Сравнительный анализ содержания вторичных метаболитов и ростовых характеристик культур клеток Polyscias fruticosa и Polyscias filicifolia тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.05, кандидат биологических наук Суханова, Елена Сергеевна

• Суханова, Елена Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Суханова, Елена Сергеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Растения сем. Аралиевых - общая характеристика и содержание биологически активных веществ.

1.1.1. Общая характеристика семейства Araliaceae.

1.1.2. Женьшень - наиболее известный представитель семейства.

1.1.3. Растения рода Polyscias.

1.2. Культуры клеток высших растений - методы получения и условия выращивания.

1.2.1. Историческая справка.

1.2.2. Характеристики роста культур клеток.

1.2.3. Условия культивирования.

1.2.4. Генетическая гетерогенность клеточных культур.

1.3. Вторичный метаболизм в культурах клеток.

1.3.1. Общая характеристика вторичного метаболизма в культурах клеток растений.

1.3.2. Характеристика вторичных метаболитов растений рода Panax.

1.3.3. Характеристика вторичных метаболитов растений рода Polyscias.

1.4. Исследование билогической активности растительных объектов

1.4.1. Биологическая активность индивидуальных компонентов экстрактов Panax spp.

1.4.2. Биологическая активность экстрактов Аралиевых на примере Panax spp. и Polyscias filicifolia.

1.4.3. Сопоставление биологической активности растительных экстрактов и их индивидуальных компонентов.

1.4.4. Методы скрининга биологической активности.

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Получение культур клеток Polyscias fruticosa и Polyscias filicifolia.

2.2. Выращивание и изучение ростовых характеристик клеточных культур.

2.3. Приготовление анатомических срезов корней.

2.4. Цитофотометрический анализ ДНК.

2.5. Химический анализ экстрактов клеточных культур.

2.6. Определение биологической активности экстрактов культур клеток аралиевых.

2.6.1. Определение адаптогенной активности.

2.6.2. Определение стимулирующей активности.

2.7. Статистическая обработка результатов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Получение и характеристика культур клеток Р./гиИсоза и

Р./ШЫ/оНа.

3.1.1. Получение каллусных культур клеток Р./гиИсояа и

РфИЫ/оИа.

3.1.2. Получение суспензионных культур клеток Р./гиИсоБа и

Р.АИЫ/оНа.

3.2. Исследование морфогенного потенциала культур клеток Р./гиИсоэа и Р./ШЫ/оНа.

3.2.1. Ризогнез в культурах клетокРф-ийсоха и Р.ДИЫ/оИа.

3.2.2. Эмбриогенез в культурах клеток Рф-иИсоза и РфИЫ/оИа.

3.3. Сравнение полученных штаммов Ро^с'шб Брр. с коллекционным штаммом Ро^ст/ИШ/оИа.

3.3.1. Сравнение культур клеток полисциаса по ростовым характеристикам.

3.3.2. Сравнение культур клеток полисциаса по содержанию ДНК.

3.3.3. Сравнение культур клеток полисциаса по содержанию тритерпеновых гликозидов.

3.4. Биосинтетические характеристики культуры клеток Ро^Ыая /гийсоБа.

3.4.1. Динамика накопления тритерпеновых гликозидов в культуре клеток Polyscias fruticosa.

3.4.2. Влияние предшественника синтеза изопреноидов на рост и содержание тритерпеновых гликозидов в культуре клеток Polyscias fruticosa.

3.5. Биологическая активность экстрактов культур клеток и индивидуальных тритерпеновых гликозидов.

3.5.1. Химический состав экстрактов культур клеток Panax japonicus и Polyscias spp., используемых для определения биологической активности.

3.5.2. Разработка тест систем для скрининга адаптогенной активности экстрактов.

3.5.3. Определение адаптогенной активности экстрактов Panax japonicus и Polyscias spp.

3.5.4. Определение стимулирующей активности экстрактов Panax japonicus и Polyscias spp.

4.ВЫВОДЫ. ИЗ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ содержания вторичных метаболитов и ростовых характеристик культур клеток Polyscias fruticosa и Polyscias filicifolia»

В настоящее время наблюдается повышение интереса медицинской науки и практики к фитопрепаратам: в разных странах доля лекарств, содержащих растительное сырье, варьирует от 25% (США) до 50% (Китай, Индия, Пакистан); в России их доля превышает 30%. Активное использование дикорастущих растений в качестве сырья приводит не только к сокращению природных растительных ресурсов, но и ставит многие виды растений под угрозу исчезновения. Таким образом, поиск альтернативного возобновляемого растительного сырья для медицины, ветеринарии, парфюмерии и пищевой промышленности весьма актуален.

Использование культур клеток высших растений в качестве альтернативного источника растительной биомассы имеет ряд преимуществ: экологическая чистота производства и получаемого продукта, гарантированное производство биомассы независимо от сезонных и погодных условий, высокая продуктивность, отсутствие в биомассе токсичных веществ. В то же время, клетки высших растений in vitro по своим свойствам существенно отличаются от клеток в составе растительного организма. Культура клеток представляет собой популяцию дедифференцированных соматических клеток, в которой процессы образования биологически-активных веществ (вторичных метаболитов) значительно отличаются от таковых в интактных растениях. Следовательно, для создания эффективных биотехнологий получения биомассы культур клеток лекарственных растений требуется значительный объем как фундаментальных, так и прикладных исследований. К первым следует отнести работы по получению культур клеток, оптимизации их роста и регулированию образования клетками биологически-активных веществ. Важнейшими прикладными задачами являются разработка систем хранения и поддержания штаммов-продуцентов, а также выяснения их промышленной ценности - определение продуктивности по целевым веществам и, в случае использования биомассы для получения экстрактов («галеновых препаратов»), определение биологической активности.

Растения семейства Аралиевых {АгаИасеае), к которым относятся такие известные виды как женьшень, элеутерококк, аралия, широко используются в современной медицине. В то же время, как правило, они имеют очень ограниченный ареал распространения, некоторые виды растут в тропическом климате. Одними из наименее исследованных растений этого семейства являются представители рода полисциас (Ро^Ыай). Растения этого рода, полисциас папоротниколистный (Р.^Ис'фИа) и полисциас кустарникрвый (Р./гиИсоза), применяются в народной медицине; показаны тонизирующее, противовоспалительное, антимутагенное, ранозаживляющее и другие свойства этих растений. В 1970-х годах была получена культура клеток Р^ПсфИа, показаны антитератогенные и стимулирующие свойства ее экстрактов, на ее базе создана биологически-активная пищевая добавка «Витагмал». В то же время, состав и биологическая активность экстрактов этой культуры клеток изучена недостаточно.

Проблема воспроизводимости свойств культур клеток одного и того же вида растений, а также стабильности их сохранения при длительном культивировании имеет как теоретическую, так и практическую важность. В связи с этим, достаточно актуальным является сравнение характеристик независимо полученных культур клеток одного вида, а также свойств культур клеток близких видов растений, полученных в одно время и в одинаковых условиях.

Цель исследования. Получить культуры клеток Ро/уяс/оу /гийсоБа и Роемая АИсфИа, изучить их ростовые и биосинтетические характеристики (содержание в клетках тритерпеновых гликозидов; биологическую активность экстрактов биомассы) и сопоставить их с коллекционным штаммом Ро/уус/оу ДИсфИа.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

• Получить культуры клеток двух видов полисциаса: Ро1узааз /гийсоБа и Ро1у5СШ8 У\licifolia

• Исследовать ростовые и биосинтетические характеристики (содержание тритерпеновых гликозидов) полученных культур клеток, а также сравнить их с коллекционным штаммом Ро1узс1ая /Шс1/оИа, используемого для производства нутрицевтика «Витагмал».

• Разработать тест-системы для быстрого скрининга стимулирующей и адаптогенной биологической активности растительных экстрактов и индивидуальных биологически-активных веществ (тритерпеновых гликозидов).

• Исследовать биологическую активность экстрактов полученных культур клеток и коллекционного штамма полисциаса и сопоставить биологическую активность экстрактов с содержанием в них тритерпеновых гликозидов.

Научная новизна работы

Получены новые линии культур клеток Ро1увс1а$/гиНсояа и Ро1узс'ш$ АИЫ/оИа, при этом культура клеток Ро1узс1ая /гиНсоза - впервые. В полученных линиях показано наличие тритерпеновых гликозидов с олеаноловой кислотой в качестве агликона. Исследована динамика накопления этих соединений в процессе цикла субкультивирования. Установлено, что полученные линии значительно отличаются от коллекционного штамма Ро^аая fllicifolia как по ростовым характеристикам, так и по содержанию тритерпеновых гликозидов.

Разработаны оригинальные тест-системы для определения стимулирующей и адаптогенной биологической активности экстрактов: для исследования стимулирующей активности - тест на прорастание пыльцевых зерен, для оценки адаптогенной активности - влияние экстрактов на пролиферацию культур клеток человека под действием токсического, низко-и высокотемпературных стрессов. С использованием разработанных тест-систем впервые продемонстрировано адаптогенное действие экстрактов всех исследуемых культур клеток полисциаса. Исследована биологическая активность индивидуальных гинзенозидов, при этом малонил-Шэ1 (выделенного из культуры клеток Рапах ]аротси8) и полисциазидов (выделенных из листьев Ро1узс1аз /ИШ/оИа) - впервые. Впервые показано, что максимальной активностью обладают наиболее низкомолекулярные тритерпеновые гликозиды: ладигинозид А и гинзенозиды ЯЬ-группы с гликозилированием только по СЗ атому агликона.

Научно-практическая ценность работы

Получены новые штаммы культур клеток растений Ро1узс'тзА1Ш/оИа и Ро1у8сш8 /гиНсоза, биомасса которых содержит тритерпеновые гликозиды, и которые могут быть использованы в фармацевтической, пищевой и косметической промышленности. Разработаны тест-системы для определения адаптогенной и стимулирующей активности растительных экстрактов и индивидуальных БАВ (тритерпеновых гликозидов), которые могут быть использованы как для скрининга биологической активности экстрактов (в том числе при оптимизации условий выращивания), так и для изучения свойств отдельных веществ. Полученные результаты могут быть использованы при исследовании прикладных вопросов биотехнологии, фармакологии и фундаментальных проблем физиологии растений.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Суханова, Елена Сергеевна

выводы

1. Получены культуры клеток двух видов полисциаса: Polyscias fruticosa и Polyscias filicifolia и выявлен их высокий морфогенный потенциал в течение первого года культивирования; установлено, что тип морфогенеза зависит от используемого ауксина - на средах с НУК происходит ризогенез, на средах с 2,4-Д - эмбриогенез.

2. Проведен анализ физиологических характеристик полученных культур клеток в сопоставлении с коллекционным штаммом Polyscias filicifolia, показаны более высокие ростовые характеристики вновь полученных культур.

3. Анализ содержания ДНК в культурах клеток Polyscias spp. показал, что «новые» штаммы представлены преимущественно диплоидными клетками, тогда как коллекционной штамм - клетками более высокой плоидности, что, возможно, связано с его длительным культивированием.

4. Установлено, что полученные культуры клеток Polyscias fruticosa и Polyscias filicifolia содержат тритерпеновые гликозиды (полисциазиды А, Е, 3 и ладигинозид А), тогда как в коллекционном штамме их не обнаружено, что может быть следствием длительного выращивания этого штамма.

5. Разработаны методы экспресс-оценки (скрининга) адаптогенной и стимулирующей биологической активности растительных экстрактов и с их помощью проведен анализ как экстрактов из культур клеток Polyscias spp. и Panax japonicus, так и содержащихся в экстрактах индивидуальных тритерпеновых гликозидов.

6. Установлено, что биологическая активность индивидуальных гинзенозидов зависит от особенностей их химической структуры. Наличие дополнительной ОН-группы (у протопанаксодиола, по сравнению с протопанаксотриолом), как и присоединение остатка малоновой кислоты, может лишать эти соединения биологической активности.

7. Для всех исследуемых экстрактов выявлена адаптогенная активность, тогда как стимулирующее действие установлено только для экстрактов

Ро1узЫаз fllicifolia и Рапах }аротсш. Показано, что определяемая биологическая активность экстракта не всегда коррелирует с содержанием в нем тритерпеновых гликозидов и их характером активности, что указывает на наличие в экстрактах других биологически активных веществ 8. Поскольку биологическая активность экстрактов биомассы культур клеток не строго зависит от содержания в них основных вторичных метаболитов, для определения практической ценности штамма-продуцента, наряду с анализом биологически-активных веществ, необходим мониторинг биологической активности экстрактов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Суханова, Елена Сергеевна, 2013 год

1. Баландин Д.А. (1955) Химический состав женьшеня. Материалы к изучению женьшеня и лимонника, 2, 77-96.

2. Барыкина Р.П., Вссслова Т.Д., Девятое А.Г., Джалилова Х.Х., Ильина Г.М., Чубатова Н.В. (2000) Основы микротехнических исследований в ботанике. Справочное руководство, М.: изд-во МГУ, 127 с.

3. Барыкина Р.П., Веселова Т.Д., Девятов А.Г., Джалилова Х.Х., Ильина Г.М., Чубатова Н.В. (2000) Основы микротехнических исследований в ботанике. Справочное руководство, М., МГУ — 127 с.

4. Брехман И.И. (1957) Женьшень. Л: Медгиз, 181 с.

5. Брехман И.И., Дардымов И.В., Добряков Ю.И. (1966) К фармакологии индивилдуальных гликозидов из корней женьшеня (Panax ginseng). Фармакология и токсикология, 2, 167-170.

6. Бржихнач Б., Шаповалов В.К., Севрюк Н.И. (1982) К фармакогностической характеристике листьев Panax ginseng С. А. Меу. Раст. ресурсы, 18(3), 357-363.

7. Бутенко Р.Г. (1964) Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 162 с.

8. Бутенко Р.Г. (1981) Культура клеток растений. М.: Наука, 166 с.

9. Бутенко Р.Г. (1999) Биология клеток высщих растений in vitro и биотехнологии на их основе. М.: ФБК-Пресс, 152 с.

10. Бутенко Р.Г., Гусев М., Корженевская Т., Юрина Т. (1981) Влияние возраста суспензионных культур диоскореи и табака на репродуктивную выживаемость и характер роста клеток. Физиология растений, 28(3), 562-569.

11. Бутенко Р.Г., Слепян Л.И., Хретонова Т.И., Михайлова И,В., Высоцкая Р.И. (1979) Изучение некоторых штаммов культур тканейтрех видов Panax L. как возможных источников стимулирующих препаратов. Раст. ресурсы, 15(2), 265-270.

12. Бутенко Р.Г. (1979) Изучение некоторых штаммов культуры ткани трёх видов женьшеня, как возможных источников стимулирующих препаратов. Раст. Ресурсы, 15(2), 265-268.

13. Высоцкая Р.И., Слепян Л.И. (1980) Культура ткани женьшеня. Сообщение 1. Химический состав биомассы культуры ткани женьшеня. Растит. Ресурсы, 16(1), 124-129.

14. Галицкий В. А. (2009). Эпигенетическая природа старения. Цитология, 51, 388-397.

15. Гамбург К.З., Рекославская Н.И., Швецов С.Г. (1990) Ауксины в культурах тканей и клеток растений. Новосибирск: Наука, 243 с.

16. Грушвицкий И.В. (1963) Семейство аралиевых и некоторые биологические особенности его представителей. Материалы к изучению женьшеня и др. лекарственных растений Дальнего Востока, 5, 173-191.

17. Грушвицкий И.В. (1981) Семейство аралиевые (Araliaceae). В сб. Жизнь растений, под ред. Тахтаджяна А.Л., т.5, ч.2. М.: Просвещение, с. 297-302.

18. Грушвицкий И.В., Скворцова Н.Т., Ха Т.З., Арнаутов H.H. (1985) Конспект семейства Araliaceae Juss. флоры Вьетнама. Новости систематики высших растений, 22, 153-191.

19. Губарь С.И., Гулько Т.П., Кунах В.А. (1997) Рост и накопление гликозидов в каллусной культуре тканей женьшеня при длительном воздействии экзогенных фитогормонов. Физиология растений, 44(1), 97-103.

20. Демидова Е.В., Носов A.M., Решетняк О.В. (2006) Влияние состава питательных сред на ростовые характеристики и содержаниетритерпеновых гликозидов суспензионной культуры клеток женьшеня японского (Panax japonicus var. repens). Биотехнология, 2, 32-39.

21. Клюшин А.Г. (2000) Характеристика суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia ВаИеупри различных способах культивирования. Дисс. канд. биол. Наук, Москва: ИФР РАН 112 с.

22. Котин A.M. (2001) В поисках средства от всех заболеваний. Витагмал. Спб.: ЗАО НПФ «Биофармтокс», 28 с.

23. Кудряшова O.A., Волотович A.A., Зубарев A.B., Решетников В.Н. (2003) Регуляция каллусогенеза Nicotiana tabacum L. соединениями стероидной природы. Растительные ресурсы, 39(2), 103-113.

24. Лекис A.B., Машанаускас Т.К., Иванов Л.Л. Лукошявичюс Л.Ю., Кунах В.А., Коваленко М.И., Прашкявичюс А.К., Ельская A.B. (1988) Влияние культивируемых клеток полисциаса на биосинтез белка в печени кроликов. Химико-фармацевтический журнал, 22(8), 970-973.

25. Липский А.Х. (1993) Физиология роста клеток растений в биореакторах (периодические режимы): автореф. дис. канд. биол. наук. М.: ИФР РАН, 25 с.

26. Липский А.Х., Черняк Н.Д. (1983) Влияние температуры на культуру клеток диоскореи дельтовидной при глубинном выращивании. Физиология растений, 30(3), 437-447.

27. Носов A.M. (1994) Функции вторичных метаболитов растений in vivo и in vitro. Физиология растений, 41(6), 873-878.

28. Носов A.M. (2011) Методы оценки и характеристики роста культур клеток высших растений. Молекулярно-генетические и биохимические методы в современной биологии растений, под ред. Вл.В. Кузнецова, В.В. Кузнецова, Г.А. Романова. М.: БИОНОМ, с. 386-403.

29. Писецкая Н.Ф. (1970) К вопросу о подборе питательной среды для культуры тканей женьшеня. Раст. ресурсы, 6(4), 517-520.

30. Попов A.M. (2006) Механизмы биологической активности гликозидов женьшеня: сравнение с ликозидами голотурий. Вестник ДВО РАН, 6, 92-104.

31. Прозина М.Н. (1960) Ботаническая микротехника. М.: Высшая школа, 208 с.

32. Самыгин Г.А., Волкова Л.А., Попов A.C. (1985) Сравнение разных методов для оценки жизнеспособности клеток суспензионных и каллусных культур. Физиология растений, 32, 813-817.

33. Слепян JI. И., Арнаутов Н. Н., Грушвицкий И. В. (1975а) Культура тканей некоторых видов рода Polyscias J. R. et G. Forst. (Araliaceae). Раст. ресурсы, 11(2), 198-204.

34. Слепян JI. И., Джабава JI. А., Лощилина И. А. (19756) Химическое и фармакологическое изучение биомассы культуры тканей Polyscias filicifolia Bailey. Раст. ресурсы, 11(4), 523-528.

35. Слепян Л.И., Михайлова Н.В., Кублашвили Ц.Г. (1978) Строение корней Polyscias filicifolia Bailey in vivo и in vitro. Растительные ресурсы, 14, 100-106.

36. Смоленская И.Н., Ралдугина Г.Н. (1981) Культура протопластов из суспензии клеток сахарной свеклы. Физиол. растений, 28(5), 10221029.

37. Смоленская И.Н., Решетняк О.В., Суханова Е.С., Воевудская С.Ю., Носов A.M. (2012) Увеличение синтеза гинзенозидов в суспензионной культуре клеток женьшеня настоящего при действии регуляторов роста. Вестник МарГТУ, 14, 96-100.

38. Суханова Е.С., Черняк Н.Д., Носов A.M. (2010) Получение и характеристика каллусных и суспензионных культур клеток Polyscias filicifolia и Polyscias fruticosa. Биотехнология, 4, 44-50.

39. Трилис Я.Г., Давыдов В.В., Слепян Л.И. (2005) Влияние препаратов культуры тканей Panax ginseng С.А. Меу и Polyscias filicifolia Bailey (Araliaceae) на течение постстрессорных реакций. Психофармакология и биологическая наркология, 5(4), 1071-1080.

40. Тулупова Е.С., Остроженкова Е.Г., Слепян. Л.И., Саканян Е.И. (2002) Влияние различных цитокининов на рост селективных штаммов Panax ginseng С.А.Меу и Panax quinqiiefolius L. с герматраном Lx 5 и содержание в них гликозидов. Биотехнология, 3, 30-36.

41. Хейл А. (1969) Микроспектрофотометрия окраски по Фёльгену и ее связь с другими цитохимическими методами. Введение в количественную цитохимию, М.: Мир, с. 155-166.

42. Ходаковская М.В., Булгаков В.П., Маханьков В.В. (1995) Влияние фитогормонов на накопление биомассы и содержание гинзенозидов в каллусных культурах Panax ginseng С.А. Меу. Биотехнология, 9-10, 40-45.

43. Чернявская Т.Н., Холодова В.П. (1977) Выращивание клеток сахарной свеклы методом суспензионных культур. Физиол. растений, 24(4), 867-873.

44. Abdel-Wahhab M.A., Mohamed A.A., Ibrahim A., El-Nekeety A.A., Hassan N.S. (2012) Panax ginseng CA Meyer extract counteracts theoxidative stress in rats fed multi-mycotoxins-contaminated diet. Comunicata Scientiae, 3(3), 143-153.

45. Abdoul-Azize S., Bendahmane M., Hichami A., Dramane G., Simonin A.M., Benammar C., Sadou H., Akpona S., El Boustani E.S., Khan

46. N.A. (2012) Effects of Zizyphus lotus L.(Desf.) polyphenols on Jurkat cell signaling and proliferation. International Immunopharmacology, 15(2), 364-371.

47. Abraham R.T., Weiss A. (2004) Jurkat T cells and development of the T-cell receptor signalling paradigm. Nature Reviews Immunology, 4(4), 301308.

48. Agier C., Bister-Miel F., Guignard J.L. (1983) Etude de la vitesse moyenne de croissance d'une suspension cellulaire de Silene alba; influence de macroelements du milieu de culture. Bull. Soc. Bot. Fr. Lett. Bot., 130(4-5), 291-300.

49. Attele A.S., Xie J.T., Yuan C.S. (2000) Treatment of insomnia: an alternative approach. Alternative Medicine Review, 5(3), 249-259.

50. Baek S.H., Bae O.N., Park J.H. (2012) Recent methodology in Ginseng analysis. J. Ginseng Res., 36(2), 119-134.

51. Barow M., Meister A. (2003) Endopolyploidy in seed plants is differently correlated to systematics, organ, life strategy and genome size. Plant, Cell & Environment, 26(4), 571-584.

52. Benammar C., Hichami A., Yessoufou A., Simonin A.M., Belarbi M., Allali H., Khan N.A. (2010) Zizyphus lotus L.(Desf.) modulates antioxidant activity and human T-cell proliferation. BMC complementary and alternative medicine, 10(1), 54-59.

53. Benishin C. (1992) Actions of ginsenoside Rbl on choline uptake in central cholinergic nerve endings. Neurochem Int., 21, 1-5.

54. Benito Moreno R.M., Macke F., Alwen A., Heberle-Bors E. (1988) In situ seed production with in vitro matured, isolated pollen. Planta, 176, 145-148.

55. Bespalov V.G., Alexandrov V.A., Limarenko A.Y., Voytenkov B.O., Okulov V.B., Kabulov M.K., Peresunko A.P., Slepyan L.I., Davydov

56. Bhargava H.N., Ramarao P. (1991) The effect of Panax ginseng on the development of tolerance to the pharmacological actions of morphine in the rat. General Pharmacology: The Vascular System, 22(3), 521-525.

57. Bhattacharya S.K., Mitra S.K. (1991) Anxiolytic activity of Panax ginseng roots: an experimental study. Journal of ethnopharmacology, 34(1), 87-92.

58. Bisignano G., Sanogo R., Marino A., Aquino R., Germano M.P., De Pasquale R., Pizza C. (2000) Antimicrobial activity of Mitracarpus scaber extract and isolated constituents. Letters in applied microbiology, 30(2), 105-108.

59. BonfiIl M., Cusido R.M., Palazon J., Pinol M„ Morales C. (2002) Influence of auxins on organogenesis and ginsenosides production in Panax ginseng calluses. Plant cell, Tissue and organ culture, 68, 73-78.

60. Bowie L.E., Roscoe W.A., Lui E.M., Smith R., Karlik S.J. (2012) Effects of an aqueous extract of North American ginseng on MOG (35-55)-induced EAE in mice. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 90(7), 933-939.

61. Chan P., Hong C.Y., Tomlinson B., Chang N.C., Chen J.P., Lee S.T., Cheng J.T. (1997) Myocardial protective effect of trilinolein: An antioxidant isolated from the medicinal plant Panax pseudoginseng. Life sciences, 61(20), 1999-2006.

62. Chan P., Kao P., Tomlinson B. (2005) Cardiovascular effects of trilinolein, a natural triglyceride isolated from the herb sanchi (Panax notoginseng). Acta Cardiológica Sínica, 21(2), 71-76.

63. Chan R.Y., Chen W. F., Dong A., Guo D., Wong M.S. (2002) Estrogenlike activity of ginsenoside Rgl derived from Panax notoginseng. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 87(8), 3691-3695.

64. Chen F.D., Wu M.C., Wang H.E., Hwang J.J., Hong C.Y., Huang Y.T., Yen S.H., Ou Y.H. (2001) Sensitization of a tumor, but not normal tissue, to the cytotoxic effect of ionizing radiation using Panax notoginseng extract. Am J. Chin. Med., 29, 517-524.

65. Cho S.W., Cho E.H., Choi S.Y. (1995) Ginsenosides activate DNA polymerase delta from bovine placenta. Life Sci., 57, 1359-1365.

66. Choi K.T. (2008) Botanical characteristics, pharmacological effects and medicinal components of Korean Panax ginseng CA Meyer. Acta Pharmacologica Sinica, 29(9), 1109-1118.

67. Choi Y.E. (2007) Ginseng. Biotechnology in Agriculture and Forestry, 61, 149-168.

68. Chuang W.C., Wu H.K., Sheu S.J., Chiou S.H., Chang H.C., Chen Y.P.2007) A comparative study on commercial samples of ginseng radix. Planta medica, 61(05), 459-465.

69. Cogo E., Lai K. (2003) Should ginseng be considered for cancer prevention. Univ Toronto Med J, 80, 153-155.

70. Corbit R.M., Ferreira J.F.S., Ebbs S.D., Murphy L.L. (2005) Simplified extraction of ginsenosides from American ginseng (Panax quinquefolius L.) for high-performance liquid chromatography-ultraviolet analysis. J. Agric. Food Chem., 53, 9867-9873.

71. Dewick P.M. (2002) Medicinal Natural Products: a biosynthetic approach, 2nd ed., John Wiley & Sons, New York, 515 p.

72. DoIezel J., Bartos J. (2005) Plant DNA flow cytometry and estimation of nuclear genome size. Annals of Botany, 95, 99-110.

73. DoIezel J., Greilhuber J., Lucretti S., Meister A., Lysak M.A., Nardi L., Obermayer R. (1998) Plant genome size estimation by flow cytometry: Inter-laboratory comparison. Annals ob Botany, 82 (Suppl. A), 17-26.

74. DDrnenburg H., Knorr D. (1995) Strategies for the improvement of secondary metabolite production in plant cell cultures. Enzyme and Microbial Technology, 17(8), 674-684.

75. Drapeau D., Blanch H.W., Wilke C.R. (1986) Growth kinetics of Dioscorea deltoidea and Catharanthus roseus in batch culture. Biotech. Bioeng., 28, 1555-1563.

76. Duhan O.M., Baryliak I.R., Nester T.I., Dvornyk A.S., Kunakh V.A. (1999) The antimutagenic activity of biomass extracts from the cultured cells of medicinal plants in the Ames test. Tsitol Genet., 33(6), 19-25.

77. Eriksson T. (1967) Duration of the mitotic cycle in cell cultures of Haplopappus graciluis. Physiol, plantarum, 20(3), 348-354.

78. Filaretov A.A., Bogdanova T.S., Mityushov M.I., Podvigina T.T., Srailova G.T. (1986) Effect of adaptogens on activity of the pituitary-adrenocortical system in rats. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 101(5), 627-629.

79. FiIkuka J., Kleinwachter V. (1981) Basic staining of cell nuclei. Medical Faculty of Purkyne University, Brno, 158 p.

80. Fukushima S.H., Wanibuchi H., Li W. (2001) Inhibition by ginseng of colon carcinogenesis in rats. J. Korean Med. Sci., 16, 75-80.

81. Furmanowa M., Nosov A.M., Oreshnikov A.V., Klushin A.G., Kotin A.M., Starosciak B., Sliwinska A., Guzewska J., Bloch R. (2002) Antimicrobial activity of Polyscias filicifolia cell biomass extracts. Pharmazie, 57(6), 424-426.

82. Gao H., Wang F., Lien E.J., Trousdale M.D. (1996) Immunostimulating polysaccharides from Panax notoginseng. Pharm Res., 13, 1196-1200.

83. Gautheret R.J. (1939) Sur la possibilité de réaliser la culture indéfinie des tissus de tubercules de carotte. Compt. Rend. l'Acad. Sci, 208, 118-120.

84. Gautheret R.J. (1934) Culture du tissu cambial. Compt. Rend. l'Acad. Sci, 198, 2195-2196.

85. George E.F., Hall M.A., De Klerk G.J. (2008) Plant propagation by tissue culture. Volume 1. The Background. 3rd ed. Springer, XII, 502 p.

86. Georgiev M.I., Weber J., Maciuk A. (2009) Bioprocessing of plant cell cultures for mass production of targeted compounds. Appl. Microbiology and Biotechnology, 83(5), 809-823.

87. Gottlieb R.A., Nordberg J., Skowronski E., Babior B.M. (1996) Apoptosis induced in Jurkat cells by several agents is preceded by intracellular acidification. Proceedings of the National Academy of Sciences, 93(2), 654-658.

88. Greilhuber J. (2005) Intraspecific variation in genome size in Angiosperms: Identifying its existence. Annals of Botany, 95, 91-98.

89. GreiIhuber J. (2008) Cytochemistry and C-values: the less-well-known world of nuclear DNA amounts. Ann Bot, 101(6), 791-804.

90. GreiIhuber J., Dolezel J., Lysak M.A., Bennett M.D. (2005) The origin, evolution and proposed stabilization of the terms 'Genome size' and 'C-value' to describe nuclear DNA. Contents Annals of Botany, 95(1), 255260.

91. Haidara K., Alachkar A., AI Moustafa A.E. (2011) Teucriiun polium plant extract provokes significant cell death in human lung cancer cells. Health, 3(6), 366-369.

92. Han L.K., Zheng Y.N., Yoshikawa M., Okuda H., Kimura Y. (2005) Anti-obesity effects of chikusetsusaponins isolated from Panax japonicus rhizomes. BMC Complementary and Alternative Medicine, 5,9.

93. Helms S. (2004). Cancer prevention and therapeutics: Panax ginseng. Alternative medicine review: a journal of clinical therapeutic, 9(3), 259.

94. Hostettmann K., Kizu H., Tomimori T. (1982) Molluscicidal properties of various saponins. Planta Med, 44(1), 34-35.

95. Hu C., Kitts D.D. (2001) Free radical scavenging capacity as related to antioxidant activity and ginsenoside composition of Asian and North American ginseng extracts. Journal of the American Oil Chemists' Society, 78, 249-255.

96. Huan V.D., Yamamura S., Ohtani K., Kasai R., Yamasaki K., Nham N.T., Chau H.M. (1998) Oleanane saponins from Polyscias fraticosa. Phytochemistry, 47(3), 451-457.

97. Huand S.Y., Chen S.Y. (1998) Efficient L-DOPA production by Stizolobium hassjoo cell culture in a two stage configuration. Journal of biotechnology, 62, 95-103.

98. Ji L.L., Peterson D.M. (2004) Aging, exercise, and phytochemicals: promises and pitfalls. Ann N YAcadSci; 1019: 453-461.

99. Kang K.S., Kim H.Y., Pyo J.S., Yokozawa T. (2006) Increase in the free radical scavenging activity of ginseng by heat-processing. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 29, 750-754.

100. Kasauskas A., Rodovicius H., Viezeliene D., Lazauskas R. (2009) Effect of anoxia and Polyscias filicifolia Bailey biomass tincture on the activity of tRNA and aminoacyl-tRNA synthetases in isolated pig heart. Medicina (Kaunas), 45(6), 486-492.

101. Kejnovsky E., Leitch I.J., Leitch A.R. (2009) Contrasting evolutionary dynamics between angiosperm and mammalian genomes. Trends in Ecology and Evolution, 24(10), 572-582.

102. Kenarova B., Neychev H., Hadjiivanova C., Petkov V.D. (1990) Immunomodulating activity of ginsenoside Rgl from Panax ginseng. Japanese Journal of Pharmacology, 54, 447-454.

103. Keum Y.S., Park K.K., Lee J.M., Chun K.S.,Park J.H.,Lee S.K., Kwon H., Surh Y.J. (2000) Antioxidant and anti-tumor promotingactivities of the methanol extract of heat-processed ginseng. Cancer Letters, 150, 41-48.

104. Keyes G.J., Collins G.B., Taylor N.L. (1980) Genetic variation in tissue cultures of red clover. Theoretical and Applied Genetics, 58(6), 265271.

105. Kim J.Y., Germolec D.R., Luster M.I. (1990) Panax Ginseng as a Potential Immunomodulator: Studies in Mice. Immunopharmacology and Immunotoxicology, 12, 257-276.

106. Kim Y.K., Guo Q., Packer L. (2002) Free radical scavenging activity of red ginseng aqueous extracts. Toxicology, 172, 149-156.

107. Kim Y.S., Kim S.I., Hahn D.R. (1988) Effect of polyacetylene compounds from Panax ginseng on macromolecular synthesis by lymphoid leukemia L1210. YakhakHoechi, 32, 137-140.

108. King P. J., Mansfiteld K.J., Street H.E. (1973) Control of growth and cell division in plant cell suspension cultures. Can. J. Bot., 51(11), 1807-1823.

109. Kolewe M.E., Gaurav V., Roberts S.C. (2008) Pharmaceutical^ Active Natural Product Synthesis and Supply via Plant Cell Culture Technology. Mol.Pharmaceutics, 5(2), 243-256.

110. Komatsu K., Zhu S., Sasaki Y. (2004) Systematic pharmacognostical study on Panax drugs and Curcuma drugs Phylogenetic analysis, molecular authentication and quality evaluation. Journal of Traditional Medicines, 21(6), 251-270.

111. Kondorosi E., Roudier F., Gendreau E. (2000) Plant cell-size control: growing by ploidy? Current Opinion in Plant Biology, 3(6), 488492.

112. Konoshima T. (1999) Cancer chemo preventive activities of Panax notoginseng and ginsenoside Rgl. Stud. Plant. Sci., 6, 36-42.

113. Konoshima T., Takasaki M., Tokuda M. (1996) Anti-tumor-promoting activities of the roots of Panax notoginseng. Natural Medicines, 50, 158-162.

114. Kreuger M., van der Meer W., Postma E., Abbestee R., Raaijmakers N., van Hoist G.-J. (1996) Genetically stable cell lines of cucumber for the large-scale production of diploid somatic embryos. Physiologia Plantarum, 2, 303-310.

115. Kristen U., Friedrich R.E. (2006) Toxicity screening of mouthwashes in the pollen tube growth test: safety assessment of recommended dilutions. Brazilian Dental Journal, 17(1), 58-62.

116. Kristen U., Hoppe U., Pape W. (1993) The pollen tube growth test: a new alternative to the Draize eye irritation assay. Journal-Society of Cosmetic Chemists, 44, 153-153.

117. Kristen U., Kappler R. (1995) The pollen tube growth test. In: Methods in Molecular Biology, O'Hare S., Atterwill C.K. (eds.), Humana Press Inc., Totowa, NJ, p. 189-198.

118. Kudo N., Kimura Y. (2002) Nuclear DNA endoreduplicationduring petal development in cabbage: relationship between ploidy levels and cell size. J. Exp. Bot., 53(371), 1017-1023.

119. Kutchan T.M., Ayabe S., Krueger R.J., Coscia E.M., Coscia C.J. (1983) Cytodifferentiation and alkaloid accumulation in cultured cells of Papaver bracteatum. Plant Cell Reports, 2(6), 281-284.

120. Lee F.C. (1992) Facts about ginseng. The elixir of life. Elizabeth, New Jersey: Hollyn International Corporation, 140 p.

121. Leung K.W., Wong A.S.T. (2010) Pharmacology of ginsenosides: a literature review. Chinese Medicine , 5:20-26.

122. Li S.H., Chu Y.A. (1999) Anti-inflammatory effects of total saponins of Panax notoginseng. Pharmacologica Sinica, 20, 551-554.

123. Lim W., Mudge K.W., Vermeylen F. (2005) Effects of population, age, and cultivation methods on ginsenoside content of wild american ginseng {Panax quinquefolium). J. Agric. Food Chem., 53(22), 8498-8505.

124. Liu K.Z., Li J.B., Lu H.L., Wen J.K., Han M. (2004) Effects of astragalus and saponins of Panax notoginseng on MMP-9 in patients with type 2 diabetic macroangiopathy. Chin. J. Chin. Mater. Med., 29, 264-266.

125. Mahady G.B., Gyllenhaal C., Fong H.H.S., Farnsworth N.R.2000) Ginsengs: a review of safety and efficacy. Nutrition in Clinical Care, 3(2), 90-101.

126. Masters J.R. (2002) HeLa cells 50 years on: the good, the bad and the ugly. Nature Reviews Cancer, 2(4), 315-319.

127. Matsunaga H., Katano M., Yamamoto H., Fujito H., Mori M., Takata K. (1990) Cytotoxic activity of polyacetylene compounds in Panax ginseng CA Meyer. Chemical & pharmaceutical bulletin, 38(12), 34803482.

128. Matsunaga H., Saita T., Nagumo F., Mori M., Katano M. (1995) A possible mechanism for the cytotoxicity of a polyacetylenic alcohol, panaxytriol: inhibition of mitochondrial respiration. Cancer chemotherapy and pharmacology, 35(4), 291-296.

129. Melaragno J.E., Mehrotra B., Coleman A.W. (1993) Relationship between endopolyploidy and cell size in epidermal tissue of arabidopsis. The Plant Cell November, 5(11), 1661-1668.

130. Mishiba K., Okamoto T., Mii M. (2001) Increasing ploidy level in cell suspension cultures of Doritaenopsis by exogenous application of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. Physiologia Plantarum, 112(1), 142-148.

131. Miura Y., Hirata K., Kurano N. (1987) Isolation of vinblastine in callus culture with differentiated roots of Catharanthus roseus (L.) G. Don Vinca rosea, Agr. and Biol. Chem., 51, 611-614.

132. Miyoshi N., Nakamura Y., Ueda Y., Abe M., Ozawa Y., Uchida K., Osawa T. (2003) Dietary ginger constituents, galanals A and B, arepotent apoptosis inducers in Human T lymphoma Jurkat cells. Cancer letters, 199(2), 113-119.

133. Murashige T., Scoog F. (1962) A revised medium for rapid growth and bio assays with Tobacco tissue culture. Physiology Plantarum, 15, 473497.

134. Ng T.B. (2010). Pharmacological activity of sanchi ginseng (Panax notoginseng). Journal of pharmacy and pharmacology, 58(8), 1007-1019.

135. Niks M., Otto M. (1990) Towards an optimized MTT assay. J. Immunol. Meth., 130, 149-151.

136. Nitsch J.P. (1965) Deux especes photoperiodiques de jours courts: Plumbago indica L. et P. zeylanica L. Bull Soc Bot Fr, 9, 517-522.

137. Nobécourt P. (1939) Sur la pérennité et l'augmentation de volume des cultures de tissues végétaux. Compt. Rend. Soc. Biol., 130, 1270-1271.

138. Nocerino E., Amato M., Izzo A.A. (2000) The aphrodisiac and adaptogenic properties of ginseng. Fitoterapia, 71, S1-S5.

139. Nosov A.V., Globa E.B., Zoriniants S.E. (2003) Trends in nuclear DNA content variations of long-term cell suspension cultures. In:

140. Abstracts, VIII Int. Conf. "The Biology of Plant Cells in vitro and Biotechnology ", Saratov, p. 226.

141. Nosov A. V., Smolenskaya I.N., Nosova A.L. (1983) Cytophotometric study of DNA-fuchsin complex in cultured mesophyll protoplasts of Nicotiana tabacum and Vicia faba. Biologia Plantarum (Praha), 25, 173-179.

142. Paek K.Y.,Murthy H.N.,Hahn E.J.,Zhong J.J. (2009) Large scale culture of ginseng adventitious roots for production of ginsenosides. Advances in Biochemical Engineering. Biotechnology, 113, 151-176.

143. Park J.D., Rhee D.K., Lee Y.H. (2005) Biological Activities and Chemistry of Saponins from Panax ginseng C. A. Meyer. Phytochemistry Reviews, 4, 159-175.

144. Pellicer J., Fay M.F., Leitch I.J. (2010) The largest eukaryotic genome of them all? Botanical Journal of the Linnean Society, 164(1), 1015.

145. Pererva T.P., Miryuta A.Y., Moisa L.N., Mozhylevskaya L.P., Kunakh V.A. (2010) Interaction of plant extracts of Ungernia victoris, Rhodiola rosea, and Polyscias filicifolia with a bacterial cell. Cytology and Genetics, 44(4), 221-226.

146. Plunkett G.M., Lowry II P.P., Vu N.V. (2004) Phylogenetic relationships among Polyscias (Araliaceae) and close relatives from the western Indian ocean basin. International Journal of Plant Sciences, 165(5), 861-873.

147. Poudyal D., Le P.M., Davis T., Hofseth A.B., Chumanevich A., Chumanevich A.A., Hofseth L.J. (2012) Hexane fraction of american ginseng suppresses colitis and colon cancer—response. Cancer Prevention Research, 5(7), 983-983.

148. Qi L.W., Wang C.Z., Yuan C.S. (2011a) Ginsenosides from American ginseng: chemical and pharmacological diversity. Phytochemistry, 72, 689-699.

149. Qi L.W., Wang C.Z., Yuan C.S. (2011b) Isolation and analysis of ginseng: advances and challenges. Natural product reports, 28(3), 467-495.

150. Rahbari R., Sheahan T., Modes V., Collier P., Macfarlane C., Badge R.M. (2009) A novel LI retrotransposon marker for HeLa cell line identification.BioTechniques, 46(4), 277-284.

151. Rai D., Bhatia G., Sen T., Palit G. (2003) Anti-stress effects of Ginkgo biloba and Panax ginseng: a comparative study .Journal of pharmacological sciences, 93(4), 458-464.

152. Ramasamy S., Abdul Wahab N., Zainal Abidin N., Manickam S. (2012) Effect of extracts from Phyllanthus watsonii Airy Shaw on cell apoptosis in cultured human breast cancer MCF-7 cells. Experimental and Toxicologic Pathology, 65(3), 341-349.

153. Rao S.R., Ravishankar G.A. (2002) Plant cell cultures chemical factories of secondary metabolites. Biotechnology Advances, 20, 101-153.

154. Razdan M.K. (2003) Introduction to Plant Tissue Culture. New Delhi: Oxford and IBH Publishing Co., 377 p.

155. Roberts S.C. (2007) Production and engineering of terpenoids in plant cell culture. Nature Chemical Biology, 3, 387 395.

156. Saito A., Lee Y., Takagi K., Shibata S., Shoji J., Kondo N. (1977) Pharmacological studies of Panax japónicas rhizome. Chem. Pharm. Bull., 25, 1017-1020.

157. Shibata S. (2001). Chemistry and cancer preventing activities of ginseng saponins and some related triterpenoid compounds. Journal of Korean medical science, 16(SUPP), 28-37.

158. Shibata S., Tanaka O., Shoji J., Saito H. (1985). Chemistry and pharmacology of Panax. Economic and Medicinal Plant Research, 1, 217284.

159. Shilpa K., Varun K., Lakshmi B.S. (2010) An alternate method of natural drug production: elciting secondary metabolite production using plant cell culture. Journal of Plant Sciences, 5(3), 222-247.

160. Sliwiñska A., Olszowska O., Furmanowa M., Nosov A. (2008) Rapid multiplication of Polyscias filicifolia by secondary somatic embryogenesis. In Vitro Cellular & Developmental Biology Plant, 44, 6977.

161. Smirnova Yu.N., Reshetnyak O.V., Smolenskaya I.N., Voevudskaya S.Yu., Nosov A.M. (2010) Effect of growth regulators onginsenoside production in the cell culture of two ginseng species. Russian Journal of Plant Physiology, 57(3), 430-437.

162. Sonnenborn U., Proppert Y. (1991) Ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer). Br. J. Phytother., 2, 3-14.

163. Spinozzi F., Pagliacci M.C., Migliorati G., Moraca R., Grignani

164. F., Riccardi C., Nicoletti I. (1994) The natural tyrosine kinase inhibitor genistein produces cell cycle arrest and apoptosis in Jurkat T-leukemia cells. Leukemia research, 18(6), 431-439.

165. Stone B.C. (1965) Notes on the Type Species of Polyscias J. R. &

166. G. Forst. (Araliaceae). Taxon, 14(8), 281-285.

167. Stone B.C., Loo A.H. (1969). Cytotaxonomic Notes on Some Species of Polyscias (Araliaceae). Journal of Japanese Botany, 44, 321— 327.

168. Stoscheck C.M., Carpenter G. (1983) Biology of the AD431 cell: A useful organism for hormone research. Journal of cellular biochemistry, 23(1 D4), 191-202.

169. Sugimoto-Shirasu K., Roberts K. (2003) "Big it up": endoreduplication and cell-size control in plants. Current Opinion in Plant Biology, 6(6), 544-553.

170. Swift H. (1950) The Constancy of desoxyribose nucleic acid in plant nuclei. Proc Natl Acad Sci USA, 36(11), 643-654.

171. Tanaka O. (1990) Recent studies on glycosides from plant drugs of Himalaya and Southwestern China chemogeographical correlation of Panax species. Pure and applied chemistry, 62(7), 12811284.

172. Tanaka O., Han E.C., Yamaguchi H., Matsuura

173. H.,Murakami T., Taniyama T., Yoshikawa M. (2000) Saponins of plants of Panax species collected in Central Nepal, and theirchemotaxonomical significance. III. Notes Chem. Pharm. Bull., 48(6) 889—892.

174. Tanaka O., Kasai R. (1984) Saponins of ginseng and related plants. Fortschr. Chem. Org. Naturst., 46, 1-76.

175. Thanh N.T., Paek K.Y. (2010) Cell suspension culture Panax ginseng C.A. Meyer: role of plant growth regulators and medium composition on biomass and ginsenoside production. VNU Journal of Science, Natural Sciences and Technology, 26, 191-196.

176. Todaro G.J., Green H. (1963) Quantitative studies of the growth of mouse embryo cells in culture and their development into established lines. The Journal of cell biology, 17(2), 299-313.

177. Tohda C., Matsumoto N., Zou K., Meselhy M.R., Komatsu K. (2004) Ab(25-35)-induced memory impairment, axonal atrophy, and synaptic loss are ameliorated by Ml, a metabolite of protopanaxadiol-type saponins. Neuropsychopharmacology, 29, 860-868.

178. Vanisree M., Lee C.Y., Lo S.F., Nalawade S.M., Lin C.Y., Tsay H.-S. (2004) Studies on the production of some important secondarymetabolites from medicinal plants by plant tissue cultures. Bot. Bull. Acad.Sin., 45, 1-22.

179. Vasil I.K. (2008) A history of plant biotechnology: from the Cell Theory of Schleiden and Schwann to biotech crops. Plant Cell Reports, 27(9), 1423-1440.

180. Vilhar B., Grelhuber J., Koce J.D., Temsch E.M., Dermastia M.2001) Plant genome size measurement with DNA image cytometry. Annals of Botany, 87, 719-728.

181. Vuksan V., Sievenpiper J.L. (2005) Herbal remedies in the management of diabetes: lessons learned from the study of ginseng. Nutrition, metabolism and cardiovascular diseases, 15(3), 149160.

182. Wang C.Z., Yuan C.S. (2011) Panax quinquefolius (American ginseng) and Panax notoginseng (Notoginseng) in cancer chemoprevention. In: Evidence-based Anticancer Materia Medica, Cho W.C.S. (ed.), Springer: New York, 97-109.

183. Wang W., Zhao Y., Rayburn E.R., Hill D.L., Wang H., Zhang R. (2007b) In vitro anti-cancer activity and structure-activity relationships ofnatural products isolated from fruits of Panax ginseng. Cancer chemotherapy and pharmacology, 59(5), 589-601.

184. Weathers P.J., Towler M.J.,Xu J. (2010) Bench to batch: advances in plant cell culture for producing useful products. Applied Microbiology and Biotechnology, 85(5), 1339-1351.

185. White C.M., Fan C., Song J., Dr. Tsikouris J.P., Chow M. (2001) An evaluation of the hemostatic effects of hydrophilic, alcohol, and lipophilic extracts of notoginseng. Pharmacotherapy: The Journal of Human Pharmacology and Drug Therapy, 21, 773-777.

186. White P.R. (1934) Potentially unlimited growth of excised tomato root tips in a liquid medium. Plant Physiol, 9(3), 585-600.

187. White P.R. (1939). Potentially unlimited growth of excised plant callus in an artificial medium. Amer. J. Bot., 26, 59-64.

188. Wink M., Witte L. (1983) Evidence for a wide spread occurrence of the genes of quinolizidine alkaloid biosynthesis. Induction of lkaloid accumulation in cell suspension cultures of alkaloid-«free» species. FEBS Lett., 159, 196-200.

189. Xiaoguang C., Hongyan L., Xiaohong L., Zhaodi F., Yan L., Lihua Т., Rui H. (1998) Cancer chemopreventive and therapeutic activities of red ginseng. Journal of ethnopharmacology, 60(1), 71-78.

190. Xie J.T., Mehendale S., Yuan C.S. (2005) Ginseng and Diabetes. Am. J. Chin. Med., 33, 397.

191. Yamahara J., Kubomura Y., Miki K., Fujimura H. (1987) Antiulcer action of Panax japonicus rhizome. Journal of Ethnopharmacology, 19, 95-101.

192. Yeoman M.M., Miedzybrodzka M.B., Lindsey K., McLauchlan

193. W.R. (1980) The synthetic potential of cultured plant cells. In: Plant cell cultures: results and perspectives, Sala, F., Parisi B., Cella R., Cifferi O. (eds.), Elsevier-North Holland, Amsterdam, pp. 327-343.

194. Yokozawa T., Yasui T., Oura H. (2004) Stimulation of RNA polymerase activity by ginsenoside-Rb2 in diabetic rats. Phytotherapy Research, 1 (3), 240-243.

195. Yuan C.S., Tanaka H. (2011) Bioactivity of American ginseng by knockout extract preparation using monoclonal antibody. Current drug discovery technologies, 8(1), 32-41.

196. Yun T.K. (2001) Panax ginseng—a non-organ-specific cancer preventive? The lancet Oncology, 2, 49-55.

197. Yun T.K., Lee Y.S., Lee Y.H., Kim S.I., Yun H.Y. (2001) Anticarcinogenic effect of Panax ginseng CA Meyer and identification of active compounds. Journal of Korean medical science, 16(SUPP), 6-18.

198. Zhang X.M., Xu Y.H. (2002) The associated regulators and signal pathway in rIL-16/CD4 mediated growth regulation in Jurkat cells. Cell research, 12(5), 363-372.

199. Zhang Y.H., Zhong J.J., Yu J.T. (1996). Enhacement of ginseng saponin production in suspension cultures of Panax notoginseng: manipulation of medium sucrose. Journal of Biotechnology, 51, 49-56.

200. Zhong J. J., Bai Y., Wang S.J. (1996) Effects of plant growth regulators on cell-growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium. J. Biotechnol., 45, 227-234.

201. Zhu S.,Zou K.,Cai S., Meselhy R.M., Komatsu K. (2004) Simultaneous determination of triterpene saponins in ginseng drugs by high-performance liquid chromatography. Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 52(8), 995-998.

202. Эту работу нельзя было бы осуществить без Наталии Юаниловны 'Ч'ерняКг, которая буквально «вырастила» из лтш. ученого-экспериментатора.

203. Мне хотелось бы поблагодарить рецензентов (Елену Анатольевну %алашиикдву, Ларису Ивановну Слепян и Ольгу Ивановну Молкапову - за теплое отношение, внимательное прочтение и критический разбор моей работы.

204. Непременно хочется поблагодарить (Омитрия (Владимировича Дочкина за столь плодотворное сотрудничество и помощь!

205. Нельзя не упомянуть Наталию Павловну Матвееву, подавшей замечательную идею к^моей работе и «познакомившей» лтш с пыльцой.

206. Особая благодарность Марие (Владимировне Шитовой, за постоянную дружескую поддержку, впилшиие и такую приятную и плодотворную совместную работу!

207. Мне было очень приятно работать с крллегалш по лаборатории: Нриной Евгеньевной 1(уличенкр, Оксаной (Владимировной (РешетпяКь Талиной Ивановной Собольковой, Николаем Анатольевичем Щулшло. Они всегда полюгали и поддерживали Л1еня добрым советол1 и шуткой.

208. Н, конечно, я благодарю своих. (Родных и друзей, и, особенно, родитиелей (Вы всегда были рядом, верили в лгеня и полюгали!!!