goulart, A.M.O. Brett // Biosens. Bioelectron. 2002. - V.17.- P.913-919.

190. Barek J. Electrochemical methods for monitoring of environmental carcinogens./ J.Barek, J.Cvacka, A.Muck, V.Quaiserova, J.Zima// Fresenius J.Anal.Chem. 2001. - V.369. - P.556-562.

191. Lucarelli F. Electrochemical DNA biosensor as a screening tool for the detection of toxicants in water and wastewater samples./ F.Lucarelli, I.Palchetti, G.Marrazza, M.Mascini // Talanta. 2002. - V.56. - P.949-957.

192. Некоторые вопросы токсичности ионов металлов/ Под ред. Х.Зигель, А.Зигель. М.: Мир, 1993.-С. 222-227.

193. Hason S. Impedance analysis of DNA and DNA-drug interactions on thin mercury film electrodes./ S.Hason, J.Dvorak, F.Jelen, V.Vetterl// Crit.Rev.Anal.Chem. -2002. V.32, No.2. - P. 167-179.

194. Radi A. Electrochemical study of the interaction of levofloxacin with DNA./ A.Radi, M.A.E1 Ries, S.Kandil// Anal.Chim.Acta. 2003. - V.495, No. 1-2. -P.61-67.

195. Palecek E. Detecting DNA hybridization and damage./ E.Palecek, M.Fojta// Anal .Chem. 2001. - V.73, No.3. - P.74A-83A.

196. Palecek E. DNA hybridization at microbeads with cathodic stripping voltam-metric detection./ E.Palecek, S.Billova, L.Havran, R.Kizek, A.Miculkova, F.Jelen// Talanta. 2002. - V.56. - P.919-930.

197. Wang J. Scanning electrochemical microscopic imaging of surface-confined DNA probes and their hybridization via guanine oxidation./ J.Wang, F.Zhou// J.Electroanal.Chem. 2002. - V.537. - P.95-102.

198. Fajkus M. Peculiarities of the DNA hybridization on the surface of bilayer lipid membranes./ M.Fajkus, T.Hianik // Talanta. 2002. - V.56. - P.895-903.

199. Yosypchuk B. Use of solid amalgam electrodes in nucleic acid analysis./

200. B.Yosypchuk, M.Heyrovsky, E.Palecek, L.Novotny// Electroanalysis. 2002. - V.14, No.21. - P. 1488-1493.

201. Kostecka P. Voltammetry of osmium-modified DNA at a mercury film electrode: Application in detecting DNA hybridization./ P.Kostecka, L.Havran, H.Pivonkova, M.Fojta// Bioelectrochemistry. 2004. - V.63, No. 1-2. -P.245-248.

202. Palecek E. Past, present and future of nucleic acids electrochemistry./ E.Palecek// Talanta. 2002. - V.56. - P.809-819.

203. Jung A. DNA chip technology./ A.Jung // Anal.Bioanal.Chem. 2002. -V.372. - P.41-42.

204. Wang J. Nucleic-acid immobilization recognition and detection at chronopo-tentiometric DNA chips./ J.Wang, X.Cai, G.Rivas, H.Shirashi, N.Dontha// Biosens.Bioelectron. 1997. - V. 12, No.7. - P.587-599.

205. Marquette C.A. Impedance based DNA chip for direct Tm measurement./

206. C.A.Marquette, I.Lawrence, C.Polychronakos, M.F.Lawrence // Talanta. — 2002.-V.56.-P.763-768.

207. Антитела 2. Методы/ Под ред. Д.М.Кэтти. М.: Мир, 1991. - С.158.

208. Егоров A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа/ А.М.Егоров, А.Н.Осипов, Б.Б.Дзантиев, Е.М.Гаврилова,- М.: Высшая школа, 1991.-288с.

209. Towbin H. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications./ H.Towbin, T.Staehelin, J.Gordon// Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1979. - V.76. - P.4350-4354.

210. A.c. 1562831 СССР MKM3G01N27/48. Способ определения хлорофоса и прозерина/ Г.К.Будников, С.С.Бабкина, Э.П.Медянцева, И.Л.Федорова; Казанский гос.университет. № 4485080/31-25; Заявлено 11.07.88; Опубл. 1990, Бюл.№17.

211. Budnikov Н.С. An enzyme amperometric sensor for toxicant determination/ H.C.Budnikov, E.P.Medyantseva, S.S.Babkina // J.Electroanal.Chem. 1991. -V.310. - P.49-55.

212. Медянцева Э.П. Вольтамперометрический контроль иммунологических реакций/ Э.П.Медянцева, С.С.Бабкина, М.Г.Вертлиб, Г.К.Будников// Журн.аналит.химии. 1993. - Т.48, № 10. - С. 1632-1638.

213. А.с. 1832198 СССР MKH5G01N33/53. Способ определения антител в сыворотке крови/С.С.Бабкина, Э.П.Медянцева, Г.К.Будников, М.Г.Вертлиб, Н.Н.Ибрагимова, В.Г.Винтер; Казанский гос.университет.- №4902268/14; Заявлено 14.01.91; Опубл. 1993, Бюл.№29.

214. Ткачева Т.К. Радиоиммунологический анализ. Справочник/ Т.К.Ткачева.- М.: Медицина, 1983. С.32-34.

215. Пат. 2088230 РФ. МКИ 6 А 61 К 31/475, 39/385. Способ получения конъюгата аймалина с бычьим сывороточным альбумином/ С.С.Бабкина, В.Г.Винтер, А.С.Зайнуллина; Казанский гос.университет. №93039016/14; Заявл. 27.07.93; Опубл. 27.08.97.

216. Бабкина С.С. Иммуноферментный метод определения низкомолекулярных органических соединений со спектрофотометрической индикациейаналитического сигнала/ С.С.Бабкина, В.Г.Винтер, А.С.Зайнуллина// Журн.аналит.химии. 1994. - Т.49, № 10. - С.1119-1123.

217. Щербакова Э.С. Метод обработки на ЭВМ результатов физико-химического исследования комплесных соединений в растворах / Э.С. Щербакова, И.П. Гольдштейн, К.А. Кочешков // Изв. АН СССР. Сер. хим.-1975. №6. - С.1262-1271.

218. Shevelkova A.N. Thermodynamic mechanism of catalysis by haloper-oxydases/ A.N.Shevelkova, Yu.I.Salnikov, N.L.Kuzmina, A.D.Ryabov // FEBS Letters.-1996.-V.383.-P.259-263.

219. Холин Ю.В. Количественный физико-химический анализ комплексообразования в растворах и на поверхности химически модифицированных кремнеземов: содержательные модели, математические методы и их приложения/ Ю.В.Холин Харьков: Фолио, 2000. — 288 с.

220. Новиков Ю.В. Методы исследования качества воды водоемов/ Ю.В. Новиков, К.О. Ласточкина, З.Е. Болдина М.: Медицина, 1990. - С. 173-248.

221. Бабкина С.С. Использование комплексообразования ионов железа (III) с различными формами ДНК с целью разработки биосенсора для анализа сыворотки крови»/ С.С.Бабкина, Н.А.Улахович// Биомед.химия. 2004 — Т.50, вып.6. - С.500-505.

222. Fojta M. Electrode potential-controlled DNA damage in the presence of copper ions and their complexes/ M.Fojta, L.Havran, T.Kubicarova, E.Palecek// Bioelectrochemistry.-2002.-V.55.-P.25-27.

223. Руководство по медицине. Диагностика и терапия./ Под ред. Р. Беркоу, Э. Флетчера.- М.: Мир, 1997. С. 771-878.

224. Клиническая оценка лабораторных тестов/Под. ред. Н.У. Тица.-М.'Медицина, 1986.-480 с.

225. Сорокин В.А. Исследование связывания ионов Fe(III) с ДНК/ В.А. Сорокин, В.О. Гладченко, В.А. Валеев // Мол. биол. 1983. - Т. 17, № 4. - С. 868-876.

226. Эткинс П. Физическая химия/ П.Эткинс М.: Мир, 1980.- Том 2. -С. 492521.

227. Адсорбция из растворов на поверхностях твердых тел/ Под ред. Г.Парфита М.: Мир, 1986. - С. 13-59.

228. Варфоломеев С.Д. Биокинетика/ С.Д.Варфоломеев.— М.: ФАИР-Пресс, 1999.-720 с.

229. Упахович Н.А. Определение эффекторов дезоксирибонуклеиновой кислоты с помощью биохимического амперометрического сенсора/

230. Н.А.Улахович, С.С.Бабкина, Ю.И.Зявкина // Российский химический журнал. Журн. РХО им. Д.И.Менделеева. 1999. - Т.43,№3-4. - С.147-149.

231. Дятлова Н.М. Комплексоны/ Н.М.Дятлова, В.Я.Темкина, И.Д.Колпакова.-М.: Химия, 1970.- 416 с.

232. Korper S. Differential effects of alkaloids on sodium currents of isolated single skeletal muscle fibers/ S.Korper, M.Wink, R.H.A.Fink// FEBS Lett. -1998.-V.436.-P.251-255.

233. Органическая электрохимия/Под.ред. М.Бейзера, Х.Лунда М.: Химия, 1988. — Т.1. -с.469.

234. Еремин С.А. Иммунохимический анализ лекарств и органических соединений/ С.А.Еремин// Журн. ВХО им. Д.И.Менделеева. — 1989. -Т.34, №1. С.46-51.

235. Медянцева Э.П. Амперометрический биохимический сенсор на основе иммобилизованной холинэстеразы в иммуноанализе пестицидов./ Э.П.Медянцева, М.Г.Вертлиб, Г.К.Будников, С.С.Бабкина, С.А.Еремин // Журн.аналит.химии. 1995. - Т.50, №7. - С.782-786.

236. McClintock S.A. Homogeneous voltammetric immunoassay of haptens/ S.A.McClintock, W.Purdy// Electrochemical sensors in immunological analysis/Ed. T.T.Ngo. -N.Y.: Plenum Press, 1987. P.77-85.

237. Дзантиев Б.Б. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа/ Б.Б.Дзантиев, А.М.Егоров// Журн. ВХО им. Д.И.Менделеева. 1982. - Т.27 - С.82-89.

238. Franek M. Antibody-based methods for surfactant screening./ M. Franek, J. Zeravik, S.A.Eremin, J.Yakovleva, M.Badea, A.Danet, C.Nistor, N.Ocio, J.Emneus //Fresenius J.Anal.Chem. 2001. - V.371. - P.456-466.

239. Ковалев И.Е. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям./ И.Е.Ковалев, О.Ю.Полевая М.: Наука, 1985. - 304 с.

240. Садритдинов Ф.С. Фармакология растительных алкалоидов и их применение в медицине / Ф.С.Садритдинов, А.Г.Курмуков // Ташкент, 1980. -С. 20-23.

241. Ястребова Н.Е. Аутоантитела к ДНК и иммуноферментный метод их определения/ Н.Е.Ястребова, Н.П.Ванеева//Иммуноферментный анализ в диагностике заболеваний. Сб.трудов. М., 1989. - С. 110-124.

242. Rubenstein К.Е. Homogeneous enzyme immunoassay: new immunochemical technique/ K.E.Rubenstein, R.S.Schneider, E.F.Ullman// Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1972.- V.47.-P.846-851.

243. Ngo T.T. Recent advances in homogeneous and separation-free emzyme immunoassays/ T.T.Ngo, H.M.Lenhoff// Appl. Biochem. Biotechnol. — 1981. -V.6. — P.53-64.

244. Гаврилова E.M. Гомогенный иммуноферментный анализ новое направление иммунохимии/ Журн. ВХО им. Д.И.Менделеева. - 1982. -Т.27, №4 - С.450-457.

245. Будников Г.К. Амперометрические датчики на основе иммобилизованных ферментов/ Г.К.Будников, Э.П.Медянцева, С.С.Бабкина // Успехи химии. 1991. - Т.60, №4. - С.881-910.

246. Babkina S.S. An enzyme amperometric sensor for the determination of choli-nesterase effectors/ S.S.Babkina, E.P.Medyantseva, H.C.Budnikov//Abs.4th Eur.Conf. on Electroanalysis. ESEAC'92.- Noordwijkerhout, the Netherlands, 1992. P.58.

247. A.c. 1296913 СССР МКИ G01N27/30. Ферментный электрод для определения концентрации тиохолиновых эфиров/Г.К.Будников,

248. Э.П.Медянцева, Н.А.Улахович, С.С.Бабкина. Казанский гос.университет.- №3749229/31-25; Заявл. 19.03.84; Опубл.1986, Бюл.№10.

249. Дукур И.И. Алеутская болезнь норок/ И.И.Дукур, В.С.Слугин, В.А.Чижов// Болезни пушных зверей/ Под ред. Е.П.Данилова. М.: Наука, 1984. - С.78-87.

250. Babkina S.S. New variants of enzyme immunoassay of antibodies to DNA/ S.S. Babkina, E.P. Medyantseva, H.C. Budnikov, M.P. Tyshlek// Anal. Chem.-1996.- V. 68, №21.-P. 3827-3831.

251. Медянцева Э.П. Амперометрический иммуноферментный электрод на основе иммобилизованной холинэстеразы/ Э.П.Медянцева, С.С.Бабкина, Г.К.Будников, И.Л.Федорова, Н.Н Ибрагимова.// Журн.аналит.химии. -1992. Т.47, № 6. - С. 1101-1106.

252. А.с. 1615173 СССР МКИ G12M1/40. Устройство для определения ингибиторов и активаторов холинэстеразы/ Г.К.Будников, С.С.Бабкина, Э.П.Медянцева; Казанский гос.университет. №4458197/31; Заявлено 11.07.89; Опубл. 1990, Бюл.№47.

253. Будников Г.К. Электрохимическое определение кинетических параметров ферментативной реакции с участием иммобилизованной холинэсте-разы/Г.К.Будников, Э.П.Медянцева,С.С.Бабкина// Электрохимия. 1989. - Т.25, №9. - С.1283-1286.

254. Медянцева Э.П. Ферментный электрод на основе иммобилизованной холинэстеразы в анализе потенциальных загрязнителей окружающей среды/ Э.П.Медянцева, Г.К.Будников, С.С.Бабкина // Журн.аналит.химии. -1990. Т.45, №7. - С.1386-1389.

255. Babkina S.S. Enzyme amperometric sensor for the determination of choli-nesterase inhibitors or activators./ S.S.Babkina, E.P.Medyantseva, H.C.Budnikov, V.G.Vinter // Analytica Chimica Acta. 1993. - V.273. -P.419-424.

256. Nucleus acids in immunology/ Ed.O.Pescia, W.Braun. Springer-Verlag, 1968.-P.98.

257. Помогайло А.Д. Макромолекулярные металлохелаты/ А.Д.Помогайло, И.Е.Уфлянд. М.: Химия, 1991. - 210 с.

258. Бабкина С.С., Исследование комплексообразования Pt(II) с денатурированной ДНК. / С.С.Бабкина, О.В.Климович, Н.А.Улахович // Структура и динамика молекулярных систем. Сборник статей. Йошкар-Ола - Казань - Москва, 1996. - Ч.1.- С.43-46

259. Cotton F.A. Advanced inorganic chemistry/ F.A.Cotton, G.Wilkinson. -N.Y.:Wiley, 1980.- 950 p.

260. Бабкина С.С. Определение аутоантител к ДНК с помощью биосенсора на основе комплекса Pt(II) с ДНК/ С.С.Бабкина, Н.А.Улахович, Э.П.Медянцева, О.В Климович // Прикл.биохимия и микробиология. -1998. Т.34,№5. - С.572-575.

261. Babkina S.S. Amperometric biochemical sensor based on immobilized deoxyribonucleic acid (DNA): A new tool for ecological monitoring/ S.S.Babkina, N.A.Ulakhovich, E.P.Medyantseva, Yu.A.Zyavkina // Ecological Congress. -2000.- V.3,No.2. -P.37-42.

262. Babkina S.S. Amperometric DNA biosensor for the determination of autoantibodies using DNA interaction with Pt(II) complex/ S.S.Babkina, N.A.Ulakhovich, Yu.I.Zyavkina // Analytica Chimica Acta. 2004. - V.502, N.l. - P.23-30.

263. Дворкин В.И. Метрология и обеспечение качества количественного химического анализа/ В.И.Дворкин. -М.: Химия, 2001. 263 с.

264. Бабкина С.С. Амперометрический биосенсор на основе дезоксирибонук-леиновой кислоты и комплексов платины(Н): новые аналитические возможности/ С.С.Бабкина, Н.А.Улахович, Э.П.Медянцева, Ю.И.Зявкина // Журн.аналит.хим. 1999. - Т.54, № 11. - С. 1205-1211.

265. Koffler D. Antibodies to polynucleotides in human sera: antigenic specifity and relation to disease/ D.Koffler, R.Carr, V.Angello//Science. 1971. -V.116. — P.294-312.

266. Цебецауэр JI. Клиническое значение определения антител к ДНК с различной авидностью при СКВ/ Л.Цебецауэр, А.И.Поверенный, Е.Л.Насонов//Тер.архив. 1987. - №4. - С.48-50.

267. Nossent J.C. Low avidity antibodies to ssDNA as a diagnostic tool/ J.C.Nossent, V.Hugsen, R.T.Smeenk, A.G.Swaak//Ann.Reumat.Dis. 1989. -V.48,N.9. - P.748-752.

268. Семенов Б.Р. Концепция аутоиммунитета в редакции конца 80х и начала 90х/ Б.Р.Семенов//Журн.микробиол. 1995. - №3. - С.45-45.

269. Машковский В.Б. Лекарственные средства./ В.Б.Машковский. М.: Медицина, 1993.-С. 221-230.

270. Бабкина С.С. Иммуноферментное определение антител к ДНК на нит-ратцеллюлозных мембранах/ С.С.Бабкина, В.Г.Винтер, А.С.Зайнуллина //Журн.аналит.химии. 1994.-Т.49,№ 12. - С.1313-1316.

271. Blackburn M.G. Nucleic acids in chemistry and biology/ M.G.Blackburn, M.J.Gait. -N.Y.: IRL Press, 1990. 420 p.

272. Theodorou A. Copper(II) complexes of diclofenac: Spectroscopic studies and DNA strand breakage/ A.Theodorou, M.A.Demertzis, D.Kovala-Demertzi, E.E.Lioliou, A.A.Pantazaki, D.A.Kyriakidis// BioMetals. 1999. - V.12. -P. 167-172.

273. Durackova Z. The Cu(II) complex with tetraaza macrocyclic ligand as a DNA modulator and an antineoplastic agent./ Z.Durackova, L.Novotny, A.Liptakova, I.Dovinova, J.Labuda // J.Inorg.Biochem. 1997. - V.80. -P.350.

274. Ibrahim M.S. Voltammetric studies of the interaction of nogalamycin antitumor drug with DNA/ M.S.Ibrahim// Anal.Chim.Acta. 2001. - V.443. -P.63-72.

275. Гао X. Опреление констант устойчивости комплексов алюминия и меди с пикрамином СА и использование конкурирующей координации для селективного определения следов меди/ Х.Гао// Журн.аналит.химии. — 2003. Т.58, №4. - С.372-377.

276. А.с. 1822971 СССР МКИ 3 G01N27/48. Способ определения микроколичеств тяжелых металлов/ Э.П.Медянцева, С.С.Бабкина, Г.К.Будников, И.Л.Федорова, М.Г.Вертлиб; Казанский гос.университет. №4839153/25; Заявлено 14.06.90; Опубл. 1993, Бюл.№23.

277. Wang J. Hydrophobic stripping voltammetry of antihypertensive drugs at lipid-modified electrodes/ J.Wang, M.Ozsoz//Analyst. 1990. - V.l 15, No.6. -P.831-834.

278. Singh D.K. Spectrophotometric determination of Rauwolfia alkaloids: Estimation of reserpine in pharmaceuticals/ D.K.Singh, B.Srivastana, A.Sahu//Anal.Sci. 2004. - V.20. - P.571-573.

279. Мирзаева X.A. Экстракционно-фотометрическое определение димедрола и папаверина в лекарственных формах/ Х.А.Мирзаева, М.С.Ахмедова, А.Ш.Рамазанов, С.А.Ахмедов// Журн.аналит.химии. 2004. - Т.59, №3. -С.245-249.

280. Бабенко Г.А. Биологическая роль меди / Г.А. Бабенко.- М.: Наука, 1970.- 235с.294.3игель X. Ионы металлов в биологических системах/ X. Зигель. М.: Мир, 1982.- 165 с

281. Кодчайнова В.Н. Медь / В.Н. Кодчайнова, JI.M. Симонова. М.: Наука, 1990.-103 с.

282. Архипова О.Г. Методы исследования в профпатологии (биохимиче-ские)/О.Г. Архипова, Н.Н. Шацкая, JI.C. Семенова. М.: Медицина, 1988.-С. 123-125.

283. Чарыков А.К. Селективность методик химического анализа и способы ее численной оценки/ А.К.Чарыков // Журн. аналит. химии.-1984. -Т. 39, № 9.-С.1708-1714.

284. Новые методы иммуноанализа/ Под ред. У.П.Коллинза. М.: Мир, 1991. -280 с.

285. Егоров A.M. Современный иммунохимический анализ и перспективы его развития/ А.М.Егоров // Журн. ВХО им. Д.И.Менделеева. 1988. -Т.ЗЗ, №5. - С.494-501.

286. Слугин B.C. Персистенция вируса алеутской болезни норок в организме некоторых видов животных/ В.С.Слугин//Науч.тр. НИИ пушн.зверовод. и кроликовод. М., 1981. - С.27-31.

287. Слугин B.C. Чувствительность норок к алеутской болезни/ В.С.Слугин//Ветеринария. 1981. - №5. - С.29-31.

288. Вербов В.Н. Принципы твердофазного иммуноферментного анализа/ В.Н.Вербов // Твердофазный иммуноферментный анализ: Труды ин-та им. Пастера.-Л.: Изд-во ин-та им. Пастера, 1988.-Т. 64.-С. 3-27.