Значение оценки параметров антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса жидкости для прогноза и лечения заболеваний глаза. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат медицинских наук Столярова, Елизавета Петровна

• Столярова, Елизавета Петровна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Столярова, Елизавета Петровна

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о слезной жидкости.

1.1.1. Происхождение слезной жидкости.

1.1.2.Сведения об основных компонентах слезной жидкости.

1.2. Антиоксиданты слезной жидкости в норме и патологии.

1.3. Протеолитические ферменты и их ингибиторы в слезной жидкости в норме и патологии.

Собственные исследования

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика материала исследования.

2.2. Экспериментальные модели.

2.2.1. Щелочной ожог роговицы.

2.2.2. Ожоговая ишемия конъюнктивы.—

2.2.3. Проникающая рана роговицы.

2.2.4. Экспериментальный иммуногенный увеит .

2.2.5. Острая ретинальная ишемия.

2.3. Обследованные больные.

2.4. Методы исследования —

2.4.1. Определение антиокислительной активности биологического материала путем измерения кинетики хемилюминесценции в модельной системе.

2.4.2. Определение активности каталазы

2.4.3. Определение активности супероксиддисмутазы с использованием системы адреналин/адренохром

2.4.4. Методы измерения трипсиноподобной, антитриптической активности и уровня а2-макроглобулина.

2.4.4.1. Определение трипсиноподобной активности.

2.4.4.2. Определение общей антитриптической активности.

2.4.4.3. Определение активности а,2- макроглобулина.

2.4.5. Определение концентрации белка в слезе

2.4.6. Статистические методы

Глава 3. АНАЛИЗ БИОХИМИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ В СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ ВО ВНЕШНИХ СТРУКТУРАХ ГЛАЗА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

3.1. Характер изменения показателей антиоксидантной системы в слезной жидкости кролика с щелочным ожогом роговицы.

3.1.1. Влияние перорального приема антиоксидантного комплекса на показатели антиоксидантной системы слезной жидкости кролика с щелочным ожогом роговицы

3.2. Характер изменения показателей протеиназно-ингибиторного баланса и-антиокислительной активности в слезной жидкости кролика.с ожоговой ишемией конъюнктивы.

3.2.1 Влияние воздействия, NO-СГП на, показатели протеиназно-ингибиторного баланса и антиокислительную - активность в слезной жидкости кролика с ожоговой ишемией конъюнктивы.

3.3. Характер изменения показателей протеиназно-ингибиторного баланса и антиокислительной активности в слезной жидкости кролика с проникающей раной роговицы.

3.3.1 Влияние воздействия NO-СГП на показатели протеиназно-ингибиторного баланса и антиокислительную• активность в слезной жидкости кролика с проникающей раной роговицы.

3.4. Обсуждение.

Глава 4. АНАЛИЗ БИОХИМИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ В СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ ВО ВНУТРЕННИХ СТРУКТУРАХ ГЛАЗА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

4.1. Характер изменения показателей протеиназно-ингибиторного баланса и антиоксидантной системы кролика с иммуногенным увеитом.—

4.1.1. Влияние доноров и ингибиторов NO на протеиназно-ингибиторный баланс и показатели антиоксидантной системы кролика с иммуногенным увеитом

4.2. Характер изменения показателей протеиназно-ингибиторного баланса и антиокислительной активности слезной жидкости кроликов с острой ишемией сетчатки.

4.2.1. Влияние инсталляций антиоксидантного комплекса на показатели протеиназно-ингибиторного баланса и антиокислительную активность слезной жидкости кроликов с острой ишемией сетчатки.

4.3. Обсуждение.

Глава 5. ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ У ПАЦИЕНТОВ С ПОУГ < '

5.1. Исследование антиокислительной активности слезной жидкости у пациентов с ПОУГ.

5.1.1. Влияние инсталляций эмоксипина на АОА, зрительные функции и показатели гидродинамики глаза пациентов с ПОУГ.

5.2. Обсуждение.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Значение оценки параметров антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса жидкости для прогноза и лечения заболеваний глаза.»

Актуальность исследования.

Сохранение зрения является одной из важнейших социально-медицинских проблем. В России ежегодно на 45-50 тыс. увеличивается число лиц, впервые ставших инвалидами по зрению. За период 1992-2003 гг. численность инвалидов^ вследствие зрительных расстройств составила свыше 402 тыс. человек [53].

Современные подходы к лечению многих заболеваний связаны с привлечением большого количества инструментальных и лабораторных исследований для- получения целостной картины болезни и поиска эффективных способов борьбы, с ней. Большое внимание уделяется разработке новых не-инвазивных методов исследования.

Наиболее1 доступным биологическим объектом1 для биохимических исследований, характеризующих локальные изменения, метаболизма глаза, является слезная^жидкость (СЖ). СЖ не только увлажняет поверхность глаза и удаляет пылевые частицы. Метаболические процессы в слезе тесно взаимосвязаны с обменными процессами, происходящими в глазу как в норме, так и при патологии [20, 41, 64, 70, 81, 105, 134, 164]. Поэтому исследование-биохимических свойств СЖ позволяет получать новые сведения, существенно дополняющие представления о патогенезе целого ряда заболеваний глаз. Состав СЖ изменяется при различных заболеваниях в непосредственно омываемых ею тканевых структурах глаза [48, 75, 81, 115, 123, 131]. Имеется связь между составом слезы и патологическими процессами, происходящими во внутренних структурах глаза [4, 43, 63, 67, 80]. Поэтому выявление корреляции между биохимическим составом слезы, активностью ее компонентов и характером, течения патологического процесса является актуальной проблемой, поскольку может расширить представления о патогенезе заболевания и помочь, в оценке прогноза и выборе патогенетически ориентированной терапии, оценке ее эффективности и адекватности.

В настоящее время не вызывает сомнения роль свободнорадикального окисления в повреждении тканевых структур глаза и нарушении их функций при многих заболеваниях глаз, например, при глаукоме, катаракте, увейте, ретинопатиях различной этиологии, внутриглазных кровоизлияниях и других заболеваниях [6, 26, 30, 40, 51, 103, 109, 174]. Не менее важная роль в патогенезе заболеваний глаз принадлежит процессам протеолиза. Нарушение баланса между протеазами и их ингибиторами лежит в основе многих патологических процессов, в том числе заболеваний глаз [32, 81, 112, 123, 151, 155, 167]. Имеются'многочисленные данные о сопряженном функционировании протеиназ, их ингибиторов и метаболитов-кислорода [8, 60, 106, 143]. Эти две системы действуют кооперативно как при физиологических, так и при патологических процессах,.в том числе связанных с повреждением собственных тканей организма.

Перспективным направлением в лечении заболеваний глаз является регуляция (свободнорадикального окисления и протеолитических процессов [1, 29, 45, 65, 73, 77, 83, 96, 169, 185]. Однако в настоящее время в офтальмологии недостаточно четко определены биохимические критерии-к применению г медикаментозной терапии и биохимический контроль ее эффективности. Таким обра

I' зом, исследование интенсивности свободнорадикальных процессов и процессов протеолиза в слезе, изучение взаимосвязи между ними, может способствовать получению новых сведений о патогенезе глазных болезней, разработке новых подходов к диагностике, профилактике и лечению заболеваний органа зрения.

Цель работы: В слезной жидкости изучить значение исследования параметров ^антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса в патогенезе патологических процессов во внутренних и внешних структурах глаза для оценки прогноза заболевания и адекватности медикаментозной терапии.

Задачи исследования: 1. изучить характер изменения показателей антиоксидантной системы в слезной жидкости кролика, их взаимосвязь с протеиназно-ингибиторным балансом при патологических процессах в во внешних структурах глаза на моделях травм глаза (щелочной ожог роговицы, ожоговая ишемия конъюнктивы, проникающая рана роговицы);

2". изучить характер изменения показателей антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса в. слезе кролика при травмах глаза при: а) пероральном приеме антиоксидантного комплекса, б) различных режимах воздействия NO-содержащего газового потока;

3. изучить характер' изменения- показателей антиоксидантной системы в слезной жидкости кролика, их взаимосвязь с протеиназно-ингибиторным балансом при патологических процессах во внутренних структурах глаза на моделях ишемии сетчатки и иммуногенного увеита;

4. изучить- характер изменения показателей антиоксидантной' системы- и протеиназно-ингибиторного баланса в слезе кролика.при.патологических процессах во внутренних структурах глаза под влиянием: а) инсталляций антиоксидантного^ комплекса, б) субконъюнктивальных инъекций донора NOh ингибитора NO-синтазы;

5.* изучить характер изменения показателей антиоксидантной, защиты, в слезной жидкости пациентов с первичной открытоугольной глаукомой и' влияние на них инсталляций эмоксипина.

Научная новизна.

Впервые изучена взаимосвязь между изменением активности компонентов' антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторным балансом в слезной5 жидкости в динамике патологических процессов во внешних (щелочной ожог роговицы, ожоговая ишемия конъюнктивы, проникающая рана роговицы) и во внутренних (иммуногенный увеит, острая ретинальная ишемия) структурах глаза. Нарушение протеиназно- ингибиторного баланса и угнетение показателей системы, антиоксидантной защиты, отмечаемое в «слезе, ассоциировано^ с замедлением процессов1 репарации в травматизирован-ных тканях и активацией воспаления.

Впервые изучено влияние оксида,азота в газовом потоке на активность компонентов антиоксидантной и антипротеолитической систем слезной жидкости кролика в норме и при травмах глаза.

Впервые изучено влияние антиоксидантных комплексов на активность компонентов антиоксидантной и антипротеолитической систем слезной жидкости кролика при щелочном ожоге роговицы и острой ишемии сетчатки.

Впервые изучена активность компонентов антиоксидантной и антипротеолитической систем слезной жидкости и крови кролика при общей иммунизации организма, при иммуногенном увейте, а также влияние на исследуемые параметры доноров NO и ингибиторов NO-синтазы.

Впервые у больных глаукомой установлена корреляция^ между изменением антиокислительной активности слезы и изменением показателей гидродинамики глаза,* выявлено нормализующее действие эмоксипина на АОА слезной жидкости.

Практическая значимость.

Показана, информативность исследования активности компонентов антиокислительного и антипротеолитического1 потенциала слезы для оценки характера течения патологических процессов, протекающих как во* внешних, так и во внутренних структурах глаза.

Анализ состояния компонентов антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса слезной жидкости послужил одним из оснований для разработки режимов применения NO-содержащего газового потока для лечения травм глаза.

Анализ состояния компонентов антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса слезной жидкости послужил одним из критериев для обоснования применения ингибиторов-индуцибельной NO-синтазы в лечении иммунногенного увеита.

Оценка антиокислительного и антипротеолитического потенциала слезной' жидкости является объективным- показателем эффективности применения антиоксидантных комплексов при ожоговой травме роговицы- и при ишемии сетчатки.

Определение антиокислительной активности в слезной жидкости пациентов с первичной открытоугольной глаукомой является объективным показателем эффективности медикаментозной терапии.

Положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

1. Травматические повреждения внешних структур глаза сопровождаются угнетением активности показателей системы антиоксидантной защиты и изменением активности компонентов протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости на стадии максимальной выраженности воспалительных проявлений патологического процесса.

2. При пероральном приеме антиоксидантного комплекса в слезной жидкости здоровых кроликов возрастает антиоксидантный потенциал. Прием антиоксидантного комплекса при ожоге роговицы, способствует увеличению активности компонентов антиоксидантной системы в слезе, что свидетельствует об уменьшении окислительного стресса в тканях глаза и проявляется благоприятным течением- репаративных процессов.

3.- Местное воздействие газовым потоком, содержащим оксид азота, положительно влияет на течение посттравматического процесса в глазу кролика, при этом в- слезе отмечается раннее увеличение активности трипсиноподобных ферментов с последующим возрастанием антипро-теолитического потенциала'и АОА.

4. Общая иммунизация организма кролика сопровождается, изменениями активности компонентов антиоксидантной системы в»слезной жидкости, изменения этих показателей в крови менее выражены.

5. При патологических процессах во внутренних структурах глаза в слезной* жидкости кролика происходит снижение АОА и увеличение активности СОД и каталазы при иммуногеном увейте; увеличение анти-триптической активности при острой ишемии сетчатки.

6. В слезе кроликов с иммуногенным увеитом под влиянием донора N0 происходит угнетение антитриптической активности, активности СОД. и каталазы* клинически это соответствует тяжелому и длительному течению воспаления;. Применение ингибитора5 NO-синтазы приводит к увеличению антитриптической активности, ранней нормализации АОА, увеличению активности катал азы на поздних сроках увеита, уменьшению^ активности и продолжительности: воспалительного процесса;

7. Инсталляции антиоксидантногскомплекса кроликамсострой ишемией сетчатки приводят к возрастанию антиоксидантного - потенциала i слезы и повышению активности а2-макроглобулина, отмечается улучшение проходимости'и кровенаполнения ретинальных сосудов.

8. AOAi слезной гжидкостишациентов с: глаукомойше; отличается; от АОА слезы здоровых доноров и не зависит от стадии заболевания. Впервые обнаружена! высокая: степень корреляции между изменением' АОА и изменением^ показателей гидродинамики; глаза при местном? применении эмоксипина.

Апробация работы.

Основные положения? работы доложены, и . обсуждены на II Всероссийской научной конференции1 молодых ученых с участием? иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва; 2007), .на научно-практической конференции «Офтальмоиммунология; Итоги и перспективы». . (Москва, 2007); Диссертационная работа апробирована на межотделенческой конференции в МНИИ ГБ< им. Гельмгольца (25.02.2009);

Публикации;

По теме диссертации опубликовано 25 научных работ, из них 5 - в центральной печати, 3 - в зарубежных изданиях. Структура и объем диссертации.

Диссертация* изложена; на 169 страницах машинописного текста, состоит из введения* обзора литературы, материалов и методов исследования, резуль

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Столярова, Елизавета Петровна

Выводы:

1. При травматических повреждениях внешних структур глаза (щелочной ожог роговицы, ожоговая ишемия конъюнктивы, проникающая, рана роговицы) в период максимальной выраженности клинических признаков воспаления в. слезной жидкости происходит: а) снижение антиокислительной активности и угнетение активности антиоксидант-ных ферментов СОД и каталазы, б) изменение протеиназно-ингибиторного баланса.

2. Пероральный прием антиоксидантного комплекса приводит к увеличению АОА- в слезе здоровых кроликов; прием антиоксидантного комплекса при ожоговой травме роговицы положительно влияет на клиническое течение ожога и способствует более ранней по сравнению с нелеченными нормализации АОА, увеличению активности каталазы и СОД в слезе.

3. Под влиянием газового потока, содержащего оксид азота, в слезе кроликов с травмами внешних структур глаза происходит увеличение активности трипсиноподобных ферментов в острый период воспаления и возрастание антипротеолитического потенциала и АОА* на поздних сроках воспаления, что выражается клинически благоприятным течением посттравматического процесса.

4. При общей иммунизации организма кролика в слезной жидкости отмечается возрастание активности СОД и снижение активности каталазы, АОА при этом не меняется. Изменения этих показателей-в слезе более выражены, чем в крови.

5. При патологических процессах во внутренних структурах глаза в слезной жидкости кролика происходит изменение активности компонентов антиоксидантной' системы и протеиназно-ингибиторного баланса: а) при иммуногеном' увейте - снижение АОА и увеличение активности СОД и каталазы на ранних стадиях воспаления, б) при острой ишемии сетчатки - повышение антипротеолитического потенциала.

6. Применение донора оксида азота при иммуногеном увейте у кролика приводит к угнетению антитриптической активности, активности СОД и каталазы в слезной жидкости и к более тяжелому течению увеита. Воздействие ингибитором NO-синтазы способствует раннему увеличению антитриптической активности, ранней нормализации АОА, увеличению активности каталазы на поздних сроках увеита и значительному улучшению течения увеита.

7. Под влиянием инстилляций антиоксидантного комплекса в слезной жидкости кроликов с острой ишемией сетчатки происходит увеличение АОА и активности а2-макроглобулина, улучшается проходимость и кровенаполнение ретинальных сосудов.

8. АОА слезы у пациентов с глаукомой не зависит от стадии заболевания, но является объективным показателем эффективности терапии, так как выявлена корреляция между изменением АОА слезы и изменениями показателей гидродинамики глаза при глаукоме.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В конце 70-х годов прошлого века впервые в стране в МНИИ глазных болезней им.Гельмгольца были начаты исследования по изучению биохимического состава слезы в норме и патологии [41, 81]. Количество зарубежных работ, посвященных этой проблеме, в то время было крайне мало. В последние годы, благодаря появлению новых методов и технологий, количество работ по биохимии слезы значительно возросло как в нашей стране, так и за рубежом [64, 70, 110, 111, 114, 121, 129, 130, 136,151, 155, 167]. Исследование биохимических свойств слезы позволяет получать новые сведения, дополняющие представления о патогенезе целого ряда заболеваний глаз. Актуальной проблемой является выявление корреляции между биохимическим составом слезы и характером течения патологического процесса. В; последние годы все большее подтверждение находит участие свободнорадикальных и протеолитических процессов в патогенезе различных заболеваний глаза.

В соответствии с этим сформулирована-цель настоящей работы - в слезной жидкости изучить значение исследования параметров антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса в патогенезе патологических процессов- во внутренних и внешних структурах глаза для оценки прогноза заболевания и адекватности медикаментозной терапии.

Для достижения цели были поставлены задачи изучить характер изменения-показателей антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости при патологических процессах воспалительного и ишемического характера во внутренних и внешних структурах глаза.кролика, оценить, взаимосвязь «биохимических изменений в слезе с клиническими проявлениями патологического процесса, изучить.влияние на исследуемые биохимические параметры различных воздействий, а также провести исследование антиокислительной активности слезы у пациентов с глаукомой.

Изменение протеиназно-ингибиторного баланса в слезе при ожоге роговицы изучалось ранее, в том числе и в нашем отделении [48, 72, 82, 84]. Выявлены основные закономерности изменений со стороны протеиназноингибиторного баланса в разные стадии воспалительного процесса, изучены некоторые особенности, характерные для клинически благоприятного или неблагоприятного течения. Показано, что недостаток ингибиторов или чрезмерная активация протеиназ могут явиться причиной развития глубоких деструктивных процессов в тканях глаза [82]. Условием успешной регенерации является увеличение протеолитической активности в острую фазу воспалительного процесса, что способствует очищению ожоговой раны и удалению некротизированных тканей. Одновременно в область повреждения поступают ингибиторы протеолиза и ограничивают действие протеиназ. Повышение антитриптической активности препятствует чрезмерной активации протеолитических ферментов и характеризует успешный процесс рубцевания. Развитие воспаления, сопровождается снижением, активности а2-МГ в, слезной жидкости. Увеличение активности а2-МГ происходит по-мере врастания-сосудов в роговицу. Нормализация^ значений активности а2-МГ на поздних сроках является признаком клинически благоприятного течения, чрезмерно высокая? активность а2-МГ свидетельствует о включении иммунных механизмов «и характеризует неблагоприятное течение ожога* [82]. Таким образом, изменение ТПА, АТА и активности- а2-МГ зависит от стадии патологического процесса и, по-видимому, является результатом реакции поверхностного капиллярного русла.глаза, клеток конъюнктивы, изменений, происходящих в слезной железе, а также поступления ПЯЛ в слезную жидкость.

Нами впервые изучены изменения показателей протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости при ожоговой ишемии конъюнктивы - и проникающей ране роговицы. Наличие ишемизированного участка конъюнктивы,осложняет течение ожоговой болезни глаз. В-результате тяжёлых ожогов-тлаз образуются грубые, интенсивно васкуляризированные бельма роговицы, т.к. повреждение конъюнктивы в значительной мере влияет на регенерацию роговицы. Тяжелые некротические изменения конъюнктивы приводят к нарушению питания роговицы, усиливают явления интоксикации, создают условия для развития инфекции и возникновения различных осложнений, что требует экстренного хирургического вмешательства. Проникающая рана роговицы, напротив, характеризуется слабой воспалительной реакцией, основное внимание уделяется процессам рубцевания. При тяжелых повреждениях роговицы часто остаются грубые рубцы, приводящие к потере прозрачности и развитию астигматизма и значительно снижающие зрение.

По нашим данным, как при ожоговой ишемии конъюнктивы, так и при проникающей ране роговицы наблюдается дисбаланс между протеиназами и их ингибиторами. При-ожоговой ишемии конъюнктивы в слезе не происходило увеличения- протеолитической активности в острую фазу воспалительного процесса, которое должно способствовать очищению ожоговой раны. Увеличение- ТПА отмечалось в, начале развития- изъязвлений роговицы и в период, когда происходило их резкое углубление. Изменения' АТА при этом были выражены слабо, что может быть связано с окислением метионина в активном центре агантитрипсина. оксидантами, что приводит к его инактивации. Подтверждением этому может служить длительное и стойкое снижение АОА слезной жидкости, являющееся., маркером интенсивных деструктивных процессов, происходящих с участием гидроксильного ^радикала.

При проникающей ране роговицы в, слезе на фоне увеличения АТА активность трипсиноподобных протеиназ была снижена на всех сроках наблюдения. Чрезмерное снижение протеолитической активности на ранних сроках после травмы может явиться причиной недостаточного очищения раны от продуктов распада, что приводит к формированию грубого рубца [82].

При травмах внешних структур глаза, нами впервые изучена динамика АОА в слезе. Выявлено снижение АОА слезной жидкости на всех сроках наблюдения, особенно выраженное в период максимальных клинических проявлений воспаления. Снижение АОА свидетельствует о расходовании эндогенных антиоксидантов слезы на нейтрализацию наиболее агрессивных гид-роксильных радикалов, образование которых усиливается при воспалении [8,

59]. Таким образом,. АОА слезы является маркером интенсивности окислительного стресса в наружных структурах глаза.

По полученным нами данным интерес представляет исследование активности СОД в слезе. Мы обнаружили,.что в слезе интактных кроликов активность СОД достаточно лабильна и чувствительна к различным воздействиям внешней среды. Возможно, это связано с физиологической ролью СОД, защищающей роговицу от продуктов фотохимических реакций, и обусловлено изменением' условий: инсоляции, колебаниями содержания кислорода и различных примесей в атмосферном воздухе: При; щелочном ожоге роговицы нами обнаружено угнетение активности антиоксидантных ферментов СОД и каталазы в слезе; наиболее выраженное в период интенсивной* васкуляриза-ции. При этом реактивность СОД в слезе практически отсутствует, т.е. происходит угнетение: адаптационных механизмов регуляции системы, антиоксидантной защиты;

С целью воздействия 1на свободнорадикальные и протеолитические: процессы при травмах глаза мы применили- антиоксидантный комплекс и N0-содержаы щй газовый поток (NO-C ГП).

Нами впервые показано, что пероральный прием антиоксидантов; здоровыми кроликами приводит к достоверному увеличению АОА и некоторому увеличению активности СОД в слезе.

При щелочном ожоге; роговицы на фоне приема антиоксидантного комплекса в слезе достоверно; увеличивалась АО А,, активность каталазы и СОД по сравнению с нелеченными животными. Важным обстоятельством на наш: взгляд оказалось сохранение реактивности СОД в слезе, что свидетельствует о том; что адаптационные механизмы регуляции антиоксидантной защиты; действовали нашриближенном, к норме уровне. Увеличение активности каталазы и СОД на поздних стадиях воспаления может положительно влиять на репаративные процессы,, поскольку эти ферменты, предотвращают окислительное повреждение вновь синтезируемых структурных компонентов»роговицы. Клинически это подтверждается формированием более прозрачного рубца по сравнению с нелеченными кроликами.

Нами впервые было изучено влияние оксида азота в газовом потоке на биохимические показатели слезной жидкости здоровых кроликов и кроликов с травмами передней поверхности глаза. Мы применяли NO-СГП в режимах, оказывающих, согласно полученным раннее данным [92], терапевтическое воздействие. Нами показано, что воздействие на глаз NO-СГП не оказывает влияния на исследуемые параметры слезы у здоровых кроликов. У кроликов с ожоговой ишемией конъюнктивы и с проникающей раной роговицы NO-СГП в используемых режимах способствовал ранней нормализации АОА слезы. По-видимому, N0 проявляет в данных концентрациях антиоксидант-ные свойства, не исключено также, что нормализация АОА является следствием благоприятного клинического течения-и снижения образования активированных кислородных метаболитов. При воздействии NO-СГП на глаза кроликов с экспозицией, оказывающей благоприятное действие на клиническое течение ожоговой ишемии конъюнктивы и проникающей раны роговицы, нами обнаружено повышение активности протеиназ на ранних сроках воспалительного процесса, что должно способствовать лучшему очищению ожоговой раны и что объясняет терапевтическую эффективность NO-СГП. При этом в слезе кроликов с ожоговой ишемией конъюнктивы на поздних сроках воспаления возрастала антитриптическая активность, которая препятствует чрезмерной активации протеолитических ферментов и ограничивает распространение воспалительного процесса [82]. Не исключено, что это мо! жет быть связано с сосудорасширяющим действием NO при экспозиции газового потока 15с и поступлением низкомолекулярных антипротеиназ из со-t судов конъюнктивы, что создает возможность не только интенсивной доставки питательных веществ, к обожженным участкам, но также обеспечивает быстрое выведение из тканей продуктов метаболизма.

У кроликов с проникающей раной роговицы, получавших NO-СГП, антитриптическая активность слезы была ниже, чем у нелеченных животных.

Это способствовало лучшему очищению раны протеолитическими ферментами от продуктов распада тканей, что особенно важно при раневом процессе, поскольку от этого зависит успех репарации. Клинически это проявлялось формированием более нежного и прозрачного рубца.

Таким образом, при травматических повреждениях внешних структур глаза в период максимальной выраженности клинических признаков воспаления в слезной жидкости происходит снижение активности показателей антиоксидантной защиты и изменение протеиназно-ингибиторного баланса. Изучая динамику биохимических показателей, можно получить сведения о тяжести и стадии патологического процесса, подобрать патогенетически обоснованную терапию и определить сроки ее применения. Для антиоксидантной и NO-терапии- важным является подбор- адекватной дозировки, поскольку использование высоких либо недостаточных доз препаратов принципиально может способствовать проявлению ряда негативных эффектов.

Согласно данным литературы [4, 43, 63, 67, 80] слезная жидкость способна реагировать на изменения метаболизма в тканях глаза, с которыми она не соприкасается. В своем исследовании на моделях иммуногенного увеита и острой ретинальной ишемии мы хотели показать информативность биохимического анализа слезной жидкости при оценке характера течения патологического процесса и эффективности проводимой терапии при воспалительных и ишемических процессах, протекающих во внутренних структурах глаза.

Увеит - тяжелое воспалительное заболевание рецидивирующего характера, часто сопровождающее системные заболевания. Одним из основных звеньев патогенеза увеита является сенсибилизация организма антигеном из внеглазных очагов воспаления с дальнейшим развитием местной сенсибилизации тканей глаза[89]. Серьезной задачей является коррекция* иммунных нарушений и предотвращение манифестаций заболевания.

Нарушения в иммунной системе, присущие увеиту изучались ранее, в том числе в нашем Институте [30, 42, 74]. Данных о биохимических изменениях в слезе при иммуногеном увейте в доступной нам литературе не найдено. Поскольку очевидна взаимосвязь иммунной, протеолитической и антиоксидантной систем, нами изучены системные и локальные изменения параметров антиоксидантной и антипротеолитической систем, как при иммуно-генном увейте, так и при общей иммунизации.

Оказалось, что при общей иммунизации изменения исследуемых биохимических параметров в слезе более выражены, чем в крови. Это связано, вероятно, с тем, что конъюнктива - слизистая оболочка, оказывающая большое влияние на состав слезы, - является иммунокомпетентной тканью, которая вовлекается в иммунный и воспалительный ответ. По нашим данным в слезе происходит снижение активности СОД после первичной сенсибилизации, повторное введение антигена приводит к достоверному увеличению активности этого показателя. Одновременно достоверно снижается активность каталазы. Характер изменения активности антиоксидантных ферментов! является следствием активации нейтрофилов-и'генерации супероксидного радикала при стимуляции иммунной системы [58, 59]. Характер изменения активности а2-МГ свидетельствует об активации макрофагов конъюнктивы, в которых он вырабатывается [82].

При иммуногеном увейте в слезе мы. наблюдали значительные изменения показателей антиоксидантной системы. Следствием развития увеита было снижение АОА и увеличение активности каталазы в период, когда клинические признаки воспаления стихали. В то же время динамика активности СОД практически не отличалась от изменения активности СОД у иммунизированных животных. То есть, биохимические изменения в слезе свидетельствовали о более длительном течении патологического процесса, чем это отмечается с помощью клинических исследований.

Согласно литературным данным NO и его метаболит пероксинитрит, играют одну из ключевых ролей в развитии увеита. Считается, что пероксинитрит является важным медиатором увеального воспаления [171]. Имеются работы по применению доноров N0 и ингибиторов NO-синтазы при экспериментальном увейте [98, 99, 166, 194]. Однако их воздействие на биохимические процессы в слезной жидкости раннее не изучались.

Нами впервые были изучены биохимические изменения в слезе при лечении увеита донорами оксида азота и ингибиторами индуцибельной NO-синтазы (iNOS). Известно, что в результате стимуляции иммунной системы происходит активация индуцибельной NO-синтазы и повышается концентрация оксида азота в очаге воспаления [59,60]. При введении донора оксида азота мы способствовали длительному сохранению высокой концентрации оксида азота. Это может приводить к накоплению пероксинитрита и реализации цитотоксического действия NO. Согласно данным клинических наблюдений введение донора NO приводило к более'тяжелому и длительному течению воспалительного процесса по сравнению нелеченными животными. В-слезе мы обнаружили снижение активности СОД и каталазы на поздних сроках воспаления по сравнению с нелеченными животными. О высоком уровне окислителей свидетельствует и снижение АТА в слезе кроликов, получавших донор NO по сравнению с нелеченными животными, поскольку известно, что оксиданты способны окислять метионин в активном центре ai-антитрипсина [144]', что приводит к его инактивации.

Противоположное действие на исследуемые биохимические параметры слезы и клиническое течение иммунногенного увеита мы наблюдали при применении ингибитора iNOS. Введение на ранних сроках ингибитора iNOS может способствовать снижению концентрации оксида азота до уровня, при котором он не способен конкурировать с СОД за супероксидный радикал. По* данным клинических наблюдений после введения ингибитора NO-синтазы отмечалось значительное уменьшение активности и длительности воспалительной реакции. При этом в слезе мы наблюдали более раннюю нормализацию АОА в слезе, увеличение антипротеолитической активности, а также повышение активности каталазы, защищающей ткани глаза от действия перекиси водорода.

Таким образом, при иммуногеном увейте наиболее выраженные изменения мы наблюдали в слезной жидкости со стороны показателей антиокислительной системы, характеризующие острую деструкцию тканей с развитием респираторного взрыва. Донор N0 и ингибитор NO-синтазы в используемых дозировках и при указанных выше способах и сроках введения оказывали противоположные эффекты как на клиническое течение иммуногенного увеита, так и на изучаемые биохимические параметры.

Нами были впервые изучены изменения антиокислительной и антипро-теолитической активности в слезе при острой ишемии сетчатки, вызываемой лазеркоагуляцией ретинальных сосудов. Мы обнаружили увеличение анти-триптической активности и активности а2-МГ в слезе в ранние сроки после лазерного воздействия. Это могло быть вызвано как воспалительным процессом в сетчатке, так и реакцией компонентов системы гемостаза слезы в ответ на нарушение кровообращения в сетчатке. По-нашим данным ишемический процесс в сетчатке не влиял на уровень АОА в слезе.

Одним из перспективных направлений в лечении посттравматической ретинальной патологии является применение антиоксидантной терапии для нормализации, обменных процессов в сетчатке и повышения ее репаративной способности [33, 45, 73]. С этой целью нами впервые было исследовано влияние инсталляций селенсодержащего антиоксидантного комплекса Селекартен на клинические и биохимические показатели при острой ишемии сетчатки.

По полученным нами данным инстилляции антиоксидантного комплекса приводили к увеличению АОА слезы, что свидетельствует о прямом анти-оксидантном действии компонентов Селекартена. На фоне лечения антиокси-дантным комплексом увеличивалась активность а2-МГ. Вероятно, это связано'с иммунотропным действием комплекса, поскольку известно, что селен способен оказывать стимулирующее воздействие на иммунокомпетентные клетки конъюнктивы, которые синтезируют а2-МГ [79, 139]. Положительное влияние антиоксидантного комплекса на биохимические параметры подтверждалось данными клинических наблюдений: применение Селекартена способствовало более раннему восстановлению проходимости и кровенаполнения сосудов сетчатки.

Таким образом, исследование параметров антиоксидантной системы и протеиназно-ингибиторного баланса слезы, информативно при патологических процессах во внутренних структурах глаз,, не омываемых слезой. Изучая; метаболические сдвиги в слезной5 жидкости, можно подобрать патогенетически обоснованное лечение, определить сроки его воздействия,. а также оценить его эффективность.

Отдельная, часть работы была посвящена, исследованию^ антиокислительной активности слезной жидкости и оценке эффективности применения эмоксипина у больных с глаукомой. В отечественной литературе имеются работы, посвященные исследованию зависимости между состоянием антиоксидантной защиты органа зрения и стадией глаукомы [29, 51, 54, 56]. Однако данные; полученные разными авторами весьма противоречивы.

Результаты; проведенных нами исследований; показали- отсутствие зависимости АОА слезы от стадии глаукомы. Значения АОА не отличались от таковых у здоровых доноров.

Тем: не менее: нами была выявлена значительная; вариация АОА в слезе, больных до лечения;. Это позволило нам разделить больных на три группы - с низким, средним и высоким уровнем АОА.

Наши данные по исследованию in vitro антиоксидантных свойств Эмоксипина указывают на отсутствие у него прямого антиоксидантного действия, что согласуется с данными, полученными другими авторами, которые исследовали Эмоксипин в такой же модельной системе [6]:

Тем не менее, под влиянием Эмоксипина;у больных ПОУГ происходило изменение АОА слезы, заключающееся вшормализации значений гэтого1 показателя: исходно высокая АОА снизилась, низкая - увеличилась. По-видимому,. Эмоксипин оказывает опосредованное действие на свободноради-кальное: окисление в слезной жидкости. Улучшая; микроциркуляцию и энергетический обмен в тканях, Эмоксипин способен препятствовать формированию условий для активации свободиорадикального окисления. Снижение повышенного уровня АОА в слезной жидкости, отмечаемое у ряда больных глаукомой, можно объяснить стабилизацией сосудистой мембраны под влиянием Эмоксипина, что приводит к снижению выхода антиоксидантных компонентов плазмы в слезу.

Впервые нами обнаружена достоверная корреляция между изменением зрительной функции (полей зрения и показателей гидродинамики глаза) и изменением АОА в слезе до и после лечения Эмоксипином. Полученная корреляция свидетельствует о том, что одним из показателей эффективности лечения может служить изменение АОА слезы в процессе лечения глаукомы.

Таким образом, проведенные нами исследования свидетельствуют о том, что исследование слезной жидкости является информативным при патологических процессах воспалительного и ишемического характера, протекающих как в структурах глаза, омываемых слезой, так и во внутренних структурах глаза, не соприкасающихся со слезной жидкостью. По нашим данным исследование состояния системы антиоксидантной защиты и протеиназно-ингибиторного баланса в слезной жидкости имеет значение для получения информацйи о патогенезе и прогнозе заболевания, для разработки, показаний к медикаментозной терапии и оценке ее эффективности, а также для разработки новых методов лечения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Столярова, Елизавета Петровна, 2009 год

1. Алексеев В.Н., Кетлинская О.С., Грузинова Т.Л. Цитокины в слезной жидкости и их роль в патогенезе офталъмогерпеса.И Вестн. РАМН. — 1996.- №1. С.57-59.

2. Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Макашова Н.В., Гусева М.Р. Антиок-сидантная активность гистохрома и некоторых лекарственных препаратов, применяемых в офтальмологии II Вестн. офтальмол. 1999. - №4. -С.22-24.

3. Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И., Тлепшуков И.К Физиология системы гемостаза //Пособ. для студ. и слушателей институтов усоверш. врачей.-М.-1995.-С.65.

4. Белова Л. А .Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов II Биохимия. 1997. - Т.62. - вып.6. - С.659-668.

5. Безнос О.В., Чеснокова Н.Б. Роль ферментов фибринолитической системы в изъязвлении роговицы// Вестн. офтальмол. — 1999. №4. — С.42-44.

6. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина. 1989. - 368С.

7. Биохимические методы исследования5 в клинике. //ред. А.А.Покровский. -М. 1969: - с.206-209.

8. Бунин А.Я. О роли метаболических факторов в патогенезе первичной открытоугольной глаукомы. // Патофизиология и биохимия глаза. М. — 1986.-С.6-9.

9. Бунин А.Я., Бабижаев М.А., Супрун А.В. Об участии процесса пере-кисного окисления липидов в деструкции дренажной системы глаз при открытоугольной глаукоме // Вестн. офтальмол. 1985. - Т.101. - №2. - С.13-16.

10. Бунин А.Я., Ермакова В.Н., Филина А.А. Новые направления гипотензивной терапии открытоугольной глаукомы (экспериментально-клинические исследования // Вестн.офтальмол. 1993. - Т.109. - № 1. - С. 3-6.

11. Бурлакова Е.Б., Губарева А.Е., Архипова Г.В., Рогинский В.А. Модуляция перекисного окисления липидов биогенными аминами в модельных сите-мах // Вопр. мед. химии. 1992. - №2. - С. 17-20.

12. Веремеенко К.Н., Голобородько О.П., Кизим А.И. Протеолиз в норме и при патологии. — Киев. 1988.

13. Викторов И.В Роль оксида азота и других свободных радикалов в игие-мической патологии мозга II Вести. РАМН. 2000. - №4. - С.5-10

14. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН. 1998. - №7. - С.43-51.

15. Горбачева О.А. Влияние оксида азота в газовом потоке на состояние тканей и. структур глазного яблока и экспериментальное обоснование использования его для лечения ожоговой'травмы глаз. // Автореф. дис. к. м. н.-М. 2002.

16. Григорьев'А.В. Значение клинико-биохимическйх показателей в прогнозе течения диабетической ретинопатии и экспериментальное обоснование применения ликопина для их коррекции. II Автореф. дис. к. н. М. - 2005.

17. Гулидова О.В, Любицкий)С^Б., Клебанов Г.И:, Чеснокова Н. Б. Изменение антиокислительной активности слезной• жидкости при экспериментальной ожоговой болезни глазЛ Бюлл. экспер. биол. и медицины: 1999. -Т.128. - №11. -С. 571-574.

18. Доценко В.Л. Воспаление. Новые аспекты старой проблемы: Учеб. по-собие.П М. — 1998. С.59.

19. Доценко В.Л., Нахикян Р.И., Соловьева Н.И., Платонова Т.К., Яровая Г.А. Протеолитические ферменты слезной жидкости как факторы патогенеза хронических язв роговой оболочки // Вопр. мед. химии. 1990: -№3. -С.73-76.

20. Егоров Е.А., Шведова А.А., Образцова И.С. Результаты исследования антиоксиданта эмоксипина в клинике глазных болезней II Вестн. офтальмол. 1989. —Т.105. - №5. - С.52-55.

21. Зборовская И.А, Банникова М.В. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты II Вестн. РАМН. — 1995. №6. - С. 53-60.

22. Зенков Н.К, Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б.Окислительный стресс //маик: Hayка/интерпериодика. 2001.

23. Зиангирова Г.Г., Антонова О.В. Перекисное окисление липидов в патогенезе первичной открытоуголъной глаукомы!7 Вестн. офтальмол. — 2003. -№4. С.54-55.

24. Зорин Н.А., Зорина В.Н., Зорина P.M., Левченко В.Г. Универсальный регулятор аг-макроглобулин (обзор литературы) II Клин. лаб. диагн. — 2004.-№11.-С. 18-22.

25. Зорина В.Н., Зорин Н.А., Лыкова Т.В., Конышева Т.В., Зорина P.M. JIu-ганды а2-макр о глобулина и механизмы их биотранспорта II Биомед.хим. — 2007. т.53. - вып.2. - С. 164-171.

26. Иванов А.Н., Танковский В.Э., Швецова Н.Е., Мизерова О.В., Цапенко И.В., Зуева М.В. Способ моделирования ишемии сетчатки глаза И Патент РФ на изобретение № 2313312 от 27.12.2007.

27. Камилов Ф.Х., Винькова Г.А., Орлова Н.С. Активность перекисного окисления липидов и антиоксидантных ферментов в слезной жидкости при посттравматическом увейте.!I Клин. лаб. диагн. 1999. — №7. - С. 7-9.

28. Касавина Б.С., Кузнецова Т.П. О диагностической ценности биохимических исследований> слезной жидкости в офтальмологии И Вестн. Офталь-мол. 1978. - №5. - С.79-81.

29. Катаргина Л.А. Эндегенные увеитьг у детей раннего возраста. Клини-ко~функциональные и иммунологические особенности, профилактика и лечение осложнений II Автореф. дис. д. м. н. М. — 1992.

30. Катаргина Л.А, Сидорова Т.В., Чеснокова Н.Б., Кузнецова Т.П. Клиническое значение гнтиокислительной активности сыворотки крови и слезной жидкости при эндогенных увеитах у детей //Вестн. офтальмол. 2003. — №2. - С.20-21

31. Кваша О.И. Терапия оксидом азота в газовом потоке в офтальмо-травматологии (экспериментально-клиническое исследование) // Автореф. дис. д. м. н. М. - 2007.

32. Ковалевский Е.И., Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Гусева М.Р., Комаров О.С. Антиоксидантная активность фармацевтических препаратов, применяемых для лечения заболевания глаз И Вестн. офтальмол. 1987. — Т. 103. - №4. - С.48-51.

33. Кондратьева Е.И., Суханова Г.А., Спиприна Л.В.и др. Роль протеолитических систем в патогенезе диабетической нефропатии у детей // Сах.диабет. 2004. - №1. - с. 12-15

34. Короленко Т.А., Филатова Т.Г, Черканова М.С, Халикова Т.А, Бравве И.Ю. Цистатины: регуляция цистеиновых протеаз и нарушения при опухолевых и воспалительных заболеваниях. II Биомед. химия. 2008. — Т.54. — вып.2: — С.210-217.

35. Кузнецова Т.П., Чеснокова Н.Б., Пасхина Т.С. Активность тканевого и плазменного калликреинов и содержание их предшественников в слезной жидкости кроликов после щелочного ожога роговицы. II Вопр. мед. химии. —1994. -№3.-С.37-40.

36. Курышева Н. Г., Винецкая М. И., Еричев В.П., Демчук М.Л., Курышев С.И. Роль свободнорадикальных реакций камерной влаги в развитии первичной открытоугольной глаукомы // Вестн. офтальмол. 1996.- Т. 112. № 4. -С. 3-5.

37. Ланкин ЪЗ.Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих. В кн.: Биохимия липидов и их роль в обмене веществ // М.: Наука. 1981. -С.75-95.

38. Либман Е.С., Шахова Е.В. Слепота и инвалидность по зрению в населении России // Материалы VIII съезда офтальмологов России, Москва, 2005, с.78-79):

39. Луценко Н.С Состояние системы антиоксидантной защиты у больных первичной открытоугольной глаукомой // Матер. Всерос. научнопрактической конференции "Глаукома на рубеже тысячелетий: итоги и перспективы". М. - 1999. - С. 54-55.

40. Любицкий О.Б. Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей хемилюминесцентным методом // Автореф. дис. к.б.н. — М. 1999.

41. Макашова Н.В. Ранняя диагностика, особенности клинических проявлений и лечения первичной открытоуголъной глаукомы при миопии // Автореф. дис. д. м. н. М. — 2004.

42. Т.А.Малиновская Лечение больных инволюционной центральной хо-риоретиналъной дистрофией методами рефлексотерапии и магнитотера-nuull Автореф: дис. к.м.н. -М. 2005.

43. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. II Новосибирск: Наука. -1989.

44. Меныцикова Е. Б., Зенков Н. К., Реутов В. R Оксид азота и NO- син-тазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях // Биохимия. 2000. - Т.65. - вып. 4. - С. 485-503.

45. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Окислительный стресс npwвоспалении. II Успехи совр. биол. 1997. - Т. 117. - вып.2. - С. 155-171.

46. Михальчик Е.В., Иванова А.В., Ануров М.В., и др. Профилактическое и лечебное действие комплексного антиоксидантного препарата при ожоговой травме у крыс. II Бюлл. эксп. биол. и мед. 2004. - № 9. - С.299-301.

47. Нероев В.В., Чеснокова Н.Б., Охоцимская Т.Д., Рябина М.В., Кост О.А., Никольская И.И., Павленко Т.А. Активность ангитензинпреврагцающего фермента в крови и слезе у больных диабетической ретинопатией. II Вестн. офтальмол. 2006. - №3. - С.11-14.

48. Петрович Ю.А., Терехина Н.А. Биохимия слезы и ее изменение при патологии (обзор) // Вопр.мед.химии — 1990. №3. — С. 13-17.

49. Полунин Г.С., Макаров И.А., Овчинников А.Н. ингибиторы ппазмино-подобных ферментов при лечении герпетических кератитов фибронектином // Сб.: Возрастные особенности органа зрения при патологии.- 1992. вып.4.- С.105-106.

50. Рашба Ю.Э., Вартанян JI.C., Серегина JI.A. и др. Нарушение в функционировании системы супероксидный радикал — супероксиддисмутаза при ишемии печени крыс //Бюл. эксперим. биол. и мед. -1986.- №11. — С. 559-561.

51. Слепова О.С., Герасименко B.JL, Захарова'Г.Ю., Новикова-Билак Т.И. Сравнительное исследование роли цитокинов при разных формах глазных заболеваний. Сообщение 2. Диабетическая ретинопатия. // Вестн. офтальмол. -2001.-Т.111. №3. - С.35-37.

52. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие И Вопр. мед. химии. 1988. - №6. — С.2-11

53. Сомов Е.Е, Бржеский В.В. Слеза (физиология, методы исследования, клиника).- СПб.: Наука. 1994.

54. Сомов Е.Е., Бржеский В.В, Пирогов Ю.И. Защитные факторы слезной жидкости здоровых и больных людей // Офтальмол. журн. 1991. -№2. -С.113-117.

55. Сосулина Н.Е. Изучение роли гидролитических ферментов в повреждении тканевых структур глаза при щелочном ожоге роговицы // Автореф. дис. к.б.н. М. - 1991.

56. СтавицкаяТ.В., Топчиева Г.В., Древаль А.А.Изучение влияния способа введения эмоксипина на его фармакокинетические и фармакодинамические свойства. И Глаз. 2006. - №5. - С.24-29.

57. Теплинская JI.E. Нарушения иммунитета, иммунодиагностика, иммунологические основы терапии эндогенных увеитов. И Автореф. дис. д. м. н. -М. 1992.

58. Терехина Н.А., Реук С.Э., Петрович Ю.А. Использование ферментного анализа слезной жидкости для прогнозирования рецидивов герпетического кератита у детей // Вестн. офтальмол. 2007. - №4. — С.23-24.

59. Урашова СМ., Кайнарбаева КА., Краморенко ЮС., Гольдман ЗМ. Определение суммарной пероксидазной активности СЖ в терапии герпетического кератита.// Офтальмол. журн. 1991. - №4. - С.213-215.

60. Филина А.А. Антиоксидантная терапия первичной глаукомы // Вестн. офтальмол.- 1994. -Т.110. №1.- С.33-35.

61. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид кислорода и токсичность кислорода, В кн.: Свободные радикалы в биологии. Пер. с англ. // М.: Мир. -1979. С. 272-314.

62. Холов А.К. Изучение биохимических и фармакологических свойств Селекартена // Дис. к. б. н. Душанбе, 2005. - 93 с.

63. Хышиткуев Б.С., Максименя М.В., Козлов С.А. Диагностическое значение исследований слезной жидкости при диабетической ретинопатии (обзор литературы)// Клин. Лаб. Диагн. 2006. - №3. - С.34-36.

64. Чеснокова Н. Б. Клиническое значение биохимического исследования слезной жидкости (обзор литературы)// М.Р.Ж. 1986. - VIII. — Т.З. — С.7-11.

65. Чеснокова Н. Б. Роль протеолитических ферментов и их ингибиторов в патологии роговицы. //Дис. д. б. н. М. - 1991.

66. Чеснокова Н. Б. Значение p-каротина для зрения //Клин, офтальмол. -2004. Т.5. - №4. - С.147-149.

67. Чеснокова Н.Б., Бордюгова Г.Г., Багдаш С., Сосулина Н.Е. Динамика протелитической и антипротеолитической активности при ожоге роговицы // Офтальмол. журн. — 1987. №1. - С.52-56

68. Чеснокова Н.Б., Григорьев А.В., Павленко Т.А., Никольская И.И., Кост. О.А., Казанская Н.Ф. Локальная ренин-ангиотензиновая система глаза, роль в офтальмопатологии//Вестн. РАМН. 2003. - №9. — С.29-32.

69. Шанин Ю.К Шанин В.Ю., Зиновьев Е.В. Антиоксидантная терапия в клинической практике.// С-Пб.: Элби-СПб. 2003". - С. 132.

70. Шатилова Р.И., Бархатова Л.А. Диагностика и лечение увеитов: состояние, проблемы и перспективы // Офтальмол. журн. — 1995. №1. — С. 1-5.

71. Шведова А.А. Роль процессов перекисного окисления липидов в повреждении- мембранных структур сетчатки и использование антиоксидан-тов как средств химической профилактики и лечения глаз. II Автореф.',дис. д.б. н.-М. 1986.

72. Швецова-Н.Е. Изучение воздействия препарата селекартен на сетчатку (экспериментальное исследование) // Автореф. дис. к.м. н. М. - 2008.

73. Шехтер'А.Б., Кабисов Р:К., Пекшев А.В:, Козлов Н.П», Перов Ю.Л. Экспериментально-клиническое обоснование плазмодинамической терапии ран оксидом азота II Бюллетень экспериментальной,биологии и медицины. 1998. -Т. 126.-№4.-С. 210-215.

74. Шинкаренко Н.В., Алексовский В.Б. Химические свойства синглетного молекулярного кислорода и значение его в биологических системах II Успехи химии. 1982. - Т.51. - №5. - С.713-735.

75. Югай М.Т Роль свободнорадикалъного окисления в патогенезе катаракты//Автореф. к.м.н. Самара. - 1996

76. Яровая Г.А. Биорегулирующие функции и патогенетическая роль про-теолиза (1. Современные представления и перспективы)II Лаб. медицина*. — 2000. №3. -С.19-22.

77. Яровая Г.А. Биорегулирующие функции и патогенетическая роль про-теолиза. 2. распространение, классификация и основы механизма действия протеиназ II Лаб. медицина. 2001. - №4. -С.75-80.

78. Яровая Г.А. Калликреин- кининовая система: новые факты и концеп-циии (обзор)!! Вопр. мед. химии. 2001. - №1.

79. Allen J.B., McGahan М.С., Ferrell J.B., Adler K.B., Fleisher L.N. Nitric Oxide synthase inhibitors exert differential time-dependent effects on LPS-induced uveitis. II Exp.Eye Res. 1996 - Vol.62,№1 - P. 21-28.

80. Allen J.B., Keng Т., Privalle C. Nitric oxide andperoxynitrite production in ocular inflammation. II Environ. Hlth. Perspect. 1998. - Vol.106 Suppl. 5.-P.1145-1149.

81. Barrett A., Starkey P., The inflammatori phagocytes: their properties and their involment in rheumatoid arthritis.// Triangle. 1979.- Vol.18. - P. 53-61.

82. Beers. R.F., Sizer I.W. A spectrophotometry method for measuring the breakdown of hydrogen peroxide by catalase //, J. Biol. Chem. 1952. - Vol. 195. - P.133.

83. Behndig A., Svensson B;, Marklund S.L., Karlsson K. Superoxide Dismu-tase Isoensymes in the Human Eye. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 1998. — Vol.39. №3.- P.471-475.

84. Berninger R.W. Alphal- antitrpsin II J. Med.-1985.-Vol.16 №1,2,3. -P.22-100.

85. Bonini M.G., Siraki A.G., Bhattacharjee S., Mason R.P. Glutathione ■ induced radical formation on lactoperoxidase does not correlate with the enzyme's peroxidase activity// Free Radic Biol Med. 2007. - Vol.42. №7. - P. 985-992.

86. Broekhuyse R. Lactoferrin and the protective function of the lacrimal fluid II Ophthalmologica.- 1976.- Vol.173. №3/4. -P.268-270.

87. Buddi R et all. Evidence of oxidative stress in human corneal diseases J/The Gournal of Histochemistry and Cytochemistry- 2002.- Vol.50. №3. - P.341-351.

88. Butovich I. A., Uchiyama E., McGulley J.P. Lipids of human meibum: mass-spectrometric analysis and structural elucidation// J', of Lipids Res. — 2007. — Vol. 48. — P.2220-2235

89. Cadenas E., Barja G. Resveratrol, melatonin} vitamin E, and PBN protect against renal oxidative DNA damage induced by the kidney carcinogen КЬгОз II Free Radical Biol, and Med. 1999. - Vol.26. - P. 1531-1537.

90. Carubelli R., Nordquist R.E., Rowsey J.J. Role of active oxygen species in corneal ulceration.//Cornea: 1990. - Vol.9. - №2. - P.161-169.

91. Choy C.K.M., Benzie I.F.F., Cho P. Ascorbic Acid Concentration and Total Antioxidant Activity of Human Tear Fluid Measured Using the FRASC Assay //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000 - Vol.41. - P.3293-3298.

92. Choy C.K.M., Cho P., Chung W-Y.,. Benzie I.F.F. Water-Soluble Antioxidants in Human Tears: Effect of the Collection Method II Invest. Ophthalmol.Vis. Sci.- 2000. Vol.42.- P.3130-3134.

93. Corrales R. M., Stern M. E., De Paiva C. S., Welch J., Li D-Q., Pflugfelder S.C. Desiccating Stress Stimulates Expression of Matrix Metalloproteinases by the Corneal Epithelium II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2006. - Vol.47. - P. 32933302.

94. Cristiano F., Dehaan J.B., Ianello R.C., Kola I. Changes in the levels of enzymes which modulate the antioxidant balance occur during aging and correlate with cellular damage И Mech. Ageing and Dev. 1995.- Vol.80. - P.93-105.

95. Crouch R.K., Goletz P., Snyder A., Coles W.H. Antioxidant enzymes in human tears.//! Ocul Pharmacol. 1991. - Vol.7. - №3. -P.253-258.

96. Csutak A., Tozser J., Bekesi L., Hassan Z., Berta A., Silver D.M. Plasminogen Activator Activity in Tears after Eximer Laser Photorefractive Keratectomy. 11 Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. - Vol.41. -P.3743-3747.

97. Dahl H., Dahl C. Hydrogen ion concentration of tear fluid in newborn infants! I Acta ophthalm. 1985. -Vol.63. - P.692-694.

98. DiMatio J., Zadunaisky J., Altszuler N. Onset of changes in glucose transport across ocular barriers in streptozotocin-induced diabetes II Invest. Ophthalmol. 1984. - Vol.25. - №7. p.820-826.

99. Foss B. Experimental Anaphylactic Iridocyclitis.il Acta Pathol. Microbiol. Scand. — 1949. Suppl.81.

100. Francis A., L'Esperanse F.A.Jr. Ophthalmic Lasers.// Photocoagulation, Photoradiation and Surgery. St.Louis. - 1983. - P.255-305.

101. Gachon A-M. F., Lacazette E. Tear lipocalin and the eye's front line of defence! I Br. J. Ophthalmol. 1998. - Vol.82. - P.453-455.

102. Garner В., Davies V.J., Truscott R.J.W. Formation of Hydroxyl Radicals in the Human Lens is Related to the Severity of Nuclear Cataract!I Exp.Eye Res. — 2000.-Vol.70.-P.81-88.

103. Ghavami S., Hashemi M., Serres F.J., Bajestani S.N., Mehrabifar H., Leo-nardi A. Trypsin Inhibitory Capacity in Vernal Keratoconjunctivitis II Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - Vol.48. - P.264-269.

104. Gillette Т.Е., Alllansmith m.R., Greiner J.V., Janusz M. Histologic and immunologic comparison of main and accessory lacrimal tissue./У Amer. J. ophthal-mol. 1990. - Vol.85. - №5. -P.724-730.

105. Girotti A.W., Geiger P.G., Thomas J.P. Cellular detoxification of photo-chemically-generated lipid hydroperoxides (LOOHs)l!¥ree Radical Biol, and Med. -1990. — Suppl. 1. P.76.

106. Gogia R., Richer S.P., Rose R.C. Tear fluid content of electrochemically active components including water soluble antioxidants. //Curr Eye Res. — 1998. — Vol.17. -№3.P.257-263.

107. Goralska M., Harned J., Grimes A.H., Fleisher L.N., McGahan M.C. Mechanisms by which ascorbic acid increases ferritin levels in cultured lens epithelial cells!/ Exp. Eye Res. 1997. - Vol. 64. - №3. - P. 413-421.

108. Grafword R.D. Proposed role for a combination of citric acid and ascorbic acid in the production of dietary iron overload: A fundamental cause of disease // BiochemMol Med. 1995. - Vol.54. - №1. - P.l-l 1.

109. Green-Church K.B., Nichols K.K., Kleinholz N.M., Zhang L., Nichols J.J. Investigation of the human tear film proteome using multiple proteomic approaches// Mol. Vis. 2008. - №14. - P.456-470.

110. Gupta A, Monroy D, Ji Z, Yoshino K, Huang A, Pflugfelder SC. Transforming growth factor beta-1 and beta-2 in human tear fluid. // Curr Eye Res. 1996. -Vol.15. - №6.-P. 605-14.

111. Gupta A.K., Sarin G.S., Lamba P.A., D'Souza P. Immunoassay of tear ly-so2yme in acute adenovirus conjunctivitis // Brit. J. Ophthalmol. — 1986. — Vol.70.-№6. P.439-441.

112. Gutteridge JiM.C. Signal, messenger and trigger molecules from free radical reactions and their control by antioxidants II NATO ASI Series. — Vol,H92. — Berlin; Heidelberg; N. Y.: Springer- Verlag, 1995. -P.157-164.

113. Haeringen van N., Agtmaal E. Fibrinolytic activity in human tears. II Exp. Eye. Res. 1989. - Vol.47.- P. 461-462.

114. Haeringen van N.J. Clinical biochemistry of tears. // Survey of ophthalmol. 1981. - Vol.26. - №2. - P.84-96.

115. Haeringen van N.J., Agtmaal van E.J. Fibrinolytic activity in human tears//. Exp Eye Res. 1989.- Vol.48. - №3. -P.461-464.

116. Hassan H.M. Biosynthesis and regulation of superoxide dismutases II Free Radical Biol, and Med. -1988. Vol.5.- P.377-385.

117. Herzog V., Miller F. The localization of endogenous peroxidase in the lacrimal gland of the rat during postnatal development // J Cell Biol. 1972. -Vol.53. -№3.-P.662-680.

118. Hoffmann P.R, Berry MJ. The influence of selenium on immune responses.// Mol. Nutr. Food Res. 2008. - Vol. 52. -№11.- P.1273-1280.

119. Imayasu M., Hirata Т., Mitsunaga S., Kotani, Hamano H. Quantitative evaluation of corneal' lesion by measuring the lactate dehydrogenase activity in rabbit tears. II J. Eye. 1990.- №7. - P.297-302.

120. Immonen I., Friberg k.,Sorsila R., Fyhrqist F. Concentration of angeotensin-converting enzyme in tears of patient with sarcoidosis II Acta Ophthalmol. — 1987. Vol.65.-P.27-29.

121. Jones L.T. Anatomy of the tear system II Intern. Ophthalmol. Clin. — 1973. — Vol.13.-№l.-P.3-22.

122. Jonson D., Travis J. Structural evidence for methionine at the reactive site ofihuman arproteinase inhibitor. 111. Biol. Chem. 1978. - Vol.253.- P.7142- 7144.

123. Jonson D., Travis J. The oxidative inactivation of human alpha-1-proteinase ingibitor II J. Biol. Chem. 1979. - Vol.254. - P.4022-4026.

124. Kanner-J; Harel-S; Granit-R Nitric oxide, an inhibitor of lipid oxidation by lipoxygenase, cyclooxygenase andhemoglobinllLipids.-\992.- Vol.27.-1,- P.46-49.

125. Katunuma N, Shiota H, Le QT. Medical significance of cysteine protease inhibitors in mammalian secretory fluids //J. Med. Invest. — 2003. — Vol.50. №34. - P154-161.

126. Kim J.C., Park G.S., Kim J.K., Kim Y.M. The Role of Nitric Oxide in Ocular Surfase Cells//. Korean Med. Sci. 2002. - №17. - P.389-394.

127. Leonardi A., Brim P., Abatangelo G;, Plebani M., Secchi A.G. Tear Levels and Activity of Matrix Metalloproteinase (MMP)-l and MMP-9 in VernalKeratoconjunctivitis// Invest. Ophthalmol.V. S. 2003. - Vol.44. - P3052-3058.

128. McGahan M.C., Harncd J., Grimes A.H., Fleisher L.N. Regulation of ferritin levels in cultured lens epithelial cells// Exp; Eye Res. — 1994. Vol.59. - №5. — P.551-555.

129. Mendelsohn ME, Abramson DH, Senft S, Servodidio CA, Gamache PH. Uric acid in the aqueous humor and tears of retinoblastoma patients.//J AAPOS. — 1998. Vol.2.-№6.-P.369-371.

130. Michiels C., Remacle J. Use of inhibition of enzymatic antioxidant systems in order to evaluate their physiological importance // Eur. J. Biochem.- 1988. — Vol.177.- P.435-441.

131. Mizra H., Fridovich I The Generation of Superoxide Radical during the An-tioxidation ofFerrodoxins. II J. Biol. Chem. 1971. - Vol.246. - P. 6886-6890.

132. Mulholland B; Tuft SJ, Khaw PT. Matrix metalloproteinase distribution during early corneal wound healing.// Eye. 2005. — Vol.19. - №5. - P.584-588.

133. Ng V., Cho P., To C. Tear proteins of normal young Hong Kong Chinese// Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 2000. - Vol.238. - №9. - P.738-745.

134. Obenberger J. Paper strips and rings as simple tools for standartisation of experimental eye injuries // Ophthalm. Res. — 1975. — Vol.7. — P.363-366.

135. Ohashi Y, Dogru M, Tsubota K. Laboratory findings in tear fluid analysis // Clin Chim Acta. 2006 . -Vol.369. - №1. - P. 17-28.

136. Ohashi Y., Motokura M., Kinoshita Y., Mano Т., Watanabe H., Kinoshita Ch.m Manabe R., Oshiden K., Yanaihara Ch. Presence of epidermal grown factor in human tears // Invest. Ophthalmol. 1989. - Vol.30. - №8 - P. 1879-1882.

137. Oku H., Yamaguchi H., Sugiyama T. Retinal toxicity of nitric oxide released by administration of a nitric oxide donor in the albino rabbit. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1997.- Vol. 38. - № 12 .- P. 2540-25441.

138. Ollivier F.J., Gilger B.C., Barrie K.P., Kallberg M.E., Plummer C.E., O'Reilly S., Gelatt K.N., Brooks D.E. Proteinases of the cornea and preocular tear film.// Vet Ophthalmol. 2007. -Vol.10. - №4. - P. 199-206.

139. Paterson CA., Williams RN., Parker AV. Characteristics of polymorphno-nuclear leukocyte infiltration into the alkali burned eye and the influence of sodium citrate. H Exp Eye Res. 1984. - Vol.39. - №6. - P.701-708.

140. Pfister R., Haddox J., Dobson R., Harkins L. Alkali-burned collagen produces a locomotori and metobolie stimulant to neuttrophilis // Invest. Ophthalmol.- 1987. Vol. 28. - P. 296-304.

141. Pittman K.M., MacMillan- Crow L.A., Peters B.P., Allen J.B. Nitration of manganese superoxide dismutase during ocular inflammation. // Exp. Eye Res. -2002. Vol.74, №4. - P: 463-471.

142. Redl B. Human tear lipocalinll Biochim Biophys Acta. 2000. - Vol 1482.- №1-2. P.241-248.

143. Rocha E.M., Cunha D.A., Carneiro E.M., Boschero A.C., Saad M.J. A., Vel-loso L.A. Identification of Insulin in the Tear Film and Insulin Receptor and IGF-I Receptor on the Human Ocular SurfaceII Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. -Vol.43. -P.963-967.

144. Rose R.C., Richer S.P., Bode A.M. Ocular Oxidants and Antioxidant Protection/1 Exp. Biol, and Med. 1998. - Vol.217. - №4. P.397-407.

145. Sathe S, Sakata M, Beaton AR, Sack RA. Identification, origins and the diurnal role of the principal serine protease inhibitors in human tear fluid.// Curr Eye Res. 1998. - Vol.17. - №4. -P.348-362.

146. Schonenberger M., Schmidtberger R., Schultze H. Uber das CC2-makroglobulin.// Z. Naturforsch:- 1958. Vol.l3b. - P.761-772.

147. Sevanian A., Davies k.J.A., Hochstein P. Serum urate as an antioxidant for ascorbic acid 11 Amer. J. Klin. Nutr. 1991. - Vol.54. - P.S1129-S1134.

148. Sharma O.P., Vita B.J. Determination of angiotensin-converting enzyme activity in tears. A noninvasive test for evaluation of ocular sarcoidosis. I I Arch, oph-thalm. 1983. - Vol. 101. - P. 559-561

149. Shrimali R.K., Irons R.D., Carlson B.A., Sano Y., Gladyshev V.N., Park J.M., Hatfield D.L. Selenoproteins mediate T cell immunity through an antioxidant mechanism II J. Biol. Chem. 2008. - Vol: 283. - №29. -P.20181-20185.

150. Sies H. Oxidative stress — From basic research to clinical application II Amer. J1 Med. -1991.- Vol.91, Suppl.3C. -P. 313-323.

151. Sousa G.A., Godoy L.M.F., Mann M. Identification of 491 proteins in the tear fluid proteome reveals a large number of proteases and protease inhibitors //Genome Biol. 2006. - Vol.7. - №8. - R.72.

152. Stoyanovsky D.A., Goldman R., Darrow R.M., Organisciac D.T., Kagan V.E. Endogenous ascorbate regenerates vitamin E in the retina directly and in combination with exogenous dihydrolipoic acid II Curr. Eye Res. — 1995. Vol.14. - №3. - P:181-189.

153. Stralin P., Marklund S.L. Effects of oxidative stress on the expression of extracellular superoxide dismutase, CuZn-superoxide dismutase and" Mn-superoxide dismutase in human dermal fibroblasts II Biochem.J. -1994. -Vol.298.-P.347-352"

154. Suzuki Т., Schirra F., Richards S.M., Jensen R.V., Sillivan D.A. Estrogen and progester on control of gene expression in the mouse meibomian gland. I I Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2008. - Vol.49.- №5. -P.1797-1808.

155. Thompson K.N., Godin D.V. Micronutrients and antioxidants in progression of diabetes!I Nuta Res. 1995. - Vol.15. - №9. - P.'1377-1410;

156. Twining S., Averse S., Wilson P. Corneal synthesis of aj-proteinase inhibi-tor.ll Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994.-Vol.35. - №8. - P. 3226.

157. Wang X., Liu J., Yokoi I. et al. Direct detection of circulating free radicals in the rat using electron spin resonance spectrometry II Free Radical Biol, and Med. 1992. - Vol. 12/- P.121-126.

158. Watanabe H., Maeda N., Kiritoshi A. et al. Expression of a mucin-like glycoprotein produced by ocular surface epithelium in nirmal and keratinized cells H Am. J. Ophthalmol. 1997. - Vol.124. - P.751-757.

159. Weinberg J.B., Lang Т., Wilkinson W.E., Pisetsky D.S., Clair E.W. St. Serum, urinary, and salivary nitric oxide in rheumatoid arthritis: complexities of interpreting nitric oxide measures// Arthritis res. Ther. 2006. — Vol.8. - №5. — R.140.

160. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen I I Enzymes Tools and Targets. - Basel: Karger. - 1988. -P.161-167.

161. Wimen В., Collen D. Molecular mechanism of physiological fybrinolysise.il Nature.-1988.- Vol.272.-P.549-550.

162. Xu D.P., Wells W.W. a-Lipoic acid dependent regeneration of ascorbic acid fro dehydroascorbic acid in rat liver mitochondria // J. Bioenerg. and Biomem-brane. 1996.-Vol.28.-P.77-85.

163. Zamir E., Zhang R., Samuni A. Nitroxide stable radical suppresses autoimmune uveitis in rats. // Free Rad. Biol. Med. 1999. - Vol.27, № 12. - P. 7-15.

164. Zhang Q.-M., Yonei S. Induction of manganese-superoxide dismutase by membrane-binding drugs in Escherichia coli 11 J.Bacteriol. —1991. —Vol.173. — P.3488-3491.