Влияние фактора некроза опухоли на цитотоксичность и индукцию апоптоза противоопухолевыми препаратами на клеточных линиях меланом. Экспериментальное исследование тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Бигвава, Хьыбла Амерановна

• Бигвава, Хьыбла Амерановна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бигвава, Хьыбла Амерановна

ОГЛАВЛЕНИЕ

15

19

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Цитокины - фактор некроза опухоли-а

Глава 2. Клеточные культуры как модель экспериментальной онкологии.

Глава 3. Характеристика индукции апоптоза и белки, контролирующие этот процесс в клетке. ЧАСТЬ II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 1. Материалы

Глава 2. Методы исследования

2.1. Определение цитотоксической активности -МТТ-тест.

2.2. Метод фиксированного окрашивания ДНК пропидий йодидом (PI) для определения апоптотических клеток.

2.3. Метод двойного прижизненного окрашивания ДНК с использованием Аннексина V-FITC в комбинации с PI

2.4. Реакция прямой иммунофлюоресценции

2.4.1. Окрашивание поверхностных антигенов

2.4.2. Окрашивание внутриклеточных маркеров

2.5. Проточно-цитофлюориметрический анализ

2.6. Статистическая обработка результатов 39 ЧАСТЬ III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 1. Цитотоксическое действие противоопухолевых препаратов в сочетании с альнорином на клеточных линиях меланом человека in vitro

1.1. Цитотксичность ACNU на клеточных линиях меланом в сочетании с альнорином.

33

34

35

1.2. Цитотксичность аранозы на клеточных линиях 43 меланом в сочетании с альнорином.

1.3. Цитотксичность BCNU на клеточных линиях меланом 47 в сочетании с альнорином.

1.4. Цитотксичность DTIC на клеточных линиях меланом 53 в сочетании с альнорином.

Глава 2. Исследование in vitro на клеточных линиях меланом лекарственно-индуцированного апоптоза противоопухолевыми препаратами в сочетании с

63

альнорином.

2.1. Определение влияния альнорина на индукцию апоптоза BCNU на клеточных линиях меланом методом фиксированного окрашивания ДНК

2.2. Определение влияния альнорина на индукцию апоптоза DTIC на клеточных линиях меланом методом фиксированного окрашивания ДНК

2.3. Определение влияния альнорина на индукцию апоптоза BCNU на клеточных линиях меланом методом двойного прижизненного окрашивания ДНК

2.4. Определение влияния альнорина на индукцию апоптоза DTIC на клеточных линиях меланом методом двойного прижизненного окрашивания ДНК. 87 Глава 3. Изучение экспрессии CD95 и белков группы bcl-2

на клеточных линиях меланом

3.1. Экспрессия CD95 на клеточных линиях меланом

3.2. Экспрессия молекулярно-биологических маркеров семейства bcl-2 на клеточных линиях меланом

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние фактора некроза опухоли на цитотоксичность и индукцию апоптоза противоопухолевыми препаратами на клеточных линиях меланом. Экспериментальное исследование»

ВВЕДЕНИЕ

Меланома кожи является одной из агрессивных форм злокачественных опухолей, обладающей высокой потенцией местного роста, регионарного метастазирования, способностью к диссеминации по коже, множественному метастазированию. Развитие метастазов в лимфатической системе наблюдается в 70% случаев меланомы, обычно поражаются печень, легкие, мозг и костная ткань. Именно метастазирование на ранних стадиях обусловливают высокую смертность и неэффективность терапии данного заболевания [Плешкан 2011].

Несмотря на достижения последних десятилетий, лечение меланомы кожи остается крайне трудной проблемой. С одной стороны, наружная локализация опухоли, возможность радикального лечения ранних стадий, высокая иммуногенность позволяют рассчитывать на успех в лечении. С другой - высокая частота рецидивов, непредсказуемость клинического течения заболевания и отсутствие эффективности системной терапии делают пессимистичными прогнозы при возникновении прогрессирования болезни [Новик А.В., 2011].

У каждого десятого больного меланому выявляют в IV стадии, когда уже имеет место инвазия и метастазирование, и методом лечения является химиотерапия с использованием дакарбазина, производных нитрозомочевины и платины. Эффективность такой терапии остается низкой из-за высокой резистентности клеток меланомы и/или быстрой индукции множественной лекарственной устойчивости при воздействии противоопухолевых препаратов [Беггопе Ь. е1 а1., 1999; Не1тЬасЬ Н. е1 а1., 2003].

Среднегодовой темп прироста заболеваемости меланомой в мире составляет около 5% (в США - 4%, в России - 3,9%) и может считаться одним из самых высоких среди всех злокачественных опухолей, после рака легкого. Ежегодно в нашей стране выявляется около 8000 пациентов с диагнозом меланома кожа. [Давыдов М.И., 2009].

Диссеминированная меланома кожи считается практически инкурабельным заболеванием. При использовании химиотерапии выживаемость больных с метастазами меланомы варьирует от 6 до 12 мес., а 5-летняя выживаемость составляет только 5% [Hersey Р., 2011].

Небольшие успехи химиотерапии послужили стимулом к созданию и изучению комбинирования ее с цитокинами. В клинических исследованиях лечебную активность показали интерлейкин-2 (ИЛ-2), a-интерферон (а-ИФН), фактор некроза опухоли (ФНО). Изучение роли цитокинов в лечении злокачественных новообразований является одним из современных направлений в онкологии.

До недавнего времени считалось, что назначение цитокинов при диссеминированной меланоме основано на возможности стимулировать противоопухолевый иммунный ответ. Однако клинико-иммунологические исследования при совместном применении цитокинов, в частности, интерферона-a и ФНО-а показали, что, по крайней мере, при лечении меланомы они не проявили себя в качестве иммуномодуляторов, тогда как определенная клиническая эффективность была установлена. Отсутствие иммуномодулирующего действия было связано, главным образом, с тем, что у этих больных исходно были слабо выражены нарушения показателей иммунологического статуса. Реализация его противоопухолевых эффектов связана с иными механизмами действия. В литературе имеются данные о том, что ФНО может оказывать цитотоксическое и цитостатическое действие. Тем не менее, его применение в качестве самостоятельного противоопухолевого препарата очень ограничено из-за, во-первых, множества побочных эффектов и, во-вторых, по причине резистентности многих опухолевых клеток к его цитотоксическому действию. На многих экспериментальных моделях, включая ксенотрансплантаты опухолей человека на бестимусных мышах, было показано, что в переносимых дозах сам по себе ФНО очень слабо подавляет или вовсе не подавляет рост опухолей. Однако он проявляет in vivo

синергизм с интерфероном-а и с некоторыми противоопухолевыми лекарствами в индукции противоопухолевого ответа.

Среди новых препаратов ФИО большой интерес представляет отечественный рекомбинантный человеческий препарат фактора некроза опухоли альфа - альнорин.

Таким образом, представляет интерес углубления знаний о механизмах гибели опухолевых клеток in vitro при комбинировании химиотерапии с цитокинами, получение экспериментальных доказательств свидетельствующих о повышении эффективности терапии.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Целью работы является изучение in vitro эффективности комбинирования альнорина с химиопрепаратами в усилении цитотоксического действия противоопухолевых препаратов и индукции ими апоптоза в клеточных линиях меланом.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Определить чувствительность клеточных линий меланом к цитотоксическому действию химиопрепаратов in vitro.

2. Оценить эффективность комбинирования альнорина с химиопрепаратами в клетках меланом.

3. Оценить лекарственно-индуцированный апоптоз в сочетании с альнорином на клеточных линиях меланом с применением современных методов регистрации апоптоза.

4. Исследовать влияние фактора некроза опухоли-а (альнорин) на экспрессию в клетках меланом маркера апоптоза CD95 и белков - продуктов генов, регулирующих апоптоз: bcl-2 и Ьах.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые установлена in vitro различная чувствительность клеток меланом, происходящих от различных больных, к цитотоксическому и

апоптозиндуцирующему действию противоопухолевых препаратов, применяемых в терапии меланомы - дакарбазину (БТ1С), кармустину (ВСЫи), нидрану (ACNU) и аранозе. Впервые продемонстрировано усиление фактором некроза опухоли-а - отечественным препаратом альнорином -чувствительности клеток меланом к цитотоксичности этих препаратов. Показана способность фактора некроза опухоли-а в сочетании с противоопухолевыми препаратами индуцировать апоптоз на клеточных линиях меланом. Получены данные о различной экспрессии в клетках белков генов - регуляторов апоптоза.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Полученные экспериментальные данные могут лечь в основу повышения эффективности противоопухолевой химиотерапии меланомы фактором некроза опухоли (альнорином).

За время выполнения работы в отделении химиотерапии и комбинированного лечения злокачественных опухолей уже получены первые результаты об увеличении безрецидивной и общей выживаемости больных, получавших стандартную терапию в сочетании с альнорином.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Бигвава, Хьыбла Амерановна

ВЫВОДЫ:

1. Клетки меланом различаются между собой по чувствительности к цитотоксическому и апоптозиндуцирующему действию противоопухолевых препаратов. Клетки одних и тех же линий меланом обладают различной чувствительностью к разным лекарствам.

2. Чувствительность клеток меланом различных линий к цитотоксическому действию лекарств не совпадает с их чувствительностью к апоптозиндуцирующему действию.

3. На большинстве клеточных линий меланом цитотоксическое действие ВСКТИ и ОТ1С предшествует индукции этими лекарствами апоптоза, что свидетельствует о том, что в основе начального противоопухолевого действия этих препаратов лежат неапопототические механизмы гибели опухолевых клеток.

4. Чувствительность и/или резистентность клеток меланом к цитотоксическому и апоптозиндуцирующему действию ВС№1 и БТ1С не коррелирует с количеством клеток, позитивных по экспрессии белков С095, Вс1-2 и Вах.

5. Нецитотоксичные концентрации альнорина усиливают цитотоксическое действие противоопухолевых лекарств АС№1, ВСЫИ, ВТ1С и аранозы на клетки меланом.

6. Альнорин на чувствительных клеточных линиях усиливает апоптоз, индуцированный ВСШ и БТ1С только при низких концентрациях этих препаратов. На клеточных линиях нечувствительных к действию химиопрепаратов не вызывает апоптозиндуцирующего действия.

7. Добавление к ВС№1 и БТ1С альнорина более эффективно в отношении прямого цитотоксического действия лекарств, чем в отношении индукции ими апоптоза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бигвава, Хьыбла Амерановна, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Абелев Г. И. Иммунология опухолей человека / Г. И. Абелев // Под ред. Д. Г. Заридзе. Москва.: Научный мир, 2000. — 343 с.

2. Абраменко И.В., Фильченко A.A. Прогностическое значение апоптотического и пролиферативного индексов в солидных новообразованиях // Онкология. - 2002. 4, 165 -170 с.

3. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза - М.: Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

4. Бурова О.С. Получение и характеристика клеточных линий меланомы человека для создания противоопухолевых вакцин: Дис. канд. биол. наук: 14.01.12 / О.С.Бурова.-М., 2010,- 120с.

5. Васильев Н. В. Иммунная система при повышенном онкологическом риске и злокачественном росте / Н. В. Васильев, Н. В. Чердынцева, Т. И. Коляда. Томск: Изд-во Томского университета, 2005. — 308 с.

6. Давыдов, М. И. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2007 г. / М. И. Давыдов, Е. М. Аксель // ВЕСТНИК РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. — 2009. - Т. 20, № 3. - Прил. 1. - С.11

7. Кадагидзе 3. Г. Цитокины // Практическая онкология. -2003. -Т.4, № 3. С. 131-139.

8. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. Цитокины // СПб, Издат. Фолиант -2008,-408с.

9. Колокольцева Т. Д. К вопросу о контроле безопасности культур клеток, пригодных для заместительной терапии. / Т. Д. Колокольцева, Н. В. Шалунова, Е. М. Петручук // Биопрепараты. - 2006. Июнь. - С.8-12

10. Конюшко О.И. Требования, предъявляемые к линиям диплоидных клеток, предназначенных для регенеративной медицины. / О. И. Конюшко, В. Б. Хватов, С. В. Смирнов, В. С. Бочарова // Трансплантология. - 2009. - С.31-34.

11. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза // Биохимия. -2000.-65.-5-33 с.

12. Новик А.В. Меланома кожи: новые подходы. / А. В. Новик // Практическая онкология. - 2001. - Т. 12, № 1., - С. 36 -42.

13. Плешкан В. В., Зиновьева М. В., Свердлов Е. Д. Меланома: поверхностные маркеры как первый «порт» адресной доставки терапевтических генов при многоуровневой генной терапии // Молекулярная биология. - 2011. - Т. 45, № 3. - С. 416-433.

14. Самуилов В.Д., Олескин А.В., Лагунова Е.М. Программируемая клеточная смерть // Биохимия. - 2006. - 65. 1029 - 1046 с.

15. Славина Е.Г., Черткова А.И., Короткова О.В. и др. Модуляция интерфероном-а цитотоксичности и индукции апоптоза доксорубицином и 5-фторурацилом. Иммунология, 2005, том 26, №1 стр. 16-19.

16. Фильченков А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак, - К.: Морион, 1999. -184 с.

17. Azenshtein Е., Luboshits G., Shina S. et al. The CC chemokine RANTES in breast carcinoma progression: regulation of expression and potential mechanisms of promalignant activity // Cancer Research. 2002. - Vol. 62. - P. 1093-1102.

18. Adams J.M., Cory S. The Bcl-2 protein family: Arbiter of cell survival. // Science, 1998,281, 1322-26.

19. Ashkenazi A., Pai R.C., Fong S., et al. Safety of antitumor activity of recombinant soluble Apo-2 ligand // J. Clin. Invest., 1999, 104, 155-62.

20. Balkwill F. Inflammation and cancer: back toVirnov? // Lancet. -2001. Vol. 357.-P. 539-545.

21. Basco Z., Everson B.R. and Eluason J. The DNA of Annexin V-binding apoptotic cells are highly fragmented. Cancer Research; 2000. 60: 4623-4628.

22. Boullet P., Strasser A. ВНЗ-only proteins evolutionarily conserved pro-apoptotic Bcl-2 family members essential for initiating programmed cell death. // J. Cell Sci., 2002, 115, 1567-74.

23. Boehm I. Apoptosis in physiological and pathological skin: implications for

therapy // Curr Mol Med. - 2006, Jun 6. 375-94.

24. Buttke T.M., Sadstrom P.A. Oxidative stress as a mediator of apoptosis // Immunol. Today. 1994. V. 15. P. 7-14.

25. Bertazza L., Mocellin S. The dual role of tumor necrosis factor (TNF) in cancer biology // Curr Med Chem. 2010. - 17. - P. 3337 - 3352.

26. Blower P. E., Yang C, Fligner M. A., Verducci J. S., Yu L., Richman S., Weinstein J. N. Pharmacogenomic analysis: correlating molecular substructure classes with microarray gene expression data // Pharmacogenomics J. - 2002. - V. 2(4). - P. 259-271.

27. Builles N., Bechetoille N., Justin V., Andri V., Barbara V., Di lorio E, Auxenfans C, Hulmes D. Development of a hemicornea from human primary cell cultures for pharmacotoxicology testing // Cell Biol. Toxicol. - 2007. - V. 23(4). - P. 279-292.

28. Blankenberg F.G., Norfray J.F. Myltimodality molecular imaging of apoptosis in oncology // AJR Am Roentqenol. — 2011. 197, P. 308-17.

29. Browen I.D., Bowen S.M., Jones A.H. Mitosis and apoptosis: matters of life and death // Chapman and Hall - London. 1998. - p. 182.

30. Capello D., Gaidano G. / Molecular pathophysiology of indolent lymphoma. // Haematologica, 2000, v.85, No.2, 195-201.

31. Cohen S., Taylor J.M., Mitchell W.M. Characterization of the binding protein for epidermal growth factor // The Journal of biological chemistry - 1974 - V. 249(7)-P. 2188-94.

32. Chowdhary S.A., List A.F. Drug resistance: overview of mechanisms // Enciclopedia of cancer. 1997. -V. 1. P. 610-620.

33. Makin G., Hicman J.A. Apoptosis and cancer chemotherapy. // Cell Tissue Res. - 2000. - Vol.301. - P. 143-152.

34. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assays // J.Immunol.Meth.-1983 -65(1-2). -P. 55-63.

35. Nicoletti I., Migliorati G., Pagliacci M.C. et al. A rapid and simple methods for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry // J.Immunol.Meth. - 1991. - 139. - P. 271-280.

36. Kim K., Lee C.-k., Sayers T.J., Muegge K., Durum S.K. / The trophic action of IL-7 on pro-T-cells: inhibition of apoptosis of Pro-Tl, -T2, and -T3 cells correlates with Bcl-2 and Bax levels and is independent of fas and p53 pathways. // The Journal of Immunology, 1998, v.160, 5735-5741.

37. Zheng L., Dengler T.J., Kluger M.S., Madge L.A., Schenchner J.S., Maher S.E., Pober J.S., Both well A.L.M. / Cytoprotection of human umbilical vein endothelial cells against apoptosis and CTL-mediated lysis provided by caspase-resistant Bcl-2 without alterations in growth or activation responses. // The Journal of Immunology, 2000, v. 164, 4665-4671.

38. Riccardi G, Nicoletti I. Analysis of apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry //Nat. Protoc. - 2006. - V. 1(3). - P. 1458-1461.

39. Hannun Y. Apoptosis and dilemma of cancer chemotherapy. // Blood. - 1997. -Vol. 89.-P. 1845-1953.

40. Freshney R. I. Culture of animal cells, a practical approach. - Oxford. "IRL

Press Limited". - 1989. - P. 277.

41. Kroemer G. / The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis. // Nature Medicine, 1997, v.3, No.6, 614-620.

42. Wickremasinghe R.G., Hoffbrand A.V. / Biochemical and genetic control of apoptosis: relevance to normal hematopoiesis and hematological malignancies. //Blood, 1999, v.93, No.ll, 3587-3600.

43. Simonian P.L., Grillot D.A.M., Andrews D.W., Leber B., Nunez G. / Bax homodimerization is not required for bax to accelerate chemotherapy-induced cell death. // The Journal of Biological Chemistry, 1996, v.271, No.50, 3207332077.

44. Reed J.C./ Double identity for proteins of the Bcl-2 family. // Nature, 1997, v.387, 773-776.

45. Holbeck S. L. Update on NCI in vitro drug screen utilities // Eur. J. Cancer. -2004.-V. 40(6).-P. 785-793.

46. Dai Z., Sadee W., Blower P. Chemogenomics of sensitivity and resistance to anticancer drugs // Current Pharmacogenomics. - 2007. - V. 5(1). - P. 11-19.

47. Davila J., Rodriguez R. J., Melchert R. B., Acosta D. Predictive value of in vitro model systems in toxicology // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. - 1998. -V. 38.-P. 63-96.

48. Dhiman H. K., Ray A. R., Panda A. K. Three-dimensional chitosan scaffoldbased MCF-7 cell culture for the determination of the cytotoxicity of tamoxifen // Biomaterials. - 2005. - V. 26(9). - P. 979-986.

49. Duss S., Andre S., Nicoidaz A. L., Fiche M., Bonnefoi H., Brisken C, Iggo R. An estrogen-dependent model of breast cancer created by transformation of normal human mammary epithelial cells // Breast Cancer Res. - 2007. - V. 9(3). - P. 38.

50. Kawamoto K. Flow cytometric analysis, mechanism of action and evaluation of viability by antineoplastic agents // Nippon. Rinsho. - 1992. - V. 50(10). - P . 2360-2367.

51. Kim J. B., Stein R., O'Hare M. J. Three-dimensional in vitro tissue culture models of breast cancer - a review // Breast Cancer Res. Treat. - 2004. - V. 85,-P. 281-291.

52. Lee G Y, Kenny P. A., Lee E. H., Bissell M. J. Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells // Nat. Methods. -2007.-V. 4(4).-P. 359-365.

53. Marx K. A., O'Neil P., Hoffman P., Ujwal M. L. Data mining the NCI cancer cell line compound GI(50) values: identifying quinone subtypes effective against melanoma and leukemia cell classes // J. Chem. Inf. Comput. Sci. -2003. -V. 43(5). - P. 1652-1667.

54. Mehta J. P., O'Driscoll L., Barron N, Clynes M., Doolan P. A microarray approach to translational medicine in breast cancer: how representative are cell line models of clinical conditions? // Anticancer Res. - 2007. - V. 27(3A).- P. 1295-1300.

55. Ross D. T., Perou C. M. A comparison of gene expression signatures from breast tumors and breast tissue derived cell lines // Dis. Markers. - 2001. - V. 17.-P. 99-109.

56. Satyamoorthy K., DeJesus E., Linnenbach A. J., Kraj B., Kornreich D. L., Rendle S., Elder D. E., Herlyn M. Melanoma cell lines from different stages of progression and their biological and molecular analyses // Melanoma Res. 7 Suppl. - 2004. - V. 2.-P. 35-42.

57. Segal E., Friedman N., Kaminski N., Regev A., Koller D. From signatures to models: understanding cancer using microarrays // Nat. Genet. - 2005. - V. 10,-P. 38-45.

58. Sklar L. A., Carter M. B., Edwards B. S. Flow cytometry for drug discovery, receptor pharmacology and high-throughput screening // Curr. Opin. Pharmacol. 2007. - V. 7(4). - P. 395-403.

59. Walter-Yohrling J., Morgenbesser S., Rouleau G, Bagley R., Callahan M., Weber W., Teicher B. A. Murine endothelial cell lines as models of tumor endothelial cells // Clin. Cancer Res. - 2004. - V. 10(6). - P. 2179-2189.

60. Watson M. B., bind M. J., Cawhvell L. Establishment of in vitro models of chemotherapy resistance // Anticancer Drags. - 2007. - V. 18. - P. 749-754.

61. Yamori T. Panel of human cancer cell lines provides valuable database for drug discovery and bioinformatics // Cancer Chem. Pharmacol. - 2003. - V. 52. - P. 74-79.

62. Serrone L, Zeuli M. Sega F.M. et al. Dacarbazine-based chemotherapy for matastatic melanoma: thirty-year experience overview. J Exp Clin Cancer Res 2000; 19:21-34

63. Hersey P., Smalley K. S., Weeraratna A. et al. Meeting report from the 7th International Melanoma Congress, Sydney, November, 2010 // Pigment Cell Melanoma Res. -2011. -Vol.24. -№ l.P.el-el5.

64. Krammer, P.H. CD95 (APO-l/Fas)-mediated apoptosis: live and let die. // Adv. Immunol. -1999. - 71, 163-210

65. Nagata, S., & Golstein, P. The Fas death factor // Science. -1995. -Vol.267. -P.1449-1456.

66. Trauth B.C., Klas C., Peters A.M., et al. Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis // Science. -1989. -Vol.245.-P.301-305.

67. Yonehara S., Ishii A. & Yonehara M. A cell killing monoclonal antibody (anti-Fas) to cell surface antigen co-down-regulated with the receptor to tumor necrosis factor//J.Exp.Med. -1989. -Vol.169. -P. 1747-1756.

68. Peter M.E and Krammer P-H. Mechanisms of CD95 (APO-l/Fas)-mediated apoptosis // Current Opinion in Immunology. -1998. -Vol.10. -P.545-551.

69. Ungefroren H., Kruse M.L., Trauzold A., Roeschmann S., Roeder C., Arlt A., Henne-Bruns D., Kalthoff H. FAP-1 in pancreatic cancer cells: functional and mechanistic studies on its inhibitory role in CD95-mediated apoptosis. J. Cell. Sci., 2001, 114, 2735-46.

70. Yonehara S., Nishimura Y., Kishi S., Ishii A. Expression and function of apoptosis antigen Fas on T-cells in thymus and peryphery. // Tiss. Antigens, 1993,42, 253.

71. Owen-Schaub L.B. Fas/Apo-1: A cell surface proteinmediating apoptosis. // Cancer Bull., 1994, 46, 141-5.

72. Zhivotovsky B., Orrenius S. Defects in the apoptotic machinery of cancer cells:

role in drug resistance // Seminars in Cancer Biol., 2003, 13, 125-34.

73. Guimaraes A., Linden R. Programmed cell deaths. Apoptosis and alternative deathstyles // Eur J Biochem. - 2004, 271, 1638-50.

74. Ghobrial I.M., Witziq T.E., Adjei A.A. Targeting apoptosis pathways in cancer therapy // CA Cancer J Clin. - 2005, May-Jun, 55., 178-94.

75. Lowe S.W., Lin A.W. Apoptosis in cancer // Carcinogenesis. - 2000. 21, 485495.

76. Hersey P. Apoptosis and melanoma: how new insights are effecting the development of new therapies for melanoma // Curr Opin Oncolo. 2006. № 18. P. 189-96.

77. Schmitt C.A., Lowe S.W. Apoptosis and therapy. // J. Pathol., 1999, 187, 127-37.

78. Lowe S.W., Ruley H.E., Jacks t., Housman D.E. p53-dependent apoptosis modulate the cytotoxicity of anticancer agents. // Cell, 1993, 74, 954-67.

79. Kerr J.F. Shrinkage necrosis: a distinct mode of cellular death. // J. Pathol.-

1971,- 105.- P.13-20.

80. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. / Apoptosis: a basic biological phenomenon with wideranging implication in tissue kinetiks. // Br. J. Cancer,

1972, 26, 239-57.

81. Scaffidi C., Fulda S., Srinivasan A., et al. Two CD95 (APO-l/Fas) signaling pathways. // EMBO J., 1998, 17, 1675-87.

82. Rufmi A., Melino G. Cell death pathology: the war against cancer // Biochem Biophys Ras Commun. - 2011. Oct 28, P. 445-450.

83. Wang C., Youle R. J. The role of mitochondria in apoptosis // Annu Rev Genet.-2009. 43. P. 95-118.

84. Harris M.H., Thompsom C.B. The role of the Bcl-2 family in the regulation of outer mitochondrial membrane permability // Cell Death Differ. - 2000, 7. P. 1182-91.

85. Ulukaya E., Acilan C., Yilmaz Y. Apoptosis: why and how does it occur in biology? // Cell Biochem Funct. - 2011. 29. P. 468-80.

86. Gerspach J., Pfizenmaier K., Wajant H. Therapeutic taegeting of CD95 and the TRAIL death receptors // Recent Pat Anticancer Drug Discoy. - 2011. Sep 1. P. 294-310.

87. Zamzami N., Kroemer G. The mitochondrion in apoptosis: how Pandora s box opens. // Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 2001, 2, 67-71.

88. Martinou J.C., Green D.R. Breaking the mitochondrial barrier. // Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 2001, 2, 63-67.

89. Tsujimoto Y. Role of Bcl-2 family proteins in apoptosis: apoptosomes or mitochondria? // Genes Cells, 1998, 3, 697-707.

90. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: Enemies within. // Science.- 1998.281.- P.1312-15.

91. Syeed S.A., Vohra H., Gupta A., Ganguly N.K. Apoptosis: Molecular machinery. // Curr.Science, 2001, 80, N 3, 349-60.

92. Green D.R., Kroemer G. The central executioner of apoptosis: mitochondria or caspases? // Trends Cell Biol., 1998, 8, 267-71.

93. Rieber M., Mary Strasberg Rieber. N-Acetylcysteine enhances UV-mediated caspase-3 activation,fragmentation of E2F-4, and apoptosis in human C8161melanoma: inhibition by ectopic Bcl-2 expression. Biochemical Pharmacology, 2003, 65. P. 1593-1601.

94. Willis S., Day C.L., Hinds M.G., Huang D.C.S. The Bcl-2-regulated apoptotic pathway. J Cell Sci. 2003. 116. P. 4053-4056.

95. Muracami T, Li X, and Cong J et al. Induction of apoptosis by 5-Azacytidine: Drug Concentration-dependent Differences in Cell Cycle Specificity. Cancer Res. -1995. Vol.55. P.3093-3098.

96. Fu Y.F., Fan T.J. Bcl-2 family proteins and apoptosis. Acta Biochim Biophys Sin. 2002. - 34,- P. 389-394.

97. Earnshaw W.C. Nuclear changes in apoptosis. // Curr.Opin. Cell Biol. -1995.-Vol.7.-P.337-343.

98. Kuwana T., Mackey M.R., Perkins G., et al. Bid, bax, and lipids cooperate to form supramolecular openings in the outer mitochondrial membrane. Cell. 2002. 111. P. 331-342.

99. Koopman G., Reutelingsperger C.P.M., Kuijten G.A.M., Keehnen R.M.J., Pals S.T. & van Ors M.H.J. Annexin V for Flow Cytometric Detection of

124

phosphatidylserine exspression on B cells undergoing apoptosis // Blood. -1994. - Vol.84. -P.1415-1420.

100. Kuypers F.A., Lewis R.A., Hua M., Schott M.A., Discher D., Ernst J.D. & Lubin B.H. Detection of altered membrane phospholipid asymmetry in subpopulations of human red blood cells using fluorescently labeled Annexin V//Blood. - 1996. - Vol.87. -P.l 179-1187.

101. Labat-Moleur F., Guillerment C., Lorimier P. TUNEL apoptic cell detection in tissue sections: critical evaluation and improvement // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry. -1998. -Vol.46 (3). -P.327-334.

102. Negoescu A., Lorimier P., Labat-Moleur F. et al. TUNEL: Improvement and evaluation of the method for in situ apototic cell identification // BIOCHEMICA. -1997. -No.2.

103. Godard T., Deslandes E., Lebailly P. et al. Early detection of staurosporine-induced apoptosis // Histchem. Cell Biol. -1999. -Vol.112. - P. 155-161.

104. Vermes I, Haanen C, Steffens-Nakken H, Reutelingsperger C. A novel assay for apoptosis: flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V // J Immunol Methods. - 1995. - Vol.184. -Vo.39-51.

105. Kobayashi, H., Takemura, Y., Miyachi, H. // Novel approaches to reversing anti-cancer drug resistance using gene-specific therapeutics. Hum. Cell 2001, 14, 172-184.

106. Kastan M.B., Berkovich E.. p53: a two-faced cancer gene // Nature Cell Biology. 2007. 9. - P. 489 - 491.

107. Karst A.M., Li G., BH3-only proteins in tumorigenesis and malignant melanoma// Cell. Mol. Life Sci. 2007. - 64, P. 318-330.

108. Erster S. et al. In Vivo Mitochondrial p53 Translocation Triggers a Rapid First Wave of Cell Death in Response to DNA Damage That Can Precede p53 Target Gene Activation // Molecular And Cellular Biology, 2004., Aug., P. 6728-6741.

109. Wei M.C., Zong W.X., Cheng E.H., et al. Proapototic Bax and Bak: a requisite gateway to mitochondrial dysfunction and death // Science. 2001.-292, P. 727-730.

110. Levine A.J., W Hu and Z Feng. The P53 pathway: what questions remain to be explored? // Cell Death and Differentiation. - 2006. - 13, P. 1027-1036.

111. Seth R., Yang C., Kaushal V., et al. 2005. P53-dependent caspase-2

activation in mitochondrial release of apoptosis-indusing factor and its role in renal tubular epithelial cell injury // J. Biol. Chem. 2005. 280, P. 3123031239.

112. Jurgensmeier, J.M., Xie Z., Deveraux Q., Ellerby L., Bredesen D., and Reed J.C. Bax directly induces release of cytochrome с from isolated mitochondria // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. 95. P. 4997-5002.

113. Kluck, R.M., E. Bossy-Wetzel, D.R. Green, and D.D. Newmeyer. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis//Science. 1997. 275. P. 1132-1136.

114. Slavina E.G., Chertkova A.I., Gutorov S.L., et al. The interferonotherapy in cancer treatment: some aspects of mechanisms of action. Int.J.Cancer, 2002, SI2, p.449-450

115. Isaack A., Lindemann J., Virus interference. I. The Interferon // Proc. Roy. Soc. Series B. - 1957. - V. 147. - P. 258-267.

116. Yoshimura A. Signal transduction of inflammatory cytokines and tumor development // Cancer Sci. - 2006. - V. 97. - P. 439-447.

117. Moore K.W., Malefyt R.W., Coffman R.L., O'Garra A. Interleukin-10 and the Interleukin-10 receptor // Annu Rev Immunol - 2001. - V.19. - P.683-765.

118. Luboshits G., Shina S., Kaplan S. et al. Elevated expression of the CC chemokine regulated on activation, normal T cell expressed and secreted

(RANTES) in advanced breast carcinoma//Cancer Res. 1999. - Vol. 59. -P.4681-4687.

119. Yu P., Lee Y., Liu W. et al. Priming of naive T-cells inside tumors leads to eradication of established tumors // Nat. Immunol. - 2004. - V. 5. - P. 141149.

120. Morgan D.A., Ruscetti F.W., Gallo R.C. Selective in vitro growth of T lymphocytes from normal human bone marrows // Science - 1976. -V.193, N4257.-P. 1007-1008.

121. Liu R., Paxton W., Choe S. et al. Homozygous defect in HTV-l-coreceptor accounts for resistance of some multiply-exposed individuals to HTV-1 infection // Cell. 1996. - Vol. 86.- P. 367-377.

122. Ossina N.K., Cannas A., Powers V., et al. Interferon-y modulates a p53-independent apoptotic pathway by apoptosis-related gene expression // J.Biol.Chem., 1997.-V. 272. P. 16351-16357.

123. Wadler S., Schwartz E.I., Antineoplastic activity of combination of interferon and cytotoxic agents agaunst experimental and human malignancies: a review. Cancer Research. - 1990, - V. 50. P. 3473-3486.

124. Lakour S., Hammann A., Wotava A. et al. Anticancer agents sensitize tumor cells to TNF_related apoptosis_inducing ligand_mediated Caspase_8 activation and apoptosis // Cancer Res. - 2001. - Vol. 61. - P. 1645-1651.

125. Meier B., Radeke H. H., Sell S. et al. Human fibroblasts relase reactive oxygen species in response to interleukin-1 or tumor necrosis factor-alpha // Biochem. J. 1989. V. 263. P. 539-545.

126. Yamauchi N., Kuriyama H., Watanabe H., et al. Intracellular hydroxyl radical production induced by recombinant human tumor necrosis factor and its implication in the killing of tumor cells in vitro // Cancer Res. 1989. V. 49. P. 1671.

127. Mocellin S., Nitti D. TNF and cancer: two sides of the coin // Front Biosci. 2008.-Jan. l.P. 2774-83.

128. Van Horssen R., Ten Hagen T.L., Eggermont M.M. TNF-alpha in cancer treatment: molecular insights, antitumor effects, and clinical utility // Oncologist. 2006. - Apr. 11. P. 397-408.

129. Wang X., Lin Y. Tumor necrosis factor and cancer, buddies or foes? // Acta Pharmacol Sin. 2008. Nov. 29. P. 1275-88.