Характеристика рекомбинантного прионного белка крупного рогатого скота (Bos taurus) и разработка методов выявления патологической изоформы прионов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Покидышев, Алексей Николаевич

• Покидышев, Алексей Николаевич
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Покидышев, Алексей Николаевич

1. Оглавление.

2. Перечень сокращённых названий.

3. Введение.

4. Обзор литературы.

4.1. Прионы в инфекционной патологии млекопитающих.

4.2. Прионные белки - структура, свойства и функции.

4.3. Молекулярные механизмы и патогенез прионных болезней.

4.4. Лабораторные модели для изучения конверсии прионных белков.

4.5. Диагностика ТГЭ.^

5. Материалы.

6. Методы.

6.1. Манипуляции с ДНК.

6.1.1. Амплификация целевого фрагмента ДНК.

6.1.2. Рестрикция.

6.1.3. Лигирование.

6.1.4. Электрофорез ДНК в геле агарозы.

6.1.5. Выделение молекул ДНК гелей агарозы.

6.1.6. Выделение ппазмидной ДНК из клеток Е. coli.

6.1.7. СеквеиированиеДНК.

6.2. Экспрессия рекомбинантного полипептида в клетках E.coli.^

6.2.1. Приготовление ростовых сред для E.coli.

6.2.2. Получение компетентных для электропорации клеток E.coli.

6.2.3. Получение химически компетентных клеток E.coli.

6.2.4. Трансформация экспрессионных штаммов E.coli ппазмидной ДНК.

6.2.5. Индукция экспрессии целевого фрагмента прионного белка КРС в ^ клетках E.coli.*.

6.3. Получение моноклон ал ьных антител.^

6.3.1. Иммунизация.

6.3.2. Миеломная клеточная линия.

6.3.3. Культивирование клеток.

6.3.4. Слияние клеток и выращивание гибридом.

6.3.5. Криоконсервация гибридом.

6.3.6. Получение асцитных жидкостей, содержащих МКА.

6.3.7. Получение МКА из асцитных жидкостей.

6.3.8. Субтипирование МКА.

6.4. Работы с препаратами белков. б. 4.1. Определение концентрации белка в растворах.

6.4.2. Электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии „„ додегртсулъфата натрия (ПААГ-ДСН).

6.4.3. Пммуноблоттинг.

6.4.4. Методы твердофазного иммуноферментного анализа.

6.4.5. Синтез конъюгатов моноклоналъных антител с пероксидазой хрена.

6.4.6. Выделение рекомбинантного фрагмета прионного белка КРС, ~ методом металлоаффинной хроматографии.

6.4.7. Лиофилизация белковых препаратов.

6.4.8. Получение фибрилл rBovPrP(l02-240).

6.4.9. Обработка различных изоформ рекомбинантного прионного белка „^ протеиназой К.

6.5. Электронная микроскопия.

6.5.1. Электронная микроскопия агрегатов образованных рекомбинантным у у фрагментом прионного белка КРС.

6.5.2. Иммуномаркирование САФ.

6.6. Иммуногистохимический анализ.^

7. Результаты исследований.

7.1. Выбор фрагмента гена прионного белка для экспрессии в клетках g j E.coli.

7.2. Создание генноинженерной конструкции для экспрессии целевого фрагмента гена прионного белка крупного рогатого скота (Bov- 8 2 PRNP) в клетках Е. coli.

7.3. Экспрессия фрагмента прионного белка крупного рогатого скота в g5 клетках E.coli.

7.4. Очистка и иммунохнмпческая характеристика рекомбинантного g 5 фрагмента прионного белка КРС.

7.5. Определение молекулярной массы и чистоты полученного препарата рекомбинантного белка.

7.6. Получение иротеиназорезистентных изоформ рекомбинантного прионного белка.

7.7. Получение моноклональных антител к рекомбинантному фрагменту прионного белка крупного рогатого скота.

7.8. Иммунохимическая характеристика МКА.

7.9. Разработка твердофазного «сэндвич» ИФА для выявления ^ ду патологической изоформы прионных белков.

8. Обсуждение.

9. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика рекомбинантного прионного белка крупного рогатого скота (Bos taurus) и разработка методов выявления патологической изоформы прионов»

3.1 Актуальность темы.

Трансмиссивные губкообразные энцефалопатии (ТГЭ) являются особым классом нейродегенеративных болезней, встречающихся как у человека, так и у животных. В настоящее время гипотеза о том, что инфекционным агентом, вызывающем ТГЭ, является только аномальная изоформа клеточного белка организма-хозяина, является общепринятой, а выделенный инфекционный агент был назван прионом [194; 195].

Считается установленным, что возникновение и развитие летальных прионных болезней связано с изменением конформации нормального белка организма (РгР°), индуцированным внедрением экзогенного аномального приона или аналогичной прионной частицей, образовавшейся в организме спорадически, с последующим необратимым накоплением патогенных белковых изоформ [196].

На сегодняшний день актуальными являются как вопросы биологии прионных болезней, так и проблемы выявления и идентификации их возбудителей, т.е. патогенных белковых инфекционных агентов (PrPd).

Фактически неизученными остаются механизмы индуцированного и спонтанного конформационных переходов наблюдаемых при прионных инфекциях. Выделенные «штаммы» прионных белков указывают на множественность возможных конформационных состояний прионного белка стабилизирующихся в результате образования характерных для ТГЭ белковых агрегатов - фибрилл [218]. Аналогичные агрегаты других гетерологичных белков также были зарегистрированы в живых организмах (при развитии амилоидо-зов) или получены in vitro [97; 134]. Последнее наблюдение даёт основание относиться к данному явлению, как к достаточно распространенному, но малоизученному варианту фолдинга белков.

За последние несколько лет появились данные о возможности обнаружения патогенной конформации прионного белка практически в любом органе и ткани пораженного организма, доказано выделение инфекционного 8 агента с молоком, слюной, мочой [152]. В этой связи, существенный интерес представляет собой исследование возможности внутри- и межвидовой трансмиссии заболевания.

Использование рекомбинантных прионных белков или их фрагментов является удобным методом изучения механизмов происходящих при конверсии белков, мутаций индуцирующих возникновение заболевания, возможности межвидовой трансмиссии. Кроме того, в настоящее время, для разработки всех вариантов тест-систем выявления возбудителей ТГЭ, основанных только на иммунологическом анализе, необходимы рекомбинантные аналоги нативных прионных белков.

Очевидно также, что моноклональные антитела (МКА) являются фактически единственным инструментом, пригодным для диагностики прионных инфекций в целом. Полученные на сегодняшний день моноклональные антитела не позволяют проводить прямую дифференциацию изоформ прионных белков, что приводит к необходимости использовать дополнительные этапы обработки проб элиминируя «неинфекционные» молекулы. Таким образом, получение новых моноклональных антител к прионным белкам является важнейшей задачей, позволяющей разрабатывать новые методы выявления патогенных прионных белков, в том числе и для нерешенной проблемы прижизненной диагностики ТГЭ.

3.2 Цели и задачи исследования.

Целью данной работы являлась разработка системы in vitro моделирующей конформационные изменения прионных белков при ТГЭ и методов выявления патологической изоформы прионов.

Для достижения поставленных целей были определены следующие задачи:

1. Разработать технологию и получить рекомбинантный фрагмент при-онного белка.

2. Изучить возможность самоорганизации рекомбинантного прионного белка в амилоидоподобные структуры in vitro.

3. Оценить влияние различных факторов на процесс изменения конфор-маций рекомбинантного прионного белка in vitro.

4. Определить иммуногенность полученного рекомбинантного прионного белка

5. Получить гибридомные клеточные линии, стабильно продуцирующие моноклональные антитела к рекомбинантному прионному белку.

6. Определить иммунологическую активность, специфичность и имму-нохимические свойства полученных моноклональных антител.

7. Апробировать рекомбинантный антиген и МКА в качестве иммуноди-агностических реагентов в различных методах выявления патологической изоформы прионов

3.3 Научная новизна и практическая значимость работы.

Разработана технология получения и очистки рекомбинантного фрагмента прионного белка КРС. Разработаны подходны к получению различных конформаций данного рекомбинантного белка, представлены доказательства, подтверждающие структурную гомологию фибрилл РгР, наблюдаемых при ТГЭ, и агрегатов, образуемых рекомбинантным фрагментом прионного белка.

Получена панель моноклональных антител к рекомбинантному фрагменту прионного белка КРС. Выделены клоны МКА, способные к специфическому связыванию с инфекционными изоформами прионных белков человека и животных. Разработаны подходы к диагостике ТГЭ человека и животных с использованием полученных моноклональных антител.

3.4 Основные положения выносимые на защиту.

• результаты экспериментов по изучению молекулярно-биологических свойств рекомбинантного фрагмента прионного белка крупного рогатого скота

• иммунохимическая характеристика МКА к rBovPrP( 102-240)

• методологические подходы к выявлению патологической изоформы прионов с использованием рекомбинантного антигена и моноклональ-ных антител

3.5 Апробация работы.

Материалы диссертационной работы были доложены и опубликованы в материалах 2-го семинара Научно-консультационного комитета МНТЦ «Борьба с глобальными инфекциями» (г. Иркутск, 2009), 2 -го Международного конкурса научных работ молодых учёных в области нанотехнологий (в рамках форума Rusnanotech-2009, Москва, 2009), международных конференций «Prion 2007» (г.Эдинбург, Великобритация), «Prion 2008» (г. Мадрид, Испания), «Prion 2009» (г. Салоники, Греция), а также доложены на Т-ой ежегодной научной конференции молодых учёных НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского (г. Москва, 2008).

3.6 Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 3 (и одна принята к печати) научные работы, в изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Опубликовано 7 тезисов научных докладов на российских и международных конференциях.

3.7 Объём и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 150 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка цитированной литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 9 таблицами и 44 рисунками. Список литературы включает 259 источников (23 отечественных и 236 зарубежных авторов).

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Покидышев, Алексей Николаевич

9.ВЫВОДЫ.

1. Получен рекомбинантный вектор, позволяющий проводить экспрессию фрагмента прионного белка (со 102 по 240 а.к.) крупного рогатого скота {Bos taurus) в клетках E.coli.

2. Разработана технология очистки и охарактеризованы свойства рекомбинантного фрагмента прионного белка КРС.

3. Подтверждено существование множественности конформационных состояний прионных белков, в том числе и отличных от наблюдаемых in vivo. Показана возможность параллельного образования различных стабильных изоформ прионных белков in vitro.

4. На основании изучения свойств рекомбинантного фрагмента прионного белка крупного рогатого скота, предложена общая схема образования амилоидных фибрилл наблюдаемых при ТГЭ.

5. Получена панель моноклональных антител (МКА) специфически связывающихся с прионными белками человека и животных. Установлено, что антитела клонов 2С8, 9С12, 6А5, 7А7 взаимодействуют с эпитопами прионных белков человека, крупного рогатого скота и овцы, локализованных в протеиназорезистентной области инфекционных изоформ.

6. Установлено, что полученные моноклональные антитела 9С12, 6А5 и 7F7 направлены к одному или двум близкорасположенным эпитопам РгР, которые топографически удалены от эпитопа РгР, распознаваемого МКА 2С8.

7. Установлено, что полученные антитела могут быть использованы для посмертной диагностики трансмиссивных губкообразных энцефалопатий человека и животных, методами иммуногистохимического анализа и иммуноблоттинга.

8. На основе моноклональных антител 2С8 и 9С12 разработан «сэндвич»-вариант ИФА, позволяющий выявлять протеиназорезистентные конформации молекул РгР, с чувствительностью до 10 нг/мл.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Покидышев, Алексей Николаевич, 2009 год

1. Григорьев В.Б. Методы диагностики прионных заболеваний. / В.Б. Григорьев, А.Н. Покидышев, C.JT. Кальнов, С.М. Клименко // Вопросы вирусологии. 2009. - № 5. - С. 4-9.

2. Дагданова A.B. Роль клеток лимфоцитарно-макрофагального пула в патогенезе прионовых инфекций./ A.B. Дагданова // Вестник РАСХН. -2001.-№ 2.-с. 6-8.

3. Зуев В.А. Прионные болезни человека и животных: Руководство для врачей/ В.А. Зуев, И.А. Завалишин, В.М. Ройхель. М.: Медицина, 1999. - 192с.

4. Комар A.A. Дрожжевой прион URE3.: от генетики до биохимии. / A.A. Комар, Р. Мелкий, К. Кюланн // Биохимия. 1999. - Т. 64. - Вып. 12.-С. 1659-1667.

5. Коромыслов Г.Ф. Эпизоотическая ситуация по медленным инфекциям овец романовской породы в хозяйствах Нечерноземья. / Г.Ф.

6. Коромыслов, В.А. Шубин, B.C. Суворов // Аграрная наука. 1994. - № 5.-С. 31-33.

7. Кушниров В.В. Структурное и функциональное сходство белков дрожжей Sup35p и Ure2p и прионов млекопитающих. / В.В. Кушниров, М.Д. Тер-Аванесян, В.Н. Смирнов // Молекулярная биология. 1995. -№ 29. - с. 427-430.

8. Маниатис Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование/ Т. Маниатис, Э.Фрич, Дж. Сэмбрук; пер. с англ.А.А. Баева, К.Г. Скрябина. М.: Мир, 1984. - 480 с

9. Надточей Г.А. Прионные инфекции: диагностика, профилактика и меры борьбы. Прионные и ретровирусные болезни животных. // Г.А. Надточей // Бюл. ВИЭВ. 1996. - Вып. 77. - с. 5-10.

10. Надточей Г.А. Экспериментальные прионные инфекции у животных. / Г.А. Надточей, В.А. Шубин, К.П. Юров, Г.Ф. Коромыслов // Труды ВИЭВ. 1999. - Т. 72. - с. 299-305.

11. Орлянкин Б.Г. Структура и биология прионов. / Б.Г. Орлянкин // Сельскохозяйственная биология. 1998. — № 2. — с. 46-58.

12. Покровский В.И. Прионы и прионные болезни. / В.И. Покровский, О.П. Киселёв, Б.Л. Черкасский М.: Издательство РАМН, 2004. - 384 с.

13. Ройхель В.М. Прижизненная диагностика прионовых трансмиссивных энцефалопатий. / В.М. Ройхель, Г.И. Фокина, Л.М. Кондакова и др // Вопросы вирусологии. 1997. — № 5. - с. 203-205.

14. Рыбаков С.С. Методические укказания по гистологической диагностике губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота. / С.С. Рыбаков, Е.В. Гусева, A.B. Чепуркин, A.A. Егоров М. - 2001. - 13 с.

15. Рыбаков С.С. Скрепи и другие прионные болезни животных и человека. / С.С. Рыбаков Владимир: Фолиант, 2003. — 199 с.

16. Рыбаков С.С. Клиническое проявление и диагностика губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота. / С.С. Рыбаков, К.Н. Груздев // Ветеринария. 2004. -№ 7. - с. 18-23.

17. Рыбаков С.С. Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота. / С.С. Рыбаков Владимир, 2007. - 588 с.

18. Рыбаков С.С. Меры, направленные на предотвращение возникновения и заноса ГЭ КРС в Россию. /С.С. Рыбаков, А.А. Егоров // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. — 2009. -№ 1. — с. 22-23.

19. Рыбаков С.С. Отбор патологического материала для диагностики ГЭ КРС. / С.С. Рыбаков, А.А. Егоров // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2009. - № 1. — с. 23 - 24.

20. Суворов B.C. Патоморфологическая дифференциация прионных инфекций: скрепи овец и губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота. /B.C. Суворов, В.А. Шубин, Г.А. Надточей, К.П. Юров, Д.Д. Санджаев// Труды ВИЭВ. 2003. - Т. 73. - с. 60-63.

21. Шуляк Б.Ф. Губчатая энцефалопатия кошек. / Шуляк Б.Ф. // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние животные. 2005. - № 2. - с. 2-3.

22. Aguzzi A. Understanding the diversity of prions. / A. Aguzzi // Nature cell biology. 2004. - Vol. 6. - № 4. - P. 290 - 292.

23. Aguzzi A. Prion biology: the quest for the test. / A. Aguzzi // Nat. methods. 2007. - Vol. 4. - № 8. - P. 614-616.

24. Aguzzi A. Molecular mechanisms of prion pathogenesis / A. Aguzzi, C. Sigurdson, M. Heikenwaelder // Annu Rev. Pathol. 2008. - № 3. - P. 11-40.

25. Aksamit A. J. Quantitation of 14-3-3 and neuron —specific enolase proteins in CFS in Creutzfeldt-Jacob disease. / A. J. Aksamit, С. M. Preissner, H. A. Homburger // Neurology. 2001. - Vol. 57. - № 4. - P. 728-730.

26. Arslan E. Kinetics of autocatalysis in small systems. / E. Arslan, I.J. Laurenzi // J. Chem. Phys. 2008. - Vol. 128. - № 1. p. 15.

27. Atarashi R. Ultrasensitive detection of scrapie prion protein using seeded conversion of recombinant prion protein / R. Atarashi, R.A. Moore, V.L. Sim,

28. A.G. Hughson, D.W. Dorward, H.A. Onwubiko, S.A. Priola, B. Caughey // Nat. Methods. 2007. - Vol. 4. - № 8. - P. 645-650.

29. Aucouturier P. Biochemical and conformational variability of human prion strains in sporadic Creutzfeldt-Jakob disease./ P. Aucouturier, R.J. Kascsak,

30. B. Frangione, T. Wisniewski // Neuroscience Letters. 1999. - Vol. 274. — № l.-P. 33-36.

31. Banks W.A. Leptin enters the brain by a saturable system independent of insulin. / W.A. Banks, A.J. Kastin, W. Huang, J.B. Jaspan, L.M. Maness // Peptides 1996. -№ 17. - P. 305-311.

32. Banks, W.A. Transport of insulin across the blood-brain barrier: saturability at euglycemic doses of insulin. / W.A. Banks, J.B. Jaspan, W. Huang, A.J. Kastin // Peptides. 1997. - № 18. - P. 423^129.

33. Banks W.A. Transport of prion protein across the blood-brain barrier. / W.A. Banks, S.M. Robinson, R. Diaz-Espinoza, A. Urayama, C. Soto // Exp. Neur. 2009. -№ 218. - P. 162-167.

34. Baron T. Mouse models of prion disease transmission. / T. Baron // Trends Mol. Med.-2002.-Vol. 8.-№ 10.-P. 495-500.

35. Baskakov I.V. Autocatalytic conversion of recombinant prion proteins displays a species barrier. / I.V. Baskakov // J. Biol. Chem. — 2004. Vol. 279.-№9.-P. 7671-7677.

36. Baskakov I.V. Converting the prion protein: what makes the protein infectious. / I.V. Baskakov, L. Breydo // Biochim. Biophys. Acta. 2007. -Vol. 1772. - № 6. - P. 692-703.

37. Baskakov I.V. The reconstitution of mammalian prion infectivity de novo. / I.V. Baskakov // FEBS J. 2007. - Vol. 274. - № 3. - P. 576-587.

38. Basu S. Modulation of PK-resistant PrPSc in cells and infectious brain homogenate by pathogenesis. / S. Basu, M.L. Mohan, X. Luo, B. Kundu, Q. Kong, N. Singh // Mol. Biol. Cell. 2007. - № 18. - P. 3302-3312.

39. Benestad S.L. Cases of scrapie with unusual features in Norway and designation of new type, Nor98. / S.L. Benestad, P. Sarradin, B. Thu, J. Schönheit, M.A. Tranulis, B. Bratberg // Vet. Res. 2003. - Vol. 153. - № 7. -P. 202-208.

40. Beringue V. Regional heterogeneity of cellular prion protein isoforms in the mouse brain. / V. Beringue, G. Mallinson, M. Kaisar, M. Tayebi, Z. Sattar, G. Jackson, D. Anstee, J. Collinge, S. Hawke // Brain. 2003. - № 126. - P. 2065-2073.

41. Bessen R.A. Non-genetic propagation of strain-specific properties of scrapie prion protein./ R.A. Bessen, D.A. Kocisko, G.J. Raymond, S. Nandan, P.T Lansbury, B. Caughey. // Nature. 1995. - Vol. 375. - № 6533. - P. 698700.

42. Bieschke J. Autocatalytic self-propagation of misfolded prion protein. / J. Bieschke, P. Weber, N. Sarafoff, M. Beekes, A. Giese, H. Kretzschmar // Proc Natl Acad Sei USA. 2004. - Vol. 101. -№ 33. P. 12207-12211.

43. Bocharova O.V. In vitro conversion of full-length mammalian prion protein produces amyloid form with physical properties ofPrP(Sc). / O.V.

44. Bocharova, L. Breydo, A.S. Parfenov, V.V. Salnikov, I.V. Baskakov I I J. Mol. Biol. 2005. - Vol. 346. - № 2. - P. 645-659.

45. Brimacombe D.B. Characterization and polyanion-binding properties of purified recombinant prion protein. / D.B. Brimacombe, A.D. Bennett, F.S. Wusteman, A.C. Gill, J.C. Dann, C.J. Bostock // Biochem J. 1999. - Vol. 342.-№3.-P. 605-613.

46. Brown D.R. Microglial expression of the prion protein. / D.R. Brown, A. Besinger, J.W. Herms, H.A. Kretzschmar // Neuroreport. 1998. - № 9. - P. 1425-1429.

47. Brown D.R. Normal prion protein has an activity like that of superoxide dismutase. / D.R. Brown, B.S. Wong, F. Hafiz, C. Clive, S.J. Iiaswell, I.M. Jones // Biochem. J. 1999. - № 344. - P. 1-5.

48. Brown D.R. Consequences of manganese replacement of copper for prion protein function and proteinase resistance. / D.R. Brown, F. Hafiz, L.L. Glasssmith, B.S. Wong, I.M. Jones, C. Clive, S.J. Haswell // EMBO J. 2000. - № 19.-P. 1180-1186.

49. Brown P. Blood infectivity and the prospects for a diagnostic screening test in Creutzfeldt-Jacob disease. / P. Brown, L. Cervenakova, H. Diringer // J. Lab. Clin. Med.-2001.-Vol. 137.-№4.-P. 5-13.

50. Buschmann A. Detection of cattle-derived BSE prion using transgenic mice overexpressing bovine PrPc. / A. Buschmann, E. Pfaff, K. Reifenberg, H.M. Müller, M.H Groschup // Arch. Virol. Suppl. 2000. - №. 16. - P. 7586.

51. Calzolai L. Prion protein NMR structures of chickens, turtles, and frogs. / L. Calzolai, D.A. Lysek, D.R. Perez, P. Güntert, K. Wüthrich // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2005. - Vol. 102.-№3.-P. 651-655.

52. Carmona P. In vivo detection of scrapie cases from blood by infrared spectroscopy. / P. Carmona, M. Monzón, E. Monleón, J.J. Badiola, J. Monreal //J. Gen. Virol.-2005.-Vol. 86. -№> 12.-P. 3425-3431.

53. Cashman N.R. Cellular isoform of the scrapie agent protein participates in lymphocyte activation. / N.R. Cashman, R. Lortscher, J. Nalbantoglu, I. Shaw, R.J. Kascsak, D.C. Bolton, P.E. Bendheim//Cell. 1990.-№ 61.-P. 185192.

54. Castilla J. In vitro generation of infectious scrapie prions / J. Castilla, P. Saá, C. Hetz, C. Soto//Cell. 2005.-Vol. 121.-№ 2.-P. 195-206.

55. Castilla J. Protein misfolding cyclic amplification for diagnosis and prion propagation studies. / J. Castilla, P. Saa, R. Morales, K. Abid, K. Maundrell, C. Soto // Methods Enzymol. 2006. - № 412. - P. 3-21.

56. Caughey B. Prion protein and the transmissible spongiform encephalopathies. / B. Caughey, B. Chesebro // Trend in Cell Biology. 1997. -Vol. 7. №2.-P. 56-62.

57. Cervenakova L. Advances in sreening test development for transmissible spongiform encephalopathies. / L. Cervenakova, P. Brown // Expert Rev. Anti. Infect. Ther. 2004. - Vol. 2. - № 6. - P. 873-880.

58. Collinge, J. Molecular analysis of prion strain variation and the aetiology of "new variant" CJD. / J. Collinge, K.C. Sidle, J. Meads, J. Ironside, A. F. Hill // Nature. 1996. - № 383. - P. 685-690.

59. Come J.H., Fraser P.E., Landsbury P.T. A kinetic model for amyloid formation in the prion diseases: importance of seeding. / J.H. Come, P.E. Fraser, P.T. Landsbury // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V. 90. - №. 13.-P. 5959-5963.

60. Cotto E. Molecular characterization, philogenetic relationships and developmental expression patterns of prion genes in zebrafish / E. Cotto, M. Andre, J. Forgue, H.J. Fleury, P.J. Babin //FEBS Journal. 2004. - № 272. -P. 500-513.

61. Crozet C. Cellular pathogenesis in prion diseases. / C. Crozet, F. Beranger, S. Lehmann // Vet. Res. 2008. - Vol. 39. - № 4. - P. 44.

62. Cuille J., Chelle P.L. Experimental transmission of trembling to the goat./ J. Cuille, P.L.Chelle // CR Seances Acad.Sci. 1939. - № 208. - P. 10581060.

63. DeArmond S. J. Etiology and pathogenesis of prion diseases. / S. J. DeArmond, S.B. Prusiner // American Journal of Pathology, 1995. - Vol. 146.-№4.-P. 785-811.

64. Deleault N.R. Formation of native prions from minimal components in vitro. / N.R. Deleault, B.T. Harris, J.R. Rees, S. Supattapone // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. - Vol. 104. -№ 23. - P. 9741-9746.

65. DeMarco M. L. From conversion to aggregation: Protofibril formation of the pion protein. / M.L. DeMarco, V. Daggett // PNAS. 2004. - Vol. 101. -№8.-P. 2293-2298.

66. Eiden M. Synthetic prions./ M. Eiden, A. Buschmann, L. Kupfer, M.H. Groschup // J. Vet. Med. B Infect. Dis. Vet. Public Health. 2006. - Vol. 53. -№ 6. P.-251-256.

67. Endo T. Diversity of oligosaccharide structures linked to asparagines of the scrapie prion protein. // T. Endo, D. Groth, S.B. Prusiner, A. Kobata Biochemistry. -1989. -№ 28. P. 8380-8338.

68. Farquhar C. F. Post-mortem immunodiagnosis of scrapie and bovine spongiform encephalopathy / C.F. Farquhar, R. A. Somerville, L. A. Ritchie // J. Virol. Methods. 1989. 24. - P. 215-222.

69. Foster J. D. Immunolocalisation of the prion protein (PrP) in the brains of sheep with scrapie / J.D. Foster, M. Wilson, N. Hunter // Vet. Rec. 1996. -№ 139.-P. 512-515.

70. Fraser H. Diversity in the neuropathology of scrapie-like diseases in animals / H. Fraser // Br. Med. Bull. 1993. - № 49 p. 792-809.

71. Gajdusek D. Transmission and passage of experimenal "kuru" to chimpanzees / D. Gajdusek, C.J. Gibbs, M. Alpers // Science. 1967. - № 155.-P. 212-214.

72. Gajdusek D.C. Transmissible and non-transmissible amyloidoses: autocatalytic post-translational conversion of host precursor proteins to beta-pleated sheet configurations. / D.C. Gajdusek // J. Neuroimmunol. 1988. -Vol. 20.-№2-3.-P. 95-110.

73. Gambetti P. Human brain amyloidoses. / P. Gambetti, C. Russo // Nephrol Dial Transplant. 1998. - № 13. - P. 33-40.

74. Giese A. Effects of metal ions on de novo aggregation of full-length prion protein. / A. Giese, J. Levin, U. Bertsch, H. Kretzschmar // Biochem. and Biophys. Reseach Communications. 2004. - № 320. - P. 1240-1246.

75. Reisacher, W.R. Mayr // Transfusion. 2003. - Vol. 43. - № 12. - P. 17061710.

76. Goder V. Topogenesis of membrain proteins: determinants and dynamics / V. Goder, M. Spiess // FEBS Lett. 2001. - Vol. 504. - № 3. - P. 87-93.

77. Grassi J. Progress and limits of TSE diagnostic tools. / J. Grassi, S. Maillet, S. Simon, N. Morel // Vet. Res. 2008. - Vol. 39. - P. 1-39.

78. Green A. J. Increased S-lOOb in the cerebrospinal fluid of some cattle with bovine spongiform encephalopathy. / A.J. Green, R. Jackman, T.A. Marshal, E.J. Thompson //Vet. Rec. 1999. -Vol. 145.-№4.-P. 107-109.

79. Greer M.L. A mathematical analysis of the dynamics of prion proliferation. / M.L. Greer, L. Pujo-Menjouet, G.F. Webb // J. Theor. Biol. 2006. - Vol. 242.-№3.-P. 598-606.

80. Grosset A. .Rapid presymptomatic detection of PrPsc via conformationally responsive palindromic PrP peptides. / A. Grosset, K. Moskowitz, C. Nelsen, T. Pan, E. Davidson, C.S. Orser // Peptides. 2005. - Vol. 26. - № 11. - P. 2193-2200.

81. Grays E. Protein folding pathology in domestic animals. / E. Grays // J Zhejiang. Univ. Sci. 2004. - Vol. 5. - № 10. P. 1226-1238.

82. Hall T.A. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT. / T.A. Hall // Nucl. Acids. Symp. Ser.- 1999. № 41. - P. 95-98.

83. Haritani M. Hydrated autoclave pretreatment enhancement of prion protein immunoreactivity in formalin-fixed bovine spongiform encephalopathy-affected brain / M. Haritani, Y. I. Spencer, G.A.H. Wells // Acta Neuropathol.- 1992.-№ 87. -P.86-90.

84. Harris D.A. Cellular biology of prion diseases. / D.A. Harris // Clin. Microbiol. Rev. 1999. - Vol. 12. - № 3. - P. 429-444.

85. Hegde R.S. A Transmembrane Form of the Prion Protein in Neurodegenerative Disease / R.S. Hegde // Science. 1998 - № 279. - P. 827-834.

86. Hedge R.S. Regulation of protein biogenesis at the endoplasmic reticulum membrane. / R.S. Hedge, V.R.Lingappa // Trends Cell. Biol. 1999. - Vol. 9.- № 4. P. 132-137.

87. Herrmann L. M. Cellular prion protein is expressed on peripheral blood mononuclear cells but not platelets of normal and scrapie-infected sheep / L.M. Herrmann et al. // Haematologica. 2002. - № 86. - P. 146-153.

88. Hilton D. A. Accomulation of prion protein in tonsil and appendix: review of tissue samples./ D.A. Hilton, A.C. Ghani, L. Conyers, P. Edwards, L. McCardle, D. Ritchie, M. Penney, J.W. Ironside.// Brit. Med. J. 2002. - Vol. 325. - № 7365. - P. 633-634.

89. Hilton D.A. Prevalence of lymphoreticular prion protein accumulation in UK tissue samples. / D.A. Hilton, A.C. Ghani, L. Conyers, P. Edwards, L. McCardle, D. Ritchie, M. Penney, D. Hegazy, J.W. Ironside. // J. Pathol. -2004.-Vol. 203.-№3.-P. 733-739.

90. Hilton D. A. Pathogenesis and prevalence of variant Creutzfeldt-Jacob disease. / D.A. Hilton // J.Pathol. 2006. - Vol. 208. - № 2. - P. 134-141.

91. Holada K. Different levels of prion protein (PrPc) expression on hamster, mouse and human blood cells. / K. Holada, L.G. Vostal // Br. J.Hematol. -2000. Vol. 110. - № 2. - P. 472-480.

92. Hornshaw M.P. Copper binding to the N-terminal tandem repeat regions of mammalian and avian prion protein. / M.P. Hornshaw, J.R. McDermott, J.M. Candy//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. -№ 207. - P. 621-629.

93. Houston F. Transmission of BSE by blood transfusion in sheep. / F. Houston, J.D. Foster, A. Chong, N. Hunter, C.J. Bostock // Lancet. 2000. -Vol. 356. №9234.-P. 999-1000.

94. Hunter N. Transmission of prion disease by blood transfusion. / N. Hunter, J. Foster, A. Chong, S. McCutcheon, D. Parnham, S. Eaton, C. MacKenzie, F. Houston // J. Gen. Virol. 2002. - Vol. 83. - № 11. - P. 2897-2905.

95. Ingrosso L. Molecular diagnostics of transmissible spongiform encephalopathies. / L. Ingrosso, V. Vetugno, F. Cardone, M. Pocchiari // Trend Mol. Med. 2002. - Vol. 8. - № 6. - P. 273-280.

96. Jackson G.S. Reversible conversion of monomeric human prion protein between native and fibrilogenic conformations. / G.S. Jackson, L.L. Hosszu,

97. A. Power, A.F. Hill, J. Kenney, H. Saibil, C J. Craven, J.P. Waltho, A.R. Clarke, J. Collinge // Science. 1999. - Vol. 283. -№ 5409. - P. 1935-1937.

98. Jackson G.S. The molecular pathology of CJD: old and new variants. / G.S. Jackson, J. Collinge // J. Mol. Pathol. 2001. - Vol. 54. - № 6. - P. 393399.

99. Jackson G.S. Location and properties of metal-binding sites on the human prion protein. / G.S. Jackson, I. Murray, L.L. Hosszu, N. Gibbs, J.P. Waltho, A.R. Clarke, J. Collinge// Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2001. - № 98. - P. 8531-8535.

100. Jarrett J.T. Seeding "one-dimensionalcrys tallization" of amyloid: a pathogenic mechanism in Alzheimer's disease and scrapie ? / J.T. Jarret, P.T.Lansbury.//Cell. 1993. -№ 73. - P. 1055-1058.

101. Jones E.M. Fibril conformation as the basis of species- and strain-dependent seeding specificity of mammalian prion amyloids. / E.M. Jones, W.K. Surewicz// Cell. -2005. -Vol. 121.-№ l.-P. 63-72.

102. Kitamoto T. Formic acid pretreatment enhances immunostaining of cerebral and systemic amyloids / T. Kitamoto, K. Ogomori, J. Tateishi, S.B. Prusiner // Lab. Invest. 1987. - Vol. 57. - № 2. - P. 230-236.

103. Klohn P.C. A quantitative, highly sensitive cell-based infectivity assay for mouse scrapie prions. / P.C. Klohn, L. Stoltze, E. Flechsig, M. Enari, C. Weissmann // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - Vol. 100. № 20. - P. 11666-11671.

104. Kneipp J. Molecular changes of preclinical scrapie can be detected by infrared spectroscopy. / J. Kneipp, M. Beekes, P. Lasch, D. Naumann// J. Neurosci. 2002. - Vol. 22. - № 8. - P. 2989-2997.

105. Kocisko D.A. Cell-free formation of protease-resistant prion protein. / D.A. Kocisko, J.H. Come, S.A. Priola, B. Chesebro, G.J. Raymond, P.T. Lansbury, B. Caughey // Nature. 1994. - Vol. 370. - № 6489. P. 471-474.

106. Kohler G.Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity / G. Kohler, C. Milstain // Nature. 1976. - Vol.256. -P.495-497.

107. Kordek R. The diagnosis of human prion disease. / R. Kordek // Folia Neuropathol. 2000. - Vol. 38. -№ 4. -P. 151-160.

108. Korth C. Prion (PrPsc)-specific epitope defined by a monoclonal antibody. / C. Korth, B. Stierli, P. Streit, M. Moser, O. Schaller, R. Fischer, W. Schulz' Schaeffer, H. Kretzschmar, A, Raeber, U. Braun, F. Ehrensperger, S.

109. Hornemann, R. Glockshuber, R. Riek, M. Billeter, K. Wuthrich, B. Oesch // ( Nature. 1997. - Vol. 390. - № 6655. - P. 74-77.

110. Korth C. Abbreviated incubation times for human prions in mice expressing a chimeric mouse-human prion protein transgen. / C. Korth, K. Kaneko, D. Groth, N. Heye, G. Telling, J. Mastrianni, P. Parchi, P. Gambetti,

111. R.Will, J. Ironside, C. Heinrich, P. Tremblay, S.J. DeArmond, S.B. Prusiner // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2003. - Vol. 100. - № 8. - P. 4784-4789.

112. Kuzuhara S. Gerstmann-Straussler-Scheinker's disease. / S. Kuzuhara, I. Kanazawa, H. Sasaki, T. Nakanishi, K. Shimamura // Ann. Neurol. 1983. -Vol. 14. №2.-P. 216-225.

113. Kyhse-Andersen J. Electroblotting of multiple gels: a simple apparatus with-out buffer tank for rapid transfer of protein from polyacrylamide to nitrocellulose / J. Kyhse-Andersen // J. Biophys. Biochem. Meth. 1984. - № 10.-P. 203-209.

114. Lachmann H.J. Systemic amyloidosis. / H.J. Lachmann, P.N. Hawkins // Current Opinion in Pharmacology 2006. - № 6. - P. 214-220.

115. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. 1970. - № 227. - P. 680-685.

116. Lane A. Polymeric ligands with specificity for aggregated prion protein. / A. Lane, C.J. Stanley, S. Dealler, S.M. Wilson // Clin. Chem. 2003. - Vol. 49. -№ 10.-P. 1774-1775.

117. Laurent M. Autocatalytic processes in cooperative mechanisms of prion diseases. / M. Laurent // FEBS Lett. 1997. - № 407. - P. 1-6.

118. Le Nel A. Controlled proteolysis of normal and pathological prion protein in a microfluidic chip. / A. Le Nel, N. Mine, C. Smadja, M. Slovakova, Z. Bilkova, J.M. Peyrin, J.L. Viovy, M. Taverna // Lab. Chip. 2008. - Vol. 8. -№2.-P. 294-301.

119. Leffers K.W. Assembly of natural and recombinant prion protein into fibrils. / K.W.Leffers, H. Wille, J. Stohr, E. Junger, S.B. Prusiner, D. Riesner // Biol. Chem. 2005. - Vol. 386. - № 6. - P. 569-580.

120. Legname G. Synthetic mammalian prions. / G. Legname, I.V. Baskakov, H.O. Nguyen, D. Riesner, F.E. Cohen, S.J. DeArmond, S.B. Prusiner // Science. 2004. - Vol. 305. - № 5684. P. 673-676.

121. Lehto M. Current and future molecular diagnostics for prion diseases. / M. Lehto, H.E. Peery, N.R. Cashman // Expert Rev. Mol. Diagn. 2006. - Vol. 6.-№4.-P. 597-611.

122. Liberski P.P. Isolation and purification of scrapie-associated fibrils and prion protein from scrapie-infected hamster brain. / P.P. Liberski, A. Plucienniczak, E. Hrabec, A. Bogucki // J. Comp. Pathol. 1989. - Vol. 100. - № 2. - P. 177-185.

123. Liberski P.P. The ultrastructural diversity of scrapie-associated fibrils isolated from experimental scrapie and Creutzfeldt-Jakob disease. / P.P. Liberski, P. Brown, S.Y. Xiao, D.C. Gajdusek // J. Comp. Pathol. 1991. -Vol. 105. - № 4. - P. 377-386.

124. Llewelyn C. A. Possible transmission of variant Creutzfeldt-Jacob disease by blood transfusion. / C.A. Llewelyn, P.E. Hewitt, R.S. Knight, K. Amar, S. Cousens, J. Mackenzie, R.G. Will // Lancet. 2004. - Vol. 363. - № 9407. -P. 417-421.

125. M'Go wan J.P. // J.Comp.Path. & Therap. 1918. - № 31. - P. 278.

126. MacGregor I. Distribution normal prion protein in blood. /1. MacGregor, O. Drummond, Turner M, R. Barclay, C. Prowse // Trunsfusion Sci. — 2000. -Vol. 22. № 1-2.-P. 51.

127. Maissen M. Plasminogen binds to disease-associated prion protein of multiple species. / M. Maissen, C. Roeckl, M. Glatzel, W. Goldmann, A. Aguzzi// Lancet. -2001. Vol. 357. -№ 9273. - P. 2026-2028.

128. Makarava N. Expression and purification of full-length recombinant PrP of high purity. / N. Makarava, I.V. Baskakov // Methods Mol. Biol. 2008. - № 459.-P. 131-143.

129. McBride P. A. PrP protein is associated with follicular dendritic cells of spleens and lymph nodes in uninfected and scrapie-infected mice / P.A. McBride, P. Eikelenboom, G. Kraal, H. Fraser, M.E. Bruce // J. Pathol. -1992.-Vol. 168.-№4-P. 413-418.

130. McGregor I. Immunoassay of human plasma cellular prion protein. /1. McGregor, O. Drummond // Transfusion. 2001. - Vol. 41. - №1. - P. 6166.

131. Mead S. Prion disease genetics. / S. Mead // Eur. J. Hum. Genet. 2006. -Vol. 14. -№ 3. - P. 273-281.

132. Miele G. A novel eritroid-specific marker of transmissible spongiform encephalopathies. / G. Miele, J. Manson, M. Clinton // Nat. Med. 2001. -Vol. 7. -№ 3. - P. 361-364.

133. Miller J.M. Immunohistochemical detection of prion protein in sheep with scrapie / J.M. Miller, A.L. Jenny, W.D. Taylor, R.F. Marsh, R. Rubenstein, R.E. Race // J.Vet.Diagn.Invest. 1993. - Vol. 5. - № 3. - P.309-316.

134. Miroux B. Over-production of proteins in Escherichia coli: Mutanthosts that allow synthesis of some membrane proteins and globular proteins at high levels. / B. Miroux, J.E. Walker // J Mol Biol. 1996. - № 260. - P. 289-298.

135. Missler U. Measurment of glial fibrillary acidic protein in human blood: analytical method and preliminary clinical results./ U. Missler, M. Wiesmann, G. Wittmann, O. Magerkurth, H. Hagenstrom // Clin. Chem. 1999. - Vol. 45.-№ l.-P. 138-141.

136. Moronchini G., Kanu N., Solforosi L.et al. Motif-grafted antybodies containing the replicative interface of cellular PrP are specific for PrPsc. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2004. Vol. 101. № 28. - P. 10404-10409.

137. Moser M. Developmental expression of the prion protein gene in glial cells. / M. Moser, R.J. Collelo, U. Pott, B. Oesch // Neuron. 1995. - № 14. P. 509-517.

138. Murayama Y. Specific detection of prion antigenic determinants retained in bovine meat and bone meal by flow microbead immunoassay. / Y. Murayama, M. Yoshioka, H. Horii // J. Appl. Microbiol. Vol. 101. - № 2. -P. 369-376.

139. Nakane P. Peroxydase labeled antibody. A new method of conjugation. / P. Nakane, A. Kawaoi // J.Histochem.Cytochem. 1974. - Vol. 22. - № 12. - P. 1084-1091.

140. Novitskaya V. Probing the conformation of the prion protein within a single amyloid fibril using a novel immunoconformational assay./ Novitskaya V., Makarava N., Bellon A., Bocharova O.V. // J. Biol. Chem. 2006. - Vol. 281.-№22.-P. 15536-15545.

141. Orem N.R. Copper (II) ions potently inhibit purified PrPres amplification./ N.R. Orem, J.C. Geoghegan, N.R. Deleault, R. Kascsak, S. Supattapone // J. Neurochem. 2006. - Vol. 96. - № 5. - P. 1409-1415.

142. O'Rourke K. I. Preclinical detection of PrP-Sc in nictitating membrane lymphoid tissue of sheep / K.I. O'Rourke, T.V. Baszler, S.M. Parish, D.P.Knowles // Vet. Rec. 1998. - Vol. 142.-№ 18.-P. 489-491.

143. Pammer J. Human keratinocytes express cellular prion-releated proteinin vitro and during inflammatory skin disease. / J. Pammer, W. Weninger, E. Tschachler//Am. J.Pathol.- 1998.-Vol. 153.-P. 1353-1358.

144. Pan K.M. Purification and properties of the cellular prion protein from Syrian hamster brain. / K.M. Pan, N. Stahl, S.B. Prusiner// Protein Sci. -1992.l.-P. 1343-1352.

145. Pan T. Detection of misfolded prion protein in blood with conformationally sensitive peptides. / T. Pan, J. Sethi, C. Nelsen, A. Rudolph,

146. Cervenakova, P. Brown, C.S.Orser 11 Trunsfusion. 2007. - Vol. 47. - № 8.-P. 1418-1425.

147. Parveen I. The use of non- prion biomarkers for the diagnosis of transmissible spongiform encephalopathies in the live animal. /1. Parveen, J. Moorby, G. Allison, R. Jackman // Vet. Res. 2005. - Vol. 36. - № 5-6. - P. 665-683.

148. Pastrana M.A. Isolation and characterization of a proteinase K-sensitive PrPsc fraction. / M.A. Pastrana, G. Sajnani, B. Onisko, J. Castilla, R. Morales, C. Soto, J.R. Requena// Biochemistry. 2006. - Vol. 45. -№ 51. - P. 1571015717.

149. Peden A. H. Preclinical vCDJ after blood transfusion in PRNP codon 129 heterozygous patient. / A.H. Peden, M.W. Head, D.L. Ritchie, J.E. Bell, J.W. Ironside // Lancet. 2004. - Vol. 364. - № 9433. - P. 527-529.

150. Peretz D. Strain-specified relative conformational stability of the scrapie prion protein. / D. Peretz, M.R. Scott, D. Groth, R.A., Williamson., D.R. Burton, F.E. Cohen, S.B. Prusiner // Protein Sci. 2001. - Vol. 10. - № 4. -P. 854-863.

151. Perini F. Prion protein released by platelets. / F. Perini, B. Frangione, F. Prelli//Lancet. 1996. Vol. 347.-№ 9015. - P. 1635-1636.

152. Pertinhez T.A. Stimulation and inhibition of fibril formation by a peptide in the presence of different concentrations of SDS. / T.A. Pertinhez, M. Bouchard, R.A Smith., C.M. Dobson, L.J. Smith // FEBS Letters. 2002. -Vol. 529. - № 2-3. - P. 193-197.

153. Picard-Hagen N. Prion protein in cerebrospinal fluid of healthy and naturally scrapie-affected sheep. / N. Picard-Hagen, V. Gayrard, C. Viguie, M. Moudjou, C. Imbs, P.L. Toutain // J.Gen.Virol. 2006. - Vol. 87. - № 12. -P. 3723-3727.

154. Politopoulou G. Age-releated expression of cellular prion protein in human peripheral blood leukocytes. / G. Politopoulou, J.D. Seebach, M. Schmugge, H.P. Schwarz, A. Aguzzi // Haematologica. 2000. - Vol. 85. P. 580-587.

155. Prusiner S.B. Molecular biology of prion diseases / S.B. Prusiner // Science. 1991.-Vol. 252.-№ 5012-P. 1515-1522.

156. Prusiner S.B. Novel proteinaceous infection particles cause scrapie / S.B. Prusiner// Science. 1982. - Vol. 216. -№ 4542. - P. 136-144.

157. Prusiner S.B. Prion diseases of the central nervous system. / S.B. Prusiner, S.J. DeArmond // Monogr. Pathol. 1990. - № 32. - P. 86-122.

158. Prusiner S.B. Prions / S.B. Prusiner // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998. -Vol. 95.-№23.-P. 13363-13383.

159. Prusiner S.B. The prion diseases./ S.B. Prusiner // Brain Patology. 1998. -Vol. 8. — № 3. - P. 499-513.

160. Requena J.R. Oxidation of methionine residues in the prion protein by hydrogen peroxide. / J.R. Requena, M.N. Dimitrova, G. Legname, S. Teijeira, S.B. Prusiner, R.L. Levine // Arch. Biochem. Biophys. 2004. - Vol. 432. -№2.-P. 188-195.

161. Riek R. NMR structure of the mouse prion protein domain PrP(121-231). / R. Riek, S. Hornemann, G. Wider, M. Billeter, R. Glockshuber, K.Wuthrich.// Nature(Lond-). 1996. - Vol. 382. -№ 6587. - P. 180-182.

162. Riek R. NMR characterization of the full-length recombinant murine prion protein, mPrP(23-231). / R. Riek, S. Hornemann, G. Wider, M. Billeter, R.

163. Glockshuber, K. Wuthrich. // FEBS Lett. 1997. Vol. 413. - № 2. - P. 282288.

164. Rivera-Milla E. An evolutionary basis for scrapie disease: identification of a fish prion mRNA. / E. Rivera-Milla, C.A. Stuermer, E. Malaga-Trillo // Trends Genetics. 2003. - Vol. 19. - № 2. - P. 72-75.

165. Robertson C. Cellular prion protein is released on exosomes from activated platelets. / C. Robertson, S.A. Booth, D.R. Beniac, M.B. Coulthart, T.F. Booth, A. McNicol // Blood. 2006. - Vol. 107. - № 10. - P. 3907-3911.

166. Rubenstein R. Detection and discrimination of PrPsc by multi-spectral ultraviolet fluorescence. / C. Robertson, S.A. Booth, D.R Beniac, M.B. Coulthart, T.F. Booth, A. McNicol // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1998.-Vol. 246. -№ l.-P. 100-106.

167. Saá P. Cyclic amplification of protein misfolding and aggregation. / P. Saá, J. Castilla, C. Soto // Methods Mol. Biol. 2005. - № 299. - P. 53-65.

168. Saborio G.P. Sensitive detection of pathological prion protein by cyclic amplification of protein misfolding. / G.P. Saborio, B. Permanne, C. Soto // Nature. 2001. - V. 411. - № 6839. - P. 810-813.

169. Safar J. Eight prion strains have PrP(Sc) molecules with different conformations. / Safar J., Wille H., Itri V., Groth D., Serban H., Torchia M., Cohen F.E., S.B. Prusiner // Nat. Med. 1998. - Vol. 4. - № 10. - P. 11571165.

170. Sakudo A. Recent developments in prion disease research: Tools and in vitro cell culture models. / A. Sakudo, I. Nakamura, K. Ikuta, T. Onodera // J. Vet. Med. Sci. 2007. - Vol. 69. - № 4. - P. 329-337.

171. Sambrook J., Russell D.W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. -2001. Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, NY.

172. Sanchez-Valle R. 14-3-3 Protein isoforms and atypical patterns of the 143-3 assay in the diagnosis of Creutzfeldt-Jakob disease. / R. Sanchez-Valle, A. Saiz, F. Graus // Neurosci. Lett. 2002. - Vol. 320. - № 1-2. - P. 69-72.

173. Schmitt-Ulms G. Evolutionary Descent of Prion Genes from the ZIP Family of Metal Ion Transporters / G. Schmitt-Ulms, S. Ehsani, J.C. Watts, D.Westaway, H. Wille // PLoS One. 2009. - Vol. 4 - № 9. - P. 1-13.

174. Schofield F.W. 1938 Rpt. Ont.Vet. College - P.34.

175. Shaked Y. A C-terminal-truncated PrP isoform is present in mature sperm. / Y. Shaked, H. Rosenmann, G. Talmor, R. Gabizon // J.Biol. Chem. 1999. -Vol. 274. -№ 45. - P. 32153-32158.

176. Somerville R.A. Structural and biochemical evidence that scrapie-associated fibrils assemble in vivo. / R.A. Somerville, L.A. Ritchie, P.H. Gibson // J. Gen. Virol. 1989. - Vol. 70. - № 1. - P. 25-35.

177. Somerville R.A. Transmissible spongiform encephalopathy strain, PrP genotype and brain region all affect the degree of glycosylation of PrPSc. / R.A. Somerville, S. Hamilton, K. Fernie// J. Gen. Virol. 2005. -№ 86. - P. 241-246.

178. Soto C. Protein misfolding and neurodegeneration. / C. Soto, L.D. Estrada //Arch Neurol.-2008.-Vol. 65.-№2.-P. 184-189.

179. Stack M. Western immunoblotting techniques for the study of transmissible spongiform encephalopathies. // Methods and tools in biosciences and medicine- techniques in prion research. Ed. Lehmann S.,Grassi J. P. 97-116. - Birkhauser Verlag. Berlin

180. Stahl N. Scrapie prion protein contains a phosphatidylinositol glycolipid. / N. Stahl, D.R. Borchelt, K. Hsiao, S.B. Prusiner // Cell. 1987. - № 51. - P. 229-240.

181. Stohr J. Mechanisms of prion protein assembly into amyloid. / J. Stohr, N. Weinmann, H. Wille, T. Kaimann, L. Nagel-Steger, E. Birkmann, G. Panza, S.B. Prusiner, M. Eigen, D. Riesner // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2008. -Vol. 105.-№7.-P. 2409-2414.

182. Supattapone S. Prion protein conversion in vitro. / S. Supattapone // J. Mol. Med. 2004. - Vol. 82. - № 6. - P. 348-356.

183. Surewicz W.K. The Emerging Principles of Mammalian Prion Propagation and Transmissibility Barriers: Insight from Studies inVitro. / W.K. Surewicz,

184. E.M. Jones, A.C. Apetri // Acc. Chem. Res. 2006. - № 39. - P. 654-662.

185. Swerdlow R H. Pathogenesis of Alzheimer's disease / R.H. Swerdlow // Clin Interv Aging. 2007. - Vol. 2. - № 3. - P. 347-359.

186. Swietnicki W. Aggregation and fibrillization of the recombinant human prion protein huPrP 90-231./ W. Swietnicki, M. Morillas, S.G. Chen, P. Gambetti, W.K. Surewicz // Biochemistry. 2000. - Vol. 39. - № 2. - P. 424431.

187. Tanaka M. Conformational variations in an infectious protein determine prion strain differences. / M. Tanaka, P. Chien, N. Naber, R. Cooke, J.S. Weissman // Nature. 2004. - Vol. 428. - № 6980. - P. 323-328.

188. Tcherkasskaya O. Conformational biosensor for diagnosis of prion disease. / O. Tcherkasskaya, E. A. Davidson, M.J. Schmerr, C. S. Orser // Biotechnology Letters. 2005. - Vol. 27. - № 9. - P. 671-675.

189. Telling G.C. N-terminally tagged prion protein supports prion propagation in transgenic mice / G.C. Telling, P. Tremblay, M. Torchia, S.J. Dearmond,

190. F.E. Cohen, S.B. Prusiner // Protein Science. 1997. - Vol. 6. - № 4. - P. 825-833.

191. Torrent J. High pressure induces scrapie-like prion protein misfolding and amyloid fibril formation. / J. Torrent, M.T. Alvarez-Martinez, M.C. Harricane, F. Heitz, J.P. Liautard, C. Balny, R. Lange // Biochemistry. 2004. -Vol. 43.-№22.-P. 7162-7170.

192. Trieschmann L. Ultra-sensitive detection of prion protein fibrils by flow cytometry in blood from cattle affected with bovine spongiform encephalopathy. / L. Trieschmann, A. Navarrete Santos, K. Kaschig, S.

193. Torkler, E. Maas, H. Schatzl, G. Bohm // BMC Biotechnol. 2005. - Vol. 5. -P. 26.

194. Wadsworth J.D. Tissue distribution of protease resistant prion protein in variant Creutzfeldt-Jakob disease using a highly sensitive immunoblotting assay / J.D. Wadsworth // Lancet. 2001. - № 358. - P. 171-180.

195. Watts J. C. The prion protein family: diversity, rivalry, and dysfunction. / J.C. Watts, D. Westway // Bioch. Bioph. Acta. 2007. - Vol. 1772. - № 6. -P. 654-672.

196. Wells G.A.H. Recently described scrapie-like encephalopathies of animals: case definitions / G.A.H. Wells, I.S. McGill // Res. Vet. Sci. 1992. - Vol. 53.-№ l.-P. 1-10.

197. WHO Guidelines on Tissue Infectivity Distribution in Transmissible Spongiform Encephalopathies, 2006

198. Wickner RB. Prions of fungi: inherited structures and biological roles. / R.B. Wickner, H.K. Edskes, F. Shewmaker, T. Nakayashiki // Nat Rev Microbiol.-2007.-Vol. 5.-№8.-P. 611-618.

199. Williams E.S. Spongiform encephalopathies in cervidae / E.S. Williams, S. Young// Rev. Sci. Tech. OIE. 1982. - № 11. - P. 551-567.

200. Williamson R. A. Mapping the prion protein using recombinant antibodies./ R.A. Williamson, D. Peretz, C. Pinilla, H. Ball, R.B. Bastidas, R. Rozenshteyn, R.A. Houghten, S.B. Prusiner, D.R. Burton // J.Virol. 1998. -Vol. 72. -№ 11.-P. 9413-9418.

201. Winklhofer K.F. A sensitive filter retention assay for the detection of PrPSc and the screening of anti-prion compounds / K.F. Winklhofer, F.U. Harlt, J. Tatzelt // FEBS Lett. 2001. - Vol. 503. - №. 1. - P. 41-45.

202. Yakovleva O. Effect of protease treatment on plasma infectivity in variant CJD mice. / O. Yakovleva, A. Janiak, C. McKenzie, L. McShane, P. Brown, L.Cervenakova // Transfusion. 2004. - Vol. 44. - № 12. - P. 1700-1705.

203. Yang W.C. Capillary electrophoresis-based noncompetitive immunoassay for the prion protein using fluorescin-labeled protein as a fluorescent probe. /

204. W.C. Yang, M.J. Schmerr, R. Jackman, W. Bodemer, E.S. Yeung // Anal. Chem. 2005. - Vol. 77. - № 14. - P. 4489-4494.

205. Ye X. Astrocytosis and amyloid deposition in scrapie-infected hamster. / X. Ye, A.C. Scallet, R.J. Kascsak, R.I. Carp // Brain Res. 1998. - Vol. 809.- № 2. P. 277-287.

206. Zahn, R., A. Liu, T. Luhrs, R. Riek, C. vonSchroetter, F.L. Garcia, M. Billeter, L. Calzolai, G. Wilder, and K. Wuthrich. NMR solution structure of the human prion protein. Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 2000. - Vol. 97. - № l.-P. 145-150.

207. Zou W.Q. Acidic pH and detergents enhance in vitro conversion of human brain PrPC to a PrPSc-like form. / W.Q. Zou, N.R. Cashman // J. Biol. Chem.- 2002. Vol. 277. - № 46. - P. 43942-43947.

208. Zou W. Q. Antybody to DNA detectes scrapie but not normal prion protein. / W.Q. Zou, J. Zheng, D.M. Gray, P. Gambetti, S.G. Chen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2004. - Vol. 101.-№5.-P. 1380-1385.