Разработка нового пробиотика на основе бактерий видов Lactobacillus plantarum и bacillus subtilis тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Плохушко, Елена Николаевна

• Плохушко, Елена Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Плохушко, Елена Николаевна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Современное состояние проблемы пробиотиков.

2.1.1. Общая характеристика пробиотиков.

2.1.2. Механизмы лечебно-профилактического действия пробиотиков.

2.1.3. Критерии оценки свойств бактериальных культур, используемых для производства лечебно-профилактических препаратов.

2.1.4. Композиционный состав пробиотиков.

2.2. Видовая характеристика бактерий родов Lactobacillus и Bacillus.

2.3. Краткая характеристика технологии получения пробиотиков.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Микроорганизмы.

3.2 Методы исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Биологическая характеристика штаммов, входящих в состав экспериментального образца нового пробиотика.

4.1.1. Изучение биологических свойств культур штаммов микроорганизмов из музейной коллекции. Оценка возможности их использования для производства нового пробиотика.

4.1.2. Изучение биологических свойств культуры штамма

Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ.

4.1.3. Изучение биологических свойств культуры штамма Bacillus subtilis 3.

4.1.4. Оценка влияния бактерий видов В. subtilis 3 и L. Plantarum 8Р-АЗ на неспецифическую резистентность организма.

4.2. Сохранение культур штаммов L. plantarum 8Р-АЗ и В. subtilis 3 в жизнеспособном и активном состоянии.

4.3. Конструирование экспериментального образца нового препарата

4.4. Испытания экспериментального образца бактерийного препарата субтилакт на основе культур штаммов L. plantarum 8Р-АЗ и В. subtilis 3 ^

4.4.1. Определение специфической активности экспериментального образца препарата.

4.4.2. Изучение безопасности экспериментального образца бактерийного препарата на основе культур штаммов В. subtilis 3 и L. plantarum 8Р-АЗ.

4.4.3. Влияние субтилакта на микробиоценоз кишечника птиц и телят ^^ 5 .ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка нового пробиотика на основе бактерий видов Lactobacillus plantarum и bacillus subtilis»

В последние годы в Российской Федерации наблюдается нарастание неблагоприятных социальных, экологических и других факторов, что существенно влияет на ухудшение эпидемической ситуации. Одним из закономерных следствий такого положения является увеличение числа инфекционных заболеваний, в том числе кишечных инфекций и дисбактериозов /1,2,3,4/.

Острые кишечные инфекции в настоящее время остаются одной из актуальных и важных проблем инфекционной патологии. По данным Центра Госсанэпиднадзора Министерства здравоохранения РФ за период с 1998 года по декабрь 1999 года заболеваемость, в частности, сальмонеллезами увеличилась на 3 %, острыми кишечными инфекциями, вызванными неустановленными возбудителями -на 39,37%, шигеллезом - на 89,36% /5/. В 2000г. и 2001г. отмечена тенденция к снижению заболеваемости кишечными инфекциями, в 2002г. их увеличение. В целом по стране за 2002г. было зарегистрировано 16 вспышек острых кишечных инфекций. Особое внимание на себя обращают так называемые инфекции с неустановленной этиологией, на долю которых приходится более 50% заболевших /6/.

По данным Центрального научно-исследовательского института Эпидемиологии Минздрава Российской Федерации, увеличивается также и количество инфекционных заболеваний, отличающихся затяжным и хроническим течением, которые вызываются условно-патогенными возбудителями /6/.

Необходимо обратить внимание на то, что, по данным Российской Академии медицинских наук, почти 90 % населения России страдает кишечными дис-бактериозами. Широкое распространение дисбактериозов, в свою очередь, способствует развитию ряда других рецидивирующих инфекционных заболеваний, а также иммунодефицитов и аллергопатий. Нелеченные дисбактериозы сопровождаются морфологическими и функциональными нарушениями не только в пищеварительной, но и в иммунной, урогенитальной и дыхательной системах организма. Анализ данных литературы показал, что проблема кишечных инфекций и дисбактериозов не менее актуальна и в ветеринарии /7-12/. Патологии ЖКТ, клинически проявляющиеся диарейным синдромом, в общей структуре заболеваний молодняка животных составляют 75%, падеж поросят от желудочно-кишечных болезней достигает 40-50% от числа родившихся. В промышленном птицеводстве России желудочно-кишечные болезни занимают второе место в общей структуре заболеваемости птиц/10/.

Положительные результаты в борьбе с кишечными инфекциями и дисбак-териозами могут быть достигнуты лишь при условии решения целого комплекса лечебно-профилактических, противоэпидемических и санитарно -гигиенических мероприятий. Особое внимание должно быть уделено совершенствованию имеющихся, разработке и внедрению новых эффективных медицинских препаратов /13/.

В настоящее время в практике лечения и профилактики острых кишечных инфекций и дисбактериозов все более широкое применение находят медицинские бактериальные препараты (пробиотики), созданные на основе культур различных микроорганизмов: кишечных палочек, бифидобактерий, лактобактерий и аэробных спорообразующих бактерий. В терапии острых кишечных инфекций наиболее распространены такие препараты как севакол, колифлорал, колибактерин, би-фидумбактерин, бификол, ацилакт, лактобактерин, бактисубтил, биоспорин, фло-нивин и др. Из медицинской практики известно, что некоторые из таких преп аратов обладают недостаточной эффективностью при определенных формах дисбактериозов, а также при тяжелых формах острых кишечных инфекций, вызва н-ных стафилококками, кандидами и сальмонеллами /13,14/. При применении про-биотиков на основе бацилл всегда следует помнить, что культуры некоторых штаммов в больших дозах способны вызывать у людей инфекционные процессы различной тяжести (до эндокардитов) и, что вопросы кинетики и длительной пер-систенции бацилл в организме человека до настоящего времени не в теоретическом, не в практическом плане не изучены (Kiss Т., Gratwohl A., Frei R., Oggioni M.R., Pozzi G., Valensin P.E., Thomas M., Mhitter H., Velasco E., Wallet F., Crunelle V. et all). Необходимо отметить, что существующие пробиотики не реализуют в своем составе всего комплекса механизма пробиотического действия, что снижает их эффективность.

Целью настоящей работы является разработка нового пробиотика на основе бактерий видов Lactobacillus plantarum и Bacillus subtilis.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие основные задачи:

- провести теоретические исследования по выбору перспективных микроорганизмов для включения в состав нового пробиотика;

- определить критерии оценки свойств бактериальных культур, использу е-мых для производства лечебно-профилактических препаратов; всесторонне изучить культурально -морфологические, тинкториальные, фи-зиолого-биохимические и другие биологические свойства выбранных культур штаммов; определить терапевтическую эффективность экспериментального образца препарата при острых кишечных инфекциях и дисбактериозах у лабораторных и сельскохозяйственных животных, а также его влияние на показатели неспециф и-ческой резистентности макроорганизма.

Научная новизна работы. Теоретически и экспериментально обоснованы и выбраны культуры штаммов для включения в состав нового пробиотика; определены оптимальные концентрации бактериальных культур компонентов в экспериментальном образце.

Отработана технология получения нового препарата, изучена его терапе в-тическая эффективность на лабораторных и сельскохозяйственных животных и представлены рекомендации по его дальнейшему использованию.

Основные научные положения и результаты исследований, выносимые на защиту:

Композиционный состав биопрепарата, включающий бактерии видов L. plantarum и В. subtilis в соотношении 1:2, пригоден для создания нового высокоэффективного пробиотика.

Комплексный биопрепарат может быть использован для регуляции микробиоценоза и неспецифической иммуностимуляции при лечении кишечных инфекций и дисбактериозов кишечника, в том числе отличающихся затяжным и хроническим течением.

Практическая ценность работы. Разработана технология получения нового препарата из глубинных культур L. plantarum и В. subtilis. По результатам исследований разработаны: инструкция по приготовлению и контролю качества препарата субтилакт, утвержденная директором ВНИВИ Минсельхоза РФ и начальником ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ; сборник лабораторных методик по выделению, изучению биологических свойств и поддержанию культур лактобактерий, утвержденный директором ВНИВИ Минсельхоза РФ и начальником ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ ; заявка на патент «Способ получения сухого препарата на основе бацилл и лактобацилл для лечения и профилактики диспепсии у крупного рогатого скота».

Исследования проведены в рамках плановой тематики научно-исследовательских работ Центра ВТП БЗ НИИМ (темы №№ О -99-94У-С, 0-99-42У-С, 0-01-35У-С, 0-01-39У-С) в период с 1999 по 2002 г.г.

Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста (с полуторным интервалом), иллюстрирована 8 рисунками, 21 таблицами, состоит из списка сокращений единиц и терминов, введения, обзора литературы, выбора направления исследований, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и заключения. Литературный указатель содержит 117 источников, включая работы отечественных и зарубежных авторов.

Автор глубоко признательна руководству ВНИВИ и Центра ВТП БЗ НИИМ МО РФ за предоставленную возможность обобщить результаты проведенных теоретических и экспериментальных исследований в виде кандидатской диссертации, научному руководителю доктору ветеринарных наук Садыкову Нариману Султановичу, научному консультанту кандидату медицинских наук Забокрицк ому Александру Николаевичу, а также доктору биологических наук Васильеву Петру Геннадьевичу, оказавшим консультативную и практическую помощь при оформлении настоящей работы. Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам ВНИВИ и Центра ВТП БЗ за ценные советы и замечания, высказанные в процессе подготовки диссертации.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Плохушко, Елена Николаевна

6. ВЫВОДЫ

1. На основании выполненных теоретических исследований обоснована возмо ясность и целесообразность создания нового пробиотика на основе бацилл В. subtilis и лактобактерий.

2. Теоретически обоснованы критерии отбора культур для производства проби о-тических препаратов. По результатам выполненных исследований, предложены для включения в состав нового пробиотика культуры штаммов В. subtilis 3 и L. plantarum 8Р-АЗ.

3. Изучены культурально-морфологические, физиолого-биохимические свойства выбранных культур, определены оптимальные концентрации бактериальных культур в экспериментальном образце препарата. Количество живых клеток в готовом обра з

6 3 6 3 це препарата составляет (2,9+0,7)» 10 кл»см" В. subtilis 3 и (5,2+0,8)»10 кл*см" L. plantarum 8Р-АЗ.

4. В лабораторных условиях отработана технология получения биомассы бакт е-риальных клеток L. plantarum 8Р-АЗ методом глубинного культивирования. Испол ь-зование глубинного метода культивирования позволяет сократить в 3 раза продолжительность выращивания микроорганизмов и в 10 раз увеличить объем выпуска препарата, снизить себестоимость производства в 8 раз и трудозатраты на 30%.

5. Результаты исследований на лабораторных и сельскохозяйственных животных показали высокую терапевтическую эффективность экспериментального образца препарата при острых кишечных инфекциях и дисбактериозах. Применение субт и-лакта на экспериментальных моделях кишечных инфекций и дисбактериоза обесп е-чивает выздоровление подопытных животных, полную са нацию организма от возбудителя, быструю нормализацию микробиоценоза кишечника. Совместное примен е-ние бактерий В. subtilis 3 и L. plantarum 8Р-АЗ позволяет снизить терапевтическую дозу в 1000 раз по сравнению с биоспорином и другими известными^эобиотиками.

6. Установлено, что экспериментальный образец нового пробиотика оказывает стимулирующее влияние на показатели неспецифического иммунитета, что прив о дит к повышению защитных функций организма экспериментальных животных.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При производстве препарата субтилакт рекомендуется использовать техн о-логию глубинного выращивания культур В. subtilis 3 и L. plantarum 8Р-АЗ.

2. Рекомендуется использовать комплексный бактерийный препарат для per у-ляции микробиоценоза и неспецифической иммуности муляции при лечении кише ч-ных инфекций и дисбактериозов кишечника, в том числе отличающихся затяжным и хроническим течением.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Плохушко, Елена Николаевна, 2003 год

1. Шевченко Ю.Л. Роль современных факторов во взаимодействии человека и микроорганизмов. Значение национального здравоохранения в профилактике и лечении инфекционных болезней // Журн. микробиол. 2000. - № 6. - С.З.

2. Бойко А. В. Этиологическая структура острых кишечных инфекций, вызванных не холерными вибрионами, в дельте Волги //Журн. микробиол. 2000. - № 1. — С. 1517.

3. Карцев А.Д. Цикличность и прогнозирование заболеваемости шигеллезами в России // Журн. микробиол. 2000. - № 1. - С.57.

4. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации за январь декабрь 1997 года // Эпидемиология и инфекционные бол езни. 1998. - № 3. - С. 63-64.

5. Инфекционная заболеваемость в РФ за январь декабрь 1999 года // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2000. - № 4. - С. 55.

6. Фролочкина Т.И. Вспыпки под надзором // Фармацевтический вестник. -2002.- №23. С.22.

7. Щербаков П.Н., Гусев А.Г. Профилактика и лечение при желудочно -кишечных и респираторных болезнях телят // Ветеринария 2002. - №3. - С. 15.

8. Субботин В.В. Влияние бифацидобактерина на кишечную микрофлору пор о-сят // Ветеринария 1998. - №5. - С.24.

9. Раицкая В.И. Новые препараты для лечения желудочно -кишечных болезней телят. // Ветеринария 2001. - №5. - С. 14.

10. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дисс. докт. биол. наук / Малик Н.И. М.,2002.

11. Джупина С.И. Факторные инфекционные болезн и животных. // Ветеринария -2001. -№3.-С.6.

12. Тараканов Б.В., Николичева Т.А. Пробиотический потенциал Lactobacillus са-sei при выращивании телят// Ветеринария 2001 - №3. - С.46.

13. Литусов Н.В., Поберий И.А. и др. // Перспективы использования эубиотика "Биоспорин" в практике здравоохранения и военно -медицинской службы Екатеринбург. - 1997. - С.6-10.

14. Лобзин Ю.В., Позняк А.Л., Добрынин В.М., Захаренко С.М. Дисбактериозы при острых кишечных инфекциях. СПб, 1997.

15. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора кишечника и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии // Антибиотики и медицинская биотехнология. -1987,- №3.- С. 164-170.

16. Гончарова Г. И., Дорофейчук В. Г., Смолянская А.З., Соколова К.Я. Микро б-ная экология кишечника в норме и при патологии // А нтибиотики и химиотерапия. -1989. 34, № 6.С. 462-466.

17. Tannock G. М. The Normal Microflora New Conctpts in Health Promotion // Micr-jbiologinal Scinees. 1988. - Vol.5.

18. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э. и др. Лактофлора и колониз а-ционная резистентность // Антибиотики и мед. биотехнол. 1987. - 32, № 3. - С. 173179.

19. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры // Вестник РАМН. 1997. -№ 3. - С. 7-10.

20. Тараканов Б. В. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищевар и-тельного тракта и организм животных // Ветеринария. 2000 - № 1. - С. 47-54.

21. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбактери о-зы актуальная проблема медицины // Вестник РАМН - 1997. - № 3. - С. 4-7.

22. Ruchim M.A., Makino D. Volatile Fatty Acids degradation By Human Fecal Suspensions // Gastroenterol.- 1984. Vol.86.

23. Бароновский А.Ю., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. -СПб.,2000.

24. Шендеров Б.А. Медицинская микробн ая экология и функциональное питание. Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции. М., 1998.

25. Коршунов В. М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника // Журн. ми к-робиол. 1995. - № 3 . - С. 48-55.

26. Микроэкологические нарушения при экспериментально м дисбактериозеи роль бактерицидных систем клеток организма хозяина: Автореф. дисс. канд. биол. наук / Патрушева Е.В. Волгоград.,2000

27. Петровская В. Г., Марко О. П. Микрофлора человека в норме и патологии. ■ М., Медицина, 1976.

28. Пинегин Б. В., Коршунов В. М., Мальцев В. Н. Дисбактериозы кишечника. ■ М., Наука, 1984.

29. Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - №5. - С. 7.

30. Гончарова Г.И., Семенова Л.П., Лянная А.М. и др. Бифидофлора человека, ее нормализующеие и защитные функции // Антибиотики и мед ицинская биотехнол о-гия. 1987.-№3.-С. 179.

31. Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А., Осадчая А.И. и др. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма // Микробиол. журн. 1996. -№ 2.- С.46-55.

32. Шендеров Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний // Иммунология инфекционного процесса. М., 1994. - С. 112-121.

33. Николаева И.В., Бондаренко В.М., Анокин В.А. и др. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбактер иоза // Журн. микробиол. -2000. -№ 1.-С.17.

34. Шендеров Б. А., Маквелова М.А., Степанчук Ю.Б., Скиба Н.Э. Пробиотики и функциональное питание // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - №7.- С.30-34.

35. Аутофлора человека в норме и патологии / Под ред. Блохиной И.Н., Соколовой К.Я. Горький, 1988.

36. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические осн о-вы молочного производства. М., 1987.

37. Коршунов В.М., Ефимов Б.А., Пикина А.П. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функциолального питания и коррекции микр о-флоры кишечника / Журн. микробиол., -2000.-№3.-С.86-91.

38. Кругликов В.Д., Цураева Р.И., Рыжков И.В. и др. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии // Ж. микробиол. 1997. - № 1. - С. 67-69.

39. Коршунов В.М., Кафарская Л.И., Володин Н.Н. и др. Коррекция дисбиотич е-ских нарушений вагинальной микрофлоры с помощью препарата из высокоадгези в-ных лактобактерий // Журн. микробиол. -1990.- № 7. С. 17-19.

40. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологич е-ские свойства, защитные функции // Журн. микробиол. 1999.- №6. - С. 102-105.

41. Коваленко Н.К. Бактериоциногенная и лизоцимсинтезирующая активность молочнокислых бактерий // Микробиол. журн. 1999,- №6.- С.42.

42. Квасников Е.И., Нестеренко О. А. Молочнокислые бактерии и пути их испол ь-зования. М., 1975.

43. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев: Наукова думка, 1982.

44. Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.А., Сорокулова И. Б., Самгородская Н.В., Тофан А. В. Современные представления о механизмах лечебно -профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. журн. 1993. - №4. - С. 92-112.

45. Егоров Н.С., Баранова И.П. Бактериоцины. Образование, свойства, примен е-ние // Антибиотики и химиотерапия. — 1999. №6. - С.33.

46. Филиппов В.А. Некоторые свойства бактериоцинов лактобацилл подрода Streptobacterium // Антибиотики. 1980. - №11. - С.837.

47. Шаталов Е.В. Сравнительная характеристика влияния некоторых иммуном о-дуляторов на показатели неспецифической защиты организма и структуру популяций возбудителей при смешенных инфекциях// Журн. микробиол. 1996. - №3. - С.• 54.

48. Бондренко В.М., Рубакова Э.И., Лаврова В.А. Иммуностимулирующее дейс т-вие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов робиотиков // Журн. микробиол.- 1998.-№5.-С. 107-112.

49. Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В. Н. Иммуномоделирующее дейс т-вие препаратов-эубиотиков. // Вестник РАМН. М., 1997. - № 3. - С. 30-34.

50. Резник С.Р., Смирнов В.В., Волынец А.К., Вьюницкая В.А. Влияние перорал ь-ного введения бактерий рода Bacillus на фагоцитарную активность лейкоцитов крови //Микробиол. журн. 1982. - 44, № 4. - С. 51-54.

51. Бляхер М. С., Лопатина Т. К., Фёдорова И. М. Характер влияния биоспорина на некоторые показатели иммунитета // Проблемы инфекционны х болезней. Сб. статей, посвящ. 100-летию со дня рождения Г.Н. Габрического. М., 2000. - С. 2327.

52. Карсонова М.И., Андронова Т.М., Пинегин Б.В., Хаитов P.M. Иммуностим у-лирующая активность мурамилдипептида // Журн. микробиол. -1999.-№3.-С.105.

53. Пикина А.П., Смеянов В.В., Ефимов Б.А. Первичный скрининг штамов биф и-добактерий и лактобактерий с целью разработки на их основе эффективных препар а-тов пробиотиков. //Журн. микробиол. - 1999. - №6. - С.34-36

54. Коршунов В.М., Уртаева З.А., Смеянов В.В. Изучение антагонистической активности бифидобактерий in vitro и in vivo с использованием гнотобиологической технологии // Журн. микробиол. 1999. - №5. - С.72-74.

55. Прист Ф. Внеклеточные ферменты микрооргазмов. М., 1987.

56. Руководство по вакцинному и сыворо точному делу / Под ред. Бургасова П.Н. -М., 1978.

57. Штамм бактерий Bifidobacterium adolescentis 2Ф1 для приготовления бакпре-паратов, нормализующих микрофлору при нарушениях микробиоценоза: Пат.2148640 Россия, МПК7 С12 N1/20, А61К 35/74/ Коршунов В.М., Гудеева З.А., Ефимов Б.А. и др. Заявл. 09.07.98.

58. Серженко С.В., Филатов Н.Н. Опыт применения бифидумбактерина для пр о-филактики острых респираторных вирусных инфекций в детских дошкольных учр е-ждениях Москвы // Журн. микробиол. 1993. - №6. - С.61.

59. Коршунов В.М., Кисина Е.В., Иконникова Т.Б. Влияние препаратов из лакт о-бацилл и бифидобактерий на микрофлору кишечника мышей, облученных у квантами //Журн. микробиол. - 1980. - №6. - С. 47-54.

60. Бардых И.Д., Круглинов В.Д., Мазрупо Б.Л. Экспериментальная оцен ка эффективности лактобацилл для профилактики и лечения холеры // Журн. микробиол. 2001. - №2. - С.68.

61. Бляхер М. С., Поспелова В. В., Лопатина Т. К. Сравнение разных лекарстве н-ных форм ацилакта по их влиянию на иммунную систему // Проблемы инфекцио н-ных болезней. Сб. статей, посвящ. 100-летию со дня рождения Г.Н. Габрического. -М„ 2000.-С. 27-31.

62. Получение антибиотикоустойчивых штаммов бифидобактерий и лактобацилл и изучение их биологических свойств: Автореф. дисс. канд. мед.наук / Иванова И.П. -М„ 1981.

63. Воспяков В.Г и др. Гликопептиды лактобацилл регуляторы гемопоэза и иммунитета: Доклад на 8 Международной конференции, С -Пб // "ВИЧ/СПИД и родств. пробл." - 2000, - №1. С. 31,32, 156

64. А.С. 1710575 А1 СССР, МКИ5 С 12 N 1/29, А61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus sp. компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергии / Л.И.Никитенко, В.И.Никитенко (СССР). - Опубл. 07.02.92, Бюл. № 5.

65. Штамм бактерий В. breve Р2 для приготовления бакпрепаратов, нормализу ю-щих микрофлору: Пат. 2148639 Россия, МПК7 С12 N 1/20, А61К 35/74/Гудеева З.А. Заявл. 09.07.98.

66. Смирнов В. В., Резник С. Р., Вьюницкая И. А. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. журн. 1993. - Т. 54, № 6. - С. 82-94.

67. Поберий И.А., Харечко А.Т., Садовой Н.В., Литусов Н.В. Новый комплексный эубиотик "Биоспорин" для детей и взрослых // Уральское медицинское обозрение "Здравоохранение Башкортостана". 1998. -№ 1. - С. 97-99.

68. Белявская В.А., Кашперова Т.А., Сорокулова И.Б. Экспериментальная оценка безопасности генно-инженерных бактерий на модели штамма В. subtilis, продуцирующего интерферон //Журн. микробиол. 2001. - №2. - С. 16-20.

69. Killen М. Klatnhammtr Т. Genetic modification of intestinol lactobacilli and bifi-dobfcteria // J. Mol.Biol. 2000. - № 2. - P. 41-50.

70. Вельков В.В. Интродукция генетически модифицированных микроорганизмов в окружающую среду. Перспективы и риск // Генетика 1994. - №5. - С.581-592.

71. Банникова Л. А. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в моло ч-ной проышленности. -М., 1987.

72. Gopal P. In vitro adherence properties of L. rhamnosus DR20 and B. lactis DR10 strains and thtir antagonistic activity against an enterotoxigenic E. coli // Int J. Food Microbiol.- 2001. №5. - P. 207-216.

73. Лихачева А,Ю., Бондаренко B.M., Соколова К.Я. Современное состояние в о-просатаксономии бактерий рода LACTOBACILLUS //Журн. микробиол. № 9-10.

74. Блохина И.Н., Бондаренко В.М., Лихачева А.Ю. Традиционная классификация и геносистематика бактерий рода LACTOBACILLUS // Журн. микробиол. 1995,-№4. - С. 19-23.

75. Резник С.Р., Слабоспицкая А.Т., Смирнов В.В. Некоторые биологические свойства бактерий рода Bacillus, выделенных из организма людей // Микробиол. журн. 1985. - 47, № 3. - С. 53-59.

76. Бациллы. Генетика и биотехнология / Пер. с англ. под ред. Харвурда. М., 1992.

77. Егоров Н.С. Промышленная микробиология. М ., 1890. С.570.

78. Fleuring Н. P., Ordal Z. J. Responses of В. subtillis spores to ionic environments during sporulation and germination/ J. Bacterial.- 1964, v.88,'6.-p. 1529-1537.

79. Hanson R. S., Spinivasan V. R. and Halvorson H. O., 1963, Biochemistry of sporulation. I. Metabolism of acetate by vegetative and sporulating cells, T. Bacteriol. 1985.-P.451-460.

80. Harrison О. E. F. Physiological effest of dissolved oxygen tension and redox potential on growing populations of microorganisms T. Appl. Chem. Biotechnol. 1972.-V223.-P.-417-440.

81. Horkins T. R. Feed-on-demand control of fermentation by cyclic changes in dis-* solved oxygen tenson // Biotechol. and Bioeng., -1981.-V.23.-P.2137-2143.

82. Nakata H.M. and Halvorson H.O., 1960, Biochemical changers occurring during growth and sporulation of Bacillus cereus. T.Bacteriol.-1980.-P. 801-810.

83. Neilson N.E., Macgnillan M.F., Campbele L.L. Grout studies on B. stearothermi-phillus// Canad. J.Microbiol.-1959,- V.6.-P.293-298.

84. Емцева Т.В. Влияние источников углерода и азота, добавок витаминов группы В на биосинтез щелочной протеазы штаммами B.mesenthericus и В. subtilis // Прикладная биохимия и микробиология. 1975.- №3.- С.391.

85. Лабораторный регламент. Биоспорин сухой /ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. 1993. - Арх. ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. Инв.№ 373/3 -ДСП.

86. Методические рекомендации по изучению биологических свойств бактерий рода Bacillus.- М., 1998.

87. Фармакопейная статья. Бифидумбактерин сухой. ФС 42 -132ВС-88.

88. Сборник методик /ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. 2002. - Арх. ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.

89. Стандарты предприятия /ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. 1999. - Арх. ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. Инв.№ 401 -ДСП.

90. Отчет о НИР (заключительный) / ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. Руководитель 3 а-бокрицкий АН. 2002. - Арх. ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.

91. Price К. Inhibition of Pseudomon species by hydrogen peroxide producing lactoba-cilli.// Т/ Milk Food Technol. 1970. - №3. - P. 13.

92. Reiter B. Laktoperoxidase antibacterial system // T. Food Prof. 1984. - №4. -P.324.

93. Коваленко H.K., Касумова C.A. Лизоцимсинтезирующая активность энтер о* кокков и лактобацилл // Микробиол. журн. 19 96.- №6.-С. 12.

94. Харечко А.Т., Садовой Н.В., Поберий И.А., Литусов Н.В., Филин В.А. Ос о-бенности роста и развития бактерий на плотных и в жидких питательных средах. ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ. Инв.№ 961В, 1996.

95. Войно-Ясенецкий М. В. Биология и патология инфекционны х процессов. Л., Медицина, 1981.

96. Павлович С. А. Основы иммунологии. Минск, 1997.

97. Кашин В.Н. Нетрадиционная иммунология инфекций. Пермь, 1996.

98. Аркадьева З.А. Методы хранения культур микроорганизмов.// Метаболизм микроорганизмов / Под ред. Егорова Н.С. М.,1986. - С.57-64.

99. Куплетская М.Б., Аркадьева З.А. Методы длительного хранения коллекцио н-ных микрорганизмов кафедры микробиология МГУ // Микробиол о-гия.1997.№2.С.283.

100. Опарин Ю.Г. Повреждение и защита биоматериалов при замораживании и лиофилизации // Биотехнология. 1996. №7. - С.З.

101. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроо р-t ганизмов при различных методах хранения. // Биологические науки. №4. - С. 93105.

102. ГОСТ 9525-84. Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа. Дополнение ГК от 1992года.

103. Ушаков Р.В., Царев В.Н., Ушаков Т.В. Стандартный тампон для количестве н-ных исследований смешанной анаэробно -аэробной микрофлоры //Лабораторное д е-ло.-1991-№7.- С.69-71

104. Государственные испытания и регистрация новых медицински х иммунобиологических препаратов: Санитарные правила. М.: Информационно-издательский центр М инздрава России, 1998.

105. Разработка нового экспериментального препарата из молочнокислых бактерий L. plantarum 8Р-АЗ: Автореф. дисс. канд. мед. наук / Красик Пермь, 1974.it

106. ЦЕНТР ВОЕННО-ТЕХНИЧЕСКИХ ПРОБЛЕМ БИОЛОГИ™ CKcS?*™ ЗАЩИТЫ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ИНСТИТУТА МИКРОБИОЛОГИИ МО РФ1. Экз.№ ✓

107. УТВЕРЖДАЮ ЗАМЕСТИТЕЛЬ НАЧАЛЬНИКА ЦЕНТРА , ПО НАУЧНОЙ РАБОТЕ доктор технических наук старший научный1. V- V^ мая 2002г.

108. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО ПЕРСПЕКТИВАМ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НОВЫХ

109. НАЧАЛЬНИК НИУ-3 доктор биологических наук старший научный сотрудник

110. НАЧАЛЬНИК 17 ОТДЕЛА кандидат медицинских наук старший научный сотрудник1. W11. П.Васильев1. JfiM1. А.Забокрицкий1. Екатеринбург 2002137 Приложэниэ 21. УТВЕРЖДАЮ УТВЕРЖДАЮ

111. Начальник Центра военно-технических Директор Всероссийского научногроблем биологической защиты . исследовательского ветеринарного

112. НИИ микробиологии МО РФ института Минсельхоза РФп© ппрщиготозлкешишю шробэдшшчсскош Ервзшряпга субтшпяшет

113. НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ РАБОТЫ

114. Ведущий научный сотрудник Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института Минсельхоза РФ доктор ветеринарных наук

115. Начальник научно-исследовательского управления Центра ВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ доктор биологических наук старший научный сотрудник ■ л/1. Начальник отдела

116. Центра ВТО ЕЗ НИИ микробиологии МО РФ кандидат медицинских наук старший научный сотрудникы1. Н.Садыков1. П.Васильев1. АЗабохрицкий1. Екатеринбург-Казань- 2CG21. УТВЕРЖДАЮ 138

117. Начальник Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФсхих наук1. ШВ.Ли

118. УТВЕРЖДАЮ • Прилсжэниэ 3 Директор Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института Минсельхоза РФ доктор ветеринарных наук •Абря 2002г.

119. СБОРНИК МЕТОДИК ПО ВЫДЕЛЕНИЮ, ИЗУЧЕНИЮ СВОЙСТВ И ПОДДЕРЖАНИЮ В ЖИЗНЕСПОСОБНОМ И АКТИВНОМ СОСТОЯНИИ КУЛЬТУР1. ЛАКТОБАКТЕРИЙ

120. НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ РАБОТЫ

121. Ведущий научный сотрудник Всероссийского научно-исследовательсхого ветеринарного института Минсельхоза РФ доктор ветеринарных наукс

122. Начальник научно-исследовательского управления

123. Центра ВТП 53 НИИ микробиологии МО РФ доктор биологических наук стглзший научный сотрудник /2^1. Начальник отдела

124. Центра ВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ кандидат медицинских наук стгрп-ий научный сотрудник1. Н.Садыкоз1. П.Васильгз1. АЛабокзицкий

125. Екатерикбург-Хаза:-:ь- 2002