Агрегация хитозана и его производных в разбавленных водных растворах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат физико-математических наук Корчагина, Евгения Викторовна

• Корчагина, Евгения Викторовна
• кандидат физико-математических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Корчагина, Евгения Викторовна

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Получение хитозана и его гидрофобных производных

1.2. Агрегация хитозана в разбавленных водных растворах

1.2.1. Физические причины агрегации хитозана

1.2.2. Влияние степени ацетилирования хитозана

1.2.3. Влияние молекулярной массы хитозана

1.2.4. Влияние рН

1.2.5. Влияние соли

1.2.6. Форма и структура агрегатов хитозана

1.2.7. Природа агрегатов хитозана

1.3. Агрегация ГМ хитозана в разбавленных водных растворах

1.3.1. Влияние содержания гидрофобных групп

1.3.2. Влияние размера гидрофобных групп

I. 3.3. Влияние молекулярной массы ГМ хитозана

1.3.4. Влияние рН

1.3.5. Влияние соли

1.3.6. Форма и структура агрегатов ГМ хитозана

ГЛАВА II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

11.1. Объекты исследования

11.2. Методы исследования

И.2.1. Метод динамического и статического рассеяния света

а) Оборудование

б) Методика измерения

в) Приготовление образцов

П.2.2. Метод просвечивающей электронной микроскопии

а) Оборудование

б) Методика измерения

в) Приготовление образцов

IL2.3. Метод УФ/видимой спектроскопии

а) Оборудование

б) Методика измерения

в) Приготовление образцов

IL2.4. Метод капиллярной вискозиметрии

а) Оборудование

б) Методика измерения

в) Приготовление образцов

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

111.1. Агрегация хитозана и ГМ хитозана в разбавленных водных растворах

111.2. Влияние молекулярной массы на агрегацию

111.3. Влияние гидрофобных групп на агрегацию

111.4. Влияние соли на агрегацию

111.4.1. Влияние концентрации соли на агрегацию

111.4.2. Влияние типа соли на агрегацию

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГМ - гидрофобно модифицированный

ДРС - динамическое рассеяние света

ККА - критическая концентрация агрегации

ККМ - критическая концентрация мицеллообразования

ПЭМ - просвечивающая электронная микроскопия

СА - степень ацетилирования

СРС - статическое рассеяние света

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Агрегация хитозана и его производных в разбавленных водных растворах»

ВВЕДЕНИЕ

Хитозан является природным полисахаридом, выделяемым, главным образом, из отходов переработки морепродуктов. Этот полимер обладает целым рядом замечательных свойств. Будучи практически единственным поликатионом природного происхождения [1], он нетоксичен, биосовместим, а также биоразлагаем, что исключает возможность его накопления в организме человека и окружающей среде [2,3]. Благодаря своим уникальным свойствам хитозан уже нашел широкое применение в медицине, фармацевтической, пищевой, парфюмерно-косметической промышленности, сельском хозяйстве, водоочистке [1-7].

Из всех областей применения хитозана на первом месте стоит здравоохранение [8]. Это связано, в частности, с его высокой биологической активностью. Обнаружено [3], что этот полимер обладает кровоостанавливающими, бактерицидными, фунгицидными, противоопухолевыми, антихолестериновыми и иммуномодулирующими свойствами, также он оказывает успокаивающее действие на центральную нервную систему. Очень перспективным является использование этого полимера в качестве носителя лекарственных средств [9-15]. Положительный заряд хитозана способствует его проникновению через клеточные мембраны и плотные слои эпителия, обеспечивает хорошую адгезию к слизистым оболочкам и противомикробные свойства [2]. Благодаря своей способности связывать противоположно заряженную ДНК, хитозан также может быть использован для доставки генов [9,16,17].

Хитозану можно придать новые свойства, если химически модифицировать его путем введения различных заместителей. Если в результате такой модификации не затрагиваются основной скелет полимерной цепи и часть функциональных групп, то ценные свойства самого хитозана сохраняются. Полученный таким образом ГМ хитозан способен образовывать гидрофобные домены [18-23], которые способны солюбилизировать плохо растворимые в воде лекарственные вещества. Это расширяет возможности применения хитозана в качестве носителя лекарств. Также гидрофобные заместители могут усиливать трансфекцию [24-26], что повышает эффективность хитозана при доставке генов.

Большинство применений хитозана связано с его водными растворами, поэтому важно понимать поведение полимера в этой среде. В одних случаях он образует истинные растворы одиночных макромолекул [27-31], в других случаях он агрегирует [32-36]. Растворы индивидуальных макромолекул важны для того, чтобы

охарактеризовать отдельные цепи хитозана, например, определить их молекулярную массу. Но особый интерес вызывают самопроизвольно формирующиеся агрегаты хитозана, перспективные в качестве носителей лекарственных веществ и генов.

Зная закономерности образования агрегатов хитозана и факторы, определяющие их размер, можно направленно получать полимерные носители требуемого размера.

Теория, описывающая поведение ассоциирующих полиэлектролитов в разбавленных водных растворах, предсказывает [37], что стабилизация таких межмолекулярных агрегатов определяется конкуренцией между притяжением ассоциирующих групп и отталкиванием, вызванным заряженными группами на цепи полимера и осмотическим давлением противоионов, препятствующим агрегации. При этом размеры агрегатов зависят от содержания ассоциирующих и заряженных групп. Однако имеющиеся экспериментальные данные противоречивы. Более того, влияние на агрегацию таких факторов, как длина основной цепи хитозана, концентрация и тип соли, практически не изучены.

Целью работы является экспериментальное исследование агрегации макромолекул хитозана и его гидрофобных производных в разбавленных водных растворах, которое включает в себя определение размера агрегатов и числа составляющих их полимерных цепей в зависимости от следующих факторов: длины цепи полимера, содержания гидрофобных групп, концентрации и типа низкомолекулярной соли.

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Корчагина, Евгения Викторовна

выводы

1. Впервые показано, что размер агрегатов хитозана и ГМ хитозана не зависит от длины составляющих их полимерных цепей, что связано с электростатической природой их стабилизации.

2. Обнаружено, что число полимерных цепей, образующих агрегат, увеличивается при уменьшении молекулярной массы полимера, что связано с необходимостью обеспечения определенного выигрыша в энергии ассоциации. В то же время содержание в агрегате заряженных и гидрофобных групп остается неизменным.

3. Показано, что агрегаты хитозана и ГМ хитозана представляют собой наногели с более плотным ядром и разреженным поверхностным слоем.

4. Обнаружено, что введение в полимер н-додецильных гидрофобных групп приводит к увеличению доли агрегированных макромолекул ГМ хитозана и агрегационного числа, что связано с дополнительным вкладом гидрофобных взаимодействий в энергию ассоциации. В то же время, показано, что при увеличении содержания гидрофобных групп от 2 до 4 мол.% агрегационное число остается постоянным. Этот результат можно объяснить низкой поверхностной энергией агрегата, благодаря чему введение в полимерную цепь небольшого количества дополнительных гидрофобных групп уже не приводит к перестраиванию агрегатов с включением в него дополнительных макромолекул.

5. Показано, что увеличение концентрации соли приводит к поджатию агрегатов и увеличению доли агрегированных макромолекул, что связано с подавлением электростатического отталкивания одноименно заряженных звеньев и осмотического давления противоионов. В то же время при изменении концентрации соли агрегационное число остается постоянным, благодаря двуслойной структуре агрегатов, обеспечивающей низкую поверхностную энергию.

6. Обнаружено, что агрегация сильно зависит от типа соли. В присутствии хлорида натрия доля агрегированных макромолекул намного больше, поскольку хлорид ионы способствуют формированию кристаллитов, стабилизирующих агрегаты. В то же время в присутствии ацетата натрия агрегационное число и плотность агрегатов ГМ хитозана больше, что связано с тем, что ацетат-ионы более эффективно экранируют электростатические отталкивания одноименно заряженных полимерных цепей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Корчагина, Евгения Викторовна, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Rinaudo М. «Chitin and Chitosan: Properties and Applications» II Prog. Polym. Sei. 2006, vol. 31, pp. 603-632.

2. «Material Science of Chitin and Chitosan» / Uragami Т., Tokura S. Tokyo: Springer, 2006.

3. «Хитин и хитозан: природа, получение и применение». / Под ред. Варламова В. П., Немцева С. В., Тихонова В. Е. М.: Российское Хитиновое Общество, 2010.

4. Martin G. P. «Applications and Environmental Aspects of Chitin and Chitosan». II J. Macromol. Sei. - Pure Appl. Chem. 1995, vol. 32, pp. 629-640.

5. Быков В. П. // Тезисы V Всероссийской конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». Щелково, 1999, с. 15.

6. Быкова В. М., Кривошеина JL И., Глазунов О. И., Ежова Е. А. // Тезисы VI Всероссийской конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». Щелково, 2001, с. 147.

7. «Chitin and Chitosan. Sources, Chemistry, Biochemistry, Physical Properties and Applications». / Ed. by G. Skjak-Brek, T. Anthonsen, P. Sandford. London: Elsevier, 1989.

8. Нудьга JI.A. «Структурно-химическая модификация хитина, хитозана и хитин-глюкановых комплексов». / Дис. на соиск. ст. докт. хим. наук. СПб.: ИВС РАН, 2006.

9. Ravi Kumar M.N.V., Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli С., Sashiwa H, Domb A.J. «Chitosan Chemistry and Pharmaceutical Perspectives». II Chem. Rev. 2004, vol. 104, pp. 6017-6084.

10. Sinha V. R., Singla A. K., Wadhawan S., Kaushik R., Kumria R, Bansal K., Dhawan S. «Chitosan Microspheres as a Potential Carrier for Drugs». И Int. J. Pharm. 2004, vol. 274, pp. 1-33.

11. Lehr С., Bouwstra J. A., Schacht E. H., Junginger H. E. «In Vitro Evaluation of Mucoadhesive Properties of Chitosan and Some Other Natural Polymers». II Int. J. Pharm. 1992, vol. 78, pp. 43-48.

12. He P., Davis S. S., Ilium L. «In Vitro Evaluation of the Mucoadhesive Properties of Chitosan Microspheres». II Int. J. Pharm. 1998, vol. 166, pp. 75-88.

13. Liu X. F., Guan Y. L., Yang D. Z., Li Z., Yao K. D. «Antibacterial Action of chitosan and Carboxymethylated Chitosan». II J. Appl. Polym. Sei. 2001, vol. 79, pp. 1324-1335.

14. Ikinci G., §enel S„ Akincibay H„ Ka§ S„ Erci§ S„ Wilson C. G., Hincal A. A. «Effect of Chitosan on a Periodontal Pathogen Porphyromonas Gingivalis». // Int. J. Pharm. 2002, vol. 235, pp. 121-127.

15. Dhawan S., Singla A.K., Sinha V.R. «Evaluation of Mucoadhesive Properties of Chitosan Microspheres Prepared by Different Methods». I IAAPS PharmSciTech 2004, vol. 5, pp. 1-7.

16. Philippova О. E., Akitaya T., Mullagaliev I. R., Khokhlov A. R., Yoshikawa K. «Salt-Controlled Intrachain/Interchain Segregation in DNA Complexed with Polycation of Natural Origin». H Macromolecules 2005, vol. 38, pp. 9359-9365.

17. Riva R., Ragelle H., des Rieux A., Duhem N., Jérôme С., Préat V. «Chitosan and Chitosan Derivatives in Drug Delivery and Tissue Engineering». II Adv. Polym. Sei. 2011, vol. 244, pp. 19-44.

18. Philippova O.E., Hourdet D., Audebert R., Khokhlov A.R. «pH-Responsive Gels of Hydrophob ically Modified Poly (acrylic acid)». II Macromolecules. 1997, vol. 30, pp. 82788285.

19. Филиппова O.E. ««Восприимчивые» полимерные гели». II Высокомолек. Соед. С. 2000, Т. 42, сс. 2328-2352.

20. Blagodatskikh I.V., Sutkevich M.V., Sitnikova N.L., Churochkina N.A., Pryakhina T.A., Philippova O.E., Khokhlov A.R. «Molecular Mass Characterization of Polymers with Strongly Interacting Groups Using Gel Permeation Chromatography-Light Scattering Detection». II J. Chromatogr. A. 2002, vol. 976, pp. 155-164.

21. Shashkina Y.A., Zaroslov Y.D., Smirnov V.A., Philippova O.E., Khokhlov A.R., Pryakhina T.A., Churochkina N.A. «Hydrophobic Aggregation in Aqueous Solutions of Hydrophob ically Modified Polyacrylamide in the Vicinity of Overlap Concentration». II Polymer. 2003, vol. 44, pp. 2289-2293.

22. Philippova O.E., Andreeva A.S., Khokhlov A.R., Islamov A.K., Kuklin A.I., Gordeliy V.l.

«Charge-Induced Microphase Separation in Polyelectrolyte Hydrogels with Associating Hydrophobic Side Chains: Small-Angle Neutron Scattering Study». II Langmuir. 2003, vol. 19, pp. 7240-7248.

23. Андреева A.C., Фоменков А.И., Исламов A.K., Куклин А.И., Филиппова O.E., Хохлов А. Р. «Гидрофобная агрегация в микрофазно расслоенном геле гидрофобно модифицированной полиакриловой кислоты». II Высокомолек. Соед. А. 2005, Т. 47, сс. 338-347.

24. Kabanov A.V., Kabanov V. A. «DNA Complexes with Polycations for the Delivery of Genetic Material into Cells». H Bioconjugate Chem. 1995, vol. 6, pp. 7-20.

25. Kurisawa M., Yokoyama M., Okano T. J. «Transfection Efficiency Increases by Incorporating Hydrophobic Monomer Units into Polymeric Gene Carriers». H J. Control. Release. 2000, vol. 68, pp. 1-8.

26. Sato T., Kawakami T., Shirakawa N., Okahata Y. «Preparation and Characterization of DNA-Lipoglutamate Complexes». //Bull. Chem. Soc. Jpn. 1995, vol. 68, pp. 2709-2715.

27. Kim Y.-H., Gihm S. H„ Park C. R., Lee K. Y„ Kim T. W., Kwon I. C., Chung H„ Jeong S. Y. «Structural Characteristics of Size-Controlled Self-Aggregates of Deoxycholic Acid-Modified Chitosan and Their Application as a DNA Delivery Carrier». II Bioconjugate Chem. 2001, vol. 12, pp. 932-938.

28. Lee K. Y., Jo W. H., Kwon I. C., Kim Y.-H., Jeong S. Y. «Physicochemical Characteristics of Self-Aggregates of Hydrophobically Modified Chitosans». II Langmuir 1998, vol. 14, pp. 23292332.

29. Liu W.G., Zhang X., Sun S.J., Sun G.J., Yao K.D., Liang D.C., Guo G., Zhang J.Y. «N-Alkylated Chitosan as a Potential Nonviral Vector for Gene Transfection». II Bioconjugate Chem. 2003,14, pp. 782-789.

30. Liu W., Sun S. J., Zhang X., Yao K. D. «Self-Aggregation Behavior of Alkylated Chitosan and Its Effect on the Release of a Hydrophobic Drug». II J. Biomater. Sci. Polymer Edn. 2003, vol. 14, pp. 851-859.

31. Buhler E., Rinaudo M. «Structural and Dynamical Properties of Semirigid Poly electrolyte Solutions: a Light-Scattering Study». II Macromolecules 2000, vol. 33, pp. 2098-2106.

32. Sorlier P., Denuziere A., Viton C., Domard A. «Relation between the Degree of Acetylation and the Electrostatic Properties of Chitin and Chitosan». II Biomacromolecules 2001, vol. 2, pp. 765-772.

33. Sorlier P., Viton C., Domard A «Relation between Solution Properties and Degree of Acetylation of Chitosan: Role of Aging». II Biomacromolecules 2002, vol. 3, pp. 1336-1342.

34. Sorlier P., Rochas C., Morfin I., Viton C., Domard A. «Light Scattering Studies of the Solution Properties of Chitosans of Varying Degrees of Acetylation». II Biomacromolecules 2003, vol. 4 pp. 1034-1040.

35. Popa-Nita S., Alcouffe P., Rochas C., David L.,Domard A. «Continuum of Structural Organization from Chitosan Solutions to Derived Physical Forms». II Biomacromolecules 2010, vol. 11, pp. 6-12.

36. Kulikov S., Tikhonov V., Blagodatskikh I., Bezrodnykh E., Lopatin S., Khairullin R., Philippova Y., Abramchuk S. «Molecular Weight and pH Aspects of the Efficacy of Oligochitosan against Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)» II Carbohydr. Polym. 2012, vol. 87, pp. 545-550.

37. Potemkin 1.1., Vasilevskaya V. V., Khokhlov A. R. J. «Associating Poly electrolytes: Finite Size Cluster Stabilization Versus Physical Gel Formation». II Chem. Phys. 1999, vol. 111, pp. 28092817.

38. Aranaz I., Harris R., Heras A. «Chitosan Amphiphilic Derivatives. Chemistry and Applications». II Current Organic Chemistry 2010, vol. 14, pp. 308-330.

39. Гальбрайх JI.C. «Хитин и хитозан: строение, свойства, применение». II Соросовский образовательный журнал 2001, Т. 7, сс. 51-56.

40. Быкова В.М., Немцев С.В. «Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана». В сб. «Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение» под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002, сс. 7-23.

41. Нудьга JI.A., Плиско Е.А., Данилов С.Н. «Получение хитозана и изучение его фракционного состава». // Журнал Общей Химии 1971, Т. 41, сс. 2555-2558.

42. Cho Y.-W., Jang J., Park C.R., Ко S.-W. «Preparation and Solubility in Acid and Water of Partially Deacetylated Chitins». //Biomacromolecules. 2000, vol. 1, pp. 609-614.

43. Taghizadeh S. M., Davari G. «Preparation, Characterization, and Swelling Behavior of N-Acetylated and Deacetylated Chitosans». II Carbohydr. Polym. 2006, vol. 64, pp. 9-15.

44. Desbrieres J., Martinez C., Rinaudo M. «Hydrophobic Derivatives of Chitosan: Characterization and Rheological Behaviour». II Int. J. Biol. Macromol. 1996, vol. 19, pp. 2128.

45. Rinaudo M., Auzely R., Vallin C., Millagaliev I. «Specific Interactions in Modified Chitosan Systems». I I Biomacromolecules. 2005, vol. 6, pp. 2396-2407.

46. Ortona O., D'Errico G., Mangiapia G., Ciccarelli D. «The Aggregative Behavior of Hydrophobically Modified Chitosans with High Substitution Degree in Aqueous Solution». И Carbohydr. Polym. 2008, vol. 74, pp. 16-22.

47. Ngimhuang J., Furukawa J. I., Satoh Т., Furuike Т., Sakari N. «Synthesis of a Novel Polymeric Surfactant by Reductive N-Alkylation of Chitosan with 3-O-Dodecyl-D-Glucose». II Polymer. 2004, vol. 45, pp. 837-841.

48. Onesippe C., Lagerge S. «Studies of the Association of Chitosan and Alkylated Chitosan with Oppositely Charged Sodium Dodecyl Sulfate». II Colloid. Surf. A. 2008, vol. 330, pp. 201-206.

49. Terbojevich M., Muzzarelli R.A.A. «Chitosan». In Handbook of Hydrocolloids. Ed. by Phillips G.O., Williams P.A., Boca Raton, Boston, N.Y., Washington: Woodhead Publishing Limited and CRC Press. 2000, pp. 367-378.

50. Anthonsen M. W., Varum K. M., Hermansson A. M, Smidsod O., Brant D. A. «Aggregates in Acidic Solutions of Chitosans Detected by Static Laser Light Scattering». // Carbohydr. Polym. 1994, vol. 25, pp. 13-23.

51. Lamarque G., Lucas J.-M., Viton C., Domard A. «Physicochemical Behavior of Homogeneous Series of Acetylated Chitosans in Aqueous Solution: Role of Various Structural Parameters». // Biomacromolecules 2005, vol. 6, pp. 131-142.

52. Philippova O., E., Volkov E., V., Sitnikova N.. L., Khokhlov A., R. «Two Types of Hydrophobic Aggregates in Aqueous Solutions of Chitosan and Its Hydrophobic Derivative». II Biomacromolecules 2001, vol. 2, pp. 483-490.

53. Amiji M. «Pyrene Fluorescence Study of Chitosan Self-Association in Aqueous Solution». II Carbohydr. Polym. 1995, vol. 26, pp. 211-213.

54. Matsumoto T., Kawai M., Masuda T. «Heterogeneous Molecular Aggregation and Fractal Structure in Chitosan/Acetic Acid Systems». II Biopolymers 1991, vol. 31, pp. 1721-1726.

55. Ottoy M.H., Vârum K.M., Christensen B.E., Anthonsen M.W., Smidsrod O. «Preparative and Analytical Size-Exclusion Chromatography of Chitosans». II Carbohydr. Polym. 1996, vol. 31, pp. 253-261.

56. Kubota N., Eguchi Y. «Facile Preparation of Water-Soluble N-Acetylated Chitosan and Molecular Weight Dependence of Its Water-Solubility». II Polymer J. 1997, vol. 29, pp. 123127.

57. Schatz C., Viton C., Delair T., Pichot C., Domard A. «Typical Physicochemical Behaviors of Chitosan in Aqueous Solution». //Biomacromolecules 2003, vol. 4, pp. 641-648.

58. Kurita K., Sannan T., Iwakura Y. «Studies on Chitin. 4. Evidence for formation of Block and Random Copolymers of N-Acetyl-D-Glucosamine and D-Glucosamine by Hetero- and Homogeneous Hydrolyses». //Makromol. Chem. 1977, vol. 178, pp. 3197-3202.

59. Sogias I. A., Khutoryanskiy V. V., Williams A. C. «Exploring the Factors Affecting the Solubility of Chitosan in Water». II Macromolecular Chemistry and Physics 2010, vol. 211, pp. 426-433.

60. Chen W.Y., Hsu C.H., Huang J.R., Tsai M.L., Chen R.H. «Effect of the Ionic Strength of the Media on the Aggregation Behaviors og High Molecule Weight Chitosan». II J. Polym. Res. 2011, vol. 18, pp. 1385-1395.

61. Roberts G.A., Domszy J.G. « Deter emination of Viscometric Concstants for Chitosan». II Int. J. Biol. Macromol. 1982, vol. 4, pp. 374-377.

62. Rinaudo, M.; Milas, M.; Dung, L., P. «Characterization of Chitosan. Influence of Ionic Strength and Degree of Acetylation on Chain Expansion». 11 Int. J. Biol. Macromol. 1993, 15, pp. 281-285.

63. Sogias I.A., Williams A.C., Khutoryanskiy V.V. «Why is Chitosan Mucoadhesive?». // Biomacromolecules. 2008, vol. 9, pp. 1837-1842.

64. Крамаренко Е.Ю., Филиппова O.E., Хохлов А.Р. «Полиэлектролитные сетки как высокочувствительные полимеры». //Высокомолек. Соед. С. 2006, Т. 48, сс. 1216-1240.

65. Потемкин И.И., Зельдович К.Б., Хохлов А.Р. «Статистическая физика растворов ассоциирующих полиэлектролитов». // Высокомолек. Соед. С. 2000, Т.42, сс. 2265-2285.

66. Potemkin I., I., Andreenko S., A., Khokhlov, A., R. J. «Associating Polyelectrolyte Solutions: Normal and Anomalous Reversible Gelation». // Chem. Phys. 2001, vol. 115, 10, pp. 48624872.

67. Zaroslov Yu.D., Fytas G., Pitsikalis M., Hadjichristidis N., Philippova O.E., Khokhlov A.R. «Clusters of Optimum Size Formed by Hydrophobically Associating Polyelectrolyte in Homogeneous Solutions and in Supernatant Phase in Equilibrium with Macroscopic Physical Gel». // Macromol. Chem. Phys. 2005, vol. 206, pp. 173-179.

68. Schatz С., Pichot С., Delair Т., Viton С., Domard A. «Static Light Scattering Studies on Chitosan Solutions: From Macromolecular Chains to Colloidal Dispersions». II Langmuir 2003, vol. 19, pp. 9896-9903.

69. Aiba S. «Studies on Chitosan: 3. Evidence for the Presence of Random and Block Copolymer Structures in Partially N-Acetylated Chitosan». II Int. J. Biol. Macromol. 1991, vol. 13, pp. 4044.

70. Varum K.M, Anthonsen M. W, Grasdalen H, Smidsrod O. «Determination of the Degree of N-Acetylation and the Distribution of N-Acetyl Groups in Partially N-Deacetylated Chitins (Chitosans) by High-FieldN.M.R. Spectroscopy». // Carbohydr. Res. 1991, vol. 211, pp. 17-23.

71. Yanagisawa M., Kato Y., Yoshida Y., Isogai A. «SEC-MALS Study on Aggregates of Chitosan Molecules in Aqueous Solvents: Influence of Residual N-Acetyl Groups». II Carbohydr. Polym. 2006, vol. 66, pp. 192-198.

72. Qin C., Li H., Xiao Q., Liu Y., Zhu J., Du Y. «Water-Solubility of Chitosan and Its Antimicrobial Activity». II Carbohydr. Polym. 2006, vol. 63, pp. 367-374.

73. Ogawa K., Hirano S., Miyanishi Т., Yui Т., Watanabe Т. «А New Polymorph of Chitosan». II Macromolecules. 1984, vol. 17, pp. 973-975.

74. Belamie E., Domard A., Chanzy H., Giraud-Guille M.-M. «Spherulitic Crystallization of Chitosan Oligomers». //Langmuir. 1999, vol. 15, pp. 1549-1555.

75. Ercelen S., Zhang X., Duportail G., Grandfils С., Desbrieres J., Karaeva S., Tikhonov V., Mely Y., Babak V. «Physicochemical Properties of Low Molecular Weight Alkylated Chitosans: a New Class ofPotential Nonviral Vectors for Gene Delivery». II Colloids Surf. В : Biointerfaces. 2006, vol. 51, pp. 140-148.

76. Elias H.-G. «In Light Scattering from Polymer Solutions». II Academic Press: New York 1972.

77. Domard A., Rinaudo M. «Gel Permeation Chromatography of Cationic Polymers on Cationic Porous Silica Gels». II Polym. Commun. 1984, vol. 25, pp. 55-58.

78. Сафронов А.П. В сб. «Хитин ихитозан. получение, свойства и применение» под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука, 2002, сс. 130-140.

79. Esquenet С., Buhler Е. «Phase Behavior of Associating Poly electrolyte Polysaccharides. 1.Aggregation Process in Dilute Solution». II Macromolecules. 2001, vol. 34, pp. 5287-5294.

80. Esquenet C., Terech P., Boue F., Buhler E. «Structural and Rheological Properties of Hydrophobically Modified Polysaccharide Associative Networks». // Langmuir. 2004, V. 20, pp. 3583-3592.

81. Jiang G.-B., Quan D., Liao K., Wang H. «Preparation of Polymeric Micelles Based on Chitosan Bearing a Small Amount of Highly Hydrophobic Groups». II Carbohydr. Polym. 2006, vol. 66, pp. 514-520.

82. Hu Y., Du Y. J., Yang J., Tang Y., Li J., Wang X. «Self-Aggregation and Antibacterial Activity ofN-AcylatedChitosan». //Polymer 2007, vol. 48, pp. 3098-3106.

83. Jiang G.-B., Quan D., Liao K., Wang H. «Novel Polymer Micelles Prepared from Chitosan Grafted Hydrophobic Palmitoyl Groups for Drug Delivery». I I Molecular Pharmaceutics 2005, vol. 3, pp. 152-160.

84. Lee K. Y., Kim Y.-H., Kwon I. C., Jeong S. Y. «Self-Aggregates of Deoxycholic Acid-Modified Chitosan as a Novel Carrier of Adriamycin». II Colloid Polym Sei 2000, vol. 278, pp. 12161219.

85. You J., Hu F.-Q., Du Y.-Z., Yuan H «Polymeric Micelles with Glycolipid-like Structure and Multiple Hydrophobic Domains for Mediating Molecular Target Delivery of Paclitaxel». II Biomacromolecules 2007, vol. 8, pp. 2450-2456.

86. Li Y. Y„ Chen X. G., Liu C. S„ Cha D. S., Park H. J., Lee С. M. «Effect of the Molecular Mass and Degree of Substitution of Oleoylchitosan on the Structure, Rheological Properties, and Formation ofNanoparticles». I I J. Agric. Food Chem. 2007, vol. 55, pp. 4842-4847.

87. Wang Y. S., Liu L. R., Jiang Q., Zhang Q.-Q. «Self-Aggregated Nanoparticles of Cholesterol-Modified Chitosan Conjugate as a Novel Carrier of Epirubicin». //Eur. Polym. J. 2007, vol. 43, pp. 43-51.

88. Liu C.-G., Desai K. G. H., Chen X. G., Park. H. J. «Linolenic Acid-Modified Chitosan for Formation of Self-Assembled Nanoparticles». II J. Agric. Food Chem. 2005, vol. 53, pp. 437441.

89. Zhang C., Ding Y., Ping Q., Yu L. «Novel Chitosan-Derived Nanomaterials and Their Micelle-Forming Properties». II J. Agric. Food Chem. 2006, vol. 54, pp. 8409-8416.

90. Kwon S., Park J. H., Chung H., Kwon I. C., Jeong S. Y. «Physicochemical Characteristics of Self-Assembled Nanoparticles Based on Glycol Chitosan Bearing 5ß-Cholanic Acid». II Langmuir 2003, vol. 19, pp. 10188-10193.

91. Lee K. Y., Jo W. H., Kwon I. C., Kim Y.-H., Jeong S. Y. «Structural Determination and Interior Polarity of Self-Aggregates Prepared from Deoxycholic Acid-Modified Chitosan in Water». II Macromolecules 1998, vol. 31, pp. 378-383.

92. Lee K. Y., Kwon I. C., Kim Y.-H., Jo W. H., Jeong S. Y. «Preparation of Chitosan Self-Aggregates as a Gene Delivery System». II Journal of Controlled Release 1998, vol. 51, pp. 213-220.

93. Qu X., Khutoryanskiy V.V., Stewart A., Rahman S., Papahadjopoulos-Sternberg B., Dufes C., McCarthy D., Wilson C.G., Lyons R., Carter K.C., Schätzlein A., Uchegbu I.F. «Carbohydrate-Based Micelle Clusters Which Enhance Hydrophobic Drug Bioavailability by Up to 1 Order of Magnitude». II Biomacromolecules. 2006, vol. 7, pp. 3452-3459.

94. Halperin A «Polymeric vs. Monomeric Amphiphiles: Design Parameters». II J. Macromol. Sei. 2009, vol. 46, pp. 173.

95. Liu W., Sun S.J., Zhang X., Yao K.D., Liang D.C., Guo G., Zhang J.Y. «Self-Aggregation Behavior of Alkylated Chitosan and Its Effect on the Release of a Hydrophobic Drug». II J. Biomater. Sei. Polymer Edn. 2003, vol. 14, pp. 851-859.

96. Liu C.G., Chen X.G., Park H.J. «Self-Assembled Nanoparticles Based on Linoleic-Acid Modified Chitosan: Stability and Adsorption of Trypsin». I I Carbohydr. Polym. 2005, vol. 62, pp. 293-298.

97. Andreeva A.S., Philippova O.E., Khokhlov A.R., Islamov A.Kh., Kuklin A.I. «Effect of the Mobility of Charged Units on the MicrophaseSeparation in Amphiphilic Poly electrolyte Hydrogels». II Langmuir. 2005, V. 21, pp. 1216-1222.

98. Bokias G., Vasilevskaya V.V., Iliopoulos I., Hourdet D., Khokhlov A.R, «Influence of Migrating Ionic Groups on the Solubility of Polyelectrolytes: Phase Behavior of Ionic Poly(N-isopropylacrylamide) Copolymers in Water». //Macromolecules. 2000, vol. 33, pp. 9757-9763.

99. Terbojevich M., Cosani A., Conio G., Marsano E., Bianchi E. «Chitosan: Chain Rigidity and Mesophase Formation». II Carbohydr. Res. 1991, vol. 209, pp. 251-260.

100. Akiyoshi К., Deguchi S., Tajima H., Nishikawa Т., Sunamoto J. «Microscopic Structure and Thermoresponsiveness of a Hydrogel Nanoparticle by Self-Assembly of a Hydrophobized Polysaccharide». //Macromolecules. 1997. vol. 30, pp. 857-861.

101. Kok M.S., Abdelhameed A.S., Ang S., Morris G.A., Harding S.E. «А Novel Gglobal Hydrodynamic Analysis of the Molecular Flexibility of the Dietary Fibre Polysaccharide Konjac Glucomannan». II Food Hydrocolloids. 2009, vol. 23, pp. 1910-1917.

102. Noda Т., Morishima Y. «Hydrophobic Association of Random Copolymers of Sodium 2-(Acrylamido)-2-methylpropanesulfonate and Dodecyl Methacrylate in Water as Studied by Fluorescence and Dynamic Light Scattering». //Macromolecules 1999, vol. 32, pp. 4631-4640.

103. Sashiwa H., Aiba S. «Chemically Modified Chitin and Chitosan as Biomaterials». II Prog. Polym. Sci. 2004, vol. 29, pp. 887-908.

104. Amidi M., Mastrobattista E., Jiskoot W., Hennink W.E. «Chitosan-Based Delivery Systems for Protein Therapeutics and Antigens». II Adv. Drug Delivery Reviews. 2010, vol. 62, pp. 59-82.

105. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C. «Chitosan in Pharmacy and Chemistry». Grottammare: ATEC, 2002.

106. Plisko E. A., Nud'ga L. A., Danilov S. N. «Chitin and Its Chemical Transformations». И Rus. Chem. Rev. 1977, vol. 46, pp. 764-774.

107. Rinaudo M., Pavlov G., Desbrieres J. «Influence of Acetic Acid Concentration on the Solubilization of Chitosan». //Polymer 1999, vol. 40, pp. 7029-7032.

108. Zhou Z., Peiffer D. G., Chu B. «Light Scattering Studies of Block Ionomer Aggregation Characteristics inNonpolar Solvent». //Macromolecules 1994, vol. 27, pp. 1428-1433.

109. Moore S., Stein W.H. J. «А Modified Ninhydrin Reagent for the Photometric Determination of Amino Acids and Related Compounds». II Biol. Chem. 1954, vol.211, pp. 907-913.

110. Moore, S.; Stein, W. H. «Photometric Ninhydrin Method for Use in the Chromatography of Amino Acids». //J. Biol. Chem. 1948, vol. 176, pp.367-388.

111. Moore S. «Chemistry and Metabolism of Substances of Low Molecular Weight». II J. Biol. Chem. 1968, vol. 243, pp. 6281-6283.

112. Prochazkova, S.; Varum, К. M.; Ostgaard, K. «Quantitative Determination of Chitosans by Ninhydrin». // Carbohydr. Polym. 1999, vol.38, pp. 115-122.

113. Калдыбаев К. А., Константинова А. Ф., Перекалина З.Б. «Гиротропия одноосных поглощающих кристаллов». II Изд. ИСЭ и производственно-экологических проблем инвестирования 2000.

114. Филиппова О. Е., Хохлов А. Р. «Практические работы по вискозиметрии растворов полимеров». // МГУ, физический факультет, Москва 1997.

115. Tsvetkov V., Eskin V., Frenkel S. «Structure of Macromolecules in Solutions». II Butterworths: London 1970.

116. Grosberg A. Yu., Khokhlov A. R. «Statistical Physics of Macromolecules». // American Institute of Physics Press: New York 1994.

117. Denuziere A., Ferrief D., Domard A. «Chitosan-Hondroitin Sulfate and Chitosan-Hyaluronate Poly electrolyte Complexes. Physico-Chemical Aspects». // Carbohydr. Polym. 1996, vol. 29, pp. 317-323.

118. Rolland-Sabaté A., Mendez-Montealvo M. G., Colonna P., Planchot V. «Online Determination of Structural Properties and Observation of Deviations from Power Law Behavior». II Biomacromolecules. 2008, vol. 9, pp. 1719-1730.

119. Kawata T., Hashidzume A., Sato T. «Micellar Structure of Amphiphilic Statistical Copolymers Bearing Dodecyl Hydrophobes in Aqueous Media». II Macromolecules. 2007, vol. 40, pp. 1174-1180.

120. Liu R. C. W., Pallier A., Brestaz M., Pantoustier N., Tribet C. «Impact of Polymer Microstructure on the Self-Assembly of Amphiphilic Polymers in Aqueous Solutions». II Macromolecules. 2007, vol. 40, pp. 4276-4286.

121. Berth G., Côlfen H., Dautzenberg H. «Physicochemical and Chemical Characterisation of Chitosan in Dilute Aqueous Solution». //Progr. Colloid Polym. Sci. 2002, vol. 119, pp. 50-57.

122. Filippov S. K., Lezov A. V., Sergeeva O. Yu., Oliferenko A. S., Lesnichin S. B., Domnina N. S., Komarova E. A., Almgren M., Karlsson G., Stepanek P. «Aggregation of Dextran Hydrophobically Modified by Sterically-Hindered Phenols in Aqueous Solutions: Aggregates vs. Single Molecules». //Eur. Polym. J. 2008, vol. 44, pp. 3361-3369.

123. Gao J., Haidar G., Lu X., Hu Z. «Self-Association of Hydroxypropylcellulose in Water». II Macromolecules. 2001, vol. 34, pp. 2242-2247.

124. Braccini I., Rodriguez-Carvajal M. A., Perez S. «Chain-Chain Interactions for Methyl Polygalacturonate: Models for High Methyl-Esterified Pectin Junction Zones». II Biomacromolecules. 2005, vol. 6, pp. 1322-1328.

125. Jordan R. C., Brant D. A. «An Investigation of Pectin and Pectic Acid in Dilute Aqueous Solution». //Biopolymers. 1978, vol. 17, pp. 2885-2895.

126. Davis M. A. F., Gidley M. J., Morris E. R., Powell D. A., Rees D. A. « Intermodular Association in Pectin Solutions». II Int. J. Biol. Macromol. 1980, vol. 2, pp. 330-332.

127. Kravtchenko T. P., Berth G., Voragen A. G. J., Pilnik W. «Studies on the Intermolecular Distribution of Industrial Pectins by Means of Preparative Size Exclusion Chromatography». II Carbohydr. Polym. 1992, vol. 18, pp. 253-263.

128. Errington N., Harding S. E., Varum K. M., Ilium L. «Hydrodynamic Characterization of Chitosans Varying in Degree of Acetylation». II Int. J. Biol. Macromol. 1993, vol. 15, pp. 113117.

129. Burchard W. «Solution Properties of Branched Maeromolecules». II Adv. Polym. Sci. 1999, vol. 143, pp. 113-194.

130. Burchard W. «Static and Dynamic Light Scattering From Branched Polymers and Biopolymers». II Adv. Polym. Sci. 1983, vol. 48, pp. 1-124.

131. Zhao Z., He M., Yin L., Bao J., Shi L., Wang B., Tang C., Yin C. «Biodegradable Nanoparticles Based on Linoleie Acid and Polyff-malic acid) Double Grafted Chitosan Derivatives as Carriers of Anticancer Drugs». // Biomacromolecules. 2009, vol. 10, pp. 565572.

132. Hyunmin Y., Wu L.-Q., Bentley W. E„ Ghodssi R., Rubloff G. W„ Culver, J. N„ Payne G. F. «Biofabrication with Chitosan». //Biomacromolecules. 2005, vol. 6, pp. 2881-2894.

133. Ogawa K. «Effect of Heating an Aqueous Suspension of Chitosan on the Crystallinity and Polymorphs». II Agric. Biol. Chem. 1991, vol. 55, pp. 2375-2379.

134. Ogawa K., Yui T., Mirya M. «Dependence on the Preparation Procedure of the Polymorphism and Crystallinity of Chitosan Membranes». II Biosci. Biotech. Biochem. 1992, vol. 56, pp. 858862.

135. Ogawa K., Yui T., Okuyama K. «Three D structures of Chitosan». II Int. J. Biol. Macromol. 2004, vol. 34, pp. 1-8.

136. Cartier N., Domard A., Chanzy H. «Single Crystals of Chitosan». // Int. J. Biol. Macromol. 1990, vol. 12, pp. 289-294.

137. Okuyama K., Noguchi K., Miyazawa T., Yui T., Ogawa K. «Molecular and Crystal Structure of Hydrated Chitosan». //Macromolecules. 1997, vol. 30, pp. 5849-5855.

138. Huggins M. J. «The Viscosity of Dilute Solutions of Long-Chain Molecules. IV. Dependence on Concentration». //J. Am. Chem. Soc. 1942, vol. 64, pp. 2716-2718.