Триптофановая фосфоресценция при комнатной температуре и структурное состояние белков и биологических мембран тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Ермолаев, Юрий Сергеевич

• Ермолаев, Юрий Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ермолаев, Юрий Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

ШАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Кинетическая модель активации и дезактивации триплетного состояния индольного хромофора

1.2. Фосфоресценция триптофана и его производных

1.3. Низкотемпературная фосфоресценция белков

1.4. Температурная' зависимость триптофановой фосфоресценции белков.

1.5. Общая характеристика внутримолекулярной подвижности белков.

1.6. Динамическая структура биологических мембран

1.7. Триптофановая фосфоресценция при комнатной температуре (ТФКТ) как метод изучения структурно-динамического состояния белков и биологических мембран (постановка вопроса)

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И 1ЖГ0ДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Модельнаястема: триптофанеодержащая плёнка поливиниловогоирта, модифицируемая растворителямиразной диэлектрической.проницаемостью

2.2. Белки в растворе, порошкообразные белки и белковые плёнки

2.3. Животные клетки, микроорганизмы, субклеточные структуры

2.4. Мембраны эритроцитов человека

2.5. Удаление кислорода из исследуемых образцов

2.6. Статистическая обработка экспериментальных данных.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА И СОЗДАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОЙ АВТОМАТИЗИРОВАННОЙ УСТАНОВКИ ДЛЯ РЕГИСТРАЦИИ ПАРАМЕТРОВ ТФКТ

3.1. Функциональные блоки чувствительного автоматизированного фосфориметра

3.2. Математическая модель для обработки результатов фосфоресцентных измерений.

3.3. Аналоговое и цифровое преобразование получаемой информации

ГЛАВА 4. ФОСФОРЕСЦЕНТНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ БЕЛКОВ,

БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕМБРАН И КЛЕТОК.

4.1. Белки в растворе и конденсированном состоянии

4.2. Нативные биологические мембраны и клетки

4.3. Мембранные белки - источник фосфоресцентного сигнала клетки

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТРИПЛЕТОВ ИНД0ЛБН0Г0 ХРОМОФОРА С МОЛЕКУЛЯРНЫМ ОКРУЖЕНИЕМ ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ.

5.1. Триптофансодержащая ллёнка поливинилового спирта как модель при изучении ТФКТ белков

5.2. Влияние кёсткости и полярности микроокружения индольного хромофора на параметры ТФКТ

5.3. О механизме безызлучательной дезактивации энергии триплетного состояния индольного хромофора.

глава 6. информационные возможности т ф к т в исследованиях структурно-динашческого состояния биологических мембран. ко

6.1. рН-зависимые изменения структуры эритроцитарных мембран . IOI

6.2. Влияние гуанидинхлорида на структурно-динамическое состояние мембранной матрицы

6.3. Структурная реакция мембран эритроцитов на мягкую ультразвуковую обработку

6.4. Изменение структуры эритроцитарных мембран при их взаимодействии с грулпослецифичными антителами выводы. литература.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Триптофановая фосфоресценция при комнатной температуре и структурное состояние белков и биологических мембран»

Для исследования конформационной подвижности белковых макромолекул и тестирования структурных перестроек биологических мембран успешно используется метод собственной белковой флуоресценции /12, 31, 66, 115/. Метод собственной белковой фосфоресценции не получил широкого распространения. Это связано с низкой чувствительностью параметров низкотемпературной триптофановой фосфоресценции к изменениям структурного состояния макромолекул /66/, что, вероятно, обусловлено унификацией динамических свойств микроокружения естественных белковых хромофоров при охлаждении образцов до температуры жидкого азота.

Триптофановую фосфоресценцию при комнатной температуре (ТФКТ) впервые наблюдали у белков в конденсированном состоянии - кератина шерсти, фиброина шёлка, казеина молока и белковых плёнок /29, 30/. Позднее /90/ свойства триплетного состояния триптофанилов в сухом и увлажнённом препаратах кератина шерсти были исследованы при комнатной температуре методами фосфоресценции и флеш-фотолиза. Кроме того, в работе /127/ обнаружена и изучена миллисекундная ТФКТ у алко-гольдегидрогеназы из печени лошади и щелочной фосфатазы Е. СО li в растворе. Перечисленными публикациями исчерпывались сведения о фосфоресценции при комнатной температуре белков к моменту начала наших исследований /48/, а данные о ТФКТ нативных биологических мембран и клеток в суспензии вообще отсутствовали.

Вместе с тем, в последнее время для изучения структурно-динамических свойств белков и биологических мембран развивается метод, основанный на явлении фосфоресценции вводимых в исследуемые объекты триплетных меток и зондов - искусственных хромофоров с высоким квантовым выходом фосфоресценции и оптимальным временем жизни /38, 46, 99/. Благодаря большой длительности жизни триплетов, этот метод позволяет получать информацию о медленных, микро- и миллисекундных процессах, которые могут быть сопряжены с осуществлением каталитических, рецепторных и транспортных функций белков и мембран. В этой связи, заманчиво использовать в качестве триплетной метки естественный индольный хромофор белка, который не возмущает нативную структуру макромолекулы и позволяет рассчитывать на получение информации о динамическом состоянии внутренних, недоступных для "чужих" триплетных меток или зондов, областей биологических мембран.

Таким образом, представляется важным оценить возможность применения метода триптофановой фосфоресценции при комнатной температуре для изучения конформационной подвижности белковых макромолекул и структурной лабильности биологических мембран. С этой целью в данной работе систематически исследовано явление ТФКТ белков в растворе и в конденсированном состоянии (порошки, плёнки), биологических мембран и клеток различного происхождения.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Ермолаев, Юрий Сергеевич

ВЫВОДЫ

С помощью созданной нами высокочувствительной автоматизированной установки, позволяющей регистрировать спектральные и кинетические параметры миллисекундного послесвечения с квантовым выходом порядка 10"®, систематически изучено явление триптофановой фосфоресценции при комнатной температуре (ТФКТ) белков, нативных биологических мембран й клеток в бескислородной среде.

1. Установлено, что у белков в растворе, как правило, миллисекундная ТФКТ отсутствует. Белки в конденсированном состоянии (порошки и пленки) фосфоресцируют с временем жизни

Л 9 ) 0,1-1 с и квантовым выходом (В) 10" -10". Независимо от исходного агрегатного состояния белков разрыхление структуры макромолекулы при денатурации сопровождается резким уменьшением значений Z и В.

2. При исследовании модельной системы - триптофана в пленке поливинилового спирта - показано, что уменьшение жесткости микроокружения хромофора путем пластификации (размягчения) полимерной матрицы растворителями с различной диэлектрической проницаемостью приводит к уменьшению значений параметров t й В ТФКТ. Это указывает на решающую роль жесткости (молекулярной подвижности), но не полярности микроокружения хромофора в механизмах тушения триптофановой фосфоресценции.

3. Результаты изучения нативных и денатурированных белков в различном агрегатном состоянии свидетельствуют в польI зу того, что в бескислородной среде наиболее вероятен механизм тушения ТФКТ посредством размена электронной энергии триплетов в колебательную энергию основного состояния по типу сильной вибронной связи. Возможность осуществления указанного механизма зависит от уровня броуновской подвижности молекулярного окружения хромофора.

4. Обнаружена триптофановая фосфоресценция при комнатной температуре суспензий интактных животных клеток, микроорганизмов, органелл и изолированных плазматических мембран. ТФКТ клеток, органелл и мембран характеризуется значением £ по

Т А рядка 10 с, низким значением В - 10 -10 и спектральными максимумами при 410-413, 437-440 и '458-465 нм.

5. Показано, что миллисекундная ТФКТ гепатоцитов, лимфоцитов и дрожжевых клеток определяется белками, входящими в состав субклеточных мембранных структур (ядра, митохондрии, плазматические мембраны), а не растворимыми белками цитоплазмы, кариоплазмы и митохондриального матрикса. Это позволяет изучать мембранные структуры непосредственно в клетке без их выделения.

6. Установлено, что структурные перестройки мембран эритроцитов под действием рН среды, гуанидинхлорида, ультразвука, грулпоспецифичных антител сопровождаются изменением X , В, а, в некоторых случаях, и спектральных характеристик ТФКТ. Соответствие результатов исследования перестроек эритроцитарных мембран фосфоресцентным и другими независимыми структурно-чувствительными методами свидетельствует о пригодности метода ТФКТ для анализа структурных перестроек биологических мембран.

7. Полученные в настоящей работе данные в совокупности с литературными говорят о том, что ТТ и В ТФКТ отражают структурно-динамическое состояние молекулярного окружения хромофора. Это позволяет использовать метод ТФКТ для тестирования уровня равновесной подвижности структуры белков в растворе и в составе биологических мембран.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ермолаев, Юрий Сергеевич, 1985 год

1. Абатуров J1.Bv, Молчанова Т.И. Динамическая структура белков по данным водородного обмена и лротеолитической деградации. - В кн.: Равновесная динамика нативной структуры белка. Пущино, 1977, с.5-23.

2. Абатуров JI.B., Лебедев Ю.О., Носова Н.Г. Динамическая структура глюбулярных белков: конформационная жесткость и флуктуационная подвижность. Мол.биол., 1983, т.17, № 3, с.543-568.

3. Аксенов С.И. Исследование конформационной подвижности белков в водных средах методом ядерного магнитного резонанса, В кн; Равновесная динамика нативной структуры белков. Пущино, 1977, с.42-59.

4. Аксенов С.И. Исследование динамической структуры глобулярных белков импульсными методами ядерного магнитного резонанса. Мол.биол., 1983, т.17, Л> 3, с.475-483.

5. Алексеенко А.Г., Коломбет В.А., Стародуб Г.И. Применение прецизионных аналоговых ИС. М., Радио и связь, 1981, 223 с.

6. Баренбойм Г.М. Короткоживущая фосфоресценция DL -триптофана в замороженных растворах. Биофизика, 1962, т.7, вып.2, с.227-232.

7. Бахшиев И.Г. Спектроскопия межмолекулярных взаимодействий.-Л., Наука, 1972, 263 с.

8. Брагинская Ф.И., Гендель Л.Я., Зорина О.М., Круглякова К.Е., Садыхова С,Х., Сершева О.А. Акустическое исследование мембран эритроцитов. Акустич.ж., 1979, т.25, Js 6, с. 836-843.

9. Бурштейн Э.А. рушение-флуоресценции белков. I.Принципы метода. Растворы триптофана, тирозина и денатурированных белков. Биофизика, 1968, т.13, выл.З, с.433-442.

10. Бурштейн Э.А, Люминесценция белковых хромофоров (модельные исследования). В кн.: Биофизика, М., ВИНИТИ, 1976, т.7, 213 с. (Итоги науки и техники).

11. Бурштейн Э.А. Собственная люминесценция белков (Природаи применение). В кн.: Биофизика, М., ВИНИТИ, 1977, т.7, 190 с. (Итоги науки и техники).

12. Бурштейн Э.А. Собственная люминесценция белка как метод изучения быстрой структурной динамики. Мол.биол., 1983, т.17, $ 3, с.455-467.

13. Владимиров Ю.А., Бурштейн Э.А. Спектры люминесценции ароматических аминокислот и белков. Биофизика, I960, т.5, Ш 4, с.385-392.

14. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков. -М., Наука, 1965, 232 с.

15. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М., Наука, 1980, 320 с.

16. Волков Е.И., Чернавский Д.С. Биологические следствия физической организации плазматических мембран нормальных иопухолевых клеток. Изв.АН СССР, 1981, сер.биол., Ж, с.29-43.

17. Волотовский И.Д., Конев С.В., Черницкий Е.А. Исследование кинетики низкотемпературного послесвечения триптофана и белков. Биофизика, 1967, т.12, J6 3, с.421-426.

18. Воскресенский П.И. Техника лабораторных работ. М., Химия, 1973, 717 с.

19. Гольданский В.И., Крупянский Ю.Ф., Фролов Е.Н. Роль кон-формационных подсостояний в реакционной способности белковых молекул. Мол.биол., 1983, т.17, с.532-542.

20. Данн М., Мэдди Э. Методы анализа мембранных белков. В кн.: Биохимическое исследование мембран, 1979, М., Мир, с. 176-226.

21. Демченко А.П. Равновесная внутримолекулярная подвижность в белках. Укр.биохим.журн., 1981, т.53, № 4, с.114-128.

22. Дунина-Барковская А.Я., Миттельман А.А. Выделение первичной культуры гепатоцитов мышей. Цитология, 1981, т.23, Ш 8, с.844-947.

23. Ермолаев В.Л. Люминесценция простых производных бензола. I. Ароматические амины. Оптика и спектр., 1961, т.II, вып.4, с.492-497.

24. Ермолаев В.Л., Бодунов Е.Н., Свешникова Е.Б., Шахвердов Т.А. Безызлучательный перенос энергии электронного возбуждения. Л., Наука, 1977, 311 с.

25. Зотиков А.А., Поляков Я.С. Исследование фосфоресценции клеток различных типов с помощью фосфоресцентного микроскопа. Изв.АН СССР, 1975, сер.биол., й 2, с.297-300.

26. Капрельянц А.С. Динамические белковые ансамбли в биологических мембранах. Биохимия, 1982, т.47, № 6, с.883-895.

27. Катибников М.А., Конев С.В. Длительное послесвечение белков и аминокислот при комнатной температуре. П. Спектры послесвечения и спектры возбуждения послесвечения белков.-Биофизика, 1962, т.7, вып.2, с.150-153.

28. Конев С.В., Катибников М.А. Длительное послесвечение белков и аминокислот при комнатной температуре. I. Кинетика послесвечения белков и аминокислот. Биофизика, 1961,т.6, вып.6, с.638-644.

29. Конев С.В. Электронно-возбужденные состояния биополимеров. -Минск, Наука и техника, 1965, 186 с.

30. Конев С.В,, Мажуль В.М., Черницкий Е.А. О существовании форм нативного белка с различной степенью подвижности радикалов. Докл.АН СССР, 1968, т.183, № 5, с.1201-1204.

31. Конев С.В., Аксенцев СЛ., Черницкий Е.А. Кооперативные переходы белков в клетке. Шнек, Наука и техника, 1970, 204 с.

32. Конев С.В., Слобожанина Е.И., Черницкий Е.А. Кооперативные структурные перестройки эритроцитарных мембран при взаимодействии их с гормонами. - Докл. АН СССР, 1973, т.208, & I, с.239-242.

33. Конев С.В., Мажуль В.М. Межклеточные контакты. Шнек, Наука и техника, 1977, 312 с.

34. Конев С.В., Волотовский И.Д. Структурные перестройки биологических мембран. В кн.: Биомембрана. Структура, функции, методы исследования. Рига, Зинатне, 1977, с.42-76.

35. Котельников А.И., Фогель В.Р., Меклер В.М., Быстряк И.М., Лихтенштейн Г.И. Трияленгные метки в исследовании белков и мембран. В кн.: У Всесоюзная конференция по спектроскопии биополимеров. Тезисы докладов. Харьков, 1984, с.118-119.

36. Кузнецова И.М., Т^роверов К.К. Поляризация собственной флуоресценции белков. Ш. Внутримолекулярная подвижность триптофановых остатков. Мол.биол., 1983, т.17, № 4, с.741-754.

37. Куницин В.Г., Остравская Т.А., Феденков В.И. Некоторые механизмы структурных изменений эритроцитарных мембран при действии сдвига рН. Цитология, 1979, т.21, $ 2, с.207-210.

38. Лев А,А. Ионная избирательность клеточных мембран. Л., Наука, 1975, 323 с.

39. Ленинджер А. Биохимия. М., Мир, 1974, 957 с.

40. Лихтенштейн Г.И., Трошкина Т.В., Ахмедов Ю.Д., Шувалов В.Ф. О возможности определения энергетических параметров локальных конформационных переходов в белках методом парамагнитных меток. Мол.биол., 1969, т.З, й 3, с.413-420.

41. Лихтенштейн Г.И. Метод спиновых меток в молекулярной биологии.- М., Наука, 1974, 256 с.

42. Лихтенштейн Г.И., Котельников А.И. Изучение флуктуационной внутримолекулярной подвижности белков методом физических меток. Мол.биол., 1983, т.17, № 3, с.505-517.

43. Ляхнович Г.В. Исследование взаимодействия нормальных групповых антител крови с мембранами эритроцитов человека. -Автореф.канд.дисс., Институт фотобиологии АН БССР, Шнек, 1982.

44. Мажуль В.М., Ермолаев Ю.С., Бобров В.А., Никольская В.П., Конев С.В. Аб канфармацыйнай адчувальнасц1 параметрау фас-фарэсцэнцы1 пры хатняй тэмпературы бялкоу, мембран и кле-так. Весц1 АН БССР, сер.биол.наук, 1976, № 6, с.51-56.

45. Мажуль В.М., Ермолаев Ю.С., Конев С.В. Триптофановая фосфоресценция при комнатной температуре новый метод изучения структурного состояния биологических мембран и белков в клетке. - Ж.лрикл.спектр., 1980, т.32, 5, с.903-907.

46. Мажуль В.М., Конев С.В., Ермолаев Ю.С., Мартынова М.А., Никольская В,П., Прокопова Ж.В. Исследование равновесной динамики структуры белков клетки методом триптофановойфосфоресценции при комнатной температуре. Биофизика, 1983, т.28, вып.6, с.980-984.

47. Макуль В.М., Конев С,В., Ермолаев Ю.С., Слепцов Н.Д., Доманский В.П., Калер Г.В. Автоматизированная система для регистрации параметров триптофановой фосфоресценции при комнатной температуре (ТФКТ) клеток и их компонентов.-

48. В кн.: Автоматизация цитологических исследований, Киев, Наукова думка, 1985, с.88-94.

49. Мосолова И.М., Горская И.А., Шольц К.Ф., Котельникова А.В. Выделение интактных митохондрий из печени крыс. В кн.: Методы современной биохимии. М., Наука, 1975, с.45-47.

50. Надев. K.Hi 0 распределении атомной плотности в белковых глобулах. -.Биофизика, 1978, т.23, №4, с.602-604.

51. Нисенбаум Г.Д., Ляхнович Г.В., Конев С.В. Структурный переход в мембранах эритроцитов человека, инициируемый группослецифическими антителами, Биофизика, 1978, т.23, вып.4, с.641-644.

52. Островский Д.Н. Молекулярная организация биологических мембран. -В кн.: Биомембраны. Структура, функции, методы исследования. Рига: Зинатне, 1977, с.7-27.

53. Паркер С. Фотолюминесценция растворов. М.: Мир, 1972. - 510 с.

54. Пермяков Е.А., Бусел Е.П., Бурштейн Э.А. Люминесценция и состояние производных индола в замороженных водно-солевых растворах. Ж. структ. химии, 1971, т.12, № I, с.79-86.

55. Пермяков Е.А. Люминесцентные исследования динамики структуры белка при низких температурах. Дисс. канд., ИБФ АН СССР, Пущино, 1975.

56. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск, Вышэй-шая школа, 1973, 320 с.

57. Самаль А.Б., Хмара Н.Ф., Черенкевич G.H. рН-зависимые конформационные изменения в белках тромбоцитов. Цитология, 1983, т.25, №7, с.845-848.

58. Салежинский И.И. Хемилюминесценция, индуцированная излучениями, и ее применение для изучения фото и радиационных превращений белков и других объектов. Дисс. докт., Институт химической физики АН СССР, Москва, 1980.

59. Теренин А.Н. Фотоника молекул красителей. JI., Наука, 1967, 318 с.

60. Финин B.C. Исследование структурно-функциональных перестроек биологических мембран, индуцируемых взаимодействием некоторых физиологически активных соединений с белками. Дисс. канд., Институт фотобиологии АН БССР, Минск, 1979.

61. Фролов Е.Н., Мокрушин А.Д., Лихтенштейн Г.И., Труханов В.А., Гольданский В.И. Исследование динамической структуры белков методом гамма-резонансн&х меток. -Докл. АН ' СССР, 1973, т.212, й I, 6.165-168.

62. Черницкий Е.А., Волотовский И.Д. К вопросу о природе тушения люминесценции триптофана в растворе и белке.

63. Биофизика, 1967, т.12, выл.4, с.624-629.

64. Черницкий Е.А. Люминесценция и структурная лабильность белков в растворе и клетке. Минск: Наука и техника, 1972, - 280 с.

65. Черницкий Е.А., Воробей А.В. Структура и функция эритро-цитарных мембран. Минск: Наука и техника, I98.I, - 216 с,

66. Allerhand A, liTatural-abundance carbon-I3 fourier transform NMR studies of large molecules. Pure Appl, Chem., 1975, v. 41, N 1-2, p.247-273.

67. Artymink P.J., Blake C.C.P., Grace D.E.P., Oatley S.J., Phillips D.S., Sternberg J.E. Crystallographic studies of the dynamic properties of lysozyme. Nature, 1979, v.280, N 5723, p.563-568.

68. Bent D.V., Hayon E. Excited state chemistry of aromatic amino acids and related peptides. III. Tryptophan. J. Amer. Chem. Soc. 1975, v.97, N 10, p,26l2-26l9.

69. Bishai P., Kuntz E., Angenstein L. Intra- and intermolecular factors affecting the excited states of aromatic amino acids. Biochim. Biophys, Acta, 1967, v,I4o, N 3, P. 381-394.

70. Buettner A.V, Radiationless Transitions in Cyanine Dyes. -J. Chem. Phys. 1967, v.46, IT 4, I398-I40I.

71. Cherenkevich S.N., Vanderkooi J.M. Dentch C. Changes in membrane fluidity associated with limphocyte stimulation by succinyl-concanavalin A. Biochim. Biophys. Acta, 1982, v. 686, N 2, p. 170-176.

72. Chernavsky D.S., Palamarchuk E.K., Polezhaev A.A., Solyanik G.I., Burlakova E.B. A mathematical model of periodic processes in membranes (with application to cell cycle regulation) . Biosystems, 1977, v.9, p. 187-193.

73. Cherry R.J, Rotational and lateral diffusion of membrane proteins. Biochim. Biophys. Acta, 1979, v.559, p. 289-327.

74. Cockle S.A., Szabo A.G. Time-resolved fluorescence spectraof tryptophan in monomeric glucagon. Photochem. Photobiol.,1981, v.34, N I, p.23-27.

75. Colona G. Alexander S.S., Yamada K.M., Pastan I., Edelpoae H. The stability of cell surface protein to surfactants and denaturants. J.Biol. Chem., 1978, v.253, N 21, p.7787 -7790.

76. Cooper A. Thermodynamic fluctuations in protein molecules. -Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, N 8, p.2740-2741.

77. Debye P., Edwards J.O. A note on the phosphorescence of proteins. Science, 1952, v.116, N 3006, p.I43-I44.

78. Dodd Б.Е., Lincoln P.A. The influence of elution on the reactivity antibodies ABO systems including cross-reacting antibodies. Brit. J. Haematol., 1974, v.26, N I, р.93-Ю4.

79. Dodge J., Mitchell C., Hanahan D. The preparation and chemi«- cal characteristics of hemoglobin-free ghosts of erytrocytes. Arch. Biochem. Biophys., 1963, v.100, К I, p.II9-I30.

80. Domanus J., Strambini G.B., Gaily W.C. Heterogenity in the thermally-inducedquenching of the phosphorescence of multi-tryptophan proteins.- Photochem. and Photobiol., 1980,v.31, N I, p.15-21.

81. Eletr S., Zakim D., Yessey D.A. A spin-label study of the role of phospholipids in the regulation of membrane-bound microsomal enzymes. J. Mol., 1973, v.78, N 2, p.351-362.

82. Engelman R., Jortner J. The energy gap law for radiationless transitions in large molecules. Mol.Phya., 1970, v.18,1. N 2, p.145-164.

83. Pinne J. Identification of blood group ABH-active glycoprotein components of human erytrocyte membrane. Eur.J.Biochem , 1980,, v. 104, M I, p.181-189.

84. Prauenfelder Н., Petsko G.A., Tsernoglon D. Temperature de-dependent X-ray diffraction as a probe protein structural dynamics. Nature, 1979, v.280, N 5723, p. 558-563.

85. Prushour B.G., Koenig J.L. Raman spectroscopic study of tropomyosin denaturation. Biopolymers, 1974, v.13, p.1809-1819.

86. Geacintov N., Oster G., Cassen T. Polymeric matrices for organic phosphors. J. Opt. Soc. Am. , 1968, v.58, N 9, p.1217-1229.

87. Gelin B.R., Karplus M. Sidechain torsional potentials and motion of amino acids in proteins: bovine pancreatic trypsin inhibitor. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1975, v.72,p.2002-2006.

88. Ghiggino K.P., Nicholls C.N., Pailthorpe M.T. Kinetic studies of the tryptophan tryplet state in solid films and in wool keratin. Photochem. Photobiol., 1975, v.22, N 5,p.169-173.

89. Ghivon C.A. Site heterogenity of tryptophanyl residues in proteins detrained by fluorescence quenching. Biophys. J., 1977, v.I9, N lt p.73-74.

90. Giacobino J.P., Chmelar M. Comparision of plasma membranes and endoplasmic reticulum fractions obtained from whole white adipose tissue and isolated adipocytes. Biochim. Biophys. Acta, 1975, v. 406, N I, p.68-82.

91. Grinnvald A., Steinberg I.Z. The fluorescence decay of tryptophan residues in native and denatured proteins. -Biochim. Biophys. Acta, 1976, v.427, N 2, p. 663-678.

92. Henderson R. Membrane protein structure. In: Membranes etcommun. intercell., Amsterdam, 1981, p.229-249.

93. Hicks В., White M., Chiron C.A., Kuntz R.R., Volkert V.A.

94. Plash photolysis of human serum albumin: characterizationof the indol tripet absorption spectrum and decay at amrbient temperature.-Proс. Nat. Acad. Sci. USA, 1978, v.75, IT 3, p.1172-1175.

95. Horie Т., Vanderkooi J.M. Phosphorescence of alkaline phosphatase of E.coli in vitro and in situ. Biochim. Biophys. Acta, 1981, "v.670, p.294-297.

96. Horie Т., Vanderkooi J.M. Phosphorescence of tryptophan from parvalbumin and actin in liquid solution. FEBS letters, 1982,v.147, N I, p.69-73.

97. Kai Y, Imakubo K. Temperature dependence of the phosphorescence lifetimes of heterogenous tryptophan residues in globulas proteins between 293 and 77°K. Photochem. Pho-tobiol., 1979, v.29, N 2, p.261-265.

98. Kapitza H.G., Sackmann E. Local measurement of lateral motion in erythrocyte membranes by photobleaching technique. Biochim. Biophys. Acta, 1980, v.595, N I, p.56-64.

99. Kellogg R.E., Schwenker R.P. "Temperature effect" on triplet state lifetimes in solid solutions. J. Chem. Phys.,1964, v.41, N 9, p.2860-2863.

100. Kishner S., Trepman E., Gaily W.С. Phosphorescence evidence for the role of solvent-protein interacion in the energetics of conformational flaxibility of liver degydroge-nase. Canadian J. Biochem., 1979, v.57, IT II, p.1299-1304.

101. Konev S.V., VcOotovskii I.D., Finin V.S., Kulikov A.V., Kirillov V.A., Zaichkin E.I. The structural transitionsof erythrocyte membranes induced by cyclic AMP. Biochim, Biophys. Acta, 1977, v.470, IT 2, p.230-241.

102. Konev S.V., Volotovskii I.D., Sheiko L.M. UV-inactivati-on of ensymes in supramolecular complex of biological membranes. The phenomenon of photochemical allotopy. Photo-chem. Photobiol., 1978, v.27, p.289-296.

103. Kuntz J.O., Kausmann W. Hydration of proteins and polypeptides. Adv. Protein Chem., 1974, v.28, p.239-345.

104. Kunt25 J.O., Crippen G.M. Protein densities. Int. J. Peptide and Protein Res., 1979, v.13, N 3, p.223-228.

105. Lakowicz J.R., Weber G. Quenching of protein fluorescence by oxygen. A probe for structural fluctuations in macro-molecules. Biochemistry, 1973, v.12, IT 21, p.4l6l-4I70.

106. Lakowicz J.R., Weber G. Quenching of protein fluorescence by oxygen. Detection of structural fluctuations in proteinr. on the nanosecond time scale. Biochemistry, 1973, v.12,1. 21, p.4171-4179.

107. Lakowicz J.R., Weber G. nanosecond segmental mobilities of tryptophan residues in proteins observed by lifetime-resolved fluorescence anisotropics. Biophys. J., 1980,у,32, N I, p.591-601.

108. Lakowicz J.R., Cherek H. Dipolar-relaxation in proteins on the nanosecnd timescale observed by the wavelength-resolved phase fluorimetry of tryptophan fluorescence. -J.Biol. Chem., 1980, v.255, N 3, p.831-834.

109. Leaver I.H. On the roomtemperature phosphorescence of wool keratin. Photochem. Photobiol., 1978, v.27, Ж 4, p.439-443.

110. Lenaz G., Bertoli E., Curatola G. et al. Lipid-protein interactions in mitochondria. Spin and fluorescence probe studies on the effect of n-alcohols on phospholipid vesicles and mitochondrial membranes, Arch. Biochem. Biophys., 1976, v.172, p.278-288.

111. Linderstrom-Lang K., Schellemann J. Protein structure and enzyme activity. In: Enzymes, ITew York, 1959, v.I,p.443-510.

112. Longworth J.W. Ins Ezcited states of proteins and nucleic acides. Eds. Steiner R.F., Weinryb I. Itf.Y.-L., Plenum Press, 1971.

113. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Parr A.L., Randall R.J. Protein measurements with the Polin phenol reagent, -J, Biol. Chem., 1951, v.193, N I, p.265-275.

114. Luer C.A., Wong К.-Рт The effect of pH and temperature on the circular dichroism of human erythrocyte membranes. -Biophys. Chem., 1978, v.9, N I, p.15-22.

115. Morgan R.S., Peticolas W.L. Frequence-dependent diffraction from enzymatic breathing modes. Intern. J. Peptide prot. Res., 1975, v.7, p.361-365.

116. Munro. I, Pecht I., Stryer L. Subnanosecond motions of tryptophan residues in proteins. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, N I, p.56-60.

117. Nicolson G.L., Poste G., Ji Т.Н. The dynamics of cell membrane organisation. In: Dynamic Aspects of Cell Surface Organization. Eds. G.Poste. G.L.Nicolson Elsevior/ Horth-Holland, Biomedical Press, 1977, p.1-73.

118. Op den Kamp J.A .P. Lipid asymmetry in membranes. Ann. Rev. Biochem., 1979, v.48, p.47-71.

119. Parak P., Frolov E.N., Kononenko A.A., Mossbauer R.L.,Gol~ danskii V.I., Rubin A.B. Evidence for a correlation between the photoinduced electron transfer and dynamic properties of the chromatophore membranes. PEBS Letters, 1980,v.117, N I, p.368-372.

120. Peterson J.A., Ebel R.E., O'Keeffe D.H., Matsubara Т., Estabrook R.W. Temperature dependence of cytochrome P-450 reduction. A model for NADPH-cytоchrome P-450 reductase: cytochrome P-450 interaction. J. Biol. Chem., 1976, v.25I, N 13, p.4010-4016.

121. Rossman M.G., Liljas A. Recognition of structural domains in globular proteins. J. Mol.Biol., 1974, v.85, N I,p. I77-I8I.

122. Rothman J.E., Davidowiecz E.A. Asymmetric exchange of vesicle phospholipids catalyzed by the phosphatidylcholine exchange protein. Measurement of inside-outside transition. Biochemistry, 1975, v.I4, N 13, p.28o9- 2816.

123. Saviotti M.L., Galley W.C. Room temperature phosphorescence and the dynamic aspects of protein structure. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1974, v.71, N 10, p.4154-4158.

124. Schramm S., Kinsey R.A., Kintanar A., Rothgeb T.M., Old-field E. Deuterium Iffi of proteins in solution, in membranes and in crystalline solid-state. In: Biomol. Stereo-dyn. Proc. Symp., Albany, N.Y., 26-29 Apr., 1981. v.2,p.271-286.

125. Shuh J.R., Chan S.I. Nuclear magnetic resonance. Meth. Exp. Phys., 1982, v.20, p.1-52.

126. Shaklai N., Daniel E. Phosphorescence properties of hemo-cyanine from Levantina Hierosolima. Biochem., 1972, v.II, N II, p.2199-2203.

127. Shiga Т., Mason H.S., Simo C. Studies of the triplet state of proteins by electron spin resonance spectrscopy. -Biochemistry, 1966, v.5, N 6, p.1877- 1885.

128. Singer S.J., NiсоIson G.L. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes. Science, 1972, v.175,1. N 4023, p. 720-731.

129. Singer S.J. The molecular organization of membranes. Ann. Rev. Biochem., 1974, v.43, p.805-833.

130. Snyder G.H., Rovan R., Karpulus S., Sykes B.D. Complete tyrosine assiquuments in the high field *H nuclear magnetic resonance spectrum of the bovine pancreatic trypsin inhibitor. Biochemistry, 1975, v.I4, N 17, p.3765-3777.

131. Sitte P. Biomembranes: high protein concentration. Natur-wissenschaften, 1979, v.66, N 6, p.315-316.

132. Sokolovsky M., Daniel E. Application of phosphorescence to the study of proteins. Meth. Enzymol., 1978, v.49, part G, p.236-249.

133. Spohn K.-H., Kimmich R. Characterization of the mobility of various chemical groups in the purple membrane of Halo-bacterium halobium by , and H solid state Ш. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, v.114, N 2, p.713-720.

134. Steck T.L. Selective solubilization of red blood cell membrane proteins with guanidin hydrochloride. Biochim. Biophys. Acta, 1972, v.255, p.553-556.

135. Strambini G.B., Gaily W.C. Detection of slow rotational motions of proteins by stady-state phosphorescence aniso-tropy. Nature, 1976, v.260, N 8, p.554-556.

136. Strambini G.B., Gaily W.C. Time-dependent phosphorescence anisotropy measurements of the slow rotational motions of proteins in viscous solution. Biopolymers, 1980, v.19, p.383-394.

137. Strambini G.B. Singular oxygen effect on the room-temperature phosphorescence of alcohol dehydrogense from horseliver. Biophys.J., 1983, v.43, N I, p.127-130.

138. Strambini G.B., Gabellieri E. Intrinsic phosphorescence from proteins in the solid state. Photochem. Photobiol., 1984, v.39, N 6, p.725-729.

139. Tsier H.C., Higgins M.L. Effect of temperature on thedistribution of membrane particles in Streptococcus faeca-lis as seen by the freeze-fracture technique. J. Bacteri-ol., 1974, V.II8, N 2, p. 725-734.

140. Triplett R.B., Summers J. Ellis D.E., Carraway C.L. Solubilization, disaggregation and chromatography of erythrocyte membranes. Biochim. Biophys. Acta. 1972,v. 266, N 2, p.484-493.

141. Wahl P., Weber G. Fluorescence depolarization of rabbit gamma globulin conjugates. J. Mol. Biol. 1967, v.30, p.371-382.

142. Windell C.C., Tata J.R. A procedure for the isolation of enzymically active rat liver nuclei. Biochem. J., 1964, v.92, F 2, p.313-317.

143. Wodak Sh. J., Janin J. Location of structural domains in proteins. Biochemistry, 1981, v.20, N 23, p.6544-6552.

144. Zotikov A.A,, Polyakov Ya. S. The use of the phosphorescence microscope for the study of the phosphorescence of variouse cells. Microsc.acta , 1977, v.79, N5 ,p. 415418.