Молекулярно-генетический анализ и функционально значимые генетические мутации вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, доктор биологических наук Гребенникова, Татьяна Владимировна

• Гребенникова, Татьяна Владимировна
• доктор биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор биологических наук Гребенникова, Татьяна Владимировна

Введение

Актуальность темы.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна работы.

Практическая значимость.

Основные положения, выносимые на защиту.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Заболевание, вызываемое вирусом РРСС.

1.2 Таксономическая характеристика вируса РРСС.

1.3 Ультраструктура и морфогенез вируса РРСС.

1.3.1 Репликация вируса in vivo и in vitro.

1.3.2 Структура вириона вируса РРСС.

1.4 Геномная организация вируса РРСС.

1.5 Неструктурные белки вируса РРСС (белки репликативного комплекса).

1.5.1 Неструктурные белки, кодируемые ORF 1а.

1.5.2 Неструктурные белки, кодируемые ORF lb.

1.6 Основные структурные белки вируса РРСС.

1.6.1 Нуклеокапсидный (N) белок.

1.6.2 Основные оболочечные белки.

1.6.2.1 М белок.

1.6.2.2 Главный поверхностный гликопротеин (GP5).

1.6.3 Минорные структурные белки вируса РРСС.

1.6.3.1 Гликопротеин GP2.

1.6.3.2 Гликопротеин GP4.

1.6.3.3 Гликопротеин GP3.

1.7 Геномная изменчивость вируса РРСС.

1.7.1 Геномная изменчивость неструктурных белков.

1.7.2 Геномная изменчивость главных негликозилированных структурных бежов.

1.7.3 Геномная изменчивость главного оболочечного гликопротеина.

1.7.4 Геномная изменчивость минорных вирусных гликопротеинов.

1.8 Методы диагностики РРСС.

1.9 Методы специфической профилактики РРСС.

1.10 Применение методов обратной генетики для создания вирусов с новыми свойствами.

1.11 Изучение микроэлементных профилей металлов для характеристики физиологического состояния биологической системы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетический анализ и функционально значимые генетические мутации вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней»

Актуальность темы

Работа посвящена комплексному молекулярно-генетическому исследованию вируса, вызывающего репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС).

РРСС - инфекционное заболевание, которое обнаружено 1987 г. в Северной Каролине, США (Keffaber 1989) и Канаде (Dea S. et al. 1990). РРСС называли также загадочной болезнью свиней (mystery swine disease). В настоящее время РРСС является эндемичным заболеванием во многих, если не во всех странах с промышленным свиноводством (Goyal S. М. 1993). Практически все страны мира, включая Россию, США и страны Западной Европы, несут огромные экономические потери от этого респираторного и репродуктивного синдрома свиней.

Заболевание выражается множеством клинических проявлений, но двумя наиболее характерными являются патология органов дыхания и репродукции. Течение РРСС может сильно отличаться по проявлению признаков: от полного отсутствия клинической картины до выраженных признаков репродуктивных и респираторных нарушений. Респираторные расстройства, как правило, наиболее сильно выражены у поросят всех возрастов и проявляются в виде неспецифических лимфомононуклеарных пневмоний (Halbur P. G. et al. 1996b и др.). Нарушения репродуктивной функции наблюдаются, в основном, у ремонтных свинок и свиноматок, инфицированных во время супоросности (Christianson W. Т. et al. 1993; Mengeling W. L. et al. 1994). При этом наблюдаются аборты, рождение мертвых или ослабленных поросят (Christianson W. Т. et al. 1992; Terpstra С. et al. 1991), иногда гибель свиноматок (Zimmerman J. J. et al. 1997a). Считают, что в неблагополучных хозяйстьах РРСС способствует усилению других инфекционных заболеваний респираторного комплекса (Galina L. et al. 1994; Carvalho L. et al. 1995; Solano G. et al. 1995; Van Alstine W. G. et al. 1996).

Вирус PPCC относится к роду Arterivirus, семейству Arterividae, порядка Nidovirales (Cavanagh D. 1997). Предполагается, что вирус распространился из Канады в США. Происхождение вируса неизвестно. Различают два типа вируса РРСС: американский и европейский. Предполагают, что европейский и американский типы вируса имеют различные эволюционные истории, т.к. их геномы сильно различаются (Nelson Е. A. et al. 1993; Wensvoort G. et al. 1992).

Вирус PPCC проникает в клетки иммунной системы, главным образом, в макрофаги (Wensvoort G. et al. 1991; Voicu I. L. et al. 1994; Rossow K. D. et al. 1995; Rossow R. D. et al. 1996, Molitor T. W. et al. 1996). Быстрому распространению вируса способствует его длительная персистенция в организме зараженных животных (Benfield D. A. et al. 1997), его присутствие в сперме (Christopher-Hennings J. et al. 1995, Swenson S. L. et al. 1994), высокая контагиозность (Mengeling W. L. et al. 1998).

Из-за сходства клинических признаков PPCC с признаками заболеваний, вызываемых другими вирусными или бактериальными патогенами, для точной диагностики РРСС требуются специфические лабораторные методы. Серологические тесты включают иммуноферментный анализ, реакцию нейтрализации и непрямую реакцию иммунофлюоресценции (Yoon I. J. et al. 1992, Dea S. et al 2000, Witte S. B. et al. 2000). Вирус выявляют с использованием иммуногистохимического анализа, окрашивания при помощи флюоресцирующих антител, методом полимеразной цепной реакции и выделения вируса в культуре клеток (Paton D. L. et al. 1992, Suares P. et al. 1994, Christofer-Hennings J. et al 1995, Mengeling W. L. et al. 1995). Секвенирование генома вируса PPCC позволяет, с определенной степенью точности, определить родство между разными штаммами.

Для установления в хозяйствах стабильной ситуации относительно репродуктивного и респираторного синдрома свиней используют как частичную депопуляцию стада, так и его полную замену (в странах Европы и Америки), а также вакцинацию. Для специфической профилактики РРСС используются, в основном, живые и инактивированные вакцины (Б. Г. Орлянкин и др. 2000). В настоящее время разрабатываются субъединичные и ДНК-вакцины, проводятся активные исследования иммунного ответа животных. Тем не менее, эффективность применения вакцин на практике в условиях широкого распространения и длительной персистенции полевых штаммов вируса РРСС достоверно не подтверждена. В настоящее время не существует вакцины, которая эффективно защищала бы животных от заболевания. Более того, использование живых вакцин часто приводит к заболеванию животных из-за реверсии вакцинного штамма вируса к дикому типу (Smedegaar G. et al. 1997).

Таким образом, несмотря на значительный прогресс в изучении вируса, РРСС остается загадочной болезнью и в настоящее время. Роль иммунного ответа в патогенезе РРСС недостаточно изучена. Известно, что при контакте с вирусом у свиней вырабатываются вирус-специфические антитела (Gorcyca D. Е. et al. 1995; Gorcyca D. E. et al. 1996; Hesse R. A. et al. 1996, Mengeling et al. 1996). Предполагается также, что в определенных условиях выработка антител может усиливать фагоцитоз (antibody dependent enhancement, ADE) и увеличивать репликацию вируса (Christianson W. Т et al. 1993; Yoon K.-J. et al. 1996). Эти данные косвенно свидетельствуют о значительных антигенных вариациях среди циркулирующих вирусов РРСС. Вирус-нейтрализующие антитела появляются поздно, через 3-4 недели после инфицирования (Yoon K-J et al. 1995, Loemba H. D. et al. 1996, Ostrowski M. et.al. 2002). Известно, что гуморальный иммунный ответ организма на присутствие вируса РРСС не обеспечивает эффективной защиты.

Очевидно, что для создания эффективных средств профилактики данного заболевания необходимы фундаментальные исследования. В частности, необходимо подробное молекулярно-генетическое исследование этого патогена, выявление генетических детерминант вирулентности вируса РРСС. Для разработки стратегии профилактики РРСС требуется комплексное изучение инфекционного процесса, включая выяснение особенностей патогенеза и также подробное молекулярное исследование вирусных изолятов, циркулирующих на территории России и пограничных с ней государств.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа посвящена комплексному молекулярно-генетическому анализу вируса РРСС, в частности, выявлению функционально значимых генетических мутаций.

Целью работы было подробное молекулярно-генетическое исследование вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней и выявление детерминант вирулентности.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести исследование распространения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней на территории России и Белоруссии.

2. Разработать комплекс средств лабораторной диагностики РРСС, основанных на выявлении вируса и антител к нему:

- Разработать тест-системы для выявления вируса РРСС с использованием ОТ-ПЦР и ПЦР в реальном времени на основе отечественных реагентов;

- Разработать набор реагентов для определения антител к вирусу РРСС на основе непрямого ИФА с использованием рекомбинантных антигенов, полученных из отечественных изолятов вируса РРСС.

3. Провести широкие производственные испытания разработанных отечественных тест-систем для выявления вируса РРСС и специфических антител.

4. Провести подробные молекулярные исследования полевых изолятов, циркулирующих на территории России и Белоруссии, методом прямого секвенирования и филогенетического анализа гена, кодирующего белок нуклеокапсида вируса РРСС.

5. Провести сравнение in vivo свойств трех различных вариантов североамериканского штамма вируса РРСС NADC8: вирулентного штамма NADC8-2, аттенуированного варианта, полученного после 251 пассажа в культуре клеток - NADC8-251, а также промежуточного варианта, выделенного от свиньи после частичной реверсии аттенуированного вируса -NADC8-252P.

6. Определить полную первичную структуру геномов у трех штаммов вируса РРСС: вирулентного штамма NADC8-2, его аттенуированного мутанта, полученного пассированием в культуре клеток (NADC8-251), а также частично ревертировавшего вируса (NADC8-252P).

7. Провести сравнительный анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей вирулентного штамма NADC8-2, аттенуированного штамма NADC8-251 и частично ревертировавшего NADC8-252P и на основе проведенного анализа определить функционально значимые участки генома, потенциально ответственные за аттенуацию вируса, а также молекулярные детерминанты, связанные со свойствами вирулентности.

8. Разработать стратегию и осуществить конструирование системы обратной генетики для внесения целенаправленных генетических изменений в РНК-геном вирусов РРСС, основанной на библиотеке полноразмерных инфекционных копий генома аттенуированного штамма NADC8-251.

9. Получить рекомбинантные вирусы путем трансфекции перевиваемой культуры клеток in vitro, охарактеризовать их вирусологическими методами. Подтвердить генно-инженерное происхождение вируса определением первичной структуры его генома.

Научная новизна работы

До начала комплексных исследований (1997-1998 г.г.) не было сведений о распространении вируса РРСС на территории Российской Федерации и пограничных с ней государств. В рамках данной работы было проведено обследование свиноводческих хозяйств России и Белоруссии на наличие антител против вируса РРСС. Впервые было установлено широкое распространение вируса на территории этих государств. Проведен подробный молекулярный анализ первичной структуры геномов полевых изолятов вируса РРСС, выделенных на территории Российской Федерации и Белоруссии. Это позволило нам оценить степень вариабельности геномов вирусов, циркулирующих на данной территории, и разработать средства лабораторной диагностики РРСС. Были созданы и утверждены отечественные тест-системы для проведения комплексной лабораторной диагностики РРСС, основанные на выявлении компонентов вируса и антител к нему. Отечественных тест-систем до этого разработано не было.

Впервые были подробно исследованы молекулярные основы вирулентности и аттенуации вируса РРСС. На основании исследования полной первичной структуры геномов трех вариантов вируса РРСС: вирулентного штамма NADC8-2, аттенуированного варианта NADC8-251 и его ревертанта, образовавшегося в результате одного пассажа в организме свиньи NADC8-252P, обнаружены участки генома, которые могут играть роль в приобретении вирулентности вирусом РРСС. Впервые найдены генетические детерминанты вирулентности вируса РРСС.

Впервые создана библиотека полноразмерных инфекционных копий генома вируса РРСС, состоящая из 32 плазмид, для изучения фундаментальных генетических характеристик представителей рода Arterivirus методами обратной генетики. Полноразмерные копии генома аттенуированного штамма NADC8-251 вируса РРСС собраны и клонированы в E.coli. На основе полученных генноинженерных конструкций синтезированы РНК-геномы и получены рекомбинантные инфекционные вирусы с минимальными различиями в первичной структуре генома по сравнению с родительским штаммом NADC8-251. Создание библиотеки, а не единичной инфекционной копии вируса РРСС, позволило успешно преодолеть трудности, связанные с нестабильностью генома вируса РРСС. Таким образом, создана система обратной генетики, позволяющая проводить генетические манипуляции с вирусным РНК-геномом, что ранее было невозможно.

Впервые проведены исследования микроэлементного состава клеток MARC-145, инфицированных и не инфицированных вирусом РРСС, для определения воздействия вируса на биологическую систему. Определены специфические изменения микроэлементного профиля биологической системы.

Практическая значимость

Итогом проведенных исследований была разработка полного комплекса методов лабораторной диагностики РРСС на основе отечественных реагентов. Разработаны тест-системы для определения РНК вируса РРСС методами ПЦР и ПЦР в реальном времени. Разработан также набор реагентов для определения антител к вирусу РРСС методом ИФА. Тест-системы успешно прошли лабораторные испытания. Тест-система для определения РНК вируса РРСС методом ПЦР и набор реагентов для определения антител к вирусу РРСС методом ИФА получили все необходимые сертификационные документы и прошли широкомасштабные производственные испытания. Результаты испытаний позволяют рекомендовать разработанные тест-системы для использования в хозяйствах Российской Федерации и пограничных с ней государств. Тест-система для определения вируса РРСС методом ПЦР в реальном времени в настоящее время проходит комиссионные испытания. Полученные результаты позволяют надеяться на то, что данная тест-система будет использоваться для широкого мониторинга хозяйств на наличие вируса РРСС.

Наличие инфекционных копий вируса РРСС, полученных на основе библиотеки полноразмерных геномов, позволит вносить генетические изменения в вирусный РНК-геном и получать вирусы с новыми свойствами.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Подтверждение распространения вируса РРСС на территории России и Белоруссии, определением антител к вирусу на основе серологического анализа сывороток крови свиней.

2. Создание и характеристика комплекса новых средств лабораторной диагностики РРСС на основе отечественных реагентов: тест-систем для выявления вируса РРСС с использованием ОТ-ПЦР и ПЦР в реальном времени и набора реагентов для определения антител к вирусу РРСС на основе непрямого ИФА с использованием рекомбинантных антигенов.

3. Доказательство эффективности разработанных тест-систем для выявления вируса РРСС и антител к нему, полученных на основе отечественных реагентов в ходе масштабных производственных испытаний.

4. Оценка генетического разнообразия и генотипирование полевых изолятов вируса, циркулирующих на территории России и Белоруссии, и их филогенетический анализ.

5. Экспериментальное подтверждение степени вирулентности или аттенуации трех вариантов полевого изолята NADC8: высоковирулентного NADC8-2, аттенуированного вируса NADC8-251, а также вируса-ревертанта - NADC8-252P.

6. Сравнительный анализ трех полноразмерных геномов, включающий анализ генов вирусных белков и регуляторных последовательностей вирусов NADC8-2, NADC8-251 и NADC8-252P. Выявление потенциальных молекулярных детерминант, связанных со свойствами вирулентности вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней.

7. Создание библиотеки полноразмерных инфекционных копий генома аттенуированного штамма NADC8-251 для исследования функциональных участков вирусного генома методами обратной генетики.

8. Характеристика библиотеки инфекционных копий генома вируса РРСС и отбор рекомбинантного вируса РРСС со свойствами, приближенными к родительскому штамму NADC8-251.

Апробация результатов исследования

Материалы исследования доложены на заседаниях Ученого Совета ГУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского, Научно-технического совета НПО НАРВАК, на Международной научно-практической конференции РУДН, Москва, 2004 г., на 7-м международном симпозиуме по исследованию положительно-цепочечных РНК-содержащих вирусов, Сан-Франциско, США, 2004 г., на Всероссийском совещании-семинаре директоров ветеринарных лабораторий субъектов РФ, Брянск, 2004, на 82-й и 84-й конференциях по болезням животных (CRWAD), Сент-Луис и Чикаго, США, 2001 г. и 2003 г., на конференции ВНИИЖЗ, Владимир, 2003 г., на Международной научно-практической конференции по болезням животных, Покров, 2003 г., на 17-м международном конгрессе ветеринарных вирусологов, Эймс, Айова, США, 2002 г., на 20-й конференции Американского общества вирусологии, Мэдисон, Висконсин, США, 2001 г., на XVI Менделеевском съезде по общей и прикладной химии в Москве, 1998 г., на Симпозиуме МЭБ (OIE), Бирмингем, Великобритания, 1998 г., на международной конференции АТВ'92, Милан, Италия, 1992 г.

Благодарности

Автор приносит глубокую благодарность научному консультанту д.б.н. Е. А. Непоклонову, д.б.н. Т. И. Алиперу, д.б.н. А. Д. Забережному, проф. Б. Г. Орлянкину, заслуженному деятелю науки РСФСР, проф. В. С. Сергееву, д.б.н. Сыроешкину, проф. В. Менгелингу и д-ру К. JIarepy (NADC, Ames, USA) за разностороннюю научно-методическую помощь в работе. Автор приносит глубокую благодарность к.б.н. М. И. Мусиенко, к.б.н. В. В. Цибезову, В. С. Богдановой, В. В. Грабовецкому, О. В. Елисеевой, Н. И. Потаповой, А. В. Байбак, к.б.н. А. Н. Власовой и к.б.н. К. П. Алексееву, совместно с которыми были выполнены отдельные фрагменты представленной работы.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Загадочная болезнь свиней (mystery swine disease), болезнь синего уха -так в конце 80-х и начале 90-х называли репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС), вызываемый вирусом PRRSV (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus). Заболевание было впервые обнаружено в 1987 г. в Северной Каролине, США, после чего оно быстро распространилось по всей стране (Keffaber 1989; Loula 1991), в Канаде (Dea et al. 1990), Японии (Shimizu et al. 1994), Германии (Lindhaus and Lindhaus 1991), в Нидерландах (Wensvoort et al. 1991), Англии (White 1991), Франции и Испании, (Meredith 1992), Дании (Botner et al. 1994), в'других регионах мира (Meredith 1995). При анализе сывороток свиней из коллекций прошлых лет в Онтарио (Канада) обнаружили антитела к вирусу в образцах 1979 г. в 2 хозяйствах и в 1980 г. в 8 хозяйствах (Carman et al. 1995), а в Айове (США) антитела обнаружили, начиная с 1985 г. (Zimmerman et al. 1997). Это свидетельствует о циркуляции вируса в поголовье свиней задолго до официального установления болезни.

Существует гипотеза, что вирус распространился из Канады в США. Происхождение вируса неизвестно. Различают два типа вируса РРСС: американский и европейский. Предполагают, что европейские и североамериканские типы вируса имеют различные эволюционные истории, т.к. их геномы сильно различаются (Nelson et al. 1993; Wensvoort et al. 1992).

Вирус PPCC был выделен впервые в 1991 г. в Нидерландах (г. Лелистад) на культуре альвеолярных макрофагов поросят (PAMs). Выделенный штамм вируса получил название Lelystad (Wensvoort et al. 1991). В 1992 году в США вирус был выделен на перевиваемой линии клеток АТСС CL2621, производной от перевиваемой линии клеток почки обезьяны. (Benfield et.al. 1992; Collins et al. 1992).

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Гребенникова, Татьяна Владимировна

4. ВЫВОДЫ

1. Установлено широкое распространение вируса РРСС на территории России и Белоруссии. В 41 хозяйстве Российской Федерации антитела к вирусу РРСС были обнаружены в 79%. В 19 хозяйствах Белоруссии антитела к вирусу РРСС были найдены в 81 %.

2. Разработана и внедрена тест-система для обнаружения вируса РРСС американского и европейского генотипов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Диагностическая чувствительность тест-системы составляла 1-10 ТЦД50/ мл.

3. Подтверждена постоянная циркуляция вируса РРСС на территории России и Белоруссии в рамках широких производственных испытаний тест-системы для определения РНК вируса РРСС методом ПЦР в 2002-2004 г.г. В России из 41 исследованного района в 16-ти был обнаружен вирус РРСС у свиней различных возрастных групп. В Белоруссии в 10 из 19 районов был обнаружен вирус РРСС.

4. Разработана тест-система на основе ПЦР в реальном времени ("Realtime PCR") для определения РНК вируса РРСС. Показана принципиальная возможность количественного определения вируса РРСС в культурах клеток и материале от больных животных. Диагностическая чувствительность тест-системы составляла 1ТЦЦ50/ мл.

5. Вирусные изоляты, выделенные на территории России и Белоруссии, относятся к европейскому генотипу вируса и близки к вирусам, циркулирующим в Испании, согласно филогенетическим исследованиям с использованием гена белка нуклеокапсида вируса РРСС.

6. Показано, что рекомбинантные белки нуклеокапсида американского и европейского типов, полученные в эукариотической (бакуловирусной) и прокариотической (Е. coli) системах экспрессии могут быть использованы в качестве специфических компонентов диагностической тест-системы.

7. Разработан и внедрен набор реагентов для определения антител к вирусу РРСС на основе непрямого ИФА с использованием рекомбинантного белка нуклеокапсида, полученного в системе экспрессии Е. coli.

8. Исследование in vivo свойств полевого изолята вируса РРСС NADC8-2, аттенуированного вируса, полученного после 251 пассажа в культуре клеток - NADC8-251, а также промежуточного варианта, выделенного от свиньи после частичной реверсии аттенуированного вируса - NADC8-252P, на стандартной модели животных, показало, что три исследованных варианта штамма NADC8 вируса РРСС располагаются по степени вирулентности в следующем порядке (по убыванию): NADC8-2, NADC8-252p, NADC8-251.

9. Для выявления функционально значимых участков генома проведено сравнение первичной структуры геномов трех вариантов штамма вируса РРСС NADC8 размером 15453 нуклеотида. При сравнении геномов NADC8-2 и NADC8-251 обнаружено 50 нуклеотидных различий, 22 из которых не приводили к замене аминокислоты, и 3-нуклеотидная делеция. Геномы штаммов NADC8-251 и NADC8-252P отличались лишь в 8 позициях, при этом две из замен были молчащими. Выявлено 6 потенциальных генетических детерминант вирулентности вируса РРСС.

10. Создана и охарактеризована экспериментальная модель для изучения функционально значимых участков РНК-генома артеривирусов. Для этого сконструирована библиотека из 32 клонов полноразмерных копий геномов аттенуированного штамма NADC8-251 вируса РРСС под контролем промотора Т7 в плазмидном векторе E.coli на основе плазмиды pACYC177 с уникальным сайтом множественного клонирования. На основе полученных плазмид синтезированы инфекционные РНК-геномы штамма NADC8-251 вируса РРСС и получены инфекционные вирусы. Генно-инженерное происхождение вирусов подтверждено секвенированием.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований разработаны и предложены для практического использования:

1. Тест-система для обнаружения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Технические условия ТУ № 9388-00242418073-02

2. Наставление по применению тест-системы для обнаружения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Утверждено Департаментом Ветеринарии МСХ РФ 07. 10. 02, № 13-5-02/599

3. Набор реагентов для выявления антител к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС) иммуноферментным методом «РРСС-СЕРОТЕСТ». Технические условия ТУ № 9388-012-4241807304.

4. Наставление по применению набора реагентов для выявления антител к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС) иммуноферментным методом «РРСС-СЕРОТЕСТ». Утверждено Россельхознадзором 12. 18. 05 № 1-1.5/01446.

5. Тест-система для количественного обнаружения вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС) методом ПЦР в реальном времени. НД утверждена директором НПО НАРВАК и находится на межведомственных комиссионных испытаниях.

1. 12. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

Вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней был открыт сравнительно недавно (примерно 20 лет назад). Загадочная болезнь свиней (mystery swine disease), болезнь синего уха - так в конце 80-х и начале 90-х называли заболевание, вызываемое данным вирусом. Вирус РРСС был отнесен к семейству Arteriviridae рода Arterivirus, порядка Nidovirales.

В настоящее время хорошо изучено строение вириона вируса РРСС (Cavanagh D. 1997) и его геномная организация (Conzelmann К. К. et al. 1993, Meulenberg J. J. M. et al. 1993).

Изучение молекулярных и антигенных характеристик вируса РРСС позволило выделить два генотипа вируса РРСС: американский и европейский. В научной литературе генотипы вируса РРСС также называют подтипами. Геномы вируса РРСС европейского и североамериканского генотипа сильно различаются (50-80% гомологии на нуклеотидном уровне), поэтому существует гипотеза о том, они имеют различные эволюционные истории (Nelson et al. 1993; Wensvoort et al. 1992).

Вирус РРСС научились культивировать in vivo с использованием первичной культуры альвеолярных макрофагов поросенка (Wensvoort G. et all. 1991) и с использованием субклонов MARC-145 и CL2621 перевиваемой клеточной линии МА-104 обезьяньей почки (Bautista Е. М. et all. 1993, Benfield D. A. et all. 1992, Kim H. S. et all. 1993).

Подробные исследования как структурных, так и неструктурных белков вируса РРСС (эпитопное картирование, изучение антигенной вариабельности, исследования имунного ответа на различные протеины и т. д.) позволили получить знания о их структуре и функциях. Эти знания явились основополагающими в изучении молекулярной биологии данного вируса. Не до конца выяснена роль оболочечных гликопротеинов вируса РРСС в присоединении вируса к пермиссивным клеткам, вирусном патогенезе, апоптозе, феномене повышенной антительной зависимости, гуморального и клеточного иммунного ответа и защиты. В настоящее время ведется получение моноклональных антител к минорным структурным гликопротеинам и к конформационно зависимым эпитопам главного оболочечного гликопротеина для изучения биологических функций разных структурных компонентов вируса.

Изучение первичной структуры геномов аттенуированных и вирулентных штаммов вируса РРСС проводится в настоящее время для определения участков генома, отвечающих за вирулентность вируса РРСС (Nielsen HS et al. 2001, Grebennikova, T.V. et al. 2004).

Разработаны средства определения вируса РРСС молекулярными методами (Van Woensel et al. 1994; Kono et al. 1996; Spagnuolo-Weaver et al. 2000, Власова АН и др. 2003), а также определения антител к данному вирусу (Nelson ЕА et al. 1994, Mengeling WL. et al. 1995, Yoon K.- J. et al. 1995, Loemba HD., et al. 1996, Гребенникова Т. В. и др. 2004).

Однако, несмотря на обширные знания о возбудителе и заболевании, респираторный и репродуктивный синдром свиней остается загадочной болезнью свиней и в настоящее время. Как и двадцать лет назад, если вирус РРСС циркулирует в хозяйстве, от него невозможно избавиться. В настоящее время общепризнана следующая схема распространения вируса в хозяйствах. Вирус РРСС попадает в хозяйство, начинается заболевание. Через некоторое время происходит "адаптация" вируса РРСС, он постоянно циркулирует в хозяйстве. Следующую вспышку заболевания можно ожидать при заносе другого штамма вируса РРСС или после мутации существующего в хозяйстве вируса.

В нашей стране, в странах Европейского союза и в США данное заболевание наносит существенный экономический ущерб. В настоящее время не существует универсального эффективного средства профилактики РРСС. Для профилактики РРСС используют инактивированные и живые вакцины. Инактивированные вакцины могут быть использованы в хозяйствах, свободных от РРСС. Инактивированные вакцины могут быть использованы в составе многокомпонентных вакцин для профилактики инфекционных заболеваний свиней, поражающих органы респираторного тракта. Данные вакцины могут помочь в частичном контроле респираторных заболеваний в хозяйствах (Орлянкин Б. Г. 2000, 2004). Применение живых вакцин осложняется высокой вариабельностью вируса РРСС. Так в Дании в 1996 г. применение живой вакцины RespPRRS/Repro привело к заражению 40% свиней в результате реверсии вакцинного вируса к дикому типу (Smedegaar et al. 1997).

Трудности в создании эффективных средств профилактики данного заболевания обусловлены особенностями формирования иммунного ответа к РРСС. Вирус-нейтрализующие антитела появляются поздно, через 3-4 недели после инфицирования (Yoon K-J et al. 1995, Loemba HD et al. 1996, Ostrowski et.al. 2002). Известно, что гуморальный иммунный ответ организма на присутствие вируса РРСС не является эффективным. Ситуация осложняется высокой генетической изменчивостью данного вируса.

Очевидно, что для создания эффективных средств профилактики данного заболевания необходимы новые подходы. Одним из таких подходов является создание системы обратной генетики для вируса РРСС. В настоящее время разработаны инфекционные кДНК клоны для вируса РРСС (Meulenberg et.al. 1998; Grebennikova et.al. 2003; Nielsen et.al. 2003). С использованием полноразмерных копий вируса РРСС можно, с одной стороны исследовать факторы вирулентности и механизмы патогенности данных вирусов, а с другой стороны - конструировать вакцинные штаммы вируса РРСС с улучшенными антигенными характеристиками.

В качестве другого подхода предлагается рассмотреть воздействие вируса РРСС на биологические системы (клеточная культура, организм животного) для создания дополнительных средств профилактики РРСС. Было обнаружено, что при изучении содержания металлов (Al, Cr, Mn, Ni, Си, Zn, Cd, Pb) в бактериях (Bacillus subtillis, Mycobacteria tuberculosis, Rhodococcus ridichrous) растениях (Allium aflatuense) и у человека, вид микроэлементных профилей является видоспецифичным, и постоянным. Однако он зависит от физиологического состояния клетки/организма (Матвеева И. С. и др. 2003), и при попадании в организм патогена (вируса или бактерии) постоянство этого профиля нарушается. Следовательно, изучение микроэлементных профилей клеточных культур, инфицированных и не инфицированных вирусом РРСС, может помочь разработке микроэлементной композиции для дополнительной профилактики репродуктивного и респираторного синдрома свиней.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования

Клеточные линии.

Клеточные линии MARC-145 (субклон клеточной линии МА-104) ВНК-21 были любезно предоставлены Dr. W. Mengeling (Национальный институт болезней животных (NADC), США).

Рекомбинантные штаммы бакуловирусов выращивали на культуре клеток насекомых Spodoptera frugipedra (клеточные линии Sf-9, Sf-21). Клетки выращивали во флаконах, с использованием ростовой среды ТС-100 ("Life Technology", США), содержащей 10% сыворотки эмбрионов коровы (СЭК) и гентамицин в концентрации 50 ед./мл при 27°С. В качестве поддерживающей использовали среду ТС-100, содержащую 5% СЭК.

Для препаративного синтеза рекомбинантных антигенов использовали суспензионную или монослойную культуру клеток Sf-21, а также культуру клеток High-Five, адаптированную к росту в бессывороточной среде SF-900 ("Life Technology", США).

Полевые изоляты вируса РРСС

Одиннадцать полевых изолятов вируса РРСС были получены из различных регионов центральной России и Белоруссии в период 1992-2000 г. Один полевой изолят был получен из материала, отобранного в 1986 г. в Приморском крае. Изолят 1992 г., был выделен из биологического материала, полученного из центральной России проф. Б. Г. Орлянкиным. Полевые изоляты вируса РРСС были получены из легочных смывов поросят с подозрениями на РРСС. Из образцов легочных смывов проводили выделение вируса в культуре альвеолярных макрофагов и с использованием клеточной линии MARC-145. Клетки выращивали в 24-луночных планшетах, с использованием ростовой среды ЕМЕМ ("Life Technology", США), содержащей 10% эмбриональной сыворотки КРС (СЭК) и гентамицин в концентрации 0,05 мг/мл. В образцах, в которых наблюдали цитопатический эффект, отбирали культуральную среду и пассировали. Третий пассаж использовали для исследования на присутствие специфической РНК вируса РРСС. Проверку на присутствие других вирусов осуществляли методом ПНР.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Гребенникова, Татьяна Владимировна, 2005 год

1. Авцын А.П., Жаворонков А.А., Риш М.А., Строчкова JI.C. Микроэлементозы человека (этиология, классификация, органопатология)// М.: Медицина. -1991. С. 496.

2. Басоло Ф., Пирсон Р. Механизмы неорганических реакций. М.: Мир. -1971.-592 с.

3. Байбиков Т. 3., Гусев А. А., Яременко Н. А., Дудникова Н. С., Гаврилова В. Л., Кукушкин С. А., Курман И. Я., Ковалишин В. Ф., Рахманов А. М. Репродуктивно-респираторный синдром свиней. -Ветеринария. 2001. - № 3. - С. 18-24.

4. Болдырев А.А. Биологические мембраны и транспорт ионов. М.: Наука.- 1985.-С. 350.

5. Вернадский В.И. О химическом элементарном составе рясок (Lemna) как видовом признаке. ДАН СССР. - 1931. С. 148-152.

6. Вернадский В.И. Химическое строение биосферы Земли и ее окружения// М.: Наука. 1987. - С. 340.

7. П.Ершов Ю.А., Плетенева Т.В. "Механизмы токсического действия неорганических соединений"// М.: Медицина. 1989. - С. 272.

8. Забережный А. Д. Применение технологии рекомбинантных инфекционных геномов в изучении РНК-содержащих вирусов// Вопросы вирусологии

9. З.Ионы металлов в биологических системах. Амбивалентные свойства нуклеотидов/ Ред. X. Зигель. -М.: Мир. 1982. - С. 168.

10. Плетенева Т.В. Прогнозирование экологической опасности неорганических соединений по их физико-химическим свойствам: Автореф. дис. доктора химических наук. М., 1993. - С. 84.

11. Скальный А.В., Рудаков И.А. Биоэлементы в медицине.- М.: Издательский дом «ОНИКС 21 век»: Мир.- 2004. С. 272.

12. Сусликов В.П. Геохимическая экология болезней: В 4 т. Т.З. Атомовитозы. М.: Гелиос АРВ, 2002. - С. 546.

13. Туманова А.Л., Еременко А.И. Микроэлементозы и их влияние на возникновение и клинику диабетических, атеросклеротических и сосудистых нейроретинопатий Краснодар, 2002, 228 с. ISBN 5-22504166-3

14. Хьюз М. Неорганическая химия биологических процессов. М: Мир. -1983.- С. 414.

15. Adachi S, Takemoto K, Ohshima S, Shimizu Y, Takahama M. Metal concentrations in lung tissue of subjects suffering from lung cancer //Int Arch Occup Environ Health. 1991. -V. 63(3).-P.l93-197.

16. Ahl R, Pensaert M, Robertson IB, Terpstra C, van der Sande W, Walker KJ, White M, Meredith M. Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS or blue-eareddisease)// Vet Rec-1992.- V. 130.P 87-89.

17. Albina, E., Madee, F., Cariolet, R. and Torrison, J. Immune response and persistence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in infected pigs and farm units// Vet. Rec.- 1994. V. 134. - P. 567-573.

18. Andrasi E, Suhajda M, Saray I, Bezur L, Ernyei L, Reffy A. Concentration of elements in human brain: glioblastoma multiforme //Sci Total Environ. -1993.-№139- P.399-402.

19. Anke M., Groppel В., Kronemann H., Grun M. Nickel an essential element// IARC Sci. Publ. - 1984. - V. 53. - V. 339-365.

20. Andreyev VG, Scherbakov AG, Pylnov VA, Gusev AA Genetic heterogenesity of PRRSV in Russia// Proceedings of the International Symposium on PRRS andAujeszky's Disease. 1999. - Ploufragan, France, June 21-24. - P. 211-212.

21. Anke M., Groppel В., Kronemann H., Grun M. Nickel an essential element// IARC Sci. Publ. - 1984. - V. 53. - V. 339-365.

22. Appanna V.D., Hamel R. Aluminum detoxication mechanism in Pseudomonas fluorescens is dependent on iron// FEMS Microbiol. Lett. -1996. V. 143. - No. (2-3). - P. 223-228.

23. Bal W, Kasprzak KS. Induction of oxidative DNA damage by carcinogenic metals //Toxicol Lett. 2002. - №28. - P.55-62

24. Bargellini A., Piccinini L., De Palma M., Giacobazzi P., Scaltriti S., Mariano M., Roncaglia R., Borella P. Trace elements, anxiety and immune parameters in patients affected by cancer// Trace Elem. Med. Biol. 2003. -V. 17. - Suppl. l.-P. 3-9.

25. Baron T, Albina E, Leforban Y, Madec F, Guilmoto H, Plana Duran J, Vannier P Report on the first outbreak of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) in France. Diagnosis and viral isolation// Ann Rech Vet. 1992. - V. 23. - P. 161-166.

26. Baron, M.D., and Barrett, T.1997. Rescue of rinderpest virus from cloned cDNA. J. Virol/7 U 1265-1271.

27. Bassett S.E., Di Bisceglie A.M., Bacon B.R., Sharp R.M., Govindarajan S., Hubbard G.B., Brasky K.M., Lanford R.E. Effects of iron loading on pathogenicity in hepatitis С virus-infected chimpanzees// Hepatology. -1999. -V. 29. No 6. P. 1884-1892.

28. Bautista EM, Molitor TW Cell-mediated immunity to porcine reproductive andrespiratory syndrome virus in swine// Viral Immunol. 1997. - V. 10. -P. 83-94.

29. Bautista EM, Meulenberg JJM, Choi CS, Molitor TW Structural polypeptidesof the American (VR-2332) strain of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus// Arch Virol. 1996. - V.141. -N.l.-P. 357-365.

30. Bautista EM, Suarez P, Molitor TW T ell responses to the structural polypeptides of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Arch Virol.- 1999.-V. 144.-P. 117-134.

31. Beck M.A. The influence of antioxidant nutrients on viral infection// Nutr Rev. 1998. - V. 56. - No 1. - Pt 2. - P. S140-S146.

32. Belak, S. and Thoren, P. Molecular diagnosis of animal diseases: some experience of the past decade// Expert Rev. Mol. Diagn. 2001. - V. 1. N.4. -P. 89-98.

33. Beliakova T.M., Guseinov A.N., Ponarina M.V. Ecologic aspects of thecirculation of carcinogenic PAH and heavy metals in the geochemical landscapes of the Ural River basin //Eksp Onkol. 1988. - №10(6). - P.62-66.

34. Beyer, J., Fichtner, D., Schirrmeier, H., Polster, U., Weiland, E. and Wege, H. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV): kinetics of infection in Lymphatic organs and lungs// J. Vet. Med. 2000. - V. 47. -P. 9-25.

35. Bilodeau R, Dea S, M artineau GP, Sauvageau R Porcine reproductive and respiratory syndrome in Quebec// Vet Rec. 1991. - V. 129. - P. 102103.

36. Botner, A., Strandbygaard, В., Sorensen, K.J., Have, P., Madsen, K.G., Madsen E.S., Alexandersen, S. Appearance of acute PRRS-like symptoms in sow herds after vaccination with a modified live PRRS vaccine// Vet Rec. -1997.-V. 141.-P. 497-499.

37. Boyer, J.C., Haenni, A.L. Infectious transcripts and cDNA clones of RNA viruses//Virology. 1994. - V. 198. P. 415-426.

38. Bridgen, A., and Elliott, R.M.1996. Rescue of a stgmented negative-strand RNA virus entirely from cloned complementary DNAs// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. -P. 15400-15404.

39. Butt T.R., Sternberg E.J., Gorman J.A., Clark P., Hamer D., Rosenberg M., Crooke S.T. Cooper metallothionein of yeast, structure of the gene, and regulation of expression// Proc. Natl. Acad. Sci. 1984. - V. 81. - P. 33323336.

40. Clarke, D.K., Sidhu, M.S., Johnson, J.E.,and Udem, S.2000. Rescue of mumps virus from cDNA . J. Virol.74, 4831-4838.

41. Carlson J. Encephalomyocarditis virus (EMCV) as a cause of reproductive and respiratory disease in swine// American Association of Swine Practitioners Newsletter. 1992. - V. 4. - P. 23.

42. Carpenter D.O., Matthews M.R., Parsons P.J., Hori N. Long-term potentiation in the piriform cortex is blocked by lead// Cell. Mol. Neurobiol. 1994. - V. 14. -No. 6. - P. 723-733.

43. Carvalho, L., Segales, J., and Pijoan, C. 1995. Effect of PRRSV on subsequent Pasteurella multocida challenge in pigs. Proc 2nd Int Symposium on Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Copenhagen, Denmark p. 20.

44. Castrucci, M.R., and Kawaoka, Y. Reverse genetics system for generation of an influenza A virus mutant containing a deletion of the carboxyl-terminal residue of M2 protein// J. Virol. 1995. - V. 69. - P. 2725-2728.

45. Cavanagh, D. Nidovirales: a new order comprising Coronaviridae and Arteriviridae.il Arch. Virol. 1997. - V. 142. - P. 629-633.

46. Chan S., Gerson В., Subramaniam S. The role of copper, molybdenum, selenium, and zinc in nutrition and health// Clin. Lab. Med. 1998. - V. -18.-No. 4.-P. 673-685

47. Cheng L, Liu S, Dixon K. Analysis of repair and mutagenesis of chromium-induced DNA damage in yeast, mammalian cells, and transgenic mice// Environ. Health Perspect. 1998.-V. 106.-P. 1027-1032.

48. Christianson W. Т., Collins J. E., Benfield D. A., Harris L., Gorcyca D.E., Chladek D.W., Morrison R.B., Joo H.S. Experimental reproduction of swine infertility and respiratory syndrome in pregnant sows// Am J Vet Res. 1992. - V. 53. - P. 485—488.

49. Christianson, W.T., Choi, C.S., Collins, J.E., Molitor, T.W., Morrison, R.B., and Joo, H.S. Pathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in mid-gestation sows and fetuses. //-1993. Can J Vet Res. - V. 57. - P. 262-268.

50. Choi C, Kim J, Kang IJ, Chae C. Concurrent outbreak of PMWS and PDNS in a herd of pigs in Korea//Vet Rec. 2002. - V. 151.-N. 16.-P. 484-5.

51. Chou H.Y., Peng T.Y., Chang S.J., Hsu Y.L., Wu J.L. Effect of heavy metal stressors and salinity shock on the susceptibility of grouper (Epinephelus sp.) to infectious pancreatic necrosis virus// Virus Res. 1999. V. 63. No 1-2.-P. 121-129.

52. Conzelmann, K.K., Visser, N., Van Woensel, P., Thiel, H.J. Molecular characterization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, a member of the Arterivirus group// Virology. 1993. - V. 193. - P. 329-339.

53. Cornaglia E, Wilson L, Laganiere L, Lallier R, Dea S. PRRS serological monitoring : a new competitive ELISA. Proceedings of the International Symposium on PRRS and Aujeszky's Disease// Ploufragan, France. -1999. June 21-24. - P. 137-138.

54. Coutelier JP, Van Snick J Neutralization and sensitization of lactate dehydrogenase-elevating virus with monoclonal antibodies// J Gen Virol. 1988. - V. 69. - P. 2097-2100.

55. Damelin L.H., Vokes S., Whitcutt J.M., Damelin S.B., Alexander J.J. Hormesis: a stress response in cells exposed to low levels of heavy metals// Hum. Exp. Toxicol. 2000. - V. 19. - No. 7. - P. 420-430.

56. Da Silva E.M., Soares A.M., Moreno A.J. The use of the mitochondrial transmembrane electric potential as an effective biosensor in ecotoxicological research// Chemosphere. 1998. - V. 36. - No. 10. - P. 2375-2390.

57. Davis M.A, Murphy J.F., Boyd R.S. Nickel increases susceptibility of a nickel hyperaccumulator to Turnip mosaic virus// J. Environ. Qual. 2001. -V.30.-No l.-P. 85-90.

58. Dea S, Bilodeau R, Athanassious R, Sauvageau R, Martineau GP Swine reproductive and respiratory syndrome virus in Quebec: isolation of an enveloped virus serologically-related to Lelystad virus// Can Vet J. -1992.-V. 33.-P. 801-808.

59. Dea S, Sawyer N, Alain R, Athanassious R Ultrastructural characteristics and morphogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus propagated in the highly permissive MARC-145 cell clone// Adv

60. Exp Med Biol. 1995. - V. 380. - P. 95-98.

61. Denac H, Moser C, Tratschin JD, Hofmann MA An indirect ELISA for the detection of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome virus using recombinant nucleocapsid protein as antigen// J Virol Methods. 1997.-V. 65.-P. 169-181.

62. De Vries AAF, Chirnside ED, Bredenbeek PJ, Gravestein LA, Horzinek MC, Spann WJ.M All subgenomic mRNAs of equine arteritis virus contain a common leader sequence// Nucleic Acids Res. 1990. -V. 18. -N. 3.-P. 241-3 247.

63. De Vries AAF, Chirnside ED, Horzinek MC, Rottier PJM Structural proteins of equine arteritis virus// J Virol. 1992. - V. 66. - P. 6294-6303.

64. De Vries AAF, Post SM, Raamsman MJB, Horzinek MC, Rottier PJM The two major envelope proteins of equine arteritis virus associate into disulfide-Hnked heterodimers// J Virol. 1995. - V. 69. - P. 4668-4674.

65. De Vries AAF, Raamsman MJ, van Dijk HA, Horzinek MC, Rottier PJM The small envelope glycoprotein (Gs) of equine arteritis virus folds into three distinct monomers and a disulfide-linked dimmer// J Virol. 1995. -V. 69.-P. 3441-3448.

66. De Vries AAF, Horzinek MC, Rottier PJM, de Groot RJ The genome organization of Nidovirales: Similarities and differences between Arteri-, Того-, and Coronaviruses// Semin Virol. 1997. - V. 8. - P. 33-47.

67. Den Boon JA, Snijder EJ, Chirnside EDS, de Vries AAF, Horzinek MC,

68. Spaan WJM Equine arteritis virus is not a Togavirus but belongs to the Coronavims-like superfamily//J Virol. 1991. -V. 65. - P. 2910-2920.

69. Dixon N.E., Gazzola T.C., Blakeley R.L., Zermer B. Jack bean urease (EC 3.5.1.5). A metalloenzyme. A simple biological rolefor nickel?// J. Am. Chem. Soc. 1975. -V. 97. -No. 14. -P. 4131-4133.

70. Domingo E. RNA virus evolution, population dynamics, and nutritional status// Biol. Trace Elem. Res. 1997. - V. 56. - No 1. - P. 23-30.

71. Dominguez M.C., Sole E., Goni C., Ballabriga A. Effect of aluminum and lead salts on lipid peroxidation and cell survival in human skin fibroblasts// Biol. Trace Elem. Res. 1995. - V. 47. - No. (1-3). - P. 57-67.

72. Drew, T. W., Meulenberg, J. J. M., Sands J. J., Paton D. Production, characterization and reactivity of monoclonal antibodies to porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J. Gen. Virol. 1995. - V. 76. - P. 1361-1369.

73. OO.Drewitt PN, Butterworth KR, Springall CD, Moorhouse SR. Plasma levels of aluminium after tea ingestion in healthy volunteers //Food Chem Toxicol. 1993.-№31(1).-P.19-23.

74. Drew T. W., Lowing J. P., Yapp F. Variation in open reading frames 3,4 and 7 among porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in UK// Vet. Microbiol.- 1997. V.55. - P. 209-221.

75. Egli, C., Thur, В., Liu, L. and Hofmann, A. Quantitive TaqMan(RT-PCR for detection and differentiation of European and North American strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J. Virol. Meth. -2001.-V. 98.-P. 63-75.

76. Ermolli M., Menne C., Pozzi G., Serra M.A., Clerici L.A. Nickel, cobalt and chromium-induced cytotoxicity and intracellular accumulation in human hacat keratinocytes// Toxicology. 2001. - V. 159. - No (1-2). - P. 23-31.

77. Ezaki В., Sivaguru M., Ezaki Y., Matsumoto H., Gardner R.C. Acquisition of aluminum tolerance in Saccharomyces cerevisiae by expression of the BCB or NtGDIl gene derived from plants// FEMS Microbiol. Lett. 1999. -V. 171.-No. 2.-P. 81-87.

78. Faaberg KS, Even C, Palmer GA, Plagemann PJW Disulfide bonds betweentwo envelope proteins of lactate dehydrogenase-elevating virus are essential for viralinfectivity// J Virol V. 1995. - V. 69. - P. 613-617.

79. Faaberg KS, Plagemann PJW ORF3 of lactate dehydrogenase-elevating virus encodes a soluble, nonstructural, highly glycosylated and antigenic protein//Virology. 1997.-V. 227. P. 245-251.

80. Fields Virology, 4th edition. Eds: D.M. Knipe, P.M.Howley. Acad.Press, 2002.

81. Fodor, E., Devenish, L., Engelhardt, O.G., Palese, P., Brownlee, G.G., and Garcia-Sastre, A. Resuce of influenza A virus from recombinant DNA// J. Virol. 1999. - V. 73. - P. 9679-9682.

82. Gagnon CA, Dea S Differentiation between porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates by restriction fragments length polymorphism of their ORFs 6 and 7 genes// Can J Vet Res. 1998. - V. 62. - P. 110-116.

83. Gassen, U., Collins, F. M., Duprex, W. P., and Rima, В. K. Establishment of a rescue system for canine distemper virus// J.Virol. 2000. - V. 14. - P. 10737-10744.

84. Glaser AL, de Vries AAF, Dubovi EJ Comparison of equine arteritis virus isolates using neutralizing monoclonal antibodies and identification of sequence changes in Gl associated with neutralization resistance// J

85. Gen Virol. 1995. - V. 76. - P. 2 223-2 233.

86. Godeny EK, Chen L, Kumar SN, Methven SL, Koonin EV, Brinton MA Complete genomic sequence and phylogenetic analysis of the lactate-dehydrogenase-elevating virus (LDV)// Virology. 1993. -V. 194. - P. 585-596.

87. Goldberg R.L., Kaplan S.R., Fuller G.C. Effect of heavy metals on human rheumatoid synovial cell proliferation and collagen synthesis// Biochem. Pharmacol. 1983. - V. 32. - No. 18. - P. 2763-2766.

88. Goldberg, T. L., Weigel, R. M., Hahn, E. C. and Schreba, G. Association between genetic, farm characteristics and clinical disease in field outbreaks of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Prev. Vet. Med.-2000.-V. 43.-P. 293-302.

89. Gonin P, Mardassi H, Gagnon CA, Massie B, Dea S A nonstructural and antigenic glycoprotein is encoded by ORF3 of the IAF-Klop strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Arch Virol. 1998. -V. 143.-P. 1927-1940.

90. Gonin P, Pirzadeh B, Gagnon CA, Dea S Seroneutralization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus correlates with antibody response to the GP5 major envelope glycoprotein// J Vet Diagn Invest. -1999.-V. 11.-P. 20-26.

91. Gorcyca, D., Schlesinger, K., Chladek, D., Behan, W., Poison, D., Roof, M., and Doitchenoff, D. 1995. RespPRRS: A new tool for the prevention and control of PRRS in pigs. Proc 26th Annual Meeting Am Assoc Swine Practitioners pp. 1-22.

92. Goyal SM Porcine reproductive and respiratory syndrome// J Vet Diagn Invest. 1993. - V. 5. - P. 656-664.

93. Granero S., Domingo J.L. Levels of metals in soils of Alcala de Henares, Spain: human health risks //Environ Int. 2002. - №28(3). - P.l59-164.

94. Graske A., Thuvander A., Johannisson A., Gadhasson I., Schutz A., Festin R., Wicklund G.A. Influence of aluminium on the immune system an experimental study on volunteers// Biometals. - 2000. - V. 13. - N. 2. - P. 123-133.

95. Grebennikova, T.V., Clouser, D.F., Vorwald, A.C., Musienko, M.I.,

96. Gruca S., Wisniewski H.M. Cytochemical study on the effect of aluminum on neuronal Golgi apparatus and lysosomes// Acta Neuropathol. 1984. -V. 63.-No. 4.-P. 287-295.

97. Halbur PG, Paul PS, Janke ВН. Viral contributors to the porcine respiratory disease complex// In proceedings of the 24th Annual Meeting of the American association of Swine practitioners. 1993. - Kansas city, Missouri, USA. - P. 343-350.

98. Hart B.A., Gong Q., Eneman J.D., Durieux-Lu C.C. In vivo expression ofmetallothionein in rat alveolar macrophages and type II epithelial cells following repeated cadmium aerosol exposures// Toxicol. Appl. Pharmacol. 1995. - V. 133.-No. l.-P. 82-90.

99. Hartwig A., Beyersmann D. Comutagenicity and inhibition of DNA repair by metal ions in mammalian cells// Biol. Trace Elem. Res. 1989. - V. 21. -P. 359-365.

100. Hesse, R.A., Couture, L.P., Lau, M.L., Dimmick, S.K., and Ellsworth, S.R. Efficacy of Prime Рас PRRS in controlling PRRS reproductive disease: Homologous challenge. // Proc 27th Annual Meeting Am Assoc Swine Practitioners. 1996. - P. 103-105.

101. Hesse, R.A., Couture, L.P., Lau, M.L., Wunder, K.K., and Wasmoen, T.L. Efficacy of Prime Рас PRRS in controlling PRRS reproductive disease: Heterologous challenge. // Proc 27th Annual Meeting Am Assoc Swine Practitioners. 1996. - P. 107-110.

102. Hoffmann, E., Neumann, G., Kawaoka, Y, Hobom, G., and Webster, R. G. A DNA transfection system for generation of influenza A virus from eight plasmids// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97. - P. 6108-6113.

103. Horter, D. C., Pogranichniy, R. M., Chang, C.-C., Evans, R. В., Yoon, K.-J. and Zimmerman, J. J. Characterisation of carrier state in porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection// Vet. Microbiol. -2002.-V. 86.-P. 213-228.

104. Hurley L.S., Keen C.L., Baly D.L. Manganese deficiency and toxicity: effects on carbohydrate metabolism in the rat// Neurotoxicol. 1984. - V.5. -No. l.-P. 97-104.

105. Jungwirth A., Paulmichl M., Lang F. Cadmium enhances potassium conductance in cultured renal epitheloid (MDCK)cells// Kidney Int. 1990. -V. 37.-No. 6.-P. 1477-1486

106. Kalkan A, Bulut V, Avci S, Celik I, Bingol NK. Trace elements in viral hepatitis// J. Trace Elem. Med. Biol. 2002. - V. 16. - No 4. - P. 227-230.

107. Kapur V., Elman M. R., Pawlovich Т. M., Murtaugh M. P. Genetic variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in the Midwestern United State// J. Gen. Virol. 1996. - V. 77. - P. 1271-1276.

108. Karul A.B., Karadag F., Yensel N., Altinisik M., Altun C., Cildag O. Should chronic obstructive pulmonary disease outpatients be routinely evaluated for trace elements?// Biol. Trace Elem. Res. 2003. - V. 94. No 1. P. 41-48.

109. Keffaber KK. Reproductive failure of unknown etiology// ASSP Newsletter . 1989. - V. 1. - P. 1 -9.

110. Kim, H.S., Kwang, J., Yoon, I.J., Joo, H.S., Frey, M.L. Enhanced replication of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in a homogenous subpopulation of MA-104 cell line// Arch. Virol. 1993. -V. 133.-P. 477-483.

111. Kim J, Choi C, Chae C. Pathogenesis of postweaning multisystemicwasting syndrome reproduced by co-infection with Korean isolates of porcine circovirus 2 and porcine parvovirus// J Comp Pathol. 2003. - V. 128. -N.l.-P. 52-59.

112. Kitasato N. Comparative test for cytotoxicity of hexavalent and trivalent chromium in primary cultures of hepatocytes// Arch. Exp. Med. 1989. - V. 62.-No. 1. — P.53-57.

113. Kono, Y., Kanno, Т., Shimizu, M., Yamada, S., Ohashi, S., Nakamine, M. and Shirai, J. Nested PCR for detection and typing of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus in pigs// J. Vet. Met. Sci. 1996. -V.58.-N 10.-P. 941-946.

114. Kostitsyn Yu.A. Sources of Rare Metals in Peraluminous Granites: A Review of Geochemical and Isotopic Data //Geochemistry International (Geokhimiya). 2001. - Vol. 39, Suppl. 1 -P.43.

115. Kozlovskii A.G., Zhelifonova V.P., Vinokurova N.G., Ozerskaia S.M. Effect on microelements on biosynthes of secondary metabolites in the fungus Penicillium citrinum Thom VKM F-1079 // Mikrobiologiia. 2000. -№ 69(5). - P.642-646.

116. Kreutz LC, Mengeling WL Baculovirus expression and immunological detection of the major structural proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Vet Microbiol. 1997. - V. 59. - P. 1-13.

117. Kwang J, Kim HS, Joo HS Cloning, expression, and sequence analysis of the ORF4 gene of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus

118. MN-lb// J Vet Diagn Invest. 1994. - V. 6. - P. 293-296.

119. Lager, K.M., Mengeling, W.L., Brockmeier, S.L. Homologous challenge of porcine reproductive and respiratory syndrome virus immunity in pregnant swine// Vet. Microbiol. 1997. - V 58. - P.l 13-125.

120. Lager, K.M., Butler, J.E. Midgestation fetal PRRSV infection did not induce an immunotolerant state// In Proc 17th Int Pig Vet Society, Ames, Iowa, USA. 2002. - V. 1. - P. 273.

121. Lai, c. J., B. Zhao, H. Hori, and M. Bray. Infectious RNA transcribed from stably cloned full-length cDNA of dengue type 4 virus// Proc.Natl. acad. Sci USA. 1991. - V. 88. -P. 5139-5143.

122. Loemba HD, Mounir S, Mardassi H, Archambault D, Dea S Kinetics of humoral immune response to the major structural proteins of the procine reproductive and respiratory syndrome virus// Arch Virol. 1996. - V. 141.-P. 751-761.

123. Loula, T. Mystery pig disease// Agry practice. 1991. - v. 12. - P. 23-34.

124. Le Gall, A., Legeay, O., Bourhy, H., Arnauld, C., Albina, E., Jestin, A. Molecular variation in the nucleoprotein gene (ORF 7) of the porcinereproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)// Virus Res.- 1998. -V. 54.-P. 9-21.

125. Li K, Chen Z, Plagemann PGW The neutralization epitope of lactate dehydrogenase-elevating virus is located on the short ectodomain of the primary envelope glycoprotein// Virology. 1998. - V. 242. - P. 239-245.

126. Liu YT, Chen Z. A retrospective lung cancer mortality study of people exposed to insoluble arsenic and radon //Lung Cancer. 1996. - №14 (Suppl 1). - P.137-148.

127. Liu J., Kershaw W.C., Klaassen C.D. The protective effect of metalllothionein on the toxicity of various metals in primary hepatocyte culture// Toxil. Appl. Pharmacol. 1991. - V. 107. - P. 27-34.

128. Loemba HD, Mounir S, Mardassi H, Archambault D, Dea S Kinetics of humoral immune response to the major structural proteins of the procine reproductive and respiratory syndrome virus// Arch Virol. 1996. - V. 141.-P. 751-761.

129. Magar R, Larochelle R, Nelson EA, Charreyre С Differential reactivity of a monoclonal antibody to the membrane protein of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Can J Vet Res. 1997. - V. 61. - P. 6971.

130. Mardassi H, Mounir S, Dea S. Identification of major differences in the nucleocapsid protein genes of a Quebec strain and European strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J Gen Virol.1994.-V. 75.-P. 681-685.

131. Mardassi, H., Mounir, S., Dea, S. Molecular analysis of the ORFs 3 to 7 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus, Quebec reference strain//Arch. Virol.- 1995.-V. 140.-P. 1405-1418.

132. Mardassi H, Massie B, Dea S Intracellular synthesis, processing, and transport of proteins encoded by ORFs 5 to 7 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Virology. 1996. - V. 221. - P. 98-112.

133. Meng X-J, Paul PS, Halbur PG, Morozov I Sequence comparison of open reading frame 2 to 5 of low and high virulence United States isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J Gen Virol .1995.-V. 76.-P. 3181-3188.

134. Meng X-J, Paul PS, Morosov I, Halbur PG A nested set of six or seven subge-nomic mRNAs is formed in cells infected with different isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J Gen Virol. 1996. -V. 77.-P. 1265-1270.

135. Meng, X. J. Heterogeneity of porcine reproductive and respiratory syndrome virus: implication for current vaccine efficacy and future vaccine development// Vet. Microbiol. 2000. - 74. - P. 309-329.

136. Mengeling WL, Vorwald AC, Lager KM, Brockmeier SL Diagnosis of porcine reproductive and respiratory syndrome// J Vet Diagn Invest . -1995.-V. 7.-P. 3-16.

137. Mengeling, W.L., Vorwald, A.C., Lager, K.M., Brockmeier, S.L. Comparison among strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus for their ability to cause reproductive failure// Am. J. Vet. Res. 1996. -V. 57.-P. 834-839

138. Mengeling, W.L., Lager, K.M., and Vorwald, A.C. An overview on vaccination for porcine reproductive and respiratory syndrome. // Proc 23rd Allen D. Leman Swine Conf. -1996. P. 139-142.

139. Mengeling, W.L., Lager, K.M., Vorwald, A.C., Koehler, K.J. Strain specificity of the immune response of pigs following vaccination with various strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Vet.

140. Microbiol.-2003.-V. 93.-P. 13-24.

141. Meulenberg JJM, De Meijer EJ, Moormann RJM Subgenomic RNAs of Lelystad virus contain a conserved leader-body junction sequence// J Gen Virol.-1993.-V. 74. P. 1697-1701.

142. Meulenberg J. J. M., Petersen-den Besten, A., de Kluyver, E. P., Moormann R. J. M., and Wensvoort, G. Characterization of proteins encoded by ORF2 to 7 of Lelystad virus// Virology. 1995. - P. 206:155163.

143. Meulenberg JJM, van Nieuwstadt AP,van Essen-Zandbergen A, Langeveld JPM Post-translational processing and identification of a neutralization domain of the GP4 protein encoded by 0RF4 of Lelystad virus// J Virol. 1997. - V. 71. - P. 6061-6067.

144. Meulenberg JJM, Petersen-Den Besten A, De Kluyver E, van Nieuwstadt A, Wensvoort G, Moormann RJM Molecular characterization of Lelystad virus// Vet Microbiol.- 1997.-P. 55. P.197-202.

145. Meulenberg JJM , Bos-de-Ruijter R, van de Graaf R, Wensvoort G, Moormann RJM Infectious transcripts from cloned genomic-length cDNA of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J Virol. 1998. -V. 72.-P. 380-387.

146. Molitor T.W., Xiao J., and Choi C.S. 1996. PRRS virus infection of macrophages: regulation by maturation and activation state. Proc 27th Annual Meeting Am Assoc Swine Practitioners pp. 563-569.

147. Morozov I, Meng XJ, Paul PS Sequence analysis of open reading frames (ORFs) 2 to 4 of a US isolate of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// ArchVirol. 1995.- V. 140. - V. 1313-1319.

148. Moormann R. J. M., Van Gennip H. G. P., Miedema G. K. W., Hulst M. M., Van Rijn P. A. Infection RNA transcribed from an engineered full-length cDNA template of the genome of a pestivirus// J. Virol.- 1996. V. 70.-P. 763-770.

149. Murtaugh, M. P., Elam, M.R., Kakach, L.T., 1995. Comparizon of the structural protein coding sequences of the VR-2332 and Lelystad virus strains of the PRRS virus.// Arch. Virol. 1995. - V. 140.-P. 1451-1460.

150. Nelsen С J, Murtaugh MP, Faaberg К Porcine reproductive and respiratory syndrome virus comparison; divergent evolution on two continents//J Virol. 1999. - V. 73. - P. 270-280.

151. Nelson, E.A., Christopher-Hennings, J., Drew, Т., Wensvoort, G., Collins,

152. J.E., Benfield, D.A. Differentiation of US and European Isolates of porcine reproductive and respiratory syndrome virus by monoclonal antibodies// J. Clin. Microbiol. 1993. - V. 31. - P. 3184-3189.

153. Nelson EA, Christopher-Hennings JT, Benfield DA Serum immune responses to the proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus// J Vet Diagn Invest. 1994. - V. 6. - P. 410-415.

154. Nemery B. Metal toxicity and the respiratory tract //Eur Respir J. 1990.-V. 3(2). -P.202-219.

155. Nielsen, H.S., Oleksiewicz M.B., Forsberg R., Stadejek Т., Botner A., Storgaard T. Reversion of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccine investigated by parallel mutations// J. Gen. Virol. -2001.-V. 82. -P.1263-1272.

156. Paton DJ, Brown IH, Edwards S, Wensvoort G 'Blue ear' disease of pigs// Vet Rec. 1991. - V. 128. - P. 617.

157. Paton, D. J., Brown, I. H., Scott, A. C., Done, S. H. and Edwards, S. Isolation of a Lelystad virus-like agent from British pigs and scanning electronic microscopy of infected macrophages// Vet. Microbiol. 1992. -V. 33.-P. 195-201.

158. Pirzadeh B, Dea S Monoclonal antibodies to the ORF5 product of porcine reproductive and respiratory syndrome virus define linear neutralizing determinants// J Gen Virol. ~ 1997. V. 78. - P. 1 867-1 873.

159. Pirzadeh B, Dea S Immune response in pigs vaccinated with plasmid DNA encoding ORF5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus// J Gen Virol. 1998. - V. 79. - P. 989-999.

160. Pirzadeh B, Gagnon С A, Dea S Genomic and antigenic variations of porcine reproductive and respiratory syndrome virus major envelope GP5 glycoprotein// Can J Vet Res. 1998. - V. 62. - P. 170-177.

161. Plagemann PGW, Moenning V Lactate dehydrogenase elevating virus,equine arteritis virus and simian hemorrhagic fever virus: a new group of pos.itive-stranded RNA viruses// Adv Virus Res. 1992. - V. 41. - P. 99192.

162. Plagemann PGW Lactate dehydrogenase elevating virus and related viruses// In: Fields BN, Knipe DM, Howley PM (eds) Field's Virology. -1996. 3rd ed. Lippincott-Raven Philadelphia, P. 1105-1120.

163. Pleschka S, Jaskunas R, Engelhardt OG, et al. A plasmid-based reverse genetics system for influenza A virus// J Virol 1996. - V. 70. - P. 41884192.

164. Pol JM, Wagenaar F Morphogenesis of Lelystad virus in porcine lung alveolar macrophages // A ASP Newsletter. 1992. - V. 4. P. 29.

165. Pol JMA, Wagenaar F, Reus JEG Comparative morphogenesis of three PRRS virus strains// VetMicrobiol . 1997. - V. 55. - P. 203-208.

166. Pomeranz A, Dolfin T, Korzets Z, Eliakim A, Wolach B. Increased sodium concentrations in drinking water increase blood pressure in neonates // J Hypertens. 2002.- №20(2). - P.203-207.

167. Porath J., Carrie A., Konoby V., Belfrage G. Metal chelate affinochromatography, a new approach to protein fractionation// Nature. -1975.-V. 258.-P. 598-599.

168. Raithel HJ, Schaller KH, Kraus T, Lehnert G. Biomonitoring of nickel and chromium in human pulmonary tissue //Int Arch Occup Environ Health.1993. №65(Suppl 1). - P. 197-200.

169. Rao K.S. Effects of aluminium salts on synaptosomal enzymes an in vitro kinetic study// Biochem. Int. - 1990. - V. 22. - No. 4. - P. 725-734.

170. Roberts, A, and Rose, J. K. Recovery of negative-strand RNA viruses from plasmid DNAs: A positive approach revatilizes a negative field// Virology. -1998.-V& 247.-P. 1-6.

171. Rodilla V., Miles A.N., Jenner W., Hawksworth G.M. Exposure of cultured human proximal tubular cells to cadmium, mercury, zinc, and bismuth: toxicity and metfllothionein induction// Chem. Biol. Interact. 1998. - V. 115. - P. 71-83.

172. Rossow, K.D., Collins, J.E., Goyal, S.M., Nelson, E.A., Christopher-Hennings, J. and Benfield D.A. Pathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in gnotobiotic pigs// Vet. Pathol. -1995. V. 32. -N.4. - P. 361-373.

173. Roth HP. Development of alimentary zinc deficiency in growing rats is retarded at low dietary protein levels // J Nutr. 2003. -№133(7). - P.2294-2301.

174. Rottier PJM, Welling GW, Welling-Wester S, Niesters HGM, Lenstra JA,

175. Van derZeijst Predicted membrane topology of the coronavirus protein El// Proc Natl Acad Sci USA. 1986.-V. 81.-P. 1421-1425.

176. Rudolf E., Peychl J., Cervinka M. Toxic effects of chromium acetate hydroxide on cells cultivated in vitro// Altern. Lab. Anim. 2001. - V. 29. -No. 2.-P. 163-177

177. Ruggli N., Tratschin J.-D., Mittelholzer C., Hofmann M. A. Nucleotide1sequence of classical swine fever virus strain Alfort/187 and transcription of infectious RNA from stably cloned full-length cDNA// J. Virol. 1996. -V. 70.-P. 3478-3487.

178. Rukgauer M, Zeyfang A Chromium determinations in blood cells: clinical relevance demonstrated in patients with diabetes mellitus type 2. Biol Trace Elem Res 2002 Jun;86(3): 193-202

179. Samecka-Cymerman A., Kempers A.J. Bioindication of heavy metals with aquatic macrophytes: the case of a stream polluted with power plant sewages in Poland //J Toxicol Environ Health A. 2001. - №62(1). - P.57-67.

180. Sarnow, P. Role of 3'-ends sequences in infectivity of poliovirus transcripts made in vitro// J. Virol. 1989. - V. 63. - P. 467-470.

181. Segales, J. and Domingo, M. Porcine circovirus type 2 infection: postweaning multisystemic wasting syndrome and other condidions// Proceedings of the 17th IPVS congress, Ames, Iowa, USA. 2001. - V 1. -P. 35-42.

182. Sellner, L.N., Coelen, R.J., Mackenzie, J.S. Sensitive detection of Ross River virus a one-tube nested RT-PCR// J. Viol. Methods. 1994. - V. 49. -P. 47-58.

183. Senft V, Racek J, Motan J, Krizek M, Bejckova H, Kohout J. An evaluation of the influence of therapeutic interventions on serum trace element levels in groups of patients// J. Trace Elem. Med. Biol. 2003. - V. 17. - No 1. - P. 7-11.

184. Shenkin A. The role of minerals and trace elements in relation to long-term health and chronic disease// Nestle Nutr. Workshop Ser. Clin. Perform.

185. Programme. 2004.- V. 9. - P. 169-181.

186. Seoane A.I., Dulout F.N. Genotoxic ability of cadmium, chromium and nickel salts studied by kinetochore staining in the cytokinesis-blocked micronucleus assay// Mutat. Res. -2001. V. 490. No. 2. P. 99-106.

187. Shibata I., Urino, K., Mori M. Serological property and replication in cell cultures of porcine reproductive and respiratory syndrome viruses isolated in Japan// J. Vet. Med. Sci.- 1996. V. 58. - P. 805-807.

188. Schnell, M. J., Mebatsion, Т., and Conzelmann, К. K. Infectious rabies viruses from cloned cDNA// EMBO J. 1994. V 13. - P. 4195-4203.

189. Schott E.J., Gardner R.C. Aluminum-sensitive mutants of Saccharomyces cerevisiaell Mol. Gen. Genet. 1997. - V. 254. - No. 1. - P. 63-72.

190. Schroder A, van Loon AA, Goovaerts D, Teifke JP, Mundt E VP5 and the N terminus of VP2 are not responsible for the different pathotype of serotype I and II infectious bursal disease virus// J Gen Virol 2001. - V. 82 (Pt 1).-P. 159-69.

191. Shopsis C. Antagonism of cadmium cytotoxicity by differentiation inducers// Cell. Biol. Toxicol. 1994. - V. 10. -No. 3. P. 191-205.

192. Shukla G.S., Chiu J, Hart B.A. Cadmium-induced elevations in the gene expression of the regulatory subunit of gamma-glutamylcysteine synthetase in rat lung and alveolar epithelial cells// Toxicology. 2000. - V. 151. - No. (1-3).-P. 45-54.

193. Smedegaard G., Madsen, E., Alexandersen, S. Appearance of acute PRRS-like symptoms in sow herds after vaccination with a modified live PRRS vaccine // Vet. Rec. 1997. - Vol. 141. -P. 497-499

194. Smith A, Chaieb S, al Aql A, Alsalhi M, Nayfeh MH. Observation of assembly of fluorescent Si nanoparticles under the influence of electric current //J Nanosci Nanotechnol. 2002. - V. 2(5). - P.471-473.

195. Snijder, E. J., Wassenaar, A. L. M., Spaan, W. J. M. & Gorbalenya, A. E. The arterivirus Nsp2 protease// Journal of Biological Chemistry. 1995. -V. 270.-P. 16671-16676.

196. Snijder, E.J., Meulenberg, J.J.M. The molecular biology of arteriviruses// J. Gen. Virol. 1998. - V. 79. - P. 961-979.

197. Snijder EJ, van Tol H, Pedersen KW, Raamsman MJB, de Vries AAF Identification of a novel structural protein of arteriviruses// J Virol. -1999.-V. 73.-P. 6335-6345.

198. Snyder C.A., Valle C.D. Lymphocyte proliferation assays as potential biomarkers for toxicant exposures// J. Toxicol. Environ. Health. 1991. - V. 34.-No. l.-P. 127-139.

199. Solano, G., Segales, J., and Pijoan, C. 1995. Interaction between Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus (PRRSV) and Haemophilus parasuis. Proc 2nd Int Symposium on Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Copenhagen, Denmark p. 21.

200. Stadejek, Т., Stankevicius, A., Storgaard, Т., Oleksiewicz, M.B., Belak, S.,

201. Drew, T.W., Pejsak, Z. Identification of radically different variants of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in Eastern Europe: towards a common ancestor for European and American viruses// J. Gen. Virol. -2002. V. 83.-P. 1861-1873.

202. Stern RM. Cancer incidence among welders: possible effects of exposure to extremely low frequency electromagnetic radiation (ELF) and to welding fumes //Environ Health Perspect. 1987. - №76. - P.221-229.

203. Storgaard, Т., Oleksiewicz, M., Botner, A. Examination of the selective pressures on a live PRRS vaccine virus// Arch. Virol.- 1999. V. 144. - P. 2389-2401.

204. Suarez P, Diaz-Guerra M, Prieto C, Esteban M, Castro JM, Nieto A, Ortin J Open reading frame 5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus as a cause of virus-induced apoptosis// J Virol. 1996. - V. 70. P. 2 876-2 882.

205. Suarez P, Zardoya R, Prieto C, Solana A, Tabares E, Bautista JM, Castro JM Direct detection of the porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus by reverse polymerase chain reaction (RT-PCR)// Arch Virol. 1994. - V. 135. P. 89-99.

206. Sur JH, Doster AR, Osario FA (1998) Apoptosis induced in vivo during acute infection by porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Vet Pathol. 1998. - V. 35. - P. 506-514.

207. Suzuki K.T., Rui M., Ueda J., Ozawa T. Production of hydroxyl radicals by copper-containing metallothionein: roles as prooxidant// Toxicol. Appl. Pharmacol. 1996. - V. 141. - P. 231-237.

208. Swain C., Chainy G.B. In vitro stimulation of chick brain lipid peroxidation by aluminium, and effects of tiron, EDTA and some antioxidants// Indian J. Exp. Biol.-2000.-V. 38.-No. 12.-P. 1231-1235.

209. Tamai K.T., Gralla E.B., Ellerby L.M., Valentine J.S., Thiele D.J. Yeast and mammalian metallothioneins functionally substitute for yeast copper-zinc superoxide dismutase// Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. - V. 90. - P. 8013-8017.

210. Terpstra C, Wensvoort G, Pol JMA Experimental reproduction of porcine epidemic abortion and respiratory syndrome (mystery swine disease) by infection with Lelystad virus: Koch's postulates fulfilled// Vet Q. 1991. -V. 13.-P. 131-136.

211. Troncoso J.C., Hoffman P.N., Griffin J.W., Hess-Kozlow K.M., Price D.L.

212. Aluminum intoxication: a disorder of neurofilament transport in motor neurons// Brain Res.- 1985.-V. 342.-No. l.-P. 172-175.

213. Van Alstine, W. G. Isolation of SIRS virus from nursery pigs of two herds without current reproductive failure// Proc. Annu. Meet. Livest. Confer. Inst. -1992.-V. l.-P. 253-259.

214. Van Berlo MF, Horzinek MC and Van Der Zeijst BAM Equine arteritis virus-infected cells contain six polyadenylated vims-specific RNAs// Virology. 1982. - V. 118. -P. 345-352.

215. Van der Meer, Y., van Tol, J. G., Krijnse Locker, J. and Snijder, E. J. ORFla-encoded replicase subunits are involved in the membrane association of the arterivirus replication complex// J. Virol. 1998. - V. 72. - N 8. - P. 6689-6698.

216. Van Rijn PA., Wellenberg GJ., Hakze-van der Honing R., Jacobs L., Moonen PL., Feitsma H. Detection of economically important viruses in boar semen by quantitative RealTime PCR technology// J. Virol. Methods. 2004. - V. 120. -N.2.-P. 151-160.

217. Van Woensel, P., Van der Wouw, J. and Visser, N. Detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus by polymerase chain reaction// J. Virol. Meth. 1994. - V. 47. - P. 273-278.

218. Venugopal В., Luckey T.D. Metal toxicity in mammals// N.Y.: Plenum Press. 1978.-V.2.-P. 409.

219. Versiek J, Cornelis R. Normal levels of trace elements in human blood plasma and serum //Analytica chimica acta. 1980. - N116. - P.217-254.

220. Vezina SA, LoembaH, Fournier M, Dea S, Archambault D Antibody production and blastogenic response in pigs experimentally-infected with porcine reproductive and respiratory syndrome viru// Can J Vet Res. -1995.-V. 60.-P. 94-99.

221. Venugopal В., Luckey T.D. Metal toxicity in mammals. N.Y.: Plenum Press. - 1978.-V.2.-409 p.

222. Vlasova, A., G. Risatti, T. Grebennikova, A. Zaberezhny, T. Aliper, E. Nepoklonov. Infectious Genomic Copy of the Russian Vaccine Strain oftVi

223. Classical Swine Fever (Hog Cholera) Virus// The 17 Congress of the International Pig Veterinary Society (IPVS). Ames, Iowa, USA. - 2002 7 - V. 1. - P. 324.

224. Von Heijine G. A new method for predicting signal sequence cleavage sites// Nucleic Acids Res. 1986. - V. 14. - P. 4683-4690.

225. Voicu I. L, Silim A, Morin M, Elazhary MASY Interaction of porcine reproductive and respiratory syndrome virus with swine monocytes// Vet Rec. 1994. -V. 134. - P. 422-423.

226. Wen CG, Pang GY, Huang SQ. Significance of the serum level of Cu, Zn, Mn, Cr and Ni in acute leukemia //Zhonghua Nei Ke Za Zhi. 1989. - V. 28. - N. 12. - P.734-736, 768-769.

227. Wensvoort G, Terpstra C, Pol J, White M. Blue ear disease of pigs// Vet Rec.- 1991.-V. 128.-P. 574.

228. Wensvoort G Lelystad virus and porcine epidemic abortion and respiratory syndrome. Vet Res. 1993. - V. 24:. - P. 117-124.

229. Whelan, S. P., Ball, L. A, Barr, J. N., and Wertz, G. T. Efficient recovery of infectious vesicular stomatitis virus entirely from cDNA clones// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92. - P. 8388-8392.

230. Williams R. An introduction to the biochemistry of zinc //C.F. Mills, (ed.). U.K. 1978. - P. 15-31.

231. Wlostowski T. Involment of metallothionein and cooper in cell proliferation//Biometals. 1993. -V. 6. - P. 71-76.

232. Wooten, S., Yoo, D., Rogan, D. Full-length sequence of a Canadian porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) isolate // Arch. Virol. -2000. V. 145.-P. 2297-2323.

233. Wooton, J. С and Federhen, S. Statistics of local complexity in amino acidsequences and sequence database// Computers and Chemistry. 1993. - V. 17.-P. 149-163.

234. Wootton SK, Nelson EA, YooD. Antigenic structure of the nucleocapsid proteinof porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Clin Diagn Lab Immunol. 1998. - V. 5. - P. 773-779.

235. Yamakoshi Y, Sueyoshi S, Miyata N. Biological activity of photoexcited fullerene //Mini Rev Med Chem. 1999. - №117. - P.50-60.

236. Yoo D., Welch SK., Lee C., Calvet JC. Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and potential as vaccinevectors// Vet. Immunol. Immunopathol. 2004. - V. 102. - N. 3. - P. 143154.

237. Yoon, K.J., Wu, L.L., Zimmerman, J.J., Hill, H.T., and Piatt, K.B. Antibody-dependent enhancement (ADE) of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection in pigs.// Viral Immunol1996.-V. 9. P. 51-63.

238. Yount B, Curtis KM, Baric RS Strategy for systematic assembly of large RNA and DNA genomes: transmissible gastroenteritis virus model// J Virol. 2000. — V.74. - N 22. - P. 10600-11.

239. Yuan, S., Mickelson D., Murtaugh M.P., Faaberg K.S. Complete genome comparison of porcine reproductive and respiratory syndrome virus parental and attenuated strains// Virus Res. 2001. - V.74. - P. 99-110.

240. Zhang Y, Sharma RD, Paul PS. Monoclonal antibodies against conformationally dependent epitopes on porcine reproductive and respiratory syndrome virus// Vet Microbiol. 1998. - V. 63. P. 125-136.