Антитела против синтетических пептидных фрагментов прионного белка для выявления клеточного приона и его патогенной изоформы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Обозная, Мария Борисовна

• Обозная, Мария Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Обозная, Мария Борисовна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ "Антитела к прионному белку: методы получения и рбласти применения"

1.1. Прионные болезни

1.2. Структура прионного белка

1.3. Методы получения антител к прионному белку

1.3.1. Иммунизация выделенным прионым белком

1.3.2. Иммунизация трансгенных бесприонных мышей

1.3.3. Иммунизация рекомбинантным прионным белком

1.3.4. ДНК-иммунизация

1.3.5. Иммунизация синтетическими фрагментами прионного белка, конъюгированными с белком-носителем

1.3.6. Иммунизация мультиантигенными пептидными комплексами

1.3.7. Иммунизация свободными неконъюгированными синтетическими фрагментами прионного белка

1.4. Области применения антител к прионному белку

1.4.1. Методы иммунодиагностики прионных болезней иммунодетекция прионного белка)

1.4.2. Подходы к иммунопрофилактике и иммунотерапии прионных болезней: исследования in vitro

1.4.3. Подходы к иммунопрофилактике и иммунотерапии прионных болезней: исследования in vivo

2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ '

2.1. Выбор пептидов в последовательности прионного белка

2.2. Получение и характеристика антител к синтетическим фрагментам прионного белка у кроликов

2.2.1. Изучение иммуногенной активности свободных синтетических пептидов и их конъюгатов с белком-носителем

2.2.2. Получение рекомбинантного прионного белка

2.2.3. Изучение связывания противопептидных антител кроликов с рекомбинантным прионным белком

2.2.4. Изучение связывания противопептидных антител кроликов с PrPSc и РгРС изоформами прионного белка, выделенными из клеток

2.2.5. Исследование способности противопептидных антител кроликов выявлять патогенный прионный белок в иммуногистохимическом тесте

2.2.6. Препятствие накоплению патогенного приона в культуре клеток в присутствии противопептидных кроличьих антител

2.3. Получение и характеристика антител к синтетическим фрагментам прионного белка у мышей

2.3.1. Изучение иммуногепной активности синтетических пептидов и их аналогов при иммунизации мышей трех линий

2.3.2. Изучение связывания противопептидных антител мышей с рекомбинантным прионным белком

2.3.3. Исследование способности противопептидных антител мышей выявлять патогенный прионный белок в иммуногистохимическом тесте

2.4. Получение и характеристика моноклональных антител к прионному белку у мышей

2.4.1. Получение моноклональных антител к синтетическим пептидам прионного белка

2.4.2. Получение моноклональных антител к рекомбинантному прионному белку

3. ЭКСПЕРИМ ЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Химические реагенты и биологические препараты

3.2. Оборудование и расходные материалы

3.3. Культуры клеток '

3.4. Животные

3.5. Получение конъюгатов пептидов с KLH или с овальбумином

3.6. Получение рекомбинантного прионного белка КРС

3.7. Иммунизация животных

3.7.1. Им мунизация кроликов

3.7.2. Иммунизация мышей для получения иммунных сывороток

3.7.3. Иммунизация мышей для получения моноклональных антител

3.8. Получение сывороток крови

3.9. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА)

3.10. Получение моноклональных антител

3.10.1. Ведение клеточных культур

3.10.2. Замораживание и размораживание клеток

3.10.3. Выделение мышиных перитонеальных макрофагов

3.10.4. Получение гибридом

3.10.5. Скрининг и клонирование гибридом

3.10.6. Культивирование гибридом для наработки антител

3.10.7. Изотипирование антител

3.11. Выделение РгР из клеток нейробластомы. 93 3.11.1. Выделение PrPSc из клеток ScN2a '

3.11.1. Выделение РгР из клеток N2a

3.12. Электрофорез и иммуноблоттинг

3.12.1. Электрофорез и иммуноблоттинг, метод 1 (рис. 2.3, 2.9, 2.10)

3.12.2. Электрофорез и иммуноблоттинг, метод 2 (рис. 2.4-2.6, 2.8)

3.13. Изучение влияния иммунных сывороток на содержание патогенного приона в культуре клеток

3.13.1. Схема эксперимента и иммуноблоттинг образцов

3.13.2. Количественный дот-блоттинг образцов

3.13.3. Иммуноцитохимический анализ

3.14. Иммуногистохимический тест

3.15. Аффинная очистка антител

3.15.1. Аффинная очистка

3.15.2. Трипсинолиз очищенных антител и масс-спектрометрический анализ фрагментов

3.16. Определение аффинности антител 100 ВЫВОДЫ 101 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

At - антитело, антитела

БСА - бычий сывороточный альбумин

ГФИ - гликозилфосфатидилинозитол

ДМСО - диметилсульфоксид

КРС - крупный рогатый скот

ИГХ - иммуногистохимический анализ

ИФА - иммуноферментный анализ мкА - моноклональное антитело, моноклональные антитела

НАФ — неполный адъювант Фрейнда

ПАФ — полный адъювант Фрейнда

ПЭГ - полиэтиленгликоль

ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка

KLH - гемоцианин улитки Megathura crenulata (keyhole limpet hemocyanin)

MAP - мультиантигенные пептидные комплексы

PrP - прионный белок (prion protein)

PrPc - нормальная изоформа прионного белка

PrPSc - патогенная изоформа прионного белка

РгР27"30 — укороченная в результате частичного протеолиза форма патогенного прионного белка гРгР - рекомбинантный прионный белок SDS - додецилсульфат натрия

SDS-PAAG - полиакриламидный гель, содержащий додецилсульфат натрия

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Антитела против синтетических пептидных фрагментов прионного белка для выявления клеточного приона и его патогенной изоформы»

Трансмиссивные губкообразные энцефалопатии, или прионные болезни — это неизлечимые пейродегенеративные заболевания, поражающие человека и некоторые другие виды млекопитающих. Одним из таких заболеваний является губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, эпидемия которой нанесла огромный ущерб сельскому хозяйству Великобритании и ряда других европейских стран. Попадание в организм человека продуктов питания либо лекарственных препаратов, полученных из тканей больных животных, может вызвать прионное заболевание - новый вариант болезни Крейтцфельдта-Якоба. Инфекционный агент этих заболеваний представляет собой патогенную изоформу нормального клеточного белка - РгР. Нормальная (РгРс) и патогенная (PrPSc) изоформы идентичны по своей аминокислотной последовательности, но отличаются по конформации белковой -цепи. Механизм патогенеза объясняют превращением нормального белка в патогенный, которое происходит при их непосредственном контакте, с последующим накоплением агрегатов измененного белка в головном мозге и массовой гибелью нейронов. Патогенная изоформа белка отличается склонностью к агрегации и устойчивостью к протеолизу.

Современная диагностика прионных болезней основана на детекции с помощью антител остающегося в образцах мозга PrPSc после обработки протеиназой. Показано, что антитела к прионному белку способствуют удалению патогенного белка из инфицированных клеток и замедляют ход заболевания у экспериментально зараженных животных. Таким образом, для разработки чувствительных методов диагностики прионных болезней, а также для детального изучения особенностей их патогенеза и создания средств иммунотерапии нужны антитела, специфичные к различным участкам приона. Получение антител к прионному белку - это актуальная задача, особенно принимая во внимание, что в России пока не существует отечественного иммунохимического диагностического теста для выявления губкообразной энцефалопатии.

Проблема получения антител к прионному белку связана с его низкой иммуногенностью, поскольку белки разных видов млекопитающих гомологичны более чем на 90%. В связи с этим получение антител затруднено из-за существования толерантности к прионному белку как к эндогенному антигену. Иммунизация белком приводит к образованию антител, направленных только к небольшому числу эпитопов, несущих межвидовые аминокислотные замены. Альтернативным способом получения антител в таком случае служит иммунизация синтетическими пептидными фрагментами прионного белка, конъюгированными с белком-носителем.

В настоящем исследовании для получения антител к прионному белку мы предлагаем использовать неконъюгированные с белком-носителем синтетические фрагменты белка. Такой подход позволит направленно получить антитела к выбранным структурно и функционально важным участкам белковой цепи. Кроме того, этот метод позволит избежать нежелательных иммунных реакций, возникающих при традиционной иммунизации пептидно-белковыми конъюгатами. Таким образом, диссертационная работа посвящена получению с помощью синтетических пептидов и рекомбинантного белка поликлональных и моноклональных антител, направленных к определенным структурно-функциональным районам прионного белка, способных выявлять изоформы прионного белка, а также обладающих потенциальным иммунотерапевтическим действием.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: "АНТИТЕЛА К ПРИОННОМУ БЕЛКУ: МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ"

1.1. ПРИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

Трансмиссивные губкообразные энцефалопатии, или прионные болезни - это неизлечимые нейродегенеративные заболевания, поражающие человека и некоторые другие виды млекопитающих. В настоящее время известно четыре болезни человека — болезнь Крейтцфельдта-Якоба, куру, синдром Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, фатальная семейная инсомния, и шесть болезней животных - скрепи овец и коз, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота (так называемое «бешенство коров»), трансмиссивная энцефалопатия норок, хроническая изнуряющая болезнь оленей и лосей, губкообразная энцефалопатия кошек и губкообразная энцефалопатия экзотических копытных [1, 2]. Необычность этих болезней заключается в том, что инфекционный агент не является бактерией или вирусом, а представляет собой белковую молекулу — патогенную изоформу (PrPSc) нормального клеточного прионного белка (РгРс) [3]. Прионный белок закодирован в геноме млекопитающих и экспрессируется на поверхности многих клеток организма, а больше всего прионной мРНК найдено в нейронах [4-6].

Прионные болезни могут быть наследственными, приобретенными и спорадическими, но независимо от этиологии заболевания оно может быть передано инфекционным путем [7]. Проникновение инфекционного агента - белка PrPSc - вызывает превращение нормального РгРс белка хозяина в патогенный белок с последующим накоплением его агрегатов. В дальнейшем происходит массовая гибель нейронов, поэтому срезы больного мозга на терминальных стадиях болезни содержат характерные губкообразные изменения. Заражение прионами человека и животных обычно происходит при употреблении пищи, содержащей инфекционный материал. Так, например, причиной возникновения эпидемии губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота в Великобритании считают использование в рационе скота мясо-костной муки, приготовленной из больных животных. В свою очередь, употребление людьми заражённой говядины считают причиной появления неизвестной ранее разновидности болезни Крейтцфельдта-Якоба, так называемого «нового варианта» этой болезни [1, 8]. А болезнь куру, ранее встречавшуюся у жителей Океании, связывают с ритуальным каннибализмом

9].

Заражение также может происходить ятрогенным путем, например, через недостаточно стерилизованные нейрохирургические инструменты. Экспериментальное заражение лабораторных животных производится путем интраперитонеального, перорального или интрацеребрального введения гомогената мозга больного человека или животного здоровому животному.

Развитие губкообразных энцефалопатии, не связанное с проникновением инфекции, имеет наследственный или спорадический характер. Семейная форма болезни Крейтцфельдта-Якоба, фатальная семейная инсомния, синдром Герстманна-Штреусслера-Шейнкера - все эти болезни человека являются наследственными и связаны с врождёнными мутациями в гене прионного белка [2]. К спорадической форме прионных заболеваний относится большинство случаев болезни Крейтцфельдта-Якоба, когда у пациентов с характерными клиническими проявлениями болезни не находят генетических изменений. Возможной причиной возникновения спорадической болезни Крейтцфельдта-Якоба считают спонтанное или обусловленное соматическими мутациями превращение белка РгРс в PrPSc [1].

Неотъемлемым морфологическим признаком болезни является накопление агрегатов белка PrPSc (прионных фибрилл и амилоидных бляшек) в тканях головного мозга [1, 10]. Но в условиях отсутствия или прекращения экспрессии РгРс агрегаты PrPSc не оказывают патологического действия у лабораторных животных [11, 12]. Эти и многие другие данные свидетельствуют о том, что механизм патогенеза прионных заболеваний пока до конца не выяснен.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Обозная, Мария Борисовна

выводы

1. На основе теоретических методов анализа и данных литературы осуществлен выбор потенциально иммуноактивных фрагментов прионного белка и их аналогов.

2. Показано, что выбранные синтетические пептидные фрагменты прионного белка, неконъюгированные с белком-носителем, вызывают образование антител у кроликов и у мышей трех линий. Изучено связывание антител с нормальным и патогенным прионным белком различными методами.

3. Установлено, что кроличьи антитела к пептидам (25-36)-(62-69), 106-134, 172-202 и 214-240 пригодны для разработки диагностикума прионных заболеваний на основе иммуногистохимического анализа, и антитела к пептиду 106-134 - на основе иммуноблоттинга.

4. Выявлено, что кроличьи антитела к пептиду 106-134 препятствуют накоплению патогенного приона в культуре клеток.

5. Установлено, что мышиные антитела к пептидам (17-36)-(62-69), 172-202 и его аналогу 172-202(К), а также к пептиду 214-240 выявляют патогенный прионный белок в иммуногистохимическом тесте.

6. Получены и охарактеризованы три моноклональных антитела к прионному белку. Выявлено, что эпитопы двух антител локализованы на участке белка 222-229, а эпитоп третьего локализован на участке 25-36, и показано, что антитела с эпитопом 222-229 пригодны для выявления патогенного прионного белка иммуногистохимическим методом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Обозная, Мария Борисовна, 2008 год

1. Prusiner S.B. Prion diseases and the BSE crisis.// Science. 1997. V.278. P.245-251.

2. Покровский В.И., Киселёв О.И. Молекулярные основы прионных болезней.// Вестн.1. РАМН. 1998. №10. С.45-55.

3. Prusiner S.B. Molecular biology of prion diseases.// Science. 1991. V.252. P.1515-1522.

4. Basler K., Oesch В., Scott M., Westaway D., Walchli M., Groth D.F., McKinley M.P.,

5. Prusiner S.B., Weissmann C. Scrapie and cellular PrP isoforms are encoded by the same chromosomal gene.// Cell. 1986. V.46. P.417-428.

6. Kretzschmar H.A., Prusiner S.B., Stowring L.E., DeArmond S.J. Scrapie prion proteins aresynthesized in neurons.// Am. J. Pathol. 1986. V.122. P. 1-5.

7. Oesch В., Westaway D., Walchli M., McKinley M.P., Kent SB., Aebersold R., Barry R.A.,

8. Tempst P., Teplow D.B., Hood L.E. A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.// Cell. 1985. V.40. P.735-746.

9. Шкундина И.С., Тер-Аванесян М.Д. Прионы.// Успехи биологической химии. 2006.1. Т.46. С.З—42.

10. Will R.G., Ironside J.W., Zeidler М., Cousens S.N., Estibeiro К., Alperovitch A., Poser S.,

11. Pocchiari M., Hofman A., Smith P.G. A new variant of Creutzfeldt-Jakob disease in the UK.// Lancct. 1996. V.347. P.921-925.

12. Goldfarb L.G., Cervenakova L., Gajdusek D.C. Genetic studies in relation to kuru: anoverview.//Curr. Mol. Med. 2004. V.4. P.375-384.

13. Hegde R.S., Tremblay P., Groth D., DeArmond S.J., Prusiner S.B., Lingappa V.R.

14. Transmissible and genetic prion diseases share a common pathway of neurodegeneration.//Nature. 1999. V.402. P.822-826.

15. Brandner S., Raeber A., Sailer A., Blattler Т., Fischer M., Weissmann C., Aguzzi A. Normalhost prion protein (PrPC) is required for scrapie spread within the central nervous system.//PNAS. 1996. V.93. P.13148-13151.

16. Mallucci G., Dickinson A., Linehan J., Klohn P.C., Brandner S., Collinge J. Depletingneuronal PrP in prion infection prevents disease and reverses spongiosis.// Science. 2003. V.302(5646). P.871-874.

17. MacGregor I. Prion protein and developments in its detection.//Transfus. Med. 2001. V.l 1.1. P.3-14.

18. Groschup MH, Harmeyer S, Pfaff E. Antigenic features of prion proteins of sheep and ofother mammalian species.//J. Immunol. Methods. 1997. V.207(l). P.89-101.

19. Pan Т., Li R., Wong B.S., Liu Т., Gambetti P., Sy M.S. Heterogeneity of normal prionprotein in two- dimensional immunoblot: presence of various glycosylated and truncated forms.// J. Neurochem. 2002. V. 81(5). P. 1092-1101.

20. Harmeyer S, Pfaff E, Groschup MH. Synthetic peptide vaccines yield monoclonal antibodiesto ccllular and pathological prion proteins of ruminants.// J Gen Virol. 1998. V.79(4), P.937-945.

21. Lopez Garcia F., Zahn R., Riek R., Wuthrich K. NMR structure of the bovine prionprotein.// PNAS. 2000. V.97. P.8334-8339.

22. Homemann S., Schorn C., Wuthrich K. NMR structure of the bovine prion protein isolatedfrom healthy calf brains.// EMBO Rep. 2004. V.5(12). P.l 159-1164.

23. DeMarco M.L., Daggett V. Local environmental effects on the structure of the prionprotein.// CR Biologies. 2005. V.328(10-l 1). P.847-862.

24. Smith C.J., Drake A.F., Banfield B.A., Bloomberg G.B., Palmer M.S., Clarke A.R., Collinge

25. J. Conformational properties of the prion octa-repeat and hydrophobic sequences.// FEBS Lett. 1997. V.405. P.378-384.

26. Liemann S., Glockshuber R. Transmissible spongiform encephalopathies.// Biochem.

27. Biophys. Res. Commun. 1998. V.250. P.187-193.

28. Pan K.M., Baldwin M., Nguyen J., Gasset M., Serban A., Groth D., Mehlhom I., Huang Z.,

29. Fletterick R.J., Cohen F.E. Conversion of alpha-helices into beta-sheets features in the formation of the scrapie prion proteins.// PNAS. 1993. V.90. P.10962-10966.

30. Govaerts C., Wille H., Prusiner S.B., Cohen F.E. Evidence for assembly of prions with lefthanded beta-helices into trimers.// PNAS. 2004. V. 101(22). P. 8342-8347.

31. Forloni G., Angerctti N., Chiesa R., Monzani E., Salmona M., Bugiani O., Tagliavini F.

32. Neurotoxicity of a prion protein fragment.//Nature. 1993. V.362. P.543-546.

33. Selvaggini C., De Gioia L., Cantu L., Ghibaudi E., Diomede L., Passerini F., Forloni G.,

34. Bugiani O., Tagliavini F., Salmona M. Molecular characteristics of a protease-resistant, amyloidogenic and neurotoxic peptide homologous to residues 106-126 of the prion protein.//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. V.194. P.1380-1386.

35. Meyer R.K., McKinley M.P., Bowman K.A., Braunfeld M.B., Barry R.A., Prusiner S.B.

36. Separation and properties of cellular and scrapie prion proteins.// PNAS. 1986. V.83. P.2310-2314.

37. Aguzzi A., Polymenidou M. Mammalian prion biology: one century of evolving concepts.//

38. Cell. 2004. V. 116(2). P.313-327.

39. Jarrett, J.T., Lansbury, P.T. Jr. Seeding "one-dimensional crystallization" of amyloid: apathogenic mechanism in Alzheimer's disease and scrapie?// Cell. 1993. V.73. P.1055-1058.

40. Caughey В., Kocisko D.A., Raymond G.J., Lansbury P.T. Jr. Aggregates of scrapieassociated prion protein induce the cell-free conversion of protease-sensitive prion protein to the protease-resistant state.// Chem. Biol. 1995. V.2. P.807-817.

41. Bendheim P.E., Barry R.A., DeArmond S.J., Stites D.P., Prusiner S.B. Antibodies to ascrapie prion protein.//Nature. 1984. V.310(5976). P.418-421.

42. Rubenstein R., Kascsak R.J., Merz P.A., Papini M.C., Carp R.I., Robakis N.K., Wisniewski

43. H.M. Detection of scrapie-associated fibril (SAF) proteins using anti-SAF antibody in non-purified tissue preparations.// J. Gen. Virol. 1986. V.67(Pt 4). P.671-681.

44. Barry R.A., McKinley M.P., Bendheim P.E., Lewis G.K., DeArmond S.J., Prusiner S.B.

45. Antibodies to the scrapie protein decorate prion rods.// J. Immunol. 1985. V.135(l). ■ P.603-613.

46. Cho H.J. Antibody to scrapie-associated fibril protein identifies a cellular antigen.// J. Gen.

47. Virol. 1986. V.67(Pt 2). P.243-253.

48. Kascsak R.J., Rubenstein R., Merz P.A. Carp R.I., Robakis N.K., Wisniewski H.M.,

49. Diringer H. Immunological comparison of scrapic-associatcd fibrils isolated from animals infected with four different scrapie strains.// J. Virol. 1986. V.59(3). P.676-683.

50. Takahashi K., Shinagawa M., Doi S., Sasaki S., Goto H., Sato G. Purification of scrapieagent from infected animal brains and raising of antibodies to the purified fraction.// Microbiol. Immunol. 1986. V.30(2). P.123-131.

51. Barry R.A., Prusiner S.B. Monoclonal antibodies to the cellular and scrapie prion proteins.//

52. J. Infect. Dis. 1986. V.154(3). P.518-521.

53. Kascsak R.J., Rubenstein R., Merz P.A., Tonna-Demasi M., Fersko R., Carp R.I.,

54. Wisniewski H.M., Diringer H. Mouse polyclonal and monoclonal antibody to scrapie-associated fibril proteins.// J. Virol. 1987. V.61(12) P.3688-3693.

55. Bolton D.C., Seligman S.J., Bablanian G., Windsor D., Scala L.J., Kim K.S., Chen С .J.,

56. Kascsak R.J., Bendheim P.E. Molecular location of a species-spccific epitope on the hamster scrapie agent protein.//J. Virol. 1991. V.65(7). P.3667-3675.

57. Rogers M., Serban D., Gyuris Т., Scott M., Torchia Т., Prusiner S.B. Epitope mapping of the

58. Syrian hamster prion protein utilizing chimeric and mutant genes in a vaccinia virus expression system.//J. Immunol. 1991. V.147(10). P.3568-3574.

59. Bueler H., Fischer M., Lang Y., Bluethmann H., Lipp H.P., DeArmond S.J., Prusiner S.B.,

60. Aguet M., Weissmann C. Normal development and behaviour of mice lacking the neuronal cell-surface PrP protein.//Nature. 1992. V.356(6370). P.577-582.

61. Bueler H., Aguzzi A., Sailer A., Greiner R.A., Autenried P., Aguet M., Weissmann C. Micedevoid of PrP are resistant to scrapie.// Cell. 1993. V.73(7). P.1339-1347.

62. Prusiner S.B., Groth D., Serban A., Kochler R., Foster D., Torchia M., Burton D., Yang

63. S.L., DeArmond S.J. Ablation of the prion protein (PrP) gene in mice prevents scrapie and facilitates production of anti-PrP antibodies.//PNAS. 1993. V.90. P. 10608-10612.

64. Williamson R.A., Peretz D., Smorodinsky N., Bastidas R., Serban H., Mehlhorn I.,

65. Dearmond S.J., Prusiner S.B., Burton D.R. Circumventing tolerance to generate autologous monoclonal antibodies to the prion protein.// PNAS. 1996. V.93. P.7279-7282.

66. Williamson R.A., Peretz D., Pinilla C., Ball H., Bastidas R.B., Rozenshteyn R., Houghten

67. R.A., Prusiner S.B., Burton D.R. Mapping the prion protein using recombinant antibodies.//J. Virol. 1998. V.72(ll). P.9413-9418.

68. Korth C., Stierli В., Streit P., Moser M., Schaller O., Fischer R., Schulz-Schacffcr W.,

69. Kretzschmar H., Raeber A., Braun U., Ehrensperger F., Hornemann S. Glockshuber R., Riek R., Billeter M., Wuthrich K., Oesch B. Prion (PrPSc)-specific epitope defined by a monoclonal antibody.//Nature. 1997. V.390. P.74-77.

70. Zanusso G., Liu D., Ferrari S., Hegyi I., Yin X., Aguzzi A., Hornemann S., Licmann S.,

71. Glockshuber R., Manson J.C., Brown P., Petersen R.B., Gambetti P., Sy M.S. Prion protein expression in different species: analysis with a panel of new mAbs.// PNAS. 1998. V.95. P.8812-8816.

72. Krasemann S., Groschup M., Hunsmann G., Bodemer W. Induction of antibodies againsthuman prion proteins (PrP) by DNA-mediatcd immunization of PrP0/0 mice.// J. Immunol. Methods. 1996. V.199(2). P.109-118.

73. Krasemann S., Groschup M.H., Harmeyer S. Hunsmann G., Bodemer W. Generation ofmonoclonal antibodies against human prion proteins in PrPO/O mice.// Mol. Med. 1996. V.2(6). P.725-734.

74. Krasemann S., Jurgens Т., Bodemer W. Generation of monoclonal antibodies against prionproteins with an unconventional nucleic acid-based immunization strategy.// J. Biotechnol. 1999. V.73. P.l 19-129.

75. Gregoire S., Logrc C., Metharom P., Loing E., Chomilier J. Rosset M.B., Aucouturier P.,

76. Carnaud C. Identification of two immunogenic domains of the prion protein PrP - which activate class ll-restricted T cells and elicit antibody responses against the native molecule.//J Leukoc Biol. 2004. V. 76(1). P. 125-134.

77. Mehlhom I., Groth D., Stockel J., Moffat B,, Reilly D., Yansura D., Willett W.S., Baldwin

78. M., Fletterick R., Cohen F.E., Vandlen R., Henncr D., Prusiner S.B. High-level expression and characterization of a purified 142-residue polypeptide of the prion protein.// Biochemistry. 1996. V.35(17). P.5528-5537.

79. Weiss S., Famulok M., Edenhofer F., Wang Y.H., Jones I.M., Groschup M., Winnacker E.L.

80. Overexpression of active Syrian golden hamster prion protein PrPc as a glutathione S-transferasc fusion in heterologous systems.// J. Virol. 1995. V.69(8). P.4776^1783.

81. Weiss S., Rieger R., Edenhofer F., Fisch E., Winnacker E.L. Recombinant prion proteinrPrP27-30 from Syrian golden hamster reveals proteinase К sensitivity.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V.219(l). P.173-179.

82. Baron T.G., Betemps D., Groschup M.H., Madec J.Y. Immunological characterization of thesheep prion protein expressed as fusion proteins in Escherichia coli.// FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1999. V.25(4). P.379-384.

83. Foster J.D., Wilson M., Hunter N. Immunolocalisation of the prion protein (PrP) in thebrains of sheep with scrapie.// Vet. Rec. 1996. V. 139(21). P.512-515.

84. Li R., Liu Т., Wong B.S., Pan Т., Morillas M., Swietaicki W., O'Rourke K., Gambetti P.,

85. Surewicz W.K., Sy M.S. Identification of an epitope in the С terminus of normal prion protein whose expression is modulated by binding events in the N terminus.// J. Mol. Biol. 2000. V.301(3). P.567-573.

86. Betemps D., Baron T. Molecular specificities of antibodies against ovine and murinerecombinant prion proteins.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. V.281(l). P.101-108.

87. Laffling A.J., Baird A., Birkett C.R., John H.A. A monoclonal antibody that enables specificimmunohistological detection of prion protein in bovine spongiform encephalopathy cases.//Neurosci. Lett. 2001. V.300(2). V.99-102.

88. Thackray A.M., Madec J.Y., Wong E., Morgan-Warren R., Brown D.R., Baron Т., Bujdoso

89. R. Detection of bovine spongiform encephalopathy, ovine scrapie prion-rclated protein (PrPSc) and normal PrPc by monoclonal antibodies raised to copper-refolded prion protein.// Biochem. J. 2003. V.370(Pt 1). P.81-90.

90. Nakamura N., Shuyama A., Hojyo S., Shimokawa M., Miyamoto K., Kawashima Т., Aosasa

91. M., Horiuchi H., Furusawa S., Matsuda H. Establishment of a chicken monoclonal antibody panel against mammalian prion protein.// J. Vet. Med. Sci. 2004. V.66(7). P.807-814.

92. Fcrnandcz-Borges N, Brun A, Whitton JL, Parra B, Diaz-San Segundo F, Salguero FJ,

93. Torres JM, Rodriguez F. DNA vaccination can break immunological tolerance to PrP in wild-type mice and attenuates prion disease after intracerebral challenge.// J. Virol. 2006. V.80(20). P.9970-9976.

94. Barry R.A., Kent S.B., McKinley M.P., Meyer R.K., DeArmond S.J., Hood L.E., Prusiner

95. S.B. Scrapie and cellular prion proteins share polypeptide epitopes.// J. Infect. Dis. 1986. V.153(5). P.848-854.

96. Shinagawa M., Munekata E., Doi S., Takahashi K., Goto H., Sato G. Immunoreactivity of asynthetic pentadecapeptide corresponding to the N-terminal region of the scrapie prion protein.// J. Gen. Virol. 1986. V.67(Pt8). P. 1745-1750.

97. Wiley C.A., Burrola P.G., Buchmeier M.J., Wooddell M.K., Barry R.A., Prusiner S.B.,1.mpert P.W. Immuno-gold localization of prion filaments in scrapie-infected hamster brains.// Lab. Invest. 1987. V.57(6). P. 646-656.

98. Barry R.A., Vincent M.T., Kent S.B., Hood L.E., Prusiner S.B. Characterization of prionproteins with monospecific antisera to synthetic peptides.// J. Immunol. 1988. V.140(4). P.1188-1193.

99. Horiuchi M., Yamazaki N., Ikeda Т., Ishiguro N., Shinagawa M. A cellular form of prionprotein (PrPC) exists in many non-neuronal tissues of sheep.// J. Gen. Virol. 1995. V.76. P.2583-2587.

100. O'Rourke K.I., Baszler T.V., Miller J.M., Spraker T.R., Sadler-Riggleman I., Knowles D.P.

101. Monoclonal antibody F89/160.1.5 defines a conserved epitope on the ruminant prion protein.// J. Clin. Microbiol. 1998. V.36(6). P.1750-1755.

102. Groschup M.H., Pfaff E. Studies on a species-specific epitope in murine, ovine and bovineprion protein.//J. Gen. Virol. 1993. V.74(Pt7). P.1451-1456.

103. Takahashi H., Takahashi R.H., Hasegawa H., Horiuchi M., Shinagawa M., Yokoyama Т.,

104. Kimura K., Haritani M., Kurata Т., Nagashima K. Characterization of antibodies raised against bovine-PrP-peptides.//J. Neurovirol. 1999. V.5(3). P.300-307.

105. Vorberg I., Buschmann A., Harmeyer S., Saalmuller A., Pfaff E., Groschup M.H. A novelepitope for the specific detection of exogenous prion proteins in transgenic mice and transfected murine ccll lines.// Virology. 1999. V.255. P.26-31.

106. Curin Serbee V., Bresjanac M., Popovic M., Pretnar Hartman K., Galvani V., Rupreht R.,

107. Cernilec M., Vranac Т., Hafner I., Jerala R. Monoclonal antibody against a peptide of human prion protein discriminates between Creutzfeldt-Jacob's disease-affected and normal brain tissue.// J. Biol. Chem. 2004. V.279(5). P.3694-3698.

108. Tam J.P. Synthetic peptide vaccine design: synthesis and properties of a high-densitymultiple antigenic peptide system.// PNAS. 1988. V.85. P.5409-5413.

109. Tam J.P. Recent advances in multiple antigen peptides.// J. Immunol. Methods. 1996. V.196.1. P.17-32.

110. Yokoyama Т., Kimura К., Tagawa Y.,Yuasa N. Preparation and characterization ofantibodies against mouse prion protein (PrP) peptides.// Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1995. V.2(2). P. 172-176.

111. Yokoyama Т., Itohara S., Yuasa N. Detection of species specific epitopes of mouse andhamster prion proteins (PrPs) by anti-peptide antibodies.// Arch. Virol. 1996. V. 141(3-4). P.763-769.

112. Arbel M., Lavie V., Solomon B. Generation of antibodies against prion protein in wild-typemice via helix 1 peptide immunization.// J. Neuroimmunol. 2003. V. 144(1-2). P.38-45.

113. Bainbridge J., Jones N., Walker B. Multiple antigenic peptides facilitate generation of antiprion antibodies.// Clin. Exp. Immunol. 2004. V.137(2). P.298-304.

114. Brennan F.R., Dougan G. Non-clinical safety evaluation of novel vaccines and adjuvants:new products, new strategies.// Vaccine. 2005. V.23(24). P.3210-3222.

115. Di Martino A., Bigon E., Corona G., Callegaro L. Production and characterization ofantibodies to mouse scrapie-amyloid protein elicited by non-carrier linked synthetic peptide immunogens.//J. Mol. Recognit. 1991. V.4(2-3). P.85-91.

116. Souan L., Tal Y., Felling Y., Cohen I.R., Taraboulos A., Мог F. Modulation of proteinase-Kresistant prion protein by prion peptide immunization.// Eur. J. Immunol. 2001. V.31. P.2338-2346.

117. Rosset M.B., Ballerini C., Gregoire S., Metharom P., Carnaud C., Aucouturier P. Breakingimmune tolerance to the prion protein using prion protein peptides plus oligodeoxynucleotide-CpG in mice.// J. Immunol. 2004. V. 172(9). P.5168-5174.

118. Вольпина O.M., Титова M.A., Короев Д.О., Волкова Т.Д., Обозная М.Б., Жмак М.Н.,

119. Алексеев Т.А., Цетлин В.И. Получение антител к а7-субъединице никотинового ацетилхолинового рецептора человека с помощью иммуноактивных синтетических пептидов.//Биоорган.химия. 2006. Т. 32(2). С.169-175.

120. Eghiaian F., Grosclaude J., Lesceu S., Debey P., Doublet В., Treguer E., Rezaei H.,

121. Knossow M. Insight into the PrPC->PrPSc conversion from the structures of antibody-bound ovine prion scrapie-susceptibility variants.// PNAS. 2004. V.101(28). P.10254-10259.

122. Peretz D., Williamson R.A., Matsunaga Y., Serban H., Pinilla C., Bastidas R.B.,

123. Rozenshteyn R., James T.L., Houghten R.A., Cohen F.E., Prusiner S.B., Burton D.R. A conformational transition at the N terminus of the prion protein features in formation of the scrapie isoform.// J. Mol. Biol. 1997. V.273. P.614-622.

124. Matsunaga Y., Peretz D., Williamson A., Burton D., Mehlhorn I., Groth D., Cohen F.E.,

125. Prusiner S.B., Baldwin M.A. Cryptic epitopes in N-terminally truncated prion protein are exposed in the full-length molecule: dependence of conformation on pH.// Proteins. 2001. V.44(2). P.110-118.

126. Kanyo Z.F., Pan K.M., Williamson R.A., Burton D.R., Prusiner S.B., Fletterick R.J., Cohen

127. F.E. Antibody binding defines a structure for an epitope that participates in the PrPC->PrPSc conformational change.// J. Mol. Biol. 1999. V.293(4). P.855-863.

128. Sakudo A., Nakamura I., Ikuta K., Onodcra T. Recent developments in prion diseaseresearch: diagnostic tools and in vitro cell culture models.// J. Vet. Med. Sci. 2007. V.69(4). P.329-337.

129. Dumoulin M., Dobson C.M. Probing the origins, diagnosis and treatment of amyloiddiseases using antibodies.// Biochimie. 2004. V.86. P.589-600.

130. Kubler E., Oesch В., Raebcr A.J. Diagnosis of prion diseases.// Br. Med. Bull. 2003. V.66.1. P.267-279.

131. Safar J., Wille H., Itri V., Groth D., Serban H., Torchia M., Cohen F.E., Prusiner S.B. Eightprion strains have PrP(Sc) molecules with different conformations.// Nat. Med. 1998. V.4(10). P.1157-1165.

132. Ermonval M., Mouillet-Richard S., Codogno P., Kellermann O., Botti J. Evolving views inprion glycosylation: functional and pathological implications. Biochimie. 2003. V.85(l-2). P.33-45.

133. Pan Т., Colucci M., Wong B.S., Li R., Liu Т., Petersen R.B., Chen S., Gambetti P., Sy M.S.

134. Novel differences between two human prion strains revealed by two-dimensional gel electrophoresis.// J. Biol. Chem. 2001. V.276(40). P.37284-37288.

135. Thuring C.M., Erkcns J.H., Jacobs J.G., Bossers A., Van Keulen L.J., Garssen G.J., Van

136. Head M.W., Bunn T.J., Bishop M.T., McLoughlin V., Lowrie S., McKimmie C.S., Williams

137. M.C., McCardle L., MacKenzie J., Knight R., Will R.G., Ironside J.W. Prion protein heterogeneity in sporadic but not variant Creutzfeldt-Jakob disease: UK cases 19912002.// Ann. Neurol. 2004. V.55(6). P.851-859.

138. Notari S., Capellari S., Giese A., Westner I., Baruzzi A., Ghetti В., Gambetti P.,

139. Kretzschmar H.A., Parchi P. Effects of different experimental conditions on the PrPSc . core generated by protease digestion: implications for strain typing and molecular classification of CJD.// J. Biol. Chem. 2004. V.279(16). P. 16797-16804.

140. Schoch G., Seeger H., Bogousslavsky J., Tolnay M., Janzer R.C., Aguzzi A., Glatzel M.

141. Analysis of prion strains by PrPSc profiling in sporadic Creutzfeldt-Jakob disease.// PLoS Med. 2006. V.3(2, el4). P.0236-0243.

142. Schulz-Schaeffer W.J., Tschoke S., Kranefuss N., Drose W., Hause-Reitner D., Giese A.,

143. Groschup M.H., Kretzschmar H.A. The paraffin-embedded tissue blot detects PrP(Sc) early in the incubation time in prion diseases.// Am. J. Pathol. 2000. V. 156(1). P.51-56.

144. Schmerr M.J., Jenny A. A diagnostic test for scrapie-infected sheep using a capillary electrophoresis immunoassay with fluorescent-labeled peptides.// Electrophoresis. 1998. V.19(3). P.409-414.

145. Schmer M.J., Jenny A.L., Bulgin M.S., Miller M.J., Hamir A.N., Cutlip R.C., Goodwin

146. K.R. Use of capillary electrophoresis and fluorescent labeled peptides to detect the abnormal prion protein in the blood of animals that are infected with a transmissible spongiform encephalopathy.// J. Chromatogr. A. 1999. V.853. P.207-214.

147. Jackman R., Everest D.J., Schmerr M.J., Khawaja M., Keep P., Docherty J. Evaluation of apreclinical blood test for scrapie in sheep using immunocapillary electrophoresis. J. AOAC Int. 2006. V.89(3). V.720-727.

148. Dormont D. Approaches to prophylaxis and therapy.// Br. Med. Bull. 2003. V.66. P.281- .292.

149. Schenk D., Barbour R., Dunn W., Gordon G., Grajeda H., Guido Т., Ни K., Huang J.,

150. Horiuchi M., Caughey B. Specific binding of normal prion protein to the scrapie form via alocalized domain initiates its conversion to the protease-resistant state.// EMBO J. 1999. V.18(12). P.3193-3203.

151. Kascsak R.J., Rubenstein R., Merz P.A., Tonna-Demasi M., Fersko R., Carp R.I., Wisniewski H.M., Diringer H. Mouse polyclonal and monoclonal antibody to scrapie-associated fibril proteins.//J. Virol. 1987. V.61(12). P.3688-3693.

152. Enari M., Flechsig E., Weissmann C. Scrapie prion protein accumulation by scrapie-infected neuroblastoma cells abrogated by exposure to a prion protein antibody.// PNAS. 2001. V.98(16). P.9295-9299.

153. Perrier V., Solassol J., Crozet C., Frobert Y., Mourton-Gilles C., Grassi J., Lehmann S.

154. Anti-PrP antibodies block PrPSc replication in prion-infected cell cultures by accelerating PrPC degradation.// 2004. J. Neurochem. V.89. P.454-463.

155. Demart S., Fournier J.G., Creminon C., Frobert Y., Lamoury F., Marce D., Lasmezas C.,

156. Dormont D., Grassi J., Deslys J.P. New insight into abnormal prion protein using monoclonal antibodies.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. V.265(3). P.652-657.

157. Kim C.L., Umetani A., Matsui Т., Ishiguro N., Shinagawa M., Horiuchi M. Antigeniccharacterization of an abnormal isoform of prion protein using a new diverse panel of monoclonal antibodies.// Virology. 2004. V.320(l). P.40-51.

158. Kim C.L., Karino A., Ishiguro N., Shinagawa M., Sato M., Horiuchi M. Cell-surface retention of PrPC by anti-PrP antibody prevents protease-resistant PrP formation.// J. Gen. Virol. 2004. V.85(Ptll). P.3473-3482.

159. Beringue V., Vilette D., Mallinson G., Archer F., Kaisar M., Tayebi M., Jackson G.S.,

160. Clarke A.R., Laude H., Collinge J., Hawke S. PrPSc binding antibodies are potent inhibitors of prion replication in cell lines.// J. Biol. Chem. 2004. V.279(38). P.39671-39676.

161. Beringue V., Mallinson G., Kaisar M., Tayebi M., Sattar Z., Jackson G., Anstee D., Collinge J., Hawke S. Regional heterogeneity of cellular prion protein isoforms in the mouse brain.// Brain. 2003. V.126(Pt9). P.2065-2073.

162. Vilette D., Andreoletti O., Archer F., Madelaine M.F., Vilotte J.L., Lehmann S., Laude H.

163. Ex vivo propagation of infectious sheep scrapie agent in heterologous epithelial cells expressing ovine prion protein. PNAS. 2001. V.98(7). P.4055-4059.

164. Sabuncu E., Petit S., Le Dur A., Lan Lai Т., Vilotte J.L., Laude H., Vilette D. PrP polymorphisms tightly control sheep prion replication in cultured cells.// J. Virol. 2003. V.77(4). P.2696-2700.

165. Feraudet C, Morel N, Simon S, Volland H, Frobert Y, Creminon C, Vilette D, Lehmann S,

166. Grassi J. Screening of 145 anti-PrP monoclonal antibodies for their capacity to inhibit PrPSc replication in infected cells.// J. Biol. Chem. 2005. V.280(12). P.l 1247-11258.

167. Pankiewicz J., Prelli F., Sy M.S., Kascsak R.J., Kascsak R.B., Spinner D.S., Carp R.I.,

168. Meeker H.C., Sadowski M., Wisniewski T. Clearance and prevention of prion infection in cell culture by anti-PrP antibodies.// Eur. J. Neurosci. 2006. V.23(10). P.2635-2647.

169. Tal Y., Souan L., Cohen I.R., Meiner Z., Taraboulos A., Мог F. Complete Freund'sadjuvant immunization prolongs survival in experimental prion disease in mice.// J. Neurosci. Res. 2003. V.71(2). P.286-290.

170. Heppner F.L., Musahl C., Arrighi I., Klein M.A., Rulicke Т., Oesch В., Zinkernagel R.M.,

171. Kalinke U., Aguzzi A. Prevention of scrapie pathogenesis by transgenic expression of anti-prion protein antibodies.// Science. 2001. V.294. P.178-182.

172. White A.R., Enever P., Tayebi M., Mushens R., Linehan J., Brandner S., Anstee D.,

173. Collinge J., Hawke S. Monoclonal antibodies inhibit prion replication and delay the development of prion disease.// Nature. 2003. V.422. P.80-83.

174. Liu Т., Zwingman Т., Li R., Pan Т., Wong B.S., Petersen R.B., Gambetti P., Herrup K., Sy

175. M.S. Differential expression of cellular prion protein in mouse brain as detected with multiple anti-PrP monoclonal antibodies.// Brain Res. 2001. V.896(l-2). P.l 18-129.

176. Sigurdsson E.M., Sy M.S., Li R., Scholtzova H., Kascsak R.J., Kascsak R., Carp R., Meeker H.C., Frangione В., Wisniewski T. Anti-prion antibodies for prophylaxis following prion exposure in mice.// Neurosci. Lett. 2003. V.336(3). P.185-187.

177. Adler V., Zcller В., Kryukov V., Kascsak R., Rubenstein R., Grossman A. Small, highly ■structured RNAs participate in the conversion of human recombinant Prp (Sen) to Prp (Res) in vitro.//J. Mol. Biol. 2003. V.332. P.47-57.

178. Sigurdsson E.M., Brown D.R., Daniels M., Kascsak R.J., Kascsak R., Carp R., Meeker

179. H.C., Frangione В., Wisniewski T. Immunization delays the onset of prion disease in mice.// Am. J. Pathol. 2002. V.161(l). P.13-17.

180. Koller M.F., Grau Т., Christen P. Induction of antibodies against murine full-length prionprotein in wild-type mice.// J. Ncuroimmunol. 2002. V.132(l-2). P.l 13-116. '

181. Polymenidou M., Heppner F.L., Pellicioli E.C., Urich E., Miele G., Braun N., Wopfner F.,

182. Schatzl H.M., Bechcr В., Aguzzi A. Humoral immune response to native eukaryotic prion protein correlates with anti-prion protection.// PNAS. 2004. V.101(Suppl.2). P. 1.467014676.

183. Andrievskaia O., McRae H., Elmgren C., Huang H., Balachandran A., Nielsen K. Generation of antibodies against bovine recombinant prion protein in various strains of mice.// Clin. Vaccine Immunol. 2006. V.13(l). P.98-105.

184. Ishibashi D., Yamanaka H., Yamaguchi N., Yoshikawa D., Nakamura R., Okimura N.,

185. Yamaguchi Y., Shigematsu K., Katamine S., Sakaguchi S. Immunization with recombinant bovine but not mouse prion protein delays the onset of disease in mice inoculated with a mouse-adapted prion.// Vaccine. 2007. V.25(6) P.985-992.

186. Purcell A.W., McCluskey J., Rossjohn J. More than one reason to rethink the use ofpeptides in vaccine design.//Nat. Rev. Drug. Discov. 2007. V.6(5). P.404-414.

187. Schwarz A., Kratke O., Burwinkel M., Riemer C., Schultz J., Henklein P., Bamme Т.,

188. Baicr M. Immunisation with a synthetic prion protein-derived peptide prolongs survival times of mice orally exposed to the scrapie agent.// Neurosci. Lett. 2003. V.350(3). P. 187189.

189. Magri G, Clerici M, DaH'Ara P, Biasin M, Caramelli M, Casalone C, Giannino ML, Longhi

190. Smith C.J., Drake A.F., Banfield B.A., Bloomberg G.B., Palmer M.S., Clarke A.R., Collinge J. Conformational properties of the prion octa-repeat and hydrophobic sequences.//FEBS Lett. 1997. V.405. P.378-384.

191. Вольпина O.M., Титова M.A., Жмак M.H., Короев Д.О., Обозная М.Б., Волкова Т.Д.,

192. Иванов В.Т. Предсказание структуры пептидов, способных индуцировать образование антител у мышей.// Биоорган.химия. 2002. Т. 28(5). С.387-395.

193. Sant'Angelo D.B., Robinson Е., Janeway С.A. Jr., Denzin L.K. Recognition of core andflanking amino acids of MHC class II-bound peptides by the T cell receptor.// Eur. J. Immunol. 2002. V.32(9). P.2510-2520.

194. Ertmcr A., Gilch S., Yun S.W., Flechsig E., Klebl В., Stein-Gerlach M., Klein M.A.,

195. Schatzl H.M. The tyrosine kinase inhibitor STI571 induces cellular clearance of PrPSc in prion-infected cells.// J. Biol. Chem. 2004. V.279. P.41918-41927.

196. Jeffrey M., Halliday W.G., Goodsir C.M. A morphometric and immunohistochemical studyof the vestibular nuclear complex in bovine spongiform encephalopathy.// Acta Neuropathol. 1992. V.84. P.651-657.

197. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefinedspecificity.//Nature. 1975. V.256 (5517). P.495-497.

198. Rosenberg A.S. Effects of protein aggregates: an immunologic perspective.// AAPS J.2006. V.8(3). E501-E507.

199. Pan Т., Chang В., Wong P., Li C., Li R., Kang S.C., Robinson J.D., Thompsett A.R., Tein

200. Apsalons U., Bichko V. The affinities of monoclonal antibodies against core antigen of .hepatitis В virus.//Arch. Virol. 1994. V.l34(3-4). P.393-402.

201. Вольпина O.M., Жмак M.H., Обозная М.Б., Титова М.А., Короев Д.О., Волкова Т.Д.,

202. Егоров А.А., Рыбаков С.С., Иванов В.Т. Антитела против синтетических фрагментов прионного белка для диагностики губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота.// Биоорган, химия. 2001. Т.27. С.352-358.

203. Обозная М.Б., Вольпина О.М., Жмак М.Н., Титова М.А., Волкова Т.Д., Егоров А.А.,

204. Рыбаков С.С., Иванов В.Т. Индукция иммунного ответа синтетическими фрагментами прионного белка и их аналогами у мышей разных линий.// Биоорган. Химия. 2004. Т.30(4). С.356-363.

205. Proske D., Gilch S., Wopfcer F., Schatzl H.M., Winnacker E.L., Famulok M. Prion-protein-specific aptamer reduces PrPSc formation.// Chem. Bio. Chem. 2002. V.3. P.717-725.

206. Lowry O.H., Rosenbrough N.Y., Farr A.H., Randall R.G. Protein Measurement with the

207. Folin Phenol Reagent.// J. Biol. Chem. 1951. V.193. P.265-275.

208. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970. V.227. P.680-685.