Молекулярно-генетические основы развития предрасположенности к артериальным тромбозам тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Сироткина, Ольга Васильевна

• Сироткина, Ольга Васильевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Сироткина, Ольга Васильевна

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Гемостаз и тромбоз.

1.2. Наследственные тромбофилии.

1.3. Генетические детерминанты, определяющие состояние тромбофилии.

1.3.1. Ген фактора V свертывания крови.

1.3.2. Ген протромбина.

1.3.3. Ген p-фибриногена.

1.3.4. Ген ингибитора активатора плазминогена типа 1.

1.3.5. Ген Ilia субъединицы рецептора тромбоцитов Ilb/IIIa.

1.3.6. Ген метилентетрагидрофолат редуктазы.

1.3.7. Ген фактора VII свертывания крови.

1.4. Патогенез ишемического инсульта и инфаркта миокарда.

2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика обследуемых групп.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение ДНК из периферической крови человека.

2.2.2. Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ.

2.2.3. Определение биохимических показателей плазмы крови.

2.3. Статистическая обработка результатов исследования.

3. Результаты исследования.

3.1. Контрольная группа.

3.1.1. Распределение аллельных вариантов генов, определяющих склонность к тромбофилии, в контрольной группе.

3.1.2. Анализ биохимических показателей в контрольной группе.

3.2. Группа пациентов, перенесших ишемический инсульт.

3.2.1. Анализ частотных распределений мутаций и полиморфизмов изучаемых генов у пациентов, перенесших ишемический инсульт.

3.2.2. Анализ результатов биохимического исследования в группе пациентов, перенесших ИИ.

3.2.3. Кооперативный вклад генетических и приобретенных факторов в риск развития ИИ.

3.2.4. Анализ аллельного распределения генов, определяющих склонность к тромбофильным состояниям, у пациентов в зависимости от семейной истории сердечно-сосудистых заболеваний.

3.2.5. Распределение частот аллелей анализируемых генов в зависимости от количества перенесенных ИИ.

3.2.6. Ген-генные взаимодействия в группе пациентов с ИИ.

3.3. Группа пациентов, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте.

3.3.1. Анализ частотных распределений мутаций и полиморфизмов изучаемых генов у пациентов, перенесших ИМ в молодом возрасте.

3.3.2. Анализ биохимических показателей в группе пациентов, перенесших ИМ.

3.3.3. Анализ аллельных распределений исследуемых генов в зависимости от семейной истории сердечно-сосудистых заболеваний.

3.3.4. Приобретенные факторы риска и развитие инфаркта миокарда в молодом возрасте.

3.3.5. Анализ кооперативного вклада генетических и приобретенных факторов риска в развитие ИМ у мужчин молодого возраста.

3.3.6. Распределение аллелей исследуемых генов у пациентов, перенесших несколько инфарктов миокарда.

3.3.7. Ген-генные взаимодействия в группе пациентов с ИМ.

4. Обсуждение.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетические основы развития предрасположенности к артериальным тромбозам»

В последние десятилетия достигнуты впечатляющие успехи в области молекулярной генетики человека, позволившие от формального описания законов наследования перейти к полной расшифровке человеческого генома. Понимание механизмов генетического контроля протекающих в организме метаболических процессов меняет представления об этиологии и молекулярных основах патогенеза как моногенных наследственных заболеваний, так и состояний, определяющих предрасположенность к широко распространенным полигенным или мультифакториальным болезням, а также может объяснить различную чувствительность индивидуумов к неблагоприятным факторам внешней среды, инфекционным агентам и фармакологическим препаратам. Таким образом, молекулярная генетика создает базис для разработки нетрадиционных методов лечения, профилактики заболеваний и индивидуальной, генетически обоснованной фармакотерапии.

Одной из актуальных проблем современного здравоохранения является выяснение молекулярно-генетических основ развития сердечнососудистых заболеваний. Сердечно-сосудистые заболевания являются основной причиной летальности населения промышленно развитых стран мира. В США на ССЗ приходится 42% всех случаев смерти. Из них на ишемическую болезнь сердца приходится 51%, 27% - на сердечную недостаточность, 16% - на ишемический инсульт мозга, 6% - на другие сердечно-сосудистые заболевания (Преображенский Д.В. и соавт., 2002). По данным рабочей группы ВОЗ (1997 г.), Россия по смертности от ишемической болезни сердца и инсульта занимает одно из первых мест в Европе. Следует отметить, что в нашей стране наблюдается преобладание церебрального инсульта над острым инфарктом миокарда (Скоромец А.А., 1997). С момента создания технологий выделения индивидуальных генов из различных биологических объектов, ведутся исследования по определению структурной организации генов, определяющих функционирование метаболических циклов, нарушения в которых приводят к развитию сердечно-сосудистой патологии. В первую очередь это гены, продукты которых либо вовлечены в липидный гомеостаз, либо оперируют в системе свертывания крови, или влияют на физиологию стенки сосудов.

В основе развития инфаркта миокарда и ишемического инсульта головного мозга лежат два процесса - атеросклероз и тромбоз соответствующих артерий. При этом следует обратить внимание на тот факт, что атеросклеротические изменения сосудов характерны для лиц пожилого возраста, у молодых пациентов больший вклад в формирование патологии вносят нарушения в системе коагуляции, приводящие к повышенному тромбообразованию. Анализ эпидемиологических исследований показывает, что повышение уровня ряда факторов свертывания крови, таких как фибриноген, фактор VII свертывания крови, фактор Виллебранда, фактор VIII, увеличение агрегационных свойств тромбоцитов, изменение содержания в крови компонентов фибринолитической системы являются факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, включая инфаркт миокарда и ишемический инсульт (Folsom A.R., 2001; Баркаган З.С., 1996; Руксин В.В., 1998). Данные изменения в плазменном и тромбоцитарном звеньях гемостаза генетически детерминируются. Однако вклад мутационных повреждений генов, кодирующих факторы свертывания крови, тромбоцитарные рецепторы и компоненты системы фибринолиза, в увеличение риска развития артериальных тромбозов к настоящему времени однозначно не определен. Результаты работ, посвященных этому вопросу, носят противоречивый характер и сильно зависят от этнических, половых и возрастных особенностей исследуемых популяций (Simmonds R.E. et al, 2001; Hassan A., Markus H.S., 2000).

Известно, что инфаркт миокарда и ишемический инсульт являются полигенными заболеваниями, приобретенными факторами риска которых выступают курение, избыточный вес, нарушения липидного обмена, артериальная гипертензия, стрессы (Мартынов Ю.С., 1988; Скопина Е.И., 2001; Оганов Р.Г., 1992; Погосова Г.В., 2002). Логично предположить, что взаимодействие между различными факторами риска, включая генетические детерминанты, обусловливающие склонность к тромбофилии, будут играть ведущую роль в генезе данных заболеваний. Вопрос о том, какие именно взаимодействия приобретенных и генетических факторов, а также ген-генные сочетания, определяют предрасположенность к развитию артериального тромбоза, особенности течения и возможные рецидивы болезни, остается открытым.

Все вышесказанное явилось основой для проведения настоящего исследования.

Цель исследования:

Целью данного исследования явилось определение молекулярно-генетических основ развития предрасположенности к артериальным тромбозам церебрального и коронарного русла и выявление взаимодействий между приобретенными и генетическими факторами, которые повышают риск формирования данной патологии.

Задачи исследования:

1. Определить частоты встречаемости аллельных вариантов генов F5, F7, FGB, F2, GP Ilia, MTHFR, PAI-1 у здоровых мужчин молодого возраста (до 45 лет).

2. Определить частоты встречаемости вышеперечисленных генов среди мужчин, перенесших ишемический инсульт в молодом возрасте.

3. Определить частоты встречаемости вышеперечисленных генов среди мужчин, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте.

4. Оценить влияние изучаемых генотипов на показатели гемостаза в исследуемых группах.

5. Определить уровень общего гомоцистеина плазмы крови у мужчин, перенесших ишемический инсульт в молодом возрасте и оценить зависимость уровня общего гомоцистеина плазмы крови от аллельных вариантов гена метилентетрагидрофолат редуктазы и приобретенных факторов риска развития артериальных тромбозов.

6. Определить вклад межгенных взаимодействий и взаимодействий приобретенных и генетических факторов риска в развитие предрасположенности к артериальным тромбозам церебрального и коронарного русла.

Научная новизна полученных результатов.

1. Впервые дана оценка распределения аллельных вариантов генов F5, F7, FGB, F2, GP Ilia, MTHFR, PAI-1 среди мужчин г. Санкт-Петербурга, перенесших ишемический инсульт или инфаркт миокарда в возрасте до 45 лет. Впервые показано протективное действие инсерционного промоторного полиморфизма гена фактора VII свертывания крови в отношении развития ишемического инсульта у мужчин молодого возраста.

2. Подтвержден вклад Pl^ аллеля гена GP Ша в риск развития инфаркта миокарда у мужчин молодого возраста.

3. Установлено, что к развитию ИИ или ИМ у пациентов с семейной историей сердечно-сосудистых заболеваний и без нее предрасполагают различные генетические нарушения. Впервые показано, что лейденская мутация гена фактора V свертывания крови повышает риск развития артериальных тромбозов у мужчин в отсутствии семейной истории сердечно-сосудистых заболеваний.

4. Впервые в российской популяции проведен анализ зависимости показателей гемостаза от генетических детерминант, определяющих склонность к развитию ишемического инсульта и инфаркта миокарда. Показано, что функциональная активность тромбоцитов повышена у носителей PI"42 аллеля гена GP Ilia, уровень фибриногена плазмы крови повышается при наличии у индивидуума А аллеля гена [3-фибриногена или 4G аллеля гена ингибитора активатора плазминогена типа 1.

5. Впервые в российской популяции проанализирован уровень общего гомоцистеина у мужчин, перенесших ишемический инсульт, и определена зависимость уровня общего гомоцистеина от генотипа С677Т MTHFR у названных пациентов. Впервые установлено, что Т677 аллель гена MTHFR ассоциируется с повышенным риском развития ишемического инсульта у лиц с семейной историей сердечно-сосудистых заболеваний.

6. Впервые проанализировано взаимодействие между приобретенными факторами риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и генетическими детерминантами, определяющими склонность к тромбофилии, у лиц мужского пола г. Санкт-Петербурга. Показан кооперативный эффект курения и F V Leiden или Р1А1/А/ GP Ша, десятикратно повышающий риск развития инфаркта миокарда. Установлено, что сочетание F V Leiden и нарушения обмена липидов увеличивает риск развития артериальных тромбозов церебрального и коронарного русла.

7. Впервые в мировой практике проведен анализ межгенных взаимодействий семи вышеуказанных детерминант у пациентов, перенесших ишемический инсульт или инфаркт миокарда, и оценен вклад сочетанных генотипов в риск развития артериальных тромбозов различной локализации. Показано, что риск развития ишемического инсульта и инфаркта миокарда возрастает при сочетанном носительстве pjAl/А2 Gp Ша и C677T MTbffR иди р1А1/А2 Gp Ша и д1/А2 5,F7j кр()ме того в риск развития ишемического инсульта вносят вклад неблагоприятные сочетания А1/А2 5'F7 и С677Т MTHFR, а в риск развития инфаркта миокарда - Р1А1/А2 GP Ша и 4G/5G PAI-1 или С677Т MTHFR и 4G/5G PAI-1.

Практическая значимость работы.

На основании полученных результатов показана целесообразность определения наличия генетических детерминант, обусловливающих склонность к повышенному тромбообразованию, в первую очередь pjA1/A2 полиморфизма гена GP Ilia и лейденской мутации гена фактора V, у курящих мужчин с целью профилактики развития инфаркта миокарда.

Для определения группы высокого риска развития ишемического инсульта и инфаркта миокарда у мужчин с нарушениями обмена липидов рекомендовано определение лейденской мутации гена фактора V.

Для определения группы высокого риска развития ишемического инсульта среди лиц, имеющих отягощенный семейный анамнез по этому заболеванию, рекомендовано определение мутации С677Т MTHFR. Это даст возможность проводить генетически обоснованную фармакотерапию повышенными дозами фолиевой кислоты и витаминами Вб и Bi2 с целью предотвращения повышения уровня общего гомоцистеина плазмы крови.

С целью профилактики развития инфаркта миокарда в молодом возрасте необходимо раннее выявление лиц мужского пола, являющихся носителями Р1А1/А2 полиморфизма гена GP Ilia. Это имеет большое практическое значение, так как лица с различными генотипами piA1/A2 GP Ilia могут обладать различной чувствительностью к антиагрегантной терапии аспирином.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Инсерционный промоторный полиморфизм гена фактора VII свертывания крови (А1/А2 5'F7) встречается достоверно реже среди пациентов мужского пола, перенесших ишемический инсульт в возрасте до 45 лет, по сравнению с контрольной группой. Данный полиморфизм является протективным в отношении развития церебрального артериального тромбоза и его отсутствие повышает риск развития ишемического инсульта.

2. Полиморфизм Р1А1/А2 гена GP Ша является фактором риска развития инфаркта миокарда у мужчин в возрасте до 45 лет. Риск развития инфаркта миокарда у носителей данного полиморфизма значительно возрастает при сочетании с курением.

3. Лейденская мутация фактора V свертывания крови вносит вклад в риск развития артериального тромбоза в церебральном и коронарном русле при взаимодействии с нарушениями обмена липидов.

Апробация работы.

Результаты работы были доложены на V Всероссийской конференции "Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения" (Москва, Россия,

2000), на конференции, посвященной 100-летию Института экспериментальной медицины (Санкт-Петербург, Россия, 2000), на юбилейной конференции СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова "100-лет кафедре факультетской терапии им. акад. Г.Ф. Ланга, важнейшие достижения и верность традициям!" (Санкт-Петербург, Россия, 2000), на VI Всероссийской конференции "Атеротромбоз и артериальная гипертензия" (Москва, Россия,

2001), на 10-ом Международном конгрессе по генетике человека (Вена, Австрия, 2001), на 10-ой научно-практической конференции неврологов "Нейроиммунология" (Санкт-Петербург, Россия, 2001), на научно-практическом симпозиуме "Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении" в рамках Международной конференции "Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины" (Москва, Россия, 2002), на 17-ом Международном конгрессе по тромбозам (Болонья, Италия, 2002).

По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них 3 статьи.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста, содержит 25 таблиц, иллюстрирована 17 рисунками и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 224 научных источника (25 - на русском языке и 199 - на иностранном).

1. Обзор литературы.

1.1. Гемостаз и тромбоз.

Гемостатический процесс начинается с травмы или разрыва сосуда, а заканчивается образованием тромбоцитарно-фибриновой сетки, так называемой гемостатической пробки. Она предотвращает дальнейшую кровопотерю и служит центром для восстановления поврежденных тканей. Реакция на повреждение сосуда включает взаимодействие между сосудистым эндотелием, тромбоцитами, коагуляционными факторами крови, их ингибиторами и фибринолитической системой. Дисбаланс гемостаза может сопровождаться либо чрезмерным кровотечением, либо образованием тромба.

Тромб образуется внутрисосудистой массой фибрина и клеток крови. Артериальные тромбы, формирующиеся при высокой скорости потока, состоят в основном из тромбоцитарных агрегатов, которые удерживаются вместе нитями фибрина. Это белые тромбы. Венозные тромбы или красные, возникающие в зоне стаза, включают большое количество эритроцитов, фибрина, но содержат относительно мало тромбоцитов. В зонах медленного и умеренного кровотока образуются смешанные тромбоцитарно-фибриновые тромбы. Тромбы могут локализоваться в венах, артериях, сердце или микрососудах органа. Тромб в любой части сосудистой системы приводит к развитию ишемии за счет окклюзии сосуда или эмболизации.

Патофизиология тромбообразования включает три взаимосвязанных фактора, определенных более 150 лет назад Рудольфом Вирховым: изменения в сосудистой стенке, замедление кровотока, нарушение свертываемости крови (Баркаган З.С., 1996). Повышенная свертываемость крови или гиперкоагуляционные состояния, называемые также предтромботическими, определяются как склонность к тромбозу в условиях, которые не привели бы к таковому у здоровых индивидуумов.

Идентифицирован ряд наследственных и приобретенных факторов риска развития тромбозов (Рисунок 1).

Факторы риска развития тромбозов.

Приобретенные тшжШ:Ш ш

Хирургическая операция Травма Иммобилизация Ожирение I заболевания Сахарный диабет

S8

Оральные контрацептивы Нефротический синдром синдром Курение Гипертензия Гиперлипидемия Гипергомоцистеи не мия

Дефицит антитромбина 111 Дефицит протеина С Дефицит протеина S Дефицит кофактора гепарина И Резистентность к активированному протеину С <F V Leiden)

Г илергомоцистеинемия Повышенный уровень фибриногена

Повышенный уровень фактора VII свертывания крови "

Высокий уровень ингибитора активатора плазминогена Аномальный тромбОмодулин

Рисунок 1. Наследственные и приобретенные факторы риска развития тромбозов.

В норме эндотелий проявляет антикоагулянтные свойства, то есть обладает тромборезистентностью, он способен нейтрализовать активные факторы свертывания крови, ингибировать адгезию и агрегацию тромбоцитов, активировать фибринолиз. При патологических состояниях пораженный эндотелий, например в месте разрыва атероматозной бляшки, трансформируется в мощную прокоагулянтную поверхность. Это происходит за счет выделения прокоагулянтных веществ, включая тканевой фактор и фактор Виллебранда, а также за счет обнажения субэндотелиальных коллагеновых структур. Все это приводит к активации тромбоцитов, изменению их формы, адгезии и агрегации. Тканевой фактор активирует внешний путь системы свертывания крови. Хотя патогенез тромбообразования одинаков в различных участках системы кровообращения, существует значительная разница в механизме формирования артериального и венозного тромба. Одним из основных факторов образования артериального тромба является активация тромбоцитов в месте повреждения эндотелия сосудов. Венозный тромбогенез отличается от артериального типом нарушения равновесия между тромбогенными и защитными механизмами. При венозном тромбозе ведущую роль играет повышенная системная гиперкоагуляция, т.е. активация свертывания с недостаточностью процессов ингибирования, и стаз крови. Активация тромбоцитов имеет второстепенное значение. Поражение стенки сосуда необязательно, однако является способствующим фактором. В ряде случаев в основе тромботического процесса лежит нарушенный фибринолиз (Шиффман Ф.Дж., 2000).

Стадии активации свертывания крови, приводящие к образованию тромбоцитарных агрегатов и фибрина, одинаковы как при формировании гемостатической пробки, так и при тромбообразовании.

Система свертывания крови представляет собой каскад взаимосвязанных реакций, протекающих с участием протеолитических ферментов, ведущих к образованию тромбина - ключевого компонента коагуляции, превращающего фибриноген в фибрин (Рисунок 2). Деление механизма коагуляции на внешний и внутренний путь условно, так как не имеет места in vivo, но такой подход облегчает интерпретацию лабораторных тестов и объяснение процесса свертывания крови. На каждой стадии коагуляционного каскада профермент (предшественник) превращается в соответствующую сериновую протеазу (фермент), которая катализирует превращение следующего профермента путем гидролиза пептидной связи в активном центре, основу которого составляет аминокислота серии. Одиннадцать таких белков - факторов свертывания крови составляют систему свертывания (Таблица 1) (Под ред. Петрищева Н.Н., Папаян Л.П., 1999).

Свертывание крови in vivo модулируется целым рядом регуляторных механизмов, которые ограничивают реакции местом повреждения. К регулирующим факторам относят: ток крови и гемодилюцию, клиренс печенью и ретикулоэндотелиальной системой активированных факторов свертывания крови, протеолитическое действие тромбина по принципу обратной связи, ингибиторы сериновых протеаз, фибринолиз.

Таблица 1.

Факторы свертывания крови.

Фактор Название Основное место Функция

F) синтеза

I Фибриноген Гепатоциты Субстрат

II Протромбин Гепатоциты Фермент

III Тканевой фактор Эндотелиальные клетки (ЭК) Рецептор, кофактор

V Лабильный фактор, проакцелерин Гепатоциты, ЭК, тромбоциты Кофактор

VII Проконвертин Гепатоциты Фермент

VIII Антигемофильный фактор Синусоиды печени Кофактор

IX Фактор Кристмаса Гепатоциты Фермент

X Фактор Стюарта-Пауэра Гепатоциты Фермент

XI Предшественник тромбопластина плазмы Гепатоциты Фермент

XII Фактор Хагемана Гепатоциты Фермент

XIII Фибринстабилизирующий фактор Гепатоциты. тромбоциты Трансглу-таминаза

Прекалликреин Гепатоциты Фермент

Высокомолекулярный Гепатоциты Кофактор кининоген

Внешний путь

Активация —> Инактивация Ингибирование

Рисунок 2. Схема системы свертывания крови и фибринолиза.

Антитромбин III (AT III) представляется наиболее важным ингибитором, способным инактивировать практически все сериновые протеазы, образующиеся в процессе свертывания крови. Другой важный регулятор сериновых протеаз - ингибитор пути тканевого фактора (TFPI) также является стехиометрическим ингибитором, который присутствует в крови в относительно низкой концентрации. Принципиальными мишенями TFPI выступает комплекс из активного фактора VII, тканевого фактора и активного фактора X. Кроме того, динамическая ингибиторная система образуется, когда тромбин связывается с тромбомодулином (ТМ), локализованным на поверхности эндотелиальных клеток. Комплекс тромбин-тромбомодулин переводит протеин С в активную форму. Активированный протеин С (АПС) в комплексе с кофактором - протеином S расщепляет активные факторы V и VIII до неактивных фрагментов, внося таким образом свой вклад в регулирование процесса свертывания крови (Бутенас С., Манн К.Г., 2002).

Основным эндогенным механизмом, предотвращающим тромбообразование, является фибринолиз (Рисунок 2). Активация фибринолитической системы приводит к растворению фибриновой пробки и восстановлению кровотока. Основным ключевым энзимом фибринолитической системы является плазмин, который образуется из своего предшественника плазминогена под действием активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типа (t-PA, u-PA). Ограничителем процесса выступает ингибитор активатора плазминогена типа 1 (PAI-1), который инактивирует тканевой активатор плазминогена и двухцепочечную урокиназу. Его задача - ограничить фибринолитическую активность местом расположения гемостатической пробки и предотвратить преждевременный лизис фибрина (Под ред. Петрищева Н.Н., Папаян Л.П., 1999; Шиффман Ф.Дж., 2000).

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Сироткина, Ольга Васильевна

Выводы:

1. В группе здоровых мужчин молодого возраста охарактеризованы частоты аллелей генов: фактора V - FVLeiden (98.7% и 1.3%), фактора VII - А1/А2 5'F7 (86.4% и 13.6%), GP Ilia - Р1А1/А2 (90.2% и 9.8%), MTHFR - С677Т (72.4% и 27.6%), PAI-1 - 4G/5G (49.0% и 51.0%), Р-фибриногена - G-455A (75.9% и 24.1%) и протромбина - G/A20210 (99.7% и 0.3%).

2. Установлено, что у пациентов, перенесших ишемический инсульт, достоверно снижена частота протективного аллеля гена фактора VII свертывания крови по сравнению с контрольной группой (7.7% и 13.6%, соответственно, р<0.05). Инсерционная вставка 10 п.н. в промоторной области гена фактора VII свертывания крови снижает вероятность развития ишемического инсульта (OR=0.52), а его отсутствие увеличивает риск развития церебрального артериального тромбоза (OR=1.91).

3. Установлено, что у пациентов, перенесших инфаркт миокарда, достоверно повышена частота встречаемости РГ^2 аллеля гена GP Ilia по сравнению с контрольной группой (16.2% и 9.8%, соответственно, р<0.005). Данный аллель ассоциируется с повышенным риском развития инфаркта миокарда у мужчин молодого возраста (OR=T.94).

4. Показано, что: 1) уровень общего гомоцистеина плазмы крови зависит от генотипа С677Т MTHFR и повышен у носителей Т аллеля; 2) функциональная активность тромбоцитов зависит от генотипа piA1/A2 GP Ша и повышена у лиц с РГ^ аллелем; 3) уровень фибриногена плазмы крови зависит от генотипов G/A -455FGB и 4G/5G PAI-1 и повышен у индивидуумов с А аллелем FGB или 4G аллелем PAI-1.

5. Установлено, что лейденская мутация гена фактора V в сочетании с нарушениями липидного обмена резко увеличивает относительный риск развития ишемического инсульта и инфаркта миокарда (OR=12 и OR=8.57, соответственно).

6. Показано десятикратное увеличение относительного риска развития инфаркта миокарда у курящих носителей лейденской мутации гена фактора V свертывания крови (OR=10.56).

7. Показано десятикратное увеличение относительного риска развития инфаркта миокарда у курящих носителей piA1/A2 полиморфизма гена GP Ilia (C)R=10.51).

8. Показано, что к развитию артериальных тромбозов у пациентов с отягощенной наследственностью и без нее предрасполагают различные генетические нарушения. У пациентов без отягощенного семейного анамнеза по сердечно-сосудистым заболеваниям фактором риска развития ишемического инсульта или инфаркта миокарда является лейденская мутация гена фактора V свертывания крови (OR=3.78 - для ишемического инсульта и OR=4.69 - для инфаркта миокарда). У лиц с семейной историей сердечно-сосудистых заболеваний относительный риск развития ишемического инсульта возрастает при носительстве 4G аллеля гена PAI-1 и Т677 аллеля гена MTHFR (OR=6.11 и OR=7.52, соответственно). В развитии предрасположенности к инфаркту миокарда у лиц с отягощенной наследственностью ведущую роль играет отсутствие протективного аллеля гена фактора VII свертывания крови (OR=2.38).

9. Показано, что риск развития артериальных тромбозов возрастает при сочетанном носительстве генетических детерминант, определяющих склонность к тромбофилии: Р1А1/А2 GP Ша и с677т mthfr (OR=2.17), plai/a2 gp ша и а1/а2 5т7 (or=2.35), А1/А2 5'f7 и с677т mthfr (c)r=2.80) - для ишемического инсульта; Р1А1/А2 GP Ilia и с677т mthfr (c)r=3.01), Р1А1/А2 GP Ша и А1/а2 5'f7 (or=2.45), P1A1/A2 GP Ilia и 4G/5G PAI-1 (or=4.71), c677t mthfr и 4G/5G PAI-1 (or=1.77) - для инфаркта миокарда.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Сироткина, Ольга Васильевна, 2003 год

1. Баркаган З.С. Клинико-патогенетические варианты, номенклатура и основы диагностики гематогенных тромбофилий. Проблемы гематологии 1996;3:5-15

2. Бутенас С., Манн К.Г. Свертывание крови. Биохимия 2002; 67(1): 5-15

3. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Учебное пособие. Под ред. проф. Петрищева Н.Н., проф. Папаян Л.П. СПб. - 1999. - 117с.

4. Давиденкова Е.Ф., Колосова Н.Н., Муравьева З.М. Наследственные факторы в развитии церебральных инсультов. Л., Медицина, 1976, 152с.

5. Маниатис Т. и др. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж.-М.: Мир, 1084.-480 е., ил.

6. Мартынов Ю.С. Нервные болезни: Учеб. Пособие.-М.: Медицина, 1988,-496с.: ил.:(8) л. ил.-(Учеб. лит. Для студентов мед. ин-тов).

7. Мухин Н.А., Моисеев С.В., Фомин В.В. Гипергомоцистеинемия как фактор риска развития заболеваний сердечно-сосудистой системы. Клиническая медицина 2001; 6: 7-14

8. Оганов Р.Г. Факторы риска атеросклероза и ишемической болезни сердца. Болезни сердца и сосудов. Руководство для врачей. Под ред. Чазова Е.И. -М.: Медицина. 1992 - т. 2 - стр. 155-178

9. Папаян К.А. Патогенетические механизмы развития артериальных и венозных тромбозов у детей и лиц молодого возраста. Авторефератдиссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, Санкт-Петербург, 2000

10. П.Патрушев Л.И. Генетические механизмы наследственных нарушений гемостаза. Биохимия 2002; 67(1): 40-55

11. Погосова Г.В. Депрессия новый фактор риска ишемической болезни сердца и предиктор коронарной смерти. Кардиология 2002; 4: 86-90

12. Преображенский Д.В., Сидоренко В.А., Малышева Н.В., Цурко В.В. Место аспирина в первичной профилактике ишемической болезни сердца. Кардиология 2002; 4: 91-95

13. Руксин В.В. Тромбозы в кардиологической практике. СПб.: Невский Диалект, М.: Бином, 1998. - 126 е.: ил.

14. Скопина Е.И. Факторы риска и профилактика мозговых инсультов. Клиническая медицина 2001; 6: 15-20

15. Скоромец А.А. Изменения сердечно-сосудистой системы и мозговые инсульты. Ст-Петербург: Врачебные ведомости 1997; 16: 45-48

16. П.Спиридонов М.Г., Степанов В.А., Пузырив В.П. О роли полиморфных вариантов гена 5,10-метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний. Клиническая медицина 2001; 2: 10-16

17. Торопова Б.Г., Горностаев B.C., Данилов А.О. и др. Лабораторное дело. 1990; 12:52-55

18. Трюфанов В.Ф., Сучкова С.Н. Стандартизация методов определения липидов при популяционных исследованиях. В кн. "Дислипопротеидемиии ишемическая болезнь сердца". Ред. Е.И.Чазов, А.Н.Климов, М., Медицина. 1980. - стр. 151-167.

19. Черкас Ю.В. Гипергомоцистеинемия как фактор риска развития ишемической болезни сердца. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Санкт-Петербург, 2001

20. Шейдина A.M. Молекулярно-генетические основы предрасположенности к варикозному расширению вен и тромботическим осложнениям. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук, Санкт-Петербург, 2000

21. Шитикова А.С. Изменение формы тромбоцитов как показатель их внутрисосудистой активации. В сб. Клинико-лабораторная диагностика предтромбоза и тромботических состояний.- СПб, 1991.-С.38-52

22. Шитикова А.С., Каргин В.Д., Белязо О.Е., Тарковская Л.Р., Салтыкова Н.Б., Понкратьева С.Е. Морфологическая оценка повышенной внутрисосудистой активации тромбоцитов. Метод.рекомендации.-СПб, 1996.-17с.

23. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови. Пер. с англ. М. -СПб.:"Издательство Бином" - "Невский диалект", 2000. - 448с., ил

24. Akar N., Akar Е., Yilmaz Е., Deda G. Plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G polymorphism in Turkish children with cerebral infarct and effect on factor V 1691 A mutation. J Child Neurol 2001; 16(4): 294-295

25. Akar N., Yielmaz E., Akar E., Avcu F., Yalcin A., Cin S. Effect of plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G polymorphism in Turkish deep vien thrombotic patients with and without FV 1691 G-A. Thromb Res 2000; 94: 227-230

26. Al-Mondhiry H.A.B., Bilezkian S.B., Nosse H.L. Fibrinogen New York: an abnormal fibrinogen associated with thromboembolism: functional evaluation. Blood. 1975; 45: 607-619

27. Ardissino D., Mannucci P.M., Merlini P.A., Duca F., Fetiveau R., Tagliabue L., Tubaro M., Galvani M., Ottani F., Ferrario M., Corral J., Margaglione M.

28. Protrombotic genetic risk factoers in young survivors of myocardial infarction. Blood 1999; 94:46-51

29. Arruda V.R., Zuben von P.M., Chiaparini L.C., Annichino-Bizzacchi J.M., Costa F.F. The mutation Ala677-Val in the methylene tetrahydrofolate reductase gene: a risk factor for arterial disease and venous thrombosis. Thromb Haemost 1997; 77(5): 818-821

30. Baranovskaya S., Kudinov S., Fomicheva E., Vasina V., Solo vie va D., Khavinson V., Schwartz E. Age as a risk factor for myocardial infarction in leiden mutation carriers. Molecular Genetics and metabolism 1998; 63: 155-157

31. Beer J.H., Pedevina S., Pontiggia L. Genetics of platelt receptor singl-nucleotide polymorphisms: clinical implications in thrombosis. Ann Med 2000; 32 Suppl 1: 10-15

32. Bertina R.M. Factor V Leiden and other coagulation risk factor mutations affecting thrombotic risk. Clin Chem 1997; 43: 1678-1683

33. Boekholdt S.M., Bijsterveld N.R., Moons A.H.M., Levi M., Buller H.R., Peters R.J.G. 'Genetic variation in coagulation and fibrinolytic proteins and their relation with acute myocardial infarction. Circulation 2001; 104: 3063-3068

34. Bogar L. Hemorheology and hypertension: not "chicken or egg" but two chickens from similar eggs. Clin Hemorheol Microcirc 2002; 26(2): 81-83

35. Bolander-Gouaille C. Focus on Homocysteine and the Vitamins. Involved in its Metabolism. Springer, 2002

36. Bom van der J.G., Maat de M.P.M., Bots M.L., Haverkate F., Jong de P.T.V.M., Hofman A., Kluft C., Grobbee D.E. Elevated plasma fibrinogen cause or consequence of cardiovascular disease? Arterioscler Thromb Vase Biol 1998; 18:621-625

37. Bombeli Т., Mueller M., Haeberli A. Anticoagulant properties of the vascular endothelium. Thromb Haemost. 1997; 77(3): 408-423

38. Bray P.F. Integrin polymorphisms as risk factors for thrombosis. Thromb Haemost 1999; 82(2): 337-344

39. Cattaneo M. Hyperhomocysteinemia: a risk factor for arterial and venous thrombotic disease. Int J Clin Lab Res 1997; 27: 139-144

40. Catto A.J., Carter A.M., Stickland M.H., Bamford J.M., Davies J.A., Grant P.J. Plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G promoter polymorphism and levels in subjects with cerebrovascular disease. Thromb Haemost 1997; 77: 730-734

41. Chalmers J. Global impact of stroke. Heart Dis 2000; 2: 13-17

42. Chambers J.C., Obeid O.A., Kooner J.S. Physiological increments in plasma homocysteine induce vascular endotelial dysfunction in normal human subjects. Arterioscler Thromb Vase Biol 2000; 20: 185-188

43. Chan WP, Lee CK, Kwong YL, Lam CK, Liang R. A novel mutation of Arg306 of factor V gene in Hong Kong Chinese. Blood 1998; 91(4): 1135-1139

44. Coen D., Zadro R., Honovic L., Banfic L., Stavljenic Rukavina A. Prevalence and association of the factor V Leiden and prothrombin G20210A in healthy subjects and patients with venous thromboembolism. Croat Med J 2001; 42: 488-492

45. Comp P.C., Nixon R.R., Cooper M.R., Esmon C.T. Familial protein S deficiency is associated with recurrent thrombosis. J Clin Invest 1984; 74: 2082-2088

46. Cooper D.N., Millar D.S., Wasey A., Banner D.W., Tuddenham E.G.D. Inherited factor VII deficiency: molecular genetics and pathophysiology. Thromb Haemost 1997; 78: 151-160

47. Dahlback B. Inherited thrombophilia: resistence to activated protein С as a pathogenic factor of venous thromboembolism. Blood 1995; 85(3): 607-614

48. Dahlback B. Resistance to activeted protein С caused by the factor V R506Q mutation is a common risk factor for venous thrombosis. Thromb Haemost 1997; 78(1): 483-488

49. Dahlback В., Carlsson M., Svensson P.J. Familial thrombophilia due to a previously unrecognized mechanism characterized by poor anticoagulant response to activated protein C. Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90: 1004-1008

50. Dalmon J., Laurent M., Courtois G. The human b-fibrinogen promoter contains hepatocyte nuclear factor 1 dependent interleukin-6-responsive element. Mol Cell Biol 1993; 13: 1183

51. Dawson S., Hamsten A., Wiman В., Henney A., Humphries S. Genetic variation at the plasminogen activator inhibitor-1 locus is associated with altered levels of plasminogen activator inhibitor-1 activity. Arterioscler Thromb 1991; 11:183

52. De Stefano V., Chiusolo P., Paciaroni K., Casorelli I., Rossi E., Molinari M., Servidei S., Tonali P.A., Leone G. Prothrombin G20210A mutant genotype is a risk factor for cerebrovascular ischemic disease in young patients. Blood 1998; 91(10): 3562-3565

53. De Stefano V., Rossi E., Paciaroni K., Leone G. Screening for inherited thrombophilia: indications and therapeutic implications. Haematologica 2002; 87: 1095-1108

54. Deguchi H., Fernandez J.A., Pabinger I., Heit J.A., Griffm J.H. Plasma glucosylceramide deficiency as potential risk factor for venous thrombosis and modulator of anticoagulant protein С pathway. Blood 2001; 97(7): 1907-1914

55. Doggen C.J.M., Cats V.M., Bertina R.M., Rosendaal F.R. Interaction of coagulation defects and cardiovascular risk factors. Increased risk of myocardial infarction associated with Factor V Leiden or Prothrombin 2021 OA. Circulation 1998; 97: 1037-1041

56. Egeberg O. Inherited antithrombin deficiency causing thrombophilia. Thromb Diath Haemorrh 1965; 13: 516-530

57. Engstrom G., Janzon L., Berglund G., Lind P., Stavenow L., Hedblad В., Lindgarde F. Blood pressure increase and incidence of hypertension in relation to inflammation-sensitive plasma proteins. Arterioscler Thromb Vase Biol 2002; 22(12): 2054-2058

58. Feng Y.J., Draghi A., Linfert D.R., Wu A.H.B., Tsongalis G.J. Polymorphisms in the genes for coagulations factors II, V, and VII in patients with ischemic heart disease. Arch Pathol Lab Med 1999; 123: 1230-1235

59. Folsom A.R. Hemostatic risk factors for atherothrombotic disease: an epidemiologic view. Thromb Haemost 2001; 86: 366-373

60. Folsom A.R., Wu K.K., Rosamond W.D., Sharrett A.R., Chembless L.E. Prospective study of hemostatic factors and incidence of coronary heart disease: The Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study. Circulation 1997; 96: 1102-1108

61. Freyburger G., Labrouche S., Sassoust G., Rouanet F., Javorschi S., Parrot F. Mild hyperhomocysteinemia and hemostatic factors in patients with arterial vascular diseases. Thromb Haemost 1997; 77(3): 466-471

62. Friday G., Alter M., Lai S.M. Control of hypertension and risk of stroke recurrence. Stroke 2002; 33: 2652-2657

63. Friedlander Y., Elkana Y., Sinnreich R., Kark J.D. Genetic and environmental sources of fibrinogen variability in Israeli families: The Kibbutzim Study. Am J Hum Genet 1995; 56: 1194

64. Frosst P., Blom H.J., Milos R., Goyette P., Sheppard C.A., Matthews R.G., Boers G.J.H., Heijer den M., Kluijtmans L.A.J., Heuvel van den L.P., Rozen R.

65. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylentetrahydrofolate reductase. Nature Genet 1995; 10: 111-113

66. Gehring N.H., Frede U., Neu-Yilik G., Hundsdoerfer P., Vetter В., Hentze M.W., Kulozik A.E. Increased efficiency of mRNA 3' end formation: a new genetic mechanism contributing to hereditary thrombophilia. Nature Genetics 2001;28:389-392

67. Giles W.H., Croft J.B., Greenlund K.J., Ford E.S., Kittner S.J. Total homocysteine concentration and the likelihood of nonfatal stroke. Stroke 1998;29:2473-2477

68. Glowinska В., Urban M., Peczynska J., Florys В., Szydlowska E. Elevated concentrations of homocysteine in children and adolescents with arterial hypertension accompanying Type 1 diabetes. Med Sci Monit 2001; 7(6): 12421249

69. Glueck C.J., Fontaine R.M., Gupta A., Alasmi M. Myicardial infarction in a 35-year-old man with homocysteinemia, high plasminogen activator inhibitor activity, and resistance to activated protein C. Metabolism 1997; 46: 1470-1472

70. Gonzalez-Conejero R., Lozano M.L., Rivera J., Corral J., Iniesta J.A., Moraleda J.M., Vicente V. Polymorphisms of platelet membrane glycoprotein Iba associated with arterial thrombotic disease. Blood 1998; 92: 2771-2776

71. Goyette P., Sumner J.S., Milos R., Duncan A.M.V., Rosenblatt D.S., Matthews R.G., Rozen R. Human methylentetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification. Nature Genet 1994; 7: 195-200

72. Griffin J.H., Evatt В., Zimmerman T.S., Kleiss A.J., Wideman C. Deficiency of protein С in congenital thrombotic disease. J Clin Invest 1981; 68: 1370-1373

73. Griffin J.H., Fernandez J.A., Deguchi H. Plasma lipoproteins, hemostasis and thrombosis. Thromb Haemost 2001; 86: 384-394

74. Gunther G., Junker R., Strater R., Schobess R., Kurnik K., Kosch A., Nowak-Gottl U. Symptomatic ischemic stroke in full-term neonates. Role of acquired and genetic prothrombotic risk factors. Stroke 2000; 31: 2437-2441

75. Hankey G.J., Eikelboom J.W. Homocysteine and stroke. Curr Opin Neurol 2001; 14:95-102

76. Hankey G.J., Eikelboom J.W. Homocysteine and vascular disease. Lancet 1999;354:407-413

77. Hassan A., Markus H.S. Genetics and ischemic stroke. Brain 2000; 123: 17841812

78. Heinrich J., Balleisen L., Schulte H., Assmann G., Loo van de J. Fibrinogen and factor VII in the prediction of coronary risk. Results from the PROCAM study in healthy men. Arterioscler Thromb 1994; 14: 54-59

79. Heywood D.M., Carter A.M., Catto A.J., Bamford J.M., Grant P.J. Polymorphisms of the factor VII gene and circulating FVII:C levels in relation to acute cerebrovascular disease and poststroke mortality. Stroke 1997; 28: 816821

80. Hooper W.C., Evatt B.L. The role of activated protein С resistance in the pathogenesis of venous thrombosis. Am J Med Sci 1998; 316(2): 120-128

81. Humphries S.E., Cook M., Dubowitz M., Stirling Y., Meade T.W. Role of genetic variation at the fibrinogen locus in determination of fibrinogen concentrations. Lancet 1987; 1: 1452-1455

82. Iacoviello L., Castelnuovo Di A., Knijff de P., D'Orazio A., Amore C., Arboretti R., Kluft C., Donati M.B. Polymorphisms in the coagulation factor VII gene and the risk of myocardial infarction. N Engl J Med 1998; 338: 79-85

83. Imano H., Iso H., Sato S., Kitamura A., Okamura Т., Tanigawa Т., Ohira Т., Kudo M., Naito Y., Iida M., Shimamoto T. Determinants of platelet aggregation in 50-70-year-old men from three Japanese communities. Atherosclerosis 2002; 165(2): 327-334

84. Jacquelin В., Tarantino M.D., Kritzik M., Rozenshteyn D., Koziol J.A., Nurden А.Т., Kunicki T.J. Allele-dependent transcriptional regulation of the human integrin 2 gene. Blood 2001; 97: 1721-1726

85. Jacques P.F., Selhub J., Bostom A.G., Wilson P.W.F., Rozenberg I.H. The effect of folic acid fortification on plasma folate and total homocysteine concentrations. N Engl J Med 1999; 340(19): 1449-1454

86. Kain K., Catto A.J., Grant P.J. Impaired fibrinolisis and increased fibrinogen levels in South Asian subjects. Atherosclerosis 2001; 156 (2): 457-461

87. Mehilli J., Schomig K., Beckerath von N. P1A polymorphism of plateletglycoprotein Ilia and risk of restenosis after coronary stent placement. Circulation 1999; 99: 1005-1010

88. Kenny D., Muckian C., Fitzgerald D.J., Cannon C.P., Shields D.C. Platelet glycoprotein lb alpha receptor polymorphisms and reccurent ischaemic events in acute coronary syndrome patients. J Thromb Thrombolysis 2002; 13: 13-19

89. Kiely D.K., Wolf P.A., Cupples L.A., Beiser A.S., Myers R.H. Familial aggregation of stroke. The Framingham Study. Stroke 1993; 24: 1366-1371

90. Knowlton K.U., Chein K.R. Inflammatory pathways and cardiac repair: the affliction of infarction. Nature Medicine 1999; 5(10): 1122-1123

91. Koeleman B.P.C., Reitsma P.H., Bakker E., Bertina R.M. Location on the human genetic lineage map of 26 genes involved in blood coagulation. Thromb Haemost 1997; 77(5): 873-878

92. Kottke-Marchant K. Genetic polymorphisms associated with venous and arterial thrombosis. Arch Pathol Lab Med 2002; 126: 295-304

93. Kristensen В., Malm J., Nilsson Т.К., Hultdin J., Carlberg В., Olsson T. Increased fibrinogen levels and acquired hypofibrinolisis in young adults with ischemic stroke. Stroke 1998; 29: 2261-2267

94. Kunicki T.J., Ruggeri Z.M. Platelet collagen receptors and risk predition in stroke and coronary artery disease. Circulation 2001; 104: 1451-1453

95. Lane D.A., Grant P.J. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease. Blood 2000; 95(5):1517-1532

96. Leroyer C., Mercier В., Oger E., Chenu E., Abgrall J.F., Feres C., Mottier D. Prevalence of the 20210A allele of the prothrombin gene in venous thromboembolism patients. Thromb Haemost 1998; 80: 49-51

97. Lopez J.A., Andrews R.K., Afshar-Kharghan V., Berndt M.C. Bernard-Soulier syndrome. Blood 1998; 91: 4397-4418

98. Maat de M.P.M., Green F., Knijff de P., Jespersen J., Kluft C. Factor VII polymorphisms in populations with different risks of cardiovascular disease. Arterioscler Thromb Vase Biol 1997; 17: 1918-1923

99. Madonna P., De Stefano V., Coppola A., Cirillo F., Cerbone A.M., Orefice G., Di Minno G. Hyperhomocysteinemia and other inherited prothrombotic conditions in young adults with a history of ischemic stroke. Stroke 2002; 33: 51-56

100. Malinow M.R. Homocysteine and arterial occlusive disease. J Intern Med 1994;236:603-617

101. Marchetti G., Patracchini P., Papacchini M., Ferrati M., Bernardi F. A polymorphism in the 5'region of coagulation factor VII gene (F7) caused by an inserted decanucleotide. Hum Genet 1993; 90(5): 575-576

102. Marcus H.S., Ali N., Swaminathan R., Sankaralingam A., Molloy J., Powell J. A common polymorphism in the methylentetrahydrofolate reductase gene, homocysteine, and ischemic cerebrovascular disease. Stroke 1997; 28: 17391743

103. Maresca G., Di Blasio A., Marchioli R., Di Minno G. Measuring plasma fibrinogen to predict stroke and myocardial infarction: an update. Arterioscler Thromb Vase Biol 1999; 19: 1368-1377

104. Margaglione M., Cappucci G., Colaizzo D., Pirro L., Vecchione G., Grandone E., Di Minno G. Fibrinogen plasma levels in an apparently healthy general population relation to environmental and genetic determinants. Thromb Haemost 1998; 80 (5): 805-810

105. Margaglione M., D'Andrea G., Giuliani N., Brancaccio V., De Lucia D., Grandone E., De Stefano V., Tonali P.A., Di Minno G. Inherited prothrombotic conditions and premature ischemic stroke. Arterioscler Tromb Vase Biol 1999; 19: 1751-1756

106. Marian A.J. Genetic risk factors for myocardial infarction. Current Opinion in Cardiology 1998; 13: 171-178

107. Martinelli I. Risk factors in venous thromboembolism. Thromb Haemost 2001;86:395-403

108. Martinelli I., Taioli E., Bucciarelli P., Akhavan S., Mannucci P.M. Interaction between the G20210A mutation of the prothrombin gene and oral contraceptive use in deep vein thrombosis. Arterioscler Thromb Vase Biol 1999;19:700-703

109. Marz W., Seydwitz H., Winkelmann В., Chen M., Nauck M., Witt I. Mutation in the coagulation factor V associated with resistance to activated protein С in patients with coronary artery disease. Lancet 1995; 345: 526-527

110. McCully K.S. Vascular pathology of homocysteinemia: implications for the pathogenesis of arteriosclerisis. Am J Pathol 1969; 56: 111-128

111. McMurray J. The health economics of the treatment of hyperlipidemia and hypertension. Am J Hypertens 1999; 12: 99-104

112. McVey J.H., Boswell E., Mumford A.D., Kemball-Cook G., Tuddenham E.G.D. Factor VII deficiency and the F VII mutation database. Hum Mutat 2001;17:3-17

113. Meade T.W., Cooper J.A., Miller G.J. Platelet count and aggregation measures in the incidence of ischaemic heart disease (IHD). Thromb Haemost 1997; 78: 926-929

114. Mennen L., Maat de M., Meijer G., Zock P., Grobbee D., Kok F., Kluft C„ Schouten E. Factor Vila response to a fat-rich meal does not depend on fatty acid composition. A randomized controlled trial. Arterioscler Thromb Vase Biol 1998; 18(4): 599-603

115. Moran N., Morateck P.A., Deering A., Ryan M., Montgomery R.R., Fitzgerald D.J., Kenny D. Surface expression of glycoprotein lb is dependent on glycoprotein lb: evidence from a novel mutation causing Bernard-Soulier syndrome. Blood 2000; 96: 532-539

116. Motulsky A.G. Nutritional ecogenetics: homocysteine-related arteriosclerotic vascular disease, neural tube defects, and folic acid. Am J Hum Genet 1996; 58: 17-20

117. Newman P.J. Platelet alloantigens: cardiovascular as well as immunological risk factor. Lancet 1997: 349: 370160. Newman P.J., Derbes R.S., Aster R.H. The human platelet alloantigens,

118. P1A1 and P1A2, are associated with a leucine33/proline33 amino acid polymorphism in membrane glycoprotein Ilia, and are distinguishable by DNA typing. J Clin Invest 1989; 83(5): 1778-1781

119. Nurden A.T. Polymorphisms of platelet receptors as risk factors in coronary thrombosis. European Heart Journal 1996; 17: 1293-1294

120. O'Brien D.K., Heywood J.B., Heady J.A. The quantitation of platelet aggregation induced by four compounds: A study relation to myocardial infarction. Thromb Haemorrh 1966; 16: 725-767

121. Pabinger I., Schneider B. Thrombotic risk in hederitary antithrombin III, protein C, or protein S deficiency. Arterioscler Thromb Vase Biol 1996; 16: 742-748

122. Paola Di J., Federici A.B., Mannucci P.M., Canciani M.T., Kritzik M., Kunicki T.J., Nugent D. Low platelet a2abl levels in type 1 von Willebrand disease correlate with impaired platelet function in a high shear stress system. Blood 1999; 93: 3578-3582

123. Patil S., Newman D.K., Newman P.J. Platelet endothelial cell adhesion molecule-1 serves as an inhibitory receptor that modulates platelet responses to collagen. Blood 2001; 97: 1727-1732

124. Prencipe M., Culasso F., Rasura M., Anzini A., Beccia M., Cao M., Ciubilei F., Fieschi C. Long-term prognosis after a minor stroke: 10-year mortality and major stroke reccurence rates in a hospital-based cohort. Stroke 1998; 29: 126132

125. Press R.D., Bauer K.A., Kujovich J.L., Heit J.A. Clinical utility of Factor V Leiden (R506Q) testing for the diagnosis and management of thromboembolic disorders. Arch Pathol Lab Med 2002; 126: 1304-1318

126. Put van der N.M.J., Eskes T.K.A.B., Blom H.J. Is the common 677C-to-T mutation in the metylenetetrahydrofolate reductase gene a risk factor for neural tube defects? A meta-analysis. Quart J Med 1997; 90: 111-115

127. Rea T.G., Heckbert S.R., Kaplan R.C., Psaty B.M., Smith N.L., Lemaitre R.N., Lin D. Body mass index and risk of recurrent coronary events following acute myocardial infarction. Am J Cardiol 2001; 88: 467-472

128. Rees D.C., Cox M., Clegg J.B. Wold distribution of fartor V Leiden. Lancet 1995; 345:1133-1134

129. Ridker P.M., Hennekens C.H., Schmitz C., Stampfer M.J., Lindpaintner K. P1A1/A2 polymorphism of platelet glycoprotein Ilia and risks of myocardial infarction, stroke and venous thrombosis. Lancet 1997; 349: 385-388

130. Rosendaal F.R. Venous thrombosis: a multicausal disease. Lancet 1999; 353: 1167-1173

131. Rosendaal F.R., Koster Т., Vandenbroucke J.P., Reitsma P.H. High risk of thrombosis in patients homozygous for factor V Leiden (activated protein С resistance). Blood 1995; 85: 1504-1508

132. Santoso S., Kunicki T.J., Kroll H., Haberbosch W., Gardemann A. Association of the platelet glycoprotein la C807T gene polymorphism with nonfatal myocardial infarction in younger patients. Blood 1999; 93: 2449-2453

133. Seligsohn U., Zivelin A. Thrombophilia as a multigenic disorder. Thromb Haemost 1997; 78:297-301

134. Simmonds R.E., Hermida J., Rezende S.M., Lane D.A. Haemostatic genetic risk factors in arterial thrombosis. Thromb Haemost 2001; 86: 374-385

135. Siscovick D.S., Schwartz S.M., Rosendaal F.R., Psaty B.M. Thrombosis in the young: effect of atherosclerotic risk factors on the risk of myocardial infarction associated with prothrombotic factors. Thromb Haemost 1997; 78(1): 7-12

136. Sloan I.G., Firkin B.G. Impaired fibrinolysis in patients wiht thrombotic or haemostatic defects. Thromb Res 1989; 55: 559-567

137. Smith F.B., Lee A.J., Fowkes F.G.R., Price J.F., Rumley A., Lowe G.D.O. Hemostatic factors as predictors of ischemic heart disease and stroke in the Edinburgh artery study. Arterioscler Thromb Vase Biol 1997; 17: 3321-3325

138. Sohda S., Arinami Т., Hamada H., Yamada N., Hamaguchi H., Kubo T. Metylenetetrahydrofolate reductase polymorphism and pre-eclampsia. J Med Genet 1997; 34: 525-526

139. Spiridonova M., Stepanov V., Puzyrev V. Thermolabile C677T mutation in 5,10-methylentetrahydrofolate reductase in coronary atherosclerosis: case-control study in Russian population. Human Genome Meeting Brisbane 1999: 76

140. Sykes T.C.F., Fegan C., Mosquera D. Thrombophilia, polymorphisms, and vascular disease. Molecular Pathology 2000; 53(6): 300-306

141. Talmon Т., Scharf J., Mayer E., Lanir N., Miller В., Brenner B. Retinal arterial occlusion in a child with factor V Leiden and thermolabile methylene tetrahydrofolate reduktase mutation. Am J Ophthal 1997; 124: 689-691

142. Thaulow E., Erikssen J., Sandvik L., Stormorken H., Cohn P.F. Blood platelet count and function are related to total and cardiovascular death in apparently healthy men. Circulation 1991; 84: 613-617

143. Thornton M.A., Poncz M., Korostishevsky M., Yakobson E., Usher S., Seligsohn U., Peretz H. The human platelet lib gene is not closely linked to its integrin partner 3. Blood 1999; 94: 2039-2047

144. Ueland P.M. Homocysteine species as components of plasma redox thiol status. Clin Chem 1995; 41: 340-342

145. Undas A., Sanak M., Musial J., Szczeklik A. Platelet glycoprotein Ilia polymorphism, aspirin, and thrombin generation. Lancet 1999; 353: 982-983

146. Undas A., Williams E.B., Butenas S., Orfeo Т., Mann K.G. Homocysteine inhibits inactivation of factor Va by activated protein C. The Journal of Biological Chemistry 2001; 276(6): 4389-4397

147. Vijayan K.V., Goldschmidt-Clermont P.J., Roos C., Bray P.F. The P1A2 polymorphism of integrin P3 enhances outside-in signaling and adhesive functions. J Clin Invest 2000; 105: 793-802

148. Wada Y., Lord S. A correlation between thrombotic disease: a specific fibrinogen abnormality (A alpha 554 Arg-Cys) in two unrelated kindred, Dusart and Chapel Hill III. Blood 1994; 84: 3709-3714

149. Walter D.H., Schachinger V., Eisner M., Dimmeler S., Zeiher A.M. Platelet glycoprotein Ilia polymorphisms and risk of coronary stent thrombosis. Lancet 1997; 350:1217-1219

150. Welch G., Loscalzo J. Homocysteine and aterothrombosis. N Emgl J Med 1998; 338(15): 1042-1050

151. Wilhelmsen L., Svardsudd K., Korsan-Bengtsen K., Larsson В., Welin L., Tobblin G. Fibrinogen as a risk factor for stroke and myocardial infarction. N Engl JMed 1984; 311: 501-505

152. Williamson D., Brown K., Liddington R., Baglin C., Baglin T. Factor V Cambridge: a new mutation (Arg306-Thr) associated with resistance to activeted protein C. Blood. 1998; 91(4): 1140-1144

153. Wilson P.W.F. Established risk factors and coronary artery disease: the Framingham study. Am J Hypertens 1994; 7: 7-12

154. Yamamoto K., Takeshita K., Shimokawa Т., Yi H., Isobe K., Loskutoff D.J., Saito H. Plasminogen activator inhibitor-1 is a major stress-regulated gene:implications for stress-indused thrombosis in aged individuals. Proc Nat Acad Sci2002; 99:890-895

155. Yoo J.-H., Chung C.-S., Kang S.-S. Relation of plasma homocysteine to cerebral infarction and cerebral atherosclerosis. Stroke 1998; 29: 2478-2483

156. Yu S., Sher В., Kudryk В., Redman C.M. Intracellular assembly of human fibrinogen. J Biol Chem 1984; 259(10): 574

157. Zaman A.G., Helft G., Worthley S.G., Badimon J.J. The role of plaque rupture and thrombosis in coronary artery disease. Atherosclerosis 2000; 149: 251-266

158. Zevin S., Saunders S., Gourlay S.G., Jacob P., Benowitz N.L. Cardiovascular effects of carbon monoxide and cigarette smoking. J Am Coll Cardiol 2001; 15: 1633-1638

159. Zitoun D., Bara L., Basdevant A., Samama M.M. Levels of factor VIIc associated with decreased tissue factor pathway inhibitor and increased plasminogen activator inhibitor-1 in dyslipidemias. Arterioscler Thromb Vase Biol 1996; 1:77-81

160. Zutter M.M., Santoro S.A. Widespread histologic distribution of the alpha 2 beta 1 integrin cell-surface collagen receptor. Am J Pathol 1990; 137: 113-120