Закономерности изменений уровня неоптерина и некоторых показателей иммунитета у пациентов со злокачественными опухолями тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, кандидат медицинских наук Ринчинов, Зорикто Цыбикжапович

• Ринчинов, Зорикто Цыбикжапович
• кандидат медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Ринчинов, Зорикто Цыбикжапович

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА!

Биологическая роль нептерина и его участие в клеточном иммунитете.

1.1 Неоптерин, его биологические функции.

1.1.1 Метаболизм неоптерина.

1.1.2 Возможные источники неоптерина. ^

1.1.3 Факторы, влияющие на продукцию неоптерина.

1.1.4 Влияние птеринов на собственную продукцию.

1.1.5 Известные биологические функции неоптерина и его восстановленных форм.

1.2 Существующие методы анализа неоптерина. Обзор хроматогра-фического анализа ВЭЖХ неоптерина в биологических жидкостях.

1.3 Роль а-ФНО и у-ИФ в продукции неоптерина.

1.4 Раково-эмбриональный антиген как индикатор опухолевого процесса.

1.5 Некоторые сдвиги комплементарного статуса онкологических больных.

ГЛАВА II.

Материалы и методы.

2.1 Клиническая характеристика обследованных групп.

2.2 ВЭЖХ анализ неоптерина в сыворотке с УФ и флюориметрической детекцией.

2.3 Методы определения а-ФНО , у-ИФ и раково-эмбрионального антигена.

2.4 Методы изучения комплементарного статуса.

2.4.1 Определение активности комплемента в классическом варианте её инициации.

2.4.2 Методы определения компонентов комплемента: С1-ингибитора, СЗа, С5а и фактора Н.

2.5 Методика определения молекул средней массы в сыворотке крови.

2.6 Оборудование и аппаратура.

2.7 Методы статистической обработки результатов.

ГЛАВА III.

Разработка и оптимизация ВЭЖХ метода определения неоптерина.

ГЛАВА IV.

Величины неоптерина и некоторых иммунологических параметров у раковых больных.

4.1 Закономерности изменений уровня неоптерина и содержания цитокинов у пациентов со злокачественными новообразованиями . 62 4.2. Закономерности изменения комплементарного статуса, содержания раково-эмбрионального антигена и молекул средней массы у пациентов со злокачественными опухолями.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Закономерности изменений уровня неоптерина и некоторых показателей иммунитета у пациентов со злокачественными опухолями»

Актуальность проблемы

В структуре причин смертности населения по России и в мире онкологическая патология занимает 3-е место после сердечно-сосудистых заболеваний и травм [7].

С начала 90-х годов XX века в России ежегодно регистрируют более 400 тысяч злокачественных новообразований. При этом наблюдается ежегодный рост абсолютного числа больных с впервые установленным диагнозом, что обусловлено не только истинным подъемом заболеваемости, связанным, в том числе и с ухудшением экологической обстановки, качества жизни, постарением населения, но и заметным улучшением выявляемости заболеваний. В структуре смертности от онкологических заболеваний около

30% занимают лица трудоспособного возраста. Ежегодно в стране более 120 тысяч человек признаются инвалидами по этой причине, что свидетельствует о чрезвычайно высокой значимости ранней диагностики, профилактики и лечения этих заболеваний [6].

В связи с этим поиск новых методов ранней и дифференциальной диагностики, критериев прогноза злокачественных опухолей, а также установление новых закономерностей, характерных для злокачественного роста, является весьма актуальным. В этом плане перспективными выглядят исследования, связанные с изучением неоптеринового статуса. В настоящее время неоптерин рассматривается как маркер активации клеточного иммунитета [21, 16, 19, 27, 138]. Это связано прежде всего с тем, что измерение биологически более инертного метаболита для дополнительной оценки состояния клеточного звена иммунитета представляет максимальный интерес. Особенно акцентируется тот факт, что изменение его концентраций в крови отражает совместное действие различных цитокинов на популяцию моноцитов/макрофагов, стимулированных у-интерфероном [27, 105]. Наряду с интерфероном-гамма (ИФ-у) фактор некроза опухолей-а (ФНО-а) является мощным костимулятором синтеза неоптерина [16, 39, 91], а экзогенный неоптерин стимулирует синтез ФНО-а макрофагами [39]. Это особенно важно, учитывая фундаментальную роль ФНО-а в иммунопатологии злокачественного перерождения [24, 8,22,20].

Из данных литературы известно, что уровень неоптерина повышается при многих онкологических заболеваниях (раке поджелудочной железы, легких, печени, яичников, молочной железы) [136, 59, 160, 121, 98, 128, 189]. Наиболее высокие концентрации отмечены у больных с опухолями кроветворной системы - с неходжкинскими лимфомами и множественными миеломами [21].

Однако мы не обнаружили работ, в которых бы рассматривались взаимоотношения между уровнем неоптерина и цитокинами, влияющими на его продукцию, и другими показателями - онкомаркерами, факторами неспецифической резистентности при злокачественных новообразованиях.

Кроме того, существующие методы определения неоптерина - это иммуноферментный, радиоиммунный анализы, а также высокоэффективная жидкостная хроматография, не нашли пока широкого применения в клинической практике вследствие либо своей дороговизны, либо сложности проведения анализа, а также необходимости специфического оборудования и других факторов [19, 21].

На основании вышеизложенного, нами сформулирована цель исследования: установить закономерности изменений уровня неоптерина и его взаимоотношения с цитокинами (ИФ-у, ФНО-а), системой комплемента, онкомаркером (РЭА) и показателем эндотоксикоза у пациентов со злокачественными новообразованиями.

Для достижения поставленной цели последовательно решались следующие задачи:

1. Разработать способ определения неоптерина в сыворотке крови.

2. Изучить концентрацию неоптерина у пациентов с раком желудка, толстого кишечника, молочной железы и почки до и после хирургического лечения.

3. Исследовать концентрацию цитокинов (ИФ-у, ФНО-а), влияющих на продукцию неоптерина, а также уровень раково-эмбрионального антигена, молекул средней массы, и выявить особенности изменений в комплементарном статусе при злокачественных опухолях.

4. Оценить характер корреляционных взаимоотношений между величинами неоптерина, с одной стороны, и значениями цитокинов, раково-эмбрионального антигена, молекул средней массы, параметрами системы комплемента - с другой.

Научная новизна

Впервые разработан высокочувствительный ВЭЖХ метод определения неоптерина в биологических жидкостях с использованием УФ-детектора.

Приоритетным в работе является, раскрытие закономерностей изменений уровня неоптерина во взаимосвязи с некоторыми показателями иммунитета у пациентов со злокачественными образованиями. Установлено, что при онкопатологии желудочно-кишечного тракта наблюдается стимуляция синтеза ФНО-а, приводящая к повышению уровня ИФ-у, который усиливает продукцию неоптерина, что является свидетельством активации клеточного иммунитета. Показано, что оперативное лечение рака желудка снижает интенсивность синтеза неоптерина на фоне уменьшения продукции ИФ-у и ФНО-а. Хирургическое лечение рака толстого кишечника приводит к усилению ИФ-у-независимого пути синтеза неоптерина. При раке молочной железы рост уровня неоптерина обусловлен стимулирующим эффектом, прежде всего, фактора некроза опухолей-а, а после удаления злокачественного очага высокий уровень неоптерина поддерживается за счет активации его синтеза интерфероном-у. Обнаружено, что при раке почки содержание неоптерина не изменяется на фоне повышенной продукции ИФ-У

Теоретическая и практическая значимость

В ходе исследования был проведен сравнительный анализ методов экстракции неоптерина и показана высокая селективность твердофазного способа, что позволяет определять неоптерин с помощью УФ-детектора.

Полученные результаты расширили представление о роли нарушений неоптеринового статуса при злокачественных опухолях, что может быть использовано для разработки способов прогноза и ранней диагностики метастазов при онкологических заболеваниях.

Установлено, что у пациентов при всех изученных локализациях злокачественного процесса происходит активация комплемента, главным образом, за счет альтернативного пути. Корреляционные взаимосвязи между продукцией неоптерина и показателями системы комплемента носят разнонаправленный характер, однако общими являются отрицательные связи между содержанием неоптерина, с одной стороны, и уровнем С5а и СЗа - с другой.

Подана заявка на изобретение «Способ определения неоптерина в крови» №2006106029, приоритет от 26.02.2006.

Материалы работы внедрены в учебный процесс на кафедрах биохимии, патологической физиологии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанный метод определения неоптерина является простым, нетрудоемким, чувствительным и воспроизводимым по сравнению с имеющимися аналогичными методами.

2. Продукция неоптерина и характер его взаимоотношений с уровнем цитокинов (ИФ-у и ФНО-а), определяется локализацией злокачественного процесса. Хирургическое лечение онкологических больных оказывает различное влияние на вышеуказанные показатели

3. Изменения комплементарного статуса у пациентов со злокачественными новообразованиями свидетельствуют о преимущественной активации альтернативного пути.

Апробация работы

Основные положения диссертации и результаты исследований доложены и обсуждены на V Всероссийской университетской научнопрактической конференции молодых ученых и студентов по медицине (Тула, 2006), на X международной конференции «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии» (Москва - Клязьма, 2006), на совместном заседании кафедр биохимии, нормальной физиологии, патологической физиологии, общей химии Читинской государственной медицинской академии с участием сотрудников НИИ экологии при ГОУ ВПО ЧГМА (Чита, 2007).

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста, иллюстрирована 7 рисунками и 23 таблицами и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 32 отечественных и 166 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Ринчинов, Зорикто Цыбикжапович

ВЫВОДЫ:

1. Разработан метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения неоптерина в сыворотке крови с использованием УФ-детекции, характеризующийся высокой воспроизводимостью и чувствительностью.

2. У больных со злокачественным поражением желудочно-кишечного тракта (рак желудка, колоректальный рак) и молочной железы регистрируется повышение содержания неоптерина в сыворотке крови, что свидетельствует об активации моноцитарно-макрофагального звена иммунитета. При раке почки уровень неоптерина не изменяется.

3. Хирургическое лечение обследуемых больных приводит к снижению концентрации неоптерина только у лиц с раком желудка и почки, при раке толстого кишечника его продукция ещё больше усиливается, у пациентов с раком молочной железы остается на прежнем уровне.

4. У больных раком желудка, колоректальным раком гиперпродукция неоптерина сопряжена с активаторным влиянием ИФ-у и ФНО-а, уровень которых значительно возрастает. Наличие злокачественного процесса в молочной железе приводит к росту значений неоптерина за счет стимулирующего эффекта, прежде всего, ФНО-а; после хирургического лечения высокое содержание неоптерина поддерживается за счет активации его синтеза ИФ-у.

5. У всех онкологических больных подъём уровня СЗа, С5а, С1-ингибитора и фактора Н свидетельствует о преимущественной активации комплемента альтернативным путем. Рост концентрации раково-эмбрионального антигена и молекул средней массы при всех локализациях рака носит неспецифический характер и является общей закономерностью злокачественного процесса.

6. Корреляционные взаимоотношения между изучаемыми параметрами у больных с опухолями желудочно-кишечного тракта характеризуются относительной однотипностью (значения ИФ-у положительно коррелируют как с цифрами неоптерина, так и с продукцией ФНО-а ), тогда как при раке молочной железы и раке почки эти зависимости носят разнонаправленный характер. Хирургическое лечение изменяет картину корреляционных взаимосвязей между уровнем неоптерина и содержанием цитокинов, за исключением пациентов с раком желудка.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема злокачественных новообразований остается актуальной в настоящее время, несмотря на прогресс в сфере технологий диагностики и лечения опухолей. За последнее десятилетие наблюдается тенденция снижения заболеваемости онкопатологией желудка, при высоком уровне (один из наиболее высоких в мире среди мужчин) все же произошла стабилизация заболеваемости новообразованиями легкого, трахеи и бронхов. В то же время отмечается рост заболеваемости населения России злокачественными новообразованиями толстого кишечника, кожи, мочевого пузыря, головного мозга, щитовидной железы. Среди мужчин регистрируется интенсивный рост заболеваемости злокачественными новообразованиями предстательной железы, среди женщин - молочной железы. В прошедшем десятилетии впервые за многие годы регистрируется рост заболеваемости среди женщин раком шейки матки, что свидетельствует в числе других причин и о свертывании программ ранней диагностики и профилактики этой патологии [6,7].

В настоящее время уже не вызывает сомнений, что биологические особенности малигнизированной ткани во многом определяют гетерогенность иммунологического ответа организма на опухолевые антигены [8]. Клеточный иммунитет играет одну из ведущих ролей в защите организма от вирусных, инфекционных, паразитарных, аутоиммунных заболеваний, в механизмах отторжении трансплантата, а также в противоопухолевых реакциях. Важную роль в реализации данного процесса принимают Т-лимфоциты и система моноцитов/макрофагов. Полноценный иммунный ответ обеспечен только активным взаимодействием клеток, которое осуществляется с помощью цитокинов -биологически активных веществ, секретируемых активированными клетками иммунной системы. Однако же, определение концентраций отдельных цитокинов не дает полной оценки состояния защитных систем. Это связано с относительно небольшим периодом полужизни цитокинов, которые в короткое время связываются со специфическими, высоко аффинными рецепторами, представленными на клетках-мишенях или циркулирующими в кровотоке. Кроме того, биологический эффект одного цитокина, как правило, реализуется совместно с действием других, поэтому величины индивидуальных представителей этих биологически активных веществ дают весьма ограниченные сведения только о взаимодействии между ними и иммунокомпетентными клетками. В связи с этим, измерение высвобождения биологически более инертного метаболита для дополнительной оценки клеточного звена иммунного ответа представляет максимальный интерес. В последние 10-15 лет, особое внимание уделяется определению уровня неоптерина. И в зарубежной и в отечественной литературе были подробно описаны имеющиеся к тому времени данные о неоптерине и клиническом значении анализа этого вещества. Особенно акцентировался тот факт, что изменение его концентраций в крови отражает совместное действие различных цитокинов на популяцию моноцитов/макрофагов, стимулированных у-интерфероном [27].

Как правило, у онкологических больных величины неоптерина определяются со стадией заболевания, но при некоторых формах злокачественных новообразований, например, при раке желудка, толстого кишечника и почки, такой закономерности не прослеживается [59]. При раке легких гипернеоптеринемия наблюдается в 75% случаев независимо от гистологического типа опухоли, причем концентрация неоптерина до лечения имеет прогностическое значение при аденокарциноме и мелкоклеточной форме. При раке печени уровень неоптерина коррелирует с размерами опухоли и имеет прогностическое значение [160]. Диагностическая чувствительность теста на неоптерин неодинакова при различных вариантах рака и составляет от 100% при поздних стадиях некоторых заболеваний крови до 20% при раке молочной железы [189]. Значимость статуса неоптерина для верификации и прогноза злокачественного новообразования не ниже, а в некоторых случаях даже выше, чем у специфических опухолевых маркеров, таких как раково-эмбриональный антиген, СА 19/9 или щелочная фосфатаза [59, 121]. В целом результаты динамического определения концентрации неоптерина свидетельствуют, что ее увеличение является важным признаком прогрессирования опухолевого процесса, метастазирования или прогностическим критерием летального исхода.

Проведенные нами наблюдения зафиксировали, что у больных с онкопатологией происходят выраженные изменения в продукции неоптерина и некоторых показателях иммунитета. Так, установлено, что у пациентов с впервые выявленным раком желудка и колоректальным раком до оперативного вмешательства уровень неоптеринемии достоверно выше по сравнению с подобным параметром здоровых людей. Полученные данные о содержании неоптерина при раке желудка и колоректальном раке совпадают с мнением других авторов. Повышение уровня неоптерина обнаружено у 40 % больных раком желудка и у 50% больных раком толстой кишки независимо от стадии заболевания [143]. У больных раком почки уровень этого птерина регистрировался в пределах цифр контрольной группы. Данный факт идет в противоречие с данными литературы. Так, в работе [136] повышение содержания неоптерина отмечено у 65 % больных раком почки, независимо от стадии болезни. Мы склонны объяснить это тем, что в данной выборке злокачественный процесс выявлен на 1 и 2 стадии, когда иммунологическая картина не столь развернута. Кроме того, возможно, это объясняется повышенной экскрецией данного птерина пораженной почкой.

Исследование продукции неоптерина позволило определить различия в содержании данного метаболита в сыворотке крови в финале послеоперационного периода. У больных раком желудка наблюдалось значительное понижение уровня неоптерина и даже вплоть до величин показателей здоровых лиц. Одни из наиболее существенных различий обнаружены в группе больных колоректальным раком. Отмечено весьма значительное повышение продукции неоптерина с высокой степенью разницы по сравнению с нормой и до проведенного лечения. В данном случае, вероятно влияние мощного ятрогенного эффекта оперативного вмешательства.

В группе больных раком молочной железы содержание неоптерина имело некоторую тенденцию к снижению, оставаясь однако, в пределах тех значений, что были до проведенного хирургического лечения. У пациентов прооперированных по поводу рака почки, продукция данного вещества резко снижалась и статистически значимо отличался как от цифр контроля, так и от значений неоптерина до проводимого лечения.

Полученные данные о содержании неоптерина в данных группах онкобольных совпадают с результатами других авторов. [189, 184]. Кроме того, отдельные исследователи утверждают, что как правило, уровень неоптерина коррелирует со стадией заболевания, при некоторых формах злокачественных новообразований, например, но при раке желудка, толстого кишечника и почки, такой закономерности не прослеживается [10].

Известно, что к центральным регуляторам иммунологического гомеостаза в организме относятся цитокины, обладающие чрезвычайно широким спектром биологических эффектов. При опухолевом росте нередко изменяется характер взаимодействий в системе «иммунокомпетентные клетки - цитокины», что может лежать в основе нарушений механизмов реализации противоопухолевой защиты организма. [3].

Известно, что а-ФНО посредством высокоаффинных рецепторов взаимодействует с большинством клеток [11]. Он участвует в формировании многих иммунобиологических феноменов в тканях организма, способен изменять реакции лимфоцитов при воспалении. Ему принадлежит важная роль в развитии антибактериального, антипаразитарного, антивирусного иммунитета и противоопухолевых реакций. а-ФНО является ключевым медиатором воспалительных процессов и клеточных иммунных реакций.

Нами установлено незначительное повышение уровня а-ФНО у всех исследуемых больных, но достоверно значимое увеличение наблюдалось только у больных раком желудка. Кроме того, проведенное хирургическое лечение практически не отразилось на продукцию этого пептида. Так Н. Н. Бабышкина и соавт. также не обнаружили статистически подтвержденных данных увеличения концентрации этого цитокина [3]. Совокупность полученных фактов указывает на достаточно низкий активационный потенциал клеток - продуцентов этих щггокинов у больных с онкопатологией.

Как известно, провоспалительный цитокин у-интерферон обладает широким спектром биологических эффектов: противовирусной и тумороцидной активности), активирует моноциты и макрофаги (продукцию цитокинов, кислородный метаболизм, экспрессию адгезивных молекул), NK-клетки (цитотоксичность), пролиферацию и дифференцировку Т-лимфоцитов, стимулирует созревание костномозговых клеток -предшественников моноцитов, подавляет опухолевый рост, размножение вирусов в клетках, пролиферацию, продукцию и секрецию противовоспалительных лимфокинов Tli 2 лимфоцитами (ИЛ-4, ИЛ-10 и др.), пролиферацию В-лимфоцитов и синтез Ig Е, пролиферацию соматических клеток, усиливает дифференцировку опухолевых клеток, противовирусную, противомикробную и антипаразитарную резистентность, тумороцидную активность ФНО-а и противовирусную активность а-интерферона, индуцирует антигенпрсзентацию [22].

Учитывая вышеизложенное, логичным выглядит выявленный нами подъём цифр ИФ-у у всех больных с онкопатологией в среднем более чем в 2 раза по сравнению с контрольной группой. После проведенного радикального хирургического лечения продукция данного лимфокина у больных раком желудка, почки, колоректальным раком значительно снижается, в отличие от значений ИФ-у у пациентов с РМЖ, которые оставались в их прежних границах. По всей видимости, циркуляция повышенного уровня этого провоспалительного цитокина в совокупности с показателями туморонекротического фактора-а свидетельствует о несостоятельности локальных иммунологических механизмов, и постоперативные изменения подтверждают напряженность работы системы иммунитета при исследуемой патологии.

Выяленные нами величины у-интерферона положительно коррелировали со значениями неоптерина у пациентов с раком желудка, почки как до, так и после оперативного лечения, обнаруженное явление имеет вполне логическое объяснение. Из данных литературы известно, что на анаболизм неоптерина в организме человека влияет высвобождающийся из Т-лимфоцитов и NK клеток у-интерферон, который активирует .ключевой фермент в цепочке превращения ГТФ в неоптерин. Так, в работе [122] in vitro было показано, что моноциты человека, стимулированные аллогенными или модифицированными клетками, выделяют в кулыуральную жидкость большое количество неоптерина. Дальнейшие опыты in vitro с участием Т-лимфоцитов и культуры макрофагов показали, что экскреция неоптерина является результатом комплексного взаимодействия клеток. В ответ на стимуляцию Т-клетки секретируют у-ИФ, который вызывает экскрецию неоптерина макрофагами. Клинико-лабораторные исследования подтвердили участие лимфокина в контроле за выделением неоптерина, поскольку заболевания, при которых происходит нарастание содержания интерферона, сопровождаются и повышенным уровнем птерина [35].

Таким образом, становится понятной выявленная взаимосвязь в продукции неоптерина и интерферона-у при аденокарциноме желудка и раке почек.

Наличие отрицательных корреляций между неоптерином и у-интерфероном у пациентов с колоректальным раком после лечения мы попытались объяснить следующим образом. Как было проиллюстрировано выше, активность ключевого фермента в синтезе всех птеридинов, в том числе и неоптерина, ГТФ циклогидролазы-I индуцируется у-ИФ. Но существует, так называемый, гамма-интерферон независимый путь синтеза неоптерина, который менее значим чем основной, но приводящий к умеренному увеличению его концентрации при бактериальных инвазиях.

Это связано со способностью пнрогенов, а именно липополисахаридов клеточной стенки бактерий, индуцировать снижение экспрессии ГТФ циклогидролазы-I регуляторным белком GFRP. Вышеназванный регулятор является активатором ГТФ циклогидролазы-I, с последующей генерацией всего спектра птеридинов в том числе и неоптерина [35]. Вероятно, имело место воздействие микробного пейзажа толстого кишечника липополисахарид ассоциированным путем на продукцию последнего в данной группе больных после оперативного вмешательства.

Стоит так же отметить, что основной механизм, провоцирующий невысокий рост концентрации неоптерина при острых бактериальных инфекциях, связан со способностью пнрогенов стимулировать продукцию у-ИФ Т-клетками, без вовлечения туморонекротического фактора-а, [58, 190, 159, 55, 91, 138], чего в данном случае не наблюдалось.

У больных раком молочной железы подобные взаимосвязи мало актуальны, поскольку уровень неоптерина был увеличен, но достоверно не отличался от цифр контроля. Возможно, это связано с тем, что в изучаемом варианте озлокачествления малигнизация гормонально зависима и, как известно, сопровождается фоновым увеличением секреции эстрогенов, и соответственно, гипосекрецией прогестинов. Поскольку последние по механизму действия сходны с глюкокортикостероидами, то возможно на производство неоптерина они воздействуют аналогичным образом. В главе I указано, что глюкокортикоиды селективно подавляют продукцию цитокинов Тх-1 профиля, в частности у-ИФ, антигенпрезентирующими и Т-клетками, приводя к сдвигу иммунного ответа по Тх-2 гуморальному пути с образованием всего спектра противовоспалительных цитокинов [70]. Также, оговаривается факт снижения экспрессии мРНК ГТФ ЦГ-1 в различных клетках организма, вызванном глюкокортикоидами [123, 81, 126, 85]. Следствием вышеописанных эффектов и является снижение уровня неоптерина в организме при применении данных гормонов [61]. Безусловно, этот вопрос заслуживает внимания, но так как отсутствуют достаточно четкие сведения из литературных источников, которые подтверждали бы либо опровергали бы высказанное предположение, мы полученные результаты оставляем без попыток их объяснения.

Механизмы функционирования системы комплемента при неопластических процессах недостаточно изучены. Роль комплементарной системы при опухолевых процессах без учета протеолитической активности плазмы была изучена рядом авторов. Полученные результаты весьма противоречивы: отмечены изменения значений некоторых компонентов комплемента при опухолевых процессах [17, 23, 119, 152].

Полученные нами результаты свидетельствуют о наличии общих тенденций в активации иммунологического процесса у онкологических больных. Обращает на себя внимание многократное увеличение концентрации отдельных компонентов системы: СЗа и С5а факторов на фоне относительно низкой гемолитической активности в классическом пути активации комплемента. Кроме того, значительный рост цифр С1-ингибитора во всех группах свидетельствует о напряженном регулировании процессов связанных с расходом первого компонента комплемента, и соответствующее снижение фактора Н косвенно указывают на активацию комплемента альтернативным путем, что совпадает с мнением других авторов. G. Pontoeri et al. [156] считают, что в основе этого явления лежит потребление компонентов CI, С4 и С2 иммунными комплексами при опухолях. Данные F. Praz et al. [158] регистрируют активацию альтернативного пути лимфоцитами больных хроническим лимфолейкозом в отличие от клеток при других формах лейкозов и нормальных лейкоцитов; причины этого явления окончательно не выяснены.

Неопластические процессы, особенно злокачественные, сопровождаются неспецифическими изменениями ферментативных систем организма человека. В норме протеазы играют существенную роль в обменных и регуляторных процессах. Механизмы протеолитического контроля высокоэффективны в клетке благодаря их структурной простоте и энергетической экономичности. Реакции протеолиза необратимы и одноступенчаты, и поэтому их результат всегда однозначен. Протеолитический контроль, являясь относительно самостоятельным регуляторным явлением, имеет точки сопряжения с эволюционно более поздними и динамичными сигнальными механизмами. Однако в нормоцитах именно этот процесс предопределяет итоговый ответ клетки на внешнее воздействие, включая цитокины и другие гуморальные регуляторные молекулы иммунной системы.

В злокачественно трансформированных клетках возможности протеолиза ограничены, он осуществляется лишь некоторыми каспазами, а активность протеосомы и действие лизосомальных ферментов направлены лишь на определенные субстраты. Повышение выявляемой активности трипсина, эластазоподобных протеиназ, коллагеназы и катепсинов регистрируется при опухолевых заболеваниях пищеварительного тракта, легких и других органов и тканей [161, 181]. Избирательность в активности различного рода систем протеолиза резко снижает эффективность ответа малигнизированной клетки на проапоптотический и антипролиферативный сигналы цитокинов. Активация протеаз при онкопатологии может приводить к усилению ферментативного расщепления цитокинов, хемокинов, антител, компонентов комплемента, что, безусловно, влияет на состояние защитных свойств организма - факторов адаптивного и врожденного иммунитета. [23, 171]. В этой связи недостаточная активность системы протеолиза в злокачественно трансформированных клетках следует рассматриваться как цитоплазматический механизм формирования иммунной толерантности.

Таким образом, депрессия антипролиферативной и проапопто-тической составляющих действия цитокинов и комплементарной системы на малигнизированные клетки достигается уменьшением выраженности и интенсивности реакций протеолиза, которые в свою очередь обеспечиваются активностью протеосомы и/или соответствующих каспаз. [3]

У всех больных рассматриваемого спектра онкопатологий выявлены повышенные концентрации раково-эмбрионального антигена. Падение величин РЭА после хирургической коррекции во всех группах, кроме больных раком почки, согласно традиционным представлением является показателем эффективности проводимого лечения. У пациентов с аденокарциномой желудка уровень РЭА коррелировал с производством неоптерина. По всей видимости, это связано прежде всего с оперативным вмешательством, в ходе которой удалена озлокачествленная ткань продуцирующая данный онкомаркер. К сожалению, данное вещество обладает низкой специфичностью и обычно для повышения прогностической ценности и чувствительности в диагностике различных форм рака требует сочетанного применения с другими органоспецифическими маркерами злокачественного перерождения.

Таким образом, разработанный способ высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением твердофазной экстракции и УФ детекции неоптерина, позволил нам определить уровень данного метаболита в сыворотке крови онкологических больных. Кроме того, при данных нозологических формах рака наблюдается увеличение концентрации неоптерина, гиперпродукция которого макрофагами связана с активаторным влиянием ИФ-у и ФНО-а. Данный факт косвенно свидетельствует об активации клеточного иммунитета при злокачественных опухолях. Проведенное хирургическое лечение онкологических больных оказывает различное влияние на вышеуказанные показатели. Изменения комплементарного статуса свидетельствуют о преимущественной активации альтернативного пути, а рост концентрации раково-эмбрионального антигена и молекул средней массы при всех локализациях рака носит неспецифический характер и является общей закономерностью злокачественного процесса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Ринчинов, Зорикто Цыбикжапович, 2007 год

1. Адо А.Д. Патологическая физиология / А.Д. Адо М. : Триада-Х, 2000. - 576 с.

2. Акбашева О.Е. Активность протеолитических ферментов и их ингибиторов в плазме крови и мышей при опухолевом росте / О.Е Акбашева, Г. А Суханова//Бюлл. экспер. биологии. 1999. -Т.128, №7 -С. 69-72.

3. Антонов В.Г. Патогенез онкологических заболеваний. Цитоплазматические и молекулярно-генетические механизмы иммунной резистентности малигнизированных клеток / В.Г. Антонов,

4. B.К. Козлов // Цитокины и воспаление. 2004. - Т.З, №2. - С. 23-33.

5. ВЭЖХ анализ неоптерина в сыворотке крови и моче с УФ- и флюориметрической детекцией / А.А. Дутов и др. // Теоретич. проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии : X междунар. конф М. - Клязьма, 2006. - С. 295.

6. Иммунологические параметры и уровень продукции цитокинов у больных с пролиферативными заболеваниями и раком молочной железы / Н.Н. Бабышкина и др. // Цитокины и воспаление. 2006. - Т.5, №1.1. C. 37-43.

7. Иегер. Л. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Л. Йегера. -М.: Медицина, 1986. Т.1. - 155с.

8. Клиническое значение неоптерина при заболеваниях человека / Д. Фукс и др. // Тер. архив. 1993. - № 5. - С. 80-87.

9. Козлов В.А. Некоторые аспекты проблемы цитокинов / В.А. Козлов // Цитокины и воспаление. -2002. Т.2, №1. - С. 11-14.

10. Кузник Б.И. Физиология и патология системы крови / Б.И. Кузник. -Чита. : Поиск, 2000. 284с.

11. Метод определения активности компонентов комплемента / JI.B. Козлов и др. // Биоорганическая химия. 1982. - Т.8, №5. - С. 652-659.

12. Модификация компонентов комплемента под действием катионных белков лейкоцитов доноров и больных лейкозами / Л.П. Рыбакова и др. // Вопр. мед. хим. 1993. - №5. - С. 38-41.

13. Нагорнев В.А. Цитокины, иммунное воспаление и атеросклероз // В.А. Нагорнев, Е.Г. Зота // Успехи современ. биологии. 1996. - Т.2 - Вып. З.-С. 320-331.

14. Неоптерин: новый иммунологический маркер аутоиммунных ревматических заболеваний / Е.Л. Насонов и др. // Клин, медицина. -2000.-№8. -С. 43-46.

15. Неспецифические изменения системы комплемента при неопластических процессах / Ю.В. Тяготин и др. // Вопр. онкологии. -2002. Т.48, №2. - С. 206-210.

16. Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования / Ю.Л. Земскова и др. М.: РУДН, 2003. - 67 с.

17. Орлова О.В. Диагностическое значение неоптерина при инфицировании вирусами пациентов с пересаженным сердцем / О.В. Орлова, Р.Б. Манцаева, О.П. Шевченко // Клин. лаб. диагностика. 2006. - №2. - С. 10-12.

18. Рыдповская А.В. Функциональный полиморфизм гена TNF а и патология / А.В. Рыдловская, А.С. Симбирцев / Цитокины и воспаление. 2005. - Т.4, №3. - С. 4-10.

19. Свиридов Е.А. Неоптерин и его восстановленные формы: биологическая роль и участие в клеточном иммунитете / Е.А.

20. Свиридов, Т.А. Телегина // Успехи биол. химии. 2005. - Т.45. - С. 355-390.

21. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции / А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2004. - Т.З, №2. - 16-22.

22. Содержание компонентов комплемента в плазме онкогематологических больных при недостаточности гемопоэза. / Л.П. Рыбакова и др. // Вопр. онкол. 1996. - Т. 42, № 2. - С. 63-67.

23. Содержание цитокинов IL-lp, TNFa и уровни антител к TNFa у больных с онкологическими и воспалительными заболеваниями / А.И. Аутеншлюс и др. // Цитокины и воспаление. 2005. - Т.4, №3. - С. 1115.

24. Хорст А. Молекудярные основы патогенеза болезней / А. Хорст. Пер. с пол. М., 1982.-256с.

25. Цитокины в кроветворении, иммуногенезе и воспалении / Е.Б. Жибера и др. // Терра Медина Нова. 1996. - №3. - С. 64-69.

26. A new HPLC method for serum neopterin measurement and relationships with plasma thiols levels in healthy / C. Carru et al. // Bioined. Chromatogr. -2004.-Vol. 18.-P. 360-366

27. Abnormal carcinoembryonic antigen levels and medullary thyroid cancer progression: a multivariate analysis / A. Machens et al. // Arch. Surg. -2007. Mar; 142(3). - P. 289-293.

28. Aktan F. iNOS-mediated nitric oxide production and its regulation / F. Aktan// Life Sci. 2004. - Jun 25; 75(6). - P. 639-653.

29. Alpha-MSH production, receptors, and influence on neopterin in a human monocyte/macrophage cell line / N. Rajora et al. // J. Leukoc. Biol. 1996. -Feb; 59(2).-P. 248-253.

30. Alpha-MSH in systemic inflammation. Central and peripheral actions / A. Catania et al. // Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1999. - Oct 20; 885. - P. 183-187.

31. Association between homocysteine and neopterin in healthy subjects measured by a simple HPLC-fluorometric method / N. Turgan et al. // Clin. Biochem. -2001. Jun; 34(4). - P. 271-275.

32. Bacterial lipopolysaccharide down-regulates expression of GTP cyclohydrolase I feedback regulatory protein / E.R. Werner et al. // J. Biol Chem. -2002. Mar 22; 277(12). - P. 10129-10133.

33. Baggott J.E. The effect of methotrexate and 7-hydroxymethotrexate on rat adjuvant arthritis and on urinary aminoimidazole carboxamide excretion / J.E. Baggott, S.L. Morgan, W.J. Koopman // Arthritis Rheum. 1998. -Aug; 41(8).-P. 1407-1410.

34. Barak M. Interleukin-2 and neopterin-induced neopterin release from peripheral blood mononuclear cells / M. Barak, D. Merzbach, N. Gruener // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1990. - Nov; 50(7). - P. 705-714.

35. Barak M. Neopterin augmentation of tumor necrosis factor production / M. Barak, N. Gruener. // Immunol. Lett. 1991. - Sep; 30(1). - P. 101-106.

36. Barthakur S.R. Catalysis of the Haber-Weiss reaction by iron-diethylenetriaminepentaacetate / S.R. Barthakur, P. Aisen // J. Inorg. Biochem. 1992. - Dec; 48(4). - P. 241-249.

37. Bassan A. Mechanism of dioxygen cleavage in tetrahydrobiopterin-dependent aminoacid hydroxylases / A. Bassan, M.R. Blomberg, P.E Siegbahn // Chemistry. 2003. - Jan 3; 9(1). - P. 106-115.

38. Bellahsene Z. Guanosine triphosphate cyclohydrolase activity in rat tissues / Z. Bellahsene, J.L. Dhondt, J.P. Farriaux // Biochem. J. 1984. - Jan. 1; 217(1).-P. 59-65.

39. Bermingham A. The folic acid biosynthesis pathway in bacteria: evaluation of potential for antibacterial drug discovery / A. Bermingham, J.P. Derrick // Bioessays. 2002. - Jul; 24(7). - P. 637-648.

40. Biliary and urinary neopterin concentrations in monitoring liver-allograft recipients / A. Hausen et al. // Clin. Chem. 1993. - Jan; 39(1). P. 45-47.

41. Biosynthesis and metabolism of pterins in peripheral blood mononuclear cells and leukemia lines of man and mouse / G. Schoedon et al. // Eur. J. Biochem. 1987. - Vol. 166. - P. 303-310.

42. Buettner G.R. Catalytic metals, ascorbate and free radicals: combinations to avoid / G.R. Buettner, B.A. Jurkiewicz // Radiat. Res. 1996. - May; 145(5).-P. 532-541.

43. Carcinoembryonic antigen-producing multiple myeloma detected by a transcription-reverse transcription concerted reaction system / K. Kaito et al // Int. J. Hematol. 2007. - Feb; 85(2). - P. 128-131.

44. Cerebrospinal fluid neopterin concentrations in central nervous system infection / L. Hagberg et al. // J. Infect. Dis. 1993. - Nov; 168(5). - P. 1285-1288.

45. Characteristics of interferon induced tryptophan metabolism in human cells in vitro / G. Werner-Felmayer et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1989. - Jul11; 1012(2).-P. 140-143.

46. Contrasting effects of interferon-gamma and interleukin-4 on neopterin generation from human adherent monocytes / A. Moutabarrik et al. // Lymphokine Cytokine Res. 1992. - Dec; 11(6). - P. 327-330.

47. Control of pteridine biosynthesis in the natural killer-like cell line YT / K. Schott et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. - May 15; 176(3). -P. 430-436.

48. Control of the complement system / M.K. Liszewski et al. // Adv. Immunol. 1996. - Vol. 61. - P. 201-283.

49. Control of tetrahydrobiopterin synthesis in T lymphocytes by synergistic action of interferon-y andinterleukin-2 / I. Ziegler et al. // J. Biol. Chem. -1990. Vol. 265. - P. 17026-17030.

50. Correlation between neopterin, interferon-gamma and haemoglobin in patients with haematological disorders / H. Denz et al. // Eur. J. Haematol. -1990.-Mar; 44 (3).-P. 186-189.

51. Davis M.D. The tyrosine-dependent oxidation of tetrahydropterins by lysolecithin-activated rat liver phenylalanine hydroxylase / M.D. Davis, S. Kaufman // J. Biol. Chem. 1988. - Nov 25; 263 (33). - 17312-17316.

52. Decreased plasma tetrahydrobiopterin in pregnant women is caused by impaired 6-pyruvoyl tetrahydropterin synthase activity / D. Tachibana et al. // Int. J. Mol. Med. 2002. - Jan; 9(1). - P. 49-52.

53. Detection of bacterial pyrogens on the basis of their effects on gamma interferon-mediated formation of neopterin or nitrite in cultured monocyte cell lines / G. Werner-Felmayer et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. -1995. -May; 2(3).-P. 307-313.

54. Determination of neopterin a marker of cellular immunity in gastrointestinal and pancreatic carcinoma / F. Conrad et al. // Biochemical and Clinical Aspects of Pteridines. - 1984. - Vol. 3. - P. 357-366.

55. Differential effect of dexamethasone on interleukin lbeta and cyclic AMP-triggered expression of GTP cyclohydrolase I in rat renal mesangial cells /

56. С. Pluss et al. // Br. J. Pharmacol. 1997. - Oct; 122(3). - P. 534-538.

57. Differential effect on serum neopterin and serum beta 2-microglobulin is induced by treatment in Pneumocystis carinii pneumonia / T.L. Benfield et al. // J. Infect. Dis. 1994. - May; 169 (5). - P. 1170-1173.

58. Dinarello C.A. Proinflammatory cytokines / C.A. Dinarello // Chest. 2000. -Aug; 118(2).-P. 503-508.

59. Distinct distributions of D-erythro-neopterin in arteries and veins and its recovery by an enterohepatic circulation / G. Weiss et al. // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1992. - May; 373(5). - P. 289-294.

60. Down-regulatory effect of N-chlorotaurine on tryptophan degradation and neopterin production in human PBMC / E. Wirleitner et al. // Immunol. Lett. -2004.-May 15; 93(2-3).-P. 143-149.

61. Dugas B. Nitric oxide production in human inflammatory processes / B. Dugas, J.P. Kolb // Res. Immunol. 1995. -Nov-Dec; 146(9). - P. 661-663.

62. Duggan S. Protein and thiol oxidation in cells exposed to peroxyl radicals is inhibited by the macrophage synthesised pterin 7,8-dihydroneopterin / S. Duggan et al. // Biochim. Biophys. Acta. 2002. - Augl9; 1591(1-3). - P. 139-145.

63. Effects of interferons beta or gamma on neopterin biosynthesis and tryptophan degradation by human alveolar macrophages in vitro: synergy with lipopolysaccharide / K.C. Meyer et al. // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 1992. - Jun; 6(6). - P. 639-646.

64. Effects of neopterin-derivatives on H202-induced luminol chemiluminescence: mechanistic aspects / C. Murr et al. // Free Radic. Biol Med. 1996. -21(4). - P. 449-456.

65. Effects on leukocytes after injection of tumor necrosis factor into healthy humans / T. Van der Poll et al. // Blood. 1992. - Feb 1; 79(3). - P. 693698.

66. Elenkov I.J. Glucocorticoids and the Thl/Th2 balance / I.J. Elenkov . // Ann. N-Y. Acad. Sci. 2004. - Jun; 1024. - P. 138-146.

67. Endogenous release of interferon-gamma and dimin ished response of peripheral blood mononuclear cells to antigenic stimulation / Fuchs D.et al. // Immunol. Lett. 1989. - Vol. 1990:23. - P. 103-108.

68. Engelmann M.D. Variability of the Fenton reaction characteristics of the EDTA, DTPA, and citrate complexes of iron / M.D. Engelmann et al. // Biometals. -2003. Vol. 16 (4). - P. 519-527.

69. Enhancement of hydrogen peroxide-induced luminol-dependent chemiluminescence by neopterin depends on the presenceof iron chelator complexes / C. Murr et al. // FEBS Lett. 1994. - Vol. 338. - P. 223-226.

70. Evidences for iNOS expression and nitric oxide production in the human macrophages / M.A. Panaro et al. // Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord. -2003. Sep; 3(3). - P. 210-221.

71. Expression of complement regulatory proteins CR1, DAF, MCP and CD59 in haematological malignancies / D. Guc et al. // Europ. J. Haematol. 2000, Jan; 64(1).-P. 3-9.

72. Factors influencing serum neopterin concentrations in a population of blood donors / H. Schennach et al. // Clin. Chem. 2002. - Vol. 48(4). - P. 643645.

73. Fisher D.B., Kaufman S. Tetrahydropterin oxidation without hydroxylation catalyzed by rat liver phenylalanine hydroxylase / D.B. Fisher, S. Kaufman // Biochemistry.-2004.-Aug 12; 1452 (1-3). P. 120-131.

74. Fitzpatrick P.F. Mechanism of aromatic aminoacid hydroxylation / P.F. Fitzpatrick // Biochemistry. 2003. - Dec 9; 42(48). - P. 14083-14091.

75. Fitzpatrick P.F. Tetrahydropterin-dependent aminoacid hydroxylases / P.F. Fitzpatrick // Annu. Rev. Biochem. 1999. - Vol. 68. - P. 355-381.

76. Formation of oxygen radicals in solutions of 7,8-dihydroneopterin / K. Oettl et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - Oct 14; 264(1). - P. 262-267.

77. Forrest H.S. Conversion of 2-amino-4-hydroxypteridine to isoxanthopterin in D. Melanogaster / H.S. Forrest, E. Glassman, H.K. Mitchell // Science. -1956. Oct 19; 124 (3225):72. - P. 5-6.

78. Fredrikson S. CSF neopterin as marker of disease activity in multiple sclerosis / S. Fredrikson, H. Link, P. Eneroth // Acta. Neurol. Scand. 1987. -May; 75(5).-P. 352-355.

79. Fukusliima T. Analysis of reduced forms of biopterin in biological tissues and fluids / T. Fukushima, J.C Nixon // Anal. Biochem. 1980. - Vol. 102. -P. 176-188.

80. Functional tetrahydrobiopterin synthesis in human platelets / N. Franscini et al.//Circulation.-2004.-Jul 13; 110(2).-P. 186-192.

81. Generation of carbon monoxide and iron from hemeproteins in the presence of 7,8-dihydroneopterin / R. Horejsi et al. // Biochim. Biophys. Acta. -2002. Jun 6; 571(2). - P. 124-130.

82. Gieseg S.P. Inhibition of THP-1 cell-mediated low-density lipoprotein oxidation by the macrophage-synthesised pterin, 7,8-dihydroneopterin / S.P. Gieseg, S. Cato. // Redox Rep. 2003. - Vol. 8 (2). - P. 113-115.

83. Goldberg M. Studies and comparison of pterin patterns in the plasma of dogs and cats and their alteration in various neoplasias and virus infections / M. Goldberg, C. Fuchs // Zentralbl. Veterinarmed A. 1996. - Jun; 43(4). -201-209.

84. GTP cyclohydrolase I mRNA: novel splice variants in the slime mould Physarum polycephalum and in human monocytes (THP-1) indicateconservation of mRNA processing / G. Golderer et al. // Biochem. J. 2001.-Vol. 355. - P. 499-507.

85. Henderson D.C. Stimulus-dependent production of cytokines and pterins by peripheral blood mononuclear cells / D.C Henderson, J.J. Rippin // Immunol. Lett. 1995. - Feb; 45(1-2). - P. 29-34.

86. Hoffmann G.F. Cerebrospinal fluid investigations for neurometabolic disorders / G.F. Hoffmann, R.A. Surtess, R.A. Wevers // Neuropediatrics.1998.-Vol. 29.-P. 59-71.

87. HPLC Determination of Neopterin in Biological Liquids for Clinical Purposes / A. A. Dutov et al. // Russian Journal of Physical Chemistry A. 2007. - Vol. 81, No. 3. - P. 421-423.

88. Hyperhomocysteinemia, pteridines and oxidative stress / B. Widner et al. // Curr. Drug. Metab. 2002. - Apr; 3(2). - P. 225-232.

89. IL-4 down-regulates IL-1 and TNF gene expression in human monocytes / R. Essner et al. // J. Immunol. 1989. - Jun 1; 142(11). - P. 3857-3861.

90. Immune response associated production of neopterin release from macrophagei primarily under control of interferon-gamma / C. Huber et al. J. Exp .Met. - 1984. - Vol. 160. - P. 310-316.

91. Increased neopterin concentrations in patients with cancer: indicator of oxidative stress? / C. Murr et al. // Anticancer Res. 1999. - May-Jun; 19 (ЗА).-P. 1721-1728.

92. Increased production of immune activation marker neopterin by colony-stimulating factors in gynecological cancer patients / C. Marth et al. // Int. J. Cancer. 1994. - Jul 1; 58(1). - P. 20-23.

93. Induction of GTP cyclohydrolase I by bacterial lipopolysaccharide in the rat / G. Werner-Felmayer et al. // FEBS Lett. 1993. - May 17; 322(3). - P. 223.

94. Induction of nitric oxide and nitric oxide synthase mRNA by silica and lipopolysaccharide in PMA-primed THP-1 cells / F. Chen et al. //. APMIS. -1996. Mar; 104(3). - P. 176 -182

95. Induction of tetrahydrobiopterin synthesis in human umbilical vein smooth muscle cells by inflammatory stimuli / R. Walter et al. // Immunol. Lett. -1998.-Jan; 60(1).-P. 13-17.

96. Influences of interleukins 2 and 4 on tumor necrosis factor production by murine mononuclear phagocytes / W.H. McBride et al. // Cancer Res. -1990. May 15; 50(10). - P. 2949-2952.

97. Insights into the respiratory electron transfer pathway from the structure of nitrate reductase A / M.G. Bertero et al. // Nat. Struct. Biol. 2003. - Sep; 10(9).-P. 681-687.

98. Interference of 7,8-dihydroneopterin with peroxynitrite-mediated reactions / K. Oettl et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. - Aug 20; 321(2).-P. 379-85.

99. Interferon-gamma modifies cytokine release in vitro by monocytes from surgical patients / C. Schinkel et al. // J. Trauma. 2001. - Feb; 50(2). - P. 321-323.

100. Interferon-gamma stimulates neopterin release from cultured kidney epithelial cells / A. Moutabarrik et al. // Scand. J. Immunol. 1994. - Jan; 39(1).-P. 27-30

101. Interleukin 2 enhancement of lymphokine secretion by established T cell clones / H.M. Johnson, B.A. Torres // J. Immunol. 1984. - Oct; 133(4). -P. 2278.

102. Intraperitoneal fluid neopterin, nitrate, and tryptophan after regional administration of interleukin-12 / B. Melichar et al. // J. Immunother. -2003. May-Jun; 26(3). - P. 270-276.

103. Investigation of alpha-pinene + ozone secondary organic aerosol formation at low total aerosol mass / A.A. Presto et al. // Environ. Sci. Technol. -2006. Jun 1; 40(11). - P. 3536-3543.

104. Iron-catalyzed hydroxyl radical formation. Stringent requirement for free iron coordination site / E. Graf et al. // J. Biol. Chem. 1984. - Mar 25; 259(6).-P. 3620-3624.

105. Isolation of a new naturally occurring pteridine from bacteria, and its relation to folic acid biosynthesis / M. Goto et al. // Arch Biochem. Biophys. 1965.-Jul; 111(1).-P. 8-14.

106. Jacobson K.B. Effects of sepiapterin and 6-acetyldihydrohomopterin on the guanosine triphosphate cyclohydrolase I of mouse, rat and the fruit-fly Drosophila / K.B. Jacobson R.E. Manos // Biochem J. 1989. - May 15; 260(1).-P. 135-141.

107. Kaufman S. New tetrahydrobiopterin-dependent systems / S. Kaufman // Annu. Rev. Nutr. 1993. - Vol. 13. - P. 261-286.

108. Kisker C. Molybdenum-cofactor-containing enzymes: structure and mechanism / C. Kisker, H. Schindelin, D.C. Rees // Annu. Rev. Biochem. -1997.-Vol. 66.-P. 233-267.

109. Koff W.C. Modulation of macrophage-mediated tumoricidal activity by neuropeptides and neurohormones / W.C. Koff, M.A. Dunegan // J. Immunol. 1985. - Jul; 135(1). - P. 350-354.

110. Krause A. Correlation between synovial neopterin and inflammatory activity in rheumatoid arthritis / A. Krause, H. Protz, K.M. Goebel // Ann. Rheum. Dis. 1989. - Aug; 48(8). - P. 636-640.

111. Large-scale production of human tumorcytotoxic macrophages grown from blood monocytes of cancer patients / W. Brugger et al. // Cancer Detect. Prev. 1991. - 15(5). - P. 407-412.

112. Lebedeva T.V. Regulation of Classical Pathway of Complement Activation by Interferons / T.V. Lebedeva, L.V. Kozlov // Russ. J. Immunol. 1997. -Jul; 2(2).-P. 129-134.

113. Levels of complement regulatory proteins CD3 (CR1), CD46 (MCP) and CD55 (DAF) in human haematological malignancies / Нага T. et al. // Br. J. Haematol. 1992. - V. 82. - P. 368-373.

114. Levings M.K. IL-4 inhibits the production of TNF-alpha and IL-12 by STAT6-dependent and -independent mechanisms / M.K. Levings, J.W. Schrader//J. Immunol. 1999. - May 1; 162(9). - P. 5224-5229.

115. Lewenhaupt A. Serum levels of neopterin as related to the prognosis of human prostatic carcinoma / A. Lewenhaupt et al. // Europ.Urol. 2001. -Vol.12.-422-425.

116. Low tetrahydrobiopterin biosynthetic capacity of human monocytes is caused by exon skipping in 6-pyruvoyl tetrahydropterin synthase / K.L. Leitner et al. // Biochem. J. 2003. - Aug 1; 373(Pt 3). - P. 681-688.

117. Macrophage activity during high dose steroid pulse therapy and 7S-immunoglobulin administration in patients with collagenoses / H. Zmierczak et al. // Comparison with in vitro studies Immun. Infekt. 1991. - Jun; 19(3).-P. 95-96.

118. Macrophage heterogenety and differentiation: defined serum-free culture conditions induce different types of macrophages in vitro / M. Kreutz et al. // Res. Immunol.- 1992.-Jan; 143(1).-P. 107-115.

119. Margreiter J. Possible uses of transesophageal echocardiography in perioperative monitoring / J. Margreiter, C. Hormann, P. Mair // Anaesthesist. 2000. - Jan; 49(1). - P. 74-92.

120. Mitchell B.M. GTP cyclohydrolase 1 inhibition attenuates vasodilation and increases blood pressure in rats / B.M. Mitchell, A.M. Dorrance, R.C. Webb // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - Nov; 285(5). - P. 21652170.

121. Modulation of LDL oxidation by 7,8-dihydroneopterin / J. Greilberger et al. // Free Radic. Res. 2004. - Jan; 38(1). - P. 9-17.

122. Modulation of neopterin formation and tryptophan degradation by Thl- and Th2-derived cytokines in human monocytic cells / G. Weiss et al. // Clin. Exp. Immunol. 1999. - Jun; 116(3). - P. 435-440.

123. Modulatory effect of a serine protease inhibitor on surgical stress: its clinical implications / H. Iwagaki et al. // Acta. Med. Okayama. 1999. - Oct; 53(5).-P. 239-244.

124. Molecular characterization of HPH-1: a mouse mutant deficient in GTP cyclohydrolase I activity / M. Gutlich et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. - Sep 30; 203(3). - P. 1675-1681.

125. Multiple molecular markers as predictors of colorectal cancer in patients with normal perioperative serum carcinoembryonic antigen levels / J.Y. Wang et al. // Clin. Cancer. Res. 2007. - Apr 15; 13(8). - P. 2406-2413.

126. Multiple mRNA forms of human GTP cyclohydrolase I / A. Togari et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. - Vol. 187. - P. 359-365.

127. Neopterin its clinical use in urinalysis / D. Fuchs et al. // Kidney Int. -1994. - Vol. 46(Suppl 47). - P. 8-11.

128. Neopterin and 7,8-dihydroneopterin interfere with low density lipoprotein oxidation mediated by peroxynitrite and/or copper / I. Herpfer et al. // Free Radic. Res. 2002. - May; 36(5). - P. 509-520.

129. Neopterin as a marker for activated cell-mediated immunity: application in malignant disease / G. Reibnegger et al. // Cancer Detect. Prev. 1991. -Vol. 15.-P. 483-490.

130. Neopterin as a marker for activated cell-mediated immunity: application in HIV infection / D. Fuchs et al. // Immunol. Today.- 1988. Vol. 9. - P. 150-155.

131. Neopterin as a marker for immune system activation / C. Murr et al. // Curr. Drug Metab. 2002. - Apr; 3(2). - P. 175-187.

132. Neopterin concentrations in fetal and maternal blood: a marker of cell-mediated immune activation / N. Radunovic et al. // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1999. Jul; 181(1). - P. 170-173.

133. Neopterin in AIDs, other immunodeficiencies, and bacterial and viral infections / A. Niederwieser et al. // Klin. Wochenschr. 1986. - Apr 1;64(7). 333-337.

134. Neopterin modulates toxicity mediated byreactive oxygen and chlorine species / G. Weiss et al. // FEBS Lett. 1993. - Vol. 321. P. 89-92.

135. Neopterin release from human endothelial cells is triggered by interferon-gamma / S.E. Andert et al. // Clin. Exp. Immunol. 1992. - Jun; 88(3). - P. 555-558.

136. Neora tumor marker in colorectal carcinoma? / H. Putzki et al. // Dis. Colon, Rectum. 1987. - Vol. 30 - P. 879-883.

137. Neutrophils: molecules, functions and pathophysiological aspects / V. Witko-Sarsat et al. // Lab. Invest. 2000. - May; 80(5). - P. 617-653.

138. Nichol C.A. Biosynthesis and metabolism of tetrahydrobiopterin and molybdoterin / C.A. Nichol, O.K. Smith, D.S. Duch //Annu. Rev. Biochem. -1986.-Vol. 54.-729-761.

139. Nitric oxide production in human macrophagic cells phagocytizing opsonized zymosan: direct characterization by measurement of the luminol dependent chemiluminescence / A. Gross et al. // J. Free Radic Res. 1998. -Feb; 28 (2).-P. 179-191.

140. Oettl K. Pteridine derivatives as modulators of oxidative stress / K. Oettl, G. Reibnegger // Curr. Drug. Metab. 2002. - Apr; 3 (2). - P. 203-209.

141. Opal S.M. Anti-inflammatory cytokines / S.M. Opal, V.A. DePalo // Chest. -2000.-Apr; 117 (4).-P. 1162-1172.

142. Oxidation of 7,8-dihydroneopterin by hypochlorous acid yields neopterin / B. Widner et al. // Biochem. Biophys. Res. Cornmun. 2000. - Aug 28; 275(2).-P. 307-311.

143. Oxidation of tetrahydrobiopterin by biological radicals and scavenging of the trihydrobiopterin radical by ascorbate / K.B. Patel et al. / Free Radic. Biol. Med. 2002. - Feb 1; 32(3). - P. 203-211.

144. Peroxidase catalysed aerobic degradation of 5,6,7,8-tetrahydrobiopterin at physiological pH / W.L. Armarego et al. // Eur. J. Biochem. 1983. - Oct 3; 135(3).-P. 393-403.

145. Persistent complement activation on tumor cell in breast cancer / F. Niculescu et al. // J. Pathol. 1992. - Vol. 140. - P. 1039-1043.

146. Phase I study of intraperitoneal recombinant human interleukin 12 in patients with Mullerian carcinoma, gastrointestinal primary malignancies, and mesothelioma / R. Lenzi et al. // Clin. Cancer. Res. 2002. - Dec; 8(12).-P. 3686-3695.

147. Pirie A. Preparation of a fluorescent substance from the eye of the dogfish, Squalus acanthias/ A. Pirie// Biochem. J. 1946. - Vol. 40(1). - P. 14-20.

148. Polyribonucleotides induce nitric oxide production by human monocyte-derived macrophages / J.C. Snell, O. Chernyshev, D.L. Gilbert, C.A. Colton // J. Leukoc. Biol. 1997. - Sep; 62(3). - P. 369-373.

149. Pontieri G.M., Ippoliti F., Lipari M. / Med. Biol. Environ. 1982. - Vol.10. -P. 110-113.

150. Praz F., Karsently G., Binet J.L. / Blood. 1984. - Vol.63. - №2. - P. 463-467.

151. Prenatal diagnosis of dihydrobiopterin synthetase deficiency, a variant form of phenylketonuria / A. Niederwieser et al. // Eur. J. Pediatr. 1986. - Vol. 145.-P. 176-178.

152. Prognostic significance of urinary neopterin levels in patient with hepatocellular carcinoma / H. Kawasaki et al. // Tohoku J. Exp. Med. 1988. -Vol. 155.-P. 311-318.

153. Proteinase activity in invasive cancer of the breast correlation with tumor progression / L. Benitez-Bribiesca, G. Martinez, M.T. Ruiz et al. // Arch. Med. Res. 1995. - Vol. 26. - P. 163-168.

154. Pteridines as a new marker to detect human T cells activated by allogeneic or modified self major histocompatibility complex (MHC) determinants / C.

155. Huber et al. // Immunol. 1983. - Mar; 30(3). - P. 1047-1050.

156. Purification and cloning of the GTP cyclohydrolase I feedback regulatory protein, GFRP / S. Milstien et al. // J. Biol. Cliem. 1996. - Aug 16; 271(33).-P. 19743-19751.

157. Recognition of carcinoembryonic antigen peptide and heteroclitic peptide by peripheral blood T lymphocyte / M.E. Brown et al. // J. Immunother. 2007. -Apr; 30(3).-P. 350-352.

158. Regulation of GTP cyclohydrolase I by alternative splicing in mononuclear cells / W.L. Hwu et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Jul. 11; 06(4).-P. 937-942.

159. Rippin J.J. Analysis for fully oxidized neopterin in serum by high-performance liquid chromatography / J.J. Rippin // Clin. Chem. 1992. -Vol. 38. -№ 9. - P. 1722-1724.

160. Schott K. Induction of GTP-cyclohydrolase I mRNA expression by lectin activation and interferon-gamma treatment in human cells associated with the immune response / K. Schott, M. Gutlich, I. Ziegler // J. Cell Physiol. -1993.-Jul; 156(1).-P. 12-16.

161. Selective induction of mononuclear phagocytes to produce neopterin by interferons / G. Bitterlich et al. // Immunobiology. 1988. - Feb; 176 (3). -P. 228-235.

162. Serum estimation of carcinoembryonic antigen, beta (2)-microglobulin and calcitonin as tumor markers in primary lung cancer / K. Charalabopoulos et al. // J. BUON. 2003. - Jan-Mar; 8(1). - P. 35-37.

163. Serum proteolytic activities and antiproteases in human colorectal carcinoma / J.A. Amiquet et al. // J. Physiol. Biochem. 1998. - Vol. 54. - P. 9-13.

164. Shen R.S. Inhibition of GTP cyclohydrolase I by pterins / R.S. Shen, A. Alam, Y.X. Zhang // Biochim. Biophys. Acta. 1988. - Apr 14; 965(1). - P. 9-15.

165. Shen R.S. Inhibition of luminol-enhanced chemiluminescence by reduced pterins / R.S. Shen // Arch. Biochem. Biophys. 1994. - Apr; 310(1). - P. 60-63.

166. Shintaku H. Disorders of tetrahydrobiopterin metabolism and their treatment / H. Shintaku // Curr. Drug Metab. 2002. - Vol. 3. - P. 123-131.

167. Simultaneous determination of neopterin and creatinine in serum with solid-phase extraction and on-line elution liquid chromatography / E.R. Werner et al. // Clin. Chem. 1987. -Vol. 33. - P. 2028-2033.

168. Slazyk W.E. Liquid-chromatographic measurement of biopterin and neopterin in serum and urine / W.E. Slazyk, F.W. Splerto. // Clin. Chem. -1990. Vol. 36. - № 7. - P. 1364-1368.

169. Spin trapping study of antioxidant properties of neopterin and 7,8-dihydroneopterin / K. Oettl et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1997. May 29; 234(3). - P. 774-800.

170. Sutton H.C. Efficiency of chelated iron compounds as catalysts for the Haber-Weiss reaction / H.C. Sutton // J. Free Radic. Biol. Med. 1985. -Vol. 1(3).-P. 195-202.

171. Taguchi H. Adult T-cell leukemia / H. Taguchi, W.L. Armarego // Ryoikibetsu Shokogun Shirizu. 1999. - Vol 23, Pt 1. - P. 38-41.

172. Taguchi H. Glyceryl-ether monooxygenase. A microsomal enzyme of ether lipid metabolism / H. Taguchi, W.L. Armarego // Med. Res. Rev. 1998. -Jan; 18(1).-P. 43-89.

173. Tanimoto K. Granulocyte collagenase and cathepsin В in patients with cancer of the digestive organs / K. Tanimoto, J. Muravaki, C. Hirayama // Gastroenterol. Jpn. 1984. - Vol. 19. - P. 537-542.

174. Tetrahydrobiopterin as combined electron/proton donor in nitric oxide biosynthesis: cryogenic UV-Vis and EPR detection of reaction intermediates / A.C. Gorren et al. // Methods Enzymol. 2005. - Vol. 396. - P. 456-466.

175. Tetrahydropterin biosynthetic activities in human macrophages, fibroblast, THP-1, and T24 cells / J. Reibnegger et al. // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265.-P. 3189-3192.

176. The peripheral blood leukocyte phenotype in patients with breast cancer: effect of doxorubicin/paclitaxel combination chemotherapy / B. Melichar et al. // Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2001. - May; 23(2). - P. 163173.

177. Thony B. Tetrahydrobiopterin biosynthesis, regeneration and functions / B. Thony, G. Auerbach N. Blau // Biochem. J. 2000. -Vol. 347. - P. 1-16.

178. Treatment with GM-CSF and IL-2 in patients with metastatic colorectal carcinoma induced high serum levels of neopterin and sIL-2R, an indicator of immune suppression / A.L Skog et al. // Cancer Immunol. Immunother. -2002. Jul; 51(5). - P. 255-262.

179. Urinary neopterin as a prognostic marker haematological neoplasis / H. Denz et al. // Pteridines. 1989. - Vol 1. - P. 167-170.

180. Urinary neopterin concentrations and T-cell subset data in HIV-l infection. / G. Reibnegger et al. // Klin. Wochenschr. 1990. - Jan 4; 68(1). - P. 43-48.

181. Urinary neopterin in patients with advanced colorectal carcinoma / B. Melichar et al. // Int. J. Biol. Markers. 2006. - Jul-Sep 21(3). - P. 190-198.

182. Werner-Felmayer G. Tetrahydrobiopterin biosynthesis, utilization and pharmacological effects / G. Werner-Felmayer, G. Golderer, E. R. Werner // Curr. Drug Metab. -2002. Vol. 3. - P. 159-173.

183. Winterbourn C.C. Iron and xanthine oxidase catalyze formation of an oxidant species distinguishable from OH comparison with the Haber-Weiss reaction / C.C. Winterbourn, H.C. Sutton // Arch. Biochem. Biophys. -1986.-Jan; 244(1).-P. 27-34.