Антимикробная активность металлокомплексных соединений и их влияние на течение инфекционного раневого процесса в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Заикин, Александр Вячеславович

• Заикин, Александр Вячеславович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Заикин, Александр Вячеславович

ГЛАВА 1 ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные особенности микробиологии раневой инфекции.

1.2. Антимикробные лекарственные средства, используемые дляше-' 19 чения гнойных ран.

1.3; Влияние микроэлементов на макроорганизм и микроорганизмы 31 при гнойной инфекции, возможность использования комплексных-соединений;при лечении инфицированных ран.

ГЛАВА 2: МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ: ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Штаммы микроорганизмов и грибов, использованные в работе 47 2.3., Лабораторные животные 50 2.4: Исследование антимикробной активности препаратов in vitro и in 50 vivo '

2.5. Исследование местноанестезирующей активности препаратов

2.6. Изучение высвобождения лекарственных веществ из глицероге- 52 лей методом диализа

2.7. Оценка факторов антиинфекционной защиты организма живот- 53 ных

2.8. Индукция и оценка выраженности иммунного ответа

2.9. Определение токсичности препаратов 55 ТЛО": Моделирование раневого процесса 55 2.11. Статистическая обработка полученных данных

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ И АНТИГРИБКОВОЙ 57 АКТИВНОСТИ НОВЫХ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЦИ1ПСА И ЖЕЛЕЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

3 .1. Получение биокомплексов цинка и железа;

3.2. Антимикробная и антимикозная активность биокомплексов in vi- 62 tro и in vivo .•

3.3. Изучение влияния биокомплексов цинка и железа с производим- 75 ми адамантана, нитроимидазола и нитрофурана на иммуномодули-рущую активность

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА СОСТАВОВ АНТИМИКРОБНЫХ MHO- 84 ГОКОМПОНЕНТНЫХ ПОЛИМЕРНЫХ ГЕЛЕЙ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ СВОЙСТВ

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ПО- 112 ЛИКОМПОНЕНТНОЙ ПОЛИМЕРНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ВОСПАЛЕНИИ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Антимикробная активность металлокомплексных соединений и их влияние на течение инфекционного раневого процесса в эксперименте»

Проблема лечения гнойных ран и раневой инфекции издавна является одной из важнейших в медицине, занимая ведущее место в хирургической заболеваемости (от 35 до 40%) [17, 127]. Обусловлено это изменившимся характером патогенных микроорганизмов, сложностью в выборе лечебной тактики, отсутствием унифицированных антибактериальных средств и методов лечения [43, 134].

Представление о раневом процессе постоянно меняется вместе с развитием медицины, микробиологии и технических наук и постоянно находится в центре пристального внимания клиницистов, приобретая медико-социальное значение [16, 92,111, 135].

Постоянное внимание к этой сложной и актуальной проблеме объясняется также увеличением числа гнойно-воспалительных заболеваний, тяжестью их течения, прогрессирующим возрастанием антибиотикоустойчивых и антибио-тикозависимых микроорганизмов [6, 74]. По данным ВОЗ к 2010 году патология микробной этиологии снова станет главной причиной.смертности людей во всех странах. В значительной степени такой неблагоприятный прогноз связан с ускорением формирования и распространения микробов, устойчивых к существующим препаратам. Одной из главных причин образования подобных штаммов! бактерий является нерациональное использование антимикробных препаратов, обусловленное недостаточными знаниями особенностей существования бактерий, характера раневого микробиоценоза, [16]. Поэтому одной из важных задач остается поиск новых методов и средств местного лечения, обладающих разнонаправленным действием, обеспечивающих антимикробный, иммуномо-дулирующий, противовоспалительный и репаративный эффект [135].

В связи с этим оправданно повысился интерес к химической модификации лекарственных средств, которая может осуществляться различными способами, в том числе комплексообразованием с металлами, так как в организме жизненно важные металлы находятся преимущественно в виде координационных соединений. Для большинства металлов показано разнообразное действие на активность биологических процессов в организме человека, в то же время, сравнительно мало известно о результатах их контакта с бактериями, патогенными для человека. Еще меньше данных о возможных результатах действия комплексных соединений металлов с лекарственными препаратами на бактерии. Однако именно изучение особенности, действия новых комплексных соединений металлов на,бактерии, находящиеся в раневом отделяемом, в присутствии различных факторов внешней среды; может позволить сделать новый шаг к рациональной антимикробной терапии.

Поэтому комплексообразование биометаллов с уже известными1 лекарственными средствами может являться одним; из эффективных и актуальных направлений поиска новых биологически активных соединений, так как оно позволит сочетать в одном веществе различные виды активности, которые к тому же могут взаимно усиливать друг друга, расширять спектр действия; снижать токсичность лекарственных средств.

В-качестве металлов-комплексообразователей нами-были выбраны цинк и железо, учитывая их положительную биологическую роль в жизнедеятельности организма. Необходимо отметить многообразную роль этих метал лов. в окислительно-восстановительных процессах, протекающих в организме, а также иммунологических реакциях, необходимых для процессов роста и кроветворения.

В качестве лиганд для комплексообразования с металлами были выбраны биологически активные вещества производные, адамантана, нитроимидазола и нитрофурана. Из производных адамантана нас заинтересовало новое соединение, синтезированное в Пермском медицинском институте - 1Ч-(Г-Адамантил)-2-гидрокси-4-оксо-4-(п-толил)-кротонамйд, а производные нитроимидазола и нитрофурана часто используются-в практическоймедицине.

Целью работы явилось изучение антимикробной активности новых комплексных соединений цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола, нитрофурана и разработанных на их основе поликомпонентных глице-рогелей, а также их влияния на течение экспериментального раневого процесса.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

1. Изучение биологической, активности новых комплексных соединений цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана, а также оценка возможности их использования в составе антимикробных лекарственных форм.

2. Проведение сравнительного анализа выживаемости различных бактерий в присутствии комплексных соединений металлов.

3. Исследование влияния новых биокомплексов на течение экспериментальной стафилококковой инфекции.

4. Разработка состава и технологии получения антимикробной полимерной лекарственной формы, содержащей новые биокомплексы и предназначенной для подавления гноеродной микрофлоры.

5. Изучение антимикробной активности разработанной поликомпонентной полимерной лекарственной формы и эффективности ее применения при экспериментальном воспалении.

6. Изучение реактивных изменений в органах и тканях при введении биокомплексов цинка и железа при моделировании экспериментального воспаления.

Научная новизна работы. Впервые установлены антимикробные, антигрибковые, иммуномодулирующие свойства разработанных комплексных соединений цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана.

Оценено действие комплексных соединений металлов на выживаемость бактерий.

Показана высокая эффективность металлокомплексных соединений при лечении стафилококковой инфекции в эксперименте.

Результаты применения разработанных полимерных гидрогелей, содержащих биокомплексы цинка и железа, являются научно-экспериментальным обоснованием их использования в практическом здравоохранении при лечении гнойно-воспалительных инфекций кожи.

Практическая значимость работы. Установленная антимикробная, ан-тимикотическая и иммуномодулирующая активность новых биокомплексов позволяет рекомендовать эти соединения для дальнейшего изучения в качестве препаратов выбора при лечении инфекций, вызванных различными видами об-лигатно- и факультативноанаэробных микроорганизмов.

Результаты проведенных исследований позволяют по-новому оценить выживаемость бактерий в естественных условиях раневого процесса в присутствии комплексного соединения.

Предложенные составы многокомпонентных глицерогелей обеспечивают выраженный антимикробный, обезболивающий, ранозаживляющий и регенерирующий эффекты при лечении и профилактике гнойно-воспалительных процессов кожи.

Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе на кафедрах биологической и химической технологии, микробиологии, вирусологии, иммунологии и кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии Курского государственного медицинского университета, на кафедре биомедицинской инженерии Курского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту. Полученные результаты экспериментов in vitro и in vivo демонстрируют повышение антимикробной и антимикотической активности, иммуномодулирующие свойства новых биокомплексов цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана относительно исходных лигандов.

Разработанные составы многокомпонентных полимерных гелей, обеспечивая воздействие на различные стороны патогенеза раневого процесса, позволяют сократить сроки лечения кожных гнойных воспалений в эксперименте в среднем в 1,5 раза.

Апробация работы. Основные положения работы представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2006, 2007 гг.), межвузовских конференциях студентов и молодых ученных

Курского государственного медицинского университета (2006, 2007 гг.), Всероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2006 г.), Международной конференции «Современные медицинские технологии (диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, 2006 г.), межкафедральной конференции Курского государственного университета (2008 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе две из них в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 5-и глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы. Она изложена на 171 страницах компьютерного текста, содержит 44 таблицы и 24 рисунка. Библиографический указатель включает 146 отечественных и 50 зарубежных литературных источников.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Заикин, Александр Вячеславович

выводы

1. Установлено, что новые, комплексные соединения цинка и железа, с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана обладают более выраженным антимикробным действием в отношении тест-штаммов микроорганизмов по сравнению с исходными лигандами.

2. Действие новых комплексных соединений металлов на бактерии имеет индивидуальных характер? и сопровождается усилением микробицидных свойств;

3. Показана высокая» эффективность металлокомплексных соединений при лечении? экспериментальной* стафилококковой] инфекции, заключающаяся, в снижении смертности; животных при« их инфицировании^ 1,3-1,6 раза;

4. Комплексообразование цинка и железа с производными, адамантана, нит-роимидозола и нитрофурана приводит к: усилению стимулирующего действия, на факторы неспецифической резистентности (фагоцитоз, лизоцим, бактерицидная? активность сыворотки крови), гуморального и клеточного* иммунитета1.; Установлена низкая токсичность и отсутствие раздражающего эффекта изучаемых биокомплексов.

5. Разработаны составы многокомпонентных полимерных глицерогелей, содержащих биокомплексы, цинка и железа, и установлена их выраженная антимикробная^ активность, биологическая переносимость, противовоспалительный^ и: обезболивающий эффекты,, возможность обеспечения пролонгированного антимикробного действия, что в результате позволило сократить сроки' лечения* кожных гнойных воспалений в 1,5 раза.

6. Изучены реактивные изменения в тканях при введении новых биокомплексов цинка и железа и установлено их стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденных тканей, заключающиеся • в активизации образования «демаркационной л инии4 очага воспаления« и более г быстром; развитии грануляционной соединительнойгткани по сравнению с контролем.

7. Результаты антимикробной активности полимерных гидрогелей на основе комплексных соединений дают основание рекомендовать их для проведения клинических испытаний с целью дальнейшего использования в качестве лекарственных препаратов выбора для подавления гноеродной микрофлоры.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Не возникает сомнения в том, что антибиотикотерапия была и остается наиболее эффективным методов лечения инфекционно-воспалительных процессов различной этиологии [25,29,36]. Антибиотики наряду с вакцинацией больше чем какие-либо другие достижения медицинской науки повлияли на жизнь человечества. Вместе с тем арсенал антибактериальных средств постоянно расширяется и обновляется в связи с неуклонным ростом резистентности микрофлоры, во многом обусловленным нерациональным их применением. Возможности для открытия новых препаратов практически исчерпаны и основные усилия, по мнению многих авторов, должны быть направлены на повышение эффективности и усовершенствование имеющихся лекарственных средств [5,3,53,55,120].

Кроме того, повысился интерес к использованию препаратов, который учитывали бы индивидуальные особенности организма больного (и в, первую очередь состояние иммунной системы), специфику инфекционного процесса и стадии его развития. Поэтому модификация широко использующихся антимикробных препаратов становится одним из основных вопросов современной медицины [75,67,47].

Особенно привлекательными в этом отношения являются комплексы лекарственных средств с эссенциальными металлами. Это связано с тем, что развитие патологических процессов в организме сопровождается нарушением естественного баланса микроэлементов. Применение же указанных комплексов может восполнить этот дефект и, тем самым, способствовать скорейшему выздоровлению больного. Имеется много примеров не только увеличения антибактериальной активности препаратов после включения в их состав различных биометаллов, но и расширения спектра действия [8,9,18,23,37,48,52].

Эффективность действия введенных в организм микроэлементов, связанных с лекарственными средствами, зависит от нескольких важных факторов -от природы центрального атома, характера и прочности связи металл-лиганд, от исходного содержания вводимых (в виде биокомплексов лекарственных средств) микроэлементов в крови, печени и пораженных органах при конкретной патологии, а также от влияния указанных микроэлементов на рост бактерий, вызывающих эту патологию.

Из анализа литературных данных следует, что, учитывая возможность комплексообразования лекарственных средств in vivo, можно путем целенаправленного синтеза биокомплексов металлов с лекарственными средствами не только снижать их отрицательные побочные действия, но и в ряде случаев значительно усилить фармакологическую активность [75,77,90,96,117]. К тому же, введение в состав комплексов биометаллов, обладающих определенной иммуностимулирующей активностью, позволяет получать соединения с аналогичными свойствами.

Одними из препаратов, применяемых в терапии анаэробных или смешанных анаэробно-аэробных инфекций различной локализации, являются производные нитроимидазола [40,75,85,95,163]. В основном они активны против простейших и анаэробных бактерий, но известно и их антибактериальное действие и в отношении ряда факультативно-анаэробных микроорганизмов. Эти данные, наряду с описанной в литературе способностью эссенциальных металлов расширять спектр действия лигандов при комплексообразовании, явились предпосылками к изучению влияния некоторых, металлов на антимикробную активность нитроимидазола.

Для лечебно-профилактических целей был синтезирован ряд биокомплексов цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитро-фурана и изучена их биологическая активность, прежде всего в отношении тест-штаммов микроорганизмов, рекомендованных ГФ-XI методом диффузии в агар и двухслойной агаровой культурой. В результате проведенных сравнительных исследований было выяснено, что изучаемые биокомплексы обладают антимикробной активностью, но в разной степени.

Наиболее выраженное антимикробное действие было обнаружено у изучаемых биокомплексов цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана в отношении всех исследованных тест-микробов по сравнению с чистыми лигандами, так как биокомплекс цинка с производным адамантана проявлял наиболее выраженное антимикробное действие в отношении S. aureus, В. subtilis, В. cereus, P. aeruginosa и С. albicans. Изучаемые биокомплексы цинка с метронидазолом и фурацилином в отношении S. aureus, В. subtilis, Е. coli и P. aeruginosa также проявили наиболее значимую антимикробную активность, чем лиганды, то есть производные адамантана, метронида-зол и фурацилин.

В случае использования комплексов железа с метронидазолом, производным адамантана и производным нитрофурана наибольшая активность наблюдалась в отношении S. aureus и В. subtilis и была значимо выше во всех остальных случаях по сравнению с лигандами.

Таким образом, исследования антимикробной активности препаратов методом диффузии в агар показали, что комплексообразование цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана позволяет значительно увеличить антимикробную активность и расширить спектр действия биокомплексов по сравнению с исходным лекарственным средством (в отношении целого ряда факультативно-анаэробных возбудителей). Это можно объяснить тем, что в составе биокомплексов биометаллы оказывают существенное синергидное действие, оказывая влияние на специфическую активность лиган-да.

Очень важной характеристикой антибактериальных препаратов является определение минимальной бактерицидной концентрации. Это связано с тем, что увеличение концентрации нитроимидазолов может сопровождаться различными побочными эффектами вследствие способности к кумуляции. Поэтому важно было, чтобы синтезированные биокомплексы по минимальной бактерицидной концентрации, как минимум, не уступали исходному лиганду. Для достижения указанных целей было исследовано антибактериальное действие изучаемых лиганд и их комплексных соединений с металлами методом серийных разведении в жидкой питательной среде.

Установлено, что производные адамантана и нитроимидазола оказывали подавляющее действие в отношении изученных тест-микробов в концентрации от 2,5 мг/мл до 5,0 мг/мл, а производное нитрофурана — в дозе 1,25 — 2,5 мг/мл. Комплексы цинка и железа с лигандами оказывали минимальное подавляющее действие в концентрациях 0,31 - 1,25 мг/мл, т.е. комплексообразование способствовало повышение антимикробной активности in vitro.

Комплексообразование цинка и железа с производными адамантана, нит-роимидазола и нитрофурана повышает их активность, что позволяет, рекомендовать данные комплексные соединения в качестве антимикробных лекарственных средств при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний.

Однако данный вывод требовал подтверждения в опытах на лабораторных животных, поскольку далеко не всегда антимикробное действие препарата, установленное in vitro может совпадать с его активностью в живом организме. Поскольку все исследованные биокомплексы показали выраженную активность в отношении стафилококков, то были проведены исследования протективной активности биокомплексов железами цинка с производными адамантана, нитро-имидозола и нитрофурана в опытах на мышах при внутрибрюшинном их заражении культурой S.aureus. Выживаемость животных при лечении комплексными соединениями железа и цинка с производным адамантана, метронидазолом и фурацилином составила 80-99 % по сравнению с исходными лигандами.

Таким образом, исследование антибактериальной активности комплексных соединений производных адамантана, нитроимидазола и нитрофурана с металами позволяет сделать заключение, что в большинстве случаев включение металлов (железо, цинк) в структуру лекарственного средства приводит к повышению активности исходного лиганда и расширению спектра его действия.

Определение показателей токсичности изучаемых соединений для мышей свидетельствует о том, что как базовые препараты, так и синтезированные на их основе биокомплексы цинка и железа характеризуются сравнительно низкой токсичностью и в соответствии с классификацией токсичности, принятой ВОЗ, относятся к классу малотоксичных веществ; не обладали раздражающим и ал-лергизирующим действием на кожу морских свинок в 0,5%-ных концентрациях, не оказывали отрицательного воздействия на морфологическую структуру кожи и печени. Препараты не проявляли общетоксического действия на экспе-рименталых животных: аппетит, привес, реактивность, подвижность, состояние кожи и шерсти не отличались от контроля.

Исследование антигрибковой активности новых комплексных соединений цинка и железа позволило охарактеризовать их как биологически активные вещества с умеренной антимикотической активностью.

Поскольку одним из непременных условий эффективной терапий инфекционных процессов является адекватный иммунологический ответ, то интересно было исследовать воздействие новых биокомплексов на показатели антиинфекционной защиты организма экспериментальных животных, так как известно, что использованные в комплексах металлы, обладают высокой активностью в процессах иммуногенеза [49,51,54, 68, 72, 126, 142,143].

Фактором антиинфекционной защиты, определяющим дальнейшее развитие инфекционного процесса, является ее неспецифическое звено. Результаты исследования влияния биокомплексов на фагоцитарную активность лейкоцитов показали, что более высокие показатели фагоцитоза, в первую очередь фагоцитарного индекса, отмечены в группах животных, которым вводили биокомплексы цинка и железа, так как фагоцитарный индекс значительно превышал показатели как контрольной группы, которым вводили физиологический раствор натрия хлорида, так и групп, которым вводили лиганды (производные адамантана, нитроимидазола и нитрофурана).

Активность кислородзависимых бактерицидных систем нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) также свидетельствует о стимулирующем влиянии исследованных биокомплексов.

Использование биокомплексов оказывало выраженный стимулирующий эффект на кислороднезависимые бактерицидные системы нейтрофилов, определяемые в тесте на лизосомальные катионные белки. Стимуляция бактерицидных систем нейтрофилов послужила, по нашему мнению, причиной усиления завершенности фагоцитоза под действием биокомплексов.

Изучение иммуномодулирующих свойств новых биокомплексов при иммунизации крыс эритроцитами барана показало, что введение изучаемых ли-ганд существенно не влияло на формирование гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана. Об этом свидетельствовал тот факт, что количество АОК в селезенке крыс, получавших физиологический раствор в твине и изучаемые лиганды, существенно не отличались друг от друга.

Введение же биокомплексов цинка и железа активизировало иммуномо-дулирующее действие лиганда на формирование гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Об этом свидетельствовал факт повышения по сравнению с контролем количества АОК в 1,5-2 раза.

Таким образом, установлено, что изучаемые биокомплексы повышают фагоцитарную активность нейтрофилов и стимулируют лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови крыс, иммунизированных эритроцитами, барана. Кроме того, на основании полученных данных можно констатировать факт более выраженного по сравнению с лигандами иммуномодулирую-щего действия биокомплексов с металлами на гуморальное звено иммунитета.

Выявленная высокая специфическая активность и эффективность действия комплексов, в частности, комплексного соединения цинка с производным 5-нитроимидазола, возможно, объясняется проявлением аналогии строения биокомплекса (где металл связан с 5-нитроимидазольными остатками через атом азота в положении 3 и молекулой воды) и активного центра важнейшего фермента - карбоангидразы (где, в частности, цинк связан с тремя имидазоль-ными остатками гистидина и одной молекулой воды).

Учитывая антибактериальную активность биокомплексов и отсутствие раздражающего эффекта целесообразно было провести испытания биологической активности этих соединений при экспериментальной гнойной ране. Местное применение лекарственных средств при очаговых поражениях, к которым относятся гнойные раны, является наиболее предпочтительным, поскольку позволяет создать максимальные концентрации их в ране и снизить общее отрицательное воздействие на организм больного [7,134,135,125,129]. Эффективность местной лекарственной терапии определяется суммарным действием целого ряда факторов, среди которых важное значение имеет терапевтическая активность используемых лекарственных средств [87, 91,97, 114, 116]. Достижения современной медицинской науки позволили сформулировать основные требования к лекарственным средствам для лечения гнойных ран. Основное из этих требований состоит в том, что применяемый препарат должен способствовать скорейшему заживлению гнойной раны [112,115,127,128,166,167]. Однако реализовать это требование на практике оказывается далеко не просто. Успех лечения определяется тем, насколько примененный лекарственный препарат будет соответствовать биологическим процессам, протекающим в ране в этот период.

Необходимость в интенсивном местном лечении ран после хирургической обработки диктуется тем фактом, что радикальная санация раны хирургическим путем практически невозможна. Успех лечения определяется одновременным и комплексным действием препарата как на микробную флору так и на основные факторы патогенеза раневого процесса, определяющие сущность каждой его фазы. Использование лекарственных препаратов, применяемых на рану после ее адекватной хирургической обработки должны подавить остатки микробной флоры и ликвидировать причины, обуславливающие прогрессиро-вание гнойного воспаления - ацидоз, гипергидратацию, нарушения микроциркуляции и т.д.

Наиболее часто для этих целей применяются антимикробные мази. На основании анализа литературных данных, посвященных разработкам мягких лекарственных форм для наружного применения, основной антимикробный компонент чаще всего используется в диапазоне концентраций от 0,1 до 3% [134,138,173]. При разработке мягкой лекарственной формы учитывалась природа носителя, так как она имеет большое влияние на терапевтическую активность лекарственных веществ в мазях [129]. В связи с этим выбор основы для мягкой лекарственной формы осуществлялся с учетом требований современной медицины и, особенно, с учетом такого показателя как способность основ к высвобождению действующих веществ [80,144,145,164,165].

Поиск в области разработки новых аппликационных лекарственных форм и составов для лечения воспалительных заболеваний актуален, а использование для этих целей гидрофильных основ может обеспечить создание необходимой и удобной, в каждом конкретном случае, консистенции хорошо фиксирующейся на поверхности, что будет способствовать локализации препарата на определенном участке. Большой интерес для разработки иммобилизированных лекарственных форм для лечения ран представляют производные целлюлозы, так как они имеют ряд преимуществ: лекарственные вещества хорошо и равномерно распределяются в их растворах; не обладают аллергизирующими свойствами; более устойчивы к действию микроорганизмов; способствуют лучшему контактированию лекарственных веществ с пораженным участком и т.д.

Мягкие лекарственные формы готовили на общеизвестных и широко используемых в производстве основах гидрофильной природы: 5% глицерогели метилцеллюлозы (МЦ), натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ) и оксиметилцеллюлозы (ОМЦ). Антимикробную активность мягких лекарственных форм исследовали вначале в опытах in vitro методом диффузии в агар.

Установлено, что использование гидрофильных основ в виде 5% глицеро-гелей не препятствует проявлению антимикробной активности как лиганд, так и их биокомплексов в отношении изученных тест-микроорганизмов. Диаметр зоны задержки роста тест-микробов, для глицерогелей содержащих (0,5 — 1,0%) биокомплексы цинка и железа значимо превышал зону угнетения тест-штаммов в случае использования полимерных гелей, содержащих исходные лиганды.

Поскольку при разработке мягкой лекарственной формы необходимо учитывать такой важный показатель, как способность основы к высвобождению действующего вещества, то его оценку проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану. Установлено, что изучаемые основы не препятствовали высвобождению активных компонентов, о чем свидетельствовало постоянное нарастание концентрации до 89,5±0,68% изучаемых веществ к 4-5 часам эксперимента и до 90±0,95% к 5-6 часам эксперимента.

Кроме того, при лечении ран одной из главных задач является проблема устранения болевого синдрома. Довольно часто для этих целей используется тримекаин. Принимая во внимание положительные стороны данного анестетика (по силе и продолжительности анестезирующего эффекта) тримекаин в 3-5 раз превосходит новокаин, сохраняет свою активность в кислой среде, которой характеризуется гнойная рана, и, при сочетании с рядом лекарственных веществ, усиливает их активность, вводили его в состав разрабатываемой сложной мази в концентрации 3%.

Показано, что введение в состав глицерогелей тримекаина (3%) также не оказывало отрицательного действия на высвобождение активных компонентов и не снижало их антимикробную активность.

Наибольшие показатели силы (индекс Ренье 1300±5,6 усл.ед.) и продолжительности анестезии (98,15±2,17 мин) имеют место при одновременном сочетании в гелях тримекаина, производного нитроимидозола и его биокомплекса с цинком, а время наступления анестезии было во всех случаях одинаково.

Таким образом, введение тримекаина в состав многокомпонентных глицерогелей содержащих биокомплексы, обеспечивает ценные качества, необходимые в терапии гнойно-воспалительных процессов.

Учитывая то, что применяемые для лечения ран препараты должны воздействовать на все составляющие инфекционной раны мы считали целесообразным включить в их состав общепринятый активатор чрезкожного всасывания - димексид, который к тому же обладает также антимикробной и противовоспалительной активностью. Показано, что увеличение концентрации димек-сида до 15% способствует увеличению активных компонентов в диализате, что позволяет характеризовать изучаемые глицерогели как пролонгированные лекарственные формы.

Другим активным компонентом разрабатываемых глицерогелей был выбран хлоргексидин, применяемый как антисептик для инфицированных ран и ожогов, а в качестве пластификатора - глицерин. Установлено, что антимикробная активность многокомпонентных глицерогелей достоверно увеличивается при включении в их состав хлоргексидина, димексида и тримекаина по сравнению с контролем и глицерогелями, содержащими только лиганды.

В: результате проведения комплексного исследования разработаны составы и технология получения многокомпонентных полимерных лекарственных форм, способных обеспечить разнонаправленное действие в терапии местных гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек.

Учитывая активность биокомплексов в- отношении &аигеиэ и тот факт, что этот микроорганизм часто выделяется из ран исследовние эффективности применения многокомпонентных полимерных лекарственных форм для лечения раневой инфекции; было произведено на модели полнослойной стафилококковой раны, создаваемойу крыс линии Вистар.

Применение дляшечения* экспериментальных животных глицерогелей; содержащих биокомплексы цинка и железа, позволило повысить эффективность лечения гнойных раневых процессов стафилококковой этиологии.

По данным гистологических исследований использование разработанных многокомпонентных глицерогелей, содержащих биокомплексы, быстро купировало воспалительный процесс, оказывало стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденных тканей, что проявлялось в активации образования демаркационной линии очага септического воспаления, более быстром развитии грануляционной соединительной ткани по< сравнению с; контролем.

Введение в состав гелей дополнительно тримекаина^ хлоргексидина, димексида и глицерина усиливало их антимикробную активность и ранозажив-ляющее действие, а также позволило сократить сроки лечения с 14 суток до 1012 суток.

Таким образом, проведение исследования показали, что введение в состав глицерогелей биокомплексов цинка, и железа оказывает существенное влияние на антимикробную активность глицерогелей приводя как к ее увеличению, так и к расширению спектра действия. Поскольку известно, что биокомплексы металлов с лекарственными препаратами обычно выполняют транспортную и аккумулирующую роль, а также выступают как функционирующие модели активного центра ферментных систем, то усиление активности изучаемых лиганд может быть объяснено именно присутствием данных металлов.

Эффективность многокомпонентного глицерогеля, очевидно, основана на сочетании антимикробного и антисептического вещества, местного анестетика, димексида и глицерина, оказывающих влияние на иммунную систему, регенерацию тканей и гидрофильной основы.

Синергичные и антагонистические взаимоотношения биометаллов являются важными критериями, определяющими специфическую активность биоi комплексов in vivo. Испытания новых биокомплексов на животных позволило установить не только их выраженную протективную активность, но и способность стимулировать факторы иммунологической защиты организма.

Эффективность действия координационных соединений цинка и железа с метронидазолом при экспериментальной гнойной ране оценивалась по ослаблению экссудативно-инфильтративных явлений в коже и прилегающих мышцах, активизированию формирования грануляционной ткани, ускорению очищения раны от струпа по сравнению с моделью и использованием чистого мет-ронидазола.

• Новый методический прием коррекции нарушенного метало-лигандного гомеостаза организма при патологических состояниях, заключающийся в применении новых синтезированных координационных соединений металлов, позволит расширить область их применения в лечебных и лечебно-профилактических мероприятиях, а также подтверждает необходимость разработки комплекса тонких и аналитически значимых методов, включающих исследование среды обитания и позволяющих выявлять ранние изменения в организме.

Таким образом, завершенное на данном этапе исследование, последующие теоретические и методические обобщения, систематизации полученных новых результатов и в дальнейшем буду способствовать реализации цели — укрепления здоровья и снижения заболеваемости.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Заикин, Александр Вячеславович, 2008 год

1. Абаев, Ю.К. Динамика устойчивости к антисептикам возбудителей гной-но-восполительных заболеваний мягких тканей у дете1 / Ю.К. Абаев, A.A. Адарченко // Вестник хирургии. 1996. - Т. 155. - № 4. - С. 35-36.

2. Аванасян, Л.А. О взаимоотношении иммунного и адаптивного ответа / Л.А. Аванасян, Т.К. Давтян // Успехи современной биологии 2001. - Т. 121.-№3.-С. 275-286.

3. Автина, Н.В. Разработка и исследование лекарственных препаратов с метронидазолом для лечения воспалительных заболеваний пародон-та:Автореферат.дис.канд.наук. / Н.В. Автина; Курск,-2004.-18с.

4. Адарченко A.A., Красильников А.П., Собещук О.П. Сравнительное исследование антибиотиков и антисептиков в отношении S. aureus // Антибиотики и химиотерапия. 1991. - № 2. - С. 21-24.

5. Акбаров, А.Б. Бионеорганическая химия металлов, аминокислот и биокомплексов / А.Б. Акбаров, Ю.Я. Харитонов. Ташкент: Фан, 1994.-324с.

6. Аспераза энзиматический препарат для очищения ран / В.Т. Чернобой, П.И. Кабачный, В.Ф. Рудюк и др. // Хим.-фарм. журн. - 1991. - т. 25, № 1.-С.86-87.

7. Афанасьев, Ю.И. Роль микроэлементов в нарушении и коррекции металлолигандного гомеостаза / Ю.И. Афанасьев, Н.И.Калетина, Ю.Я. Харитонов, Л.П. Лазурина // Вестник РАМН, 1995. №10. - с. 44-48.

8. Афзалетдинова, Н.Г. Получение, ранозаживляющее и противоязвенное действие комплекса хитозина с родием (III) / Н.Г. Афзалетдинова, Ю.И. Муринов, И.Р. Муллагалиев // Хим-фарм журнал.-2000.-Т34.-№5.-С.26-27.

9. Ю.Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф. Антимикробные полимеры. СПб.: крат, 1993.-264 с.

10. Бала, Ю.И. О некоторых компенсаторных механизмах нарушения обмена микроэлементов в условиях патологии / Ю.И.Бала, Г.И. Аксенов //Терапевт, арх. -1970. N4,- С.81-84.

11. Бала, Ю.М. Микроэлементы в клинике внутренних болезней / Ю.М.Бала,

12. B.М. Лифшиц. Воронеж, 1973.-139 с.

13. Балебанова, Е.В. Влияние металлокомплексов 1-замещенных 3,4-дигидроизохинолинов на систему гомеостаза7 Е.В. Балебанова, В.В. Давыдов, А.Н. Зорин//Хим.-фарм.журнал.- 1996.-№8.-С.17-19.

14. Бахина, Т.С. Содержание микроэлементов (цинк, медь, марганец, никель, свинец) в эритроцитах, плазме и цельной кровибольных хроническим панкреатитом: Автореф. дис. канд.мед.наук / Т.С. Бахина; Омск, -1972.-17 с.

15. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький,- М.: Наука, 1963.-177 с.

16. Быков, В.И. Комплексный подход к изучению механизмов действия противомик-робных и противовирусных средств / В.А. Дубинская, Л.В. Ркбров, М.Ф. Минеева,

17. C.Г. Скуридин, Ю.М. Евдокимов // Хим-фарм журнал 2008. - Т. 42. - № 4. - С. 3.

18. Блатун, Л.А. Флегмоны и абсцессы современные возможности лечения Л.А. Блатун // Лечащий врач. - 2002. - №1-2. - С.30-40.

19. Бурачева, С.А. Синтез и противомикробная активность координационных соединений меди с тиосемикарбазонами замещенных салицилового альдегида / С.А. Бурачева, И. Прискарь, В.И. Цапилов // Химико-фармацевтический журнал 2005. -Т. 6.-№39.-С. 30-33.

20. Вайчуненас, В. Разработкаполимерных пленок, содержащих иммобилизованную протеазу и диоксидин / В. Вайчуненас, Т. Пуджюнене, В. Якуми // Химико-фармацевтический журнал 2005. - Т. 1. - № 1. - С. 24-28.

21. Виксман, М.Е. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия / М.Е.

22. Виксман, А.Н. Маянский. Казань, 1979. - 15 с.

23. Вирник,А.Д. Декстран и его производные/ А.Д.Вирник, К.П.Хомякова, И.Ф.Скокова//Успехи химию.- Х.-19975.-вып.7.-С1280- 1307ю

24. Воронков, М.Г. Антибактериальные и гемостатические свойства серебряных солей полиакриловой кислоты/М.Г.Воронков, Л.М. Антоник, A.C. Коган // Хим.-фарм.журнал.-2002.-Т.36.-№2.-С.27-29.

25. Гаркави, A.B. Раны и раневая инфекция. Ч. I. Раны мягких тканей и их лечение при катастрофах / A.B. Гаркави, Е.Т. Елисеев // Мед. Помощь2000.-№ 4.-С. 25-32.

26. Гаркави, A.B. Раны и раневая инфекция. Ч. II. Раневая инфекция, ее профилактика и лечение. / A.B. Гаркави, Е.Т. Елисеев // Мед. помощь. 2000. - № 5. - С. 3-7.

27. Гидроколлоидные покрытия новое поколение средств для лечения ожогов / Г.Я. Кивман, Ю.В. Ляшенко, Э.З. Рабинович, Л.И. Флейдерман // Хим-фарм. журн. - 1994. - т. 28, № 9. - С. 21-27.

28. Гипохлорит натрия в лечении гнойных ран / Петросян Э.А., Сергиенко В.И, Кулаев Г.К. и др. // Вест, хирургии им. Грекова. 1991. - № 1. - С. 40-43.

29. Глянцев, С.П. Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов, М., 1995.- С.28-29.

30. Госгищев, В.К. Оперативная гнойная хирургия / В.К. Гостищев М.: Медицина 19%. 314 с.

31. Государственная фармакопея СССР. X изд. - М.: Медицина, 1968. -1076 с.

32. Государственная фармакопея СССР. XI изд. - М.: Медицина, вып. 2. — 1990.-397 с.

33. Говарикер, В.Р. Полимеры / В.Р. Говарикер, Н.В. Висванатхан М.: Наука.- 1990.-396 с.

34. Гусейнов, А.З. Влияние иммунотерапии на пато- и морфогенез гнойного воспаления мягких тканей: Автореф. дис. канд. / А.З. Гусейнов;-М., 1990.24 с.

35. Даценко, Б.М. Методические рекомендации по экспериментальному (доклинкческому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран / Б.М. Даценко, Н.Ф.1 Калиниченко, В.К. Лепехин и др. -М., 1989.-45 с.

36. Даценко, Б.М. Теория и практика местного лечения гнойных ран / Б.М. Даценко Киев, Здоровье. — 1995. - 382 с.

37. Диланян, Э.Р. Синтез и противоопухолевая активность новых бистиосе-микарбазонов метилглиоксаля, глюказона и их медных комплексов / Э.Р. Диланян, Т.Р. Овсепян, Г.М. Степанян // Хим-фарм. журнал 2000 -Т.34-№8.-С. 16-17.

38. Динамика некоторых показателей иммунитета у больных гнойно-септическими заболеваниями / О.В. Смирнова, Г.К. Вандяева, И.Б. Иси-ченко и др. // Хирургия.-1980.-N 11.-С.З0-36.

39. Дорофейчук, ВТ. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г. Дорофейчук // Лаб.дело. 1968. - №1. - С.28-30.

40. Блинов, Н.П. Современные лекарственные препараты / Н.П Блинов // М.:Питер.-2003.-1102с.41.3емсков, A.M. Дополнительные аспекты оценки иммунного статуса / A.M. Земсков, В.М. Земсков // Клинич. лаб. диагностика. 1994. - № 5. -С.91-98.

41. Земсков, A.M. Методы оценки эффективности иммунокоррекции / A.M.

42. Зурочка, A.B. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и репера-тивных реакциях поврежденной ткани / A.B. Зурочка, И.И. Долгушин, A.B. Чука-чев//ВесшикРАМН-2000. № 2.-С. 14-18.

43. Изучение фунгицидной активности некоторых эфирных масел / Н.И. Ткачева, И.А. Муравьев, H.H. Николаевский, H.H. Синченко // Фармация. -1989.-№3.-С. 72-73.

44. Иманалиев, А.Б. Комплексное лечение длительно не заживающих ран: Автореферат дис. канд. мед. наук / А. Б.Иманалиев. Фрунзе, 1990- 23 с.

45. Исмаилова, Г.М. Получение комплексных соединений Mg(II) с никотиновой кислотой и никодином / Г.М. Исмаилова, И.М. Иминова, A.A. Ту-лаганов // Хим-фарм. журнал.- №36.- №6.- 2002.- С. 42- 43.

46. Исмаилов, Т.А. Клеточные механизмы иммуномодулирующего действия некоторых микроэлементов / Т.А. Исмаилов, Дж.Г. Тагдиси, Я.Д. Маме-дов, С.Д. Алиев // Экспериментальная и клиническая иммунология и аллергология. Чебоксары, 1985.-С.57-60.

47. Казанская, Н.Ф. Ферменты и белковые препараты в медицине / Н.Ф Казанская, Н.И. Ларионова, В.П. Толчилин // Биотехнология.-М.:Наука.-1984.-С113-125.

48. Казаков, Э.Ю. Влияние комплексных соединений кобальта на некоторыебиохимические и иммунологические показатели организма в возрастном аспекте: Автореф. дис. канд. / Э. Ю. Казаков;.-Ташкент, 1975.-19 с.

49. Казаченко, A.C. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений золота с глицином, гистидином и триптофаном / А.С.Казаченко, Е.В.Леглер, О.В.Перьянова // Хим-фарм. журнал 1999-Т.З.-№9.-С.11-13.

50. Казаченко, A.C. Синтез и Антимикробная активность комплексных соединений серебра с гистидином и триптофаном / A.C. Казаченко, Е.В. Леглер, О.В. Перьянова // Хим.-фарм.журн.-2000.-Т.34.-№5.-С.34-35.

51. Калетина, Н.И. N- гликозиламины и микроэлементы / Н.И. Калетина.-Ереван: Изд. АН Арм. ССР.-1988.-145 с.

52. Канорский, И.Д. Использование физических методов лечения в лечении гнойных ран / И.Д. Канорский, К.В. Липатов, М.А. Сопромадзе // Хирургия 2001. № Ю. - С. 56-59.

53. Карпенко, В.В. Обезболивание животных в эксперименте: Метод, рек.-М.-1985.-53 с.

54. Каюми, А.К. Экспериментальное обоснование лечения гнойных ран препаратом меди /А.К. Каюми // Клинич. хирургия. 1979. - № 6. - С. 24-27.

55. Коломийцева, М.Г., Габович Р.Д. Микроэлементы в медицине / М.Г. Ко-ломийцева, Р.Д. Габович.- М.: Медицина, 1970.-286 с.

56. Кононеко, H.B. Избранные вопросы хирургической инфекции / Н.В. Ко-ноненков, A.M. Чухраев, O.K. Кудрявцева Курск. - 2000: - 224 с.

57. Кортеев, А.И. Биоэлементы и патология человека / А.И. Кортеев, Г.И. Донцов, А. П. Ляшева. Свердловск, 1972.-301 с.

58. Костюченок, Б.М. Лечение гнойных ран в управляемой абактериальной среде / Б.М. Костюченок»// Хирургия 1986: - № 12. - С. 148-152.

59. Колкер, И.И. Антибактериальный эффект препаратов для местного лечения ожоговых и гнойных ран / И.И. Колкер, М.И. Кузин, А.Ю. Варес //

60. Хирургия 1987.-№ 1.-С. 14-18.

61. Красильников, А.П. Современные проблемы антисептики // А.П. Красильников, A.A. Адарченко, Ю.К. Абаев // Здравоохранение Белоруссии. -1990. № 11'.- С. 52-58.

62. Красильников, А.П: Справочник по асептике / А.П. Красильников í -Минск: Высшая школа. 1995. — 367 с.

63. Крисс, Е.Е. Координационные соединения, металлов в медицине / Е.Е. Крисс, И.И. Волченкова, A.C. Григорьева // Киев: Наук.думка, 1986. -216с.

64. Кудрин, A.B. Цинк и иммунный ответ / A.B. Кудрин // Южнороссийский медицинский журнал, 1998. №4. - с. 42-46.

65. Кузин, М.И. Лечение гнойных ран и ожогов в условиях регулируемой среды / М.И. Кузин // Вестник АМН СССР 1979. - № 3. - С. 59-61.

66. Курбангалеев СМ. Гнойная инфекция в хирургии. М.: Медицина, 1985.272 с.

67. Кутузова, И.В. Сравнительная оценка высвобождения препарата полиненасыщенных жирных кислот из мазей в опытах in- vitro и* in vivo / И.В. Кутузова, Н.К.Бабанова, А.И. Тенцова и др. // Фармация.-1990.-№1.-С. 1822.

68. Куфлина, С.А. Эвтаназия экспериментальных животных: Метод.рек. по выведению животных из эксперимента.-М.-1985.-9 с.

69. Лабинская, A.C. Микробиология с техникой микробиологических исследований / A.C. Лабинская. -М.: Медицина, 1978.-391 с.

70. Лазарева, A.B. Микробный спектр возбудителей аппендикулярного перитонита / A.B. Лзарева, O.A. Пономаренко // Клиническая микробиология и Антимикробная химиотерапия 2008. - Т. 10. - № 2. - С. 24-25.

71. Лазурина, Л.П. Роль комплексных соединений металлов в становлении металло-лигандного гомеостаза и донозологический диагностике: Авто-реф. дис.д.б.н. / Л.П. Лазурина; МД995. - 43с.

72. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М., 1980. - 293 с.

73. Леглер, Е.В. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений серебра с аргинином и глутаминовой кислотой / Е.В. Леглер, A.C. Казаченко, В.И. Казбанов // Хим-фарм.журнал.-2001.- Т.35—№9-С.35— 36.

74. Лекарственные формы. Термины и определения // Эконом, вестн. фармации.- 2000. №4. - С. 44-47.

75. Либедьков, Е.В. Осложнение лазерной терапии / Е.В. Либедьков, П.И. Толстых, Д.В. Макаров // Военно-медицинский журнал 2001. - № 1. — С. 33.

76. Лившиц B.C. Полимерные покрытия на раны и ожоги: (обзор) // Хим.-фарм. журн. 1988. - т. 22, № 7. - С. 790-798.

77. Мальберг, К. Метод локального гемолиза / К. Мальберг, Э. Зигль // Иммунологические методы: Пер.с нем. Под.ред.Г.Фремеля.-М.:Медицина.-1987.-С57-72.

78. Матусис, З.Е. К методике определения индекса завершенности фагоцитоза / З.Е. Матусис, С.И. Пылаева // Лаб.дело. 1972. - N4. - С.237-240.

79. Максименко, A.B. Модифицированные препараты супероксиддисмутазы и катала-зы для защиты сердечно-сосудистой системы и легких / А.В Максименко // Успехисовременной биологии.-1993.-Т113.-№3.-С.351-365

80. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т / М.Д. Машковский. -М.:000 «Издательство НоваяВолна», 2000: 540 с.

81. Медведев, А.Н-. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза / А.Н. Медведев, В.В. Чаленко // Лаб. дело. 1991. - №2. - С.19-20.

82. Мелехов. IIÍА., Мирошин С.И., Мелехов С.П. Сравнительная-характеристика микробоцидной активности, некоторых традиционных и современных антисептиков, применяемых вхирургии// Хирургия. 1990. - № 6. -С.39-41.

83. Мелихов, А:П. Применение раннихшвов в комплексном?лечении гнойных ран' / А.П. Мелихов, Ю. М. Стайко, G.KDi Смехнов // Вестник хирургии им. И.И1 Грекова 2003. - Т. 162. - № 3. - С. 81-84.

84. Назаренко, Г.И*. Рана. Повязка. Больной. Руководство* для' врачей и медсестер // Г.И. Назаренко, И.Ю. Сугурова, С.П. Глянцев. М.: Медицина, 2002. - 472 с.

85. Николаенко-Л.В., Заугольников B.C. Изменение содержания некоторых эссенциальных элементов* при различных формах перитонита // Вятский медицинский вестник, 1999. №4i - с.19-21.

86. Ноздрюхина, Л.Р., Гринкевич Н.И.- Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции / ЛгР. Наздрюхина, Н.И. Гринкевич. -М: Наука, 1980.-278 с.950 заживлении ран / В.Г. Петров, С.Е. Козлов, Г.А. Чиженков, А.И. Горин

87. Опыт лечения гнойных ран с использованием стабилизированного в ди-мексиде нитрата серебра / П.Р. Пульняшенко, Н.Б. Безлюда, Г.М. Ларионов и др. // Клинич. хирургия. 1990. - № 1. - С. 35-36.

88. Осрбенности хирургической инфекции мягких тканей / С.Б. Фадеев, О.И. Чернова, С.Б. Киргизова // Хирургия 2001. - № 7. - С. 42-44.

89. Павлов, П.А. Синтез и антимикробная активность некоторых нитрофу-рансодержащих имидазотриазолов / П.А. Павлов, Н.Ю. Басова, П.П. Павлов // Хим.-фарм. журнал. 1998. №7.-С.33-34.

90. Павлов, П.А. Синтез и антимикробная активность некоторых нитрофу-рансодержащих азометинов / П.А. Павлов, Н.Ю. Басова, П.П. Павлов // Хим. журнал. -2000.-Т34.-№6.-С.24-25.

91. Падейская, Е.М. Диоксидин 25 лет в клинической практике. Значение и место среди других антибактериальных средств / E.H. Падейская // В мире лекарств 1999. - № 2(4). - С. 42-46.

92. Парахонский, А.П. Взаимосвязь иммунологии и хирургии / А.П. Пара-хонский // Фундаментальные исследования. 2004. - №4. - С.39-40.

93. Перцев, И.М. Местное лечение гнойных ран / И.М. Перцев, Б.М. Да-ценко, Б.М. Костюченок // Хирургия 1984. - № 11. - С. 136-141.

94. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1997. - 415 с.

95. Пигаревский, В.Е. Лизосомально-катионный тест. Метод, рек. / В.Е. Пигаревский // НИИЭМ АМН СССР. - М., 1979. - 57 с.

96. Платэ, H.A. Полимерные носители прорыв в фармакологии / H.A. Платэ, Л.И. Валуев, И.Л. Валуев // Наука в России. - 1998. - №1. - С. 2125.

97. Плохинский, H.A. Математические методы в биологии / Н.А.Плохинский. М., 1978. - 342 с.

98. Подымов, В.К. Молекулярные основы лигандной патологии5 и хелатной фармакологии/ В.К. Подымов, С.П. Гладких, JI.A. Пирузян // Хим.-фарм. журн.-1982.-N1.-G. 9-14.

99. Протеолитические ферменты в гнойной хирургии / В.И. Стручков, Д.В. Григорян, В.К. Гостищев и др. М;: Медицина, 1970. - 408 с.

100. Пылаева, С.И. Современные микробиологические и эпидемиологические особенности ожоговой*инфекции / С.И. Пылаева, H.A. Гординская , H.A. Кувакина // Клиническая микробиология и Антимикробная химиотерапия 2008. - Т. 10. - № 2. - С. 33-34.

101. Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей / Под ред. М.И. Кузина, Б.М; Коспоченок: 2 изд., перераб: и доп. М.: Медицина. - 1990.592 с.

102. Регистр лекарственных средств России. Изд. 6-е, перераб. и дополн. / Гл. ред. Ю.Ф. Крылов. М.: "РЛС-2000", 1998: - 1072 с.

103. Решетов, И.В. Пленочное покрытие, содержащие хлоргекседин и лизоцим, для, лечения ран / ИВ. Решетов, Т.Н. Юданова, О.В. Маторин, Д.С. Морозов // Хим.-фарм журнал.-2004:-Т.З 8.-№7.-С.41-43.

104. Розинова, Л.Т. Метропол новый препарат пролонгированного действия для лечения анаэробных инфекций / J1.T. Розинова, Э.Э. Кузнецова,

105. B.Г. Горохова // Химико-фармацевтический журнал — 2002. Т. 36. - № 2. - С. 54-56.

106. Рычков, Ю.Г. Физиологическая генетика человека в проблеме заживления ран / Ю.Г.Рычков, Ю.Г.Шапошников, Е.А.Решетников и др. М.: Наука, 1985. - 183 с.

107. Савадян, Э.Ш. Использование препаратов серебра в хирургии и травматологии. Обзор зарубеж. литер. / Э.Ш. Савадян // Хирургия.-1989.-Ы8.1. C. 135-139.

108. Самусь, H.Mi Синтез и противомикробная активность координационных соединений Зс1-элементов с некоторыми гидразонами, полученными на основе 5-нитро-2-фуральдегида /Н.М. Самусь, В.И. Цапков, С.А. Бура-чева и др. // Хим.-фарм. журнал.- 1999.-№10.С.41-44.

109. Саркисов, Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза / Д.С. Сар-кисов. М.: Медицина, 1977.-351 с.

110. Саркисов, Д.С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / Д.С. Саркисов. М.: Медицина, 1987.- 442 с.

111. Сафронова, JI.A. Синтез и антибактериальная активность комплексов палладия и кобальта с замещенными фуранами / JI.A. Сафронова, Т.К. Корниенко, Т.М. Шуб, А.Д. Шебалдова // Хим.-фарм журнал. -2000.-Т.34.- №9.-С.22-23.

112. Светухин, A.M. клинико-лабораторная эффективность современных мазей на полиэтиленгликолевой сонове при лечении гнойных ран / A.M. Светухин, J1.A. Блатун, A.A. Пальцын // Антибиотки и химиотерапия -1999. Т. 44. - № 7. - С. 25-31.

113. Сигал В.Л., Мысак O.A. О возможных физико-химических критериях клинического выбора аппликационного материала для лечения ран и ожогов // Хим.-фарм. журн. 1992. - т. 26, № 4. - С. 85-88.

114. Сливкин, А.И. Физико-химические и биологические методы оценки качества лекарственных средств / А.И. Сливкин, В.Ф. Семенев, Е.А. Су-ховерхова. Воронеж.: Изд-во Воронежского государственного университета, 1999.-366с.

115. Смирнова, О.В. Динамика некоторых показателей иммунитета у больных гнойно-септическими заболеваниями / О.В. Смирнова, Т.К. Вандяе-ва, И.Б. Исиченко и др. // Хирургия.-1980.-N 11.-С.30-36.

116. Современные йодофоры в лечение и профилактике гнойно-воспалительных процессов в ранах / Л. Блатун, А. Светухин, В. Митки и др.//Врач.-2000.-№11.-С 22-25.

117. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия. Метод, рек. / Сост.

118. М.Е. Виксман, А.Н. Маянский. Казань, 1979. - 14 с.

119. Страчунский, JI.C. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / JI.C. Страчунский, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова Смоленск: МАКМАК. - 2007. - 464 с.

120. Стручков, В.И: Хирургическая инфекция: руководство для врачей / В.И. Стручков, В.К. Гостищев, Ю.В. Стручков / АМН СССР. М.: Медицина. - 1991.-560с.

121. Тенцова, А.И. Биологическая доступность и методы ее определения / А.И. Тенцова, Т.С. Киселева// Фармация.-1980.-С. 10-14

122. Тенцова, А.И. Полимеры в фармации / А.И. Тенцова, М.Т. Алюшин -М.:Медицина. 1985. - 256 с.

123. Тенцова, А.И. Современные аспекты исследования производства мазей / А.И. Тенцова, В.М. Грецкий М.: Медицина. - 1980.,- 192 с.

124. Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейд-лин. СПб.: Наука, 2000. - Т. 1. - 231 с.

125. Трапков, В.А. Синтез и противоязвенная активность медь- и цинксо-держащих кумариновых антиоксидантов / В.А. Трапков, Э.А. Парфенов, Л.Д. Смирнов // Хим.-фарм.журнал,- 1996.-№7.-С.20-21.

126. Ушаков, Р.В. Местное антимикробное лечение в стоматологии. /Р.В. Ушаков, В.Н. Царев. М.:Медицинское информационное агенство. -2004.- 136 с.

127. Чадаев, А.П. Местное медикаментозное лечение инфицированных ран / А.П. Чадаев, А.Д. Кмишаливили, В.Ф. Козлов и др. // Российский медицинский журнал 2001. - № 4. - С. 12-15.

128. Черешнев, В.А. Иммунные механизмы воспаления / В.А. Черешнев // Наука в России. 2002. - №4. - С.30-38.

129. Черномордик, А.Б. Применение антибиотиков и других химио-терапевтических препаратов / А.Б. Черномордик. Киев: Здоровье, 1988.-320с.

130. Чуднова, В.М.' Полимерные гелеобразующие материалы для биомедицинских целей. / В.М. Чуднова, Л.И. Шальнова, Е.А. Трофимова // АСЗ624449/2305.SU. 1134581 .С0833/08.Ф61К47/ 48юз22.07.83.от15.02.85.бюл.№ 2.

131. Шехтер, А.Б. Комбинированная озоно-ультрозвуковая терапия в лечении гнойных ран / А.Б. Шехтер, К.В. Липатов, М.А. Сопромадзе // Хирур-гифя 2002. - № 1. - С. 36-39.

132. Шраер, Т.И., Шапошников Ю.Г., Крейнес В.М. Применение липосом в раннем лечении экспериментальных ран // Хирургия. 1994. - № 12. -С.35-38.

133. Шубич, М.Г. Выявление катионных белков в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего / М.Г.Шубич // Цитология. 1974.

134. Т.16, N10. С.13-21. 142.1Дерба, М.М. Всасывания железа / М.М. Щерба // Физиология всасывания.-Л., 1977.-С.223-248.

135. Щербаков, В.И. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейтрофилов к стимуляторам / В.И. Щербаков // Лаб. дело. 1989. - №1. -С. 30-33.

136. Юданова, Т.Н. Фармакокинегические свойства поливинилспиртовых пленок с комбинированным биологическим действием / Т.Н. Юданова, Е.Ю. Алешина, Л.С. Гальбрайх//Хим.-фарм журнал. -2003.- Т.37.- №11.-С.26-28.

137. Юсупов, Ф.И. Применение тримекаина и пиромекаина для местной анестезии в оториноларингологии / Ф.И. Юсупов, Н.П. Мешкова, А.А. Алимова // Журн. ушных, носовых и горловых болезней.-1991.-№4.-С.54-55.

138. Яровая, Г.А. Получение и физико-химические свойства оксиэтилкрах-мала, применяемого как плазмозаменитель / Г.А. Яровая, Л.И. Кудряшов

139. Хим-фарм. Журналю-1983ю-№ 12ю-С 1481-1489ю

140. Ali, В.Н. Pharmacological, therapeutic and toxicological properties of furazolidone : some recent research / B.H. Ali // Vit Res Commun. -1999.-№ 23.-C.343-360.

141. American society of regional anesthesia / Meeting.-1990.-0rlando, Fla // Scietific abstracts American society of regional anesthesia: Annu.meet., Orlando, Fla., March. 25-28, 1990.- Philadelphia: Lippincoti, 1990.-92p.

142. Amnrier, R. Mechanical proherties of dry and wet cellulosic and acrylic films prepared from agueous cjllidal polimer dispersions used in the cjfting of solid losfge forms / R. Amnrier // Pharm. Res.-1994.-vl l.-№6.-p882-888.

143. Ampic, N. Retrometabolic drug design concepts in ophthalmic target specific drul lelivery /N. Ampic // Adv.DrugDeliv.Rev.-1995.-vl6.- №l.-p21-38

144. Arzamastsev, E.V. Combined method for the determination of LD5o/E.V.Arzamastsev, M.I.Mironova, O.A.Terehova //Zent. Bl. Pharm., pharmakother.,lab.Diagn. Berlin, 1988, 127,5, P310-311

145. Breton, J. Prolonged half-life in the circulation of a chemical cjnjugate between' a pro-urokinase derivative and human serum albumin / J. Breton, N. Pezzi, A. Molinary //

146. EurJ.Biochem.-1995.-v231.- №3 .p.563-569.

147. Bogden, J.D. Effect of pulmonary tuberculosis on blood concentrations ofcopper and zinc / J.D. Bogden, D.I. Lintz, M.M. Joselow // Am. J. Clin. Pa-thol.-1977.-V.67.-P.251-256.

148. Brock, J.H. Iron and infection / J.H. Brock // Haematol.- 1987.-V.20.-N4.-P.237-246.

149. Callaghan, V. Platinum andother metal complexes of 2-methyl-5-nitrobenzimidazole andmetronidazole / V. Callaghan, L. Goodgame, R.P. Toose // Inorg. Chim. Acta.-1983.-Vol.78.-N.l.-p.l-4.

150. Clark, J. Metronidazole gel in managing malodorous fungating wounds / Jane Clark // "British Journal of Nursing", 2002, vol 11, №6, p. 55-60.

151. Coudron, P.E. In vitro evaluation as an alternative agent for metronidazole in combination antimicrobal therapy against Helicobacter pylori / P.E. Condron, C.W. Stratton // J. Antimicrob Chemother-1998.-№42. -P.657-660.

152. Dani, R. Omeprasole, clarithromycin and furazolidone for the eradication of Helicobacter pilori in patients with duodenal ulcer / R.Dani, D.M. Queiroz, M.G. Dias // Aliment Pharmacol Ther. -1999.-№13.-P.1647-1652.

153. M. Dodd, W. Stillman // J: Pharm Exper Ther.-1944.-82.-p. 11-13. 163: Eykyn, S.J. Metronidazole in surgicalinfection / S.J. Eykyn, I. Phillips // J.

154. Antimicrob. Chemotherapy.-1978.-Vol.4.-Syppl. P.-P. 75-81.

155. El.-Fallam T.H., Shnoky S., Abdel-Meduid E. Determination on the release and the efficacy of the two new antibacterial agents from the different ointmentbases//Die Pharmazie.-1989.-V.44, №3.-P.211. ,

156. File, T.M. Treatment of skin and soft tissue infection. / T.M. File, J.S. Tan // Am J Surg. 1995, - Vol. 169, 5A Suppl. - P. 27-33.

157. Forgacs, B. RES function and liver microcirculation in the: early stage of acute experimental pancreatitis / B; Forgacs, G. Eibl // Hepatogastroenterology 2003. -Vol.50, №51.- P.861-866

158. Frossard, J.L. Experimental acute pancreatitis: new insights into the pathophysiology / J.L. Frossard; G.M. Past // Front Biosci. 2002. - №7. - P.275-287.

159. Giammona, G. Watersoluble sopolymers of an antiviral agents: synthesis and their interaction with a biomembrane model / G. Giammona, B. Carlisi, Pitrrcsi, G. Cavalarro, V.T. Liveri //J. Control.Rel.-1992.-v22.p. 197-204

160. Callaghan, V. Platinum andother metal complexes of 2-methyl-5-nitrobenzimidazole andmetronidazole / V. Callaghan, B.M. L. Goodgame, R.P. Toose//Inorg; Chim. Acta.-1983.-Vol.78.-N.l.-P. 1-4.

161. Harbarth, S. Transmission inter-et intrahosptaliere* de staphylocogues résistants a, la- meticilline / S. Harbarth, J. Romand, Ri Ereri // Shweir med. Wo-schenschr. 1997. - Vol. 127. - №12. - P. 471-478.

162. Huand, X. Economic assessment1 of three1 antimicrobial therapies for uncomplicated urinary tract infection in^women / X. Huand, A.G. Hartzema, R.H. Raasch // Clin.Ther.- 1999.-№21. P.1578-1588.

163. Hutchinson; F.G. Biodegradable plymersfor controlled release of peptides and protein / Hutchinson, F.G. // In:Drug Carrier Systems.-1989.-11-127

164. Hunt, J.A. Diffusion and drug release in pjlymer films prepared from ester derivatives of hyaluronic acid / J.A Hunt // J.Control.Rel.-1990.-vl2.-pl59-169.

165. Kander, R. Polimers for drug delivery and tissue engineering / R. Kander // Ann.Biomed. Eng.-1995.-v.23.-№ 2.-101-111.

166. Kramer, A. Future directions in biomaterials / A. Kramer// Biomaterials.-1990.-V. 11.- № 9.-p.73 8-745.

167. Leong, K.W. Synthetic biodegradable polimer, dryg delivery systems/ K.W. Leong // GRC Press,Bocf Raton-Ann Arbor-Boston.-1991.

168. Li, L.C. An in , vitro evaluation of silicjne elastomerr latex for topical drug delivery / L.C. Li,N.T. Vu//JlPharm. Phaimacol.-1995.-v47.- № 7.-p.447-450/.

169. Larionova, N.I. Conjugation of the Bowman-Birk soybean proteinase in-hibior with hydroxyethylstarch / Larionova,N.I. // Appl. Biochem. Biotechnol.-1997.-v62.-p.l75-187

170. N- (1-Адамантил) -2-гидрокси-4-оксо-4- (n-толил) -1фотонамид, проявляющий антистафилококковую активности / Т.Н. Янборисов, З.Н. Семенова, С.Н. Шуров, Ю.С. Андрейчиков // Авт. Свид. -N1573804, 1988.

171. Nalteni, L. Dextrans as drug carries. Irr.Drug carriers in biology and meldi-cine / L. Nalteni // Acad.Press.London-NY-San Francisco.-1979.-p. 108-125

172. Nastro, L.I., Finegold, S.M. Bactericidal actinity of fine antimicrobial agentsagainst bacteroides fragilis. J. Infect. Dis. 1972, vol.126, p.104-107

173. Means, G.E. Chemikal modifications of proteins: history and appications

174. G.E Means, Feeney R.E // Bioconjugate Chem.-1990.- vl .p.2-12.

175. Pitt, C.G. Manipulation of the rate of hydrolysis of polymerdrug conjugates: the secondary structure of the polymer / C.G. Pitt, S.S. Shan // JControl.Rel.-1996.-v39.p.221-229.

176. Pecosky, D.A Bioadhesive polymers and drug delivery / D. A Pecosky // CRC Press, Boca Raton-Ann Arbor-Boston.-1991 .-p99-125

177. Schmid, R.D. Stabilized soluble enzymes / R.D. Schmid // Adv.BiochemiEng.-1997.-V 12.-p.41 -118.

178. Specht, B. Preparation and properties of trypsin and chymothrypsin coupled covalently to poly (N-vinilpyrrolidone) / B. Specht, W. Brendel // Bio-chim.Biophys.Acta.-1997/-v484.p.l 09-114

179. Stanishevskii Ia.M. Phagocytosis of polymer microspheres immobilized with bioligands by peripheral blood leukocytes in patients with acute pancreatitis / Ia.M. Stanishevskii, V.B. Skopintsev // Klin. Lab. Diagn. 2003. - №10. -C.44-47.

180. Strauberg, RLProtein-based medical adhesives / R.L Strauberg // Tibtech-February-1990.-V8.-53-57.

181. Sur, B. Studies on the antineoplasticity of Schiff bases containing 5-nitrofuran and pyrimiadine / B. Sur, S.P. Chatterjee, P.Sur // Oncology.-1990.-№47.-C.433-438

182. Zaleman, T. Proterties of asparaginase-dextran conjugates / T. Zaleman //

183. Adv. Drug Deliv.Rev.-1991 .-v6.-p. 167-180.

184. Tally, F.P. Treatment of anaerobic infections with metronidazole / F.P.

185. Tally // Antimicrob. Ag. Chemotherapy.-1975.-Vol.7.-N.5. P.672-675.

186. Tanner, W.A. Single dose intra-rectale metronidazole asprophylaxis against wound infection following emergencyappendicectomy / W.A. Tanner // Brit. J. Surg.-1980.-Vol 67.-N11.-P.809-810

187. Thorbek, P. Ester of metronidazole with N, N-di-methyglycine and its acid additionSalt / P. Thorbek, H. Bundgaard, C. Larsen // Eur. Pat., Appl. EP.96, 870 (CI. C07D233/95).-28Dec.-1983.-DK Appl. 82/2, 643.-11 Jun., 1982-171. P

188. Verma, N.K. A. Comparative trial of metronidazole (flagyl) alone and metronidazole plus antibiotics in oralinfections / N.K.A. Verma // Indian Practit.-1978.-Vol.31 .-N7.-P.631-634.