Роль нейтрофилов в регуляции микробиоценоза влагалища женщин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Андреева, Юлия Сергеевна

• Андреева, Юлия Сергеевна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Андреева, Юлия Сергеевна

Введение.

Глава I. Состояние факторов антимикробной защиты репродуктивного тракта женщины (обзор литературы).

1.1. Механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин.

1.2. Участие нормальной микрофлоры генитального тракта женщин в формировании колонизационной резистентности и изменение состава вагинальной флоры при бактериальном вагинозе.

1.3. Роль нейтрофилов в защите репродуктивного тракта женщины и механизмы их антимикробной активности.

Глава И. Материалы и методы исследования.

2.1. Общая характеристика обследованных больных.

2.2. Микробиологические методы.

2.3. Выделение нейтрофилов периферической крови.

2.4. Исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови.

2.5. Метод получения секреторных продуктов нейтрофилов.

2.6. Методы определения бактерицидной активности гепаринизированной крови, лейкоцитарной взвеси, нейтрофилов и их секреторных продуктов.

2.6.1. Упрощенный фотонефелометрический метод определения бактерицидной активности по О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой.

2.6.2. Классический метод определения бактерицидной активности секреторных продуктов активированных и неактивированных нейтрофилов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови.

2.7. Статистические методы обработки результатов.

Глава III. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови здоровых женщин после активации различными видами микроорганизмов и латексом.

3.1. Исследование фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови по отношению к Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. и частицам латекса.

3.2. Изучение лизосомальной активности нейтрофилов периферической крови после их активации Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp. и частицами латекса.

3.3. Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов периферической крови после активации Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp.,

Bifidobacterium spp. и частицами латекса.

Глава IV. Влияние нейтрофилов, их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на микрофлору влагалища здоровых женщин in vitro.

4.1. Определение качественного и количественного состава флоры влагалища здоровых женщин.

4.2. Оценка бактерицидного эффекта нейтрофилов, их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на представителей флоры влагалища здоровых женщин.

Глава V. Влияние нейтрофилов и их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на микрофлору влагалища женщин с бактериальным вагинозом.

5.1. Определение качественного и количественного состава флоры влагалища женщин с бактериальным вагинозом.

5.2. Определение влияния нейтрофилов, их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на представителей флоры влагалища женщин с бактериальным вагинозом.

Глава VI. Влияние супернатантов неактивированных и активированных нейтрофилов на эталонные штаммы Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp.

6.1. Изучение бактерицидного действия секреторных продуктов неактивированных нейтрофильных гранулоцитов на S. aureus (штамм 209), Е. coli (штамм М-17), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp.

6.2. Изучение бактерицидного действия секреторных продуктов нейтрофильных гранулоцитов, активированных частицами полистирольного латекса, Е. coli, S. aureus, Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp., на S. aureus (штамм 209).

6.3. Определение влияния секреторных продуктов нейтрофильных гранулоцитов, активированных частицами полистирольного латекса, Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp., на Е. coli (штамм М-17).

6.4. Исследование бактерицидного эффекта секреторных продуктов нейтрофильных гранулоцитов, активированных частицами полистирольного латекса, Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp., на Lactobacterium spp.

6.5. Оценка бактерицидного эффекта секреторных продуктов нейтрофильных гранулоцитов, активированных частицами полистирольного латекса, Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp., на Bifidobacterium spp.

6.6. Изучение дозозависимого эффекта бактерицидности супернатантов нейтрофилов, активированных частицами полистирольного латекса, Е. coli (штамм M-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и

Bifidobacterium spp.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль нейтрофилов в регуляции микробиоценоза влагалища женщин»

В настоящее время, несмотря на широкое применение антибактериальных препаратов, инфекционные заболевания и осложнения, обусловленные микробными агентами, по-прежнему занимают доминирующее положение в патологии человека. В свою очередь, среди бактериальных инфекций большой удельный вес составляют патологические состояния, связанные с нарушением нормальной микрофлоры организма-хозяина и, в частности, с развитием вагинальных дисбактериозов у женщин.

Местная защита половой сферы женщины обусловлена ее анатомическими и физиологическими особенностями, наличием нормальной микрофлоры, гуморальных и клеточных факторов иммунитета (Бодяжина В.И., 1978; Долгушина В.Ф., 1991; Медведев Б.И., Казачкова Э.А. и др., 2001).

На сегодняшний день достаточно хорошо изучен состав нормофлоры влагалища женщин, а также его изменение при дисбиотических процессах. Подробно описаны механизмы взаимного влияния микробных ассоциантов друг на друга (Костюк О.П., Чернышова Л. И. и др., 1998; Коршунов В.М., Володин Н.Н. и др., 1999; Воробьев А.А., Лыкова Е. А., 1999; Анкирская А.С., Муравьева В.В., 2000; Кира Е.Ф., 2001; Валышев А.В., Елагина Н.Н. и др., 2001; Кафарская Л.И., Коршунова О.В. и др., 2002). Достаточно полно раскрыты этапы взаимодействия между представителями микрофлоры и клетками вагинального эпителия (Черкасов С.В., Забирова Т.М. и др., 2001; Валышев А.В., Елагина Н.Н. и др., 2001; Маянский А.Н., Маянская И.В., 2004; Holgate S.T., Lackie P.M. et al., 1999; Mills P.R., Davies R.G. et al., 1999; Godaly G., Bergsten G. et al., 2001; Rastogi D., Rather A.G. et al., 2001).

В последние годы активно исследуется роль нейтрофилов в регуляции иммунного и других звеньев гомеостаза (Бережная Н.М., 1988; Зурочка А.В.,

1991; Пигаревский В.Е., 1992; Маянский А.Н., Невмятуллин A.JI. и др., 1995; Чукичев А.В., 1996; Колесников O.JL, 1998; Долгушин И.И., Зурочка А.В., 1998; Долгушин И.И., Зурочка А.В. и соавт., 1986, 1988, 1990, 1992, 2000; Долгушин И.И., 1980; Долгушин И.И., Телешева Л.Ф. и др., 2000; Goto К., Nakamura S. et al., 1984; Ishibashi Y., Yamashita T. et al., 1981, 1985, 1989; Zeman K., Tchorzewski H. et al., 1987; Lillard I. W., Boyaka P.N. et al., 1999; Yang D., Chertov O. et al., 2001).

Нейтрофилы традиционно относятся к фагоцитирующим клеткам (Пигаревский В.Е., 1982, 1992; Бережная Н.М., 1988; Бакуев М.М., 1992; Воробьев А.А., Медуницин Н.В., 1995; Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д. и др., 1996; Ройт А., Бростофф Дж. и др., 2000). Однако фагоцитоз, хотя и важный, но не единственный способ реализации гранулоцитами своих эффекторных функций.

Нейтрофилы - это секреторные клетки, способные выделять биологически активные продукты, с помощью которых они могут осуществлять внеклеточный киллинг, а также, вступая в медиаторные контакты с гуморальными системами и клетками крови, соединительной ткани, оказывать регуляторное действие (Зурочка А.В., 1991; Пигаревский В.Е., 1992; Маянский А.Н., Невмятиллин А.Л. и др., 1995; Чукичев А.В., 1996; Колесников О.Л., 1998; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Третьякова И.Е., 2003; Жогин А.В., 2003; Goto К., Nakamura S. et al., 1984; Ishibashi Y., Yamashita T. et al., 1981, 1985, 1989; Zeman K., Tchorzewski H. et al., 1987; Lillard I. W., Boyaka P.N. et al., 1999; Yang D., Chertov O. et al., 2001).

В цервикальном и вагинальном секретах нейтрофильные гранулоциты являются доминирующими клетками. Наибольшее значение в антимикробной устойчивости гениталий принадлежит нейтрофилам цервикального секрета, поскольку по количеству и функциональной активности они превосходят гранулоциты других секретов гениталий

Телешева Л.Ф., 2000; Bainton D.F., 1995). Доказано, что в верхних отделах репродуктивного тракта женщин в основном встречаются жизнеспособные и функционально активные нейтрофилы, а в цервикальном секрете процент жизнеспособности клеток гораздо ниже (Телешева Л.Ф., 2000). Можно предположить, что нейтрофилы, встречаясь с представителями нормофлоры, обильно обсеменяющей нижние отделы репродуктивного тракта женщин, активируются и секретируют бактерицидные вещества, которые селективно действуют на патогенные, условно-патогенные и непатогенные микроорганизмы. Однако четких представлений об участии нейтрофилов в формировании микробных сообществ нет.

Цель исследования

Определить роль нейтрофилов и их секреторных продуктов в регуляции микробиоценоза влагалища здоровых женщин и женщин с бактериальным вагинозом.

Задачи исследования

1. Оценить функциональную активность нейтрофилов периферической крови после активации различными видами микроорганизмов и латексом.

2. Изучить влияние нейтрофилов, их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на микрофлору влагалища здоровых женщин.

3. Исследовать влияние нейтрофилов, их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на микрофлору влагалища женщин с бактериальным вагинозом. и

4. Определить in vitro бактерицидный эффект супернатанта активированных и неактивированных нейтрофилов на S.aureus (штамм 209), E.coli (штамм М-17), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp.

Научная новизна

Впервые изучено влияние нейтрофилов, продуктов их секреции, гепаринизированной крови и лейкоцитарной взвеси на состав флоры влагалища здоровых женщин и женщин с бактериальным вагинозом. Выявлено, что нейтрофильные гранулоциты и их секреторные продукты участвуют в нормализации микробиоценоза влагалища женщин с бактериальным вагинозом. При этом секреторные продукты неактивированных нейтрофилов обладают широким спектром антимикробной активности. При активации нейтрофилов эталонными штаммами Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp. бактерицидные свойства их супернатантов изменяются, при этом спектр антимикробной активности определяется характером индуктора секреции.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные данные помогают расширить представление об участии нейтрофилов и их секреторных продуктов в формировании микробиоценоза слизистых оболочек гениталий женщины. Выявлено, что нейтрофилы и продукты их секреции участвуют в селективной деконтаминации влагалищного биотопа женщин с бактериальным вагинозом. Результаты исследований открывают перспективу для проведения клинических испытаний локального использования аутологичных секреторных продуктов нейтрофилов в комплексе с основной терапией с целью оптимизации коррекции дисбиотических состояний репродуктивной системы женщин, повышения качества лечения больных с бактериальным вагинозом, а также для дальнейшего более детального изучения механизмов бактерицидности продуктов нейтрофилов.

Положения, выносимые на защиту

1. Функциональный ответ нейтрофилов периферической крови на стимуляцию in vitro бактериями различных видов неодинаков: нейтрофилы активно фагоцитируют Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и в меньшей степени - Bifidobacterium spp. При этом, фагоцитоз кишечных палочек и золотистого стафилококка сопровождается существенным, а лакто- и бифидобактерий - менее значительным усилением лизосомальной и НСТ-редуцирующей активности нейтрофильных гранулоцитов.

2. Нейтрофильные гранулоциты периферической крови и их секреторные продукты участвуют в регуляции микробиоценоза влагалища: при нормальном микробиоценозе они существенно не влияют на его состав, при дисбиоценозе — обладают селективной бактерицидностью, подавляя рост условно-патогенной флоры (гарднерелл, стафилококков, кишечной палочки, протея, дрожжеподобных грибов), при этом не изменяя содержание в вагинальной слизи резидентных бактерий (лактобактерий).

3. Продукты секреции, полученные из неактивированных нейтрофилов периферической крови (супернатанты), обладают широким спектром антимикробной активности и подавляют рост Е. coli (штамм М-17), S. aureus (штамм 209), Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp.

4. Предшествующая активация нейтрофилов взвесью бактериальных клеток приводит к изменению бактерицидных свойств медиаторов, секретируемых гранулоцитами, при этом спектр антимикробной активности определяется характером индуктора секреции.

Апробация работы

Основные положения работы доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции "Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины" (Чита, 2003); III конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2003); конференции "Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов" (Челябинск, 2004); научной сессии "Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения"; VIII всероссийском форуме с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, 2004).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Андреева, Юлия Сергеевна

126 Выводы

1. Функциональный ответ нейтрофилов на стимуляцию in vitro бактериями различных видов неодинаков: нейтрофилы активно фагоцитируют Escherichia coli (штамм М-17), Staphylococcus aureus (штамм 209), Lactobacterium и в меньшей степени - Bifidobacterium. При этом, фагоцитоз кишечных палочек и золотистого стафилококка сопровождается существенным, а лактобактерий и бифидобактерий - менее значительным усилением лизосомальной и НСТ-редуцирующей активности нейтрофильных гранулоцитов.

2. Инкубация in vitro нейтрофилов, их секреторных продуктов с вагинальным содержимым женщин с нормальным микробиоценозом, существенно не влияет на видовой состав микрофлоры вагинальной слизи.

3. У женщин с бактериальным вагинозом инкубация вагинального секрета с взвесью нейтрофилов, продуктами их секреции существенно изменяет структуру микробиоценоза: в секрете снижается содержание гарднерелл, стафилококков, Escherichia coli, протея и дрожжеподобных грибов, количество лактобактерий и бифидобактерий не изменяется. Инкубация in vitro вагинальной слизи с гепаринизированной кровью подавляет условно-патогенную флору и оказывает стимулирующее действие на рост лактобактерий.

4. Нейтрофилы периферической крови, инкубированные in vitro в течение 30 минут при температуре +37°С в отсутствии индукторов секреции, выделяют наружу продукты с широким спектром антимикробной активности, они подавляют рост эталонных штаммов кишечной палочки, золотистого стафилококка, лактобактерий и бифидобактерий.

5. Предварительная инкубация нейтрофилов in vitro с взвесью частиц латекса, кишечной палочки, стафилококка, лактобактерий и бифидобактерий приводит к изменению спектра бактерицидной активности секретируемых нейтрофилами антимикробных продуктов. Если в качестве индуктора секреции применяется взвесь стафилококка или кишечной палочки, то секреторные продукты нейтрофилов утрачивают бактерицидность по отношению к этим же штаммам бактерий. Индукция нейтрофилов лактобактериями также приводит к потере бактерицидности супернатантов по отношению к Escherichia coli (штамм М-17), Staphylococcus aureus (штамм 209). Активация нейтрофилов бифидобактериями, наоборот, сопровождается выработкой бактерицидных продуктов, подавляющих рост золотистого стафилококка и лактобактерий.

6. Нейтрофилы и их секреторные продукты участвуют в регуляции измененного микробиоценоза влагалища при бактериальном вагинозе, поскольку обладают селективной бактерицидностью: они подавляют рост условно-патогенной флоры и не влияют на резидентные бактерии влагалищного биотопа.

128

Заключение

Изучение регуляторной функции нейтрофилов является одной из наиболее актуальных и малоисследованных проблем современной иммунологии. Определено влияние нейтрофилов и их медиаторов на систему мононуклеарных фагоцитов, воспалительно-репаративные ответы тканей, эритропоэз, противоопухолевую устойчивость, нейрогуморальные механизмы регуляции, стресс-резистентность организма животных и человека (Бабаева А.Г., 1985; Власов А.В., 1991; Зурочка А. В., 1991; Третьякова И.Е., 1991, 2003; Чукичев А.В., 1996; Симбирцев А.С., 1998; Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 1999; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). Сформулирована концепция о важной роли нейтрофилов и их продуктов в регуляции различных звеньев гомеостаза организма (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001).

Нейтрофилы относятся к тканевым фагоцитирующим клеткам (Пигаревский В.Е., 1982, 1992; Бережная Н.М., 1988; Бакуев М.М., 1992; Воробьев А.А., Медуницин Н.В., 1995; Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д. и др., 1996; Ройт А., Бростофф Дж. и др., 2000; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). В тканях нейтрофилы осуществляют все свои эффекторные функции, участвуя в антимикробных и воспалительных реакциях. В последние годы показано, что значительная часть этих клеток покидает ткани и мигрирует на поверхность слизистых оболочек, где они и погибают (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). Остается неясным, каков биологический смысл такого "марша смерти" нейтрофилов в слизистый биослой.

Не исключено, что, мигрируя на поверхность эпителия и разрушаясь в результате некробиоза или апоптоза, нейтрофилы выделяют наружу антимикробные продукты своих лизосом, которые, обладая бактерицидностью, влияют на микрофлору, заселяющую слизистые оболочки.

Ранее было показано, что в секретах репродуктивной системы женщин содержится значительное количество нейтрофилов (Телешева Л.Ф., 2000; Bainton D.F., 1995). В этой связи возникло предположение, что одной из функций цервикальных и вагинальных нейтрофилов является участие в регуляции микробиоценоза этих биотопов. Данное предположение и определило цель исследования - выяснить роль нейтрофилов и их секреторных продуктов в регуляции микробиоценоза влагалища здоровых женщин и женщин с бактериальным вагинозом.

Для решения поставленной задачи нами было проведено иммунологическое и микробиологическое обследование 103 женщин в возрасте 19-35 лет, из которых 32 женщины имели установленный диагноз -бактериальный вагиноз, а остальные были здоровыми. Исследования проводились в первой фазе менструального цикла. У всех пациенток при обследовании были исключены трихомониаз, гонорея, сифилис, ВИЧ-инфекция, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, генитальный герпес и цитомегаловирусная инфекция.

Прежде чем изучить способность нейтрофилов и их секреторных продуктов влиять на микробиоценоз влагалища здоровых женщин и женщин с бактериальным вагинозом, нами была исследована способность бактерий, наиболее часто заселяющих влагалище, влиять на функциональный статус нейтрофилов.

Функциональная активность нейтрофилов периферической крови была изучена после активации различными видами микроорганизмов (S. aureus (штамм 209), Е. coli (штамм М-17), Lactobacterium spp, Bifidobacterium spp.) и частицами латекса. Проведенные исследования позволили установить, что нейтрофилы способны фагоцитировать частицы латекса, условно-патогенные и непатогенные микроорганизмы, при этом поглотительная функция нейтрофилов была минимальной по отношению к бифидобактериям. Это свидетельствует о том, что фагоцитоз является универсальной функцией нейтрофилов, но бифидобактерий ("Бифидумбактерин сухой", ЗАО "Экополис", г. Ковров) обладают устойчивостью к захвату нейтрофильными гранулоцитами.

Способность нейтрофилов к внутриклеточному киллингу оценивалась с помощью НСТ-теста, позволяющего определить активность кислородзависимых систем бактерицидности, являющихся ведущими интралейкоцитарными микробоцидными факторами в процессе фагоцитоза. Процент клеток, восстанавливающих НСТ после активации микроорганизмами и латексом, был выше исходного уровня. Значимые отличия наблюдались при индукции нейтрофилов частицами латекса, Е. coli и S. aureus. Индексы индуцированного стафилококками и латексом НСТ-теста, выраженные в условных единицах, были достоверно выше базальной реакции, а при индукции лакто- и бифидобактериями - значимо не отличались от исходного уровня. По-видимому, кислородзависимые механизмы играют значительную роль в борьбе с Е. coli, S. aureus. Подобный эффект отмечен и в работах Белоцкого С.М., Филюковой О.Б. (1986) и Мазурова Д.В., Дамбаевой С.В. (2000). В то же время пероксидазные системы нейтрофилов, вероятно, не играют такой роли в инактивации лакто-и бифидобактерий.

Лизосомальная активность не изменялась при действии частиц полистирольного латекса, лакто- и бифидобактерий в сравнении с исходным уровнем свечения лизосом и была выше после взаимодействия нейтрофилов с Е. coli, S. aureus. Это позволяет предполагать, что в деградации Е. coli и S. aureus играют определенную роль гидролитические ферменты, заключенные в лизосомах нейтрофильных гранулоцитов.

В результате проведенных исследований нами получены данные о том, что внутриклеточные киллинговые системы нейтрофилов активируются в большей степени продуктами Е. coli (штамм М-17) и S. aureus (штамм 209), чем Lactobacterium spp. (препарат "Лактобактерии сухой", фирма "ИмБио", г. Нижний Новгород) и Bifidobacterium spp. (препарат "Бифидумбактерин сухой", ЗАО "Экополис", г. Ковров).

Учитывая, что нейтрофилы на поверхности слизистых оболочек оказывают антимикробное действие, по-видимому, не столько за счет внутриклеточного, сколько внеклеточного киллинга, важно было оценить бактерицидные свойства их секреторных продуктов.

Для решения этой задачи прежде всего, было изучено исходное состояние влагалищной флоры, а затем определено влияние на ее состав гепаринизированной крови, лейкоцитарной взвеси, чистой взвеси нейтрофилов и супернатантов неактивированных и активированных нейтрофилов.

Для проведения исследований в день опыта у женщины забирали 0,1 мл вагинального содержимого в пробирку с 0,9 мл изотонического раствора хлорида натрия и 15 мл крови из локтевой вены в пробирку с антикоагулянтом. Цельную гепаринизированную кровь использовали в качестве тестируемого образца в опыте № 2. Лейкоцитарную взвесь получали из гепаринизированной крови после седиментации эритроцитов и использовали в 3 опыте. Выделение чистой взвеси нейтрофилов проводили на двойном градиенте растворов фиколла-верографина. Выделенные клетки доводили до концентрации 5x106 кл/мл и использовали для опыта № 4. Для опыта № 5 использовали секреторные продукты неактивированных нейтрофилов, которые получали после инкубации клеток (концентрация 5x106 кл/мл) при температуре + 37°С в течение 30 минут без индукторов секреции. После этого клетки центрифугировали 20 мин при 3x10 об/мин, полученный супернатант фильтровали через мембранные фильтры и сразу использовали для тестирования. Секреторные продукты активированных нейтрофилов получали после инкубации клеток (концентрации 5x106 кл/мл) в тех же условиях, но в присутствии вагинального содержимого. После л центрифугирования при 3x10 об/мин, полученный супернатант пропускали через мембранные фильтры и сразу использовали в опыте № 6.

Для регистрации возможного влияния нейтрофилов, их секреторных продуктов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови на микрофлору влагалища использовали классический метод определения бактерицидной активности (Иммунол. методы . , 1981). 0,9 мл каждого тестируемого образца соединяли с 0,1 мл вагинального содержимого. Для контроля использовали 0,9 мл физиологического раствора (опыт № 1). Смесь инкубировали в течение 30 мин при температуре +37°С.

После инкубации из контрольной и опытных пробирок производили высев количественным методом на 5% кровяной, желточно-солевой агар, на тиогликолиевую среду, среду MRS и Сабуро. Через 48 часов инкубации в эксикаторе со свечой изучали рост микроорганизмов, определяли степень обсеменения вагинальной слизи, выделяли чистые культуры и проводили их идентификацию.

У здоровых женщин из влагалища в основном высевались лактобактерии, в 23 % случаев встречались коагулазонегативные стафилококки и в единичных случаях - дрожжеподобные грибы и Е. coli, что совпадало и с литературными данными (Костюк О.П., Чернышова Л. И. и др., 1998; Коршунов В.М., Володин Н.Н. и др., 1999; Воробьев А.А., Лыкова Е.А., 1999; Анкирская А.С., Муравьева В.В., 2000; Кира Е.Ф., 2001; Валышев А.В., Елагина Н.Н. и др., 2001; Кафарская Л.И., Коршунова О.В. и др., 2002; Кудрявцева Л.В., Ильина Е.Н. и др., 2003).

Содержание лактобактерии в пробе под действием нейтрофилов, их секреторных продуктов, гепаринизированной крови и лейкоцитарной взвеси существенного не менялось. Нейтрофилы значимо снижали лишь содержание коагулазонегативных стафилококков в вагинальной слизи. На дрожжеподобные грибы и E.coli все тестируемые образцы оказывали бактерицидное действие, однако значимых отличий по сравнению с контролем выявлено не было. Таким образом, супернатант неактивированных нейтрофилов и активированных нейтрофилов, лейкоцитарная взвесь и гепаринизированная кровь существенно не влияли на состав флоры влагалища здоровых женщин.

Учитывая полученные результаты, было продолжено исследование бактерицидной активности нейтрофилов периферической крови, их секреторных продуктов, а также лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови в отношении представителей влагалищной флоры женщин с бактериальным вагинозом. Данное заболевание представляло наибольший интерес, так как при бактериальном вагинозе наблюдаются значительные нарушения микробиоценоза влагалища, характеризующиеся снижением удельного веса лактобактерий и повышением уровня условно-патогенных микроорганизмов (Муравьева В.В., Анкирская А.С., 1996; Wilks М., Thin R.N. et al., 1984; Harnmann R., Kronibus A. et al., 1987). Кроме этого, одним из проявлений такого состояния является нормальное содержание лейкоцитов в вагинальной слизи (Кафарская Л.И., Коршунова О.В. и др., 2002) и практически полное отсутствие классической воспалительной реакции.

Установлено, что у женщин с бактериальным вагинозом из влагалища выделяется более широкий спектр микроорганизмов, чем у здоровых женщин. Наряду с лактобактериями, которые определялись в более низких титрах, из влагалища в 78% случаев высевали гарднереллы, в 30% случаев встречались коагулазонегативные стафилококки и в единичных случаях -дрожжеподобные грибы, бифидобактерии, Е. coli и протей, что совпадает с данными литературы (Коршунов В.М., Володин Н.Н. и др., 1999; Кира Е.Ф., 2001; Кудрявцева JI.B., Ильина Е.Н. и др., 2003).

При исследовании влияния нейтрофилов и их медиаторов на флору вагинальной слизи было отмечено снижение содержания в секрете количества стафилококков под действием секреторных продуктов нейтрофилов, лейкоцитарной взвеси и гепаринизированной крови. Инкубация с вагинальным секретом очищенной фракции нейтрофилов не оказывали значимого влияния на содержание стафилококков, вероятно потому, что у женщин с бактериальным вагинозом фагоцитарная функция нейтрофилов подавлена (Смольникова JI.A., 1999; Долгушина В.Ф., Смольникова JI.A. и др., 2001).

Нейтрофилы, супернатант неактивированных и активированных нейтрофилов, лейкоцитарная взвесь и гепаринизированная кровь значимо снижали содержание гарднерелл в вагинальной слизи. По-видимому, супернатанты активированных и неактивированных нейтрофилов содержат токсические формы кислорода, губительно действующие на анаэробную флору. Кроме того, IgG- антитела, которые в больших количествах определяются в сыворотке и вагинальной слизи женщин с бактериальным вагинозом (Смольникова JI.A., 1999; Долгушина В.Ф., Смольникова JI.A. и др., 2001), обладают опсоническими свойствами и могут стимулировать адгезию, дегрануляцию нейтрофилов и облегчать киллинг микроорганизмов (Азов Н.А., Маянский А.Н., 1985; Барсуков А.А., Годков М.А. и др., 2004).

При изучении влияния продуктов нейтрофилов на лактофлору было обнаружено незначительное бактерицидное действие фильтрата и супернатанта на эти бактерии. Вместе с тем было установлено, что добавление цельной крови к вагинальному содержимому женщин с бактериальным вагинозом, стимулирует рост лактобактерий. Это может быть связано с наличием факторов роста для лактобактерий в гепаринизированной крови. Вероятно, циклические менструальные кровотечения имеют биологический смысл, возможно, именно так ежемесячно осуществляется саморегуляция состава флоры генитального тракта.

В результате проведенных исследований можно сделать вывод о том, что нейтрофилы и их секреторные продукты оказывают регулирующее и нормализующее влияние на состав флоры слизистых оболочек, тем самым, участвуя в селективной деконтаминации влагалищного биотопа. Бактериальный вагиноз - это эпителиальная инфекция, и, по-видимому, дефицит локальной лейкоцитарной реакции может быть одной из причин развития вагинального дисбиоза. В то же время восполнение этих клеток в секрете нормализует влагалищную флору.

В представленных опытах кровь, взвесь нейтрофилов, их медиаторы вносились в вагинальный секрет сразу после их выделения. Таким образом, оценивалась суммарная бактерицидность всех выделенных из нейтрофилов факторов: и короткоживущих (в основном это метаболиты кислорода) и долгоживущих (бактерицидные пептиды и ферменты лизосом).

Для исключения действия быстроразрушающихся метаболитов кислорода, а также для изучения зависимости спектра бактерицидной активности секреторных продуктов нейтрофилов от характера индукции секреции, был изменен дизайн исследования. Для опыта использовались супернатанты неактивированных нейтрофилов и нейтрофилов, активированных в течение 30 минут при температуре +37°С in vitro в присутствии различных индукторов секреции (частиц полистирольного латекса, S. aureus (штамм 209), Е. coli (штамм М-17), Lactobacterium spp., Bifidobacterium spp.). Бактерицидность секреторных продуктов оценивалась через 30 дней после хранения при температуре -15°С. Спектр антимикробной активности супернатантов определялся по отношению к тем же штаммам микроорганизмов. Для определения бактерицидности применялся упрощенный фотонефелометрический метод О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (Иммунологич. методы . , 1981). Для этого в пробирки наливали по 4,5мл стерильного 5% мясопептонного бульона. С целью изучения дозозависимого эффекта в опытные пробирки добавляли по 1,0 мл, 0,5 и 0,1мл секреторных продуктов неактивированных нейтрофилов и нейтрофилов, активированных взвесью контрольных штаммов и частицами латекса, недостающий обьем до 1мл восполняли 0,9% раствором хлорида натрия. Для контроля использовали 1мл физиологического раствора. Затем во все пробирки вносили по одной капле 24-часовой культуры кишечной палочки (плотность взвеси 0,46-0,48, которую определяли на ФЭКе с зеленым светофильтром при длине волны 540 нм). Содержимое пробирок тщательно перемешивали и стерильной пипеткой отбирали по 2 мл для измерения на ФЭКе оптической плотности (Д). Смесь, оставшуюся в пробирках, инкубировали в термостате при температуре +37°С 3 часа. После этого вновь измеряли оптическую плотность содержимого пробирок.

Бактерицидную активность (БА) вычисляли следующим образом:

До через 3 часа - Д0 перед инкубацией

БА, % = 100--х ЮО,

Дк через 3 часа - Дк перед инкубацией где До - оптическая плотность в опыте,

Дк - оптическая плотность в контроле.

Таким образом, определяли бактерицидную активность секреторных продуктов нейтрофилов по отношению к Е. coli и S. aureus.

Для определения бактерицидной активности на лактобактерии использовали модифицированную жидкую питательную среду МРС ("НИЦФ", г. Санкт - Петербург), а для бифидобактерий использовали тиогликолиевую среду (ОАО "Биомед" им. И.И. Мечникова) и исследования проводили по той же схеме.

При действии секреторных продуктов неактивированных нейтрофилов отмечено снижение содержания всех видов микроорганизмов в исследуемой пробе. При этом бактерицидность супернатанта неактивированных нейтрофилов на стафилококки была в пределах 14-46%, на эшерихии - 4590%, на лактобактерии - 49-80%, и самые высокие показатели бактерицидности были при действии на бифидобактерии - 98-105%. Повышение бактерицидных свойств секреторных продуктов неактивированных нейтрофилов с увеличением дозы было отмечено только при действии супернатанта на Е. coli (штамм М-17), на другие микроорганизмы бактерицидность супернатанта существенно не менялась в зависимости от его дозы.

При изучении спектра антимикробной активности супернатантов нейтрофилов, активированных латексом, определили, что бактерицидность секреторных продуктов была ниже бактерицидного действия супернатанта неактивированных нейтрофилов (СНН), при действии на все тестируемые культуры, но достоверное снижение эффекта было отмечено только при действии на Е. coli.

Секреторные продукты нейтрофилов, активированных бифидобактериями, обладали бактерицидной активностью и превосходили бактерицидный эффект супернатанта неактивированных нейтрофилов при действии на S. aureus и Lactobacterium spp. В то же время при действии на Е. coli бактерицидность супернатанта нейтрофилов, активированных бифидобактериями (САНВ), была ниже бактерицидного эффекта СНН.

Снижение бактерицидности наблюдалось при действии супернатанта нейтрофилов, активированных стафилококком, на лактобактерии и на стафилококки; при действии на бифидобактерии и Е. coli бактерицидный потенциал сохранялся, хотя он был значительно ниже уровня бактерицидности супернатанта неактивированных нейтрофилов.

При действии секреторных продуктов нейтрофилов, активированных эшерихиями и лактобактериями, на Е. coli и S. aureus была отмечена низкая бактерицидная активность, а при влиянии на лактобактерии - этот показатель имел достоверно более высокие значения.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что интактные нейтрофилы секретируют длительно сохраняющиеся бактерицидные продукты, обладающие широким спектром антимикробного действия, влияющие на рост S. aureus (штамм 209), Е. coli (штамм М-17),

Lactobacterium spp. и Bifidobacterium spp. Аналогичным (и даже более сильным) эффектом обладают супернатанты, полученные из нейтрофилов, индуцированных взвесью бифидобактерий. Это, по-видимому, связано с описанным выше отсутствием у бифидобактерий способности активировать нейтрофилы. В то же время, предварительная инкубация нейтрофилов с взвесью других, изученных нами, индукторов секреции приводит к уменьшению или полному исчезновению у супернатантов части бактерицидной активности по отношению к некоторым видам микроорганизмов, использованных для индукции клеток. Так, преинкубация нейтрофилов со взвесью S. aureus (штамм 209) и Е. coli (штамм М-17) сопровождается потерей бактерицидных свойств супернатантов относительно этих микроорганизмов, в то время как их антимикробная активность к лакто- и бифидобактериям — сохраняется. Такая избирательная потеря бактерицидности, по-видимому, связана с тем, что антимикробные пептиды и ферменты лизосом обладают определенной специфичностью своего действия на различные группы микроорганизмов, и предварительная инкубация нейтрофилов с этими штаммами сопровождается расходованием (истощением) этих продуктов в супернатантах.

Нейтрофилы содержат различные биологически активные продукты, в том числе и высокотоксичные, которые образуются в процессе созревания клетки или синтезируются вновь после активации и накапливаются в гранулах (Borregaard N., Cowland J., 1997). Биохимический состав гранул различен. На сегодняшний день известно четыре основных типа гранул, однако с помощью градиентного центрифугирования их можно разделить на большее количество фракций, ряд которых содержит не смесь, а отдельные вещества, например миелопероксидазу, дефенсины, желатиназу и так далее (Прийма О. Б., 1997). При этом механизмы функциональной мобилизации различных секреторных органелл могут быть независимы друг от друга. На этапах выделения секреторных продуктов нейтрофил частично или полностью утрачивает свои гранулы. При дегрануляции содержимое гранул выливается в околоклеточное пространство, что и обуславливает бактерицидность супернатантов неактивированных нейтрофилов (Алексеев Н.А., 2002).

Нейтрофил оснащен богатым набором рецепторов, которые позволяют ему чутко и дифференцировано реагировать на малейшие изменения окружающей среды. Связывание рецепторов нейтрофила с бактериальными компонентами приводит к активации клетки. Активированный нейтрофил решает эффекторные задачи одним из двух способов: либо с помощью фагоцитоза, либо путем секреции биологически активных веществ (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). Характер дегрануляции во многом определяется природой возбуждающего агента (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001). Воздействие различных стимулов вызывает у нейтрофила функциональные ответы, реализуемые через рецепторзависимую генерацию внутриклеточных вторичных мессенджеров. Взаимодействие лигандов с рецепторами может вызвать развитие либо определенного ответа, либо последовательно всех мобилизационных и эффекторных реакций. Нейтрофилы, по-видимому, способны в ответ на различные стимулы секретировать биологически активные продукты определенного состава. Известно, что связывание рецепторов, в частности, с хемотаксическими пептидами, вызывает хемотаксис и дегрануляцию, с С5а-компонентом комплемента - хемотаксис, дегрануляцию, генерацию супероксида, с CR1, CR3FcyRI-III - эндоцитоз, дегрануляцию, респираторный взрыв (Smolen Y.E., Boxer L.A., 1995). Важнейшей чертой секреторной дегрануляции являются неодинаковые направленность и скорость мобилизации гранул. Первичные лизосомы сливаются главным образом с мембраной фагосом, их ферменты наиболее активны при кислой рН. Мембраны вторичных и третичных гранул преимущественно сливаются с наружной цитоплазматической мембраной, то есть выделяют свое содержимое во внешнюю среду (Алексеев Н.А., 2002). Что касается скорости функциональной мобилизации, то наиболее быстро высвобождаются третичные, затем специфические, и последними подключаются азурофильные гранулы. Опыты с изучением кинетики секреции желатиназы активированными нейтрофилами свидетельствуют о том, что дегрануляция желатинсодержащих частиц опережает мобилизацию специфических и азурофильных гранул. Прилипание к пластику и стеклянным бусам сопровождается дегрануляцией специфических, но не азурофильных гранул. Есть данные о том, что азурофильные гранулы реагируют только на корпускулярные агенты (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Эти факты свидетельствуют о том, что механизмы секреции различных типов гранул обособлены друг от друга. Они позволяют вовлекать в реакции определенные продукты, необходимые для реализации конкретной функции нейтрофила, что мы и обнаружили при изучении бактерицидной активности СНН и САН. Мы думаем, что эти механизмы лежат в основе различного бактерицидного ответа нейтрофилов на разные бактериальные стимулы.

Полученные результаты позволяют заключить, что нейтрофилам и их секреторным продуктам принадлежит определенная роль в регуляции микробиоценоза влагалища женщин, и, наряду с эпителиальными клетками влагалища, вагинальной средой, микрофлорой генитального тракта и другими факторами неспецифической защиты, они участвуют в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек репродуктивной системы женщины.

Кроме того, на поверхности слизистых цервикального канала и влагалища бактерицидный эффект нейтрофилов может быть усилен за счет кооперации нейтрофилов и микроорганизмов, входящих в состав нормальной флоры генитального тракта (рисунок 1). Связывание компонентов микробной стенки с То11-подобными рецепторами нейтрофила может приводить к активации внутриклеточных мессенджеров с последующей секреторной дегрануляцией (Сидоренко С.В., 2001; Артамонов Р.Г., 2004; Маянский А.Н., Маянская И. В., 2004).

То11-подобные и другие рецепторы <нейтрофил дегрануляция

Активация

->ОН

-*н202

->Т02 галоиды катепсины

-►лизоцим -*-БПИ -►дефенсины лактоферрин миелопероксидаза

Аутоцитотоксическое

Стафилококки Грибы рода Candida Е. coli

Бифидобактерии Лактобактерии

I X • •I" s< н2о2

НОС1 действие

Селективная бактерицидность

Рисунок 1. Кооперация нейтрофилов и лактобактерий в повышении бактерицидности секретов генитального тракта женщин

В результате такого процесса из гранул высвобождаются бактерицидные вещества: микробоцидные ферменты, антибактериальные катионные белки, нейтральные сериновые протеазы, металлопротеиназы, кислые гидролазы, продукты респираторного взрыва - перекись водорода, гидроксильный радикал, галогены, атомарный кислород, оксид азота, пероксинитрит и другие, в том числе и миелопероксидаза. Возможно, этот фермент взаимодействует с Н2О2, которая продуцируется лактобактериями влагалища женщин, и хлоридами вагинального секрета с образованием гипохлорной кислоты (НОС1) - мощного оксиданта, способствующего избирательному киллингу микроорганизмов (рисунок 1), а кислая рН во влагалище усиливает активность миелопероксидазы. Работы Бакуева М.М. и Саидова М.З. (1991) подтверждают расходование и снижение активности миелопероксидазы секреторных продуктов нейтрофилов после контакта клеток с живыми культурами микроорганизмов. Селективная бактерицидность продуктов нейтрофилов может быть обусловлена тем, что гранулы этих клеток гетерогенны, скорость их функциональной мобилизации неодинакова (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001) и при активации нейтрофилов через различные рецепторы, в том числе и То11-подобные, клетка секретирует неодинаковый набор антимикробных медиаторов.

Таким образом, нейтрофилы и их секреторные продукты участвуют в регуляции измененного микробиоценоза влагалища, поскольку обладают селективной бактерицидностью: они подавляют рост условно-патогенной флоры и не влияют на резидентные бактерии влагалищного биотопа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Андреева, Юлия Сергеевна, 2005 год

1. Азов Н.А. Механизмы опосредованной реактивности нейтрофила к пептидогликану Escherichia coli / Н.А. Азов, А.Н. Маянский // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. — 1985. № 10. - С. 66-69.

2. Акопян Т.Э. Бактериальный вагиноз и беременность / Т.Э. Акопян // Акушерство и гинекология. 1996. - № 6. - С. 3-5.

3. Алексеев Н.А. Клинические аспекты лейкопении, нейтропении и функциональных нарушений нейтрофилов / Н.А. Алексеев. СПб.: Фолиант, 2002.-416 с.

4. Андреев С.В. Некоторые особенности местного иммунитета влагалища у женщин с острым и хроническим кольпитом /С.В. Андреев, А.Ю. Волянский // Актуальные вопросы микробиологии, эпидемиологии и иммунологии инфекционных болезней. Харьков, 1993. - С. 33.

5. Анкирская А.С. Видовой состав и некоторые биологические свойства лактобацилл при различных состояниях микроэкологии влагалища / А.С. Анкирская, В.В. Муравьева // Акушерство и гинекология. 2000. - № 3. -С. 26-28.

6. Артамонов Р.Г. Сепсис. Новая концепция патогенеза и лечения Электронный ресурс. / Р.Г. Артамонов. Режим доступа: http://www.med-21 vec com/referats/ref 26.htm. - 24.11.2004.

7. Бабаева А.Г. Регенерация и система иммуногенеза / А.Г. Бабаева. М: Медицина, 1985. - 256с.

8. Бакуев М.М. К вопросу о реактивности циркулирующих нейтрофилов периферической крови человека / М.М. Бакуев // Бюл. экспер. биол. и медицины. 1992. - Т. 144, №11. с. 542-544.

9. Бакуев М.М. Особенности секреции миелопероксидазы и хемилюминесцентного ответа нейтрофилов человека при контакте состимуляторами различной природы / М.М. Бакуев, М.З. Саидов, А.А. Бутаков //Иммунология. 1991. -№ 1.-С. 15-17.

10. Барсуков А.А. Роль праймированных нейтрофилов в повреждении паренхиматозных органов и развитии воспалительной патологии / А.А. Барсуков, М.А. Годков, В.М. Земской и др. // Успехи современной биологии. 2004. - Т. 124, № 6 - С. 542-554.

11. Бахов Н.И. Концепция апоптоза / Н.И. Бахов, Ю.Ф. Майчук, А.В. Корнев // Иммунология. 1997. - № 3. - С. 62-64.

12. Белоцкий С.М. Хемилюминесценция нейтрофилов человека под влиянием условно-патогенных микробов / С.М. Белоцкий, О.Б. Филюкова, С.Б. Пашутин и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1986. № 3. - С. 89-92.

13. Беляков И.М. Иммунная система слизистых / И.М. Беляков // Иммунология. 1997. - № 4. - С. 7-13.

14. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз / Н.М. Бережная. Киев: Наук. Думка, 1988. - 189с.

15. Бодяжина В.И. Хронические воспалительные заболевания женских половых органов / В.И. Бодяжина. М., 1978. - 319с.

16. Боровиков В. П. STATISTICA: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов / В.П. Боровиков. СПб.: Питер, 2001. -656с.

17. Бурмистрова A.JI. Иммунный гомеостаз и микросимбиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника / A.JI. Бурмистрова. Челябинск: Челябинский Дом печати, 1997. - 216с.

18. Бухарин О.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О.В. Бухарин, П.В. Васильев. Томск: Изд-во Томск, ун-та, 1974. - 207 с.

19. Валышев А.В. Анаэробная микрофлора женского репродуктивного тракта / А.В. Валышев, Н.Н. Елагина, О.В. Бухарин // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. - № 4. - С. 78-84.

20. Власов А.В. Секреторная функция нейтрофилов при гнойной инфекции: дис. .канд. мед. наук / Власов А.В. Челябинск, 1991. - 137 с.

21. Воробьев А. А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции / А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова // Журн. микробиологии. 1999. - № 6. - С. 102-105.

22. Воробьев А.А. Клеточная теория иммунитета И.И. Мечникова и концепция антиинфекционной резистентности / А.А. Воробьев, Н.В. Медуницин // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. — 1995. -№ 3. С. 36-42.

23. Глазкова Л.К. Бактериальный вагиноз: метод, рекомендации / Л.К. Глазкова, Н.М. Герасимова. Екатеринбург, 1995. - 32с.

24. Гланц С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. — М.: Практика, 1999.-450с.

25. Добротина Н.А. Лизоцим как модулятор иммунологических реакций / Н.А. Добротина, Ж.А. Казацкая, Г.А. Емельянова // Вопр. мед. химии. 1984. - Т. 33, Вып. 4 - С. 66-69.

26. Долгушин И.И. Влияние активированных и интактных нейтрофилов на функции моноцитов периферической крови / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, С.И. Марачев // Иммунология. 1986. - № 2. - С. 79-80.

27. Долгушин И.И. Влияние нейтрофилокинов на иммунный ответ мышей / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, Л.Я. Эберт // Бюл. экспер. биол. и медицины. 1988. - Т. 11, № 9. - С. 330-331.

28. Долгушин И.И. Изучение кооперации нейтрофилов с клетками иммунной системы в норме и патологии: метод, рекомендации / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, Л.Я. Эберт и др. Челябинск, 1992. - 19с.

29. Долгушин И.И. Иммунный ответ и пути его коррекции при экспериментальных травмах: дис. . д-ра мед. наук / И.И. Долгушин. -Челябинск, 1980.-417с.

30. Долгушин И.И. Местная противоинфекционная защита репродуктивного тракта женщин различного возраста / И.И. Долгушин, Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина / Журн. микробиологии. 2000. - № 2. - С. 86-89.

31. Долгушин И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. Екатеринбург: УрОРАН, 2001. - 288 с.

32. Долгушин И.И. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и репаративных реакций поврежденной ткани / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, А.В. Чукичев, O.JI. Колесников // Вестник Рос. Акад. Мед. Наук. 2000. - № 2. - С. 14-19.

33. Долгушин И.И. Секреторные продукты нейтрофилов и иммунный ответ / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, А.В. Власов // Иммунология. 1990.-№3.-С. 35-37.

34. Долгушина В.Ф. Местный иммунитет половой системы у беременных с генитальной инфекцией / В.Ф. Долгушина, Л.Ф. Телешева, И.И. Долгушин // Журн. микробиологии. 2000. - № 2. - С. 92-95.

35. Долгушина В.Ф. Состояние факторов местной иммунной защиты репродуктивного тракта при вагинозе у беременных / В.Ф. Долгушина, JI.A. Смольникова, И.И. Долгушин // Журн. микробиологии. 2001. - № 4. - С. 8993

36. Жогин А.В. Влияние нейтрофилокинов на показатели гемостаза в норме и при инфекционной патологии : автореф. дис. . канд. мед. наук / А.В. Жогин. Челябинск, 2003. - 22 с.

37. Зеленин А.В. Взаимодействие аминопроизводных акридина с клеткой / А.В. Зеленин. М.: Наука, 1971. - 231с.

38. Зурочка А.В. Иммунобиологические свойства секреторных продуктов нейтрофилов (нейтрофилокинов): дис. . д-ра мед. наук. / А.В. Зурочка. СПб., 1991. -231с.

39. Изучение кооперации нейтрофилов с клетками иммунной системы в норме и патологии: метод, рекомендации для аспирантов, науч. работников, слушателей курса клинической иммунологии и студентов./ под ред. Д.А. Глубокова. -Челябинск, 1992. 19с.

40. Иммунологические методы / под ред. Г. М. Фримеля. М.: Медицина, 1987.-472с.

41. Иммунологические методы исследования: учебное пособие / под ред. Е.А. Олейникова и Л.Я. Эберта. Саранск, 1981. - 92с.

42. Карпищенко А.И. Медицинские и лабораторные технологии / А.И. Карпищенко. СПб: Интермедика, 1998. - с. 294-297.

43. Кафарская Л.И. Микробная экология влагалища / Л.И. Кафарская, О.В. Коршунова, Б.А. Ефимов и др. // Журн. микробиологии. 2002. - № 6. — С. 91-99.

44. Кетлинский С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, К.М. Калинина. Спб.: Гиппократ, 1998. - 156с.

45. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз (клиника, диагностика, лечение): автореф. дис. .д-ра мед. наук / Е.Ф. Кира. Санкт-Петербург, 1995.-44с.

46. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз / Е.Ф. Кира. Спб.: «Нева-Люкс», 2001.-363с.

47. Кира Е.Ф. Клиника и диагностика бактериального вагиноза / Е.Ф. Кира// Акушерство и гинекология. 1994. - № 2. - С. 32 -35.

48. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения / В.Н. Кокряков. Спб.: Наука, 1999. - 162с.

49. Колесников О.Л. Влияние неспецифической иммуностимуляции на стресс реактивность и выбор адаптационной стратегии организма: дис. .д-ра мед. наук / О.Л. Колесников. - Челябинск, 1998. - 257с.

50. Коршунов В.М. Изучение бифидофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста / В.М. Коршунов, З.А. Гудиева, Б.А. Ефимов и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. - № 4. - С. 74-78.

51. Коршунов В.М. Микроэкология влагалища: коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах: учеб. пособие / В.М. Коршунов, Н.Н. Володин, Б.А. Ефимов, и др. М., 1999. - 79с.

52. Коршунов В.М. Нормальная микрофлора кишечника. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника: пособиедля врачей и студентов / В.М. Коршунов, Н.Н. Володин, Б.А. Ефимов. М.: МЗ РФ, 1997.-40с.

53. Костюк О.П. Физиологические и терапевтические свойства лактобактерий / О.П. Костюк, Л.И. Чернышова, А.П. Волохова // Педиатрия. -1998.- №1.- С. 71-76.

54. Кубанова А.А. Состояние проблемы бактериального вагиноза / А.А. Кубанова, В.А. Аковбян, С.М. Федоров и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 1996. - № 3. - С. 22 -26.

55. Кудрявцева Л.В. Бактериальный вагиноз: пособие для врачей / Л.В. Кудрявцева, Е.Н. Ильина, В.М. Говорун и др. Москва, 2003. - 58с.

56. Кулаков В.И. Экологические проблемы репродуктивного здоровья / В.И. Кулаков, Н.П. Кирбасова, Л.П. Пономарева, Т.В. Лопатина // Акушерство и гинекология. 1993. -№ 1. - С. 12-14.

57. Ларсен Б. Микрофлора родовых путей в норме / Б. Ларсен // Репродуктивное здоровье: пер. с англ. М.: Медицина, 1988. - Т.1.- С. 17-45.

58. Лебедев К.А. Иммунограмма в клинической практике / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина. М.: Наука, 1990. - 224с.

59. Лызлова С.Н. Лизосомальные белки нейтрофилов факторы антимикробной защиты клеток / С.Н. Лызлова // Вопр. мед. химии. - 1987. — Т. 33, Вып. 5.-С. 43-48.

60. Мазуров Д.В. Оценка внутриклеточного киллинга стафилококка фагоцитами периферической крови с помощью проточной цитометрии / Д.В. Мазуров, С.В. Дамбаева, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - № 2. - С. 57-59.

61. Маянский А.Н. Апоптоз: начало будущего / А.Н. Маянский, Н.А. Маянский, М.А. Абаджиди, М.И. Заславская // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - № 2. - С. 88 -94.

62. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука. - 1989. - 254с.

63. Маянский А.Н. Проблемы управления фагоцитарными механизмами иммунитета / А.Н. Маянский, A.JI. Невмятуллин, Н.А. Маянский // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. 1995. -№3.-С. 21-27.

64. Маянский А.Н. Реактивность и медиаторные функции интестинальных эпителиоцитов в системе мукозального гомеостаза / А.Н. Маянский, И.В. Маянская // Иммунология 2004. - Т. 25, № 3 — С. 185-192.

65. Маянский А.Н. Реактивность нейтрофила / А.Н. Маянский, А.Н. Галиуллин. Казань: Изд - во Казан, ун-та, 1984. - 158с.

66. Маянский А.Н. Современная эволюция идеи И.И. Мечникова о внутрисосудистом воспалении / А.Н. Маянский // Иммунология. 1995. - № 4.-С. 8-14.

67. Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетрозолия: метод, рекомендации / А.Н. Маянский, М.К. Виксман. Казань, 1979. - 11с.

68. Маянский Д.Н. Об оценке функций нейтрофилов человека по их реакции на бактерийный стимул / Д.Н. Маянский, Э.Г. Щербакова // Антибиотики. 1983. - Т. 28, № 7. - С. 521-526.

69. Маянский Д.Н. Фагоцитарные реакции в патологии / Д.Н. Маянский, Д.Д. Цырендоржиев, А.А. Зубахина и др. // Первый Рос. конгресс по патофизиологии. М., 1996. - С. 269.

70. Муравьева В.В. Особенности микроэкологии влагалища при бактериальном вагинозе и вагинальном кандидозе / В.В. Муравьева, А.С. Анкирская // Акушерство и гинекология. 1996. - № 6. - С. 27-30.

71. Нестерова И.В. Цитокиновая регуляция и функционирующая система нейтрофильных гранулоцитов / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 4, №2.- С. 43-47.

72. Никанкина JI.B. Различия в активности НАДФ-оксидазы лейкоцитов новорожденных и взрослых доноров / JI.B. Никанкина, Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская и др. // Иммунология. 2001. - № 4. - С. 29-32.

73. О совершенствовании контроля за заболеваниями, передающимися половым путем: приказ М-ва здравоохранения РФ № 286 от 7 декабря 1993. 27с.

74. Об унификации лабораторных методов исследования в диагностике гонореи и трихомониаза: приказ М-ва здравоохранения СССР № 936 от 12 июля 1985 г.-М., 1985.-25с.

75. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений: приказ М-ва здравоохранения СССР № 535 от 22 апреляя 1985 г. М., 1985. - 27с.

76. Петровская В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии / В.Г. Петровская, О.П. Марко. М., 1986. -231с.

77. Печковский Д.В. Усиление бактерицидной, но не фагоцитарной активности нейтрофилов человека под действием интерлейкина-6 / Д.В. Печковский, М.И. Потапнев, А.В. Вознюк // Иммунология. 1993. - № 6. - С. 29-30.

78. Пигаревский В.Е. Гипотеза о резорбтивиой клеточной резистентности как особой форме антимикробной защиты организма / В.Е. Пигаревский // Архив патологии. 1992. - Т. 54, Вып. 8 - С. 40-45.

79. Пигаревский В.Е. О секреторной активности полиморфноядерных лейкоцитов / В.Е. Пигаревский // Архив патологии. -1982.-Т. 44, №5.-С. 3-12.

80. Пинегин Б.В. Индигенные микроорганизмы как иммуномодуляторы /Б.В. Пинегин, В.М. Коршунов, М.М. Шкарупета, Н.Н. Мальцева // Сборник «Иммуномодуляторы». М., 1987. — С. 149-156.

81. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы / А.Е. Платонов. М.: Изд-во РАМН, 2000. - 50с.

82. Потапнев М.П. Влияние цитокинов воспаления на фагоцитоз и бактерицидную активность нейтрофилов человека / М.П. Потапнев, Д.В. Печковский // Иммунология. 1992. - № 3. - С. 34-36.

83. Потапнев М.П. Иммунорегуляция антимикробной активности нейтрофилов / М.П. Потапнев, Д.В. Печковский // Иммунология. 1994. -№ 5.-С. 4-5.

84. Потапнев М.П. Стимуляция бактерицидной активности нейтрофилов человека лимфоидными клетками, активированными интерлейкинами-2: влияние цитокинов воспаления / М.П. Потапнев, Д.В. Печковский // Бюл. экспер. биол. 1992. - № 12. - С. 641-643.

85. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении / М.П. Потапнев // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 34-40.

86. Прийма О. Б. Неферментные катионные белки лейкоцитов периферической крови фактор неспецифической реакции организма на повреждение / О. Б.Прийма // Клин. мед. - 1997. - № 2. - С.4.

87. Проскуряков С.Я. Биология окиси азота / С .Я. Проскуряков, А.Г. Конопляников, А.И. Иванников, В.Г. Скворцов // Успехи современной биологии. 1999. - Т. 119. - С. 380 -395.

88. Роговин В.В. Антимикробные белки и пептиды нейтрофильных лейкоцитов / В.В. Роговин, Р.А. Муравьев. 1992. - № 6. - С. 854-859. - (Изв. АН. Серия «Биология»).

89. Ройт А. Иммунология: пер. с англ. / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000. - 581с.

90. Сапин М.Р. Иммунная система человека / М.Р. Сапин, А.Е. Этинген. М., 1996. - 304с.

91. Симбирцев А.С. Интерлейкин-2 и рецепторный комплекс интерлейкина-2 в регуляции иммунитета / А.С. Симбирцев // Иммунология. -1998.- №6.-С. 3-8.

92. Симбирцев А.С. Цитокины регуляторы защитных функций организма. Клиническое применение интерлейкина-1 / А.С. Симбирцев // Иммунология Урала. - 2001. - С. 125-126.

93. Смольникова JI.A. Клинико-иммунологические особенности бактериального вагинозау беременных: автореф. дис. .канд. мед. наук / JI.A. Смольникова. Челябинск, 1999. - 24с.

94. Телешева Л.Ф. Иммунологические факторы секретов репродуктивного тракта женщин: автореф. дис. . докт. мед. наук / Л.Ф. Телешева. Челябинск, 2000. — 41с.

95. Телешева Л.Ф. Механизмы противоинфекционной защиты репродуктивного тракта женщин / Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина, И.И.

96. Долгушин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1998.-№4.-С. 85-90.

97. Теплова С.Н. Секреторный иммунитет / С.Н. Теплова, Д.А. Алексеев. Челябинск, 2002. - 200с.

98. Теплякова М.В. Секреторный иммунитет влагалища при остром неспецифическом сальпингите / М.В .Теплякова, А. А. Радионченко, И. А. Рыжова // Акушерство и гинекология. 1991. - № 6. - С. 56-57.

99. Томова А.С. Роль фактора некроза опухоли а во взаимодействии макро- и микроорганизма / А.С. Томова, Ю.М. Романова, А.Л. Гинцбург // Вестник Российской Акад. Мед. Наук. 2005. - № 1. — С. 24-29)

100. Тотолян А.А. Клетки иммунной системы: серия учебных пособий / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб., 1999. - Т. 1-2.

101. Тотолян А.А. Современные подходы к диагностике иммунопатологических состояний / А.А. Тотолян // Медицинская иммунология. 1999. - Т. 1, № 1-2. - С. 75-108.

102. Третьякова И.Е. Регуляторная функция нейтрофилов в норме и в условиях механической травмы: дис. . канд. мед. наук / И.Е. Третьякова. -Челябинск, 1991.- 147с.

103. Третьякова И.Е. Роль секреторных продуктов нейтрофилов в регуляции локальных реакций воспаления и иммунитета: дис. .докт. мед. наук / И.Е. Третьякова. Челябинск, 2003. - 320с.

104. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов / И.С.Фрейдлин. М: Медицина, 1984. - 271с.

105. Хаитов P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М.: Медицина, 2000. - 430с.

106. Хаитов P.M. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2001. № 4. — С. 46.

107. Хаитов P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 3-8.

108. Хэм А. Гистология: пер с англ. / А. Хэм, Д. Кормак. М.: Мир, 1983.-Т. 5-294с.

109. Цвелев Ю.В. Анаэробная инфекция в акушерско-гинекологичес-кой практике / Ю.В. Цвелев, Е.Ф. Кира, В.И. Кочеровец, В.П. Баскаков. -Спб.: Питер, 1995.-313с.

110. Черкасов С.В. Роль биологических свойств вагинальных лактобацилл в процессах колонизации / С.В. Черкасов, Т.М. Забирова, А.В, Сгибнев и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2003.-№4.-С. 61-64.

111. Чукичев А.В. Иммунобиологическая активность нейтрофилов при травматической болезни (клинико-экспериментальное исследование): дис. докт. мед наук / А.В. Чукичев. Челябинск, 1996. - 325с.

112. Шварцман Я.С. Местный иммунитет / Я.С. Шварцман, Л.Б. Хазенсон. Л., 1978. - 222с.

113. Ярилин А.А. Симбиотические взаимоотношения клеток иммунной системы / А.А. Ярилин // Иммунология. 2001. - № 4. - С. 16-20.

114. Arnold R.R. Bactericidal activity of human lactoferrin: differentiation from stasis of iron deprivation / R.R. Arnold, J.E. Russel, W.J. Champion et al. // Infect. Immunol. 1982. - Vol. 35. - P. 792-799.

115. Baggiolini M. Exocytosis by neutrophils / M. Baggiolini, B. Dewald // Regulat. Leucocyte Funct. New-York - London. - 1984. - Vol. 64, № 5. - P. 959-966.

116. Bainton D.F. Morphology of neutrophils, eosinophils and basophils / D.F. Bainton // Williams Hematology. 5th ed. 1995. - P. 753-765.

117. Bartlett J.G. Bacterial flora of the vagina: quantitative study / J.G. Bartlett, B.F. Polk // Rev. Infect. Dis. 1984. - № 6, Suppl 1. - P. 67-72.

118. Boris S. Role played by lactobacilli in controlling the population of vaginal pathogens / S. Boris, C. Barbes // Microbes infect. 2000. -Vol. 2, № 5. -P. 543-546.

119. Borregaard N. Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocyte / N.Borregaard, J. Cowland // Blood. 1997.- Vol. 89, № 10. - P. 3503.

120. Botha A.J. Postinjury neutrophil priming and activation states: therapeutic challenges editorial. / A.J. Botha, F.A. Moore, E.E. Moore et al. // Shock. 1995. - Vol. 3, № 3. - P. 157-166.

121. Boxer L.A. Lactoferrin deficiency assotiated with altered granulocyte function / L.A. Boxer, T.D. Cats, R.A. Hack et al. // N. Engl. J. Med. 1982. -Vol. 307.-P. 404-410.

122. Catlin B. W. Gardnerella vaginalis: characteristics, clinical consideration, and controversies / Catlin B. W. // Clin. Microbial. Rev. 1992. -Vol. 5, №3.-P. 213-237.

123. Chan R.C.Y. Competitive exclusion of uropathogens from human uroepithelial cells by Lactobacillus whole cells and cell wall fragments / R.C.Y. Chan, G. Reid, R.T. Irvin, A.W. Bruce // Infection and Immunity. 1985. - Vol. 47.-P. 84-89.

124. Cohen M.S. Fagocytes, O2 reduction and hydroxyl radical / M.S. Cohen, B.E. Britigan, D.J. Hasselt et al. // Rev. Infect. Dis. 1988. -Vol. 10. - P. 1088.

125. Densen P. Granulocytic phagocytes / P. Densen, W. R. Clark, W.M. Nauseff//Infectious Diseases. 5 th ed. 1995. - P. 78 -101.

126. Domachowscke J.B. Phagocytes / J.B. Domachowscke, H.L. Malech

127. In book: Clinical immunology: principles and practice, -ed.- in -chief R. Rich, ed. T.A. Fleisher, B.D. Schwartz, W.T. Shearer, W. Strober. St. Louis, Mosby, 1996.-Vol.1.-P. 392-407.

128. Domachowscke J.B. Gene expression in epithelial cells in response to pneumovirus infection / J.B. Domachowscke, C.A. Bonville, H.F. Rosenberg // Respir. Res. 2001. - Vol. 2. - P. 225-231.

129. Eschenbach D.A. Prevalence of hydrogen peroxide-producing Lactobacillus species in normal women and women with bacterial vaginosis / D.A. Eschenbach, P.R. Davick, B.L. Williams et al. // J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol. 27, №2.-P. 251-256.

130. Fleischmann J. Opsonic activity of MCP-1 and MCP-2 cationic peptides from rabbit alveolar macrophages / J. Fleischmann, M.E. Selsted, R.I. Lehrer // Diagn. Microbiol. Dis. 1985. - Vol. 3. - P. 233-242.

131. Gardner H. Haemophilus vaginalis a new defined specific infection previously classified «поп- specific» vaginitis / H. Gardner, C.D. Duces // Am. J. Obstet. Gynecol. 1995. - № 69. - P. 962-976.

132. Giorgi A. Identification of vaginal lactobacillus: from asimptomatic women / A. Giorgi, S. Torrani, F. Dellaglio, Stola, L.Bernuzzi // Microbiol. Rew. -1987. Vol. 94. -P. 399-403.

133. Godaly G. Neutrophil recruitment, chemokine receptors, and resistance to mucosal infection / G. Godaly, G. Bergsten, L. Hang et al. // J. Leukoc. Biol. 2001. - Vol. 69. - P. 899-906.

134. Goto K. Generation of interleucin-l-like lymphocyte-stimulating factor at polymorphonuclear leucocytes / K. Goto, S. Nakamura, F. Goto, M. Yoshmaga // Brit. J. Exp. Pathol. 1984. - Vol. 65, № 5. - P. 521-532.

135. Gregoire A.T. The glicogen content of the human vaginal epithelial tissue / A.T. Gregoire, O. Kandil, W.S. Ledger // Fertil. steril. 1979. - Vol. 22. -P. 64-68.

136. Harnmann R. Quantitative studies on the vaginal flora of asymptomatic women and patients with vaginitis and vaginosis / R. Harnmann, A. Kronibus, N. Lang, H. Werner // Zbl. Bact. Hyg. A. 1987. - Vol. 265. - P. 451461.

137. Hill J. A. Human vaginal leucocytes and the effects of vaginal fluid on lymphocyte and macrophage defense functions / J.A. Hill, D.J. Anderson // Am.J. Obstet. Gynecol. 1992. - Vol. 166, № 2. - P. 720-726.

138. Holgate S.T. The bronchial epithelium as a key regulator of airway inflammation and remodeling in asthma / S.T. Holgate, P.M. Lackie, D.E. Davies et al. // Clin. Exp. Allergy. 1999. - Vol. 29, Suppl. 2. - P. 90-95.

139. Huggins G.R. Vaginal odors and secretions / G.R. Huggins, G. Preti // Clin. Obstet. Gynecol. 1981. - Vol. 24. - P. 355-358.

140. Ishibashi Y. Generation of a phagocytosis stimulating factor by polymorphonuclear neutrophils during phagocytosis / Y. Ishibashi, T. Yamashita // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1981. - Vol. 64, № 2. - P. 181-189.

141. Ishibashi Y. Identification of precursor of phagocytosis-stimula-ting factor in guinea polymorphonuclear neutrophils / Y. Ishibashi, T. Yamashita // Infec. Immun. 1985. - Vol. 50, № 2. - P. 500-505.

142. Ishibashi Y. Phagocytosis-stimulating factor derived from polymorphonuclear neutrophils / Y. Ishibashi, T. Yamashita // Sakagu. 1989. -Vol. 61, №1.-P. 21-26.

143. Jolly J. Minimal criteria for the identification of Gardnerella vaginalis isolated from the vagina / J. Jolly // J. Clin. Pathol. 1983. - Vol. 36, № 4. - P. 476-478.

144. Kaye D. In vitro inhibition of growth of Neisseria gonorrhoeae by genital microorganisms / D. Kaye, M.E. Levinson // Sex. Transm. Dis. 1977. -Vol. 4,№ l.-P. 1-3.

145. Klebanoff S.J. Oxygen-dependent cytotoxic mechanisms of phagocytes / S.J. Klebanoff // Adv. Host Defense Mech. 1982. - Vol.1. - P. 111.

146. Klebanoff S. J. Control of the microbial flora of the vagina by Н2Ог -generating Lactobacilli / S.J. Klebanoff, S.L. Hillier, D.A. Eschenbach, A.M. Waltersdorph // J. Infect. Dis. 1991. - Vol. 169. -P. 94-109.

147. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase. Occurrence and biological function / S.J. Klebanoff // Peroxidases in Chemistry and Biology. Boca raton, FL. -1991,- P. 1-36.

148. Klebanoff S.J. Viricidal effect of Lactobacillus acidophilus on human immunodeficiency virus type I: possible role in heterosexual transmission / S.J. Klebanoff, R.W. Coombs // J. Exp. Med. 1991. - Vol. 174, № 1. - P.289-292.

149. Kowanko I.C. Stimulation of neutrophil respiratory burst and lysosomal enzyme release by human interferon-gamma / I.C. Kowanko, A. Ferrante // Immunology. 1987. - Vol. 62, № 1. - P. 149-151.

150. Kuhns D.B. Increased cell-associated IL-8 in human exudative and A 23187 treated peripheral blood neutrophils / D.B. Kuhns, J.I. Iallin // J. Immunol. - 1995.-Vol. 154, № 12.-P. 6556-6562.

151. Larsen B. Vaginal flora in health and disease / B. Larsen // Clin. Obstet. Gynecol. 1993. - Vol. 36, № 1. - P. 1-10, 107 - 210.

152. Larsen В. Vaginal microbial flora composition and influences of host physiology / B. Larsen, R.P. Galask // Ann. Intern. Med. 1982. - № 96. - P. 926 -930.

153. Lehrer R.L Interaction of human defensins with E. coli. Mechanisms of bactericidal action / R.L Lehrer, A. Barton, K.A. Daher et al. // J. Clin. Invest. -1989.-Vol. 84.-P. 553-561.

154. Levin N.A. Mechanisms for vaginal ion movementsin women / N.A. Levin, G. Wagner // J. Phisiol. 1978. - Vol. 284. r P. 172-173.

155. Ley K. Sequantial contribution of L- and P-selectin to leucocyte rolling in vivo / K. Ley, D.C. Bullard, M.L. Arbones et al. // J. Exp. Med. -, 1995. -Vol. 181,№2.-P. 669-675.

156. Lillard I. W. Mechanisms for induction of acguired host immunity by neutrophil peptide defensins / I. W. Lillard, P.N. Boyaka, O. Chertov et al. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1999. - Vol. 96, № 2. - P. 651-656.

157. Mantel Ch. Physical characterization and polymerization during iron saturation of lactoferrin, a myelopoietic regulatory molecules with suppressor activity / Ch. Mantel, K. Miyazava, H.L. Broxmeyer // Adv. Exp. Med. Biol. -1994. Vol. 357. -P. 121-132.

158. Mattoli S. Allergen-induced generation of mediators in the mucosa / S. Mattoli // Environ. Helth Respect. 2001. - Vol. 109. - P. 553-557.

159. McGrory T. The interaction of Lactobacillus acidophilus and Trichomonas vaginalis in vitro / T. McGrory, K. Meysick, L.T. Lemchuk-Favel, G.E. Garber // J. Parasitol. 1994. - Vol. 80, № 1. - P. 50-54.

160. McLean N.W. Growth inhibition of metronidazol-susceptible and metronidazol-resistant strains of Gardnerella vaginalis by Lactobacilli in vitro / N.W. McLean, J.A. McGroarty // Appl. Environ. Microbiol. 1996. - Vol. 62, № 3.-P. 1089-1092.

161. Mills P. R. Airway epithelial cells, cytokines, and pollutants / P. R. Mills, R.J. Davies, J.L. Devalia // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999. - Vol. 160, №5, Pt 2. - P. S38-S43.

162. Morin A. In vitro inhibition of Neisseria gonorrhoeae growth by strict anaerobes / A. Morin, S.A. Saheb, J.G. Bisaillon et al. // Infect. Immun. 1980. -Vol. 28, №3.-P. 766-770.

163. Morin A. Inhibitors of Neisseria gonorrhoeae produced in liquid medium by Bacteroides fragillis and Eubacterium limosum / A. Morin, S.A. Saheb, J.G. Bisaillon et al. // Microbios. 1982. - Vol. 34 (135). - P. 31-40.

164. Morin A. Preliminary characterization of inhibitors of Neisseria gonorrhoeae produced in vitro by Eubacterium limosum / A. Morin, J.G. Bisaillon, R. Beaudet et al. // Can. J. Microbiol. 1984. - Vol. 30, № 2. - P. 251-259.

165. Murphey S. Lung defenses against infection: a clinical correlation / S. Murphey, A.L. Florman // Pediatrics. 1983. - Vol. 72, № 1. - P. 1-15.

166. Ogandele M.O. A novel anti-inflammatory activity of lysozyme: modulation of serum complement activation / M.O. Ogandele // Mediators Inflamm. 1998. - Vol. 7, № 5. p. 363-365.

167. Nagy E. Antibiosis between bacteria isolated from the vagina of women with and without signs of bacterial vaginosis / E. Nagy, M. Petterson, P.A. Mardh // APMIS. 1991. - Vol. 99, № 8. - P. 739-744.

168. Neumann G. Zur bedeutung von Scheideinhaltsstoffen als Terrainfactoren bei Genitalmykosen / G. Neumann, J. Gartzke, H. Boyme, H. Shitzbart // Zbl. Gynecol. 1984. - Vol. 106, № 5. - P. 326- 330.

169. Ocana V.S. Characterization of a bacteriocin-like substance produced by a vaginal Lactobacillus salivarius strain / V.S. Ocana, A.A. de Ruiz Holgado, M.E. Nader-Macias // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - Vol. 65, № 12. - P. 5631-5635.

170. Ocana V.S. Growth inhibition of Staphylococcus aureus by H2O2 -producing Lactobacillus paracasei subsp. paracasei isolated from human vagina /

171. V.S. Ocana, A.A. de Ruiz Holgado, M.E. Nader-Macias // FEMS Immunol. Med. Microbiol.-1999.- Vol. 23, №2. -P.87-92.

172. Oseas R.S. Lactoferrin: a promoter of polymorphonuclear leucocyte adhesivenes / R.S. Oseas, H.H. Yan, R.L. Baehner, L.A. Boxer // Blood. — 1981. — Vol. 57.-P. 939-945.

173. Paavonen J. Physiology and ecology of the vagina / J. Paavonen // Scand. J. Infect. Dis. 1983. - Vol. 40. - P. 31-35.

174. Pahlson C. The ecologically wrong vaginal lactobacilli / C. Pahlson, P.G. Larsson // Med. Hypothesis. 1991. - Vol. 36. - P. 126-130.

175. Pybis V. The effect of pH on growth and succinate production by Prevotella bivia / V. Pybis, A.B. Onderdonk // Microb. Ecol. Health Dis. 1996. -Vol. 9.-P. 19-25.

176. Rakita R.M. Differential inactivation of Escherichia coli membrane dehydrogenases by a myeloperoxidase-mediate antimicrobial system / R.M.

177. Rakita, B.R. Michel, H. Rosen // Biochemistry. 1990. - Vol. 29. - P. 1075-1080.

178. Rakita R.M. Penicillin-binding protein inactivation by human neutrophil myeloperoxidase / R.M. Rakita, H. Rosen // J. Clin. Invest. 1991. -Vol. 88. - P. 750 -754.

179. Rastogi D. Host-bacterial interactions in the initiations of inflammation / D. Rastogi, A.G. Rather, A. Prince // Paediatr. Respir. Rev. 2001. -Vol. 2.-P. 245-252.

180. Reid G. Prevention of urinary tract infections in rats with an indigenous Lactobacillus casei strain / G. Reid, R.C.Y. Chan, A.W. Bruce, J.W. Costerton // Infect. Immunol. 1985. - Vol. 49. - P. 320-324.

181. Reid G. Examination of strains of Lactobacilli for properties that may influence bacterial interference in the urinary tract / G. Reid, R.L. Cook, A.W. Bruce // J. Urology. 1987. - Vol. 138. - P. 330 -335.

182. Rosen F.S. Oxidation of Escherichia coli iron centers by the myeloperoxidase-mediate microbial system / F.S. Rosen, S.J. Klebanoff // J. Biol. Chem. 1982. - Vol. 257. - P. 13731-13735.

183. Rosen H. Loss of DNA- membrane interactions and cessation of DNA synthesis in myeloperoxidase-treated Escherichia coli / H. Rosen, J. Orman, R.M. Rakita et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87. - P. 10048-10052.

184. Rossel-Goffeng A. Fetal fibronectin and microorganisms in vaginalfluid of healthy pregnant women / A. Rossel-Goffeng, E. Hoist, I. Milson et al. // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. 1996. - Vol. 75, № 6. - P. 520-525.

185. Sautter R. L. Sequential vaginal culture from normal young women / R. L. Sautter, W.J. Brown // J. Clin. Microbiol. 1980. - № 11. - P. 479^184.

186. Shau H. Modulation of natural killer and lymphokine-activated killer cell cytotoxicity by lactoferrin / H. Shau, A. Kim, H. Golub // J. Leukocyte Biol. -1992.-Vol. 51.-P. 343-349.

187. Silva M. Antimicrobial substance from a human Lactobacillus strain / M. Silva, N.V. Jacobus, C. Deneke, S.L. Gorbach // Antimicrob. Agents Chemother. 1987. -Vol. 31. -P. 1231-1233.

188. Smith R. Interleukin -1 stimulates granule exocytosis from human neutrophils / R. Smith, S.C. Speziale, B. Bowman // Int. J. Immunopharmacol. -1986.- Vol. 8.-P. 33-40.

189. Smith R. Properties of interleukin -1 as a completesecretogogue for human neutrophils / R. Smith, S.C. Speziale, B. Bowman // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985. - Vol. 130. - P. 1233 -1240.

190. Smolen J.E. Function of neutrophils / J.E. Smolen, L.A. Boxer // Williams Hematology. 5 th ed. 1995. - P. 779 - 798.

191. Walter M.J. Interleukine 12 p40 production by barrier epithelial cells during airway inflammation / M.J. Walter, N. Kajiwara, P. Karanja et al. // J. Exp. Med.-2001.-Vol. 193.-P. 339-351.

192. Wilks M. Quantitative bacteriology of the vaginal flora in genital disease / M. Wilks, R.N. Thin, S. Tabaqchall // J. Med. Microbiol. 1984. - Vol. 18, №2.-P. 217-231.

193. Yang D. The role of mammalian antimicrobial peptides and proteins in awakening of innate host defenses and adaptive immunity / D. Yang, O. Chertov, J.J. Oppenheim // Ctll. Mol. Life Sci. 2001. - Vol. 58, № 7. p. 978989.

194. Zallen G. Circulating postinjury neutrophils are primed for the rease of proinflammatory cytokines / G. Zallen, E.E. Moore, J.L. Johnsen et al. // J. Trauma. 1999. - Vol. 46, № 1. - P. 42-48.

195. Zeman K. Granulocyte factor and graftversushost reaction in rats. 1. The inhibitory effect of granulocyte factor on the local graftversushost reaction in rats / K. Zeman, H. Tchorzewski // Arch. Immunol. Ther. Exp. 1987. - Vol. 35, №3.- P. 333-338.