Синтез сполна сульфатированных олигосахаридов, родственных природным полисахаридам фукоиданам тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.03, кандидат химических наук Крылов, Вадим Борисович

• Крылов, Вадим Борисович
• кандидат химических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат химических наук Крылов, Вадим Борисович

Часть 1. Введение 5 Часть 2. Литературный обзор

Синтез низкомолекулярных углеводных миметиков гепарина»

2.1. Введение: строение и функции гепариноидов '

2.2. Синтез фрагментов гепарина

2.2.1. Синтез АТШ-связывающейся пентасахаридной последовательности

2.2.2. Блочный синтез фрагментов гепариноидов

2.3. Синтез метилированных миметиков гепариноидов

2.3.1. Общая характеристика метилированных миметиков

2.3.2. Синтез метилированных аналогов ключевого пентасахарида

2.3.3. Синтез крупных метилированных миметиков гепарина

2.4. Высокосульфатированные олигосахариды, как миметики гепариноидов

2.4.1. Сульфатированный фосфоманнан PI-88 - ингибитор гепараназы

2.4.2. Синтез сульфатированных олигосахаридов с противовирусной активностью

2.4.3. Синтез сульфатированных олигосахаридов обладающих анти-пролиферативной активностью

2.4.4. Спейсерные олигосахариды

2.4.5. Фукоиданы, как миметики гепаринов 45 Часть 3. Обсуждение результатов

3.1. Целевые соединения

3.2. Синтез несульфатированных предшественников 13

3.3. Исследование исчерпывающего сульфатирования полиолов комплексом S03 в присутствии трифторметансульфоновой кислоты

3.4. Изомеризация терминального фукопиранозного остатка в фуранозный - побочная реакция сульфатирования

3.5. Промотирование реакции сульфатирования различными кислотами

3.6. Сульфатирование олигофукозидов с а-(1—И) и а-(1—>2)-связанными остатками

3.7. Исследование антикоагулянтной активности 67 Часть 4. Выводы 74 Часть 5. Экспериментальная часть 75 Часть 6. Приложение 97 Часть 7. Список литературы '

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Ас - ацетил АН - аллил Вп - бензил Bu - бутил

CAN - аммоний-церий (1У)-нитрат CSA - (±)-камфор-10-сульфоновая кислота DMAP - 4-диметиламинопиридин DS - декстран сульфат

ESI-MS - масс-спектр, ионизации в электроспрее Et - этил

FGF-1,2 - факторы роста фибробластов 1,

FGFR-1,2 - рецепторы факторов роста фибробластов 1,

Fue - фукоза

Glc — глюкоза

GlcA — глюкуроновая кислота GlcNAc — N-ацетилглюкозамин Ido - идоза

IdoA - идуроновая кислота

Lev - левулиноил (СН3С(0)СН2СН2С(0)-)

Me - метил

MS - молекулярные сита NBS — N-бромсукцинимид NIS - N-иодсукцинимид PF4 - тромбоцитарный фактор 4 Ph - фенил

МВп — иора-метоксибензил Рг - пропил Ру - пиридин

TBAF — тетрабутиламмоний фторид ТВ S — mpem-бутилдиметил силил

TES - триэтилсилан

Tf - трифторметилсульфонил

TFA - трифторуксусная кислота

TMS - триметилсилил

Toi -толил

Ts - л-толуолсульфонил - Z - карбоксибензил ATIII - антитромбин Ш

АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время

ГАГ - гликозаминогликаны

ДБУ - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен

ДМСО - диметилсульфоксид

ДМФА - NjN-диметилформамид

КССВ — константа спин-спинового взаимодействия

НМГ - низкомолекулярный гепарин

ТГФ - тетрагидрофуран

ЭА - этилацетат

ПЭ - петролейный эфир

Часть 1.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез сполна сульфатированных олигосахаридов, родственных природным полисахаридам фукоиданам»

Сульфатированные полисахариды играют важную роль в организме млекопитающих благодаря их способности образовывать прочные ионные контакты с различными белковыми рецепторами [1,2]. Например, полианионные гликозаминогликаны (ГАГ) участвуют в таких физиологических процессах, как свертывание крови, развитие воспаления, ангиогенез, адгезия клеток, распознавание вирусами клеток хозяина и других [3,4].

Среди практически доступных природных полисахаридов значительный интерес вызывают фукоиданы из бурых водорослей благодаря их способности воздействовать на широкий ряд физиологических процессов в организме млекопитающих. По-видимому, отдельные участки полисульфатированных цепей фукоиданов способны выступать в качестве миметиков природных лигандов белковых рецепторов (в том числе лигандов относящихся к ГАГ), обуславливая тем самым, например, противовоспалительную активность, оказывая антикоагулянтное и антиангиогенное действие, блокируя бактериальную и вирусную адгезию [5-8].

Цепи фукоиданов построены преимущественно из остатков а-Ь-фукопиранозы и могут содержать сульфатные и ацетильные группы, а также различные углеводные заместители (остатки глюкуроновой кислоты, ксилозы, маннозы) [9]. Важнейшей характеристикой фукоиданов, определяющей спектр проявляемой биологической активности, является степень сульфатирования, среднее значение которой чаще всего лежит в пределах от 0,5 до 1,5 сульфатных групп на фукозный остаток. Показано, что фукоиданы с высокой степенью сульфатирования проявляют антикоагулянтную активность, по величине сравнимую с действием гепарина. В связи с этим разработка эффективных схем синтеза олигосахаридов, отвечающих крупным высокосульфатированным фрагментам фукоиданов, представляется актуальной задачей. Синтетические олигосахариды [10] являются ценными модельными соединениями для выявления взаимосвязи структуры и свойств этих полисахаридов. Кроме того, их спектральные (ЯМР) данные необходимы для конформационного анализа углеводных цепей фукоиданов, а биохимические исследования позволят определить структурные мотивы, ответственные за физиологическую активность. Несмотря на проявляемый интерес к крупным высокосульфатированным фрагментам фукоиданов, их химический синтез представляет собой нетривиальную задачу. Так, исчерпывающее сульфатирование олигофукозидов, содержащих более двух углеводных остатков, весьма затруднительно, что связано с недостаточной полнотой прохождения реакции при использовании стандартных методов сульфатирования [11].

Целью настоящей диссертации является разработка эффективного метода исчерпывающего сульфатирования полигидроксильных соединений и его применение для синтеза серии крупных сполна сульфатированных олигофукозидов, включающих основные структурные типы природных цепей фукоиданов, а также изучение базовых антикоагулянтных характеристик синтезированных образцов в тестах in vitro.

Работа выполнена в лаборатории химии гликоконъюгатов (№52) Института органической химии имени Н.Д. Зелинского РАН. Диссертация состоит из 7 частей: введения, литературного обзора, посвященного синтезу низкомолекулярных углеводных миметиков гепарина, в том числе и основанных на структуре фукоиданов, обсуждения результатов, выводов, экспериментальной части, приложения и списка цитированной литературы.

Нумерация соединений дается арабскими цифрами жирным шрифтом, причем соединения, схемы и таблицы в части 2 "Литературный обзор" и в части 3 "Обсуждение результатов" нумеруются независимо.

Часть 2.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Синтез низкомолекулярных углеводных миметиков гепарина» 2.1. Введение строение и функции гепариноидов

Сульфатированные полисахариды, относящиеся к гликозаминогликанам (ГАГ), широко распространены в тканях млекопитающих. Гепарин и структурно родственный гепарансульфат, относящиеся к высокосульфатированным ГАГ, представляют собой линейные цепи, построенные из чередующихся остатков гексуроновой кислоты и a-D-глюкозамина, которые связаны между собой (1—>4)-гликозидными связями (Рисунок 1) [12]. Высокая гетерогенность этих полисахаридов обусловлена наличием двух изомерных гексуроновых кислот: ß-D-глюкуроновой и a-L-идуроновой, а также из-за частичного О-, N-сульфатирования и N-ацетилирования полисахаридной цепи.

Гепарин, в отличие от гепарансульфата, характеризуется большим содержанием остатков a-L-идуроновой кислоты и N- и О-сульфатов, кроме того, гепарин содержится только внутри клеток, в то время как гепарансульфат в составе протеогликана экспрессирован в межклеточное пространство. Учитывая структурное подобие гепарина и гепарансульфата, их принято объединять термином «гепариноиды».

За счет структурного разнообразия и высокого отрицательного заряда эти биополимеры способны связываться со многими белками, в том числе и с рецепторами, проявляя тем самым разнообразную биологическую активность [1,4]. Наиболее хорошо изученным примером взаимодействия гепариноидов с белком является специфическое связывание ключевого пентасахаридного фрагмента 2 [13] с антитромбином III (ATIII), белком крови, выполняющим важную регуляторную функцию в процессе гемостаза. Комплекс гепарина с антитромбином Ш (ATIII) способен блокировать ряд ключевых факторов коагуляции крови, обуславливающих образование фибринового сгустка [14]. За счет этого гепарин

1 Гипотетический фрагмент молекулы гепарина

ЛОЛ

ЫНАс

2 Ключевой пентасахаридный фрагмент связывающийся с АТШ

ОБОз"

ГЧНЗОз"

3 Трисахаридный фрагмент связывающийся с РСР-1

ОН 1МН803- ОН

4 Трисахаридный фрагмент связывающийся с Р6Р-2

Рисунок 1. Гепарин и его фрагменты. уже более 70-ти лет применяется в качестве антикоагулянтного препарата для предотвращения тромботических состояний.

Кроме того, в 1991 году было обнаружено, что гепариноиды необходимы для связывания факторов роста фибробластов (РОР-1, РвР-2 и др.) со своими высоко аффинными рецепторами (РОР11-1, БОРЯ-2 и др.) [15]. Это взаимодействие играет важную роль в процессах пролиферации, дифференциации и миграции клеток, а также ангиогенезе при развитии раковой опухоли. Рентгеноструктурный анализ тройного комплекса РОГ-ГОРЯ-гепарин выявил сайты связывания полисахарида, как с фактором роста, так и с его рецептором [16]. Анализ библиотеки различных фрагментов гепариноидов позволил выявить минимальные необходимые трисахаридные фрагменты, ответственные за связывание с РОР-1 3 и РОР-2 4 [17].

Помимо специфичного взаимодействия выделяют и неспецифичные связывания крупных отрицательно заряженных гепариноидов с широким рядом белков. Эти взаимодействия обуславливают роль гепариноидов в развитии воспалительного процесса, метастазировании раковых клеток, заражении вирусами и др. [1, 3].

Такой разнообразный спектр физиологической активности накладывает существенные ограничения на использование природного гепарина и гепарансульфата в качестве терапевтических средств. При использовании гепарина в качестве антитромботического средства часто наблюдается развитие побочных процессов, таких как геморрагия и тромбоцитопения [18, 19]. Кроме того сильный антикоагулянтный эффект нативных гепариноидов не позволяет использовать их в качестве противовоспалительных, противоопухолевых, противовирусных препаратов. Создание низкомолекулярных миметиков гепарина со строго определенной структурой позволяет получить высокоэффективные препараты более узкого биологического действия, снизив тем самым риски побочных процессов [4].

Поиск таких миметиков среди синтетических сульфатированных олигосахаридов является интенсивно развивающимся направлением биохимии углеводов. Рассмотрению основных типов структур и подходов к их синтезу посвящен настоящий обзор.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Крылов, Вадим Борисович, 2010 год

1. D. R. Coombe and W. С. Kett / Heparan1 sulfate-protein interactions: therapeutic potential through structure-function insights. // Cell. Mol. Life Sci. 62 (2005), p. 410-424, review.

2. J.M. Whitelock, R.V. Lozzo / Heparan sulfate: a complex polymer charged with biological activity. // Chem. Rev., 105 (2005), p 2745-2764, review.

3. R. Lever, C.P. Page / Novel drug development opportunities for heparin. // Nature Reviews Drug Discovery, 1 (2002), p. 140-148, review.

4. V. Pomin / An overview about the structure-function relationship of marine sulfated homopolysaccharides with regular chemical structures. // Biopolymers, 91 (2009), 8, p. 601-609, reveiw.

5. O. Berteau, B. Mulloy / Sulfated fucans, fresh perspectives: structures, functions, and biological properties of sulfated fucans and an overview of enzymes active toward this class of polysaccharide. // Glycobiology, 13 (2003), 6, 29R-40R.

6. P.A.S. Mourau / Use of sulfated fucans as anticoagulant and antithrombotic agents: future perspectives. // Curr. Pharm. Des., 10 (2004) 9, p. 964-981.

7. A I Usov, MI Bilan / Fucoidans sulfated polysaccharides of brown algae. // Russ. Chem. Rev., 78 (2009) 8, p. 785-799.А.И. Усов,- М.И. Билан / Фукоиданы сульфатированные полисахариды бурых водорослей // Yen. Хим., 78 (2009) 8, 846-862.

8. N. Ustyuzhanina, V. Krylov, A.Grachev, A.Gerbst, N.Nifantiev / Synthesis, NMR and conformational studies of fucoidan fragments. Part 8. Convergent synthesis of branched and linear oligosaccharides. // Synthesis, 23 (2006), p. 4017-4031.

9. V. Krylov, N. Ustyuzhanina, A.Grachev, N. Nifantiev / Efficient acid-promoted per-O-sulfation of organic polyols. // Tetrahedron Lett., 49 (2008), 5877-5879.

10. B. Casu / Structure and biological activity of heparin. I I Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 43 (1985), p. 51-134.

11. C.A.A. Boeckel, M. Petitou / The unique antithrombin III binding domain of heparin: a lead to new synthetic antithrombotics. // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32 (1993) 12, p. 1671 1690, review.

12. A. Yayona, M. Klagsbrunb, J.D. Eskoc, P. Lederd, D.M. Ornitz / Cell'-surface, heparin-like molecules are required-for binding of basic fibroblast growth, factor, to its high affinity receptor. // Cell 64 (1991), p. 841-848!

13. J. Tatai, P. Fugedi / Synthesis of the putative minimal FGF binding motif heparan, sulfate trisaccharides by an orthogonal protecting group strategy. // Tetrahedron 64 (2008), p. 9865-9873.

14. V.V. Kakkar, S. Kakkar, R.M. Sanderson, C.E. Peers / Efficacy and safety of two regimens, of low molecular weight heparin fragment (fragmin) in preventing postoperative venous thrombolism. И Haemostasis 16 (1986), p. 19-24.

15. J. Fareed, D.A: Hoppensteadt, R.L. Bick / An update on heparins at the beginning of the new millennium. // Semin. Thromb. Hemost. 26 (2000) 1, p. 5-22.

16. P. Sinay, J.-C. Jacquinet, M. Petitou, P.Duchaussoy, I.Lederman, J.Choay, G.Torri / Total synthesis of a heparin pentasaccharide fragment having high affinity for antithrombinin. // Carbohydr. Res., 132 (1984) 2, p. C5-C9.

17. M. Petitou, P. Duchaussoya, I. Ledermana, J. Choaya, J.-C. Jacquinetb, P. Sinay, G. Torric / Synthesis of heparin fragments: a methyl a-pentaoside with high affinity for antithrombin III. // Carbohydr. Res., 167 (1987), p. 67-75.

18. M. Petitou, G. Jaurand, M. Derrien, P. Duchaussoy and J. Choay / A new, highly potent, heparin-like pentasaccharide fragment containing a glucose residue instead of a glucosamine. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1 (1991) 95-98.

19. T. Polat, Chi-Huey Wong / Anomeric reactivity-based one-pot synthesis of heparin-like oligosaccharides. II J. Am. Chem. Soc. 129 (2007), 12795-12800.

20. H.A. Orgueira, A. Bartolozzi, P. Schell, R.E.J.N. Litjens, E.R. Palmacci, P.H. Seeberger / Modular synthesis of heparin oligosaccharides. // Chem. Eur. J. 9 (2003), 1, p 140-169.

21. M. Petitou, C.A.A. Boeckel / A synthetic antithrombin III binding pentasaccharide is now a drug! What comes next? // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 43 (2004), 3118 — 3133, review.

22. M. Maccarana, B.Casu, U. Lindahl / Minimal sequence in heparin/heparan sulfate required for binding of basic fibroblast growth factor. // J. Biol. Chem. 268 (1993), p.23898-23905

23. D.J.D. Johnson, J. Langdown, Wei Li, S.A. Luis, T.P. Baglin, J.A. Huntington / Crystal structure of monomeric native antithrombin reveals a novel reactive center loop conformation. II J. Biol. Chem., 281 (2006), 35478-35486.

24. M. Petitou, P. Duchaussoy, P.-A. Driguez, G. Jaurand, J.-P. Hérault, J.-C. Lormeau,C.A.A. Boeckel, J.-M. Herbert / First synthetic carbohydrates with the fullanticoagulant properties of heparin. // Angew. Chem. Int. Ed. Ъ1 (1998) 21, p. 3009 -3014.

25. J.G. Kelton, J.W. Smith, Т.Е. Warkentin, C.P. Hayward, G.A. Dénommé P. Horsewood / Immunoglobulin G from patients with heparin-induced thrombocytopenia binds to a complex of heparin and platelet factor 4. // Blood 83 (1994), 3232-3239.

26. D. Wall, S. Douglas, V. Ferro, W. Cowden C. Parish / Characterisation of the anticoagulant properties of a range of structurally diverse sulfated oligosaccharides. // Thrombosis Res., 103 (2001) 4, p. 325-335.

27. V. Ferro, K. Fewings, M.C. Palermo, C.Li / Large-scale preparation of the oligosaccharide phosphate fraction of Pichia holstii NRRL Y-2448 phosphomannan for use in the manufacture of PI-88. // Carbohyd. Res. 332 (2001), p. 183-189.

28. J.K. Fairweather, E. Hammond, K.D. Johnstone, V. Ferro / Synthesis and heparanase inhibitory activity of sulfated mannooligosaccharides related to the antiangiogenic agent PI-88. // Bioorg. & Med. Chem. 16 (2008), p. 699-709.

29. E.A. McKenzie / Heparanase: a target for drug discovery in cancer and inflammation. // Br J Pharmacol. 151 (2007) 1: 1-14.

30. S. Cochran, C. Li, J.K. Fairweather, W.C. Kett, D.R. Coombe, V. Ferro / Probing the interactions of phosphosulfomannans with angiogenic growth factors by surface plasmon resonance. II J. Med. Chem., 46 (2003), p. 4601-4608.

31. Guofeng Gu, Guohua Wei, Yuguo Du / Synthesis of a 6V-sulfated mannopentasaccharide analogue related to PI-88. // Carbohydr. Res. 339 (2004), p. 1155-1162.

32. T. Endress, M. Lampe, J.A.G. Briggs, H.-G. Krausslich, C. Brauchle, B. Miiller D.C. Lamb / HTV-l-cellular interactions analyzed by single virus tracing. // Eur. Biophys. J., 37 (2008) 8, p. 1291-1301.

33. M. Ito, M. Baba, A. Sato, R. Pauwels, E. Clercq, Sh. Shigeta / Inhibitory effect of dextran sulfate and heparin on the replication of human immunodeficiency virus (HIV) in vitro. II Antiviral Res., 7 (1987) 6, p. 361-367.

34. T. Moriya, H. Kurita, K. Matsumoto, T. Otake, H. Mori, M. Morimoto, N. Ueba, N. Kunita / Potent inhibitoiy effect of a series of modified cyclodextrin sulfates on the replication of HIV-1 in vitro. II J. Med. Chem., 34 (1991), p. 2301-2304.

35. T. Moriya, K. Saito, H. Kurita, K. Matsumoto, T. Otake, H. Mori, M. Morimoto, N. Ueba, N. Kunita / A new candidate for an anti-HIV-1 agent: modified cyclodextrin sulfate (mCDS71). II J. Med. Chem 36 (1993) 11, p. 1674-1677.

36. K. Takeo, H. Mitoha, K. Uemura / Selective chemical modification of cyclomalto-oligosaccharides via tert-butyldimethylsilylation. // Carbohydr. Res., 187 (1989) 2, p. 203-221.

37. K. Katsurayaa, H. Nakashimab, N. Yamamotoc T. Uryu / Synthesis of sulfated oligosaccharide glycosides having high anti-HTV activity and the relationship between activity and chemical structure. // Carbohydr. Res. 315 (1999) 3-4, p. 234242.

38. J.R. Guyton, R.D. Rosenberg, A.W. Clowes, M.J. Karnovsky / Inhibition of rat arterial smooth muscle cell proliferation by heparin. In vivo studies with anticoagulant and nonanticoagulant heparin. // Circ. Res. 46 (1980), p 625-634.

39. H.P. Wessel, R. Minder, G. Englert / Synthetic a,p-(l—>4)-glucan oligosaccharides as models for heparan sulfate. // J. Carbohydr. Chem., 14 (1995) 8, p.l 101 1115.

40. H.P. Wessel, J. Niggemann / Synthesis of p-D-(l—>4)-substituted trehalose oligosaccharides. II J. Carbohydr. Chem., 14 (1995) 8, p.1089- 1100.

41. H.P. Wessel, G. Englert, P. Stangier / a-D-glycosyl-substituted a,a-D-trehaloses with (1—>4)-linkage: syntheses and NMR investigations. // Helv. Chim. acta 74 (1991)4, p. 682-696.

42. H.P. Wessel, B. Mayer, G. Englert / All-a-linked tetra- and penta-saccharide substructures of Trestatin A by block syntheses with triflic anhydride as promoter. // Carbohydr. Res. 242 (1993) 7, p.141-151.

43. H.P. Wessel / Heparinoid mimetics. // Topics in Current Chemistry, 187 (1997), 215-238.

44. A. Sugidachia, F. Asaia H. Koikea / In vivo pharmacology of aprosulate, a new synthetic polyanion with anticoagulant activity. // Thrombosis Res. 69 (1993), p. 7180.

45. F.A. Ofosu, J. Fareed, L.M. Smith, N. Anvari, D. Hoppensteadt, M.A. Blajchman./ Inhibition of factor X, factor V and prothrombin activation by the bis(lactobionic acid amide) LW10082.11 Eur JBiochem. 203(1992), 1-2, p.121-125.

46. U.E. Papoulias, PJ. Wyld, S. Haas, A. Stemberger, W. Jeske, D. Hoppensteadt, A. Kammereit / Phase I study with aprosulate, a new synthetic anticoagulant. // Thromb Res. 72 (1993) 2, p. 99-108.

47. А.О. Chizhov, A. Dell, H.R. Morris, S.M. Haslam, R.A. McDowell, A.S. Shashkov, N.E. Nifantev, E.A. Khatuntseva A.I. Usov / A study of fucoidan from the brown seaweed Chorda filum. II Carbohydr. Res., 320 (1999), p. 108-119.

48. M. Nagaoka, H. Shibata, I. Kimura-Takagi, S. Hashimoto, K. Kimura, R. Aiyama, S. Ueyama, T. Yokokura / Structural study of fucoidan from Cladosiphon okamuranus tokida. // Glycoconjugate J. 16 (1999), p. 19-26.

49. L. Chevolot, B. Mulloy, J. Ratiskol, A. Foucault S. Colliec-Jouault / A disaccharide repeat unit is the major structure in fucoidans from two species of brown algae // Carbohydr. Res., 330 (2001), p. 529-535.

50. M.I. Bilan, A.A. Grachev, N.E., Ustuzhanina, A.S. Shashkov, N.E. Nifantiev, A. I. Usov, / Structure of a fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C.Ag. // Carbohydr. Res., 337 (2002), p. 719-730.

51. M.I. Bilan, A.A. Grachev, N.E. Ustuzhanina, A.S. Shashkov, N.E.; Nifantiev, A.I. Usov / A highly regular fraction of a fucoidan from the brown seaweed Fucus distichus L. // Carbohydr. Res., 339 (2004), p. 511-517.

52. L. Chevolot, A. Foucault, F. Chaubet, N. Kervarec, C. Sinquin, A.-M. Fisher, C. Boisson-Vidal / Further data on the structure of brown seaweed fucans: relationships with anticoagulant activity C. // Carbohydr. Res., 319 (1999), 154-165.

53. A.-P. Alves, B. Mulloy, J.A. Diniz, P.A.S. Mourao / Sulfated polysaccharides from the egg jelly layer are species-specific inducers of acrosomal reaction in sperms of sea urchins/ J. Biol. Chem., 272 (1997), 6965-6971

54. S.-J. Yoon, Y.-R. Pyun, J.-K. Hwang, P.A.S. Mourao / A sulfated fucan from the brown alga Laminaria cichorioides has mainly heparin cofactor П-dependent anticoagulant activity. // Carbohydr. Res., 342 (2007), p. 2326-2330.

55. J.D.C. Codee, R.E.J.N. Litjens, L.J. Bos, H.S. Overkleeft, G.A. Marel / Thioglycosides in sequential glycosylation strategies // Chem. Soc. Rev., 34 (2005), p. 769-782

56. R.U. Lemieux, K.B. Hendriks, R.V. Sick, K.J. James / Halide ion catalyzed glycosidation reactions. Syntheses of a-linked disaccharides // Am. Chem Soc., 97 (1975), p. 4056-4062.

57. J. Kuszmann, G. Medgyes, S. Boros / Synthesis of 2,5-anhydro-(P-D-glucopyranosyluronate)- and (a-L-idopyranosyluronate)-D-mannitol hexa-O-sulfonate hepta sodium salt. I/Carbohydr. Res. 339 (2004), 1569-1579.

58. A. Raghuraman, M. Riaz, M. Hindle, U.R. Desai /Rapid and efficient microwave-assisted synthesis of highly sulfated organic scaffolds. // Tetrahedron Lett. 48 (2007), p. 6754-6758.

59. М. Е. Sousa, М. Correia da Silva, M. M. М. Pinto //в Natural Products: Chemistry, Biochemistry and Pharmacology, Ред. G. Brahmachari, Narosa Publishing House PVT. Ltd., New Delhi, India ISBN: 978-81-7319-886-1, 2009.

60. M. Gelin, V. Ferrieres, M. Lefeuvre, D. Plusquellec / First intramolecular aglycon delivery onto a D-fucofuranosyl entity for the synthesis of a-D-fucofuranose-containing disaccharides. // Eur. J. Org. Chem. 2003, p. 1285-1293.

61. Breitmaier, E.; Voelter, W. Carbon-13 NMR Spectroscopy 1989, p. 384, 3-rd edition, VCH, Weinheim.

62. D. McPhail, J. Lee, B. Fraser-Reid. / Exo and endo activation in glycoside cleavage: acetolysis of methyl a- and P-glucopyranosides // J. Am. Chem. Soc. 1992, 114 (5), 1905-1906.

63. J. Liras, E. Anslyn /Exocyclic and endocyclic cleavage of pyranosides in both methanol and water detected by a novel probe. IIJ. Am. Chem. Soc. 116 (1994), p. 2645-2646.

64. F.W. Lichtenthaler, J. Breunig, W. Fischer / Boron trifluoride-catalyzed acetolysis of glycosides // Tetrahedron Lett. 12 (1971) 30, p. 2825-2828.

65. R.D. Langdell, R.H. Wagner, К.М. Brinkhous / Effect of antihemophilic factor on one-stage clotting tests; a presumptive test for hemophilia and a simple one-stage antihemophilic factor assy procedure. // J. Lab. Clin. Med. 41 (1953) 4, p. 637-647.

66. R. Stuart, A. Michel / Monitoring heparin therapy with the activated partial thromboplastin time // Can Med Assotiation J, 104 (1971) 5, p. 385-388.

67. E. Yin, S. Wessler, J. Butler / Plasma heparin: a unique, practical, submicrogram-sensitive assay // J Lab Clin Med, 81 (1973) 2, p. 298-310

68. A. Teien, M. Lie / Heparin assay in plasma a comparison of five clotting methods // Thromb Res, 7 (1975) 5, p. 777 788

69. A. Teien, М. Lie / Evaluation of an amidolytic heparin assay method: increased sensitivity by adding purified antithrombin III // Thromb Res., 10 (1977) 3, p. 399410.

70. A. Rezaie / Determinants of specificity of factor Xa interaction with its physiological inhibitors // Mini Rev Med Chem,6 (2006) 8, p. 859-865.

71. А. Гордон, P. Форд, Спутник химика, Москва, из-во "Мир" (1976).

72. W. L. F. Armarego, Christina Li Lin Chai. Purification of laboratory chemicals, 5th edition, Elsevier, Cornwall (2003).