Структурная организация хвостового чехла бактериофагов Т4 и φ KZ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Ефимов, Андрей Викторович

• Ефимов, Андрей Викторович
• кандидат физико-математических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Ефимов, Андрей Викторович

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

I. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность проблемы.

1.2. Цель и задачи работы.В

1.3. Научная новизна и практическая ценность работы.

II. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

II. 1. Структурная организация и общий путь сборки бактериофага Т4.

II.2. Структура и функции хвостового отростка бактериофага Т4.

11.2.1. Морфогенез базальной пластинки.

11.2.2. Структурам сборка хвостового стержня и чехла.

11.2.3. Структура длинных хвостовых фибрилл.

II. 3. Конформационные изменения хвостового отростка при инфицировании клетки-хозяина.

11.3.1. Структурная реорганизация базальной пластинки.

11.3.2. Молекулярный механизм сокращения чехла.

11.3.3. Строение белка шТ 8.

II.4. Бактериофаг (pKZ.

III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

III. 1. Бактериальные штаммы.

III.2. Среды для выращивания бактерий.

III. 3. Векторы для клонирования. Плазмиды.

111.3.1. Векторы для клонирования и экспрессии.

111.3.2. Конструирование векторов pET-23d(+)-Hind("> и pET-23d(+)-Xbaw.

111.3.3. Плазмиды, полученные автором в ходе исследований:.

III.4. Ферменты.

Ш.5.Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

111.6. Выделение и очистка ДНК.

111.6.1. Очистка фрагментов, амплифицированных с помощью ПЦР.

111.6.2. Выделение и очистка плазмидной ДНК.

111.7.Приготовление компетентных клеток Е. coli.

111.8. Трансформация компетентных клеток Е. coli плазмидной ДНК.

111.9. Селекция клонов, содержащих рекомбинантные плазмиды.

111.10. Экспрессия клонированных генов в Е. coli.

III. 11. Проверка растворимости синтезированных белков.

III. 12. Выделение и очистка белков.

III. 12.1. Выделение растворимых белков.

III. 12.2. Очистка белка СЛ287.

111.12.3. Очистка фрагментов СД248, СД172, СД152, СА129 и СД58.

111.12.4. Очистка химерных белков СД129-М4 и СД248-М4.

III. 13. Определение концентрации белка.

III. 14. Анализ белков с помощью моноклональных антител.

III. 14.1. Иммуноферментный анализ.

III. 14.2. Вестерн-блотт-анализ.

III. 15. Ограниченный протеолиз мутантов пг18.

III. 16. Очистка бактериофага cpKZ.

III. 17. Электронная микроскопия.

III.17.1. Электронная микроскопия мутантов пг18.

III. 17.2. Электронная микроскопия бактериофага cpKZ.

III. 18. Процессинг изображений и спиральная реконструкция хвостового чехла бактериофага cpKZ.

III.19. Кристаллизация фрагментов пг18.

III. 19.1. Кристаллизация фрагментов PR и СД

III. 19.2. Кристаллизация мутанта М26.

III. 19.3. Кристаллизация химерных белков.

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

IV. 1. Получение рекомбинантного пг18.

IV.2. Фрагменты пг18 с делециями различной длины N- и С- концевых областей молекулы.

IV.2.2. Клонирование и экспрессия делеционных фрагментов пг18.

IV.2.3. Выделение и очистка растворимых делеционных мутантов пг18.

IV.2.4.Электронная микроскопия делеционных фрагментов пг18.

IV.2.5. Эндогенный протеолиз делеционных фрагментов.

IV.2.6. Иммуноферментный анализ делеционных фрагментов пг18.

IV.3. Мутанты пг18 с внутренними делециями в центральной области молекулы.

IV.3.1. Мутанты с делециями в области уникального сайта рестрикции HindUl.

IV.3.2. Мутанты с делециями в области с 372 по 411 остатков аминокислот.

IV.4. Белки с мутациями в С-концевой области молекулы пг18.

IV.4.1. Мутанты I группы.

IV.4.2. Мутанты II группы.

IV.4.3. Мутанты III группы.

IV.4.4. Ограниченный трипсинолиз мутантов пг18.

IV. 5. Гибридные белки, содержащие фрагмент MSP1 Plasmodium falciparum.

IV.6. Кристаллизация различных мутантов шТ8.

IV.6.1. Кристаллизация фрагментов пг18-СД287, PR и М26.

IV.6.2. Кристаллизация гибридных молекул nrl 8-СА248-М4 и СА129-М4.

IV.7. Электронно-микроскопические исследования бактериофага рКZ.

IV.7.1. Электронно-микроскопическое исследование хвостового отростка.

IV.7.2. Трехмерная реконструкция хвостового чехла бактериофага cpKZ в растянутом состоянии.

IV.7.3. Трехмерная реконструкция хвостового чехла бактериофага cpKZ в сокращенном состоянии.

IV.7.4. Электронно-микроскопическое исследование рекомбинантного белка хвостового чехла бактериофага фКZ.

IV.7.5. Электронно-микроскопическое исследование головки фага cpKZ.

V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

V. 1. Фолдинг nrl 8 бактериофага Т4.

V.2. Полимеризация nrl 8.

V.3. Конформационные изменения иг 18 в процессе сокращения чехла.

V.4. Преобразования хвостового чехла бактериофага cpKZ при сокращении.

V.5. Сравнение структуры хвостового чехла бактериофагов Т4 и cpKZ.

VI. ВЫВОДЫ.

VII. Литература.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурная организация хвостового чехла бактериофагов Т4 и φ KZ»

1.1. Актуальность проблемы

Изучение сложных биологических структур, процессов их сборки, принципов организации и функционирования является важным направлением современной физико-химической биологии, а бактериофаг Т4 Esherichia coli представляет удобную экспериментальную модель для исследований. Высокая инфекционность частицы Т4 (~1), привлекательная с позиций генотерапии при разработке способов для эффективной доставки генетического материала в клетку, обусловлена сложностью структурной организации аппарата инфицирования фага, содержащего несколько субструктурных элементов. Длинные хвостовые фибриллы отвечают за специфичность узнавания клетки-хозяина, базальная пластинка является контрольным центром процесса инфицирования, а хвост с сократимым чехлом обеспечивает введение геномной ДНК фага в бактерию.

Хвостовой чехол фага Т4, построенный из белковых молекул одного типа, представляет собой простейшую однокомпонентную сократительную систему, своего рода молекулярную мышцу вируса. Сокращение обеспечивает проникновение жесткого внутреннего стержня через клеточную стенку и введение ДНК в клетку. Чехол построен из 144 субъединиц продукта гена (пг) 18 [659 аминокислотных остатков (ао)] с молекулярной массой 71,3 кДа [106]. В процессе сокращения белок чехла претерпевает конформационные изменения, и длина чехла уменьшается с 980 А до 360 А [29]. Характерной особенностью нативного пг18 является его способность к сборке в различные полимерные структуры. Свойство пг18 к полимеризации существенно затрудняет изучение структуры данного белка, что необходимо для понимания деталей молекулярного механизма сокращения чехла.

Ранее была проведена серия физико-химических исследований пг18, выделенного из чехлов частицы Т4, а также из поличехлов [8]. Мономерная и различные полимерные формы пг18 были изучены методами химической модификации и ферментативного гидролиза [16]. Установлено, что субъединицы пг18 в составе различных форм (мономер, поличехлы, несокращенный и сокращенный чехлы) имеют ряд структурных отличий.

При изучении структуры хвоста фага были применены методы электронной микроскопии, оптической дифракции и трехмерной реконструкции. В растянутом состоянии сократительный чехол бактериофага Т4 имеет длину 980 А, внешний 7 диаметр 210 А, внутренний диаметр 90 А [29] и состоит из 144 субъединиц пг18, уложенных в 24 диска. Толщина дисков составляет 41 А, и они смещены друг относительно друга на 17 вправо по отношению к дискам, лежащим ниже [100]. Одинаково ориентированные субъединицы повторяются через 7 дисков, т.е. период идентичности структуры равен 7 дискам [15]. В сокращенном состоянии длина чехла уменьшается до 360 А, внешний диаметр становится 270 А, а внутренний диаметр не изменяется. Толщина диска уменьшается до 15 А, а угол смещения субъединиц увеличивается до 32 . Период идентичности становится равен 11 [83]. В сокращенном состоянии контакты между субъединицами одного диска разрываются, расстояние между ними увеличивается. При этом образуется свободное пространство, в котором располагаются субъединицы вышележащего диска. В результате сокращения симметрия хвостового чехла становится псевдо-12-ти кратной [29].

Выявление областей молекулы, участвующих во взаимодействиях между субъединицами пг18, а также выяснение деталей пространственной структуры белка в различных состояниях важны для понимания механизмов конформационных перестроек белка, происходящих при его сборке и в процессе сокращения чехла.

Детальное изучение молекулярного механизма сокращения хвостового чехла Т4 и родственных бактериофагов необходимо для понимания функционирования других сложноорганизованных двигательных систем. Поэтому, наряду с изучением белка хвостового чехла бактериофага Т4, мы также начали изучение хвостового чехла гигантского бактериофага срКZ Pseudomonas aeruginosa. Несмотря на то, что оба фага -(pKZ и Т4 - являются представителями семейства Myoviridae, гомологии на уровне ДНК и аминокислотных последовательностей между этими вирусами не наблюдается [78].

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Ефимов, Андрей Викторович

VI. выводы

1. Сконструированы плазмидные векторы для экспрессии в клетках Е. coli полноразмерного белка хвостового чехла бактериофага Т4 (пг18), его N- и С-концевых делеционных фрагментов, а также мутантов с делециями внутри молекулы.

2. Установлено, что для фолдинга пг18 необходимо взаимодействие N- и С- концевых областей молекулы.

3. Определено, что для фолдинга пг18 важна интактная область Asp360-Arg411, а также остаток Asn523, который находится на конце предсказанной а-спирали Gly497-Ile522 и, по-видимому, формирует С-кэп.

4. Установлено, что для полимеризации пг18 важны области Leu372-Arg411 и Ие507-Gly530, и последняя, по-видимому, необходима для конформационных перестроек белка при сокращении хвостового чехла.

5. Получено несколько делеционных производных пг18, формирующих новый тип полимерных структур - несокращенные поличехлы.

6. Определен характер пространственной упаковки субъединиц хвостового чехла бактериофага cpKZ в растянутом и сокращенном состояниях и выполнена их трехмерная реконструкция. Показано, что субъединицы в растянутом чехле подчиняются правилу отбора l=-7n+19m (n=6n') и представляют собой правую спираль, а в сокращенном состоянии субъединицы чехла образуют спиральную упаковку, подчиняющуюся правилу отбора l=-n+16m (n=6n'), и формируют левозакрученную спираль.

7. Согласно данным реконструкции каждая из субъединиц чехла бактериофага фКZ в растянутой конформации взаимодействует с субъединицей белка стержня, что стабилизирует структуру хвоста. При сокращении чехлов взаимодействие между субъединицами стержня и чехла нарушается.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Ефимов, Андрей Викторович, 2002 год

1. Крылов В.Н., Жажиков И.З., "Бактериофаг (pKZ Pseudomonas aeruginosa -возможная модель для исследования генетического контроля морфогенеза", 1978, Генетика, 14, с. 678-685.

2. Крылов В.Н., Смирнова Т.А., Миненкова И.В., "Структура бактериофага срКZ", 1978, Вопр. Вирусол., 5, с. 568-571.

3. Смирнова Т.А., Миненкова И.Б., Хренова Е.А., Плотникова Т.Г., Крылов В.Н., "Электорнно-микроскопическое изучение внутриклеточного развития бактериофага (pKZ Pseudomonas aeruginosa'", 1983, Мол. Ген. Микрбиол. Вирусол., 5, с. 25-28.

4. Тяглов Б.В., Крылов В.Н., Плотникова Т.Г., Минаев В.Е., Пермогоров В.И., "Некоторые физико-химические свойства бактериофага cpKZ", 1980, Мол. Биол., 14, с. 1019-1022.

5. Хренова Е.А., Ахвердян В.З., Крылов В.Н., "Родство бактериофагов срКZ и 21 Pseudomonas aeruginosa, обладающих уникальной нуклеопротеидной структурой в головке", 1984, Мол. Ген. Микрбиол. Вирусом., 5, с. 31-34.

6. Abuladze N.K., Gingery М., Tsai J., Eiserling F.A., "Tail length determination in bacteriophage T4", 1994, Virology, 199, pp 301-310.

7. A 1 ' 1 Г XV 1 1 j T X 1.XHT .11 А ТТГ . 1 .l . .

8. Auiian ivi., i/uu>ui;iici J., Jbcpaun J., ivicjL»uwaii i\. vv., ^lyu-cieuuun ишлиь^иру uiviruses", 1984, Nature, 308, pp 32-36.

9. Amos L.A., and Klug A., "Three-dimensional image reconstructions of the contractile tail of T4 bacteriophage", 1975, J. Mol. Biol., 99, pp 51-64.

10. Arisaka F., Nakako Т., Takahashi H., Ishii S., "Nucleotide sequence of the tail sheath gene of bacteriophage T4 and amino acid sequence of its product", 1988, J. Virol., 62, pp 1186-1193.

11. Arisaka F., Tschopp J., Van Driel R., Engel J., "Reassembly of the bacteriophage T4 tail from the core-baseplate and the monomelic sheath protein PI8: a co-operative association process", 1979, J. Mol. Biol., 132, pp 369-386.

12. Arscott P.G., Goldberg E.B., "Cooperative action of the T4 tail fibers and baseplate in triggering conformational change and in determining host range", 1976, Virology, 69, pp 15-22.

13. Bayer M.E., Remsen C.C., "Bacteriophage T2 as seen with the freeze-etching technique", 1970, Virology, 40, pp 703-718.

14. Black L.W., Showe M.K., Steven A.C., "Morphogenesis of the T4 head" in Molecular biology of bacteriophage T4 (ed. J. Karam), 1994, pp. 218-258, American Society for Microbiology. Washington, D.C.

15. Bottcher В., Wynne S.A., Crowther R.A. "Determination of the fold of the core protein of hepatitis В virus by electron cryomicroscopy", 1997, Nature, 386, pp 88-91. Bradley D.E., "The structure of coliphages.", 1963, J. Gen. Microbiol., 31, pp 435445.

16. Caspar D.L., "Movement and self-control in protein assemblies. Quasi-equivalence revisited", 1980, Biophys. J., 32, pp 103-138.

17. Cerritelli M.E., Wall J.S., Simon M.N., Conway J.F., Steven A.C., "Stoichiometry and domainal organization of the long taii-nber of bacteriophage T4: a hinged viral adhesin", 1996, JMol. Biol., 260, pp 767-780.

18. Coombs D.H., Arisaka F., " T4 tail structure and function" in Molecular biology of bacteriophage T4, 1994, (ed. Karam J.), pp. 259-281, American Society for Microbiology. Washington, D.C.

19. Crowther R.A., Amos L.A., "Harmonic analysis of electron microscope images with rotational symmetry", 1971, J. Mol. Biol., 60, pp 123-130.

20. Crowther R.A., Lenk E.V., Kikuchi Y., and King J., "Molecular reorganization in the hexagon to star transition of the baseplate of bacteriophage T4", 1977, J. Mol. Biol., 116, pp 489-523.

21. Cummins D.J., Chapman V.A., De Long S.S., "Disruption of T-even bacteripohage by dimeilsulfoxid", 1968, J. Virol., 2, pp 610-617.

22. DeRosier DJ. and Klug A., "Reconstruction of three-dimentional structures fromelectron micrographs", 1968, Nature (London), 217, pp 130-134.

23. DeRosier DJ., Moore P.B., "Reconstruction of three-dimensional images fromelectron micrographs of structures with helical symmetry", 1970, J. Mol. Biol., 52, pp355.369.

24. Ditksuii R.C., "Protein composition of the tail and contracted sheath of bacteriophage T4", 1974, Virology, 59, pp 123-138.

25. Dokland Т., McKenna R., Ilag L.L., Bowman B.R., Incardona N.L., Fane B.A., Rossmann M.G., "Structure of a viral procapsid with molecular scaffolding", 1997, Nature, 389, pp 308-313.

26. Edgar R.S., Lielausis I., "Temperature-sensitive mutants of bacteriophage T4D: theirisoltion and genetic characterization.", 1964, Genetics, 52, pp 649-660.

27. Edgar R.S., Lielausis I., "Serological studies with mutants of phage T4D defective ingenes determining tail fiber structure.", Genetics, 1965, 52, pp 1187-1199.

28. Edgar R.S., Lielausis I., "Some steps in the assambly of bacteriophage T4", J. Mol.

29. Biol., 1968, 32, pp 263-271.

30. Fiori P.L. and Rappelli P., "The use of polyclonal activators in the production of murine monoclonal and polyclonal antibodies", 1991, J. Immunol. Methods., 139, pp 181-190.

31. Georgopoulos C.P., binder C.H., "Molecular chaperons in T4 assembly" in Molecular biology of bacteriophage T4, 1994, (ed. Karam J.), pp. 213-217, American Society for Microbiology. Washington, D.C.

32. Goldberg E., "Bacteriophage nucleic acid penetration", 1980, in Virus Receptors. Receptors and Recognition (Randall L.L and Phillipros L., ed.), Ser. B, vol. 7 Chapman&Hall, Ltd., London, pp 115-141.

33. Jaenicke R. "Folding and association of proteins", 1987, Prog. Biophys. Molec. Biol., 49, pp 117-237.

34. Kanamaru S., Leiman P.G., Kostyuchenko V.A, Chipman P.R., Mesyanzhinov V.V., Arisaka F., Rossmann M.G., "Structure of the cell-puncturing device of bacteriophagenn ли лллл it л m r r г гit , Z.WZ., lvaiure, чjld, pp эээ-jj j.

35. Katsura I., "Mechanism of length determination in bacteriophage lambda tails", 1990, Adv Biophys., 26, pp 1-18.

36. Kellenberger E., "Studies on the morphogenesis of the head of phage T-even. V. The components of the T4 capsid and of other, capsid-related structures", Virology, 1968, 34, pp 549-61.

37. Kikuchi Y., King J., "Genetic control of bacteriophage T4 baseplate morphogenesis. I. Sequental assambly of the major precursor, in vivo and in vitro", J. Mol. Biol., 1975, 99, pp 645-672.

38. Kikuchi Y., King J., "Genetic control of bacteriophage T4 baseplate morphogenesis.1.. Mutants unable to form the central part of the baseplate.", J. Mol. Biol., 1975, 99, pp 673-694.

39. Kikuchi Y., King J., "Genetic control of bacteriophage T4 baseplate morphogenesis.

40. I. Formation of the central plug and overall assembly pathway.", J. Mol. Biol, 1975, 99, pp 695-716.

41. King J., "Assembly of the tail of bacteriophage T4", 1968, J. Mol. Biol., 32, pp 231262.

42. King J., "Bacteriophage T4 tail assembly: four steps in core formation", J. Mol. Biol., 1971, 58, pp 693-709.

43. King J., Mykolajewycz N., "Bacteriophage T4 tail assembly: proteins of the sheath, core and baseplate", 1973, J. Mol. Biol., 75, pp 339-358.

44. Kostyuchenko V.A., Chipman P.R., Leiman P.G., Kanamaru S., Arisaka F., Mesyanzhinov V.V., and Rossmarm M.G., " Structure of Bacteriophage T4 Baseplate, a Device Controlling Viral Infectivity.", in press

45. Kozloff L.M., "Composition of T4D bacteriophage baseplate and the binding of the central tail plug.", Bacteriophage assambly, 1981, Alan. R. Liss., New York, pp 327342.

46. Kozloff L.M., Lute M., "A contractile protein in the tail of bacteriophage T2", 1959, J. Biol. Chem., 234, pp 539-547.

47. Kutter E., Mosig G., "Genomic maps of bacteriophage T4" in Genetic Maps, 1993, (ed. by S.J. O'Brien), pp 1-27, Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor.

48. Makhov A.M., Trus B.L., Conway J.F., Simon M.N., Zurabishvili T.G., Mesyanzhinov V.V., Steven A.C., "The short tail-fiber of bacteriophage T4: molecular structure and a mechanism for its conformational transition", 1993, Virology, 194, pp 117-127.

49. Meezan E., Wood W.B., "The sequence of gene product interaction in bacteriophage T4 iail core assembly.", J. Mol. Biol.,1971, 58, pp 685-92.

50. Moody M.F., "Sheath of bacteriophage T4. 3. Contraction mechanism deduced frompartially contracted sheaths" 1973, J. Mol. Biol., 80, pp 613-635.

51. Moody M.F., "Structure of the sheath of bacteriophage T4. II. Rearrangement of thesheath subunits during contraction", 1967, J. Mol. Biol., 25, pp 201-208.

52. Moody M.F., Makowski L., "X-ray diffraction study of tail-tubes from bacteriophage

53. T2L", 1981, J. Mol. Biol., 150, pp 217-244.

54. Muller M., Engel A., Aebi U., "Structural and physicochemical analysis of the contractile MM phage tail and comparison with the bacteriophage T4 tail", 1994, J. Struct. Biol., 112, pp 11-31.

55. Muller-Jensen K., Hofschneider P.H., "Infections substructures of E.coli bacteriophages. IV. The nature of infections urea T2 particles", 1964, Biochim. Biophys. Acta, 80, pp 422-430.

56. Oliver D.B., Crowther R.A., "DNA sequence of the teil fiber genes 36 and 37 of bacteriophage T4", 1989,, J Mol. Biol., 153, pp 545-568.

57. Plishker M., Rangwala S., and Berget P., "Isolation of bacteriophage T4 baseplate proteins P7 and P8 and in vitro formation of the P10/P7/P8 assembly intermediate",

58. ЛОО Г ТГ'7 ГЪ „ Лг\г\ лг\/~1700, J. rt-rui., Hi, pp 4VU-WU.

59. Simon L.D., Anderson T.F., "The infection of Escherihia coli by T2 and T4 bacteeriophages as seenin the electron microscope. I. Attachment and penetration", 1967, Virology, 32, pp 279-297.

60. Simon L.D., Anderson T.F., "The infection of Escherichia coli by T2 and T4 bacteriophages as seen in the electron microscope. II. Structure and function of the baseplate", 1967, Virology, 32, pp 298-305.

61. Steinbacher S., Seckler R., Miller S., Steipe В., Huber R., Reinemer P., "Crystal structure of P22 tailspike protein: interdigitated subunits in a thermostable trimer", 1994, Science, 265, pp 383-386.

62. Urig M.A., Brown S.M., Tedesco P., Wood W.B., "Attachment of tail fibers in bacteriophage T4 assembly. Identification of the baseplate protein to which tail fibers attach", 1983, J. Mol Biol., 169, pp 427-437.

63. Van Yunakis H., Baker W.K., Brown K., "Structural studies on the protein of bacteriophages. I. Alkaline dissociation of the protein coat "ghosf'of bacteriophage T2", 1958, Virology, 5, pp 327-332.

64. Venyaminov S.Y., Rodikova L.P., Metlina A.L., Poglazov B.F., "Secondary structure change of bacteriophage T4 sheath protein during sheath contraction", 1975, J. Mol. Biol, 98, pp 657-664.

65. Vianelli A., Wang G.R., Gingery M., Duda R.L., Eiserling F.A., Goldberg E.B., "Bacteriophage T4 self-assembly: localization of gp3 and its role in determining tail length", 2000, J. Bacteriol., 182, pp 680-688.

66. Watts N.R.M., and Coombs D.H., "Analysis of nearneighbor contacts in bacteriophage T4 wedges and hubless baseplates by using a cleaveble chemical cross-linker", 1989,

67. Virol., 63, pp 2427-2436. Watts NR, and Coombs DH., "Structure of the bacteriophage T4 baseplate as determined by chemical cross-linking", 1990, J. Virol., 64, pp 143-154.

68. Watts N.R., Hainfeld J., Coombs D.H., "Localization of the proteins gp7, gp8 and gplO in the bacteriophage T4 baseplate with colloidal gold: F(ab)2 and undecagold: Fab conjugates", 1990, J. Mol. Biol., 216, pp 315-325.

69. Williams R.C., and Fraser D., "Structural and functional differentiation in T2 bacteripohage", 1956, Virology, 2, pp 289-297.

70. Wood W.B., "Bacteriophage T4 assambly and the morphogenesis of subcellular structure", Harvey Lect., 1979, 73, pp 203-223.

71. Wood W.B., "Bacteriophage T4 morphogenesis as a model for assembly of subcellular structure.", Q. Rev. Biol., 1980, 55, pp 353-367.

72. Zhao L., Takeda S., Leiman P.G., Arisaka F., "Stoichiometry and inter-subunit interaction of the wedge initiation complex, gplO-gpll, of bacteriophage T4.", 2000, Biochim. Biophys. Acta., 1479, pp 286-292. (21)