Влияние органотипических клеточных культур человека и неонатальных клеточных культур кролика на показатели системы гемостаза в плазме крови больных ишемической болезнью сердца тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, кандидат медицинских наук Корякина, Лариса Борисовна

• Корякина, Лариса Борисовна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Корякина, Лариса Борисовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Гемокоагуляционные, антикоагуляционные и фибринолитические свойства различных тканей организма взрослого человека.

Система гемостаза при коронарном атеросклерозе и методы ее коррекции.

1.3. Клеточная терапия как метод лечебного воздействия при различных заболеваниях у человека

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Этапы приготовления органотипических суспензионных культур.

2.2. Методы исследования показателей системы гемостаза.

ГЕМОСТАТИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ ФЕ-ТАЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА ЧЕЛОВЕКА И КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА НОВОРОЖДЕННЫХ КРОЛИКОВ

3.1. Факторы системы гемостаза в фетальных клеточных суспензионных культурах челове

ГЛАВАII

ГЛАВА III

3.2. Факторы системы гемостаза в неонатальном ~ клеточном материале кролика.

Сравнительное содержание факторов системы гемостаза в органотипических фетальных клеточных культурах человека и клеточных культурах новорожденных кроликов.

ГЛАВА IV ВОЗДЕЙСТВИЕ ФЕТАЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА ЧЕЛОВЕКА И КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА НОВОРОЖДЕННЫХ КРОЛИКОВ НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА В ДОНОРСКОЙ ПЛАЗМЕ IN VITRO

4.1. Влияние фетальных клеточных культур человека на показатели системы гемостаза в образцах плазмы крови доноров.

Воздействие неонатальных клеточных культур кролика на активность факторов системы гемостаза в плазме крови доноров.

Сравнительный анализ влияния фетальных клеточных культур человека и неонатальных клеточных культур кролика на активность факторов системы гемостаза в плазме крови доноров.^

ГЛАВА V ВЛИЯНИЕ ФЕТАЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО

МАТЕРИАЛА ЧЕЛОВЕКА И НЕОНАТАЛЬ-НОГО КЛЕТОЧНОГО МАТЕРИАЛА КРОЛИКА НА АКТИВНОСТЬ ФАКТОРОВ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА В ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИБС

5.1. Воздействие фетальных клеточных культур человека на показатели системы гемостаза в плазме крови больных ИБС.

Влияние неонатальных клеточных культур кролика на активность факторов системы гемостаза в плазме крови больных ИБС.

5.3 Сравнительный анализ влияния фетального клеточного материала человека и неонатального клеточного материала кролика на активность факторов системы гемостаза в плазме крови больных ИБС.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние органотипических клеточных культур человека и неонатальных клеточных культур кролика на показатели системы гемостаза в плазме крови больных ишемической болезнью сердца»

Актуальность проблемы

Известно, что ишемическая болезнь сердца (ИБС), обусловленная стено-зирующим атеросклерозом коронарных артерий, остается одним из самых тяжелых по течению и последствиям заболеванием и сохраняет 1-е место среди причин смертности во многих развитых странах мира [2, 25, 33, 70, 106, 107]. Общепризнано, что при ИБС изменения системы гемостаза и реологии крови играют важную роль как в патогенезе этого заболевания, так и его осложнений. Риск развития ИБС увеличивают повышенная адгезивно - агрегационная активность тромбоцитов, высокое содержание в плазме крови фибриногена, увеличение активности VII фактора свертывания крови, снижение антикоагуляционной и фибринолитической активности [17, 23, 56]. Поэтому одна из наиболее актуальных проблем в лечении атеросклероза, ИБС, ряда других заболеваний - поиск новых методов лечения, способных нормализовать свертывающую систему эффективно и надолго. Одним из таких перспективных направлений является трансплантация различных клеточных субстратов [57, 69, 91]: Механизм терапевтического воздействия фетальных клеток и тканей включает в себя специфические (заместительные) и неспецифические (общие для всех зародышевых тканей) эффекты [28,101]. Последние обусловлены, вероятно, индукцией факторов нейроэндокринной регуляции, поддерживающих тканевой гомеостаз. При лечении экспериментальной гиперхолестеринемии у животных было продемонстрировано позитивное влияние трансплантации клеток фетальной печени на систему гемостаза [91]. Происходило повышение антикоагулянтных свойств крови, снижение ее тромбопластической активности, стабилизация агрегацион-ных свойств тромбоцитов. Имеются сообщения и о применении метода клеточной терапии в лечении больных ИБС [57, 69]. У них отмечалось нарастание фибринолитической и антикоагулянтной активности за счет повышения уровня плазминогена, антитромбина III и снижения напряженности коагуляционного потенциала. После однократной трансплантации оптимальный эффект удерживался в течение длительного периода наблюдения. Раскрытие механизмов влияния клеточной терапии на систему гемостаза - решающие условие для возможного последующего использования этого метода в терапевтических целях [29].

Сегодня точно установлено, что ткани организма взрослого человека обладают тромбопластическими и фибринолитическими свойствами. Клеточные структуры печени продуцируют факторы свертывающей и противосвертываю-щей систем крови, такие как VII фактор (проконвертин), протромбин, фибриноген, плазминоген [65, 76]. В ткани легкого имеются тучные клетки, которые синтезируют гепарин, большое количество активаторов плазминогена. Плацента обладает мощной противосвертывающей системой, которая нейтрализует нарастающую гиперкоагуляцию материнской крови по мере развития беременности [64, 76].

В печени синтезируются также многие белковые компоненты (ферментные системы) плазмы крови, участвующие в образовании тромбов и в фибринолизе. А легкие, плацента и сердце способны продуцировать тромбопластиноактивные вещества, прокоагулянты, активаторы фибринолиза.

Является очевидным и тот факт, что фетальные клетки в сроки гестации до 20 недель не вызывают иммунной реакции отторжения, поскольку в I и II триместрах гестации еще не экспрессированы белки гистосовместимости I и II класса. В то же время они содержат большое количество различных биологически активных веществ, таких как ростовые факторы, пептиды, а -фетопротеин, антиоксиданты, микроэлементы, витамины, гормоны, адаптогены, противовоспалительные, бактериостатические соединения и пептиды, стимулирующие иммунокомпетентные клетки [111, 69]. Между тем в доступной отечественной и зарубежной литературе сведения о гемостазиологическом потенциале органотипических фетальных и неонатальных клеточных культур нами не обнаружеЕШ. Информация же о воздействии клеточЕЮго материала на показатели гемостаза в плазме крови больных ишемической болезнью сердца немногочисленна, а сведения о влиянии этих клеток на плазму крови здоровых людей вообще отсутствуют. В связи с этим мы решили расширить представления о влиянии клеточной трансплантации на активность факторов системы гемостаза в норме и патологии. Исходя из этого, целью работы явилось изучение гемостазиологического потенциала фетальных клеточных культур человека и клеточных культур новорожденных кроликов и оценка их влияния на активность факторов системы гемостаза в плазме крови больных ишемической болезнью сердца in vitro.

Задачи исследования:

1. Изучить и провести сравнительный анализ гемостазиологического потенциала органотипического фетального клеточного материала человека и неонатального клеточного материала кролика. s

2. Исследовать влияние органотипических фетальных клеточных суспензионных культур человека и новорожденных кроликов на активность факторов системы гемостаза донорской плазмы in vitro.

3. Оценить воздействие органотипических фетальных клеточных суспензионных культур человека и новорожденных кроликов на активность факторов системы гемостаза в плазме больных ИБС in vitro.

4. Провести сравнительный анализ влияния фетальных и неонатальных клеточных суспензионных культур на активность факторов системы гемостаза в плазме крови доноров и больных ИБС

Научная новизна

В результате проведенного исследования впервые представлены данные о гемостатическом потенциале органотипических фетальных клеточных суспензионных культур человека и неонатальных клеточных суспензионных культур кроликов.

Выявлены отличительные особенности воздействия фетальных и неонатальных клеточных культур на показатели системы гемостаза в плазме крови здоровых людей и больных коронарным атеросклерозом.

Установлено, что ведущим звеном антикоагуляционного эффекта феталь-ных клеточных культур человека и неонатальных суспензионных культур кролика на плазму крови больных ИБС является повышение уровня плазминогена и активности AT - III.

Полученные данные свидетельствуют о том, что под влиянием неонатальных клеточных суспензионных культур кролика, по сравнению с фетальными клеточными культурами, в плазме крови больных ИБС в большей степени увеличивается уровень плазминогена, снижается содержание фибриногена и фиб-ринстабилизирующая активность.

Результаты исследования позволили дать патогенетическое обоснование возможному использованию органотипических фетальных клеточных культур человека и неонатальных клеточных культур кролика в целях коррекции системы гемостаза в плазме крови больных ИБС в эксперименте.

Теоретическая и практическая значимость работы заключается в том, что показан гемостатический потенциал клеточных культур печени, легкого, сердца и плаценты человека на 18-20 неделях гестации и неонатальных клеточных культур печени, легкого и сердца кролика. Также представилось возможным патогенетически обосновать использование различных органотипических клеточных суспензионных культур в целях оптимизации системы гемостаза у больных ИБС.

Апробация

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

1. молодёжной научно-практической конференции СО РАМН, г. Новосибирск. 2000 г.

2. II межрегиональной научно-практической конференции «Клинические аспекты клеточной и фетальной терапии», Омск, 2000 г.

3. международной научно - практической конференции «Здоровье и Образование», Пермь, 2003 г.

4. межрегиональной научно - практической конференции молодых ученых Сибири «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины», Иркутск, 2003 г.

5. научной конференции молодых ученых «Новое в реконструктивной хирургии», посвященной дню основания РНЦХ РАМН, Москва, 2004 г.

6. Всероссийской научно - практической конференции «Развитие физико- химической биологии и биотехнологии на современном этапе», посвященной 25 -летию кафедры физико - химической биологии Иркутского государственного университета, Иркутск, 2003 г.

7.V конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», Томск, 2004г.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Органотипические суспензионные клеточные культуры печени, легкого, сердца и плаценты фетусов человека и клеточные культуры печени, легкого, сердца новорожденного кролика обладают свертывающими и противо-свертывающими свойствами, что подтверждается стандартными тестами, принятыми для оценки состояния системы гемостаза

2. Органотипические фетальные клеточные культуры человека и неонаталь-ные клеточные культуры кролика при совместной инкубации с плазмой крови доноров способствуют возрастанию активности коагуляционного звена при умеренном повышении активности антикоагулянтной и фиб-ринолитической систем.

3. При взаимодействии фетальных клеточных культур человека и неонатальных клеточных культур с плазмой крови больных ИБС выявляется более выраженное, чем в плазме крови доноров, повышение уровня плазминогена и активности AT - III с одновременной ингибицией факторов протромбинового комплекса, что приводит к уравновешиванию свертывающей и противосвертывающей систем.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Корякина, Лариса Борисовна

выводы

1. Фетальные клеточные культуры человека и неонатальные культуры кролика содержат фибриногеноподобные вещества и факторы, обладающие антикоагу-лянтными и фибринолитическими свойствами. Содержание фибриногенопо-добных веществ в неонатальных клеточных культурах кролика в два раза выше по сравнению с фетальными клетками человека. Антикоагулянтная и фибрино-литическая активность фетального клеточного материала человека и клеточного материала неонатального кролика практически не различается.

2. Органотипические фетальные клеточные культуры человека и клеточные культуры новорожденного кролика активизируют начальную фазу свертывания в плазме крови доноров и больных ИБС, поскольку более чем в два раза сокращают активированное парциальное тромбопластиновое время.

3. Клеточная культура фетальной печени и неонатальные клетки легкого и сердца оказывают ингибирующее воздействие на вторую фазу свертывания в плазме крови больных, благодаря снижению активности факторов протромбинового комплекса на 32 % и 12 % соответственно.

4. Особенностью воздействия как фетальных, так и неонатальных клеточных культур на образцы плазмы крови больных ИБС в сравнении с донорской плазмой является более выраженная активация фибринолитической системы за счет повышения уровня плазминогена на 56 % и 117%.

5. Неонатальные клеточные культуры кролика в большей степени активизируют противосвертывающую систему плазмы крови больных ИБС, чем фетальные клетки человека. Это происходит за счет существенного увеличения активности AT - III на 5 % и концентрации плазминогена на 51 %.

6. Стабилизация системы гемостаза в образцах плазмы крови больных ИБС наиболее оптимально может обеспечиваться сочетанным применением различных органотипических клеточных культур.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время фармакологическая регуляция гемостаза при коронарной болезни сердца осуществляется комбинированным применением, антиагре-гационных препаратов, антикоагулянтов, фибринолитиков и статинов [86, 106]. Однако лекарственные методы лечения коронарного атеросклероза способствуют, к сожалению, только временной стабилизации системы гемостаза. Кроме того, для поддержания коагуляционного потенциала в оптимальном состоянии требуется, как правило, постоянный прием необходимых препаратов. Поэтому одна из наиболее актуальных проблем кардиологии - поиск новых методов лечения, способных воздействовать на свертывающую систему в течение длительного периода. Интенсивная разработка новых лечебных технологий, связанных с клеточной трансплантацией вселяет надежду, что этот вид терапии окажется эффективным и для продолжительной коррекции системы гемостаза у больных ИБС.

Физиологическая система свертывания крови проходит этапы становления и формирования в период эмбрионального развития [65]. Факторы свертывающей и противосвертывающей систем продуцируются тканями взрослого человека, а именно: печеныо, легким, сердцем. В печени синтезируется большинство факторов свертывающей и противосвертывающей систем [8, 9, 65, 89]. Легкое играет роль коагулолитического фильтра, через который проходят продукты гиперкоагуляции [38]. При этом в клеточных структурах легкого в большом количестве синтезируются тучные клетки, продуцирующие гепарин. Легкое также богато эндотелиоцитами, которые синтезируют простациклин и наряду с этим в нем содержатся активаторы плазминогена [42, 65, 86]. Клеточные субстраты сердца обладают свойствами тромбопластическими, антикоагуляционными, антигепариновыми, фибринолитическими и содержат вещества, вызывающие агрегацию тромбоцитов [23]. Кроме того, и плацента рассматривается как регулятор гемостаза в системе мать - плацента — плод, так как она обладает мощной противосвертывающей системой, которая снижает нарастающую гиперкоагуляцию материнской крови по мере развития беременности [66, 68, 89]. Из плацентарной ткани был впервые выделен аннексии - V, который нейтрализует тканевой фактор (ТФ), фактор X.

Приведенные в литературе данные свидетельствуют о том, что период с 18 - 20 недели является своеобразным рубежом, когда перечисленные выше органы начинают синтезировать факторы гемокоагуляции в кровь плода. Ранее в работах С.А. Бриллиантовой были опубликованы сведения о свертывающей системе крови у человеческих плодов на 20 неделе гестации. При этом, по мнению автора, уровень прокоагулянтов и антикоагулянтов в крови плода косвенным образом отражает степень зрелости клеток. Исходя из вышесказанного, одной из задач нашего исследования было определение факторов системы гемостаза в фетальном клеточном материале печени, легкого, сердца и плаценты в период с 18-20 недели гестации и в печени, легком и сердце кролика на 1-2 сутки после рождения.

Результаты проведенного исследования показали, что содержание фибриногена в неонатальных суспензионных культурах кроликов было более высоким, чем в фетальных клеточных субстратах. Максимальные значения его определены в неонатальных клеточных культурах печени и легком, составляя в среднем 1,5 ± 0,05 г/л (р< 0.05). В фетальных клеточных культурах средний уровень оказался равным 0,5 ± 0,03 г/л. Исключение составила фетальная плацента, уровень фибриногена в которой был наибольший по сравнению с феталь-ными клеточными культурами (1,1 ± 0,03) (р< 0.05).

Концентрация плазминогена в неонатальных клеточных суспензиях кролика находится практически на одном уровне с фетальными суспензиями человека, за исключением неонатального сердца, где уровень плазминогена оказался выше на 7,5 % (р < 0.05) и составил 12,4 ± 0,4 %.

Активность антитромбина III в фетальных клеточных культурах человека и новорожденных кроликов различается. В клетках неонатальной печени активность этого антикоагулянта выше на 0,5 % (р < 0.05) по сравнению с аналогичной фетальной культурой, а в неонатальной клеточной культуре легкого снижена на 8 % в сравнении с фетальной культурой легкого (р < 0.001). В клеточных культурах сердца как фетального, так и неонатального происхождения активность AT - III находится на одном уровне.

Таким образом, из представленных данных видно, что факторы гемостаза определяются как в органотипических фетальных клеточных культурах человека, так и в клетках новорожденного кролика. Установлено, что содержание фибриногеноподобных веществ в неонатальных клеточных культурах практически в 2 раза выше, чем в фетальных клетках. Мы полагаем, это связано с тем, что неонатальные клеточные суспензии находятся функционально в более созревшем состоянии по сравнению с фетальными суспензиями. Активность антикоагулянтной и фибринолитической систем практически одинакова как в фе-тальном, так и неонатальном материале. Тем не менее активность AT- III в фе-тальном легком была статистически выше по сравнению с другими фетальными клеточными культурами и неонатальными субстратами. Наибольшая концентрация плазминогена по сравнению с фетальными клеточными культурами человека и новорожденного кролика выявлена в неонатальной клеточной культуре сердце.

Следующей задачей, в рамках данного исследования, которая требовала решения: как фетальные клеточные культуры человека и неонатальные клеточные суспензии кролика, на основе изученного гемостатического потенциала, влияют на показатели системы гемостаза в плазме крови больных ИБС в сравнении с плазмой крови доноров.

Для этого было изначально определено состояние системы гемостаза в образцах плазмы крови больных ИБС и доноров. Как известно, у здоровых людей фибринолитическая система находится в динамическом равновесии с системой свертывания крови. Система коагуляции постоянно «латает» мельчайшие повреждения эндотелия, а фибринолитическая система удаляет остатки фибрина после выполнения гемостатической функции [8, 42, 88, 89]. В образцах плазмы крови больных мы установили дисбаланс всех основных звеньев системы гемостаза. По сравнению с плазмой крови доноров у больных отмечается активация тромбопластической системы, увеличение концентрации фибриногена, активности фибринстабилизирующего фактора, снижение активности AT - III и уровня плазминогена. Кроме того, мы выявили, что имеются нарушения и в ли-пидном обмене. Это выражалось в повышении уровня общего холестерина, триглицеридов, Хс ЛПНП при снижении уровня Хс ЛПВП.

Таким образом, для исследования были взяты образцы плазмы крови больных, у которых уже имелись осложненные формы ИБС.

При сравнительной оценки влияния фетальных клеточных культур и неонатальных клеточных субстратов на параметры гемостаза в образцах плазмы крови больных ИБС и доноров, мы установили, что все клеточные культуры сокращают активированное парциальное тромбопластиновое время свертывания - АПТВ как в плазме крови доноров, так и больных ИБС в среднем в два раза (Рис. 1)

1 2 3 4 1 2 3

А - Б

В донор пб-нои печень 2 - легкое 3 - сердце 4 - плацента

Рис. 1 Повышение АПТВ под воздействием фетальных и неонатальных клеточных культур в плазме крови больных ИБС при сравнении с плазмой крови доноров (А - фетальные; Б - неонатальные) * - р < 0.05.

В результате активизируется начальная фаза свертывания как в плазме крови доноров, так и больных ИБС. Однако на этой фазе свертывания образуется очень небольшое количество тромбина, которое не в состоянии трансформировать фибриноген в достаточное количество фибрина [73]. Известно, что система гемостаза обладает удивительной способностью к ограничению образования тромбина на начальном этапе активации процесса свертывания крови, что очень важно прежде всего для предотвращения развития тромбоза, в основе которого лежит образование фибрина [73].

На активизацию факторов протромбинового комплекса и общего пути образования тромбина в плазме крови доноров и больных ИБС клеточные суспензии также влияют практически одинаково. Так, клеточная культура фетальной печени снижает протромбиновый индекс в плазме крови доноров и больных ИБС. Наиболее активно эта культура воздействует на плазму крови больных ИБС, уменьшая активность протромбинового комплекса по сравнению с плазмой крови доноров на 32 % (р< 0.05). Однако неонатальная клеточная культура легкого снижает активность факторов протромбинового комплекса в большей степени в образцах плазмы крови доноров, уменьшая протромбиновый индекс на 24 % по сравнению с плазмой крови больных (р < 0.05). Неонатальная культура сердце в одинаковой степени снижает этот показатель как плазме крови доноров, так и больных ИБС. При этом фетальные клеточные суспензии сердца, плаценты и неонатальная клеточная культура печени не оказывают влияния на протромбиновый комплекс (Рис.2). iMii

1 2 3 4 1 2 3

А Б

ГТГИ, % о донор □ б-ной — печень 2 - легкпе 1 - сеплпе 4 - плячента

Рис. 2 Снижение уровня ПТИ под воздействием фетальных и неонатальных клеточных культур в плазме крови больных ИБС при сравнении с плазмой крови доноров (А - фетальные; Б - неонатальные) * - р < 0.05.

Мы полагаем, уменьшение активности факторов протромбинового комплекса связано с тем, что, наряду с тромбиноподобными веществами, в клеточных культурах содержатся антитромбопластические субстанции, которые способны связываться с X активным фактором. Вероятно, эти вещества, содержащиеся в клеточных культурах, являются аналогом ингибитора фактора тканевого пути. Они прерывают путь ТФ: Vila, прежде чем образуется достаточное количество фактора Ха. Это ведет к снижению уровня тканевого фактора и тромбина в плазме крови больных ИБС.

При сравнительном анализе изменений активности AT - III в образцах плазмы больных ИБС и здоровых людей под влиянием фетальных и неонатальных клеточных культур установлена схожая картина (Рис.3). Так, неонатальные клеточные культуры печени и сердца способствуют повышению активности этого антикоагулянта в среднем на 12 %, что ведет к снижению уровня тромбина и уменьшению активности Ха фактора в плазме крови больных и доноров. При этом фетальная культура печени увеличивает активность этого антикоагулянта только в плазме крови больных ИБС - на 10 %.

80 70 60 50 40 30 20 10

AT-III, %

Е1ДОНОП пб-ной 4 1

А Б - печень 2 - легкое 3 - сердце 4 -плацента

Рис.3 Изменение активности AT - III под влиянием фетальных и неонатальных клеточных культур в плазме крови больных ИБС в сравнении с плазмой крови доноров (А - фетальные клеточные культуры человека; Б - неонатальные клеточные культуры кролика) * - р < 0.05

Мы полагаем, что такое повышение активности AT - III связано с тем, что клеточные суспензии человека и животных обладают антикоагулянтной активностью. Кроме того, неонатальные клеточные суспензии печени и сердца, вероятно, имеют гепариноподобные соединения, которые способны трансформировать AT - III в быстродействующий ингибитор тромбина.

Следует отметить, что фетальная и неонатальная клеточная культура легкого снижает активность AT -III как в опытных образцах плазмы доноров, так и больных ИБС.

Важно отметить, что содержание фибриногена в плазме крови больных ИБС под воздействием всех исследуемых фетальных клеточных культур человека и неонатальных клеточных суспензий кролика уменьшается в отличие от образцов плазмы крови доноров, в которых происходит повышение уровня этого показателя (Рис.4). А Б

1 - печень 2- легкое 3-сердце 4-плацента

Рис. 4. Достоверное снижение содержания фибриногена под влиянием фетальных и неонатальных клеточных культур в плазме крови больных ИБС (А - фетальные; Б - неонатальные) * - р < 0.05

Фетальные суспензионные культуры человека и неонатальные клетки кролика повышают активность XIII фактора в образцах плазмы крови здоровых людей на 19 % и 11 % соответственно. Противоположную картину мы наблюдаем в образцах плазмы крови больных ИБС. Так фетальная клеточная культура сердца и неонатальные клеточные суспензии кролика снижают фибринстабилизирую-щую активность, т.е. уровень активности XIII фактора на 7 % и 15 % (Рис.5).

Следовательно, под действием неонатальных культур и фетальных клеток сердца в плазме крови больных ИБС сгусток фибрина, становится более чувствительным к действию плазмина, что может явиться отправной точкой в уменьшении адгезивности и агрегации тромбоцитов, а следовательно, и привести к снижению уровня фибриногена [75]. Другие фетальные клеточные культуры печени, легкого и плаценты оставляют фибринстабилизирующую активность в плазме крови больных на уровне контроля.

1 - печень 2 - легкое 3- сердце 4 - плацента

Рис. 5. Снижение фибринстабилизирующей активности под влиянием фетальных и неонатальных клеточных культур в плазме крови больных ИБС (А - фетальные; Б - неонатальные) * - р < 0.05

Снижение уровня фибриногена и фибринстабилизирующей активности в образцах плазмы крови больных связано, очевидно, с активизацией фибриноли-тического процесса. Так, все исследуемые фетальные клеточные культуры человека и неонатальные клетки кролика повышают уровень плазминогена в опытных образцах плазмы больных ИБС на 56 % и 117 % соответственно по сравнению с донорской плазмой (Рис.6). Г

300 250 200 150 100 50 0

А —♦-ДОНОр —■-б-НОЙ Б

- печень 2 - легкое 3-сердце 4 - плацента

Рис. 6 Повышение уровня плазминогена в плазме крови больных ИБС под влиянием фетальных и неонатальных клеточных культур в сравнении с плазмой крови доноров (А - фетальные; Б - неонатальные) * - р < 0.05

Повышение уровня плазминогена в образцах плазмы крови больных связано с тем, что фетальные клеточные культуры человека и неонатальные клетки кролика, возможно, содержат тканевые активаторы, которые способны вступать в каталитическую реакцию с плазминогеном [42, 86]. В плазме больных, где изначально высокий уровень тромбина, а следовательно и фибрина, образуется молекулярный комплекс фибрин - активатор - плазминоген, обеспечивающий се

Плазминоген, % *

12 3 4

1 2 3 лективную активацию плазминогена, ассоциированного с тромбом [42, 86]. При этом повышенный уровень плазминогена расщепляет не только фибрин, но и фибриноген. Однако в отсутствии фибрина действие ТАП проявляется слабо, что мы и наблюдаем при контакте клеточных культур с плазмой доноров. Привнесение фетальных и неонатальных клеток в абсолютно атромбогенную плазму доноров способствует появлению в ней пороговых концентраций тромбина. Это приводит к активизации противосвертывающей системы по принципу обратной связи со свертывающей системой и таким путем осуществляется регуляция жидкого состояния крови. Небольшие дозы образовавшегося плазмина вызывают расщепление фибрина, не затрагивая фибриногена. Следует отметить, что действие плазмина в организме несколько иное. В крови он расщепляет только фибрин, не действуя на его предшественника - фибриноген. Это связано со структурой доменов и особым механизмом активации плазминогена его физиологическими активаторами.

Резюмируя вышеизложенное, мы констатируем, что воздействие исследуемых клеточных культур было изучено на принципиально разных образцах плазмы крови, поэтому полученные эффекты несколько отличались друг от друга. Фетальные клеточные культуры человека и неонатальные клеточные культуры кролика в образцах плазмы крови доноров активизируют в основном свертывающую систему. В отличие от этого в образцах плазмы крови больных, где имеются нарушения в системе гемостаза, исследуемые клеточные культуры воздействуют в большей степени на противосвертывающий потенциал: увеличивают уровень плазминогена и активность антитромбина III. Привнесенные клетки снижают и активность прокоагулянтного звена за счет уменьшения активности факторов протромбинового комплекса, уровня фибриногена и фибринстабилизирующего фактора. Все это в совокупности препятствует развитию исходной гиперкоагуляции.

Фетальная клеточная культура печени способствует снижению факторов протромбинового комплекса и повышению активности AT - III, фетальные клетки сердца в большей степени уменьшают уровень фибриногена, клеточные культуры легкого и плаценты фетусов человека более активно повышают концентрацию плазминогена. Неонатальная клеточная культура сердца в большей степени ингибирует ферментативную активность Ха фактора и тромбина, повышает активность AT - III, а неонатальные культуры легкого и печени увеличивают концентрацию плазминогена, снижают фибринстабилизирующую активность и уровень фибриногена.

Следовательно, эффект положительного влияния на стабилизацию системы гемостаза достигается только при сочетанном воздействии клеточных культур печени, легкого, сердца и плаценты фетусов человека либо неонатальных клеточных культур печени, легкого и сердца кролика. При этом неонатальные суспензионные культуры кролика в большей степени по сравнению с фетальными клеточными культурами человека повышают ан-тикоагуляционный потенциал в образцах плазмы крови больных ИБС. Фетальные клеточные культуры человека в плазме крови больных ИБС наиболее активно снижают ферментативную активность факторов протромбинового комплекса, что ведет к уменьшению уровня тканевого фактора и тромбина.

Таким образом, полученные нами позитивные эффекты влияния клеточных культур на образцы плазмы крови больных ИБС позволили патогенетически обосновать возможное использование фетального клеточного материала человека и неонатального клеточного материала кролика при коррекции системы гемостаза в плазме крови больных ИБС.

Нами составлена концептуальная схема влияния клеточных суспензионных культур фетусов человека и клеток новорожденных кроликов (Схема 2), на которой показано, что клеточные культуры, обладая свойствами факторов свертывающей и противосвертывающей систем крови, способны влиять на основные компоненты системы гемостаза в плазме крови больных in vitro: активизировать начальную фазу свертывания крови, ингибировать внешний путь коагуляции и общий путь образования тромбина, повышать активность AT - III, снижать фибринстабилизирующую активность и уровень фибриногена, увеличивать концентрацию плазминогена.

Совокупность этих эффектов приводит к активизации антикоагулянтной и фибринолитической системы и снижению активности коагуляционного звена. Это в свою очередь способствует установлению динамического равновесия между свертывающей и противосвертывающей системами крови.

Схема 2

Концептуальна и схема влиянии фетальных и неонатальных клеточных культур на активность факторов системы гемостаза в плазме крови больных ИБС

Активизация факторов внутренней фазы свертывания крови фетальные неонатальные клеточные культуры

Ха

Ингибирование внешнего пути коагуляции и общего пути образования тромбина

Снижение фибринстабилизирующей активности

Повышение активности

AT-III

Уменьшение образования тромбина

Повышение концентрации плазминогена

Снижение содержания фибриногена

Нормализация коагуляционного звена и активизация антикоагулянтной фибринолитической систем I

Установление динамического равновесия между свертывающей и противосвертываюшей системами

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Корякина, Лариса Борисовна, 2004 год

1., как глобальный маркер тромбофилического состояния / З.С. Баркаган, Г.Ф. Еремин, А.В. Мазырко и др.// Кардиология.- 1989.-Т.29, №6.-С. 121- 125.

2. Алиджанова X. Г. Семейная холестеринемия: поражение магистральных артерий головного мозга (сообщение 1) / Х.Г Алиджанова, Н.Н Абрамова, Т.В. Балахонова // Тер. арх. 1997. - № 12. - С. 34 -37.

3. Андреенко Г.В. Сравнительное изучение тканевого активатора плазминогена, выделенного из тканей сердца, матки яичников свиньи и плаценты человека / Г.В. Андреенко, Н.Ф. Муравьева // Вопр. мед. химии, 1973.-№5.-С. 478-480.

4. Андреенко Г.В. Фибринолиз (биохимия, физиология, патология) / Г.В. Андреенко.- М., 1979.-312 с.

5. Ашкинази И. Я. Эритроцит и внутреннее тромбопластино- образование / И. Я. Ашкинази.- JL: Наука, 1977.- 155 с.

6. Балашов В.А. Клетки кроветворения / В.А. Балашов, К.М. Абдулкады-ров // Арх. анат.- 1994.- № 4.- С. 80-84.

7. Балуда В.П. Профилактика тромбоэмболических осложнений в хирургии и акушерстве / В.П. Балуда, В.Д. Михайлов, З.А. Эристави. Томск: Изд- во Томск, ун- та, 1975.- 123 с.

8. Балуда В.П. Условия регуляции и нормализации гемостаза / В.П. Балуда //Акт. пробл. гемостазиологии.- М., 1981.- С. 14-26.

9. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С. Баркаган. М.: Медицина, 1980. - 336 с.

10. Ю Баркаган З.С. Роль VII фактора в системе свертывания крови / З.С. Бар* ган, Б.И. Кузник // Тер. арх. 1990.- Т. 62, № 7.- С. 81 - 85

11. Баркаган Л.З. Нарушение гемостаза у детей / Л.З. Баркаган,- М.: Медицина, 1993.- 176 с.

12. Баркаган З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот.- М.: Ньюдиамед, 1999.- 217 с.

13. Баркаган З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот.- М.: Ньюдиамед, 2001.- 285 с.

14. Белицер В.А. Домены крупные, функционально важные блоки молекул фибриногена и фибрина / В.А. Белицер // Биохимия животных и человека.- Киев. Наукова думка.- 1982, вып. № 6. - С.38 — 57.

15. Бояджиян X. Микрометод количественного определения фибриногена / X. Бояджиян, Р. А. Бакалова // Лаб. дело.- 1982. № 5 - С 5 - 7.

16. Бойко Н.И. Аллотрансплантация культур островковых клеток поджелудочной железы хирургическим больным сахарным диабетом: Автореф. дис. . д-ра мед наук: 14.00.27. Н.И Бойко; М., 1991.- 45 с.

17. Бокарев И.Н. Ишемическая коронарная болезнь сердца и современные пути борьбы с ней / И.Н.Бокарев // Рус. мед. журн. 1996.- № 3.- С. 208 -211.

18. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н Бокарев // Тромбоз, гемостаз, реология,.- 2000,- № 1. - С. 6-7

19. Братчик A.M. Клинические проблемы фибринолиза / A.M. Братчик,-Киев: Здоровья, 1993.- 344 с.

20. Бышевский А.Ш. Витамин К - зависимые белки системы свертывания крови /А. Ш. Бышевский, С.Л. Гиллян // Успехи соврем, биол.- 1983.Т. 95, № 2.- С 272.

21. Вейс Ч.Физиология человека: В 4- х томах. /Ч. Вейс, Г. Антони, Э. Виц-леб и др.; Под ред. Р. Шмитта, Г. Тевса.- М., Мир, 1986.- Т.З. 288 с.

22. Гаврилов О. К. Проблемы и гипотезы в учении о свёртывании крови / O.K. Гаврилов М.: Медицина, 1981.- 288 с.

23. Гаврилов O.K. Актуальные проблемы гемостаза в клинической практике / O.K. Гаврилов, В.А. Макаров, Н.Я. Лагутина. М., 1987.- 185 с.

24. Гасилин B.C. Состояние и перспективы развития реабилитационного направления в кардиологии / В.С Гасилин, B.C. Юрасов // Кардиология. 1975.-Т. 15, № 9.-С. 5—11.

25. Говалло В.Н. Трансплантация тканей в клинике / В.Н. Говалло.- М., 1979.- 288 с.

26. Гриненко Т.В. Межбелковые взаимодействия плазминогена и фибриногена / фибрина в системе фибринолиза / Т.В. Гриненко, С.А. Кудинов // Биохимия животных и человека.- Киев, 1989.- С. 46 55.

27. Грицюк А.И. Практическая гемостазиология / А.И. Грицюк, Е.Н. Амосова, И.А. Грицюк. Киев: Здоровья, 1994.- 256 с.

28. Грищенко В.И. Результаты и перспективы применения фетальной, клеточной и тканевой терапии / В.П. Грищенко, В.Т Зайцев // Использование физических методов в хирургии: Материалы сетев. и практ. конф.-Харьков, 1991.- С. 14-15.

29. Грищенко В.П. Механизм действия криоконсервированной плацентарной ткани / В.П. Грищенко, И. Ю Кузьмина, О.С.Прокопюк // Материалы I Украинской науч. конф. по криобиологии и криомедицине.- Харьков, 1995.-С. 130-131.

30. Грищенко В.П. Механизм действия плацентарной ткани на организм животных в эксперименте / В.П. Грищенко, И.Ю. Кузьмина // Педиатрия, акушерство и гинекология.- 1996 . № 5. - С. 67 - 69

31. Грищенко В.И. Гемопоэтические клетки эмбриональной печени / В.И. Грищенко.- Киев, 1998.- 155 с.

32. Гусев Е.И. Этиологические факторы и факторы риска хронической сосудистой мозговой недостаточности и ишемического инсульта / Е.И Гусев, М.Ю Мартынов, А.Н Ясаманова // Журн. неврол. и психиатр. -2001.- № 1.-С. 41-45.

33. Гусейнов Ч.С. Фибриноген (физиология, биохимия, патология и клиническое применение) / Ч.С. Гусейнов, С.Ш. Хундадзе, Н.Я. Лагутина. Тбилисси.- 1975.-207 с.

34. Добровольский А. Б. Роль компонентов системы фибринолиза в атерот-ромбогенезе / А.Б. Добровольский, Е.П. Панченко, Ю.А. Карпов // Кардиология." 1996.- № 5.- С. 68 72.

35. Добротворская Т.Е. Липиды и значение их контроля для снижения связанных с атеросклерозом заболеваемости и смертности / Т.Е. Добротворская, И.А. Мазур //Рус. мед. журн.- 1996.-№ 1.-С. 68-72.

36. Есипова И.К. Синдром острой респираторной недостаточности взрослых (« шоковое легкое ») / И. К. Есипова // Арх. пат.- 1979.- № 1.- С. 66 -72.

37. Зербило Д. Д. Диссеминированное внутри сосудистое свертывание крови: Факты и концепции / Д. Д. Зербило, Л. Л. Лукасевич.- М.: Медицина, 1989.- 256 с.

38. Зубаиров Д.М. О непрерывности процесса гемокоагуляции в организме / ДМ. Зубаиров // Казан, мед. журн.- 1961.- № 2.- С. 16-24

39. Зубаиров Д. М. Супермолекулярная структура тканевого тромбопла-стина / Д. М. Зубаиров, Г. В. Грицюк, Л. Ф. Владимирова // Система свертывания крови и фибринолиз: Материалы III Всесоюз. конф., 15-20 дек. 1969 г.- Киев, С. 58 -59.

40. Зубаиров Д.М. Природа фибриногена Б растворимых комплексов фибрин - мономера, осаждаемых этанолом и 2- нафтолом / Д.М. Зубаиров, Р.И. Литвинов// Биохимия.- 1980.-№6.-С. 1056 - 1067.

41. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбинообразования / Д. М. Зубаиров.- Казань: Изд во «ФЭН», 2000.- 367 с.

42. Иванов Е.П. Диагностика нарушений гемостаза / Е.П. Иванов.- Минск: Беларусь, 1983.- 224 с.

43. Иванов А. Е. Трансплантационные ангиопатиии и васкулиты при алло-генной пересадке трупной почки человеку / А.Е. Иванов, В.Н. Блюмкин //Арх. пат.- 1986.-№5.-С. 75-81.

44. Изменение уровня тканевого активатора плазминогена и его активности у больных ИБС / Е.А Беспалько, Е.Ю. Васильева, К.Е. Соболева и др. -Кардиология.- 1995.- Т. 35, № 3.- С.9 -11

45. Ингибитор активатора плазминогена и протеин С: связь с липидами, липо- и апопротеинами плазмы при ИБС различной продолжительности / Д. А Затейщиков, О.В. Аверков, Н.А. Грацианский и др. // Кардиология.- 1990.-№4. с. 47-48.

46. Исследование внешнего пути свертывания крови / Д.М. Зубаиров, В.Н. Тимербаев, Р.Ф. Байкеев и др.// Биохимия животных и человека.- Киев, 1989.- С. 1- 10

47. Карвальхо. Анджелина К. А. Гемостаз и тромбоз / Ф. Д. Шиффман // Патофизиология крови.- СПб. 2001. С. 191-281.

48. Качанов Д. В. Впервые возможная стенокардия: роль фибриногена в прогнозировании клинической ремиссии в 1 1,5 лет наблюдения / Д.В. Качалов, Н.А. Грацинский // Кардиология.- 1993.- № 3.- С. 16 -19.

49. Климов А.Н. Липопротеиды и атеросклероз / А.Н. Климов // Липиды в организме животных и человека.- М., 1974.- С. 133 142.

50. Климов А.Н Липиды, липопротеиды и атеросклероз / А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева,- СПб.: Питер Пресс, 1995.- 304 с.

51. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и её свёртывания / Б.А. Кудряшов. М.: Медицина, 1975. - 488 с.

52. Кузник Б.И. Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз / Б.И. Кузник, В.П. Скипетров. М.: Медицина, 1974.- 308 с.

53. Кузник Б. И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, Н.Н. Цыбикова. М.: Медицина, 1989.- 320 с.

54. Кузник Б.И. Прогностические критерии при диагностике ИБС / Б.И. Кузник, З.С. Баркаган// Гематол. и трансфузиол.- 1991.- №11.-С. 4248.

55. Курильская Т.Е. Патогенетическое обоснование фетальной терапии в профилактике и комплексном лечении ишемической болезни сердца: Дис. . д-ра. мед. наук: 14.00.16 / Т.Е. Курильская; НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН. Иркутск, 1999.- 223 с.

56. Лабораторная диагностика состояния антикоагулянтной функции сосудистой стенки / В.П. Балуда, Е.И. Соколов, М.В. Балуда и др. // Лабор. дело. 1988.-№7.- С. 32-35.

57. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг и др. Томск. -1980.-314 с.

58. Лакин К. М. Лекарственная регуляция свертывания крови / К.М. Лакин.-М.,: Знание, 1971.- 130 с.

59. Лахно И.В. Изменения в иммунной системе при воздействии фетальной плаценты на организм животных в эксперименте / И.В. Лахно // Педиатрия, акушерство и гинекология.- 1998.- № 5.- С.65- 68.

60. Левин Г.Я. Оценка эффективности и безопасности длительного применения клексана после эндопротезирования тазобедренного сустава / Г.Я.

61. Левин, И.Ю. Ежов, Л.Н. Соснина // Тромбоз. Гемостаз. Реология. -2003.- №4.-62-65.

62. Луговской Э.В. Физико химические исследования мономерного фибрина и его полимеризацию // Автореферат дисс.кан. биол. Наук. - Киев.- 1967.- 26 с.

63. Макаров В.А. Патология гемостаза / В.А Макаров // Патол. физиол. и экспер. терапия.- 1998.- № 4.- С.40 47.

64. Маркосян А.А. Онтогенез системы свертывания крови /А.А. Маркосян.-Л.: Наука, 1968.- 187 с.

65. Мачабели М.С. Коагулопатические синдромы / М. С.Мачабели. М,: Медицина, 1970.-303 с.

66. Медведь Л.В. Мультидоменная структура молекулы фибриногена / Л.В. Медведь, С.В. Литвинович // Биохимия животных и человека.- 1989.-Вып. 13.-С. 18-27.

67. Милованов А.П. Патология системы мать плацента - плод / А.П Ми-лованов. // Руководство для врачей.- М., 1999.- 236 с.

68. Никифоров С.Б. Патогенетическое обоснование клеточной терапии коронарного атеросклероза: Автореф. дис. . д-ра мед. наук: 14.00.16. / С.Б. Никифоров; НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН.- Иркутск, 2000.- 46 с.

69. Оганов Р.Г. Перспективы развития исследований по предупреждению сердечно-сосудистых заболеваний / Р.Г. Оганов // Кардиология.- 1991.-№ 5.- С. 5 -7.

70. Опыт использования нового тромбопластического препарата рекомби-нантного тканевого активатора плазминогена у больных инфаркта миокарда /А.Н. Плотников, И.И. Староверов, И.А. Тагиева и др.// Кардиология.- 1993.-№ 3.- С. 32-34.

71. Папаян Л.П. Лабораторные аспекты диагностики нарушений гемостаза / Л.П. Папаян, В.А. Кобилянская, К.А. Папаян.- СПб.: Изд- во СПб ГМУ, 1988.-С. 3-12.

72. Папаян Л.П. Современное представление о механизме регуляции свертывания крови / Л.П. Папаян // Тромбоз Гемостаз и Реология.- 2003.-№2.- С.7- 11.

73. Петрищев Н.Н. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний / Н.Н. Петрищев, Л.П. Папаян. С П., 1999. - 120 с.

74. Петровский Б.В. Актуальные проблемы гемостазиологии / Б.В. Петровский, Е.И. Чазов, С.В. Андреев. М., Наука, 1976. - 327 с.

75. Плацента регулятор гемостаза матери / А.П. Милованов, П.А. Кирю-щенков, Р.Г. Шмаков и др.//Акушерство и гинекология.- 2001.-№ 3.-С.3-5.

76. Практическая трансфузиология / Г.И. Козинец, Бирюков. Н.А. Горбунова и др.- М.: Триада- X, 1997.- 435 с.

77. Разумов В.Ю. Реологические свойства крови у больных ишемической болезнью сердца: Дис. . канд. мед. наук: 14.00.16 . М., 1977.- 110 с.

78. Распределение и инактивация тканевого тромбопластина в организме / Д.М. Зубаиров, Л.Г. Попова, Г.Б. Эвранова и др. // Гематол. и трансфу-зиол.- 1988.-№3.-С. 39-41

79. Румянцев Г.Е. К теоретическим основам тканевой терапии / Г.Е. Румянцев.- М.: Росиздат., 1953.- 142 с.

80. Румянцев Г.Е. Тканевая терапия / Г.Е. Румянцев. Росиздат., 1950. -120 с.

81. Рунович А. А. Трансплантация фетальных тканей в лечении тяжелых форм ИБС: Тез. III международного конгресс «Иммунореабилитация и реабилитация в медицине» // Inten I. On Immunorehabilitation.- 1997.-Vol.4.- P. 81.

82. Рунович A.A. Влияние аллотрансплантации фетальных тканей на течение ИБС / А.А.Рунович, Т.Е. Курильская, Э.Э. Кузнецова // Трансплантация фетальных тканей и клеток человека.- М.- 1996. С. 86-91.

83. Рябцев В.Г. Профилактика и диагностика послеоперационных тромбо-эмболических осложнений / В.Г. Рябов, П.С. Гордеев.- М.: Медицина, 1987.- 144 с.

84. Савельев B.C. Массивная эмболия легочных артерий / B.C. Савельев, Е.Г. Яблоков, А.И.Кириенко.- М.: Медицина, 1990.- 335 с.

85. Сидоркина А.Н. Биохимические основы системы гемостаза и диссеми-нированное внутрисосудистое свертывание крови /А.Н. Сидоркина, В.Г. Сидоркин, М.В. Преснякова.- Н. Новгород, 2001.- 92 с.

86. Скипетров В.П. Механизм изменений и нарушений свертываемости крови при беременности и родах / В.П. Скипетров.- Саранск, 1976.- 112 с.

87. Скипетров В.П. Тканевая система свертывания крови и тромбогеморра-гический синдром в хирургии / В.П. Скипетров .- Саранск: Мордов. гос. ун-т, 1978.- 112 с.

88. Страйер Л. Биохимия / Л. Страйер. М.: Мир, 1985.- Т. 1.- 232 с.

89. Стрекаловский Д.В. Влияние трансплантации феталыюй ткани печени на течение экспериментального атеросклероза: Автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.16. / Д.В. Стрекаловский; НЦ РВХ ВСИЦ СО РАМН. -Иркутск, 1999.- 18 с.

90. Стуров В.Г. Дисфибриногенемия: Современное состояние проблемы диагностики, верификации, лечения / В.Г. Стуров, А.В. Чупрова, С.Я. Анмут // Тромбоз Гемостаз и Реология.- 2003.- № 4.- С.24 30.

91. Струков А.И. Патологическая анатомия / А.И. Струков, В.В. Серов. -Москва Медицина, 1995.-687 с.

92. Сухих Г.Т. Медицинская клеточная биология / Г.Т.Сухих, В.С Репин.-М., 1998.-200 с.

93. Сыркин А.Л. Инфаркт миокарда / АЛ Сыркин.- М., 1991.- 135с.

94. Титова М.И. Изменения системы гемостаза при ожогах и пути ее коррекции (учебное пособие) / М. И.Титова, В.И. Никулин, П. И. Самы-нин.- М., 1989.- 43 с.

95. Тканевой активатор плазминогена, его ингибитор и другие факторы фибринолитической системы крови при стабильной ИБС / Д. А. Затейщиков, О. В. Аверков, Н. А. Грацианский и др. // Кардиология.- 1992.-№2.- С. 9-11.

96. Токаева Л. К. Коагуляционно литическая активность ткани злокачественной опухоли легкого / Л.К. Токаева // Тромбоз Гемостаз и Реология.-2003.- №2.- С.47-50.

97. Трансплантация культур островковых клеток фетальной поджелудочной железы в лечении инсулинозависимого сахарного диабета / Н.Н. Скалецкий, Н. Л. Фатеева, Г.Т.Сухих и др. // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1994.-№4.- С. 356 363.

98. Федорич В.Н. Взаимодействие иммуноглобулин антител с эндогенными биологически активными веществами, роль их изменений в диагностики ревматических и ишемических поражений миокарда: Автореф дис. .д-ра мед. наук. / В.Н. Федорич; - Киев, 1988.- 44 с.

99. Ферстрате М. Тромбозы / М. Ферстрате, Ж.Фермилен.- М.: Медицина, 1986.- 336 с.

100. Фетальная, клеточная и тканевая терапия: результаты и перспективы применения в акушерстве и гинекологии / В.И. Грищенко, Н.А. Щербина, О.П. Танько и др. // Акушерство и гинекология. 2001.- № 2.- С. 6 -8.

101. Физиология системы гемостаза /В.П. Балуда, М.В. Балуда, И.И.Деянов и др.-М., 1995.-289 с.

102. Филатов В.П. Несколько соображений по поводу пересадки роговицы /

103. B.П. Филатов// Сов. вестн. офтальмон.-1933.- кн.1, 2.- С. 141.

104. Цирельников Н.И. Гистофизиология плаценты человека / Н.И. Цирель-ников.- Новосибирск, 1980.- 245 с.

105. Чазов Е.И. Антикоагулянты и фибринолитические средства / Е.И. Чазов, К.М. Лакин М.: Медицина, 1977.- 311 с.

106. Чазов Е.И. Охрана здоровья населения и её роль в социально-экономическом прогрессе общества / Е.И Чазов Г.И. Царегородцев // Тер. арх. 1983. - № 12. - С. 3 - 7

107. Чазов Е.И. Возможности консервативной терапии ИБС: Успехи и разочарования / Е.И. Чазов // Тер. архив.- 1995.- № 9.- С. 3 9.

108. Шевченко О.П. Фибриноген: биологическая роль и клиническое значение / О.П. Шевченко // Клин. лаб. диагн. 1997. - № 5. - С. 24 - 25

109. Шитикова А.С.-Тромбоцитарный гемостаз / А.С. Шитикова.- СПБ, 2000.- 227 с.

110. Шмид Ф. Клеточная терапия шаг в будущее медицины /Ф. Шмид.-Неккарсульм; Штутгарт, 1991.- 161 с.

111. Эффективность применения в терапии клеток эмбриональной печени / Л.П. Алеексеев, С.И. Шеренков, Р.В. Василов и др.// Труды V Всесоюз. биохимического съезда. Киев, 1986.- Т.2.- С. 186 - 187.

112. Эффективность применения плацентарной ткани / А.Н Гольцев, В.П. Грищенко, Н.Н. Кушниренко и др. // Вестн. проблем биол. и мед.- 1997.-№ 10.- С.95- 106.

113. Юнусов Р.В. Электрофоретическое исследование тканевых активаторов плазминогена человека / Р. В. Юнусов // Бюлл. эксп. биол.- 1973.- №.6.1. C.47- 48.

114. A comparison of low dose heparin with low molecular weight heparin as prophylaxis against venous thromboembolism after major trauma. / W. H. Geerts, R.M. Jay, J. K. Darmon et al. //N. Engl. J. Med.- 1996.- Vol. 335.1. P. 701 -707.

115. Activator of plasminogen in saline extracts of human thrombi / P.M. Dalai, P.M. Shah, M.J. Allington et al. // Nature, 1969.- Vol. 222.- P. 988 990.

116. Alles R. A.Isolation and properties of human vascular plasminogen activator / R. A. Alles, D. S. Pepper // Thromb. Haemost. 1981.-№ 3.- P. 43-50.

117. Antithrombin III and procoagulant activity: sex differences and effects of the menopause / T.W. Meade, S. Dyes, D. J. Howarth et al. // Brit. J. Haematol. -1990.- Vol. 74.- P. 77-81.

118. Aznar J. Role of plasminogen activator inhibitor type 1 in the pathogenesis of coronary diseases / J. Aznar, A. Estelles // Haemostasis, 1994.- Vol.24.- P. 243 -251.

119. Bachmann F. Fibrinolysis / F. Bachmann, Eds. M. Verstrate et al.// Thrombosis und Haemostasis. Leuven, 1987.- P. 227 265.

120. Benerschke K. Pathology of the Human Placenta / K. Benerschke, P. Kauf-mamm. Berlin, 1995. - 3- rd Ed. - 210 p.

121. Binder B.R. Physiology and path physiology of the fibrinolytic system / B.R. Binder // Fibrinolysis. № 5. - 1995. - P. 3 - 8.

122. Brennan S.O. Physiological variant of antithrombin III lacks carbohydrate side chain at Asn 135. / S. O. Brennan, P.M. George, R.E. Jordan // Febs Lett.- 1987.- Vol 2.- P. 431 -436

123. Bronze G.I. Binding of human factor VII und Vila to monocytes / G.I.Bronze //1. Clin in vest. 1982. - Vol.70, № 3. - P.526 - 535

124. Broze G. J. Human factor VII / G. J. Broze, Ph. W. Majierus // Methods Eh-zymol.- 1981.- Vol. 80.- C. 228 237.

125. Butenas S. Kinetics of human factor VII activation / S. Butenas, K. Mann // Biochemistry.- 1966.- Vol. 6.- P. 1904 1910

126. Cannel W. B. Diabetes, Fibrinogen, and risk of cardiovascular disease. The Framingham experience / W. B. Cannel, P.R.Wilson // Amer. Heart. 1990.1. Vol Л 20.- P.- 672-679.

127. Chang J. A. Factor VII a tissue factor interactions: an evaluation using factor VII- factor IX chimeras / J.A. Chang // Haemost.- 1996.- Vol. 26.- P. 35 -39.

128. Collen D. On the regulation and control of fibrinolysis / D.Collen //Thromb. Haemost.- 1980.- Vol.43.- P. 77- 89.

129. Collen D. Thrombolysis with human extrinsic (tissue type) plasminoden activator in rabbits with experimental jugular vien thombosis // D. Collen, J. M. Stassen, M. Verstraete//J. Clin. Invest. - 1983.- Vol. 71.- P. 368-376.

130. Colman W.R. Overview of hemostasis / W.R., Colman, V.J., Marder , E.W Salzman (eds) // Hemostasis and Thrombosis: Basic Principles and Clinical Practice. Philadelphia: J. B. Lippincott, 1994. - 3 rd ed.- P. 3 - 18.

131. Coronary atherosclerosis. A multifactorial disease / J.J Badimon, V. Fuster, J.H. Chesebro et al. // Circulation. 1993.- Vol. 87. - № 3.- P. 3-13.

132. Cortellaro M. Antithrombin III and arterial disease / M. Cortellaro // Lancet. 1991.-Vol.338.-P. 1525 - 1526.

133. Crystal structure of cleaved bovine antithrombin III at 3,2 resolution / L. Mourey, J. P. Samama, M. Delarue et al. // J. Mol. Biol.- 1993.- Vol. 1.- P. 223 -241.

134. Degen. S.J. The human tissue plasminogen activator gene / S.J. F Degen, B. Rajput, E. Reich//J. Biol. Chem.- 1986.- Vol. 261.- P. 6972-6985.

135. Ernst E. Fibrinogen as a cardiovascular risk factor: a metta-analysis and review of the literature / E. Ernst, K.L Resch // Ann. Intern. Med.- 1993,- Vol .118,- P. 956-963.

136. Ernst E. Regional variation in plasma fibrinogen levels / E. Ernst // Ann.1.tern. Med. 1991. - Vol. 115. - P. 329 -330.

137. Ersdal Badju E. Identification of the antithrombin III heparin binding site / E. Ersdal-Badju, A. Lu, Y. Zuo .//J. Biol. Chem, 1997.- Vol. 31.- P. 19393 -19400.

138. Fears. R. Binding of plasminogen activators to fibrin: characterization and pharmacological conseguences / R. Fear // Biochim J. -1989. Vol. -261. -P. 313 -324.

139. Fetal liver transplantation in the minipigs / M. Andean, M. Delegai, F. Gentis et al. // Fetal Liver Tansplantation.- New York: Alan R. Liss. Inc., 1985.- P. 205 218.

140. Furie W.A. Molecular basis of vitamin K-dependent gamma carboxylation / W.A. Furie, В. C. Furie//N. Engl. J. Med.- 1990.- Vol. 75.-P. 1753 -1762.

141. Glycated proteins modulate tissue plasminogen catalyzed plasminogen activation / I.W. Bobbink, J.J Tekelenburg, Sixma et al. // Biochem. Biophys Res. Commun. - 1997.-Vol. 3.-P.-595 - 601.

142. Goldfard R. H Production of plasminogen activator by human NK cells / R. H Goldfard, T. Timonen, R.B. Herberman et al // J. Exp. Med. 1984.- Vol. 159, №3.-P. 935 -951.

143. Hamberg U. The fibrinolitic activation mechanism in human plasminogen / U. Hamberg // Proc. Roy. Soc. В.- 1969.- Vol. 32.- P. 293 309.

144. Heemskerk J.W.M. Platelet activation and blood coagulation / J.W.M. Heemskerk, E.M. Bevers, T. Lindhout // Thromb. Haemost.- 2002.- Vol. 88.- P. 186- 193.

145. Heparin cofactor II Oslo. Mutation of ArG 189 to his decreases the affinitu for dermatan sulfate / M.A. Blinder, T.R. Andersson, U. Abilgaard et al. // J.Biol. Chem.-1989. - Vol. 9.-P. 5128 - 5133.

146. Hoffman M. The action of high dose factor Vila (F Vila) in cell- based model of hemostasis / M. Hoffman, D.M.Monroe // Seminars in Hematology.- 2001.- Vol. 38, № 4. Suppl 12 - P. 6 - 9.

147. Howell W.H. The purification of heparin and its presence in blood / W.H. Howell //Am. J. Phisiol.- 1924- 1925.- Vol. 71.- P. 553 562.

148. Irish A. B. Factor VII coagulant activity (VII c) and hypercoagulability in chronic renal disease and dialysis: relationship whit dyslipidaemia, inflammation, and factor VII genotype. Nephrol / Green F.R // Dial Transplant. -1998.- Vol.3.- P. 679-684.

149. Kisiel W. Activation of bovine factor VII (proconvertin) by factor Xlla (activated Hageman factor) / W.Kisiel, K.Fujikawa, E.W.Davie // Biochemistry.-1977.- Vol. 16.-P. 4189.

150. Kristennnnsen P. Human endothelial cells contain one type of plasminogen activator / P. Kristennnnsen, L. Larson , L.Nielson // Feb. Let.- 1984. Vol. 168, № 1.-P.33.

151. Kuzmina I.U. Fetal liver transplantation / I.U. Kuzmina, O.S. Prokopuk // World Congress of Cryobiology and Criomedicin.-Marselle, 1998.-P. 114117.

152. Marciniak E. Thombin- induced proteolysis of human antithrombin III : an outstanding contribution of heparin / E. Marciniak // Brit. J. Haematol.-1981.- Vol.21.- P. 325 -336.

153. Meade T.W. Hemostatic function and ischemic heart disease: principalresults of the Nothwick Part heart study / T.W., Meade, S. Mellows, M. Brozovic et al. // Lancet.- 1986.- Vol. 2.- P. 533 537.

154. Mechanism of factor VII a dependent coagulation in hemophilia blood / S. Butenas, K.E. Brummel, D. F.Brand et al. // Blood. - 2002.- Vol. 99.- P. 923 -930.

155. Octerud B. Activation of factor XI by the reaction product of tissue factor and factor VII: additional pathway for initiating blood coagulation / B.Octerud, SI. Rapaport// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977.- Vol. 74.- P. 5260 - 5264.

156. Oscarsson L.G. Location of the antithrombin binding sequence in the heparin chan / L.G. Oscarsson, G. Pejler, U. Lindahl // J.Biol. Chem, 1989. - Vol. l.-P. 296-304.

157. Physiological conseguences of loss of plasminogen activator gene function in mice / P. Carmeliet, L. Schoonjans, L. Kieckens et al. // Nature. 1994.-Vol. 368.-P. 419-424.

158. Plasma fibrinogen level as an independant indicator of severity of coronary atherosclerosis / K. Handa, S. Копе, K. Saku et al. // Atherosclerosis.-1989.-Vol. 2-3.- P. 209-213.

159. Plasma fibrinogen: levels and correlation in young adults. The Coronary Artery Risk Development in Young Adults (CARDIA) Study / A.R Folsom, H.T. Qamhich, J.M Flack, et al. // Am. J. Epidemiol.- 1993.- Vol. 138.-P.1023 -1036.

160. Plasminogen activator inhibitor 1 released from activated platelets plays a key roll in thrombolysis resistance / H.A.R. Stringer, O.van Swieten, H.F.G Heijen et al. //Arterioscler. Thromb.- 1994.- Vol.14.- P. 1452 -1458.

161. Plasminogen activator inhibitor in plasma. Risk factor for recurrent myocardial infarction / A. Hamsten, Y. De Faire, G. Waldius et al. // Lancet. -1987.- Vol.2.- P. 3-121.

162. Presence of two plasminogen alleles in normal populations / M. Kida, M. Kawadata, T. Yamazaki et al. // Thromb. Haemost.- 1998,- Vol. 20.- P. 150 -154.

163. Prochownik E.V. In vitro transcription of a human antithrombin III «minigene» / E. V. Prochownik, S. Orkin // J. Biol. Chem, 1984.- Vol. 12,- P. 15386- 15392.

164. Ratnoff O. D. The role of haemostatic mechanisms / C. R. M. Prentice, W. B. Saunders // Clinics in Haematology. Thrombosis.- London, 1981.- Vol. 10.-P. 261 -281.

165. Relationships of plasma viscosity, coagulation and fibrinolysis to coronary risk factors and angina / G. D.O. Love, D.A. Wood, J.T. Douglas et al. // Thromb. Haemost.- 1991.- Vol.65.- P. 339 342.

166. Roberts H.R. Newer concepts of blood coagulation / H.R. Roberts, D. M. Monroe, J.A.Oliver //Haemophylia. 1998.-Vol. 15.-P. 331-334.

167. Seligsohn U. Activation of human factor VII in plasma and in purified systems: Roles of activated factor IX, kallikrein and activated factor XII / U.Seligsohn, B.Osterud, S.F.Brown // J. Clin. Invest.- 1979.- Vol.- 64.- P. 1056- 1059.

168. Sprengers E.D. Plasminogen activator inhibitors / E. D Sprengers, C. Kluft // Blood.- 1987.- Vol.69, № 2.- P. 381- 387.

169. The dual role of factor VII in blood coagulation. Initiation and inhibition of a proteolytic system by a zymogen / M. Zur, R.D. Radcliffe, J.Obberdick et al. // J. Biol. Chem.- 1982.- Vol. 257.- P. 5623 5627.

170. Wetz J. I. Low molecular weight heparin / J.I. Wetz // N. Engl. J. Med.-1997.- Vol.337.- P. 688.

171. Wiman B. Molecular mechanism of physiological fibrinolysis / B. Wiman, D. Collen //Nature.- 1978.- Vol.272.- P. 549 550.