Синтез тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток Panax japonicus var.repens при разных условиях выращивания тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Демидова, Елена Викторовна

• Демидова, Елена Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Демидова, Елена Викторовна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Систематика, распространение и история изучения видов женьшеня.

1.2. Химический состав физиологически активных соединений женьшеня и их фармакологическое действие.

1.2.1. Тритерпеновые гликозиды растений рода

Panax.

1.2.2. Тритерпеновые гликозиды Panax japonicus

1.2.3. Другие биологически активные соединения женьшеня.

1.2.4. Физиологическая активность биологически активных соединений женьшеня

1.2.5. Физиологическая активность биологически активных соединений P.japonicus

1.2.6. Методы анализа тритерпеновых гликозидов женьшеня

1.3. Женьшень in vitro

1.3.1. Культура клеток и тканей растений рода

Panax

1.3.2. Получение культур клеток и тканей женьшеня

1.3.3. Другие способы культивирования женьшеня in vitro

1.3.4. Физиологическая характеристика культур клеток женьшеня

1.3.5. Оптимизация питательных сред

1.3.6. Использование элиситоров в культуре клеток и тканей женьшеня

1.3.7. Глубинное выращивание суспензионных культур клеток рода Panax

1.3.8. Режимы выращивания суспензионных культур клеток рода Panax

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Объект исследования

2.2 Анализ роста культуры клеток

2.3 Методы определения производных параметров роста

2.4 Химический анализ содержание гинзенозидов в биомассе культуры клеток женьшеня

Результаты и обсуждение

Глава 3. Влияние начальной плотности на ростовые и биосинтетические характеристики суспензионной культуры клеток P. japonicus vox.repens

3.1 Ростовые характеристики суспензионной культуры клеток P. japonicus var. repens при выращивании с разной начальной плотностью.

3.2. Накопление тритерпеновых гликозидов в клетках женьшеня ползучего in vitro, выращиваемых при разной начальной плотности суспензии

Глава 4. Влияние углеводного состава среды на ростовые и биосинтетические характеристики суспензионной культуры клеток P. japonicus vox.repens

4.1. Ростовые характеристики суспензионной культуры клеток Р.japonicus var. repens при выращивании на средах с разным содержанием сахарозы

4.2 Накопление тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток P.japonicus при выращивании в средах с разным содержанием сахарозы.

Глава 5. Изучение влияния метилжасмоната на ростовые и биосинтетические характеристики суспензионной культуры клеток P. japonicus var.repens при выращивании клеток в колбах на качалке.

5.1. Ростовые характеристики суспензионной культуры

P.japonicus var. repens при добавлении разных доз метилжасмоната.

5.2 Накопление тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток P.japonicus var. repens в колбах на качалке при внесении разных доз метилжасмоната

Глава 6. Исследование влияния фитогормонов на ростовые и биосинтетические характеристики суспензионной культуры P.japonicus var. repens.

6.1. Ростовые характеристики суспензионной культуры

P.japonicus var. repens при выращивании на средах с разным содержанием ауксинов в колбах на качалке.

6.2. Накопление тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток P.japonicus var. repens на средах с разным содержанием ауксинов при выращивании в колбах на качалке.

6.3. Ростовые характеристики культуры клеток

P.japonicus var. repens при выращивании на средах с разным содержанием ауксинов в биореакторе.

6.4. Накопление тритерпеновых гликозидов при выращивании культуры клеток P.japonicus var. repens на средах с различным содержанием ауксинов в биореакторе.

6.5. Ростовые характеристики суспензионной культуры клеток P.japonicus var. repens на средах с разным содержанием ауксинов в режиме полупротока.

6.6. Накопление тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре P.japonicus var. repens при выращивании на средах с разным содержанием ауксинов в режиме полупротока.

Глава 7. Выращивание суспензионной культуры клеток

P.japonicus var.repens в режиме проточного культивирования (хемостата)

7.1. Ростовые характеристики суспензионной культуры клеток P.japonicus var.repens при выращивании в режиме протока (хемостата).

7.2. Накопление тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток P.japonicus var. repens при выращивании в режиме протока (хемостата)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток Panax japonicus var.repens при разных условиях выращивания»

Актуальность темы. Культура клеток высших растений может служить удобным объектом для изучения ряда физиологических и биохимических проблем, быть моделью для изучения закономерностей роста и развития растительной клетки. В условиях in vitro растительные клетки, выйдя из под контроля организма, формируют уникальную биологическую систему -популяцию соматических клеток. Это позволяет производить на их основе уникальные исследования, детально изучать механизмы роста и развития популяции, первичного и вторичного метаболизма растительной клетки. Наиболее перспективным представляется исследование вторичного метаболизма в клетках высших растений in vitro. Это может быть использовано в качестве нетрадиционного подхода к решению одной из фундаментальных проблем физиологии растений - функциональной значимости вторичных метаболитов в жизнедеятельности клетки и целого организма.

Помимо использования в фундаментальных исследованиях, культура клеток высших растений является универсальным инструментом, с помощью которого можно решать многие практические задачи. В частности, растительные клетки in vitro могут служить источником ценных веществ растительного происхождения

В настоящее время в мире наблюдается тенденция к широкому использованию лекарственных средств, полученных на основе растительного сырья. Особый интерес уделяется препаратам, направленным на усиление защитных свойств организма и повышение иммунитета, обладающими адаптогенными свойствами. Из всего растительного разнообразия растения рода Panax (женьшень) являются, пожалуй, самыми знаменитыми лекарственными растениями, обладающими подобными свойствами. Женьшень на протяжении веков пользовался легендарной славой панацеи, т.е. всеисцеляющего средства, и в результате разноплановых исследований многие ожидания, связанные с его лекарственными свойствами, подтвердились. Однако, усиление интереса к препаратам, созданным на основе женьшеня, привело к печальным последствиям экологического плана - невосполнимому уничтожению этих реликтовых растений. Например, в Дальневосточном крае нашей страны практически полностью уничтожены дикорастущие формы женьшеня настоящего, причем учитывая биологию его развития, потери действительно невосполнимы.

Растения рода женьшень содержат разнообразные биологически-активные соединения, обуславливающие их лекарственные свойства. Однако уникальными и наиболее интересными из них являются тетрациклические тритерпеновые гликозиды даммаранового ряда - гинзенозиды (панаксизиды). Эти ценные вторичные метаболиты, имеющие высокую биологическую активность. На сегодняшний день открыто более пятидесяти гинзенозидов, ведутся работы по выявлению механизма их действия на человеческий организм. Наибольшее внимание исследователей привлекает в первую очередь гликозиды, полученные из женьшеня настоящего - P.ginseng, т.к. он является традиционным лекарственным растением восточных народов. Однако существуют другие представители рода Panax, использование которых в качестве продуцентов полезных веществ весьма перспективно. К таким растениям можно отнести женьшень ползучий P. japonicus var repens, который многие авторы рассматривают как подвид Panax japonicus -эндемичный вид, произрастающий на Дальнем Востоке нашей страны. Состав гинзенозидов данного вида женьшеня необычен, в нем преобладают гликозиды с олеаноловой кислотой в качестве агликона (чикусетсу-гинзенозиды).

Суспензионная культура клеток данного вида предоставляет возможность исследовать не только закономерности роста, но и особенности биосинтеза тритерпеновых гликозидов при различных способах и методах культивирования. Она может служить моделью для изучения изменения содержания гинзенозидов в зависимости от состава питательных сред, добавления элиситоров, использования биореакторов разных объемов, использования различных режимов культивирования и т.д. Получение тритерпеновых гликозидов с помощью культуры клеток P. japonicus var repens имеет большую практическую и теоретическую ценность.

Цель работы заключалась в изучении закономерностей процесса роста суспензионной культуры клеток Panax japonicus var. repens и особенностей биосинтеза клетками in vitro тритерпеновых гликозидов при различных способах и режимах выращивания культуры.

Исходя из цели, были поставлены следующие задачи исследования:

1. Изучить качественный и количественный состав тритерпеновых гликозидов в суспензионной культуре клеток Panax japonicus var .repens;

2. Изучить влияние различных факторов культивирования (начальная плотность культуры, фитогормональный состав среды, содержание углеводов в среде, добавление элиситора метилжасмоната) на ростовые характеристики культуры и синтез тритерпеновых гликозидов;

3. Изучить влияние различных способов культивирования (в колбах, в биореакторах различной конструкции и объема) на рост культуры и биосинтез гинзенозидов;

4. Изучить влияние различных режимов культивирования (периодический, полупроточный и проточный) на ростовые и биосинтетические показатели культуры.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное исследование ростовых и биосинтетических характеристик суспензионной культуры клеток женьшеня ползучего Panax japonicus var. repens. Изучено влияние различных факторов культивирования (начальная плотность культуры, состав и количество в среде фитогормонов, сахарозы, метилжасмоната) на рост культуры и накопление в клетках гинзенозидов. Впервые осуществлено полупроточное и проточное выращивание культуры клеток Panax japonicus var. repens в биореакторах и показаны высокие ростовые и биосинтетические ^ характеристики культуры при выращивании в этих режимах.

Практическое значение работы.

В результате проведенных исследований полученные данные о возможности выращивания данного штамма в биореакторах, объем которых может быть в дальнейшем доведен до полупромышленных и промышленных величин. Изучена возможность выращивания культуры в режимах, отличных от периодического - полупроточном и проточном. Предложены пути повышения биосинтеза тритерпеновых гликозидов в биомассе с помощью v изменений фитогормонального состава питательных сред и добавления элиситора метилжасмоната.

На защиту выносится

- Ростовые характеристики культуры при разных способах выращивания культуры;

-Результаты анализа содержания тритерпеновых гликозидов при разных способах выращивания культуры.

Работа выполнена в Отделе биологии клетки и биотехнологии Института физиологии растений РАН в лаборатории физиологии культивируемых клеток.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Демидова, Елена Викторовна

Заключение

По результатам, описанным в настоящей работе можно сказать, что суспензионные культуры женьшеня могут требовать различные условия для роста и биосинтеза гликозидов. Изменение условий или методов выращивания может либо стимулировать рост, но подавлять синтез гинзенозидов, либо наоборот. Основная задача исследований в этой области - найти оптимальное сочетание условий, при которых рост культуры и синтез гинзенозидов находился бы на высоком уровне.

Определение размера иннокулюма для выращивания культуры клеток в биореакторах - первичная задача, которая стоит перед исследователем при переходе к использованию аппаратурного метода выращивания. Необходимость увеличения размера иннокулюма освещается в некоторых работах, посвященных этому вопросу (Thanh et al, 2004). В нашей работе увеличение размера иннокулюма вдвое по-сравнению с контролем привело к увеличению общего содержание гинзенозидов на 22%.

Увеличение концентрации сахарозы в среде обычно приводит к улучшению ростовых характеристик культур клеток женьшеня (Zhang et al, 1996, Sivakumar et al, 2005), но снижают синтез гинзенозидов. В нашей работе увеличение концентрации сахарозы до 4 % и 5% привело и к снижению роста и к снижению биосинтеза гинзенозидов.

При культивировании суспензии в среде Т02 с повышенным содержанием ауксинов, по ростовым параметрам культура не уступала контрольной среде 62, а биосинтез гинзенозидов отличался в значительной степени. Zhong (Zhong et al, 1996) с коллегами исследовали влияние кинетина, 2,4-Д и ИУК на рост и биосинтез гинзенозидов в суспензионной культуре клеток P. ginseng. Максимального накопления гинзенозидов в биомассе (10,9% по сухому весу) им удалось добиться при применении 2,5 мг/л ИУК и 0,1 мг/л кинетина, без добавления 2,4-Д. Можно предположить, что 2,4-Д отрицательно влияет на биосинтетические характеристики культуры, каким-то образом блокируя синтез гликозидов.

Применение метилжасмоната как элиситора широко распространено в культуре клеток растений. Большинство исследователей считают его ответной реакцией на патогенную атаку. Существуют работы, связанные с использованием МЖ в качестве элиситора для синтеза веществ, имеющих защитные функции в растении, например алкалоидов (Facchini, 2001). Большинство исследователей считают гликозиды женьшеня - гинзенозиды -имеющими запасающие свойства, никак не связанные с защитной функцией. Однако всплеск синтеза гинзенозидов при применении метилжасмоната описаны во многих работах не только с культурой клеток растений, но и с каллусами, бородатыми и адвентивными корнями (Kim et al, 2005; Wang et al, 2002; Lu et al, 2001). В нашей работе максимальное накопление гинзенозидов в культуре удалось получить при применении метилжасмоната в концентрации 1 мкМ, большинство авторов указывают гораздо большую - до ЮОмкМ. Это еще раз доказывает необходимость дальнейшего исследования вопроса применения элиситоров в культуре клеток женьшеня.

При использовании биореакторов для выращивания культур клеток рода Panax часто используются режимы, отличные от периодического, способствующие увеличению продуктивности процесса по ростовым и биосинтетическим параметрам (Ushiyama, 1991; Giri, Narasu, 2000; Kim et al 1995; Kim, Wyslouzil, 2002; Sivakumar et al, 2005). При выращивании суспензионной культуры клеток P. japonicus var. repens в проточном режиме нам удалось добиться максимального содержания гинзенозидов 5 % , а в среднем около 3% к сухому весу клеток.

1. Увеличение начальной плотности культуры при выращивании в биореакторе приводит к изменению ростовых характеристик, но практически не изменяет содержания гликозидов;

2. При увеличении содержания сахарозы в среде содержание тритерпеновых гликозидов снижается, причем при 5% сахарозы в среде больше, чем при 4%. Снижение содержания гинзенозидов происходит в основном за счет Rg -группы, содержание гинзенозидов Rb -группы остается примерно одинаковым;

3. При добавлении метилжасмоната в дозе 1 мкМ происходит увеличение содержания гинзенозидов на 180% по сравнению с контролем, v ростовые характеристики культуры не снижались;

4. За счет увеличения содержания ауксинов в питательной среде получена мелкодисперсная суспензия, однако при этом снижается содержание гинзенозидов;

5. При полупроточном выращивании культуры на двух средах в течение шести субкультивирований зафиксированы стабильные и достаточно высокие ростовые характеристики культуры. Однако, на среде с высоким уровнем ауксинов содержание гинзенозидов снижалось почти на порядок. На контрольной среде (62) синтез оставался стабильным в течение всех циклов выращивания (около 3%);

6. Проточное культивирование в течение 70 сут. со скоростью протока 0,11 - 0,16 сут-1.показало стабильный рост культуры, синтез гликозидов находился на высоком уровне (около 3%).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Демидова, Елена Викторовна, 2007 год

1. Баландин Д.А. Химический состав женьшеня.(1955)Материалы к изучению женьшеня и лимонника. ДВО АН СССР, В.2, -С.77-96

2. Бородова М.С., Дубинская В.А., Дороничева Н.Б., Минеева М.Ф., Колхир В.К. (2004) Оценка биологической активности растительных средств ферментными биотест системами. Фармация, 1, стр. 42-44.

3. Бочарова О.А., Куренная О.Н.,Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б.(1993) Новый способ биологического тестирования препаратов адаптогенов. Биотехнология, 8, С. 28 - 34.

4. Брехман И.Щ1957) Женьшень. JL: Медгиз., 181 С.

5. Брехман И.И., Дардымов И.В., Добряков Ю.И. (1966) К фармакологии индивидуальных гликозидов из корней женьшеня {Panax ginseng). Фармакология и токсикология, 2, С. 167-170.

6. Булгаков В.П., Журавлев Ю.Н., Козыренко М.М., Бабкина Э.Н., Уварова Н.И., Маханьков В.В.(1991) Содержание даммарановых гликозидов в различных каллусных линиях Panax ginseng С.А. Meyer. Растит, pec., .27, В.З, - С. 94 - 100.

7. Булгаков В.П., Лауве Л.С., Чернодед Г.К., Ходаковская МИ.В., Журавлев Ю.Н. (2000) Хромосомная вариабельность клеток женьшеня, трансформированного растительным онкогеном rol С. Генетика, 36, стр. 209-216.

8. Бутенко Р.Г., Грушвицкий И.В., Слепян Л.И. (1968) Органогенез и соматический эмбриогенез в культуре ткани женьшеня и других представителей рода Панакс. Ботанический журнал, 53(7), с. 906912.

9. Бутенко Р.Г., Мясоедов Н.А., Шамина З.Б., Слепян Л.И. (1984) Штамм ИФР Ж2 - продуцент биологически активных веществ женьшеня и способ получения биологически активных веществ. А.

10. С. 1058281 СССР Б.И., 1984, - N. 37, - С. 214.

11. Бутенко Р.Г.( 1964) Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука., 162 С.

12. Бутенко Р.Г.( 1986) Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения. Культура клеток растений и биотехнология, под редакцией Р.Г.Бутенко. М.:Наука, с. 3 - 20.

13. Бутенко Р.Г.(1990) Клеточные технологии в сельскохозяйственной науке и практике. Основы сельскохозяйственной биотехнологии, под ред.Муромцев Г.С и др.,М.: Агропромиздат, с. 154- 235.

14. Бутенко Р.Г., (1999) Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе. М.,: ФКБ-ПРЕСС, -159 с.

15. Бутенко Р.Г., СлепянЛ.И., Хретонова Т.И., Михайлова Н.В., Высоцкая Р.И. (1979) Фитохимический анализ штамма культуры ткани корня женьшеня и стандартизация его препаратов. Растительные ресурсы, 15, В.З, - С. 356 - 360.

16. ВФС 42-1890-89 Настойка" Биоженьшень "

17. ВФС 42-1891-89 Биомасса женьшеня сухая.

18. Высоцкая Р.И., Слепян Л.И. (1980) Культура ткани женьшеня. Сообщение 1. Химический состав биомассы культуры ткани женьшеня. Растительные ресурсы, 16, В.1, - С. 123 - 129.

19. Глебко Л.И., Улькина Ж.И., Воробьев О.Ю., Кондратьева Г.К. (1991) Количественное определение суммы гинзенозидов в корнях Panax ginseng С.А. Meyer. Метод спектрофотометрии. Растительные ресурсы, 27, В.4, - С. 120 - 123.

20. Громова Л.И., Громова Н.А., Минина С.А., Слепян Л.И. (1990) Экспресс-метод определения количественного содержания панаксозидов в корнях Panax ginseng С.А. Meyer. Растительные ресурсы, 26, В.З, - С. 428 - 430.

21. Грушвицкий И.В. (1961) Женьшень. Вопросы биологии.// Владивосток.:СО АН СССР, 344 С.

22. Губарь С.И., Гулько Т.П., Кунах В.А. (1997) Рост и накопление гликозидов в каллусной культуре тканей женьшеня при длительном воздействии экзогенных фитогормонов.Физиология растений, 44, N. 1, - С. 97-103.

23. Давыдов Д.Д.(1890) Фармакологическое и химическое изучение корня женьшеня. Фармацевтический журнал, 1, С.97; 8, - С. 114; 9, - С. 129.

24. Дар дымов И.В.(1979) Женьшень и элеутерокок (к механизму биологического действия). М.: Наука , 189 С.

25. Еляков Г.Б., Стригина Л.И., Хорлин А.Я., Кочетков Н.К. (1962) Гликозиды из корня женьшеня (Panax ginseng С.А. Meyer). Изв. АН СССР. Отд. хим. наук., 2, С. 2054.

26. Еляков Г.Б., Стригина Л.И., Кочетков Н.К.(1965) Гликозиды из корней женьшеня. VI. Строение углеводной цепи панаксозида А. Химия природн. соединений, 3, С. 149 - 152.

27. Еляков Г.Б., Уварова Н.И., Прокопенко Г.И., Маханьков В.В.,Слабко М.Г., Фаустов B.C., Константинова Н.А., Новиков Е.В.,Подгорбунская Н.В. (1989) Химическое исследование суспензионной культуры клеток женьшеня. Биотехнология, 5, -N.4,- С. 420 426

28. Журавлев Ю.Н.(1996) Araliacaea: Женьшень и другие.

29. Владивосток: Дальнаука, 279 с.

30. Запотылка Р.Т. (1951) Результаты сравнительного химического исследования различных представителей корня женьшеня и его препаратов. Материалы к изучению стимул, и тониз. средств корня женьшеня и лимонника., В.1, С.51 - 58.

31. Кандараков О.Ф., Воробьев А.С., Носов A.M. (1994) Биосинтетические характеристики популяции клеток Dioscorea deltoidea при проточном культивировании. Физиология растений, 41 (6), с. 913-917

32. Кефели В.И. Рост растений и природные регуляторы. (1978) Физиол. растений, 25, вып. 5, 975 989.

33. Клюшин А.Г. Характеристика роста суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia bailey при различных способах культивирования, Дисс. канд. биол. наук, М.: 2000

34. Козыренко М.М., Артюкова Е.В., Лауве JI.C., Журавлев Ю.Н. Реунова Г.Д. (2001) Генетическая изменчивость каллусных линий женьшеня Panax ginseng.Биотехнология, 1, с. 19-26

35. Константинова Н.А.,Зайцева Г.В.,Фаустов В.С.,Маханьков В.В., Уварова Н.И., Еляков Г.Б. (1989) Исследование ростовых и биосинтетических способностей длительно пассируемой суспензионной культуры клеток женьшеня. Биотехнология, 5, -N.5,517- 575.

36. Константинова Н.А., Маханьков В.В., Уварова Н.И., Самошина

37. Н.Ф., Сова В.В., Михайлова О.М. (1995) Исследование динамики биосинтеза гинзенозидов в цикле роста каллусной культуры клеток женьшеня. Биотехнология, 9-10, 35-39.

38. Кунах В.А. (1999) Изменчивость растительного генома в процессе дедифференцировки и каллусообразования in vitro. Физиология растений, 46(6), с.919-929.

39. Кунах В.А., Можелевская Л.П., Адонин В.И., Губарь С.И. (2003) Продуктивность и генетическая структура клеточных популяций женьшеня Panax ginseng С. А. Меу. в культуре in vitro. Биотехнология, 3, с. 25-35.

40. Малиновский Г.В.,Маханьков В.В.,Денисенко В.А., Уварова Н.И. (1991) Изучение химического состава товарных корней Рапса ginseng. Химия природных соединений, 2, 294 295.

41. Маханьков В.В., Самошина Н.Ф., Уварова Н.И., Еляков Г.Б. (1993) Анализ нейтральных гинзенозидов диких и плантационных корней Panax ginseng, произрастающих в Приморье. Химия природных соединений, 2, 237 242.

42. Молодюк О.И., Александрова И.В., Долинина А.Н., Гуков И.А. (1983) Влияние стрессовых факторов на суспензионную культуруженьшеня. Культура клеток растений., Кишинев.:Штиинца, 75 с.

43. Мясоедов Н.А., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. (1985) Оптимизация питательной среды и выделение новых штаммов для культур ткани женьшеня. Физиология растений, 32,4, 800-806.

44. Липский А.Х. (1993) Физиология роста культур клеток растений в биореакторах (периодические режимы). Дисс. канд. биол. наук. -Москва, 162 с.

45. Носов A.M. (1991) Регуляция синтеза вторичных соединений в культуре клеток растений. Биология культивируемых клеток и биотехнология растений, под редакцией Бутенко Р.Г. М.:Наука, 520.

46. Носов A.M. (1992) Особенности метаболизма стероидов в культивируемых клетках диоскореи дельтовидной, как основа биотехнологии получения фуростаноловых гликозидов. Дисс. докт. биол наук.- М.: НИП-КИ прикладной биохимии, 243 с.

47. Носов A.M. (1994) Функции вторичных метаболитов растений in vitro и in vivo .Физиологиярастений, 41,6, 873 878.

48. Носов A.M. (1999) Культура вычших растений уникальная система, модель, инструмент. Физиология растений, 46, 6, 837-844.

49. Орешников А.В.( 1996) Физиология популяции культуры клеток Dioscorea deltoidea в условиях закрытого протока. Дисс. канд. биол. наук. М.: ИФР РАН, 115 с.

50. Пасешниченко В.А. (2001) Растения продуценты биологически -активных веществ. Биология, М.: Наука.

51. Перт С.Дж. (1978) Основы культивирования микроорганизмов. М.:Мир, 332 с.

52. Писецкая Н.Ф. (1970) К вопросу о подборе питательной среды для культуры ткани женьшеня. Растительные ресурсы, 6(4), с. 517520.

53. Решетняк О.В. (1998) Сравнительное исследование паноксазидов в культуре клеток и корне женьшеня. Дисс. канд. наук.-М.,1998.

54. Решетняк О.В., Князьков И.Е., Демидова Е.В., Носов A.M. (2003) Изменение состава и соотношения гинзенозидов в биомассе каллусной и суспензионной культуры клеток Panax japonicus (var.repens) зависимости от условий сушки. Биотехнология, 2, стр. 21-28.

55. Решетняк О.В., Смоленская И.Н., Смирнова Ю.Н., Чайко А.Л., Носов А.В. Носов A.M. (2005) Суспензионная культура клеток Panax japonicus var. repens 2. Качественный и количественный составт гинзенозидов в клетках in vitro. Биотехнология, 6, 20-26.

56. Российский Д.М. (1952) Очерк развития медицины в Китае. Фелъдшерство и Акушерство, 1. 34 38.

57. Смоленская И.Н. Решетняк О.В., Зоринянц С.Э., Чайко А.Л., Носов A.M., Князьков И.Е (2001) Рост суспензионной культуры клеток женьшеня Panax japonicus (var. repens) и биосинтез панаксозидов в культуре. // Цитология, 43, с 891

58. Смоленская И.Н., Заринянц С.Э., Смирнова Ю.Н., Носов А.В., Чайко А.Л., Носов А.М.(2005) Суспензионная культура клеток Panax japonicus var. repens 1. Параметры роста и цитогенетические характеристики. Биотехнология, 5, 21-28.

59. Строгов С.Е., Зайцева Г.В., Белоусова И.М., Шамков Н.В., Симонова Г.М. (1990) Опыт крупномасштабного культивирования клеток женьшеня в суспензии. 1. Масштабирование опытнопромышленной установки. Биотехнология, 4, 43 -45.

60. Тарчевский И.А. (2000) Элиситор-индуцируемые сигнальные системы клеток растений. Физиология растений, 47(2). С. 321-332.

61. Трилис Я.Г., Давыдов В.В. (1995) Новые сведения о механизмах адаптогенного действия препаратов культуры тканей Panax ginseng С.А. Меу. и Polyscias filicifolia bailey (Araliaceae). Растительные ресурсы, 3, 19 35.

62. Уварова Н.И., Горшкова Р.П., Стригина Л.И., Еляков Г.Б., Кочетков Н.К. (1965) Выделение новых гликозидов из женьшеня. Химия природных соединений, 2, 82 86.

63. Уварова Н.И., Маханьков В.В., Прокопенко Г.И., Слабко М.Г., Малиновская Г.В. (1988) Химическое исследование биомассы культуры клеток женьшеня. 11. б-О-ацилпроизводные-D-глюкозида-ситостерина. Химия природных соединений, 3,463-464.

64. Уварова Н.И. Маханьков В.В., Самошина Н.Ф.(2000) Химическая характеристика и биологическая активность тритерпеновых гликозидов приморской популяции Panax ginseng С.А. Meyer. Химико-фармацевтический журнал,34(3), стр. 19-25.

65. Филиппова И.Н., Зоринянц С.Э., Володина С.О., Смоленская И.Н. (2003) Культуры клеток экдистероидсодержащих растений Ajuga reptans и Serratula coronata. Физиология растений, 50, с. 501-508.

66. Ходаковская М.В., Булгаков В.П., Маханьков В.В. (1995) Влияние фитогормонов на накопление биомассы и содержание гинзенозидов в каллусных культурах Panax ginseng С.А. Meyer. Биотехнология, 9-10, 40-45.

67. Ходаковская М.В., Булгаков В.П., Журавлев Н.Н. (1997) Влияние некоторых метаболитов изопреноидного пути на накопление биомассы и содержиние гинзенозидов в клеточных культурах женьшеня. Биотехнология, 1 стр. 42-47.

68. Чайко А.Л.,Решетняк О.В.,Куличенко И.Е. (1999) Культура клеток женьшеня японского Panax japonicus (var. repens): получение каллусной и суспензионной культуры, оптимизация роста и анализ панаксозидов Биотехнология, 6, 51-55.

69. Чой К-Т, Ан И-О, Парк Д-Ч. (1994) Образование гинзенозидов в культуре тканей женьшеня {Panax ginseng С.А. Meyer). Физиология растений, 41,6, 891-895.

70. Цой К.Т., Ахн И.О., Пак Д.С.(1994) Продуцирование гинзенозидов культурой клеток женьшеня (Panax Ginseng C.A.Meyer). Физиология растений, 41(6), 784 788.

71. Шиков А.Н., Антан И.С., Слепян Л.И., Минина С.А. (1995) Влияние низкотемпературного стресса на штаммы Panax ginseng C.A.Meyer. Растительные ресурсы, 31 (2), стр.1 9.

72. Энгельгардт X. (1980) Жидкостная Хроматография при высоких давлениях, М.:. Мир , 245 С.

73. Asaka I., Ii I.,Hirotani M., Asada Y., Furuya T.(1993) Production of ginsenoside saponins by culturing ginseng (Panax ginseng) embryogenic tissues in bioreactors. Biotechnology letters, 15(12) pp.1259-1264.

74. Asaka I.,Ii I,Hirotani M,Asada Y., Yoshikawa T.,Furuya T.(1994) Mass-production of ginseng (Panax ginseng) embryoids on media containing high concentrations of sugar. Planta medica, 60 (2), pp. 146-148.

75. Attele A.S., Wu J.A., Juan C.-S.(1999) Ginseng pharmacology multiple constituents and multiple actions. Biochemical pharmacology, 58, pp. 1685-1693.

76. Bonfill M., Cusido R.M., Palazon J., Pinol M., Morales C. (2002) Influence of auxins on organogenesis and ginsenosides production in Panax ginseng calluses. Plantcell, Tissue and organ culture, 68, pp.7378

77. Bulgakov V.P., Khodakovskaya M.V., Labetskaya N.V., Chernoded G.K.,Zhuravlev Y.N. (1998) The impact of plant rolC oncogene on ginseniside production by ginseng hairy root cultures. Phytochemistry, 49 (7), pp.1929-1934.

78. Chan, T.W.D., But, P.P.H., Cheng, S. W, Kwok, I.M.Y, Lau, F. W. & Xu, H. X. (2000) Differentiation and authentication of Panax ginseng, Panx quinquefolius, and ginseng products by using HPLC/MS. Analytical Chemistry. 72, pp.1281-1287.

79. Cheng Y., Shen L.H., Zhang J.-T. (2005) Anti-amnestic and -aging effects of ginsenosides Rgi and Rbi and its mechasm of action. Acta Pharmocology, 26(2), pp. 143-149.

80. Choi Y.E. (2006) Ginseng (Panax ginseng). Methods Mol.Biology, 344, pp. 361-371.

81. Due N.M., Kasai R.,Ohtani K., Ito A., Nham N.T.,Yamasaki K.,Tanaka 0.(1994) Saponins from Vietnamese ginseng, Panax-vietnamensis Ha Et Grushv collected in central Vietnam . l.Chem.Pharm. Bull., 42(1), pp. 115-122.

82. Facchini P.J. (2001) Alkaloid biosynthesis in plant: biochemistry, cell biology, molecular regulation and metabolic engineering applications. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 52, pp.29-66

83. Fujimoto Y., Satoh M. (1987) Acetylenes from the callus of Panax ginseng. Phytochemistry, 26 (10), pp 2850-2852.

84. Fujimoto Y.,Wang H.C., Satoh M., Takeuchi N.(1994) Polyacetylenes from Panax quinquefolium. Phytochemistry, 35(5), pp.1255-1257.

85. FujiokaN., KohdaH., YamasakiK., Kasai R., Tanaka 0.,Shoyama Y., Nishioka I. (1989) Dammarane and oleanane saponins from callus tissue of Panax japonicus. Phytochemistry, 28 (7), pp. 1855 1858.

86. Furuya Т., Kojima H., Syono K., Ishii Т., Votani K., Nishio M. (1973) Isolation of saponins and sapogenins from callus tissue of Panax ginseng. Chem. Pharm. Bull., 21 (1), pp. 98-101.

87. Furuya Т., Yoshikawa Т., Ohihara J., Oda H. (1984) Studies of the culture conditions for Panax ginseng cell in Jar fermentors. J. of natural products, 47(1), pp.70-75.

88. Furuya Т., Yoshikawa Т., Ushiyana К., OdaH.(1986) Formation of planlets from callus cultures of ginseng (Panax ginseng). Experientia, 42 (2), pp. 193-194.

89. Gafner S. (2004) Evaluation of the efficiency of threedifferent solvent systems to extract triterpene saponins from roots of P.quinquefoliuns using high-performance liquid chromatography. Journal agriculture food chemistry, 52, pp. 1546-1550.

90. Gantet P., Memelink J. (2002) Transcription factors: tools to engineer the production of pharmacologically active plant metabolites. Trendpharmacology science, 23, pp.563-569.

91. A.Giri., M.L. Narasu (2000) Transgenic hairy roots: recent trends and applications. Biotechnology Advaces, 8, pp. 1-22.

92. Graebe J.E., Novelli G. D. (1966) A practical method for large-scale plant tissue culture. Exp. Cell Res., 41 (3), pp. 509 520.

93. Gui J.F.(1995) Identification and quantification of ginsenosides in various commercial ginseng preparations. European journal of pharmaceutical sciences, 3 (2), pp.77-85.

94. Iwabuchi H., Yoshikura M., Kamisako W. (1989) Studies of the sesquiterpenoids of Panax ginseng. lll.Chem. Pharm. Bull., 37(2), pp. 509 510.

95. Jaime A. Teixeira ola Silva. (2003) Thin cell layer technology in ornamental plant micropropagation and biotechnology. African Journal of Biotechnology, 2(12), pp.683-691.

96. Jamasasaki K. (2003) Bioactive saponins in Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis. Pharm. Biology, 38(1), pp. 16-24.

97. Jang J.J., Staba E.J., Kim Y.Y.(1974) American and Korean ginseng tissue cultures : growth chemical analysis and plantlet production. In vitro, 4, pp. 253 260.

98. Jartoux (Father)(1714) The description of tartarian plant called ginseng. London philosophical trans. 21, pp. 237-247.

99. Jeong G.T., Park D.H., Hwang В., Park K., Kim S.W., Woo J.C. (2002) Studies on mass production of transformed Panax ginseng hairy roots in bioreactor. Apply Biochemistry Biotechnology. 98, pp. 1115-1127.

100. Jiang Y., Chen L., SunC.W., Zhong G.G., Qi H., MaX.Y.,Xu J.D.(1993) Influence of 11 ginsenoside monomers on action potentials of myocar diocytes. Actapharmacologica sinica, 14 (5), pp. 508 - 512.

101. Joo C.N. (1993) Defense function of ginsenosides against several biochemical disorders in the animal body. The 6th international ginsengsymposium, Seul, Korea.

102. Hahn E.-J., Kim Y.-S.,Yu K.-W., Jeong C.-S., Paek K.-Y.(2003) Adventitious root cultures of Panax ginseng C.A. Meyer and ginsenoside production through large-scale bioreactor system. Journal of Plant Biotechnology, 5(1), pp. 1-6.

103. Han J., Zhong J.-J. (2003) Effects of oxygen pattial pressure on cell growth and ginsenosides production in high density cell cultures of Panax notoginseng. Enzyme and Microbial technology, 32, pp. 498-503.

104. Haralampidis K., Troyanowska M., Osbourn A.E. (2001) Biosynthesis of triterpenoid Saponins in Plants. Biochemical Engineering/Biotechnology, 75, pp.32-47.

105. Hiai S., Oura H., Hamanaka H., Odaka Y. (1975) A color reaction of panaxadiol with wanilin and sulfuric acid. Planta medica, 28, (2) pp. 131 -139.

106. Hirakura K., Morita M.,Nakajama K., Ikeya Y., Mitsuhashi H. (1991) Polyacetylenes from the roots of Panax ginseng. Phytochemistry, 30 (10), pp. 3327-3333.

107. Honda H., Itoh Т., Shiragami N., Unno H. (1993) Phytohormone controle for plant cell culture using bioreactor equipped with in-line feeding column. Journal of chemical engineering of Japan, 26(3), pp.291-296.

108. Hu W.W., Yao H., Zhong JJ. (2001) Improvement of Panax notoginseng cell culture for production of ginseng saponin and polysaccharide by high density cultivation in pneumatically agitated bioreactors. Biotechnology progressing, 17(5), pp.838-846.

109. KaizukaH., Takahashi К. (1983) HPLC system for a wide range of naturally occuring glycosides. Journal of Chromatography, 258, pp. 135 146.

110. Kanaoka M.,Kato H.,Shimada F.,Yano S. (1992) Studies on the enzyme -immunoassay of bioactive constituents in oriental medicinal drugs .6. Enzyme immunoassay of Ginsenoside Rb 41 0 from Panax ginseng. Chem. Pharm. Bull, 40,2, pp.314-317

111. Kim D.S., Chang Y.-S., Zedk U., Zhao P., Liu Y.Q., Yang C.-R. (1995) Dammarane saponins from Panax ginseng. Phytochemistry, 40(5), pp. 1493-1497.

112. Kim S„ Kim D.S., Lee Y.H.,Park J.D.,Baek N-N.(1995) Isolation of novel dammarane-glycoside, ginsenoside Rh 44 0, from Korean red ginseng. Proc.of'95 Korean-Japan Symp., pp.107-116.

113. Kim Y., Wyslouzil B.E., Weathers P. (2002) Secondary metabolism of hairy root cultures in bioreactors. In Vitro Cell Del.Biol.-Plant, 38, pp.l-10.

114. Kim Y.-S., Hahn E.-J., Murthy H.N., Paek K.-Y. (2005) Adventitious root growth and ginsenosideaccumulation in Panax ginseng cultures as affected by methyl jasmonate. Biotechnology Letters 26 (21), pp. 16191622.

115. Kando N., Marumoto Y., Shoji J. (1971) Studies on the constituents of Panax Japonicus*s rhizoma.W. The structure of chikusetsusaponin V. Chem. Pharm. Bull., 19, 6, pp. 1103-1105.

116. Ко K.M., Yang D.C., Park S.C. Choi K.S., Choi K.T., Hwang B. (2003) Mass culture and ginsenoside production of ginseng root by two-step culture process. Journal Plant Biology, 39, pp. 63-69.

117. Krahe M. (2001) Biochemical engineering AG. Wald, Switzerland

118. Kubo M., Tani Т., Katsuki Т., Ishizaki K., Arichi S. (1980)

119. Histochemistry. 1. Ginsenosides in ginseng {Panax ginseng C.A.Mey, root). J. of Natural Prodacts, 43 (2), pp.278-284.

120. Kurz W.G.W. (1971) A chemostate for growing plant cells in single cell suspension cultures. Exp. Cell Res., 64, pp. 476-479.

121. Lau A.-S., Woo S.-O., Koh M.-K.(2003) Analysis of saponins in raw and steamed P.notoginseng using high-performance liquid chromatography with diode array detection. Jornal of chromatography, 1001, pp. 77-87.

122. Lie L., Sheng Y., Zhang J., Wany C., Guo D (2004) HPLC determination of four active saponins and its application to pharmacokinetic studies. Biomed chromatography, 18 (10), pp. 849-856.

123. Liu S., Zhong J.J. (1996) Effects of potassium-ion on cell-growth and production of ginseng saponin and polisaccharide in suspension cultures of Panax ginseng. J. of Biotechnology, 52 (2), pp. 121 126.

124. Liu S, Zhong J.J. (1998) Phosphate effect on production og gingeng saponin and polysaccharide by cell suspension cultures of Panax ginseng and Panax quinquefolium. Process Biochemistry, 33(1), pp.6974.

125. Lee F. C. (1992) Facts about Ginseng. The elixir of life. Korea, 104 P.

126. Lu M.B., Wong H.L., Teng W.L. (2001) Effects of elicitation on the production of saponin in cell culture of P.ginseng. Plant cell report, 20, pp. 674-677.

127. Mathur A., Shukla Y.N, Pal M, Ahuja P.S.,Uniyal G.C. (1994) Saponin production in callus and cell-suspension cultures of Panax quinquefolium. Phytochem., 35 (5), pp.1221-1225

128. Mathur A, Mathur A.K, Sangwan R.S, Gangwar A, Uniyal G.C. (2003) Differential morphogenetic responses, ginsenoside metabolism and RAPD patterns of three Panax species. Genetic resources and crop evolution, 50, pp. 245-252

129. Matsuda H, Samukawa К, Kubo M. (1989) Studies of P.japonicus triterpenoides. Planta Medica, 55, pp. 18-21.

130. Matsuda H, Samukawa K, Kubo M. (1991) Antihepatitic activity of ginsenoside Ro. Planta medica, 57 (6), pp.523-526.

131. Matsuda H., Li Y, Mirakami T, Yamahara J, Yoshikawa M. (1999) Structure-related inhibitory activity of oleanolic acid glycosides on gastric emptying in mice. Bioorganic and Medicinal Chemistry, 7, pp. 323-327.

132. Morita T, Tanaka 0,Kohda H. (1985) Saponin composition of rhizomes of Panax japonicus collected in South Kyushu, Japan, and its significance in oriental traditional medicine. Chem.Pharm. Bull., 33 (9), pp. 3852 3858.

133. Morita T, Zhou J, Tanaka 0. (1986) Saponins of Panax pseudoginseng Wall Subsp. pseudoginseng Hara collected in Nielani, Tibet,China. Chem.Pharm.Bull, 34(11), pp.4833 4835.

134. Nishiyama N, Cho S.I., Kitagawa I, Saito H. (1994) Malonylginsenoside Rb 41 0 potentiates nerve growth factor (NGF) -induced neurite outgrowth of cultured chick embryonic dorsal root ganglia. Biol. Pharm. Bull., 17 (4), pp.509-513.

135. Nagai M,Tanaka O, Shibata S. (1971) Chemical studies on the oriental plant drugs XXVI.Saponins and sapogenins of Ginseng. The absolute configuration of cinenic acid and panaxadiol. Chem. Pharm. Bull., 19(11), pp. 2349-2353.

136. Nalawade S.M, Sagare A.P, Lee C.-Y, Kao C.-L, Tsay M.-S. (2003) Studies on tissue culture of Chinese medicinal plant resources in Taiwan and their sustainable utilization. Bot. Bull. AcadSin, 44, pp.79-98.

137. Ohtani K, Kasai R., Hatono S, Tanaka 0, Mizutani K. (1989) Reticuloendothelial system activating polysaccharides from rhizomes of Panax japonicus. 1. Tochibanan-A and Tochibanan-B. Chem. Pharm.1. Bull, 10, pp. 2587-2591.

138. Pichersky E., Gang D.R. (2000) Genetics and biochemistry of secondary metabolism in plants: an evolutionary perspective. Trend plant scince, 5(10), pp. 439-445

139. Proctor J.T.A. (1996) Ginseng: old crop, new directions. In: Journal Janick, Progress in new crops, pp.565-577.

140. Rao R., Ravishankar S., Ravishankar G.A. (2002). Plant cell cultures: Chemical factories of secondary metabolites. Biotechnol. Adv., 20, pp. 101-153.

141. Saito A., Lee Y., Takagi K., Shibata S., Shoji J., Kondo N. (1977) Pharmacological syudies of Panacis japonici rhizoma. Chem. Pharm. Bull., 25 (5), pp. 1017- 1020.

142. Sajc, L., Grubisic D., Vunjak-Novakovic G. (2000). Bioreactors for plant engineering: an outlook for further research. Biochem. Engeneering Journal. 4, pp. 89-99.

143. Sanada S., Kondo N., Shoji J., Tanaka O., Shibata S. (1974) Structures of ginsenoside -Ro, -Rb 41 0, -Rb 42 0, -Rc and -Rd. Chem. Pharm. Bull, 22 (2), pp. 421-428.

144. Shukla Y.N., Thakur R.S. (1990) A triterpenoid saponin from Panax pseudo-ginseng subsp. himalaicus var. angustifolius. Phytochemistry, 29(1), pp. 239-241.

145. Shibata S.,Tanaka O.,Shoji J., Saito H. (1985) Economic and medical plant research. Academic press Inc., London, 1, pp. 217 284.

146. Shibata S. (2001) Chemistry and cancer preventing activities of ginseng saponins and some related triterpenoid compounds. Journal of Korean medical science, 16, pp. 28-37.

147. Sivakumar G., Yu K.W., Hahn E.J., Paek K.Y. (2005) Optimization of organic nutriens for ginseng hairy roots production in large scale bioreactors. Current science, 89 (4), pp. 641 - 649.

148. Shao C.-J., Xu J.D.,Kasai R.,Tanaka 0. (1989) Saponin from flowerbuds of Panax ginseng cultivated at Jilin, China. Chem. Pharm. Bull., 37 (7), pp. 1934 1935.

149. Scragg AH. (1992) Bioreactors for mass cultivation of plant cells. In: Fowler MW, Warren GS (eds). Plant Biotechnol. Oxford: Peragmon Press, pp. 251-268

150. Smart N.J., Fowler M.W. (1984) An airlift column bioreactor suitable for large-scale cultivation of plant cell suspensions. J. Exp. Bot., 35 (153), pp. 531 537.

151. Smolemskaja I., Reshetnjak 0., Nosov A., Zarinians S., Chayko A., Smirnova Y. (2007) Ginsenoside production, growth and cytogenetic characteristics of sustained Panax japonicus var. Repens cell suspension culture. Biologiaplantarum, 51(2), pp.235-241.

152. Soldati F., Sticher O. (1980) HPLC separation and quantitative determination of ginsenosides from Panax ginseng, Panax quinquefolius and from ginseng drug preparation. 1-nd commun. Plantamedica, 38 (3), pp.348-357.

153. Su W.W. (1995) Bioprocessing technology for plant suspension cultures. Apply biochemical biotechnology, 50, pp. 189-230

154. Su W.W. (2000) Perfusion bioreactors. In: Encuclopedia of cell technology, 1, pp. 230-242.

155. Su W.W., Arias R. (2003) Continuous plant cell perfusion culture: bioreactor characterization and secreted enzyme production. Journal of bioscience and bioengineering, 95 (1), pp. 13-20.

156. Suzuki Y.,Ito Y., Konno C.,Furuya T.(1991) Effects of tissue culturedginseng on the function of the stomach and small-intestine. Yakugaku Zasshi, 111(12), pp. 765-769.

157. Tal В., Rokem J.S., Goldberg I. (1983) Factors affecting growth and product formation in plant cells grown in continuous culture. Plant Cell Rep., 2 (4), pp. 219-222.

158. TanakaH. (1987) Large-scale cultivation of plant cells at high density: A review. Process Biochem., 22 (1), pp. 106 113.

159. Tanaka 0.,Nagai M., Shibata S. (1966) Chemical studies on the oriental plant drugs. The steriochemistry of protopanaxadiol, a genuine sapogenin of ginseng. Chem. Pharm. Bull.,\A (10), pp. 1150-1156.

160. Tanaka 0., Nagai M.,Ohsawa Т.,Tanaka N., Shibata S. (1967) Stereochemistry of protopanaxadiol: acid catalysed epimerization of C-20 -hydroxyl of betulafolientriol, protopanaxadiol and their derivatives. Tetrahedron Lett., 5, pp.391-396.

161. Tanaka O., Yahara S. (1978) Damarane saponins of leaves of Panax pseudoginseng subsp. himalaicus. Phytochemistry, 17 (8), pp.l353 -1358.

162. Tanaka O. (1990) Recent studies on glycosides from plant drugs of Himalaya and Southwestern China chemogeographical correlation of Panax species. Pure and applied chemistry, 62 (7), pp. 1281-1284.

163. Tanaka O., Han E.C. (2000) Saponins of plants of Panax species collected in Central Nepal, and their chemataxonomical significance. Chemical and Pharmaceutical Bull. Tokyo, 48(6), pp. 889-892.

164. Thanh N.T., Murthy H.N., Yu K-.W., Yong C.-S., Hahn E.-J., Раек K.-Y.(2004) Effect of inoculum production by large scale cell suspension cultures of Panax ginseng. Journal Plant Biotechnology, 6(4), pp. 265268.

165. Thanh N.T., Murthy H.N., Yu K-.W., Jeong S, Hahn E.-J., Раек K.-Y.(2006) Effect of oxygen supply on cell growth and saponin production in bioreactor cultures of Panax ginseng. Plant physiology, 163 (12), pp. 1337-1341.

166. Tripathi L., Tripathi J.N.(2003) Role of biotechnology in medicinal plants. Tropical journal ofpharmaceutical research, 2(2), pp. 243-253.

167. Vanisree M., Lee C.-Y., Lo S.-F., Nalawade S.M., Lin C.Y., Tsay H.-S. (2004) Studies on the production of some important secondary metabolites from medicinal plants by plant tissue cultures. Bot. Bull. Acad.Sin., 45, pp. 1-22.

168. Veliky J.A., Martin M. (1970) A fermentor for plant cell suspension culture. Can. J. Bot., 16, pp. 223 226.

169. Wang Z., Zhong-jan J., Zhu Zi-ging, Yang Chong-ren, Zhou J., Kasai R., TanakaO., (1985) The triterpenoid saponins of rhizomes of Panax japonicus C.A.Mey var.anqustifolius (Burk) Cheng et chu. Acta

170. Botanica sinica, 27 (6), pp.618-624.

171. Wang W, Zhang Z.-Y, Zhong J.- J. (2004) Enhancement of ginsenoside biosynthesis in high-density cultivation of Panax notoginseng cells by various strategies of methyl jasmonate elicitation. Appl. Microbiol. Biotechnol.

172. Wang Z, Zhong-jan J, Zhu Zi-ging, Yang Chong-ren, Zhou J, Kasai R, Tanaka O. (1985) The triterpenoid saponins of rhizomes of Panax japonicus C.A.Mey var.anqustifolius (Burk) Cheng et chu. Acta Botanica sinica, 27 (6), pp.618-624.

173. Wang D.Q, Feng B.S, Wang X.B,Yang C.R.,Zhou J. (1989) Further study on dammarane saponins of leaves of Panax japonicus vox.major collected in Quinling Mountains China. Yao xue-Xue-Bao, 24(8), pp.633-636.

174. Wang W, Zhong J.J. (2002) Manipulation of ginsenoside heterogeneity in cell cultures of P. notoginseng by addition of jasmonates. Journal Bioscience bioeng., 93, pp. 48-53.

175. Wang J.-Y, Li X.-G, Zheng Y.-N, Yang X.W. (2004) Isoginsenoside-Rh3, a new triterpenoid saponin from the fruits of Panax ginseng C. A. Mey. J Asian Nat Prod Research, 6, pp.289-93.

176. Washida D, Shimomura K, Nakajima Y., Takido M,Kitanaka S. (1998) Ginsenosides in hairy roots of Panax hybrid. Pytochemistry, 49 (8), pp. 23312-2335.

177. Wilson G. (1976) A simple and inexpensive design of chemostate enabling steady-state growth of Acer pseudoplatanus L. cells under phosphate-limiting conditions. Ann. Boanic., 40, pp.27-31.

178. Wilson S.B, King P.J., Street H.E. (1971) Studies on the growth in culture of plant cells. XII. A versatile system for the large-scale batch or continuous culture of plant cell suspensions. Journal Exp. Botanic, 22 (70), pp. 177-207.

179. Woragidbum-rung K., Sae-Tang P, Yao H, Han J., Chovatcharin S, Zhong J.J. (2001) Impact of conditioned medium on cell cultures of Panax notoginseng in air-lift bioreactor. Process. Biochemistry, 33, pp. 209-213.

180. Wu J, Zhong J-J. (1999) Production of ginseng and its bioactive components in plant cell culture: Current technological and applied aspects. Journal of Biotechnology, 68, pp.89-99.

181. WuJ.Y, Wong К, Но K.P., Zhou L.G. (2005) Enhancement of saponin production in Panax ginseng cell culture by osmotic stress and nutrient feeding. Enzyme and microbial technology, 36 (1), pp. 133-138.

182. Yadov J.S, Maiti A. (2002) Asymmetric total syntheses of panaxytriol and panaxydol, potent antitumor agents from Panax ginseng. Tetrahedron, 55, pp. 4955-4961.

183. Yahara S, Kasai R, Tanaka O. (1977) New dammarane type saponins of leaves of Panax japonicus C.A.Meyer (1), chikusetsusaponins145 0,-L 49a 0 and -L 410 0. Chem. Pharm. Bull, 25 (8), pp. 20412047.

184. Yahara S, Tanaka O, Nishioka I. (1978) Dammarane type saponins of leaves of Panax japonicus C.A. Meyer. 111. Saponins of the specimens collected in Tottori-ken, Kyoto-shi and Niigata-ken. Chem. Pharm. Bull., 26 (10), pp. 3010-3021.

185. Yip T.T, Lau C.N.B, But P.P.H, Koug Y.C. (1985) Quantitative analysis of ginsenosides in fresh Panax ginseng. American J. of Chinese Med., XI11, 1-4, pp. 77 88.

186. Yu K.W., Murthy H.N, Hahn E.-J, Paek K.-Y. (2005) Ginsenosidesproduction by hairy root cultures of Panax ginseng: influence of temperature and light quality. Biochemical Engineering Journal 23, pp.53-56.

187. Yu K.W., Gao W.Y., Son S.H., Раек K.Y. (2000). Improvement of ginsenoside production by jasmonic acid and some other elicitors in hairy root culture of ginseng {Panax ginseng C.A. Mayer). In vitro Cell. Dev. Biol. 36 pp. 424-428.

188. Yun T.-K. (2003) Brif of introductuon of Panax ginseng C.A.Meyer. Journal Korean Medical Science, 16 pp.3-5.

189. Zhang J.T.,Yang Y.,Qu Z.W.,Jiang X.Y.,Liu M. (1993) Studies on nootropic mechanism of ginsenoside Rbj and Rgj. Proceedings of the 6th international ginseng symposium, Korea ginseng &tobacco research institute, pp. 69-74.

190. Zhang Y.H., Zhong J.J.,Yu J.Y. (1996) Enhancement of ginseng saponin production in suspension cultures of Panax notoginseng Manipulation of medium sucrose. J. of Biotechnology, 51 (1), pp. 49-56.

191. Zhang Y.H., Zhong J.J. (1997) Hyper-production of ginseng saponin and polysaccharide by high density cultivation of Panax notoginseng in an air-lift bioreactor. Enzyme and microbial, technology, 21, pp. 59-63.

192. Zhang H., Lu Z., Tan G.T., Qiu S., Farnsworth N.R., Pezzuto J.M., Fong H.H. (2002) Polyacetyleneginsenoside-Ro, a novel triterpene saponin from Panax ginseng. Tetrahedron letters, 43, pp. 973-377.

193. Zhong J.J., Bai Y., Wang S.J. (1996) Effects of plant growth regulators on cell-growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium. Journal of Biotechnology, 45 (3), pp. 227-234.

194. Zhong J.J., Zhu Q.X. (1995) Effect of initial phosphate concentration on cell growth and ginsenoside saponin production by Suspended cultures of Panax notoginseng. Applied biochemistry and biotechnology, 55 (3),pp. 241-247.

195. Zhou, J., Huang W.-G., Wu M.-Z., Yang C.-R., Feng K.-M., Wu Z.-Y. (1975) Triterpenoids from Panax Linn, and their relationship with taxonomy and geographical distribution. Acta Phytotaxonomica Sinica, 13(2), pp.29-45, plates 6-7.

196. Zhou, L. G., Zheng G. Z., Wang S.L. (1991). Comparative studies on large scale cell culture of Panax notoginseng, Panax ginseng and Panax quinquefolium. Chinese Journal of Botany, 3(2), pp.161-165.

197. Zhu S., Zou K., Fushimi H., Cai S., Komatsu K. (2004) Comparative study on triterpene saponins of ginseng drugs. Planta medica, 70, pp. 666-677.

198. Zenk М.Щ1978) The impact of plant cell culture on industry. In: Frontiers of plant tissue culture 1978. Ed. Thorpe T. A., University of Calgary, Calgary, pp. 1 -13.

199. Zin T.D., Kondo N., Shoji J. (1976) Studies of P.japonicus rhizoma. The structures of chikusetsusaponins 1, la, lb, lVa and glycoside PI. Chem. Pharm. Bull., 24 (2), pp.253-261.

200. Zou K., Zhu S., Tohda C., Cai S., Komatsu K. (2002) Dammarane-type saponins from P.japonicus. J. Nat. production, 65, pp. 346-351.

201. Zou K., Zhu S., Meselhy M. R., Tohda C., Cai S., Komatsu K. (2002) Dammarane-type saponins P. japonicus and their new rite outgrowth activity in SK-N-SH cells J. Nat. production, 65, pp. 1288-1292.