Твердофазная иммуноферментная тест-система для выявления антител к ретинальному S-антигену и ее использование в комплексном иммунологическом обследовании офтальмологических больных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Яковлева, Валентина Германовна

• Яковлева, Валентина Германовна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Яковлева, Валентина Германовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Тканеспецифические структуры сетчатки.

1.2. Участие 8-антигена и других тканеспецифических антигенов сетчатки в формировании офтальмопатологии. Клиническая и прогностическая значимость выявления аутосенсибилизации к 8-антигена.

1.3. Способы выделения и очистки ретинального 8-антигена (аррестина).

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы.

2.2. Иммунологические методы исследования.

2.3. Биохимические методы исследования.

2.4. Методы статистической обработки результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Выделение и очистка ретинального 8-антигена.

3.2. Получение гипериммунной сыворотки к ретинальному 8-антигену.

3.3. Разработка твердофазной иммуноферментной тест-системы для определения антител к 8-антигену.

3.3.1. Определение оптимальных условий для сорбирования антигена.

3.3.2. Определение оптимального разведения исследуемой сыворотки.

3.3.3. Формирование средних значений ОП при выявлении антител к антигену для здоровых доноров.

3.4. Проверка иммуноферментной тест-системы для определения антител к 8-антигену (аррестину) в сыворотке крови у больных с резличными видами патологии.

3.4.1. Антитела к аррестину у больных с увеоретинальной патологией и прогрессирующей миопией.

3.4.2. Антитела к аррестину у больных инсулинзависимым сахарным диабетом (ИЗСД).

3.4.3. Антитела к аррестину у больных инфильтративным туберкулезом легких (ИТЛ).

3.5. Использование разработанной тест-системы по выявлению антител к ретинальному 8-антигену в комплексном офтальмоиммунологическом обследовании больных.

3.6. Специфичность и чувствительность разработанной тест-системы для определения антител к ретинальному 8-антигену.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Твердофазная иммуноферментная тест-система для выявления антител к ретинальному S-антигену и ее использование в комплексном иммунологическом обследовании офтальмологических больных»

Актуальность проблемы

В настоящее время не вызывает сомнения, что аутоиммунные реакции, направленные против основного тканеспецифического ретинального белка - S-антигена (S-АГ), имеют существенную значимость в патогенезе самых разных офтальмологических заболеваний.

S-АГ (аррестин) - наиболее увеитогенный из всех известных белков сетчатки, имеет молекулярный вес около 50 ООО дальтон и локализован в фоторецепторном слое (Nussenblatt R.B. et al., 1996).

Аутосенсибилизация к S-АГ выявлена при травмах органа зрения (Яхницкая JI.K., 1992; Гундорова P.A. с соавт., 1996; Валеева Р.Т. с соавт., 1998) является сопутствующим компонентом при инфекционных поражениях глаза (Слепова О.С. и соавт., 1991), отслойках сетчатки (Зайцева Н.С. и соавт., 1986; Слепова О.С., 1991; Балашова Л.М. и соавт., 1996; SebagJ. et al., 1988), прогрессирующей миопии (Лазук A.B., 1994), присоединяется при системных заболеваниях (Поздеева О.Г., 1996), сахарном диабете (Зайцева Н.С. и соавт., 1994; Слепова О.С. и соавт., 1994), возрастных изменениях сетчатки (Daniela H. et al., 1991).

Классическим примером проявления аутоагрессии против тканеспецифических антигенов сетчатки является симпатическая офтальмия. Как известно, риск этого заболевания особенно велик после травмы (Петрова Т.В., 1990; Слепова О.С., 1991).

Так как аррестин является "забарьерным" тканеспецифическим белком сетчатки, появление аутосенсибилизации к нему свидетельствует о нарушении избирательной проницаемости мембран глаза.

Выявление аутоагрессии к ретинальному Б-АГ и другим тканеспецифическим белкам позволяет выбрать оптимальную тактику терапевтического или хирургического лечения (Краюшкина В.Ф., 1988; Слепова О.С. и соавт., 1996; Катаргина Л.А. и соавт., 1997; Зайцева Н.С. и соавт., 1997).

Несмотря на очевидную необходимость оценки аутосенсибилизации к увеоретинальным антигенам данная возможность отсутствует в большинстве офтальмологических клиник. Это объясняется отсутствием в настоящее время как в нашей стране, так и за рубежом коммерческих тест-систем для определения аутосенситизации к тканеспецифическим антигенам глаза.

В значительной мере это обусловлено трудоемкостью и многоэтапностью получения чистого Б-АГ, пригодного для применения в иммуноферментном анализе, а также сложностями, связанными с разработкой тест-системы.

В этой связи поиск способов оптимизации выделения 8-АГ, по качеству и количеству адекватного для проведения рутинного иммуноферментного анализа, а также разработка метода иммуноферментного анализа для выявления тканеспецифических антител приобретает очевидную актуальность.

Цель исследования

Оптимизация метода выделения тканеспецифического ретинального Б-антигена (аррестина) и разработка твердофазной иммуноферментной тест-системы для выявления аутоантител к Б-антигену с целью ее использования в комплексном иммунологическом обследовании больных с офтальмопатологией.

Задачи исследования:

1. Разработать простой и быстрый способ получения ретинального 8-антигена из сетчаток крупного рогатого скота.

2. На основе полученного Б-антигена разработать иммуноферментную тест-систему для определения антител к ретинальному Б-антигену в сыворотке крови и сформулировать критерии оценки получаемых в ИФА результатов.

3. Апробировать разработанную иммуноферментную тест-систему для определения антител к аррестину у больных с различными видами офтальмопатологии: острыми увеитами; субатрофией глазного яблока; симпатической офтальмией; прогрессирующей миопией.

4. Оценить возможность использования разработанной тест-системы для выявления тканеспецифического аутоиммунитета к ретинальному Б-антигену при инсулинзависимом сахарном диабете.

5. Оценить возможность использования тест-системы для определения антител к ретинальному Б-антигену в ранней диагностике туберкулезного поражения глаз у больных инфильтративным туберкулезом легких.

6. Провести комплексное офтальмоиммунологичекое обследование офтальмологических больных с использованием разработанной тест-системы.

Новизна исследования

Впервые разработан оптимальный и быстрый способ для получения и очистки ретинального Б-АГ из сетчаток крупного рогатого скота, обеспечивающий в сравнении с традиционными методами высокий выход иммунореактивного специфического белка, приемлемого для проведения иммуноферментного анализа с целью выявления тканеспецифических антител. Выявлены оптимальные условия для проведения ИФА и разработана твердофазная иммуноферментная тест-система для определения антител к ретинальному 8-АГ. Разработанная тест-система была применена для комплексного офтальмоиммунологического обследования больных с острой офтальмопатологией, хроническими увеитами в стадии субатрофии глазного яблока, при симпатической офтальмии, прогрессирующей близорукости; для выявления антител к ретинальному Б-антигену у больных сахарным диабетом и инфильтративным туберкулезом легких. Разработанная иммуноферментная тест-система по определению антител к Б-АГ была использована при офтальмоиммунологическом обследовании больных с субатрофией глазного яблока, оперированных с применением биоматериала "Аллоплант" в динамике.

Практическая значимость

Разработанная иммуноферментная тест-система позволяет определить уровень аутоантител к ретинальному 8-АГ в сыворотке крови у офтальмологических больных, оценить угрозу возникновения аутоагрессии к увеоретинальным структурам до клинических ее проявлений, оценить эффективность проведения лечебных мероприятий. Данные, полученные при применении данной тест-системы в комплексном офтальмоспецифическом иммунологическом обследовании, позволяют определить показания к применению иммуносупрессивной терапии в особенно тяжелых случаях.

Внедрение

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ. Материалы диссертации вошли в учебный курс кафедры глазной и пластической хирургии Института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета. Разработанная иммуноферментная тест-система с успехом применяется для оценки аутосенсибилизации к ретинальному 8-АГ в Уфимском НИИ глазных болезней и во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии.

Положения, выносимые на защиту

При получении Б-АГ применено дробное высаливание в сочетании с гидрофобной хроматографией на фенил-сефарозе СЬ-4В, что обеспечивает в сравнении с традиционными методами более высокий выход белка при минимальных затратах времени.

На основе полученного 8-АГ разработана чувствительная твердофазная иммуноферментная тест-система для выявления Б-АГ-специфических антител в сыворотке крови.

Наличие антител к тканеспецифическому Б-антигену является признаком увеоретинальной патологии, и определение антител к 8-антигену с помощью разработанной тест-системы может быть использовано в комплексе диагностических мероприятий, в том числе и в условиях офтальмоиммунологического обследования хирургических больных.

11

При инсулинзависимом сахарном диабете наличие специфических к Б-антигену антител в 95% случаев свидетельствует о наличии диабетической ретинопатии.

При инфильтративном туберкулезе легких выявление антител к 8-АГ может служить прогностическим критерием возможности развития туберкулезного поражения увеоретинального тракта.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Яковлева, Валентина Германовна

ВЫВОДЫ

1. Разработан оптимальный метод выделения и очистки ретинального 8-антигена из сетчаток крупного рогатого скота, обеспечивающий высокий конечный выход белка, специфичность которого подтверждена методами биохимического и иммунохимического анализа.

2. На основе полученного 8-антигена разработана твердофазная иммуноферментная тест-система для выявления специфичных к 8-антигену антител в сыворотке крови и сформулированы критерии оценки положительных результатов.

3. При использовании разработанной тест-системы выявлено, что антитела к 8-антигену обнаруживаются у 5% здоровых доноров, у 60% больных с острыми генерализованными и задними увеитами, у 50% больных с острыми передними увеитами, в 39,3% случаев у больных с субатрофией глазного яблока, в 100% случаев при симпатической офтальмии и в 16,6% при прогрессирующей миопии.

4. При использовании разработанной тест-системы антитела к ретинальному 8-антигену выявляются у 62% больных инсулинзависимым сахарным диабетом, что в 95% случаев соответствует наличию диабетической ретинопатии.

5. При инфильтративном туберкулезе легких антитела к 8-антигену выявляются в 4 раза чаще чем у здоровых доноров, что в 71,4% случаев ассоциируется с наличием субклинических признаков поражения увеального тракта.

88

6. При острых генерализованных и задних увеитах в структуре аутоиммунитета преобладает сенсибилизация к 8-антигену; при острых передних увеитах наряду с присутствием антител специфичных к 8-антигену преобладающими являются антитела к тканеспецифическому антигену роговицы ВСР-54; при субатрофии глазного яблока и симпатической офтальмии наличие антител к 8-антигену коррелирует с наличием антител к тканеспецифическим антигенам хрусталика и роговицы.

7. Разработанная иммуноферментная тест-система для определения антител к аррестину в сыворотке крови может быть использована в комплексе диагностических мероприятий при оценке тканеспецифического иммунного ответа в комплексном иммунологическом обследовании офтальмологических больных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема повреждения органов и тканей посредством аутоиммунных реакций давно стоит в центре внимания многих исследователей из различных стран. Еще в 1910 году ЕкИг^ А. высказал предположение, что именно аутоиммунитет к увеальным антигенам является причиной возникновения симпатической офтальмии. В настоящее время тканеспецифические антигены сетчатки изучены достаточно полно. Признано, что наиболее вовлекаемым в аутоиммунный процесс и в формирование ретинальной деструкции является протеин фоторецепторного слоя сетчатки - 8-антиген (аррестин), имеющий молекулярный вес около 50 КДа. Ученые отмечают, что микрограммы этого белка могут индуцировать увеит у экспериментальных животных (ЭАУ). Именно на модели ЭАУ исследователи изучают внутренние механизмы аутоиммунного повреждения сетчатки и разрабатывают схемы лечения.

Анализ работ, посвященных определению аутосенсибилизации к сетчатке при различных видах офтальмопатологии, показал, что аутоиммунные реакции к 8-АГ и другим тканеспецифическим ретинальным белкам имеют место не только при травматических повреждениях, сопряженных с явным нарушением целостности гемофтальмического барьера, но и при системных патологиях, инфекционных процессах, отслойках сетчатки, возрастных изменениях, прогрессирующей миопии и других заболеваниях, вызывающих нарушение избирательной проницаемости мембран глаза.

Эти факты дают основание утверждать о важности иммунологических тестов, направленных на выявление аутоаллергии к 8-АГ у пациентов с любыми видами офтальмопатологии. Понятно, что своевременное выявление аутоиммунного компонента дает возможность лечащему врачу вовремя выбрать правильную тактику проведения лечебных мероприятий, направленных на его ослабление. В случаях с посттравматической симпатической офтальмией эти иммунологические данные могут даже предотвратить аутоиммунное поражение парного "здорового" глаза.

Как следует из вышесказанного, актуальность в определении аутоиммунитета к ретинальному аррестину очевидна. Несмотря на это, коммерческого очищенного Б-АГ, равно как и коммерческих тест-систем для определения антител к нему не существует.

В данной работе предпринята попытка оптимизировать метод выделения чистого Б-АГ, основываясь на опыте других исследователей и знании физико-химических свойств этого белка.

Предлагаемая нами модификация имеет ряд преимуществ в сравнении со способами, предлагавшимися ранее. Во-первых, на первом этапе очистки Б-АГ мы применили дробное высаливание сульфатом аммония, позволившее сразу избавиться от высокомолекулярных балластных белков и обеспечить минимальную потерю 8-АГ. Во-вторых, применение гидрофобной хроматографии на фенил-сефарозе вместо ионообменной позволило выделить Б-АГ более специфично и опустить этап диализа, занимающий достаточно длительное время. Конечный этап очистки проводился гель-фильтрацией на Ultragel АсА 44. В результате именно такой комбинации этапов получения и очистки 8-АГ нам удалось сократить время выделения до 2-х суток и добиться максимально высокого выхода конечного продукта (0,716±0,073 мг/г веса ткани).

Получив возможность выделения чистого 8-АГ, стала реальной разработка твердофазной иммуноферментной тест-системы для определения антител к этому белку в сыворотке крови. Нами подобраны оптимальные условия проведения анализа и статистически обоснованы критерии оценки полученных результатов.

Полученный Б-АГ также был использован для оценки клеточной сенсибилизации офтальмологических больных в реакции бласттрансформации лимфоцитов после предварительного подбора дозы белка, не вызывающей неспецифическую реакцию лимфоцитов.

Таким образом, наличие очищенного аррестина и разработанная иммуноферментная тест-система позволили методически расширить возможности иммунологического обследования офтальмологических больных и оценить как наличие специфических антител к Б-АГ этих пациентов, так и клеточную сенсибилизацию к этому белку.

Определение антител к аррестину в сыворотках крови здоровых доноров выявило, что частота встречаемости положительных результатов в этом случае составляет 5%.

При этом исследование разных групп пациентов показало, что у больных острыми увеитами антитела к 8-АГ в сыворотке крови определяются в среднем в 55% случаев, у пациентов с субатрофией глазного яблока -в 39,3%, с симпатической офтальмией - в 100% случаев и в 16,6% при прогрессирующей миопии. Результаты, полученные при помощи разработанной иммуноферментной тест-системы, не противоречат данным литературы по вовлечению антигенов сетчатки в аутоиммунный процесс при этих патологиях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Яковлева, Валентина Германовна, 2000 год

1. Алипер Т.И., РухадзеГ.Г., Сергеев В.А., Щеглова Е.Ю. Разработка тест-систем иммуноферментиого анализа для выявления антител к вирусу трансмиссивного гастроэнтерита свиней // Вопр. вирусол. 1988.- Т.ЗЗ, №4.-С.440-444.

2. Архипова Л.Т. Диагностика, клинико-иммунологическая характеристика, лечение и профилактика симпатической офтальмии // Автореф. дисс. . докт. мед. наук,- М., 1985.- 42с.

3. Архипова Л.Т., Волик Е.И. Клинико-иммунологические факторы риска посттравматических увеитов у детей // Иммунология.-1993.- №5.- С.49-53.

4. Архипова Л.Т., Гундорова P.A. Лечение и профилактика симпатической офтальмии // Методич. рекоменд. М., 1990. - С. 10.

5. Архипова Л.Т., Холтобина С.М. Иммунологический мониторинг при оценке прогноза рациональной тактики лечения посттравматического воспалительного процесса в глазу // Акт. вопросы офтальмоиммунол. Сб. науч. тр.- М., 1988.-С. 130.

6. Балаболкин М.И., Лукьянчиков B.C. Клиника и терапия клинических состояний в эндокринологии // Киев: Здоровье, 1982.- С. 150.

7. Балашова Л.М., Евграфов В.Ю. Иммунологические факторы в патогенезе витреохориоретинальных дистрофий и дистрофической отслойки сетчатки, осложненной пролиферативной витреоретинопатией (Обзор литературы) // Офтальмохирургия. 1995. - № 4. - С.48-53.

8. Беляева И.М. Роль агрегации эритроцитов в патогенезе микроциркуляторных изменений сетчатой оболочки у больных диабетической ретинопатией // Вестн. офтальмол.- 1988.- №1.- С.66-71.

9. Букринская А.Г.Димина В.П., Кицак В.Я., Павлова Л.А., Мойсиади С.А., Аракелов CA., Лисицина Е.А. Разработка тест-системы иммуноферментного анализа для быстрой диагностики ротавирусной инфекции // Вопр. вирусол. 1988.- Т.ЗЗ, №4.- С.444-447.

10. Вериго E.H., Илуридзе С.Л. Роль клинико иммунологических исследований в лечении больных с посттравматической субатрофией глаза // Акт. вопросы офтальмоиммунол. Сборн. науч. труд. М., 1988.

11. Власенко С.Ю. Разработка и применение методов специфической диагностики аспергиллеза и кандидоза на основе твердофазного иммуноферментного анализа// Автореф. дисс. канд. мед. наук.- М., 1995.-24с.

12. Власенко С.Ю., Лебедин Ю.С. Разработка и применение метода определения специфического иммуноглобулина G на основе иммуноферментного анализа для диагностики аспергиллеза легких // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1992. - №7. - С.61-63.

13. Выренкова Т.Е., Олейниченко Е.Г. Диагностика окулярного туберкулеза // Пробл. туберкул.- 1991.- №9.- С.42-44.

14. Гогина И.Ф. Патогенетические аспекты диабетических ангио-, ретино-, нейропатий и их коррекция // Автореф. дисс. . докт. мед. наук.-Одесса., 1995.- 47с.

15. Демиховская Е.В., Гренкова Е.П., Халецкая Э.В., Молибог Е.В., Селиванов Я.М., Фадеева JI.JI. Разработка и применение иммуноферментного анализа для диагностики москитных лихорадок // Вопр. вирусол. 1989.- Т.34.- С.495-498.

16. Ефимов A.C. Диабетические ангиопатии.- М., 1989.

17. Зайцева Н.С., Гундорова P.A., Архипова Л.Т., Вериго E.H., Алексеева И.Б. Клинико-иммунологические показания к выбору патогенетических методов лечения посттравматических увеитов // Метод, рекомен., М., 1984.- 27с.

18. Зайцева Н.С., Дудникова J1.K, Слепова О.С., Ли Л.С., Смирнова Н.Б., Зуева М.В., Каламкаров Г.Р., Шевченко Т.Ф. Проявление иммунологии и обоснование иммунотерапии диабетической ретинопатии // Вестн. офтальмол. 1997,- Т. 113.- №1.- С.27-30.

19. Зайцева Н.С., Слепова О.С., Дудникова Л.К. Ли Л.С., Смирнова Н.Б. и др. Способ диагностики диабетической ретинопатии // Авт. свидетельство. -№167938 СССР.- 1994.

20. Зайцева Н.С., Слепова О.С., Ли Л.С., Дудникова Л.К. К иммунодиагностике диабетических ретинопатий // Вестн. офтальмол. -1990.-№1,- С.46-49.

21. Зильбер Л.А. Иммунохимический анализ // М.: Медицина.- 1968.

22. Илуридзе С.Л. Изучение клеточных реакций к антителам тканей глаза при кератопластике и последствиях травмы //Акт. вопросы офтальмол. и иммунол. Сборн. научн. труд. М., 1988.- С. 15.

23. Катаргина Л.А. Эндогенные увеиты у детей раннего возраста. Клинико-функциональные и иммунологические особенности, профилактика и лечение осложнений // Автореф. дисс. докт. мед. наук. М., 1992. - 38с.

24. Кацнельсон JI.A., Форофонова Т.И., Бунин А.Я. Сосудистые заболевания глаза.- М., 1990.

25. Княжева О.В. Изменение иммунологической реактивности у детей с проникающими ранениями глаз. // Офтальмол. журн. 1988.- № 8.- С.479-481.

26. Краюшкина В.Ф. Коррекция лечения периферических увеитов у детей на основе выявления аутоаллергического компонента к S-антигену // Акт. вопросы офтальмоиммун. Сб. научн. работ. М., 1988.- С.90-95.

27. Лазук A.B. Роль аутоиммунных факторов в прогрессировании миопии и развитии осложнений. // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1994,- 24с.

28. Ли Л.С. Клинико-иммунологическая характеристика и прогнозирование диабетической ретинопатии. // Автореф. дисс. канд. мед. наук.- М., 1990. 26с.

29. Ли Л.С., Дудникова Л.К. Иммунологическая характеристика сахарного диабета и диабетических ретинопатий // Акт. вопросы офтальмоиммунологии. Сборн. научн. работ. 1988. - С.46-50.

30. Макаров П.В. Метод локальной иммунокоррекции -аутолимфокинотерапия в комплексном лечении проникающего ранения глаза // Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1995.

31. Малая Л.Т., Веремеенко К.Н., Шуляк Л.Н. Перспективы применения иммуноферментного анализа в медицинской практике: Обзор литературы // Врач. дело. 1988.- №12.- С. 1-4.

32. Мулдашев Э.Р., Галимова В.У., Нигматуллин Р.Т. Способ реваскуляризации хориоидеи: A.c. №822820 // Открытия, изобретения и товарные знаки. Бюллетень №15. - 1981.

33. Пантелеев O.A., Ванеева Л.И., Демченко E.H., Семенова Г.Б. Проблема подбора концентрации реагентов в твердофазном иммуноферментном методе при определении концентрации антител // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1987.- №4.- С.80-85.

34. Петрова Т.П. Иммунологический мониторинг асептического посттравматического увеита//Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1990.-23с.

35. Плохинский H.A. Биометрия // М., 1970. 362с.

36. Погожева И.Д., Шевченко Т.Ф., Лившиц В.А., Каламкаров Г.Р. Механизм взаимодействия S-АГ с родопсином: роль фосфорилирования родопсина // Биол. мембраны. 1989.- Т.6, №12.- С. 1237-1247.

37. Поздеева О.Г. Клинико-иммунологические особенности увеитов при системных заболеваниях // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. -Челябинск.- 1996.- 27с.

38. Самойлина Н.Л. Морфологический метод оценки бластной трансформации лимфоцитов в культуре // Лаб. дело.- 1970.- №8.- С.455-463.

39. Скрябина O.A. Иммунодиагностика и иммунокоррекция Т-активином детей с ретинобластомой // Автореф. дисс. . канд. мед. наук, -М.- 1990. 20с.

40. Слепова О.С. Изучение роли тканеспецифических антител к антигенам сетчатки, хрусталика, роговицы при увеитах и постувеальных осложнениях //Акт. вопросы офтальмоиммун: Сб. научн. труд. М., 1988. -С.20-30.

41. Слепова О.С. Иммунодиагностика и иммунологический контроль лечения S-зависимых форм увеоретинитов // Акт. вопросы офтальмоиммун: Сб. научн. труд. -Уфа, 1996.- С.263-267.

42. Слепова О.С. Органоспецифический аутоиммунитет при воспалительной патологии сетчатки и увеального тракта (патогенез, диагностика, обоснование терапии) // Автореф. дисс. . докт. биол. наук. -М., 1991.-45с.

43. Слепова О.С., Зайцева И.С., Островский М.А. и др. Аутоаллергические реакции к S-антигену у больных с патологией сетчатки и увеального тракта // Патология глазного дна: Тез. докл. конф.- М., 1986.-С.45-46.

44. Слепова О.С., Кодзов М.Б., Быковская Г.Н. Исследование специфических иммунных комплексов, образованных S-антигеном сетчатки и S-антителами при инфекционно-аллергических и посттравматических увеитах // Вест, офтальмол. 1991.- № 1,- С.28-31.

45. Слепова О.С., Муравьева Т.В., Рысаева А.Г. Особенности иммунологической реактивности у больных с дистрофической и постувеальной отслойкой сетчатки// Акт. вопросы патол. сетчатой оболочки и зрит, нерва.- М., 1982,- С.82-85.

46. Стукалов С.Е., Писаренко C.JL, Щепетнева М.А. Иммунологические исследования при дистрофических заболеваниях глазного дна // Офтальмол. журнал. 1992.- №1.- С.8-12.

47. Тарасова JT.H., Панова И.Е., Теплова С.Н., Варнавская Н.Г. Клинико-иммунологическая классификация туберкулезных увеитов // Вест, офтальмол 1997,- Т.113, №6.- С.33-35.

48. Теплинская JI.E., Калибердина А.Ф., Зайцева Н.С., Буланова Т.Д., Кацнельсон JI.A. Клинико-иммунологические нарушения при увеитах у больных с синдромом Бехчета // Вестн. офтальмол.-1994.- Т. 110, №3. С.23-25.

49. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков// М., 1963,- С.323.

50. Фримель Г. Иммунологические методы / М.: Медицина, 1987. С.472.

51. Хаитов P.M., Манько В.М., Алексеев Л.П., Назаров Ш.Н., Литвитов В.И., Ярилин А.А. Иммуногенетика и иммунология: резистентность к инфекции. Ташкент.: Изд-во им. Ибн-Сины, 1991С.456.

52. Хокканен В.М., Батаев В.М., Жихарева С.И., Белова О.Ю., Фихман О.З. Современный патоморфоз и особенности комплексного лечения туберкулезных увеитов // Пробл. туберкул. 1998.- №5.- С.25-27.

53. Холлендер М., Вулф Д.А. Непараметрические методы статистики //М., 1983.-С.520.

54. Царев В.Н., Ушаков Р.В., Ванеева Н.П., Ястребова Н.Е., Ушакова Т.В. Разработка тест-системы для определения антител к Bacteroides Melaninogenicus с помощью твердофазного иммуноферментного анализа // Клин, лабор. диагн. -1993.- №5.- С. 11-15.

55. Ченцова О.Б., Прокофьева Г.Л., Можеренков В.П., Кравченко Т.В., Иваненко Т.В., Юдина Т.И., Сергушев С.Г. Исследование местного аутоиммунитета при проникающих травмах глаза // Офтальмохирургия.-1995.- №2.- С.47-50.

56. Abrahams I.W., Gregerson D.S. Longitunidal study of serum antibody responses to retinal antigens in acute ocular toxoplasmosis // Am. J. Ophthalmol. 1982.- Vol. 93, №2. - P.224-231.

57. Adamus G., Schmied J.L., Hargrave P.A., Arendt A., Moticka E.J. Induction of experimental autoimmune uveitis with rhodopsin synthetic peptides in Lewis rats // Curr. Eye Res. 1992.- Vol. 11, №7.- P.657-667.

58. Aronson S.B., McMaster PRB: Passive transfer of experimental allergic uveitis // Arch. Ophthalmol. 1971.- V.86.- P.557.

59. Beneski D.A., Donoso L.A., Edelberg K.E., Magargal L.E., Folberg R., Merryman C. Human retinal S-antigen. Isolation, purification, and characterization // Invest. Ophthalm. Vis. Sci. 1984.- Vol.25.- P.686-690.

60. Blair N.P. Dodge J.T. Schmidt G.M. Reumatogenous retinal detachment in labrador retrievers. 2. Proliferative Vitreoretinopathy // Arch. Ophthalmol.-1985.- Vol.103.- P.848-854.

61. Borst D.E., Redmond T.M., Elser J.E. Interphotoreceptor retinoid-binding protein. Gene characterization, protein repeat structure, and its evolution //J.Biol. Chem.- 1989.-Vol.264.-P.l 115-1123.

62. Carpenter A.B. Enzyme-linked immunoassays // Manual of Clinical Laboratory Immunology. -1992.- 4th ed. In Rose N.R., Conway de Macario, Fahey J.L., Friedman H., Penn G.M., p2-9, American Societ for Microbiology, Washington, D.C.

63. Caspi R.R., Roberge F.G., McAllister C.G. et al. T-cell lines mediating experimental autoimmune uveoretinitis (EAU) in the rat // J. Immunol. 1986.1. Vol.136.- P.928-933.

64. Caspi R.R.: Experimantal autoimmune uveoretinitis rat and mouse I I Autoummune disease models: a guidebook.- 1994. - P. 262-265.

65. Chan C.C., Nussenblatt R.B., Kim M.K. et al. Immunopathology of ocular onchocerciasis. Antiretinal antibodies in serum and ocular fluids // J. Ophthalm. 1987.- Vol.94. - P.439-443.

66. Chan C.C., Palestine A.G., Nussenblatt R.B. et al. Antiretinal autoantibodies in Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Behcet's disease and sympathetic ophthalmia // J. Ophthalmol. 1985. -Vol.92. - P. 1025.

67. Chant S.M., Heckenlively J.R., Meyers-Elliot R.A. // Autoimmunity in hereditary retinal degeneration. Basic studies//Br. J. Ophthalmol. 1985.-Vol.69.-P. 19-24.

68. Charles P.J., Maini R.N. Enzime-linked immunosorbent assay in the rheymatological laboratory // P. 1-23. In W.J. Van Venrooij and R.N.Maini, Manual of Biological Markers of Disease. Kluwer Academic Publishers, Norwell, Mass.

69. De Smet M.D., Bitar G., Roberge F. G. et al. Human S-antigen: presrnce of multiple immunogenic and immunopathogenic sites in the Lewis rat // J. Autoimmun. 1993.- Vol.6.- P.587-599.

70. DeKozak Y., Youn W.B. Bogossian M., Faure J.P. Humoral and cellular immunity to retinal antigens in guinea pigs // Mod. Probl. Ophthalmol. 1976.-Vol.16.- P.51.

71. Doekes G., Gerritsen M.J., Kijlstra A. Immunoreactivity and cross-reactivity of human and bovine retinal S-antigen // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.-1989.- Vol.30, №6.- P.l 169-1173.

72. Doekes G., Luyendijk L., Gerritsen M.J., Kijlstra A. Anti-retinal S-antigen antibodies in human sera: a comparison of reactivity in ELISA with human or bovine S-antigen // Int Ophthalmol. 1992. - Vol. 16, №3. - P. 147-152.

73. Doekes G., van der Gaag R., Rothova A., van Kooyk Y., Broersma I., Zaal J., DijKman G., Fortuin M.E., Baarsma J.S., Kijlstra A. Hummoral and cellular immune responsiveness to human S-antigen in uveitis // Curr. Eye Res. -1987,- Vol.6.-P.909-919.

74. Donoso L.A. Merryman C.F. Sery T.W.,Shinohara T., Dietzschold B., Smith A., Kalsow C.M. Characterization of a pathogenic epitope which mediates experimental autoimmune uveitis and pinealitis in Lewis rats // Curr. Eye Res. -1987.- Vol.6.- P.l 151.

75. Donoso L.A. Merryman C.F. Shinohara T., Sery T.W., Smith A. S-antigen: Experimental autoimmune uveitis following immunization with a small synthetic peptide //Arch. Ophthalmol. 1987.- Vol.165- P.838.

76. Donoso L.A., Merryman C.F., Sery T. et al. Human interstitial retinoid binding protein. A potent uveitopathogenic agent for the induction of experimental autoimmune uveitis // J. Immunol. 1989.- Vol.143. - P. 79-83.

77. Donoso L.A., Merryman C.F., Shinohara T., Dietzschold., Wistow G., Graft C, Morley W Identification of the MabA9-C6 monoclonal antibody binding site and the uveitopathogenic sites // Curr. Eye Res. 1986.- Vol.5.- P.995.

78. Dorey C. and Faure J.P. Isolement et caracterisation partielle dun antigene retinien responsable de luveo-retinite autoimmune experimentale // Ann. Immunol. 1977. - Vol.128. - P.229.

79. Dorey C., Cozette J., Faure J.P. A simple and rapid method for isolation of retinal S antigen // Ophthalmic Res. 1982,- Vol.14.- P.249-255.

80. Dua H.S., Lee R.H., Lolley R.N. et al. Induction of experimental autoimmune uveitis by the retinal photoreceptor cell protein, phosducin // Curr. Eye Res. 1992.- Vol.11.- P. 107-111.

81. Dumonde D.C., Kasp-Grochowska E., Bauga J.P. et al. Autoimmune mechanisms in inflammatory eye disease//Trans. Ophthalmol. Soc. UK. 1985.-Vol.104.- P.232-238.

82. Faure J.P.: Autoimmunity and the retina // Curr. Top Eye Res.- 1980.-Vol.2.- P.215.

83. Forrester J., Stoff D., Hercus K. Naturally occuring antibodies to bovine and human retinal S-antigen: a comparison between uveitis patients and healthy volunteers // Br. J.Ophthalmol. 1989.- Vol.73.- P.155-159.

84. Froebel K.S., Armstrong S.S., Cliffe A.M., Urbaniak S.J., Forrester J.V. An investigation of the general immune status and specific immune responsiveness to retinal S-antigen in patirnts with chronic posterior uveitis // Eye 1989. Vol. 3.- P.263-270.

85. Garcia H., Dante C., Calderon G. et al. Production of specific retinal S-antigen antibodies in patients with retinal detachment // Graefs Arch. Clin. Exp. Ophthalmol.- 1988.- Vol.226, № 5.- P.428-430.

86. Gery I., Chanaud N.P. Ill, Anglade E. Recoverin is highly uveitogenic in Lewis rats // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.- 1994.- Vol.35. P.3342-3345.

87. Gery I., Mochizuki M., Nussenblatt R.B. Retinal specific antigens and immunopathogenic processes they provoke // Prog. Ret. Res.- 1986.- Vol.75.-P.5.

88. Gosling J.P. A decade of development in immunoassay methodology // Clin. Chem. V.36.- P.1408-1427.

89. Gregerson D.S., Abrahams I.W., Puclin J.E. Serum antibody responses to bovine retinal S-antigen and rod outer segments in proliferative diabetic retinopathy before and after argon laser photocoagulation // Ophthalmology. -1982.- Vol.89, №7. P.767-771.

90. Gregerson D.S., Abrahams I.W., Thirkill C.E. Serum antibody levels of uveitis patients to bovine retinal antigens. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1981 .Vol. 21, №5. - P.669-680.

91. Gregerson D.S., Merryman C.F., Obritsch W.F., Donoso L.A. Identification of a potent new pathogenic site in human retinal S-antigen which induces experimental autoimmune uveoretinitis in LEW rats // Cell Immunol. -1990.- Vol.128.- P.209.

92. Grisanti S., Heimann K., Wiedemann P. // Immune response to specific molecules of the retina in proliferative vitreoretinal disoders // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1994,- Vol. 232, №5. - P.302-307.

93. Gupta V., Arora S., Gupta A., Ram J., Bambery P., Sehgal S. Management of presumed intraocular tuberculosis: possible role of the polymerase chain reaction // Acta Ophthalmol Scand 1998,- Vol. 76, №6. - P.679-682.

94. Hamzaoui K., Boussen E., Gorgi Y., Ouertani A., Ayed K. Molecular mimicry between S-antigen and viral peptides // Tunis Med.- 1999.- Vol.77, №5. P. 259-263.

95. Heckenlively J.R.,Solish A.M., Chant S.M., Meyers-Elliot R.A. // Autoimmunity in hereditary retinal degeniration. Klinical studies: antiretinal antibodies and fluorescein angiogram findings // Br. J. Ophthalm. 1985.- Vol.69.-P.758-764.

96. Hirose S.,Kuwabara T., Nussenblatt R.B. et al. Uveitis induced in primates by interphotoreceptor retinoid-binding protein // Arch. Ophthalmol.-1989.- Vol.104.- P. 1698-1702.

97. Ishihara M., Ohno S. Ocular tuberculosis // Nippon Rinsho. 1998. -Vol.56, №12.-P.3157-3161.

98. Kemeny D.M., Challacombe. ELISA and Other Solid Phase Immunoassays. Theoretical and Practical Aspects. 1988. John Wiley & Sons, Ltd., Chichester, United Kindom.

99. Klass M., Bohnke M., Damms T., Knospe V. Humoral immune response to retinal S-antigen in patients with uveitis // Fortschr Ophthalmol. -1991.- Vol. 88, №5.- P.450-454.

100. Kotake S., Redmond T.M., Wiggert B. et al. Unusual immunologic properties of the uveitogenic interphotoreceptor retinoid-binding protein derived peptide R23 // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1991.- Vol.146.- P.2995-3001.

101. Kovachev D., Tzanev D., Pencheva D. Modified method for isolation of retinal S-antigen sutable for ELISA diagnosis of uveoretinitis // Acta. med. Bulg. 1990.- Vol.17, №2.- P.143-152.

102. Kruit P.J., van der Gaag R., Broersma L., Kijlstra A. Autoimmunity against corneal antigens: Isolation of a soluble 54 kD corneal epithelium antigen. // Curr. Eye Res. 1986.- Vol.5.- P.313.

103. Lee R.H., Fowler A., McGinnis J.F. et al. Amino-acid and cDNA sequence of bovine phosducin, a soluble phosphoprotein from photoreceptor cells //J. Biol. Chem. 1990.- Vol.265.- P. 15867-15873.

104. Lerner M.P., Donoso L.A., Nordquist R.E., Cunningham M.W. Immunological mimicry between retinal S-antigen and group A streptococcal M proteins // Autoimmunity 1995.- Vol.22, №2. - P.95-106.

105. Merryman C.F., Donoso L.A., Zhang X., Heber-Katz E., Gregerson D.S. Characterization of new, potent immunopathogenic epitope in S-antigen that elicits T cells expressing Vb8 and Val-like genes // J.Immunol. 1991.-Vol.146.- P.75.

106. Misiuk-Hojlo M, Ruiz-Moreno J., Thillaye B., de Kozak Y. Experimental autoimmune uveitis and retinitis induced by S-antigen immunization // Klin Oczna. 1993.- Vol. 95, №3-4. - P.101-104.

107. Mok C.C., Waley S.G. Structural studies on lens protein // Biochem. J. -1967.- Vol.104.- P. 128-134.

108. Murray P.R., Barons E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Yolken R.N. Manual of Clinical Microbiology, 6th ed. ASM Press, Washington, D.C.

109. Nityanand S., Singh V.K., Shinohara T., Paul A.K., Singh V., Agarval P.K., Agarval S.S. Cellular immune response of patients with uveitis to peptide

110. M, a retinal S-antigen fragment//J. Clin. Immunol. -1993.-Vol. 13, №5. -P.352-358.

111. Nagata K., Buppodom P., Matsuaga T., Ishimatsu M. Purification and characterization of seven distinct forms of liver microssomal cytochrome P 450 from untreated and inducer-treated male rats // J. Biochem. 1985.- Vol.97.- P. 17551766.

112. Nussenblatt R.B., Kuwabara T., DeMonasterio F.M., Wacker W.B. S-antigen uveitis in primates: A new model for human disease // Arch Ophthalmol. -1981.-Vol.99.-P. 1090.

113. Nussenblatt R.B., Palestine A.G., El-Saied M. et al. Long term antigen specific and non-specific T-cell lines and clones in uveitis // Curr. Eye Res. 1984.-Vol.3.- P.299-305.

114. Nuzzi R., Amerio G. Uveitis and systemic diseases // Minerva Med. -1992.- Vol.83, №5. P.239-248.

115. OMeruch M. Enryme immbnoloassay in clinical chemistry. Present atatus and frends. J. Clin. chem. biochem., 1980. - №18. -P. 197-208.

116. Pfister C., Chabre M., Plouet J., Tuyen V.V., DeKozak Y., Faure J.P., Kuhn H.: Retinal S-antigen identified as the 48K protein regulating light-dependent phosphodiesterase in rods // Science 1985.- Vol.228.- P.891-893.

117. Ravindranath M.H., Ravindranath R.M.H., Morton D.L., Graves M.C. Factors affecting the fine specificity and sensitivity of serum antiganglioside antibodies in ELISA // J. Immunol. Methods. 1994,- Vol.169.- P.257-272.

118. Regillo C.D., Shields C.L., Shields J.A., Eagle R.C., Lehr J. Ocular tuberculosis // JAMA 1991. - Vol.266, №11.- P. 1490.

119. Reizenstein E., Hallander H.O., Blackwelder W.C., Kuhn I., Ljungman M., Mollby R. Comparison of five calculation modes for antibody ELISAprocedures using pertussis serology as a model I I J. Immunol. Methods. Vol. 183.-P.279-290.

120. Ren P., Yan X., Wang S. Lymphocyte proliferation response to S antigen in patients with uveitis and optic neuritis // Yen Ko Hsueh Pao.- 1995.-Vol.l 1, №3.- P.120-123.

121. Rose N.R., Macario E.C., Folds J.D., Lane H.C., Nakamura R.M. Manual of Clinical Laboratory Immunology // Fifth edition. 1997.- Washington, USA

122. Rozenszajn L.A., Muellenberg-Coulombre C., Gery I. et al. Induction of experimental autoimmune uveoretinitis (EAU) in rats by T cell lines // J. Immunology 1986.- Vol.57.- P.559-565.

123. Sakai J. Immune complexes in experimental autoimmune uveoretinitis // Nippon Ganka Gakkai Zassbi.- 1983.- Vol.87.- P. 1288-1299.

124. Salinas-Carmona M.C., Nussenblatt R.B., Gery I. Experimental autoimmune uveitis in the athimic nude rat // Eur. J. Immunol. 1982.- Vol.25.-P.481-484.

125. Sanui H., Redmond T.M., Kotake S. et al. Identification of an immunodominant and highly imunopathogenic determinant in the retinal interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP) // J. Exp. Med. 1989.-Vol.169. - P. 1947-1960.

126. Shinohara T., Dietzchold B., Craft C.M., Wistow G., Early J.J., Donoso L.A., Horwitz J., Tao R. Primary and secondary structure of bovine retinal S-antigen (48-kDa protein) // Proc. Natl. Acad. Sci. 1987.- Vol.84.- P.6975-6979.

127. Shinohara T., Donoso L., Wistow G., Dietzchold B., Craft C.,Tao R. The structure of bovine retinal S-antigen: Sequence analysis and identification ofmonoclonal antibody epitopes and uveitogenic site// Jpn J. Ophthalmol.-1987.-Vol.31-P. 197.

128. Singh V.K., Kalra H.K., Yamaki K., Abe T., Donoso L.A., Shinohara T. Molecular mimicry between a uveitopathogenic site of S-antigen and viral peptides: Induction of experimental autoimmune uveitis in Lewis rats 11 J. Immunol. 1990.- Vol.144.- P. 1282.

129. Sun X., Zhang C. The purification and analysis of S-antigen in rabbit retina // Chung Hua Yen Ko Tsa Chih. 1996.- Vol.32, №1. - P.45-48.

130. Sych F.J., Strobel J. Experiences with an isolation method for retinal S-antigen and interphotoreceptor retinoid binding protein // Ophthalmologe. -1996.-Vol.93, №6. P.732-738.

131. Takakura S., Tanaka E., Kimoto T.,Watanabe I., Matsumoto H., Tsuyuguchi K., Niimi A., Suzuki K., Amitani R., Kuze F. A case of miliary tuberculosis with brain tuberculoma, following intraocular tuberculosis // Kekkaku. 1998.- Vol.73, №10,- P.591-597.

132. Tijssen P. Practice and Theory of Enzyme Immunoassays. Elsevier Science Publishers, Amsterdam. 1985.

133. Tijssen P., Adam A. Ensime-linked immunosorbent assays and developments in techniques using latex beads // Curr. Opin. Immunol.- Vol.3.-P.233-237.

134. Uusitalo R.J, Stjernschanz J., Mahlberg K. Serum antibody level to S-antigen in children with chronic uveitis // Br. J. Ophthalmol. 1985.- Vol.69.-P.212-216.

135. Uusitalo R.J., Uusitalo H., Mahlberg K. Anterior uveitis in children. An analysis of 75 cases with special reference to retinal anti-S antibodies // Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 1991. - Vol.229, №1. - P.l-7.

136. Van der Gaag R., Broersma L., Rothova A., Baarsma J.S., Kijlstra A. Immunity to a corneal antigen in Fuch's heterochromic cyclitis patients // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1989,- Vol.30.- P.443-448.

137. Wacker W.B. Isolation of retinal S-antigen and its role in experimental ocular autoimmunity // New Dir. in Ophthal. Res.-1981.-P.5

138. Westgard J.O., Klee G.G. Quality management, p.548-592. In C.A.Burtis and E.R.Ashwood, Tietz Textbook of Clinicsl Chemistry, 2nd ed. The W. B.Saunders Co., Philadelphia.

139. Whitcup S.M., Vistica B.P., Milam A.H., Nussenblatt R.B., Gery I. Recoverin-associated retinopathy: a clinically and immunologically distinctive disease // Am. J. Ophthalmol. 1998.- Vol. 126, №2.- P.230-237.108

140. Whittle R.M., Wallace G.R., Whiston R.A., Dumonde D.C., Stanford M.R. Human antiretinal antibodies in toxoplasma retinochoroiditis // Br. J. Ophthalmol. 1998.- Vol.82, №9. - P. 1017-1021.

141. Wiggert B., Chader G.J. Monkey interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP): isolation, characterization, and synthesis // The interphotoreceptor matrix in health and disease, New York, 1985.

142. Xie C.F. Humoral and cellular immune responses to retinal S-antigen in uveitis patients // Chung Hua Yen Ko Tsa Chih. 1993.- Vol.29, №3. P. 131134.

143. Xie C., Yang P., Huang X. Serum antibodies to bovine retinal S-antigen in the patients with uveitis and healthy subjects // Yen Ko Hsueh Pao -1990.-Vol.6, №3-4. P.73-75.

144. Yamaki K., Takahashi Y., Sakuragi S., Matsubara K. Molekular cloning of the S-antigen cDNA from bovine retina // Biochem. Biophis. Res. Commun. 1987.- Vol. 142. - P.904.

145. Zaal J., Doekes J.,Breebaart A.C., Kijlstra A. Quantitative determination of S-antigen in human ocular tissues, aqueous humor and serum // Curr. Eye Res.- 1987.- Vol.6.- P.909.