Сравнительная оценка индукции апоптоза производными платины in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Огородникова, Мария Владимировна

• Огородникова, Мария Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Огородникова, Мария Владимировна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Противоопухолевые препараты, индуцирующие апоптоз опухолевых клеток.

1.2. Молекулярные механизмы действия препаратов группы платина.

1.2.1. Взаимодействие цисплатина с ДНК.

1.2.2. Соединения платины и апоптоз.

1.2.3. Лекарственная резистентность и соединения платины.

1.2.4.Маркеры резистентности к цисплатину

1.2.5.Трансмембранный перенос соединений платины и их локализация в клетке.

1.3. Характеристика методов регистрации апоптоза.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Материалы и реактивы.

2.2. Клеточные линии.

2.3. Оценка цвгготоксического действия химиопрепаратов МТТ-тестом.

2.4. Проточно-цитофлуориметрический анализ.

2.5. Определение апоптоза методом двойного окрашивания.

2.6. Определение активной каспазы-3.

2.7.Исследование апоптоза методом TUNEL с использованием набора АРО

DIRECT Kit.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. Оценка цитотоксической активности препаратов группы платина с использованием МТТ - теста.

3.1.Определение цитотоксической активности противоопухолевых препаратов цикл 01 и I агам а, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии Jurkat (Т-клеточный лимфобластоидный лейкоз человека).

3.2.Определение цитотоксической активности противоопухолевых препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии Raji (В-клеточный лимфобластоидный лейкоз человека).

3.3. Определение цитотоксической активности пр отив о опухол е в ы х препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии U 937(моноцитарная лимфома).

3.4. Определение цитотоксической активности противоопухолевых препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии T47D (рак молочной железы).

3.5. Определение цитотоксической активности противоопухолевых препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии меланомы человека mel Р.

3.6. Определение цитотоксической активности противоопухолевых препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии рака предстательной железы PC - 3.

3.7. Определение цитотоксической активности противоопухолевых препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина на клеточной линии рака молочной железы MCF-7.

3.8. Обобщение результатов полученных методом МТТ.

Глава 4. Исследование лекарственно-индуцированного апоптоза методами проточной цитофлуориметрии.

4.1. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3, Tunel на клеточной линии Jurkat.

4.2. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3, Tunel на клеточной линии Raji.

4.3. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3, Tunel на клеточной линии U937.

4.4. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваншш Аннексин/PI, каспазы-Зна клеточной линии mel Р.

4.5. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3 на клеточной линии SKOV-3.

4.6. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3-3, на клеточной линии MCF-7.

4.7. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3 на клеточной линии T47D.

4.8. Определение лекарственно-индуцированного апоптоза методом двойного окрашиваниия Аннексин/PI, каспазы-3 на клеточной линии РС-3.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительная оценка индукции апоптоза производными платины in vitro»

В соответствии с современными представлениями, злокачественную опухоль можно рассматривать как заболевание клетки, в основе которого лежит повреждение ее генома, вследствие чего возникает нарушение четко сопряженных в нормальной клетке процессов пролиферации и дифференцировки в сторону усиления пролиферации, снижение способности к физиологическому механизму гибели клеток — апоптозу - программе самоликвидации, заложенной в геноме всех клеток. Исследования конца 20 века привели к формированию концепции, согласно которой в ответ на первичные повреждения внутриклеточных мишеней противоопухолевыми препаратами разного механизма действия в опухолевой, клетке происходит индукция апоптоза. Особое место в этом аспекте занимают препараты, относящиеся к группе комплексных соединений платины.

С момента открытия цисплатина Б. Розенбергом в 1960 году как соединения, обладающего противоопухолевой активностью, прошло около 45 лет; за это время интерес к поиску новых комплексных соединений платины возрос. В настоящее время, помимо цисплатина широко используются такие препараты как карбоплатин, оксалиплатин, а также проходят испытания ряд новых комплексных соединений платины третьего поколения: таких как сатраплатин, недаплатин, ZD0473 (JM 473), BBR3464 [74].

Среди комплексных соединений двухвалентной платины большой интерес представляет отечественный препарат циклоплатам - 8(-)-малатоамин (циклопентиламин) платино(П), который был синтезирован П.А. Чельцовым в лаборатории координационных соединений платиновых металлов Института общей и неорганической химии им. Н.С. Курнакова РАН. Циклоплатам обладает хорошей растворимостью в воде, широким спектром и высокой противоопухолевой активностью, отсутствием нефротоксичности и перекрестной резистентности с известными платиновыми и некоторыми цито стати ками других групп [12]. Лиофилизированная форма циклоплатам а, разработанная в ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН разрешена для медицинского применения при раке яичников, мезотелиоме плевры и множественной миеломе. Получены частичные ремиссии у больных плоскоклеточным раком легкого, желудка, яичников и шейки матки. В РОНЦ им. Н.Н. Блохина при монотерапии рака яичников эффективность препарата достигала 54%. Циклоплатам применялся при лечении рака предстательной железы - в монотерашш и в комбинации с винбластином. У больных с гормонорезистентным раком предстательной железы при монотерапии объективный эффект достигнут в 7% случаев, в 30% -в комбинации с другими препаратами.

Молекулярные механизмы действия циклоплатама мало изучены. Как и у других препаратов комплексных соединений платины, мишенью цитотоксического действия циклоплатама является суперспиральная ДНК. При сравнительном изучении в опытах in vitro циклоплатам в терапевтической концентрации оказался более эффективным при действии на ДНК, чем цисплатин [9]. При этом воздействие циклоплатама на ДНК клеток лейкоза in vivo может быть обнаружено уже через 24 час. В механизмах действия-циклоплатама показано, что он модулирует (З-адренорецепторную активность плазматической мембраны [8]. Имеются данные об ингибирующем влиянии циклоплатама на протеинкиназу С [18].

Несмотря на такой большой интерес к циклоплатаму в клинике in vitro этот препарат был изучен мало.

Цель работы - изучить индукцию апоптоза отечественным противоопухолевым препаратом циклоплатамом в сравнении с цисплатином, оксалиплатином, карбоплатином.

Задачи исследования.

1. Оценить цитотоксическую активность противоопухолевых препаратов циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина и карбоплатина на клеточные линии с применением МТТ - теста.

2. Сравнить цитотоксическую активность циклоплатама с цисплатином, оксалиплатином и карбоплатином.

3. Оптимизировать условия индукции и регистрации апоптоза, вызванного противоопухолевыми препаратами in vitro.

4. Оценить лекарственно-индуцированный апоптоз на клеточных линиях с применением современных методов регистрации апоптоза.

5. Изучить влияние на апоптоз циклоплатама в сравнении с цисплатином, оксалиплатином и карбоплатином.

Научная новизна исследования. Показана цитотоксическая активность циклоплатама в сравнении с цисплатином, карбоплатином, оксалиплатином на клеточных линиях лимфобластоидного, моноцитарного, меланоцитарного и эпидермального происхождения. Впервые показана способность отечественного противоопухолевого препарата платины второго поколения — циклоплатама - индуцировать апоптоз клеток линий Raji, U937, MelP, MCF-7, T47D, SKOV-3. Проведена оценка действия циклоплатама на апоптоз в сравнении с цисплатином, оксалиплатином, карбоплатином. Применено три принципиально различных методических приема для определения популяционного анализа лекарственно-индуцированного апоптоза с использованием проточной цитофлуориметрии.

Практическая значимость исследования. Сочетание методов определения лекарственно - индуцированного апоптоза in vitro может найти применение для скрининга новых соединений и веществ с потенциальной противоопухолевой активностью и изучения их механизмов действия.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Огородникова, Мария Владимировна

выводы

1. Циклоплатам и оксалиплатин в сравнении с цисплатином и карбоплатином обладают более выраженной цитотоксической активностью по отношению к опухолевым клеточным линиям лимфобластоидного (Jurkat, Raji) и моноцитарного происхождения (U937).

2. Установлено, что цитотоксические эффекты циклоплатама и цисплатина по отношению к опухолевым клеткам эпителиального (T47-D) и меланоцитарного происхождения (MelP) выше, чем цитотоксические эффекты карбоплатина и оксалиплатина.

3. Препараты группы комплексных соединений платины - циклоплатам, цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин - индуцируют гибель опухолевых клеток линий Jurkat, Raji и U937 по механизму апоптоза.

4. Уровень индуцированного апоптоза возрастает с увеличением концентрации и/или длительности инкубации опухолевых клеток с химиопрепаратами.

5. Препараты группы комплексных соединений платины - циклоплатам, цисплатин, оксалиплатин - индуцируют апоптоз популяций клеток линий как меланоцитарного (MelP), так и эпителиального происхождения (SKOV-3, T47-D, РС-3). При действии циклоплатама уровень апоптоза выше, чем при действии цисплатина и оксалиплатина.

6. Противоопухолевые препараты группы платины значительно сильнее индуцируют апоптоз и оказывают более выраженное цитотоксическое действие в отношении клеток лимфобластоидного и моноцитарного происхождения по сравнению с клетками эпителиального и меланоцитарного происхождения.

Заключение.

Платиновые производные заняли прочные позиции в химиотерапии злокачественных новообразований. Среди других современных противоопухолевых средств они считаются особо перспективными, поэтому интенсивно разрабатываются в ряде стран, в том числе и в России. В ряду новых платиновых производных существует два препарата, достигших третьей фазы клинических испытаний и разрешенных для практического применения — это оксалиплатин и оригинальное отечественное производное платины - циклоплатам.

В настоящее время известно, что большинство противоопухолевых препаратов индуцируют гибель опухолевых клеток по механизму апоптоза.

В наптих исследованиях мы сравнили действие на цитотоксическую активность и индукцию апоптоза отечественного производного платины циклоплатама с зарубежными препаратами цисплатином, карбоплатином и оксалиплатином. В качестве модельной системы нами был выбрана панель клеточных линий различного происхождения, которая включала линии рака молочной железы, яичников, меланомы кожи, предстательной железы, Т-клсточного лимфобластоидного лейкоза, В- клеточного лимфобластоидного лейкоза, моноцитарной лимфомы.

На первом этапе нами проведено исследование по определению цитотоксической активности циклоплатама на клеточные линии в сравнении с другими платиновыми производными: цисплатином, оксалиплатином, карбоплатином. Показано, что циклоплатам обладает цитотоксической активностью в отношении всех клеточных линии. При увеличении концентрации циклоплатама уменьшается количество живых клеток. В отношении клеточных линий лимфобластного происхождения Jurkat, Raji, U937 значения ИК50 меньше либо равно теоретической терапевтической концентрации циклоплатама (1х10~5М).

При сравнении циклоплатама с оксалиплатином на клеточной линии

116

Jurkat в концентрации достоверных различии между действием этих препаратов на выживаемость опухолевых клеток не выявлено (р>0,05). Выживаемость опухолевых клеток под действием циклоплатама в сравнении с цисплатином и карбоплатином ниже, так, при использовании концентрации 0,5х10"5М процент выживших клеток для циклоплатама был равен 46,3%, тогда как для цисплатина и карбоплатина 37,7% и 100% соответственно. Циклоплатам обладает большей цитотоксической активностью по сравнению с цисплатином, карбоплатином. Циклоплатам имеет схожий эффект с оксалиплатином, о чем свидетельствуют значения ИК5о (0,4хЮ~5М и 0,6x10^ соответственно).

При сравнении циклоплатама с цисплатином на клеточной линии Raji статистически достоверных различий/ не выявлено при концентрации 0,5хЮ~5М, 1х104М, а также для циклоплатама с оксалиплатином в концентрации 1х10"5М. При сравнении циклоплатама с оксалиплатином последний обладает большей цитотоксической активностью в концентрациях lxlO^M, 0,5хЮ"5М. Так, при использовании концентрации 1x10"^ процент живых клеток для циклоплатама составил 61,4 % для оксалиплатина 52,5%, при концентрации 0,5 х

105М — 55,1% и 36,3% соответственно. Циклоплатам обладает большей цитотоксической активностью в отношении опухолевых клеток линии Raji в сравнении с цисплатином и карбоплатином. На основании полученных данных были определены значения ИК50 для циклоплатама, цисплатина, оксалиплатина которые составили 0,55хЮ"3М, 0,73хЮ"5М, 0,15хЮ"5М соответственно. При сравнении циклоплатама с другими препаратами в концентрации все полученные данные были достоверны (р>0,05).

При действии циклоплатама, цисплатина и оксалиплатина на клетки линии U937 в концентрациях О^хЮ^М, lxlO^M достоверных различий выявлено не было. При изучении действия циклоплатама в дозе близкой к терапевтической in vivo — 1хЮ"5 М, процент живых клеток составил 9,2 %.

Для цисплатина, оксалиплатина, карбоплатина были построены кривые

117 доза-эффекг» и определены значения ИК50, которые составили 0,ЗЗх10"5М, 0,44хЮ"5М, 6,6хЮ"5М соответственно.

Таким образом, нами показано, что циклоплатам обладает цитотоксической активностью в отношении клеточных линии лимфобластоидного происхождения Jurkat, Raji, и моноцитарного происхождения U937. При увеличении концентрации циклоплатама уменьшается количество живых клеток. В отношении клеточных линий значения ИК50 меньше либо равно теоретической терапевтической концентрации циклоплатама и оксалиплатина. Для клеточных линий Raji, U937, значение ИК50 цисплатина меньше либо равно теоретической терапевтической концентрации, тогда как для Jurkat значение ИК50 превышает теоретическую терапевтическую концентрацию для в 3,7 раза. Значение ИК5о карбоплатина для клеточной линии U937 превышает теоретическую терапевтическую концентрацию в 3 раза, для линий Jurkat, Raji значений получено не было.

Также нами была исследована цитотоксическая активность в отношении клеточных линий эпидермального - T47D, РС-3, MCF-7 и меланоцитарного происхождения- mel Р.

С увеличением концентрации циклоплатама и цисплатина уменьшается процент живых клеток. В отношении оксалиплатина и карбоплатина такой тенденции не наблюдается. Были определены значения ИК50 для циклоплатама - 0,46х10"5М, и цисплатина - 0,9х10"5М. Для оксалиплатина и карбоплатина эти значения не были получены. Эффективными препаратами в отношении клеточной линии рака молочной железы T47D являются циклоплатам и цисплатин.

При сравнении циклоплатама с цисплатином на клеточной линии mel Р достоверных различий в пределах выбранных концентраций не выявлено.

Определены значения ИК50 для циклоплатама цисплатина и карбоплатина и составляют 0,93хЮ"5М, 2,68x1 0"5М, 6,2хЮ'5М соответственно. Эффективным препаратом в отношении клеточной линии меланомы человека является

118 циклоплатам, так как только его значение меньше теоретической терапевтической концентрации.

При действии препаратов на клетки линии РС-3 самый низкий процент выживших клеток получен после действия циклоплатама в дозе lxlO^M и составил 33%. Значение ИК50 для циклоплатама составило 4,47><10"5М. При действии циклоплатама и цисплатина на клетки линии MCF-7 в концентрации 1хЮ"5М и 0,5x1 О^М полученные результаты статистически недостоверны. Значения ИК50 для циклоплатама, цисплатина, карбоплатина составляют 5ДхЮ"5М, 4,5хЮ~5М, 8ДхЮ~5М соответственно.

В настоящей работе было применено три принципиально различных методических приема для определения популяционного анализа лекарственно - индуцированного апоптоза с использованием проточной цитофлуориметрии.

Метод двойного прижизненного окрашивания с использованием

Аннексина V-FITC в комбинации с PI, основанный на способности

Аннексина V меченного F1TC связываться с фосфатидилсерином, позволяет зафиксировать апоптотические клетки. В связи с тем, что транслокация фосфатидилсерина происходит и в некротических клетках Аннексии V используют в сочетании с витальным красителем PI. Апоптотические клетки начинают взаимодействовать с Аннексином V после того, как произошла конденсация хроматина, но до утраты плазматической и ядерной мембранами способности ограничивать проникновение PI. В результате живые клетки не связывают ни Аннексии V, ни PI. Апоптотические клетки с неповрежденной мембраной окрашиваются только Аннексином V, а поздние апоптотические или некротические клетки - и Аннексином V, и PI. Так под действием циклоплатама в течение 72 часов при использовании терапевтической концентрации 1х10"5М число ранних апоптотических клеток (AnV^PI") для циклоплатама составило 62%, для цисплатина - 29,2% для оксалиплатина

25%, для карбоплатина 14%. Как видно циклоплатам действует на клеточную линию лучше чем все остальные препараты. Это касается и

119 применения максимальной дозы 1 хЮ"4 Моль.

Как упоминалось ранее, для определения апоптоза мы также использовали методы определения активной каспазы-3 и определение внутринитевых разрывов ДНК (Tunel) в клетке. Мы определили, что циклоплатам в сравнении с другими препаратами платины индуцирует активную каспазу-3 и внутринитевые разрывы ДНК в клетках линии Jurkat лучше, чем другие препараты. Так при действии концентрации 1хЮ"5М для циклоплатама количество апоптотических клеток составило 76%, для цисплатина - 51%, для оксалиплатина - 20,8%, для карбоплатина - 16,5%. При определении внутринитевых разрывов ДНК процент положительных клеток по маркеру составил для циклоплатама -83,5%, цисплатина 74,7%, для оксалиплатина 16%, карбоплатина 10,1%. При увеличении концентрации до lxlO"4 Моль получены статистически не достоверные данные при сравнении циклоплатама и цисплатина, которые составили 90,5% и 88,6%. Для оксалиплатина и карбоплатина наблюдается увеличение популяции апоптотических клеток, которое составляет 70,8% и 41,2% соответственно. Таким образом, циклоплатам в сравнении с оксалиплатином и карбоплатином эффективнее индуцирует гибель клеток линии Jurkat по типу апоптоза.

При исследовании лекарственно-индуцированного апоптоза на клеточной линии Raji после инкубации 72 часа под действием циклоплатама в концентрации 1хЮ"5М, количество клеток в раннем апоптозе (AnV^PI ) для циклполатама составило 4,7% (*р>0,05), для цисплатина 19,0%, для оксалиплатина 13,9%, для карбоплатина, 13,7%, соответственно. Популяция клеток положительных по AnV* и Р1* для циклоплатама составила 65,1%, для цисплатина - 25,6%, для оксалиплатина -45,7, для карбоплатина -5,9% №Х>,05).

При определении активной каспазы -3 количество апоптотических клеток при действии концентрации 1х10"5М составило циклоплатама 61,7%, для цисплатина 35,7%, для оксалиплатина 46,8%, для карбоплатина -12,7%.

120

Данные по определению внутринитевых разрывов ДНК показали, что при использовании концентрации lxlO'^M количество процент положительных клеток по маркеру составляет для циклоплатама-91,3%, для цисплатина -69,9%, для оксалиплатина-16%, для карбоплатина 10,1%. Циклоплатам является наиболее эффективным препаратом, малоэффективным -карбоплатин.

Изучение действия циклоплатама на индукцию апоптоза клеток линии U937 мы проводили в сравнении с оксалиплатином. При определении апоптотических клеток методом двойного окрашивания после инкубации 72 часа количество ранних апоптотических клеток при использовании концентрации 0,5*10"5M для циклоплатама составляет 60%, для оксалиплатина 17%. При использовании дозы 1хЮ~5 М количество поздних апоптотических или некротических клеток для циклоплатама и оксалиплатина уменьшилось и составило 24% и 7 % соответственно. При увеличении дозы (lxxlO^M) популяция клеток положительных по AnV* и отрицательных по PI ~ увеличилась как для циклоплатама так и для оксалиплатина и составила 77% и 39% соответственно. Количество клеток положительных по AnV* и Pf наоборот уменьшилось и составило для циклоплатама 15%, для оксалиплатина 14%. При определении активной каспазы-3 количество апоптотических клеток при действии циклоплатама составило 81,2% (0,5х10~5М) и увеличивается до 96,2% (1хЮ~5М). Количество клеток положительных по маркеру Tunel также увеличилось и составило 27,4% (0,5хЮ"5М), 56,1% (1хЮ"5М), 90,5% (МО^М).

При определении апоптоза методом двойного окрашивания на клеточной линии меланомы кожи MelP при концентрации 1х 1 О^М общее количество клеток положительных по AnV* и Pf и AnV* PI " для циклоплатама составило 53,8%, для цисплатина 44,4%, для оксалиплатина

11,2 %, что меньше на 42,6% по сравнению с циклоплатамом. Популяция клеток положительных по каспазе-3 составила для циклоплатама 65%, для цисплатина 29,3%, для оксалиплатина 32,6%. Таким образом циклоплатам

121 оказывает большей эффект на опухолевые клетки линии меланомы кожи Mel Р, чем оксалиплатин и цисплатин.

Циклоплатам оказывает большей эффект на опухолевые клетки линии рака яичников SKOV-3 чем цисплатин и оксалиплатин. Так при инкубации 72 часа количество ранних и поздних апоптотических клеток после действия концентрации 1*10~5M для циклоплатама составило 34,2%, для цисплатина 18,1%, для оксалиплатина 18,7%. При увеличении концентрации до 1*10"*М количество апоптотических клеток для циклоплатама составило 66,4%, для цисплатина 32%, для оксалиплатина 9,1%. Определение активной каспазы-3 проводили после инкубации клеток линии SKOV-3 с циклоплатамом, цисплатином, оксалиплатином в течение 72 часов. После инкубации с химиопрепаратами в дозе 0,510 ~5М количество апоптотических клеток для циклоплатама составило 35,4%, для цисплатина 16,1%, для оксалиплатина-17,8%. С увеличением концентрации химиопрепаратов популяция клеток, положительных по каспазе-3, в отношении циклоплатама увеличилась и составила 53,3%, для цисплатина и оксалиплатина - незначительно \ увеличилась и составила 21% и 26,5% соответственно. С увеличением дозы препаратов количество апоптотических клеток увеличилось и составило для циклоплатама 80%, для цисплатина 55%, для оксалиплатина- 35,4%.

Циклоплатам оказывает большей эффект на опухолевые клетки линии рака яичников MCF-7, чем цисплатин. При инкубацййО 1 "5М общее ^ количество окрашенных клеток для циклоплатама составило 58,9%, для цисплатина 39,9%, для оксалиплатина 36,9%. При определении активной каспазы-3 при использовании максимальной дозы количество апоптотических клеток составило 52,6%, 12,8%, 10,9% соответственно.

Эффективными препаратам в отношении клеточной линии T47-D является циклоплатам. При концентрации 410 ~5М общее количество окрашенных клеток для циклоплатама составило 32%, для цисплатина 30,5%, для оксалиплатина 21,5%. Данные по каспазе -3 показывают, что самым эффективным препаратом является циклоплатам - 49,2%, тогда как для

122 цисплатина и оксалиплатина только процент апоптотичвеских клеток составил 27,3% и 11,4% соответственно.

Таким образом полученные данные показывают, что при изучении эффективности препаратов группы платины препаратом оказывающим высокий эффект в отношении клеточных линий является циклоплатам исключение составляют линии MCF-7 и РС-3', где полученные значения LD50 превышают теоретическую терапевтическую дозу in vitro в пять раз.

Применяя современные методы определения апоптоза мы показали, что противоопухолевые препараты циклоплатам, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин индуцируют гибель опухолевых клеточных линий разного происхождения по механизму апоптоза.

Показано, что противоопухолевые препараты циклоплатам, Цисплатин, Оксалиплатин также индуцируют гибель клеток линий полученных от больных с солидными опухолями: меланома кожи, рак яичников, рак молочной железы, рак предстательной железы. В сравнении с цисплатином и оксалиплатином - при использовании теоретической терапевтической дозы in vitro циклоплатам эффективнее индуцирует гибель опухолевых клеток по типу апоптоза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Огородникова, Мария Владимировна, 2009 год

1. Багрова С.Г. Результаты IT фазы клинического изучения циклоплатама при резистентных солидных опухолях. // Вопросы онкологии. 2001. Том 47.№ 6. Стр.752-756

2. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза.- Mi: Эдиториал УРСС,2002.-320с.

3. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии.-М.: Агат-Мед, 2001.-110с.

4. Горбачева Л.Б., Васильева С.В. и др. Новый противоопухолевый препарат циклоплатам: цитотоксичность и межнитивые сшивки ДНК.// Антибиотики и химиотерапия,1999, Том 44 №4. Стр. 9-12.

5. Горбунова В.А., Оборотова Н.А.,Чельцов П.А., и др. Новый препарат платины второго поколения циклоплатам, лиофилизированный. // Вестник РОНЦ: - 2001. - №4. - С. 53-57.

6. Горбунова В.А. Препарат* циклоплатам. Результаты клинических испытаний при резистентных солидных опухолях // Вестн. моек, онкол. общества. 2004. - № 11. С. 11-14.

7. Семенов Н.Н. Активность оксалиплатина (элоксатина) при платиночувствительных опухолях // Фарматека. 2005. - № 18. - С. 63-65.

8. Солнцева Т.И. Влияние циклоплатама на мембранные свойства опухолевых клеток: p-адренергические рецепторы и адгезия на пластике // Циклоплатам: Сб. научи, тр. / М.: ОНЦ РАМН, 1993. -С.100 -106.

9. Стручков В.А. Механизм действия циклоплатама на структуры ДНК опухолевых клеток // Циклоплатам: Сб. научн. тр. / М.: ОНЦ РАМН, 1993.-С. 90-99.

10. Матвеев Б.П., Бухаркин Б.В., Калинин С.А. Химиотерапия гормонорезистентного рака предстательной железы.//Урология. 2005. №4. Стр.20-23

11. Матвеев Б.П., Горбунова В.А., и др. Циклоплатам в лечении больныхраспространенным раком предстательной желез ы//Ур ология нефрология.1996.№3 Стр.34-36.

12. Оборотова Н.А. Противоопухолевые субстанции и их лекарственные формы, созданные в РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН // В сб. Экспериментальная онкология на рубеже веков. Под редакцией Давыдова М.И. и Барышникова А.Ю. М. - 2003. С. 5-58.

13. Трещали на Е.М., Жукова О., Герасимова Г.К. Методические указания по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ. // В книге Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.

14. Фильченков А.А, Стойка Р.С. Апоптоз и рак, К.: Морион, 1999. -184 с.

15. Швембергер И.Н., Гинкул Л.Б. Апоптоз: Роль в нормальном онтогенезе и патологии. 2002. Вопросы онкологии, Том 28. №2. Стр. 153-171.

16. Al-Sarraf М. Treatment of locally advanced head and neck cancer: historical and critical review. // Cancer Control 2002. - Vol.9. - P. 387399.

17. Arando D., Wilson A.J. et al Molecular mechanisms of action and prediction of response to oxaliplatin in colorectal cancer cells. BrJCancer.// 2004-V16-P.260-261.

18. Bacso Z., Everson R.B. et al. The DNA of Annexin V-binding apoptotic cells is highly fragmented. //Cancer Reasearch -2000-Vol. 60. P. 46234628

19. Barry M.A., Behnke C.A. and Eastman A. Activation of programmed cell death (apoptosis) by cisplatin, other anticancer drugs, toxins and hyperyheremia // Biochem. Pharmacol. -1990. -Vol.40. -P.2353-2362.

20. Basil A., Akkaraju G.R. Regulation of caspase activation and cis-diamminedichloroplatinum(II) induced cell death by protein kinase C. // Biochemistry. -1999. Vol. 38. - P. 4245-4251.

21. Benhar M., Engelberg D., Levitzki A. ROS, stress-activated kinases and stress signaling in cancer. // EMBO Rep. 2002. Vol. 3. - P. 420-425.

22. Beretta G.L., Righetti S.C., Lombardi L. et al. Electron microscopy analysis of early localization of cisplatin* in ovarian carcinoma cells. // UltrastructPathol.-2002. Vol.26.-P. 331-334

23. Boulikas T. DNA lesion-recognizing proteins and the p53 connection. -1996. Vol; 16. - P.225-242.

24. Boulikas Т., Lundstrom K. Viral and non-viral vectors in gene therapy: technology development and* clinical trials. // Technol Cancer Res Treat. -2003.-P. 471-86.

25. Boulikas Т., Vougiouka M. Cisplatin and platinum drugs at the molecular level. // Oncol Rep. 2003. - Vol.16. - P. 1663-1682.

26. Bossy-Wetzel E, Green DR. Detection of apoptosis by Annexin V labeling. Methods Enzymol 2000;322:15-18.

27. Brabec V., Kasparkova J. Modifications of DNA by platinum complexes relation to resistance of tumors to platinum antitumor drugs.//Drug Resistance Updates -2005-V.8.-P.131-146

28. Bniijnincx P.C., Sadler P.J. New trends for metal complexes with anticancer activity.// Current opinion in Chemical Biology -2007 -V.12.-P.l-10

29. Caglar К., Kinalp С., Arpaci F et al. Cmniilative prior dose of cisplatin as a cause of the nephrotoxicity of high-dose chemotherapy followed by analogous stem-cell transplantation. // Nephrol Dial. Transplant. 2002: -Vol. 17.-P.1931-1935

30. Calabresi P. and Chabner B.A. Chemotherapy of neoplastic diseases // In Pharmacological Basis of Therapeutics, Eight Edition. -1990. -P.1202-1263.

31. Capizzi R.L. Amifostine reduces the incidence of cumulative nephrotoxicity from cisplatin: laboratory and clinical aspects. // Semin Oncol. 1999. - Vol. 26. - P. 72-81

32. Caraceni A., Martini C., Spatti G. et al. Recovering optic, neuritis during systemic cisplatin and carboplatin, chemotherapy. // Acta Neurol Scandr -1997.-Vol: 96.-P. 260-261

33. S.G. Chaney, S.L. Campbell, B. Temple, E. Bassett, Y. Wu and M. Faldu, Protein interactions with platinum-DNA adducts: from structure to function, J InorgBiochem 98 (2004) (10), pp. 1551-1559.

34. Chollet P., Bensmaine M.A., Brienza S. Single agent activity of oxaliplatin in heavity pretreated advanced epithelial ovarian cancer // Ann. Oncol. -1996.-Vol. 7.-P. 1065-1070.

35. Crown J., Donovan N. et al: Caspase 3 in Brest Cancer.// Clinical Cancer Research -2003-V9.-P.738-742.

36. Denkert C., Schmitt W.D., Berger S. et al. Expression of mitogen-activated kinase phosphatase-1 (MKP-l) in primary human ovarian carcinoma. // Int J Cancer. 2002. - Vol. 102. - P. 507-513.

37. Douglas J. Taatjes • Burton E. Sobel • Ralph C. Budd Morphological and cytochemical determination of cell death by apoptosis Histochem Cell Biol (2008) 129:33-43

38. Earnshaw W.C. Nuclear changes in apoptosis. // Curr.Opin. Cell Biol. -1995.-Vol.7.-P.337-343.

39. Eastman A., Schulte N., Sheibani N. et al. Mechanism of resistance to platinum drugs. // In: Nicolini M ed. Platinum and other metal coordination compounds in cancer chemotherapy. Boston . 1988. — P. 178-196.

40. Edelman J.M. Past, present and future of gemcitabine and carboplatin regimens in an advanced non-small cell lung cancer. // Lung Cancer. — 2002.-Vol. 38.-P. 37-43.

41. Emert-Sedlak L., Shangary S et al. Involvement of cathesin D in chemotherapy-induced cytochrome с release, caspase activation, and cell death. Mol Cancer Ther. 2005 V.5 P.733-742

42. Epstein R.G. Drug-induced DNA damage and tumor chemosensitivity // J. Clin. Oncol. -1990. Vol.8. - 2062-2084.

43. Fadok V.A., Voelker P.A., Campbell J.J. et al. Exposure of phosphatidylethanol-amine on the surface of apoptotic cells // Exp. Cell. Res.-1992. -Vol.232. -P.430-434.

44. Falcieri E, Martelli AM, Bareggi R et al. The protein kinase inhibitor staurosporine induces morphological changes typical of apoptosis in MOLT-4 without concomitant DNA fragmentation. Biochem Biophys Res Com. -1993. -Vol.193. -P.19-23.

45. Foster R.S. Early stage testis cancer. // Curr Treat Options Oncol. 2001. -Vol. -2. -P. 413-419.

46. Gelasco A., Lippard SJ. NMR solution structure of a DNA dodecamer duplex containing a cis-ammineplatinum(II) d(GpG) intrastand cross-link, the major adduct of the anticancer drug cisplatin. // Biochemistry. 1998. -Vol. 37.-P. 9230-9239.

47. Galea A.M., Murray V. The interaction of cisplatin and analogues with DNA in reconstituted chromatin. // Biochim Biophys Acta. 2002. - Vol. -1579.-P. 142-152.

48. Galluzzi L, Maiuri MC, Vitale I, Zischka H, Castedo M, Zitvogel L, Kroemer G Cell death modalities: classiWcations and pathophysiological implications. Cell Death DiVer.- -2007.- Vol. 14.-P. 1237-124

49. Gavrieli Y, Sherman Y, and Ben Sasson S. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation // J. Cell Biol. -1992. -Vol.119. -P.493-501.

50. Gong J.G., Costanzo A., Yang H.Q. et al. The tyrosine kinase c-Abl regulates p73 in apoptotic response to cisplatin-induced DNA damage. // Nature. -1999. Vol. 399. - P. 708-712.

51. Gorczyca W., Gong J., Darzynkiewicz Z. Detection of DNA strand breaks individual apoptotic cells by the in situ by the terminal deoxynucleotidyl transferase and nick translation assays // Cancer Res. -1993a. -Vol.52. -P.1945-1951.

52. Gown AM, Willingham MC Improved detection of apoptotic cells in archival paraYn sections: immunohistochemistry using antibodies to cleaved caspase 3 // J Histochem Cytochem.- 2002.-Vol 50,- P.449-454.

53. Godard Т., Deslandes E., Lebailly P. et al. Early detection of staurosporine-induced apoptosis //Histchem. Cell Biol. -1999. -Vol.112. -P.155-161.

54. Hickman J.A. Apoptosis induced by anticancer drugs // Cancer Met. Rev. -1992. -Vol.11.-P.121-139.

55. Harries M., Kaye S.B. Recent advances in the treatment of epithelial ovarian cancer. // Expert Opin Investig Drugs. 2001. - Vol. - 110. - P. 1714-1724.

56. Hay M.P. ZD-0473 AstraZeneka. // Curr. Opin Investig.Drugs. 2000. -Vol. l.-P. 263-266.

57. Henkels K.M., Turchi J.J. Cisplatin-induced apoptosis proceeds de caspase-3-dependent and -independent pathways in cisplatin-resistant and -sensitive human ovarian cancer. // Cancer Res. 1999. -Vol. 59. p. 30773083.

58. Hesketh R. Gene therapy for cancer. In: The oncogene and tumor suppressor gene // Hesketh R ed. Cambridge, UK. 1997. - P. 61-69.

59. Hill J.M., Speer R.J. Organo-platinum complexes as antitumor agents. // Anticancer Res. 1982. - Vol. 2. -P.173-186.

60. Inuma H., Maruyama K., Okinaga К et al. Intracellular targeting therapy of cisplatin-encapsulated transferring-polyethylene glycol liposome on peritoneal dissemination of gastric cancer. // Int J Cancer. 2002. - Vol. 99.-P. 130-137.

61. Ito Y, Shibata M-A, Kusakabe K, Otsuki Y Method of specific detection of apoptosis using formamide-induced DNA denaturation assay// J Histochem Cytochem.- 2006,-Vol 54.- P.683-692.

62. Jamieson E.R., Jacobson M.P., Barnes C.M. et al. Structural and kinetic studies of cisplatin-modified DNA icosamer binding to HMGG1 domain B. // 1999. Vol. 274. - P.2346-12354.

63. Jansen B.A., Brower J., Reedijk J. et al. Glutation induces cellular resistance against cationic dinuclear platinum anticancer drugs. // J Inorg Biochem. 2002. - Vol. 89. - P. 197-202.

64. Kaufmann S.H. Induction of endonucleolytic DNA cleavage in humanacute myelogenous leukemia cells by etoposide, camtothecin, and other131cytotoxic anticancer drugs: a cautionary note // Cancer Res.- 1989. -Vol.49. -P.5870-5878.

65. Kaufmann S.H., Desnoyers S., Ottaviano Y. et al. Specific proteolytic cleavage of Poly (ADP-ribose) polymerase: an early marker of chemotherapy-induced apoptosis // Cancer Res.- 1993. Vol.53. - P.3976-3985.

66. Kigawa J., Sato S., Shimada M. et al. p53 gene status and chemosensitivity in ovarian cancer. // Hum Cell. 2002. - Vol. 14. г P.165-171.

67. Koo MS, Kwo YG et al. Signaling and function of caspase and c-jun N-terminal kinase in cisplatin-induced apoptosis // Mol Cells. 2002. -Vol.13. -P.l94-201.

68. Koopman G., Reutelingsperger C.P.M., Kuijten. G.A.M., Keehnen R.M.J., Pals S T. & van Ors M.H.J. Annexin V for Flow Cytometric Detection of phosphatidylserine exspression on В cells undergoing apoptosis // Blood. -1994. Vol.84. - P.1415-1420.

69. Kosmidis P., Mylonakis N., Nikolades C. et al. Paclitaxe! plus carboplatin versus gemcitabine plus paclitaxel in advanced non-small cell* lung cancer: a phase in randomized trial. // J Clin Oncol. 2002. - Vol. 20. - P.3565-3567.

70. Labat-Moleur F., Guillerment C., Lorimier P. TUNEL apoptic cell detection in tissue sections: critical evaluation and improvement // The

71. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. -1998. -Vol.46 (3). -P.327-334.

72. T. Latif, L. Wood and C. Connell et al., Phase П study of oral bis(aceto)ammine dicWoro(cyclohexamine)platinum(TV) (JM-216, BMS-182751) given daily x 5 in hormone refractory prostate cancer (HRPC) // Invest New Drugs.- 2005.-Vol. 1.-P. 79-84.

73. Lazebnik YA, Kaufinann SH, Desnoyers S. et al. Cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase by a proteinase with properties like ICE //Nature. -1994, Vol.371. -P.346-347.

74. Lee E.K., Regenold W.T., Shapiro P. Ras-mediated activation of ERK by cisplatin induces cell death independently of p53 in osteocarcoma and neuroblastoma cell lines. // Anticancer Drugs. 2002. - Vol. 13. - P. 859968.

75. Levresse V., Marek L., Blumberg D. et al. Regulation of platinum-compounds cytotoxicity by the c-Jun N-Terminal kinase and c-Jun signaling pathway in small-cell lung cancer cells. // Mol Pharmacol. -2002. Vol. 62. - P. 689-697.

76. Lin W.L., Li D.G. et al. Clinical and experimental study of oxaliplatin in treating human gastric carcinoma. World J Gastroenterol. //2004-V.19-P.2911-2915.

77. Lin X., Okuda Т., Holzer A. et al. The copper transporter CTRI regulates cisplatin uptake in Saccharomyces cerevisasiae. // Mol Pharmacol. 2002. -Vol. 62.-P. 1154-1159.

78. Ling Y.H., Priebe W. and Perez-Soler R. Apoptosis induced by anthracycline antibiotics in P388 parent and multidrug-resistant cells // Cancer Res.- 1993. Vol.53. - P.1845-1852.

79. Liu W., Staecker H., Stupak H et al. Caspase inhibitors prevent cisplatin-induced apoptosis of auditory sensory cells. // Neuroreport. 1998. - Vol. 9.-P. 2609-2614.

80. Mandic A. Cisplatin induces endoplasmatic reticulum stress and nucleus-independent apoptotic pathway. // J Biol Chem. 2003, - Vol. 278. - P. 9100-9196.

81. Mani S: Graham M.A. Bregman D.B., et al- Oxaliplatin: a review of evoling concepts //Cancer Invest.- 2002 Vol. 20 - P.246-63:

82. Mattern J., Stammler G., Koomagi R. et al. Spontaneous apoptosis in ovarian-cancer: an unfavorable prognostic factor: // Int J Oncol: — 1998. — Vol. 12.-P. 351-354.

83. Meyerhardt J.A., Fuchs C.S. Chemotherapy options for gastric cancer. // Semin Radiat Oncol. 2002. Vol. 12. -P: 176-186.

84. Mizutani Y., We X.X., Yoshida O. Chemoimmunosensitization of the T24 human bladder cancer line to Fas-mediated cytotoxicity and apoptosis by cisplatin and 5-fluorouracil. // Oncol Rep. -1999: Vol: 6: -P. 979-982.

85. Mu D:, Tursum M., Duckett D R. et al. Recognition and repair of compound DNA lesions (base damage and mismatch) by human mismatch repair and exicision repair systems. // Mol Cell Bioh 1997. - Vol. \1. - P: 760-769;

86. Muracami T, bis X, and? Cong J et al: Induction; of apoptosis by 5-Azacytidine: Drug Concentration-dependent Differences in Cell Cycle Specificity // Cancer Res. -1995. Vol.55. P.3093-3098:

87. Nagata J., Kijima H., Hatanaka H. et al. Reversal of drug resistance using hammerhead ribozymes against multidrug resistance-associated protein and multidrug resistance 1 gene. // Int J Oncol. 2002. - Vol. 21. - P. 10211026.

88. Najajreh Y., Perez X.M., Nawarro-Ranninger C. et ah. Novel soluble cationic trans-diaminedichloroplatinum(II) complexes that are active against cisplatin resistant ovarian cell lines. // J Med Chem. 2002. - Vol. 45.-P. 5189-5195.

89. Negoescu A., Lorimier P., Labat-Moleur F. et al. TUNEL: Improvement and evaluation of the method for in situ apototic cell identification. // BIOCHEMICA. -1997. -No.2.

90. Nehme A., Baskaran R., Nabel S. et al. Induction of JNK and c-Abl signaling by cisplatin and oxaliplatin in mismatch repair-proficient and -deficient cells. // Br J Cancer. 1999. - Vol. -79. - P. 1104-1110.

91. Niedner H., Christen R., Lin X. et al. Identification of genes that mediate sensitivity to cisplatin. // Mol Pharmacol. 2001. - Vol. 60. - P. 11531160.

92. Orih M. Fertig G. Presentation of an Assay Format for the Specific Assessment of Caspase 3. // BIOCHEMICA.- 2000.- Vol 4.- P- 35-38.

93. Pasetto L.M., D'Andrea M.R. et al. The development of platinum compounds and their possible combination. // Critical Reviews in Oncology// Hematology 2006 - Vol.60 - P.59-75.

94. P. Perego, L. Gatti and S.C. Righetti et al., Development of resistance to a trinuclear platinum complex in ovarian carcinoma. // Int J Cancer.- 2003.-Vol. 5.- P. 617-624.

95. Pestell K.E., Hobbs S.M., Titley J.C. et al. Effect of p53 status on sensitivity to platinum complexes in a human ovarian cancer cell line. // 2000.-Vol. 57.-P. 503-511.

96. Prchal J:T., Throckmorton D.W:, Caroll A-J. et al. A common progenitor for human myeloid and lymphoid cells // Nature. -1978: -Vol 274. -P.590-5911

97. Rabik CIA Dolan M.E. Molecular mechanisms of resistance and toxicity associated with platinating agents.//Cancer Treatment Reviews-2007-Vol.33-P. 9-23

98. Reed E. Platinum analogs. In: De Vita V.T., Hellman S A. Eds. Cancer principles and practice of oncology. Philadelphia: JB Lippincort. // 1993. -P. 390-400

99. Reed E. Platmum-DNA adduct< nucleotide excision repair, and platinum based anti-cancer chemotherapy. // Cancer Treat Rev. 1998: - Vol. 24. -P.331-344.

100. Reed E. Cisplatin: // Cancer Chemother Biol Response Modif. 1999. -Vol. 18. -P.145-152.

101. Riedl SJ, Shi Y. Molecular mechanisms of caspase regulation during apoptosis.//Nat Rev Mol Cell Biol. -2004. Vol 11/- P.897-907.

102. Rose W., Schuring J. Preclinical antitumor and toxicological proffle of carboxyplatin. // Caner Treat Rev. 1985. - Vol. 18.-P. 1-19.

103. Sandercock J., Parmar M.K., Torn V. et al. First line treatment for advanced ovarian cancer: paclitaxel, platinum and the evidence. // Br. J. Cancer. 2002. - Vol: 87. - P. 815-824.

104. Schaaf G.J., Maas R.F., de Groene E.M et al. Management of oxidative stress by heme oxygenase-1 in cisplatin-induced toxicity in renal tubular cells. // Free Radic Res. 2002. - Vol. 36. - P. 835-843.

105. Scheeff E.D., Briggs J.M., Howell S.B. Molecular modeling of the intrastand guanine-guanine DNA adducts produced by cisplatin and oxaliplatin. // Mol Pharmacol. 1999. - Vol. 56. - P. 633-643.

106. Screnci D., Er H.M., Hasmbley T.W. et al. Stereoselective peripheral sensory neurotoxicity of diaminocyclohexane platinum enantiomers related to ormaplatin and oxaliplatin. // Br J cancer. 1997. - Vol. 7. - P. 502-510.

107. Sen S. and D'lncalci M. Apoptosis: biochemical events and relevance to cancer chemotherapy // FEBS Lett. -1992. -Vol307. -P.122-127.

108. Sessa S., Capri G., Gianni L. et al. Clinical and pharmacological phasel study with accelerated titration design of a daily times five schedule of BBR3464, a novel cationic triplatimim complex. // Ann Oncol. 2000. -Vol. 1 l.-P: 977-983.

109. Sharp S.Y, O'Neill C.F., Rogers P. et al. Retention of activity by the new generation platinum agents AMD0473 in four human tumor cell lines possessing acquired resistance to oxaliplatin. // Eur J Cancer. 2002. - Vol. 38.-P. 2309-2315.

110. Shen D.W., Goldenberg S., Pastan I. et al. Decreased accumulation of 14C.carboplatin in human cisplatin-resistant cells results from reduced' energy-dependent uptake. // J cell Physiol. 2000. - Vol. 183. - P. 108116.

111. Skladanowski A. and Konopa J. Adriamycin and daunomycin induce programmed cell death-(apoptosis) in tuinor cells // Biochem. Pharmacol. -1992. -Vol.46. -P.375-382.

112. Steart D.J. Mechanisms of resistance to cisplatin and carboplatin//Critical Reviews in Oncology/Hematology -2007- V.63-P. 12-31

113. C.N. Sternberg, P. Whelan and J. Hetherington et al., Phase Ш trial of satraplatin, an oral platinum plus prednisone versus prednisone alone in patients with hormone-refractoiy prostate cancer// Oncology. -2005,- Vol. 1.-P.2-9.

114. Storlad В., Pavlakis N. Oxaliplatin for the treatment of cisplatin -resistant cancer: A systematic review. // Cancer Treatment Reviews -2007. Vol.33. - P.347-357

115. Susan Elmore. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. // Toxicol Pathol. 2007. - Vol: 35.- P. 495-516.

116. Takemura G., Fujiwara H. Morphological- aspects of apoptosis inheart diseases. // J Cell Mol Med.- 2006. Vol. 10. P.56-75.

117. Tanaka M., Kuwahara E., ShimizuT. et al. New drug BMS-182751. // Biol Pharm Bull. 1999. - Vol. 22. - P.521-526.

118. Tokuchi Y., Isobe H., Takekawa H. et al. Predicting chemotherapeutic response to small-cell lung cancer of platinum compounds by thallium-201 singlphoton emission computerized tomography. // Br J Cancer. - 1998. -Vol. 77. -P.1363-1368.

119. Veal G.J., Griffin M.J., Price E. et al. A phase 1 study in paediatric patients to evaluate the safety and pharmacokinetics of SPI-77, a liposome encapsulated formulation of cisplatin. // Br J cancer. 2001. - Vol.84. - P. 1029-1035.

120. Wan-Long Lin, Ding-Guo Li. et al. Clinical and experimental study of oxaliplatin in treated human gastric carcinoma. // World J. Gastroenterol -2004- Vol. 10(19) P.2911-2915.

121. Woessman W., Chen X., Borkhardt A. Ras-mediated activation of ERK by cisplatin induces cell death independently of p53 in osteocarcoma and neuroblastoma cell lines. // Cancer Chemother Pharmacol. 2002. - Vol. 50.-P. 397-404.

122. Wyllie A.H., Morris R.G., Smith A.L. and Dunlop D. Chromatin cleavagein apoptosis: association with condensed chromatin morphology and139dependence on macromolecular synthesis // Am. J. Pathology. -1984. -V.142. -P.67-77.

123. Yamada H., Uchida N., Maekawa R. et al. Sequence-dependent antitumor efficacy of combination chemotherapy with nedaplatin, a newly developed platinum, and paclitaxel. // Cancer Lett. 2001. - Vol. - 172. - P.17-25.

124. Yunmbam M.K., Li Q.Q., Mimnaugh E.G. et al. Effects of the proteasome inhibitor ALLnL on cisplatin sensitivity in human ovarian tumor cells. // Int J Oncol. 2001. - Vol. 19. - P.741-748.

125. Zhang W., Zhang C., et al. Nuclear translocation of apoptosis inducing factor is associated with cisplatin induced apoptosis in LNCaP prostate cancer cells.// Cancer Latters 2007- Vol.255.- P.127-134

126. Zhang Т., Guan M., Jin H.Y., Lu Y. Reversal of multidrug resistance by small interfering double-stranded RNAs in ovarian cancer cells. // Gynecol Oncol.- 2005.- Vol. 97.- P. 501-507.

127. Zhen W., Link С J., O'Connor P.M. et al. Increased gene-specific repair of cisplatin interstand crosslinks in cisplatin resistant human ovarian cancer cells. // Mol Cell Biol. 1992. - Vol. 12. - P.3689-3698.

128. Zhong X., Li X., Wang G., et al. Mehanisms underlying the synergistic effect of SU5416 and cisplatin on cytotoxicity in human ovarian tumor cells.// Int S Oncol.- 2004.- Vol. 25. P. 445-51.