Влияние гипергомоцистеинемии и наследственных факторов риска тромбофилии на особенности клинического течения облитерирующего атеросклероза нижних конечностей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат медицинских наук Дмитриева, Алиса Рафаэлевна

• Дмитриева, Алиса Рафаэлевна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Дмитриева, Алиса Рафаэлевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Атеросклероз: этиология и патогенез. Повреждение эндотелия как

ключевой момент в развитии атеросклеротического процесса

1.1.1 Облитерирующий атеросклероз артерий нижних конечностей как

клиническое осложнение атеросклероза

1.1.2 Гипергомоцистеинемия как независимый фактор риска развития

атеросклеротического и тромботического процессов

1.2.1 Метаболизм гомоцистеина. Факторы, влияющие на риск развития гипергомоцистеинемии

1.2.2 Фракции гомоцистеина в плазме крови

1.3 Возможные механизмы патологического влияния повышенного уровня

гомоцистеина

2.3 1.4 Роль гипергомоцистеинемии в патогенезе атеросклероза и

тромбоза

3.3 1.5 Гипергомоцистеинемия и наследственные факторы риска

тромбообразования

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Материал и методы исследования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОВ С ОБЛИТЕРИРУЮЩИМ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ АРТЕРИЙ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ

3.1. Содержание гомоцистеина в плазме крови пациентов с облитерирующим

атеросклерозом артерий нижних конечностей

3.2. Взаимосвязь между рядом клинических факторов, биохимических показателей и содержанием гомоцистеина в плазме

крови

3.3. Анализ влияния гомоцистеина на систему гемостаза

3.4. Взаимосвязь между содержанием гомоцистеина и концентрацией

циркулирующих эндотелиоцитов в плазме крови

3.5. Изучение ассоциативных связей между генотипами по генам

метилентетрагидрофолат редуктазы и фибриногена, и содержанием кодируемых данными генами белков в плазме крови у больных

облитерирующим атеросклерозом артерий нижних

конечностей

3.6. Особенности аллельного полиморфизма генов, кодирующих компоненты системы гемостаза у больных облитерирующим

атеросклерозом артерий нижних конечностей

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ- артериальная гипертензия

АДМА- ассиметричный диметиларгинин

АКМ- активные кислородные метаболиты

АПТВ- активированное парциальное тромбопластиновое время

АТ- антитромбин

АТФ- аденозинтрифосфат

ВАТ- внутрисосудистая активация тромбоцитов

ГГЦ- гипергомоцистеинемия

ГЦ- гомоцистеин

ДДАГ- диметиларгинин-диметиламино-гидролаза ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота ДЭК- десквамированные эндотелиальные клетю! ЖКТ- желудочно-кишечного тракт

ЖХВД- жидкостная хроматография под высоким давлением

КГ- контрольная группа

РОЖ- критическая ишемия конечностей

ЛПВП- липопротеины высокой плотности

ЛПИ- лодыжечно-плечевой индекс

ЛИНИ- липопротеины низкой плотности

ОААНК- облитерирующий атеросклероз артерий нижних конечностей ПТ- протромбиновый тест

ПХ- перемежающаяся хромота ПЦР- полимеразная цепная реакция

ПЦР-ПДРФ- анализ длин рестрикционных фрагментов ПЦР-продукта

ССЗ- сердечно-сосудистые заболевания

ХАН- хроническая артериальная недостаточность

ЧВ- частота встречаемости

ЭЗРФ- эндотелий-зависимый расслабляющий фактор

ЭДТА- этилендиаминтетрауксусная кислота

С1- доверительный интервал

еЖ)8- эндотелиальная синтаза оксида азота

Бд- фибриноген

ОРШа- тромбоцитарный рецептор вРШа

М-средняя арифметическая величина статистической совокупности

МТИРЯ- метилентетрагидрофолат редуктаза

СЖ- отношение шансов

РА1-1- ингибитор активатора плазминогена -1

ББ- стандартное отклонение

^РА- тканевой активатор плазминогена

фактор Виллебранда У\УБ А^- антиген фактора Виллебранда

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние гипергомоцистеинемии и наследственных факторов риска тромбофилии на особенности клинического течения облитерирующего атеросклероза нижних конечностей»

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время показатели инвалидизации и смертности в России от сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) являются одними из самых высоких в мире, причем 40% людей в нашей стране умирают от сердечно-сосудистой патологии в активном трудоспособном возрасте (25-64 года) [3]. Данный факт объясняется, прежде всего, большей распространенностью среди жителей России ряда общепризнанных факторов риска развития сердечнососудистой патологии, напрямую ассоциированных с достаточно низким социально-экономическим уровнем жизни россиян. К таким факторам относятся несбалансированное питание, недостаточная физическая активность, психосоциальный стресс и связанные с ним поведенческие факторы риска - курение и избыточное потребление алкоголя. Помимо общепризнанных факторов риска, ассоциированных с особенностями образа жизни, в настоящее время активно изучается целый ряд потенциальных индукторов развития сердечно-сосудистой патологии, которые в отдельности или при сочетании с классическими факторами риска способны ускорять и усугублять развитие ССЗ.

Среди потенциальных индукторов важная роль отводится гипергомоцистеинемии - повышенному содержанию гомоцистеина (ГЦ) в плазме крови. Проспективные и ретроспетивные исследования, посвященные изучению корреляция между уровнем ГЦ и риском развития кардиоваскулярной патологии носят достаточно противоречивый характер [32, 48, 50]. В тоже время, экспериментальные работы убедительно свидетельствует о патологическом действии гомоцистеина на организм в концентрациях выше физиологических [98]. Показано, что данное воздействие является комплексным и реализуется, прежде всего, путем прямого цитотоксического воздействия ГЦ на эндотелий сосудов, что, в конечном итоге, приводит к развитию атеросклеротического процесса и

эндотелиальной дисфункции с угнетением антикоагулянтных и активацией прокоагулянтных свойств эндотелия [46,47].

Облитерирующий атеросклероз артерий нижних конечностей (ОААНК) начинает развиваться задолго до появления первых клинических симптомов (асимптомная форма), по риску развития критических осложнений сопоставим с атеросклерозом коронарных артерий [58, 103] и может рассматриваться как значимый предиктор системного атеросклероза.

До настоящего времени данные об этиопатогенезе тромбоза и атеросклеротических процессов полностью не раскрыли механизма их взаимного влияния. Поскольку избыток ГЦ оказывает одновременно и атерогенное и тромбоваскулярное действие, изучение влияния ГГЦ представляется крайне важным с точки зрения прогноза особенностей клинического течения ОААНК.

Развитие ССЗ в существенной степени обусловлены генетическими особенностями организма. На сегодняшний момент выявлен целый ряд генов, аллельные варианты которых независимо или синергично могут модифицировать риск развития и характер течения сердечно-сосудистой патологии. Большинство из них кодирует компоненты плазменного и тромбоцитарного звеньев гемостаза или вовлечены в патогенез артериальной дисфункции (например, гипергомоцистеинемия) [1, 55, 75, 96, 80]. Вопрос об ассоциации между носительством данных генетических вариантов и особенностями течения ОААНК в настоящее время изучен мало.

Существующие на сегодняшний момент методы лечения ОААНК не приводят к полному излечению пациентов, поэтому риск прогрессирования данного заболевания, а также развития тромботических эпизодов в других сосудистых бассейнах для пациентов с диагнозом ОААНК остается высоким всю жизнь [18]. В связи с этим, изучение влияния гипергомоцистеинемии и наследственных факторов риска тромбофилии на особенности клинического течения облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей представляется крайне актуальным.

Все вышесказанное определило значимость данного исследования и явилось основанием для его проведения.

Цель исследования.

Установить степень влияния гипергомоцистеинемии и наследственных факторов риска тромбофилии на особенности клинического течения облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей.

Задачи исследования.

1. Определить частоту встречаемости гипергомоцистеинемии у пациентов с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей.

2. Изучить клинико-лабораторные особенности течения облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей у больных с гипергомоцистеинемией.

3. Провести оценку состояния системы гемостаза у больных облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей в зависимости от уровня гомоцистеина в плазме крови.

4. Оценить влияние ГГЦ на концентрацию циркулирующих эндотелиоцитов в плазме крови.

5. Изучить влияние полиморфизма С677Т в гене метилентетрагидрофолат редуктазы на уровень гомоцистеина в плазме крови больных облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей.

6. Оценить наличие ассоциативных связей между генетическими маркерами тромбофилии и особенностями клинического течения облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Риск развития облитерирующего атеросклероза артерий нижних

конечностей и тяжесть его клинических проявлений во многом

определяются уровнем гомоцистеина в плазме крови.

2. Неблагоприятное влияние повышенного содержания гомоцистеина в плазме крови на характер клинического течения атеросклеротического процесса обусловливается сочетанием прямого атерогенного воздействия избытка этого метаболита на эндотелий сосудов с тенденцией к большей выраженности прокоагулянтных нарушений и сопутствующим угнетением системы естественных антикоагулянтов.

3. Наличие в генотипе наследственных факторов риска, предрасполагающих к развитию гипергомоцистеинемии и гиперкоагуляционного синдрома, ассоциировано с неблагоприятным клиническим течением облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей.

Научная новизна.

Установлено, что тяжесть течения ОААНК и наличие клинически выраженной сопутствующей сосудистой патологии при этом заболевании ассоциированы с содержанием ГЦ в плазме крови.

Впервые установлено, что концентрация десквамированных циркулирующих эндотелиоцитов связана со степенью тяжести хронической артериальной недостаточности, что позволяет рассматривать данный показатель как неблагоприятный прогностический маркер клинического течения ОААНК.

Впервые показана ассоциация между носительством аллеля МТНРК 677Т, генотипа РА1-1 40АЮ и степенью хронической артериальной недостаточности у больных с ОААНК.

Практическая значимость.

Полученные результаты могут быть использованы в алгоритме обследования больных облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей, что позволит спрогнозировать особенности клинического

течения заболевания и выбрать адекватные методы его лечения и профилактики повторных тромботических осложнений.

Апробация материалов диссертации.

Положения диссертационной работы были представлены на третьей Международной конференции по гипергомоцистеинемии (Саарбрюкен, Германия, 2003г.), на Международном конгрессе "Тромбоз, гемостаз и патология сосудов" (Санкт-Петербург, Россия, 2004), а также на Международном Конгрессе по тромбозу и гемостазу (Сидней, Австралия, 2005).

Внедрение результатов исследования в практику.

Полученные результаты используются при обследовании больных с сердечно-сосудистой патологией, которым оказывается стационарная и амбулаторная помощь в Российском НИИ гематологии и трансфузиологии. Результаты исследования были включены в медицинскую технологию "Молекулярно-генетические и функциональные методы диагностики тромбофилий, обусловленных полиморфизмом 675 4С/5в в гене РА1-1, -4550/А в гене фактора I и Р1А1/А2 в гене ОрШа" , представленную в 2005 году в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. Данная технология была отклонена в связи с тем, что для молекулярно-генетических исследований использовались реагенты, незарегистрированные в установленном порядке.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста и

состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания

объектов, материалов и методов исследования, изложения результатов

ю

собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 10 рисунками. Библиография включает 121 источник, из них 24 - отечественных и 97 -зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Дмитриева, Алиса Рафаэлевна

выводы

1. В обследованной группе больных ОААНК гипергомоцистеинемия (уровень ГЦ >13,4 мкмоль/л) выявлена в 46,7% случаев, по сравнению с 8,5% в контрольной группе (р<0,0001; 011=5,5; 01:3,22-9,45).

2. Повышение уровня гомоцистеина в плазме крови больных ОААНК ассоциировано с тяжелым течением заболевания и развитием клинически значимого атеросклероза сосудов других органов и систем.

3. У больных ОААНК на фоне гипергомоцистеинемии происходит повышение активности протромбогенной составляющей и снижение активности атромбогенной компоненты системы свертывания крови, что усиливает смещение баланса системы гемостаза у пациентов с нарушенным обменом гомоцистеина в сторону гиперкоагуляции.

4. Концентрация циркулирующих эндотелиоцитов существенно повышена у больных ОААНК с гипергомоцистеинемией, по сравнению с пациентами без таковой (р<0,0001).Увеличение числа циркулирующих эндотелиоцитов можно рассматривать как неблагоприятный прогностический маркер заболевания.

5. Полиморфизм МТИБЯ С677Т является существенной генетической детерминантой развития ГГЦ у больных ОААНК. Показатели среднего уровня ГЦ в группах пациентов с различными генотипами MTHFR имели статистически значимые отличия (р=0,0002).

6. К тяжелой форме течения ОААНК предрасполагает наличие в генотипе аллеля MTHFR 677Т (р=0,009; OR=2,8; CI: 1,3-6,0) и/или варианта 4G/4G гена PAI-1 (р=0,09; OR=2,0; CI.0,9-4,1). Носительство Лейденской мутации, а также генотип PAI-1 4G/4G являются неблагоприятными генетическими детерминантами, которые могут обусловливать артериальные тромбозы различной локализации у больных ОААНК.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Дмитриева, Алиса Рафаэлевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Баркаган З.С. , Момот А.П. // Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. - М.: "Ньюдиамед", 2001.-296 с.

2. Бицадзе В.О., Макацария А.Д. Принципы профилактики развития дефектов нервной трубки // Фарматека. - 2007. - N1(136). - С.26-28

3. Бочков Н. П., Гавриленко А. В., Константинов Б. А., Воронов Д. А. Генно-инженерные технологии в лечении хронической ишемии нижних конечностей // Вестник РАМН. - 2006. -N9-10. - С. 6-11.

4. Бувальцев В.И. Дисфункция эндотелия как новая концепция профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний // Международный Медицинский Журнал. - 2001.-N3.- Режим доступа: http://medi.ru/Doc/77 .htm, свободный.

5. Волошин П.В., Малахов В.А., ЗавгородняяА.Н.Эндотелиальная дисфункция при церебооваскулярной патологии. - Харьков :ИИЦ Харьковской медицинской академии последипломного образования. - 2006.92 с.

6. Воронина E.H., Филипенко M.JI, Сергеевичев Д.С., Пикалов И.В. Мембранные рецепторы тромбоцитов: функции и полимофизм // Вестник ВОГиС. - 2006. - Том 10.-N3. - С.553-564.

7. Гемостаз. Руководство для врачей. - Под редакцией Мамаева Н. Н., Рябова С.И.- СПб.-2008.- 543 С.

8. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. - Под редакцией H.H. Петрищева, Л.П. Папаян. - СПб. - 1999. - 153 С.

9. Горожанская Э.Г. Свободнорадикальное окисление и механизмы антиоксидантной защиты в нормальной клетке и при опухолевых заболеваниях // Клиническая лабораторная диагностика . - 2010.- N6. - Р. 2844.

10. Гуревич B.C. Современные представления о патогенезе атеросклероза//Consiliummedicum. - 2006. - T.1.-N4.

11. Дисфункция эндотелия. Патогенетическое значение и методы коррекции. - Под редакцией H.H. Петрищева. - СПб:ИИЦ BMA. - 2007. - 296 с.

12. Жлоба А. А. Лабораторная диагностика при гипергомоцистеинемии // Научно-практический журнал "Клинико-лабораторный консилиум". - 2009. - С.49-60.

13. Жлоба A.A., Никитина В.В. Выявление и лечение гипергомоцистеинемии (Пособие для врачей). - М.:Дружба народов. - 2004. -С.1-40.

14. Зайчик А.Ш., Чурилов Л. П. Основы патохимии. - СПб: Элби-СПб.-2001.-687С.

15. Затевахин И. И., Цициашвили М. Ш., Степанов Н. В., Золкин Н. И. Облитерирующие заболевания аорты и нижних конечностей // РМЖ. -2001.-Т.-9.-N3-4.

16. Кучеренко О.Д., Погорелов В.Н., Стоянов С.И. Антиоксиданты и атеросклероз // Экспериментальная и клиническая медицина.-2000.-N1.-С.58-61.

17. Маниатис Т., Фрич Э. ,Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Пер. с англ. - М.: Мир. - 1984. -480с.

18. Национальные рекомендации по ведению пациентов с сосудистой артериальной патологией (Российский согласительный документ). Часть 1. Периферические артерии.-М.: Изд-во НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН.- 2010. - 176 С.

19. Национальные рекомендации по кардиоваскулярной профилактике // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. -2011. - Т.10. -N6,- Приложение 2. - 64С.

20. Савельев B.C., Петухов В.А., Ан Е.С. и др. Дисфункция эндотелия при липидномдистресс-синдроме и дисметаболических последствиях перитонита // Русский медицинский журнал (хирургия). - 2009. -Т. 17.-N14.-С.881-890.

21. Шаповалова Е.Н., Пирогов А.В. Хромотографические методы анализа (Методическон пособие для специального курса). - Москва: ИИЦ МГУ им. Ломоносова. - 2007. - 109С.

22. Шестакова М.В. Дисфункция эндотелия - причина или следствие метаболического синдрома? // Русский медицинский журнал. - 2001.- Т.9. -N2. - С. 88-90.

23. Шитикова А. С. Тромбоцитарный гемостаз. - СПб. - 2000. - 222С.

24. Шмелева В. М. Значение гомоцистеина в патогенезе тромбоза и атеросклероза // Ученые Записки СПбГМУим.И.П. Павлова.- 2004. - Т.П. -N3. - С.25-31.

25. А1 - Obaidi М, Stubbs P., Collinson P. et al. Elevated homocysteine levels are associated with increased ischemic myocardial injurt in acute coronary syndromes // JACC. - 2000. - Vol.36. - P. 1217-1222.

26. Alhenc-Gelas M., Arnaud E., Nicaud V. et al.Venous thromboembolic disease and the prothrombin, methylene tetrahydrofolatereductase and factor V genes // TrombHaemost. - 1999. - Vol.81. - P.506-510.

27. Bennett J., Catella-Lawson F., Rut A.et al. Effect of the P1A2 alloantigen on the function of рЗ-integrins in platelets // Blood. - 2001. - Vol. 97. -P.3093-3099.

28. Boger R., Bode-Boger S., Szuba A. et al. Asymmetric dimethylarginine (ADMA): a novel risk factor for endothelial dysfunction: its role in hypercholesterolemia // Circulation. -1998,- Vol. 98- P. 1842-1847

29. Bolander-Gouaille C. Focus on Homocysteine and the Vitamins involved in its metabolism // 2002 - Springer Veriag France. - 217 p.

30. Bostom A., Bausserman L., Jacques P.F.et al. Cystatin С as a determinant of fasting plasma total homocysteine levels in coronary artery disease

99

patients with normal serum creatinine // ArteriosclerThrombVasc Biol. - 1999.-Vol. 19.-N9.-P. 2241-2244.

31. Bots ML, Dujk JM, Oren A, Grogge D. Carotid intima-media thickness, arterial stiffness and risk of cardiovascular disease: current evidence // J Hypertens.- 2002.-V. 20.-P.2317-2326.

32. Boushey C., Beresford S., Omenn G. et al. A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor forvascular disease. Probable benefits of increasing folic acid intakes // JAMA.- 1995,- Vol. 274,- P.1049-1057."

33. Bray P., Jin Y., Kickler T. Rapid genotyping of the five major platelet alloantigens by reverse dot-blot hybridization // Blood. - 1994. - Vol.84. - P. 43614367.

34. Cesari M., Sartori M., Patrassi G. et al. Determinants of plasma levels of plasminogen activator inhibitor-1// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1999. -Vol.19.-P. 316-320.

35. Clarke R., Armitage J., Lewington S. et al. Homocysteinelowering trials for prevention of vascular disease: protocol for acollaborative meta-analysis // ClinChem Lab Med. - 2007,- Vol. 45.- N12. - P. 1575-8151.

36. Cooke J., Tsao P. Is NO an endogenous antiathero-genic molecule? Arterioscler. Thromb. - 1994. - Vol. 14. - P. 653-655.

37. Criqui M. Peripheral arterial disease epidemiological aspect // Vascular Medicine.- 2001,- Vol.6 (suppl.l). - P.3-7.

38. Criqui M., Fronek A., Barret-Connor E. et al. The prevalence of peripheral arterial disease in a defined population // Circulation. - 1985.- Vol.71. -N3. - P.510-551.

39. Dardik R.,Varon D., Tamarin I. et al. Homocysteine and oxidized low density lipoprotein enhanced platelet adhesion to endothelial cells under flow conditions:distinct mechanisms of thrombogenic modulation // Thromb. Haemost. - 2000.-Vol. 83. - P.338-344.

40. Dawson S., Wiman B., Hamsten A. et al. The two allele sequences of

a common polymorhism in the promoter of the plasminogen activator inhibitor-1

100

(PAI-1) gene respond differently to interleukin-1 in HepG2 cells // J. Biol. Chem. -1993. - V.268. - P. 10739-10745.

41. De Bree A., Verschuren W., Blom H., Kromhout D. Lifestyle factors and plasma homocysteine concentrations in a general population sample // Am J Epidemiol.- 2001.- Vol. 154. - P.150-154.

42. De Stefano V., Chiusolo P., Paciaroni K. et al. Prothrombin G20210A mutant genotype is a risk factor for cerebrovascular ischemic disease in young patients //Blood. - 1998. - Vol.91. - P.3562-3565.

43. Demuth K., Drunat S., Giterd X. et al. Homocysteine is the only plasma thiol associated with carotid artery remodeling // Atherosclerosis.-2002,-Vol.165. -P.167-174.

44. Den Heijer M., Willems H., Blom H. et al. Homocysteine lowering by B vitamins and the secondary prevention of deep vein thrombosis and pulmonary embolism: A randomized, placebocontrolled, double-blind trial // Blood. - 2007.-Vol. 109.- N1,- P. 139-144.

45. Dhillon B., Badiwala M., Maitland A. et al. Tetrahydrobiopterin attenuates homocysteine induced endothelial dysfunction // Mol Cell Biochem. -2003.-Vol. 247,-P. 223-227.

46. Durand P., Prost M., Loreau N. et al. Impaired homocysteine metabolism and atherothrombotic disease // Laboratory investigation. - 2001. -Vol. 81.-N5.-P.645-672.

47. Eberhardt R., Forgione M., Cap A. et al. Endothelial dysfunction in a murine model of mild hyperhomocyst(e)inemia // J. Clin. Invest. - 2000. - Vol. 106.-P. 483-491.

48. Evans R., Shaten B., Hempel J. et al. Homocysteine and risk of cardiovascular disease in the MultipleRisk Factor Intervention Trial // ArteriosclerThrombVasc Biol.- 1997,- Vol.17.- P.1947-1953."

49. Fiskerstrand Y., Refsum H., Kvalheim G., Ueland P., Homocysteine and other thiols in plasma and urine: automated determination and sample stability.

// Clinical Chemistry. - 1993. - Vol. 39. - P. 263-271.

101

50. Folsom A., Nieto F., McGovern P. et al. Prospective study of coronary heart disease incidence in relation to fasting total homocysteine, related genetic polymorphisms, and B vitamins: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) study // Circulation.- 1998.- Vol.98. - P. 204-210.

51. Frosst P., Blom H., Milos R. et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolatereductase // Nat. Genet. - 1995.- Vol. 10.-P.111- 113.

52. Fukagawa N., Martin J., Wurthmann A. et al. Sex-related differences in methionine metabolism and plasma homocysteine concentrations // Am J ClinNutr. - 2000. - Vol. 72. - P.22-29.

53. Furchgott R., Zawadszki J. The obligatoryrole of endotnelial cells in the relazation of arterial smooth muscle by acetylcholine // Nature. - 1980. -Vol.288. - P.373-376.

54. Gandrille S., Alhene-Gelas M., Aiach M. A rapid screening method for the factor V Arg 506 ->Gln mutation // Blood Coagul Fibrinolysis. - 1995.-Vol.6.-P.245-248.

55. Gehring N., Frede U., Neu-Yilik G. et al. Increased efficiency of mRNA 3' end formation: a new genetic mechanism contributing to hereditary thrombophilia // Nat.Genet. - 2001. - Vol.28. - P.389-392.

56. Goyette P., Frosst P., Rosenblatt D. et al. Seven novel mutations in the methylenetetrahydrofolatereductase gene and genotype/phenotype correlations in severe methylenetetrahydrofolatereductase deficiency // Am. J. Hum. Genet. -1995.-Vol.56.-P. 1052-1059.

57. Graham J., Daly L., Refsum H. et al. Plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease. The European Concerted Action Project // JAMA. -1997. - Vol. 277. -P.1775-1781.

58. Grundy S., Cleeman J., Merz C. et al. Coordinating Committee of the National Cholesterol Education Program. Implications of recent clinical trials for the National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel III guidelines

// Circulation. - 2004.- Vol.110,- N2.- P.227-239.

102

59. Guenther В., Sheppard С., Tran P. et al. The structure and properties of methylenetetrahydrofolatereductase from Escherichia coli suggest how folate ameliorates human hyperhomocysteinemia // Nat. Struct. Biol. - 1999.- Vol. 6,- P. 359-365.

60. Hahn A., Resink Т., Scott-Burden T. et al. Stimulation of endothelin mRNA and secretion in rat vascular smooth muscle cells: a novel autocrine function // Cell Regulation. - 1990. - Vol. 1. - P.649-659.

61. Handy D., Zhang Y., Loscalzo J. Homocysteinedownregulates cellular glutathione peroxidase (GPxl) by decreasing translation // J Biol Chem.- 2005. -Vol. 280. - P.15518-15525.

62. Heinrich J., Balleisen L., Schulte H. et al. Fibrinogen and factor VII in the prediction of coronary risk. Results from the PROCAM study in healthy men // ArteriosclerThromb. - 1994. - Vol.14. - P.54-59.

63. Hiatt W., Hoag S., Hammer R. Effect of diagnostic criteria on the prevalence of peripheral arterial disease. The San Luis Valley Diabetes Study // Circulation.- 1995. - Vol.91.-N.5. - P.1472-1479.

64. Hillarp A., Zoller В., Svensson P. et al. The 20210 A allele of the prothrombin gene is a common risk factor among Swedish outpatients with verified deep venous thrombosis // Thromb. Haemost. - 1997. - Vol.78. - P.990-992.

65. Hladovec J., Rossmann P. Circulating endothelial cells isolated together with platelets and the experimental modification of their count in rats // Thromb. Res. - 1973. - Vol. 3. - P. 663-674

66. Шитикова A.C. Изменение формы тромбоцитов как показатель их внутрисосудистой активации // Сб. "Клинико-лабораторная диагностика предтромботических состояний". - СПб. -1991.-С. 38-52.

67. JacquesP., Rosenberg!, RogersG., etal. Serum total homocysteine concentrations in adolescent and adult Americans :results from the third National Health and Nutrition Examination Survey // Am J ClinNutr. - 1999.- Vol. 69.-P. 482^189.

68. Janson J., Galarza C., Murza A. et al. Prevalence of hyperhomocysteinemia in an eldery population // Am J Hypertens.- 2002.- Vol. 15. -N.l.-P. 394-397.

69. Klerk M., Verhoef P., Clarke R. et al. MTHFR 677C-*T polymorphism and risk of coronary heart disease: a meta-analysis // JAMA. -2002. - Vol.288. - P.2023-2031.

70. Knekt P., Alfthan G., Aromaa A. et al. Homocysteine and major coronary events: a prospective population study amongst women // J Intern Med.-2001,- Vol. 249,-P. 461-465.

71. Kohler H., Grant P. Plasminogen activator inhibitor Type land coronary artery disease // New Engl J Med. - 2000.- Vol. 342. - P.1792-1801.

72. Kontula K., Ylikorkala A., Miettinen H. et al. Arg506Gln factor V mutation (factor V Leiden) in patients with ischemic cerbrovascular disease and survivors of myocardial infarction // Thromb.Haemost. - 1995,- Vol.73. - P.558-560.

73. Lane D.A., Grant P.J. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease // Blood. 2000. V. 95. P. 1517-1532.

74. Lentz S., Sobey C., Piegors D. et al. Vascular dysfunction in monkeys with diet-induced hyperhomocyst(e)inemia // J Clin Invest. - 1996. - Vol. 98. -P24-29.

75. Lewis S., Ebrahim S., Smith G. et al. Meta-analysis of MTHFR 677C->T polymorphism and coronary heart disease: does totality of evidence support causal role for homocysteine and preventive potential of folate ? // BMJ.- 2005,-Vol.331.- N7524,- P.1053-1059.

76. Lievers K., Boers G., Verhoef P. et al. A second common variant in the methylenetetrahydrofolatereductase (MTHFR) gene and its relationship to MTHFR enzyme activity, homocysteine,and cardiovascular disease risk // J.Mol Med. - 2001,- Vol.79.- P. 522-528.

77. Ma J., Stampfer M., Hennekens C. et al. Methylenetetrahydrofolatereductase polymorphism, plasma folate, homocysteine,

104

and risk of myocardial infarction in the US physicians // Circulation.- 1996.-Vol.94.- P.2410-2416.

78. Majors A., Ehrhard L., Pezacka E. Homocysteine as a risk factor for vascular disease. Enhanced collagen production and accumulation by smooth muscle cells // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1997. - Vol.17. - P. 2074-2081.

79. Malinow M. Plasma concentration of total homocysteine predict mortality risk// Am.J. of Clinical Nutrition. - 1997. - Vol.74. - P.l-3.

80. Margaglione M., Cappucci G., Colaizzo D. et al. The PAI-1 gene locus 4G/5G polymorphism is associated with a family history of coronary artery disease // Arterioscler. Thromb.Vasc. Biol. - 1998 - Vol.18. - N2,- P.152-156.

81. Margaglione M., Grandone E., Cappucci G. et al. An alternative method for PAI-1 promoter polymorphism (4G/5G) typing // Thromb.Haemost. -1997. - Vol.77. - P.605-606.

82. McCully K. S. Vascular pathology of homocysteinemia: implications for the pathogenesis of arteriosclerosis // Am J Pathol. - 1969.- Vol. 56. - P.l 11-28.

83. McCully K., Wilson R. Homocysteine theory of arteriosclerosis // Atherosclerosis. - 1975. - Vol. 22. - P. 215-227.

84. Michelson A., Furman M., Goldschmidt-Clermont P. et al. Platelet GP IIIaPlA polymorphisms display different sensitivities to agonists // Circulation. -2000. -Vol. 101.-P. 1013-1018.

85. Miller S.A., Dykes D.D., Polesky H.F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells // Nucl. Acid. Res. - 1988. -Vol.16.-P. 1215-1218.

86. Morris M. Total homocysteine and estrogen status in the Third National Health and Nutrition Examination Survey // Am J Epidemiology. - 2000. -Vol.15. -P.140-148.

87. Murabito J., Evans J., D'Agostino R. et al. Temporal trends in the incidence of intermittent claudication from 1950 to 1999 // Am J Epidemiol. -2005,- Vol. 162,- N5. - P.430-437.

88. Newman P., Derbes R., Aster R. The human platelet alloantigens, PLA1 and PLA2, are associated with a leucine33/proline33 amino acid polymorphism in membrane glycoprotein Ilia, and are distinguishable by DNA typing// J. Clin. Invest. - 1989. -Vol. 83. -P. 1778-1781.

89. Nygard O., Refsum H., Ueland P. et al. Coffee consumption and plasma total homocysteine :TheHordalandHomocysteine Study // Am J ClinNutr.-1997.-Vol. 65.- P.136-143.

90. Nygard O., Refsum H., Ueland P., Vollset 'S. Major lifestyle determinants of plasma total homocysteine distribution: the HordalandHomocysteine Study // Am J ClinNutr. -1998,- Vol. 67. - P.263-70.

91. Ozkan M., Ferbi M., Rashed M. et al. Fasting and post-methionine load plasma homocysteine levels in patients with angiografically defined coronary artery disease // Turk J Med Sci. - 2003. - Vol.33. - P. 161-165.

92. Pastinen T., Perola M., Niini P. et al. Array-based multiplex analysis of candidate genes reveals two independent and additive genetic risk factors for myocardial infarction in the Finnish population // Hum Mol Genet. - 1998. - Vol. 7.-N9.-P. 1453-1462.

93. Perez-Martinez P., Adarraga-Cansino M., de la Puebla F.The -675 4G/5G polymorphism at the Plasminogen Activator Inhibitor 1(PAI-1) gene modulates plasma Plasminogen Activator Inhibitorl concentrations in response to dietary fat consumption // British Journal of Nutrition. - 2007. - P. 1-4.

94. Perutelli P., Amato S., Minniti G. et al. vonWillebrand factor multimer composition is modified following oral methionine load in women with thrombosis, but not in healthy women // Blood Coagul. Fibrinolysis - 2005.-Vol.16.-P. 267-273.

95. Poort S., Rosendaal F., Reitsma P. et al. A common genetic variation in the 3'-untranslated region of the prothrombin gene is associated with elevated plasma prothrombin levels and an increase in venous thrombosis // Blood. - 1996. -Vol. 88.-N.10,- P. 3698-3703.

96. Press R., Bauer K., Kujovich J. et al. Clinical utility of factor V Leiden (R506Q) testing for thr diagnosis and menagement of thromboembolic disorders // Arch. Pathol. Lab.Med. - 2002.- Vol.126. - P.1304-1318.

97. Rosendaal F., Siscovick D., Schwartz S. et al. A common prothrombin variant (20210 G to A) increases the risk of myocardial infarction in young women // Blood. - 1997.- Vol.90. - N.5. - P. 1747-1750.

98. Roybal C., Yang S, Sun C. et al. Homocysteine increases the expression of vascular endothelial growth factor by a mechanism involving endoplasmic reticulum stress and transcription factor ATF4 // J. Biol. Chem. -2004. - Vol. 279.- P. - 14844-14852.

99. Rusmussen K., Moller J. Total homocysteinemeasument in clinical practice // Ann ClinBiochem. - 2000.-Vol.37. - P.627-648

100. Sartori M., Vettor R., De Pergola G. et al. Role of the 4G/5G polymorphism of PAI-1 gene promoter on PAI-1 levels in obese patients: influence of fat distribution and insulin-resistance // Thromb. Haemost. - 2001. - Vol. 86. -N5. - P.1161-1169.

101. Sauls D., Lockhart E., Warren M. et al. Modification of fibrinogen by homocysteinethiolactone increases resistance to fibrinolysis: a potential mechanism of the thrombotic tendency in hyperhomocysteinemia // Biochemistry. - 2006. - Vol. 45. - N8. - P. 2480-2487.

102. Selvin E., Erlinger T. Prevalence of and risk factors for peripheral arterial disease in the United States: results from the National Health and Nutrition Examination Survey, 1999e2000 // Circulation.-2004.- Vol.110.- N6,- P.738-743.

103. Steg P., Bhatt D., Wilson P. et al. REACH Registry Investigators. One-year cardiovascular event rates in outpatients with atherothrombosis // JAMA.- 2007,- Vol.297.- N11.- P. 1197-1206.

104. Sykes T., Fegan C., Mosquera D. Thrombophilia, polymorphism and vascular disease // J.Clin.Pathol. - 2000.-Vol.53. - P.300-306.

105. Thambyrajah J., Townend J. Homocysteine and atherothrombosis -mechanisms for injury // Eur Heart J. - 2000.- Vol.21. - P.967-974.

107

106. Thomas A., Green F., Kelleher C. et al. Variation in the promoter region of the ß fibrinogen gene is associated with plasma fibrinogen levels in smokers and non-smokers // Thromb. Haemost. - 1991.- Vol.65. - P.487-490.

107. Toiler G., D'Agostino R., Jacques P. et al. // Association between increased homocysteine levels and imparedfibrinolitic potential: Potential Mechanism for Cardiovascular risk // Thromb.Haemost. - 2002. - Vol. 88. - P. 799804.

108. Tsai J. , Wang H., Perrella M. et al. Induction of cyclin A gene expression by homocysteine in vascular smooth muscle cells // J. Clin. Invest.-1996.-Vol. 97,- P.146-153.

109. Undas A., Brozek J., Szezeklik A. Homocysteine and thrombosis: from basic science to clinical evidence // ThrombHaemost. - 2005. - Vol. 94. -P.907-915.

110. Van Bockxmeer F., Mamotte C., Vasikaran S.et al. Methylenetetrahydrofolatereductase gene and coronary artery disease // Circulation.- 1997,- Vol.95.-P.21-23.

111. Van Guldener C., Robinson K. Homocysteine and renal disease // SeminThrombHemost.- 2000,- Vol. 26.- P. 313-324.

112. Vane J., Anggard E., Batting R. Regulatory functions of the vascular endotnelium // New England Journal of Medicine. - 1990. - Vol. 323. - P.27-36.

113. Vaughan D., Rouleau J-L., Ridker P. et al. Effects of ramipril on plasma fibrinolytic balance in patients with acute anterior myocardial infarction // Circulation. - 1997. - Vol. 96. - P.442-447.

114. Vischer U. M. von Willebrand factor, endothelial dysfunction, and cardiovascular disease // Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2006. - Vol.4. -P. 1186-1193.

115. Wald N., Watt H., Law M.et a! Homocysteine and ishemic heart disease // Arch Intern Med.-1998.- Vol.158. - P.862-867.

116. Wang H., Jiang X., Yang F. et al. Cyclin A transcriptional suppression is the major mechanism mediating homocysteine-induced endothelial cell growth inhibition // Blood - 2002. - Vol. 99. - P. 939-945.

117. Wang H., Tan H., Yang F. Mechanisms in homocysteine-induced vascular disease // Drug Discovery Today: Disease Mechanisms. - 2005. - Vol 2. -Nl.-P. 25-31.

118. Weiss N., Heydrick S., Zhang Y. et al. Cellular redox state and endothelial dysfunction in mildly hyperhomocysteinemiccystathionine beta-synthase-deficient mice // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 2002. - Vol. 22,- P 34-41.

119. Weiss N., Keller C., Hoffmann U. et al. Endothelial dysfunction and atherothrombosis in mild hyperhomocysteinemia // Vase. Med. -2002. - Vol 7,- P. 227-239.

120. Yap S., Boers G., Wilcken B. et al. Vascular outcome in patients with homocystinuria due to cystathionine beta-synthase deficiency treated chronically: a multicenter observational study // ArteriosclerThrombVasc Biol. - 2001.- Vol. 21. -N12. - P.2080-2085.

121. Zeng X., Dai J., Remick D. et al. Homocysteine mediated expression and secretion of monocyte chemoattractant protein-1 and interleukin-8 in human monocytes // Circ. Res. - 2003,- Vol. 93. - P.311-320.