Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Орлова, Елена Сергеевна

• Орлова, Елена Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Орлова, Елена Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика оспы овец и коз.

1.1.1. Распространенность заболеваний.

1.1.2. Клиническая картина заболеваний.

1.1.3. Патологоанатомические изменения.

1.1.4. Эпизоотологические особенности.

1.2. Характеристика BOO и ВОК.

1.2.1. Таксономическое положение.

1.2.2. Видовая специфичность.

1.2.3. Физико-химические свойства.

1.2.4. Структура вириона.

1.3. Геном BOO и ВОК.

1.4. Патогенез BOO и ВОК.

1.4.1. Проникновение вируса в клетку.

1.4.2. Депротеинизация вирусной сердцевины.

1.4.3. Экспрессия генов.

1.4.4. Морфогенез.

1.5. Культивирование BOO и ВОК.

1.6. Иммунитет и специфическая профилактика.

1.7. Диагностика оспы овец и оспы коз.

1.7.1. Дифференциальная диагностика.

1.7.2. Вирусологические методы диагностики.

1.7.3. Серологические методы.

1.7.4. Молекулярно-биологические методы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз»

Актуальность темы. Оспа овец и оспа коз - высококонтагиозные вирусные заболевания мелких жвачных. По классификации МЭБ они относятся к трансграничным болезням животных, способным вызывать эпизоотии и наносить большой экономический ущерб. Оспа овец и коз эндемична на Ближнем Востоке, в Центральной Азии, Индии, Китае, а также в Центральной и Южной Африке. В 1996-2003 гг. неблагополучными по этим заболеваниям были 55 стран, в том числе 7 стран СНГ. В России оспа регистрировалась в 1994-2000 и 2002-2003 гг. [187].

Возбудителями болезней являются близкородственные, но таксономически самостоятельные виды - вирус оспы овец (BOO) и вирус оспы коз (ВОК), - относящиеся к роду Саргурох семейства Poxviridae. BOO и ВОК не обладают четко выраженной хозяйской специфичностью: несмотря на то, что обычно вирусы вызывают наиболее выраженное заболевание либо у овец, либо у коз, некоторые штаммы патогенны для обоих видов животных-хозяев [112]. Это делает актуальной задачу видовой дифференциации возбудителей оспы.

Для специфической профилактики оспы используются живые аттенуированные вакцины. Вакцинированные животные в результате контакта с эпизоотическими штаммами могут становиться бессимптомными носителями вируса и служить резервуаром инфекции. В связи с этим, при обнаружении у вакцинированных животных вируса оспы возникает необходимость в дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов.

Лабораторная диагностика оспы основана на обнаружении вируса или его составляющих (белков, ДНК) в патологическом материале, либо антител к вирусу в крови животных.

Традиционные методы диагностики оспы овец и коз (реакция нейтрализации, выделение вируса на культуре клеток) не способны дифференцировать вирусы оспы овец и оспы коз друг от друга и, тем более, вакцинные штаммы вирусов от эпизоотических. На сегодняшний день различать вирусы рода Саргурох возможно только с помощью рестрикционного картирования или нуклеотидного секвенирования вирусных геномов (ДНК). Однако в силу сложности и трудоемкости они неприменимы для рутинной диагностики.

В соответствии с требованиями МЭБ при подозрении на оспу овец и коз патологический материал должен тестироваться также на наличие вируса контагиозной эктимы. Этот парапоксвирус вызывает заболевание, которое, также как и оспа, проявляется поражениями кожи, однако не относится к особо опасным болезням из-за незначительной смертности среди пораженных животных. Метод обнаружения вируса контагиозной эктимы с помощью ПЦР в России до сих пор отсутствует.

Для выявления антител к BOO и ВОК традиционно используется реакция нейтрализации. Метод дорог, малопроизводителен, может выполняться лишь в условиях специализированных лабораторий с высоким классом биологической защиты. Первые попытки применения ИФА для выявления антител к BOO и ВОК были основаны на использовании в качестве антигена очищенных препаратов вирусов [48, 89, 142] Однако из-за невозможности избавиться от примесей клеточных белков в препаратах антигена специфичность реакции была низкой. Для избежания этой проблемы H.G.Heine et al. [40] предложили для выявления антител к BOO и ВОК ИФА, основанный на использовании рекомбинантного антигена Р32, полученного экспрессией в E.coli. Разработанный ими ИФА имел ряд преимуществ перед традиционными тест-системами, поскольку рекомбинантный антиген был биологически безопасен, дешев в получении, а также имел высокую степень очистки, что обеспечивало высокую специфичность реакции. Однако в России подобные работы не проводились.

Таким образом, в диагностике оспы овец и оспы коз нерешенными оставался ряд проблем. Отсутствовали простые и быстрые методы видовой и штаммовой дифференциации вирусов оспы овец и оспы коз. Не разрабатывались в России и высокоспецифичные иммуноферментные методы для выявления антител к этим вирусам.

Цели и задачи исследования. Цель нашей работы заключалась в совершенствовании методов диагностики оспы овец и оспы коз.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- провести сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей генома вирусов рода Саргурох, выявить участки генома, пригодные для видовой дифференциации каприпоксвирусов и для дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов этих возбудителей;

- разработать простой и быстрый метод обнаружения и дифференциации вирусов оспы овец и оспы коз, основанный на ПЦР и не требующий проведения таких дополнительных процедур, как рестрикционный анализ или нуклеотидное секвенирование;

- разработать метод, позволяющий различать вакцинные и эпизоотические штаммы вируса оспы овец;

- для проведения дифференциальной диагностики оспы овец и оспы коз от контагиозной эктимы разработать на основе ПЦР метод обнаружения вируса контагиозной эктимы;

- получить рекомбинантные антигены вируса оспы овец экспрессией в E.coli;

- на основе рекомбинатных антигенов разработать иммуноферментный метод для выявления антител к вирусам оспы овец и оспы коз Научная новизна исследований.

Впервые разработан экспресс-метод, позволяющий выявлять и дифференцировать виды каприпоксвирусов только на основе ПЦР, без дополнительных исследований (рестрикционного анализа или нуклеотидного секвенирования).

Предложен метод дифференциации вакцинных штаммов «НИСХИ», «ВНИИЗЖ» и «Б 5/96» вируса оспы овец от эпизоотических изолятов на основе ПЦР с последующим рестрикционным анализом ампликонов, не имеющий аналогов в диагностике оспы овец.

Предложен метод дифференциальной диагностики вируса оспы овец и вируса оспы коз от вируса контагиозной эктимы.

Экспрессией в Е. coli получены рекомбинантные белки Р17, Р18 и Р26 вируса оспы овец.

Разработан непрямой вариант ИФА с использованием рекомбинантных белков Р17 и Р18 в качестве антигенов для обнаружения антител к каприпоксвирусам в сыворотках крови мелких жвачных.

Практическая значимость исследований.

В результате проведенных исследований разработано 5 методик, которые прошли комиссионные испытания, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»:

Методика обнаружения и видовой дифференциации каприпоксвирусов с использованием мультиплексной полимеразной цепной реакции» (2005 г.);

Методика обнаружения вируса контагиозной эктимы с использованием полимеразной цепной реакции» (2005 г.);

Методика дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец с использованием рестрикционного анализа продуктов ПЦР» (2005 г.);

Методика обнаружения антител к каприпоксвирусам в непрямом иммуноферментном анализе с использованием рекомбинантного антигена Р17 вируса оспы овец» (2006 г.);

Методика обнаружения антител к каприпоксвирусам в непрямом иммуноферментном анализе с использованием рекомбинантного антигена Р18 вируса оспы овец» (2006 г.).

Публикации научных исследований. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе одна работа в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены и обсуждены на Международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных» (Владимир, 2004г.), а также на заседаниях ученого совета ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» в период 2002-2006 гг.

Основные положения, выносимые на защиту:

Метод обнаружения и видовой дифференциации каприпоксвирусов, с использованием мультиплексной ПЦР.

Метод дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец с использованием рестрикционного анализа продуктов ПЦР.

Метод обнаружения вируса контагиозной эктимы с использованием

ПЦР.

Получение рекомбинантных антигенов вируса оспы овец и оценка их антигенной активности.

Использование рекомбинантных антигенов Р17 и Р18 вируса оспы овец в непрямом варианте ИФА.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения и 5 приложений. Список используемой литературы включает 188 источников, из которых 149 на иностранном языке. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 16 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Орлова, Елена Сергеевна

5. ВЫВОДЫ

1. Проведен сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей полноразмерного генома вируса оспы овец, вируса оспы коз и вируса бугорчатки. Выявлены участки генома, позволяющие определять видовую принадлежность каприпоксвирусов, а также дифференцировать вакцинные штаммы вируса оспы овец от эпизоотических изолятов.

2. Разработан метод обнаружения и дифференциации каприпоксвирусов, основанный на мультиплексной ПЦР с видоспецифичными праймерами. Метод отличается высокой специфичностью, чувствительностью и технической простотой.

3. Разработан метод, основанный на амплификации и рестрикционном анализе гена ankyrin-repeat белка, позволяющий дифференцировать вакцинные штаммы «НИСХИ», «ВНИИЗЖ» и «Б5/96» вируса оспы овец от эпизоотических изолятов и, одновременно, различать вирусы оспы овец и коз.

4. Разработан метод обнаружения вируса контагиозной эктимы с помощью ПЦР, позволяющий проводить дифференциальную диагностику оспы овец и коз и контагиозной эктимы.

5. Получены рекомбинантные белки Р17, Р18 и Р32 вируса оспы овец экспрессией в E.coli. Показана антигенная активность рекомбинантных белков Р17 и Р18.

6. На основе рекомбинантных антигенов Р17 и Р18 вируса оспы овец разработан непрямой вариант ИФА для обнаружения антител к каприпоксвирусам в сыворотках крови овец и коз.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования предлагаются:

Методика обнаружения и видовой дифференциации каприпоксвирусов с использованием мультиплексной полимеразной цепной реакции» (2005 г.);

Методика дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец с использованием рестрикционного анализа продуктов ПЦР» (2005 г.);

Методика обнаружения вируса контагиозной эктимы с использованием полимеразной цепной реакции» (2005 г.);

Методика обнаружения антител к каприпоксвирусам в непрямом иммуноферментном анализе с использованием рекомбинантного антигена Р17 вируса оспы овец» (2006 г.).

Методика обнаружения антител к каприпоксвирусам в непрямом иммуноферментном анализе с использованием рекомбинантного антигена Р18 вируса оспы овец» (2006 г.).

Методики прошли комиссионные испытания, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

110

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Орлова, Елена Сергеевна, 2007 год

1. Биологические свойства вакцинного штамма НИСХИ вируса оспы овец / В.Н. Иванющенков, О.А. Кореба, В.Т. Кекух и др. // Ветеринария. 1990. -№ 8. - С. 22-24.

2. Борисович, Ю.Ф. О распространении оспы овец и мерах борьбы с нею в некоторых странах / Ю.Ф. Борисович // Тр. ГНКИ. М., 1964. - Т. 12. - С. 24-31.

3. Ванновский, Т.Я. Оспа коз и ее специфическая профилактика: автореф. дис. д-ра.вет.наук / Т.Я. Ванновский. Воронеж, 1966.-43 с.

4. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 с.

5. Гуненков, В.В. Сухая живая вакцина против оспы овец из штамма С 113/86 / В.В. Гуненков, В.П. Черняк, Г.Д. Кузнецов // Ветеринария. 1993. - № 11/12. - С.23-24.

6. Диев, В.И. Оспа овец и ее профилактика вакциной из штамма ВНИИЗЖ / В.И. Диев // Современные аспекты вет. патологии ж-ных: матер, конф., посвящен. 40-летию ВНИИЗЖ. Владимир, 1998. - С. 114-124.

7. Иванющенков, В.Н. Реактогенные свойства вирусвакцины против оспы овец / В.Н. Иванющенков, В.Т. Кекух, О.А. Кореба // Ветеринария. 1990. -№7.-С. 28-30.

8. Изучение патогенности вирусов оспы овец и оспы коз / М.С. Зиновьева, В.М. Захаров, В.И. Диев, Д.К. Басова // Вуз и АПК. Задачи, проблемы и пути решения: сб.науч.тр. Махачкала, 2002. - С. 288-290.

9. Инфекционные болезни овец / Р.А. Кадымов, А.А. Кунаков, В.А. Седов и др.. М.: Агропромиздат, 1987. - 303 с.

10. Использование аэросила А-300 и фильтров GF/F (GF/C) для очистки фрагментов ДНК, ДНК-плазмид и РНК / О.Г. Грибанов, А.В. Щербаков, Н.А. Перевозчикова и др. // Биохимия. 1996. - Т. 21, № 6. - С. 1064-1070.

11. Испытания в производственных условиях сухой эмбрион-вирусвакцины против оспы овец / Н.В. Лихачев, А.Д. Смедов, Ю.Ф. Борисович и др. // Тр. ГНКИ.-М., 1962.-Т. 11.-С. 28-32.

12. Кадыров, У.Г. Оспа животных / У.Г. Кадыров, Ю.Ф. Борисович. М.: Колос, 1981.- 156 с.

13. Каныпина, А. В. Разработка методов иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней: дис.канд.вет.наук / А. В. Каныпина. Владимир, 2004. - 123 с.

14. Керембекова, У.Ж. Получение диагностических препаратов для серологических реакций при оспе овец / У.Ж. Керембекова, Ю.М. Гононов, JI.H. Пасечников // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1992. - № 3. - С. 122123.

15. Керембекова, У.Ж. Совершенствование средств и методов лабораторной диагностики оспы овец: автореф.дис.канд.вет.наук / У.Ж. Керембекова. -Алматы, 1994. -26 с.

16. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных. Учебное пособие / под ред. В.Ю. Луговцева, Д.А. Васильева. Ульяновск, 2002. - С. 17-26.

17. Маниатис, Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук: пер. с англ. М.: Мир, 1984.-480 с.

18. Машнин, А.В. Диагностика оспы овец и оспы коз / А.В. Машнин // Вест. РАСХН. 2003. - № 3. - С. 66-69.

19. Машнин, А,В. Получение гипериммунных сывороток для диагностики оспы овец и коз / А.В. Машнин // Докл. РАСХН. 2003. - № 5. - С. 57-59.

20. Машнин, А.В. Разработка и усовершенствование средств и методов лабораторной диагностики оспы овец и оспы коз: автореф.дис.канд.вет.наук / А.В.Машнин. Покров, 2001. -23 с.

21. Оспа овец и коз // Частная патология и терапия дом. ж-ных / Ф. Гутира, И. Марек, Р. Маннингер, И. Мочи. М.: С.-х. литература, 1961. - Т. 1, кн. 1. -С. 431-450.

22. Патогенность и иммуногенность вирусов оспы овец и оспы коз на гетеровидовых животных / Л.Б. Кутумбетов, М.С. Зиновьева, С.В. Хлебопашникова, Н.И. Ковалишина // Вет. медицина: м1жвид. тем. наук. зб. 80 рок. IEKBM. Харьюв, 2002. - С. 359-362.

23. Поляков, И. О. Практическое пособие по медицинской статистике / И. О. Поляков. JL: Медицина, 1975. - 150 с.

24. Разработка и испытание вирусвакцины против оспы овец сухой культуральной / И.Ф. Вишняков, В.М. Балышев, В.В. Башаев и др. // Состояние, проблемы и перспективы развития вет. науки России (К 100-летнему юбилею ВИЭВ). М., 1999. - Т. 1. - С. 138-140.

25. Скалинский, Е.И. Структура и морфогенез вируса оспы коз / Е.И. Скалинский, Ю.Ф. Борисович // Ветеринария. 1975. -№7. - С. 39-41.

26. Скалинский, Е.И. Об электронномикроскопической диагностике оспенных болезней животных / Е.И. Скалинский, Ю.Ф. Борисович // Ветеринария. -1978.-№6.-С. 46-47.

27. Сюрин, В.Н. Ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Г.В. Белоусова, Н.В. Фомина. М.:Агропромиздат, 1991. - С. 366-369.

28. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова. -М.: Высшая школа, 1991. -288 с.

29. Ханаан, Д. Методы трансформации Е. coli / Д. Ханаан // Клонирование ДНК. Методы: пер. с англ.-М., 1988.-С. 140-173.

30. Холодилов, Н. Г. Выделение плазмидной ДНК методом щелочного лизиса / Н.Г. Холодилов // Методы мол. генетики и генной инженерии. -Новосибирск: Наука, 1990.-С. 9-10.

31. Эффективность сухой культуральной вирусвакцины из штамма НИСХИ против оспы овец / Ф.П. Курченко, В.Н. Иванющенков, К.П. Уфимцев и др.//Ветеринария. 1991.-№ 10.-С. 21-23.

32. Яковлева, А. С. Экспрессия в E.coli рекомбинантных белков ЗА, ЗВ и ЗАВ вируса ящура / А. С. Яковлева, А. В. Каньшина, А. В. Щербаков // Тр.

33. Федерального центра охраны здоровья ж-ных. Владимир, 2005. - Т. 3. - С. 105-114.

34. A capripoxvirus detection PCR and antibody ELISA based on the major antigen P32, the homolog of the vaccinia virus H3L gene / H.G. Heine, M.P. Stevens, A.J Foord., D.B. Boyle //J.Immunol.Methods. 1999. - Vol. 227, № 1-2. - P. 187-196.

35. A classical live attenuated vaccine for sheep pox / V. Bhanuprakash, B.K. Indrani, R. Hegde et al. // Trop. Anim. Health Prod. 2004. - Vol. 36, № 4. - P. 307-320.

36. A duplex PCR assay for simultaneous detection and differentiation of Capripoxvirus and Orf virus / M. Zheng, Q. Liu, N. Jin et al. //Mol. Cell Probes. -2007.-Vol. 2.-P. 48-50.

37. A note on the antigenic relationship of sheep pox virus strains / Puranchand, V.D.P. Rao, R. Chandra, S.K. Garg // Indian J. Vet. Med. 1987. - Vol. 7. - P. 166-168.

38. A prominent antigenic surface polypeptide involved in the biogenesis and function of the vaccinia virus envelope / J. Gordon, A. Mohandas, S. Wilton, S. Dales//Virology. 1991.-Vol. 181, № 2. - P.671-686.

39. A Vero cell-attenuated goat pox virus provides protection against virulent virus challenge / M. Hosamani, S. Nandi, B. Mondal et al. // Acta Virol. 2004. -Vol. 48, № 1. - P.15-21.

40. Adaptation and growth cycle of sheep pox virus in MDBK cell line / K.D. Pandey, A. Rai, A.C. Goel et al. // Indian J. Virol. 1985. - Vol. 1. - P. 133138.

41. Adlakha, S. C. Studies on sheep- and goat-pox viruses. I. Adaptation of the viruses in laboratory animals and tissue culture / S. C. Adlakha, M.P. Bansal, B.S. Malik // Indian J. Anim. Sci. 1971. - Vol. 41. - P. 171 -175.

42. Application of ELISA in the detection of goat pox antigen and antibodies / B. Sharma, B.S. Negi, M.P. Yadav et al. // Acta Virol. 1988. - V.32. - P. 65-69.

43. Application of fluorescent antibody test in the diagnosis of sheep pox, and study of sheep pox virus multiplication in cell-culture / P. Sarkar, S.P. Singh, A.K. Pandey et al.J // Indian J.Anim.Sci. 1980. - V.50.

44. Assembly of vaccinia virus: role of the intermediate compartment between the endoplasmic reticulum and the Golgi stacks / B. Sodeik, R.W. Dom, M. Ericsson et al. // J. Cell Biol. 1993. - Vol. 121. - P. 521-541.

45. Autoradiographic study on sheep pox virus infection / A.M. Terinha, J.D. Vigario, J.L. Nunes Petisca et al. // J. Bacteriol. 1965. - Vol. 90.

46. Bakos, K. Studies on goat pox in Sweden / K. Bakos, S. Brag // Vet. Bull. -1957.-Vol. 27.-P. 571.

47. Baldick, C.J. Characterization and regulation of mRNAs encoded by vaccinia virus intermediate stage genes / C.J. Baldick, B. Moss // J. Virol. 1993. - Vol, 67.-P. 3515-3527.

48. Baroudy, B.M. Sequence homologies of diverse length tandem repetitions near ends of vaccinia virus genome suggest unequal crossing over / B.M. Baroudy, B. Moss // Nucleic Acids Res. 1982. - Vol. 10. - P. 5673-5679.

49. Bhambani, B.D. An immunodiffusion test for laboratory diagnosis of sheeppox and goatpox / B.D. Bhambani, D. Krishnamurtthi // J. Сотр. Pathol. Therap. -1963.- V. 73.-P. 349-357.

50. Bhat, P.P. Molecular characterization of pox (viral) DNA / P.P. Bhat // Indian J. Anim. Sci. 1993. - Vol. 63. - P. 857-862.

51. Bhat, P.P. Restriction enzyme profiles as molecular epidemiological tools for characterizing sheeppox virus genomes / P.P. Bhat, B.P. Mishra // Indian Journal of Animal Sciences. 1989. - Vol. 59. - P. 1475-1490.

52. Black, D.N. Genomic relationship between capripoxviruses / D.N. Black, J.M. Hammond, R.P. Kitching // Virus Res. 1986. - Vol. 5. - P. 277-292.

53. Black, D.N. The capripoxvirus genome / D.N. Black // Rev. Sci. Techn. OIE. -1986.-Vol. 5.-P. 495-501.

54. Buller, R.M.L. Poxvirus pathogenesis / R.M.L. Buller, G.J. Palumbo // Microbiol. Reviews. 1991. - Vol. 55. - P. 80-122.

55. Carn, V.M. An antigen trapping ELISA for the detection of capripoxvirus in tissue culture supernatant and biopsy samples / V.M. Carn // J. Virol. Methods. -1995.-Vol. 51, № 1. P.95-102.

56. Carn, V.M. Control of capripoxvirus infections / V.M. Carn // Vaccine. 1993. -Vol. 11, № 13. - P.1275-1279.

57. Cellular fatty acids during fowlpox virus infection of three different host systems / D.S. Lyles, C.C. Randall, L.G. Gafford, H.B.J. White // Virology. 1976. - Vol. 70. - P. 227-229.

58. Chand, P. Evaluation of the Western blot analysis of virus-specific antibody responses to capripox and contagious pustular dermatitis infections in sheep / P. Chand, R.P. Kitching, D.N. Black // Epidemiol. Infect. 1994. - Vol. 113, № 2. -P. 377-385.

59. Chand, P. Molecular and immunological characterization of a major envelope protein of capripoxvirus: Ph. D. Thesis / P. Chand. University of Surrey, 1992.

60. Cho, C.T. Monkeypox virus / C.T. Cho, H.A. Wenner // Bacteriol. Reviews. -1973.-Vol.37.-P. 1-18.

61. Coagglutination test: a simple and rapid diagnostic technique for goat pox / R.K. Joshi, R. Chandra, V.D.P. Rao, S.K. Gard // Trop. Anim. Health Prod. 1989. -Vol. 21, № 4. - P.233-235.

62. Comparative evaluation of sheep pox vaccines / I.P. Singh, V.D.P. Rao, R. Chandra, S.K. Garg // Indian J. Anim. Sci. 1984. - Vol. 54. - P. 650-653.

63. Counter-immunoelectrophoresis test for rapid diagnosis of sheep pox / Puranchand, V.D.P. Rao, S.K. Garg et al. // Brit. Vet. J. 1985. - Vol. 141. - P. 124-128.

64. Cultivation of goat pox virus in established cell line / Ved Prakash, R. Chandra, V.D.P. Rao, S.K. Garg // Indian J. Virol. 1994. - Vol. 10. - P. 60-63.

65. Cytopathogenicity of goat pox virus / R.K. Joshi, R. Chandra, V.D.P. Rao, S.K. Garg // Indian J. Сотр. Microb. Immunol. Infect. Dis. 1994. - Vol. 15. - P. 3536.

66. Dales, S. Biology of poxviruses / S. Dales, B.G.T. Pogo // Virology Monographs. 1981.-Vol. 18. - P. 1-109.

67. Dales, S. The cycle of multiplication of vaccinia virus in Earle's strain L cells. I. Uptake and penetration / S. Dales, R. Kajioka // Virology. 1964. - Vol. 24. - P. 278-294.

68. Datta, S. Dot-immunobinding technique in differential diagnosis of pox diseases of sheep and goats / S. Datta, J.P. Soman // Indian J. Anim. Sci. 1990. - Vol. 60. -P. 1186-1187.

69. Davies, F.G. The alteration in pathogenicity and immunogenicity of a Kenya sheep and goat pox virus on serial passage in bovine fetal muscle cell culture / F.G. Davies, G. Mbugwa // J. Сотр. Pathol. 1985. - Vol. 95. - P. 565-568.

70. Davison, A.J. The structure of vaccinia virus early promoters / A.J. Davison, B. Moss // J. Mol. Biol. 1989. - Vol. 210. - P. 749-769.

71. Davison, A.J. The structure of vaccinia virus late promoters / A.J. Davison, B. Moss // J. Mol. Biol. 1989. - Vol. 210. - P. 771-784.

72. Deletion of 55 open reading frames from the termini of vaccinia virus / M.E. Perkus, S.J. Goebel, S.W. Davis et al. // Virology. 1991. - Vol. 180. - P. 406410.

73. Detection of goat pox antigen and antibody by counter-immunoelectrophoresis / R.K. Joshi, R. Chandra, V.D.P. Rao, S.K. Gard // Indian J. Anim. Sci. 1990. -Vol. 60.-P. 34-35.

74. Detection of goatpox antigen and antibody by the CIE test / B. Sharma, B.S. Negi, A.B. Pandey et al. // Trop. Anim. Health Prod. 1988. - V.20. - P. 109113.

75. Detection of sheep poxvirus in skin biopsy samples by a multiplex polymerase chain reaction / P. Markoulatos, O. Mangana-Vougiouka, G. Koptopoulos et al. // J. Virol. Methods. 2000. - Vol. 84, № 2. - P. 161 -167.

76. Development of an attenuated live virus vaccine against sheep pox: a field trial / R. Chandra, V.D.P. Rao, V.P. Dixit et al. // Indian Vet. J. 1990. - Vol. 67. - P. 1-3.

77. Differentiation of sheep pox and goat poxviruses by sequence analysis and PCR-RFLP of P32 gene / M. Hosamani, B. Mondal, P.A. Tembhurne et al. // Virus Gene. 2004. - Vol. 29, № 1. - P. 73-80.

78. Easterbrook, K.B. Controlled degradation of vaccine virions in vitro: an electron microscopic study / K.B. Easterbrook // J. Ultrastructure Res. 1966. - Vol. 14. -P. 484-496.

79. ELISA: theory and practice / ed. by J.R. Crowther. -Totowa, New Jersey: Humana Press, 1995. 223 p. - (Methods in Mol. Biol.)

80. El-Zein, A. Preparation and testing of a goat pox vaccine from a pathogenic fiel isolate attenuated in cell culture / A. El-Zein, S. Nehme, K.V. Singh // Zentralblat Vet.-Med. 1983. - Bd. 30. - S. 341-348.

81. Evaluation of allergic test in goat pox / B.S. Negi, A.B. Pandey, M.P. Yadav, B. Sharma // Indian J. Virol. 1988. - Vol. 4. - P. 26-33.

82. Evaluation of an immunocapture enzyme-linked immunosorbent assay for detection of capripoxvirus / C.K. Ngichabe, Y.S. Binepal, J. W. Njiru, V.M. Cam // Vet. Rec.- 1999.-Vol. 145. P. 231-232.

83. Evaluation of immunocapture ELISA for diagnosis of goat pox / T.V. Rao, P. Malik, S. Nandi, B.S. Negi // Acta Virol. 1997. - Vol. 41, № 6. - P. 345-348.

84. Evaluation of latex agglutination test for rapid detection of goat poxvirus antigen and antibodies / T.V. Rao, B.S. Negi, P. Dhar, D. Asgola // Acta Virol. 1996. -Vol.40, №2.-P. 95-97.

85. Experimental immune response of Iranian goat pox vaccine virus strain against prevalent virus in Pakistan / M.A. Mahmood, M. Ahmad, S. Afzaal, M.S. Knah // Pakistan Vet. J.- 1993.-Vol. 13.-P. 125-127.

86. Gershon, P.D. A comparison of the genomes of capripoxvirus isolates of sheep, goats, and cattle / P.D. Gershon, D.N. Black // Virology. 1988. - Vol. 164, № 2. -P. 341-349.

87. Goat pox cell culture attenuated vaccine / H. Guo, Z.Y. Guo, Z.P. Shang, Q.G. Liu // Chinese J. Vet. Sci. Technol. 1986. - Vol.3. - P. 8-10.

88. Gomez, C.E. Recombinant proteins produced by vaccinia virus vectors can be incorporated within the virion (IMV form) into different compartments / C.E. Gomez, M. Esteban // Arch Virol. 2001. - Vol. 146, №5. - P.875-892.

89. Growth and cytopathogenicity of goat pox virus in MDBK cell line / R.K. Joshi, S.K. Garg, R. Chandra, V.D. Sharma // Indian J. Virol. 1995. - Vol. 11. - P. 3133.

90. Growth behaviour of Sambalpur strain of goat pox virus on chorioallantoic membrane of developing chicken embryo / R.K. Joshi, S.K. Garg, R. Chandra, S.N. Sharma // Indian J. Virol. 1996. - Vol. 12. - P. 109-111.

91. Hudson, L. Practical immunology / L. Hudson, F.C. Hay. Oxford: Blackwell Sci.Publ., 1989.-P. 257-258.

92. Ichihashi, Y. Proteolytic activation of vaccinia virus for penetration phase of infection / Y. Ichihashi, M. Oie // Virology. 1982. - Vol. 116. - P. 297-305.

93. Ink, B.S. Transcription of poxvirus early gene is regulated both by a short promoter element and by a transcriptional termination signal controlling transcriptional interference / B.S. Ink, D.J. Pickup // J. Virol. 1989. - Vol. 63. -P. 4632-4644.

94. Ireland, D.C. Improved detection of capripoxvirus in biopsy samples by PCR / D.C. Ireland, Y.S. Binepal //J. Virol. Methods. 1998. - Vol.74, № 1. - P. 1-7.

95. Jadhav, K.M. Field observations on sheep pox tissue culture vaccine / K.M. Jadhav, A.K. Pandey, N.S. Radadia // Indian Vet. J. 1989. - Vol. 66. - P. 908912.

96. Jaikumer, D. Virion polypeptides of SPV (Ranipet strain) / D. Jaikumer, P. Ramadass, V.D. Padmanaban // Indian J. Anim. Sci. 1996. - Vol. 66. - P. 35-36.

97. Janeczko, R.A. Studies on the mechanism of entry of vaccinia virus into animal cells / R.A. Janeczko, J.F. Rodriguez, M. Esteban // Arch. Virol. 1987. - Vol. 92.-P. 135-150.

98. Joklik,W.K. The replication and coating of vaccinia DNA / W.K. Joklik, Y. Becker // J. Mol. Biol. 1964. - Vol. 10. - P. 452-474.

99. Kirubaharan, J J. Adaptation of SPV (Ranipet strain) to BHK2i cell line / J.J. Kirubaharan, A.P.G. Sugirtha, V.D. Padmanaban // Indian Vet. J. 1993. - Vol. 70. - P. 4-6.

100. Kitching, R.P. A single vaccine for the control of capripox infection in sheep and goats / R.P. Kitching, J.M. Hammond, W.P. Taylor // Res.Vet. Sci. 1987. - Vol. 42.-P. 53-60.

101. Kitching, R.P. Clinical and antigenic relationship between isolates of sheep and goat pox viruses / R.P. Kitching, W.P. Taylor // Trop. Anim.Health Prod. 1985. -V. 17.-P. 64-74.

102. Kitching, R.P. Comparison of the external dimensions of capripoxvirus isolates I R.P. Kitching, C. Smale // Res. Vet. Sci. 1986. - Vol. 41. - P. 425-427.

103. Kitching, R.P. Poxvirus, infection and immunity / R.P. Kitching, J.M. Hammond // Encyclopedia of Immunology / Eds. A. Roit et al.. London, 1991. - P. 12611264.

104. Kitching, R.P. Progress towards sheep and goat pox vaccines / R.P. Kitching // Vaccine. 1983. - Vol.1, № 1. - P. 4-9.

105. Kitching, R.P. Studies on the major common precipitating antigen of Capripoxvirus / R.P. Kitching, J.M. Hammond, D.N. Black // J. Gen. Virol. -1986.-V.67.-P.139-148.

106. Kitching, R.P. The characterization of African strains of capripoxvirus / R.P. Kitching, P.P. Bhat, D.N. Black // Epidemiol. Infect. 1989. - Vol. 102. - P. 335343.

107. Kotwal, G.J. Analysis of a large cluster of nonessential genes deleted from a vaccinia virus terminal transposition mutant / G.J Kotwal, B. Moss // Virology. -1988.-Vol. 167.-P. 524-537.

108. Law, M. Antibody neutralization of the extracellular enveloped form of vaccinia virus/М. Law, G.L. Smith//Virology. 2001.-Vol. 280, № l.-P. 132-142.

109. Mahmood, M.A. Preparation of live sheep pox tissue culture vaccine / M.A. Mahmood, Z. Hasni, S. Afzal // Pakistan Vet. J. 1988. - Vol. 8. - P. 56-61.

110. Matthews, R.E.F. Classification and nomenclature of viruses / R.E.F. Matthews // Intervirology. 1982. - Vol. 17. - P. 1-199.

111. Merchlinsky, M. Resolution of linear minichromosomes with hairpin ends from circular plasmids containing vaccinia virus concatemer junctions / M. Merchlinsky, B. Moss // Cell. 1986. - Vol. 45. - P. 879-884.

112. Moss, B. Instability and reiteration of DNA sequences within the vaccinia virus genome / B. Moss, E. Winters, N. Cooper// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. -Vol. 78.-P. 1614-1618.

113. Pandey, A.K. Studies on sheep poxvirus. 2. Immune and antibody response with cell culture adapted virus / A.K. Pandey, B.S. Malik, M.P. Bansal // Indian Vet. J. 1969.-Vol. 46.-P. 1017-1023.

114. Pandey, R. Soluble antigens of sheep-pox and goat-pox viruses as determined by immunodiffusion in agar gel / R. Pandey, I.P. Singh // Acta Virol. 1972. - Vol. 16.-P. 41-46.

115. Parsons, B.L. Tandemly repeated sequences are present at the ends of the DNA of raccoonpox virus / B.L. Parsons, D.J. Pickup // Virology. 1987. - Vol. 161. -P. 45-53.

116. Passive haemagglutination test with goat pox virus / R.K. Joshi, R. Chandra, V.D.P. Rao, S.K. Garg // Indian J. Vet. Med. 1991. - Vol. 11. - P. 56-57.

117. Payne, L.G. Characterization of vaccinia virus glycoproteins by monoclonal antibody precipitation / L.G. Payne // Virology. 1992. - Vol. 187, № 1. - P. 251 -260.

118. Payne, L. Polypeptide composition of extracellular enveloped vaccinia virus / L. Payne // J. Virol. 1978. - Vol. 27. - P. 28-37.

119. Poxvirus genetic recombination during natural virus transmission / P.D. Gershon, R.P. Kitching, L.M. Hammond, D.N. Black // J.Gen. Virol. 1989. - Vol. 70, № 2.-P. 485-489.

120. Rafyi, A. Goat pox in Iran, serial passage in goats and developing eggs and relationship with sheep pox / A. Rafyi, H. Ramyar // J. Сотр. Pathol. Therap. -1959.-Vol. 69.-P. 141-147.

121. Ramyar, H. Goat pox:immunogenicity of vaccine virus modified in cell culture / H. Ramyar, M. Hessami, B. Ghaboussi // Vet. Bull. 1974. - Vol. 44. - P. 472.

122. Rao, T.V.S. A comprehensive review of goat pox and sheep pox and their diagnosis / T.V.S. Rao, S.K. Bandyopadhyay // Anim. Health Res. Rev. 2000. -Vol. 1, № 2. - P. 127-136.

123. Rao, T.V.S. Development and standartization of a rapid diagnostic test for sheep pox / T.V.S. Rao, B.S. Negi, M.P. Bansal // Indian J. Сотр. Microb. Immunol. Infect. Dis. 1997. - Vol. 18. - P. 47-51.

124. Rao, T.V.S. Diagnosis of sheep pox and goat pox by PCR technique / T.V.S. Rao, S. Nandi, B.P. Sreenivasa // Indian J. Anim. Sci. 2001. - Vol. 71. - P.

125. Rao, T.V.S. Evaluation of avidin-biotin ELISA for the detection of antibodies to goat poxvirus using noninfectious diagnostic reagent / T.V.S. Rao, P. Malik, D. Asgola // Acta Virol. 1999. - Vol. 43. - P. 297-301.

126. Rao, T.V.S. Evaluation of different serological tests for the diagnosis of goat pox using soluble antigens / T.V.S. Rao, B.S. Negi // Tropical Animal Health Production 1997. - Vol. 29, № 4. - P. 235-239.

127. Rao, T.V. Identification and characterization of differentiating soluble antigens of sheep and goat poxviruses / T.V. Rao, B.S. Negi, M.P. Bansal // Acta Virol. -1996.- V.40.-P. 259-262.

128. Rao, T.V.S. Isolation and characterization of soluble antigens of sheep poxvirus / T.V.S. Rao, B.S. Negi, M.P. Bansal // Indian J. Exp. Biol. 1997. - Vol. 35. - P. 597-602.

129. Rao, V.D.P. Standartization of single radial haemolysis test for detection of sheep pox antibodies / V.D.P. Rao, R. Chandra // Indian J. Vet. Med. 1986. -Vol. 6.-P. 138.

130. Rao, T.V.S. Use of purified soluble antigens of sheep poxvirus in serodiagnosis / T.V.S. Rao, B.S. Negi, M.P. Bansal // Indian J. Anim. Sci. 1997. - Vol. 67. - P. 642-645.

131. Replication and resolution of cloned poxvirus telomeres in vivo generates linear minichromosomes with intact viral harpin termini / A.M. DeLange, M. Reddy, D. Scraba et al.J // J Virol. 1986. - Vol. 59. - P. 249-259.

132. Rosel, J. Transcription and translational mapping and nucleotide sequence analysis of vaccinia virus gene encoding the precursor of major core polypeptide 4b / J. Rosel, B. Moss // J. Virol. 1985. - Vol. 56. - P. 830-838.

133. Roy, R.N. Identification and immuno-characterization of different structural polypeptides of sheep pox virion: Phd. thesis / R.N. Roy; Indian Veterinary Research Institute. Mukteswar/Izatnagar, India, 1994.

134. Saha, G.R. Studies on lymphoid lesion of goat pox / G.R. Saha, N.C. Nayak, M.K. Bhowmik // Indian J. Anim. Res. 1991. - Vol. 25. - P. 1-4.

135. Sambyal, D.S. Immunogenecity of soluble antigens of sheep-pox virus / D.S. Sambyal, I.P. Singh // Indian J. Anim. Sci. 1978. - Vol. 48, № 7. - P. 511 -514.

136. Sharma, P.C. Immunological response of RM/65 sheep-pox vaccine in lambs / P.C. Sharma, S. Prasad, S.K. Karla // Indian J. Anim. Sci. 1987. - Vol. 57, № 9. -P. 923-928.

137. Sharma, S.N. Detection of sheeppox virus multiplication in sheep cells by acridin orange staining / S.N. Sharma, B. Sambamurthi // Indian J.Exp.Biol. 1977.-V.15.-P.

138. Sharma, S.N. Studies on sheep- and goat-pox viruses. Relationship with CPD and vaccinia viruses / S.N. Sharma, M.R. Dhanda // Indian J. Anim. Sci. 1971. — Vol. 41. — P. 864-867.

139. Sheep pox and goat pox // OIE. Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals (mammals, birds and bees). 5th ed. - Paris, 2004.-P.211-220.

140. Sheep poxvirus identification by PCR in cell cultures / O. Mangana-Vougiouka, P. Markoulatos, G. Koptopoulos et al. // J. Virol. Methods. 1999. - Vol. 77, № 1.-P. 75-79.

141. Singh, A. Rai // Indian Vet. Med. J. 1991. - Vol. 15. - P. 245-250. 160.Singh, B. Virion polypeptides of sheep poxvirus / B. Singh, A. Rai // Indian Vet.

142. Med. J. 1991.-Vol. 15.-P. 239-244. 161.Smadel, J.F. Elementary bodies of vaccinia / J.F. Smadel, C.L. Hoagland //

143. Bacterid Reviews. 1942. - Vol. 6. - P. 79-110. 162.Solyom, F. A live attenuated virus vaccine against sheep pox / F. Solyom, L. Perenlei, J. Roith // Acta Vet. Acad. Sci. Hung. - 1980. - Vol. 28, № 4. - P. 389398.

144. Soman, J.P. Occurrence of malignant goat pox in Bihar and confirmation of the causal virus / J.P. Soman, R.P. Singh, G.J. Jha // Indian Vet. J. 1985. - Vol. 62. -P. 907.

145. Negi et al. // Indian J. Virol. 1986. - Vol. 2. - P. 202-221. 166.Subba Rao, M.V. Antigenic relationships among sheep pox, goat pox and CPD viruses / M.V. Subba Rao, B.S. Malik, S.N. Sharma // Acta Virol. - 1984. - Vol. 28.-P. 380-387.

146. Subba Rao, M.V. Application of electroimmunodiffusion test for detection of antigenic relationship between sheeppox and goatpox viruses / M.V. Subba Rao, B.S. Malik // Acta Virol. 1983. - Vol.27, № 2. - P. 177-179.

147. Tantawi, H.H. Laboratory characteristics of four strains of goatpox virus / H.H. Tantawi, M.M. Al-Falluji // Acta Virol. 1979. - Vol. 23. - P. 455-460.

148. The genome of sheeppox and goatpox viruses / E.R. Tulman, C.L. Afonso, Z. Lu et al. // J.Virol. 2002. - Vol. 76, № 12. - P.6054-6061.

149. The immunological relationship of the poxvirus group / M. Takahashi, S. Kameyama, S. Kato, J. Kamahora // Biken J. 1959. - Vol. 2. - P. 27-29.

150. Tiwari, A.K. Comparative efficacy of dot-ELISA and single radial haemolysis (SRH) test in detecting goat pox antigen / A.K. Tiwari, B.S. Negi // Indian Vet. J. 1996b.-Vol. 73.-P. 1017-1020.

151. Tiwari, A.K. Single radial haemolysis for the detection of goat pox virus antigen and antibody / A.K. Tiwari, B.S. Negi // Trop. Anim. Health Prod. 1996. -Vol.28, № 1.-P. 117-120.

152. Tiwari, A.K. Spot agglutination test for the rapid diagnosis of goat pox / A.K. Tiwari, T.V.S. Rao, B.S. Negi // Trop. Anim. Health Prod. 1996. - Vol.28. - P. 213-215.

153. Uppal, P.K. Serological reaction in sheep pox. 2. Agar gel diffusion test / P.K. Uppal, P.R. Nilakantan // Indian Vet. J. 1967. - V. 44. - P. 374-382.

154. Use of a recombinant antigen in an indirect ELISA for detection bovine antibody to capripoxvirus / V.M. Cam, R.P. Kitching, J.M. Hammond, P. Chand // J. Virol. Methods. 1994. - Vol. 49, № 3. - P.285-294.

155. Use of a recombinant antigen in an indirect ELISA for detecting bovine antibody to capripoxvirus / V.M. Cam, R.P. Kitching, J.M. Hammond et al. // J. of Virol. Methods. 1995. - Vol.53, № 2-3. - P. 273.

156. Veda, Y. A specific surface antigen induced by pox virus / Y. Veda, M. Ito, J. Tagaya // Virology. 1969. - Vol. 38. - P. 180-182.

157. Veterinary Virology / F. Fenner, E.P.J. Gibbs, F.A. Murphy et al.. London: Acad. Press, 1993.

158. Virus Taxonomy: Classification and Nomenclature of Virus. Sixth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses / F.A. Murphy, C.M. Fauquet, D.H.L. Bishop et al.. New York: Springer-Verlag, 1995. - P. 79-91.

159. Virus Taxonomy. Classification and Nomenclature of Viruses. Seventh Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses / Van M.H.V. Regenomortel, C.M. Fanguet, D.H.L. Bishop et al.. London: Academic Press, 2000.

160. Wang, S.H. Studies on attenuated goat pox virus vaccine. The manufacture of freeze-dried tissue culture goat pox modified virus vaccine / S.H. Wang, H.X. Jiang // Acta Vet. Zootechn. Sinica. 1988. - Vol. 19. - P. 279-284.

161. Wei, C.M. Methylated nucleotides block 5'-terminus of vaccinia virus mRNA / C.M. Wei, B. Moss // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1975. - Vol. 72. - P. 318-322.

162. Weintraub, S. Biogenesis of poxviruses: genetically controlled modifications of structural and functional components of the plasma membrane / S. Weintraub, S. Dales // Virology. 1974. - Vol. 60. - P. 96-127.

163. Wittek, R. Tandem repeats within the inverted terminal repetition of vaccinia virus DNA / R. Wittek, B. Moss // Cell. 1980. - Vol. 21. - P. 277-284.

164. Woodroofe, G.M. Serological relationships within the poxvirus group: an antigen common to all members of the group / G.M. Woodroofe, G. Fenner // Virology. -1962. Vol.16. - P. 334-341.

165. World Animal Health in 1997. / Reports on the Animal Health Status and Disease Control Methods and List A Disease Outbreaks. Statistics OIE. Paris, 1997.-P. 4.

166. Zaslavsky, V. Uncoating of vaccinia virus / V. Zaslavsky // J. Virol. 1985. -Vol. 55.-P. 352-356.