Влияние женских половых стероидных гормонов на механизмы внутри- и внеклеточной бактерицидности фагоцитирующих клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат биологических наук Смирнова, Татьяна Георгиевна

• Смирнова, Татьяна Георгиевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Смирнова, Татьяна Георгиевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. Роль женских половых стероидных гормонов в регуляции функций неспецифического иммунитета при беременности. Обзор литературы

1.1. Состояние врожденного иммунитета во время беременности

1.2. Эффекты женских половых стероидных гормонов на системном и местном уровнях

1.3. Влияние женских половых стероидных гормонов на клетки врожденного иммунитета

1.3.1. Геномный механизм действия стероидных гормонов

1.3.2. Негеномный механизм действия стероидных гормонов

1.3.3. Основные функции клеток врожденного иммунитета

1.3.4. Рецепторы женских половых стероидных гормонов на клетках врожденного иммунитета

1.3.5. Влияние женских половых стероидных гормонов на функциональную активность моноцитов

1.3.6. Влияние женских половых стероидных гормонов на функциональную

активность нейтрофильных гранулоцитов

ГЛАВА II. Материалы и методы

2.1. Объекты исследования

2.2. Количественное определение половых стероидных гормонов

2.3.Иммунологические методы исследования

2.3.1. Выделение нейтрофилов и мононуклеаров из периферической крови

2.3.2. Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов (моноцитов) периферической крови с помощью НСТ-теста

2.3.3. Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов (моноцитов) периферической крови с помощью световой микроскопии

2.3.4. Обнаружение нейтрофильных и моноцитарных внеклеточных ловушек

при окраске акридиновым оранжевым

2.4. Метод статистической обработки результатов

ГЛАВА III. Изучение функциональной активности нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови женщин в первую и

во вторую фазы менструального цикла

ГЛАВА IV. Изучение функциональной активности нейтрофилов при воздействии женских половых стероидных гормонов

4.1. Влияние эстриола на функциональный статус нейтрофильных гранул оцитов

4.2. Влияние прогестерона на функциональный статус нейтрофильных гранулоцитов

4.3. Влияние эстрадиола на функциональный статус нейтрофильных

гранулоцитов

ГЛАВА V. Изучение функциональной активности моноцитов при воздействии женских половых стероидных гормонов

5.1. Влияние эстриола на функциональный статус моноцитов

5.2. Влияние прогестерона на функциональный статус моноцитов

5.3. Влияние эстрадиола на функциональный статус моноцитов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АПК - антигенпрезентующая клетка АТФ - аденозинтрифосфат АФК - активные формы кислорода ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

ДИ - доверительный интервал

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ - интерлейкин

ИФА - иммуноферментный анализ

К - контрольная группа (чистая фракция клеток с добавлением физиологического раствора)

КП - контроль с пирогеналом (чистая фракция клеток с добавлением пирогенала)

ЛГ - лютеинизирующий гормон

ЛПС - липополисахарид

МВЛ - моноцитарная внеклеточная ловушка

НАДФ - оксидаза - никотинамидадениндинуклеотидфосфат-зависимая оксидаза

НВЛ (NET) - нейтрофильная внеклеточная ловушка

НСТ - нитросиний тетрозолий

П - пирогенал в концентрации 0,02 мкг/мл

ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

РНК - рибонуклеиновая кислота

СРБ - С-реактивный белок

ФМА - форбол миристат ацетат

ФСГ - фолликулостимулирующий гормон

ЭПС - эндоплазматическая сеть

Са++ - кальций

СБ - кластеры дифференцировки

СЯ - рецептор к компонентам комплемента

Е-эстриол

Е( - эстриол в концентрации 2 нг/мл - минимальная концентрация, соответствующая I триместру беременности Е2 - эстриол в концентрации 10 нг/мл - средняя концентрация, соответствующая II триместру беременности

Е3 - эстриол в концентрации 20 нг/мл - максимальная концентрация, соответствующая III триместру беременности

Е1+П - эстриол в концентрации 2 нг/мл (минимальная концентрация) с пирогеналом

Е2+П - эстриол в концентрации 10 нг/мл (средняя концентрация) с пирогеналом

Е3+П - эстриол в концентрации 20 нг/мл (максимальная концентрация) с

пирогеналом

Её - эстрадиол

Её] - эстрадиол в концентрации 1 нг/мл - минимальная концентрация, соответствующая I триместру беременности Е62 - эстрадиол в концентрации 5нг/мл - средняя концентрация, соответствующая II триместру беременности

Её3 - эстрадиол в концентрации Юнг/мл - максимальная концентрация, соответствующая III триместру беременности

Еф+П - эстрадиол в концентрации 1 нг/мл (минимальная концентрация) с пирогеналом

Ес^+П - эстрадиол в концентрации 5нг/мл (средняя концентрация) с пирогеналом

Ес1з+П - эстрадиол в концентрации 1 Онг/мл (максимальная концентрация) с пирогеналом

ER - эстрогеновые рецепторы

FcR - рецептор для Fc - фрагментов иммуноглобулина GPER - G-белковый парный эстрогеновый рецептор Н202 - перекись водорода Ig - иммуноглобулин

ITAM - иммунорецепторный активационный мотив на основе тирозина МНС - главный комплекс гистосовместимости Nf-kB - нуклеарный фактор Каппа В 02 - кислород

РАД-4 - пептидиларгининдеиминза -

PI3K - фосфатидилинозитол-3-киназа

PLC - фосфолипаза С

РКС - протеинкиназа С

PR - прогестеронсвязывающие рецепторы

Рг- прогестерон

Рг, - прогестерон в концентрации 20нг/мл - минимальная концентрация, соответствующая I триместру беременности

Рг2- прогестерон в концентрации 50нг/мл - средняя концентрация, соответствующая II триместру беременности

Рг3 - прогестерон в концентрации 100нг/мл - максимальная концентрация, соответствующая III триместру беременности

Рг)+П - прогестерон в концентрации 20нг/мл (минимальная концентрация) с пирогеналом

Рг2+П - прогестерон в концентрации 50нг/мл (средняя концентрация) с пирогеналом

Рг3+П - прогестерон в концентрации 1 ООнг/мл (максимальная концентрация) с пирогеналом

TNF - фактор некроза опухоли TLR - То11-подобный рецептор

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние женских половых стероидных гормонов на механизмы внутри- и внеклеточной бактерицидности фагоцитирующих клеток»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Беременность является одним из загадочных феноменов иммунологии репродукции [Ширшев C.B., 1996], развитие которой находится под гормональным контролем желез внутренней секреции организма матери и развивающегося плода [Тимошенко Л.В., 1981]. При беременности продукция многих гормонов возрастает, появляются гормоны, которые ранее не синтезировались в организме женщины. В результате происходит образование новых взаимосвязей иммунной и гуморальной систем, новых уровней взаиморегуляции.

В настоящее время известно, что помимо обладания таким общеизвестным свойством как эндокринная и паракринная регуляция, гормоны выполняют важную функцию иммуномодуляторов, обеспечивая взаимодействие и согласованность работы иммунной и эндокринной систем в ходе оплодотворения и наступающей затем беременности [Гадиева Ф.Г., 2001].

Согласно современным представлениям, изменения в иммунной системе беременной женщины сложны и разнообразны, они обеспечивают не только фетопротекцию, но и эффективную противоинфекционную защиту. Факторы врожденного иммуннитета обладают способностью немедленно реагировать на патоген и определяют барьерную функцию пограничных тканей, особенно слизистой [Ширшев C.B., 2009].

Фагоциты (нейтрофилы и моноциты/макрофаги) — основная группа клеток системы врожденного иммунитета, которые могут оказывать свое действие на объект, вызвавший их активацию, реализуя механизмы внутри - или внеклеточной бактерицидности. К механизмам внутриклеточной бактерицидности относится фагоцитоз, т.е. захват и уничтожение объекта в фаголизосомах. Один из механизмов внеклеточной бактерицидности,

реализуемый фагоцитами - это внеклеточный киллинг, т.е. выделение наружу биологически активных продуктов, которые оказывают цитотоксическое, бактерицидное действие. Совсем недавно (в 2004 году) зарубежными учеными был открыт и расшифрован еще один механизм внеклеточной бактерицидности и уничтожения патогенов - формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек [Brinkmann V. et al., 2004]. Данный процесс характеризуется тем, что катионные антимикробные пептиды и протеины нейтрофилов смешиваются с хроматином и высвобождаются во внеклеточное пространство, обеспечивая высокую местную концентрацию антимикробных продуктов нейтрофилов и, в то же время, минимизируют тканевое повреждение посредством связывания гранулярных ферментов [Долгушин И.И. и др., 2009].

С 2010 года, после того как немецкими учеными были обнаружены моноцитарные и макрофагальные внеклеточные ловушки при воздействии наночастиц [Matthias В. et al., 2010], началось их изучение и активно продолжается на сегодняшний день. Моноцитарные и макрофагальные внеклеточные ловушки образуются в ответ на различные активаторы бактериальной и не бактериальной природы [Aulik N.A. et al., 2012; Chow О. et al., 2010; Jonsson В., 2009; Matthias B. et al., 2010; Webster J. et al., 2010]. Показано, что они, также как и нейтрофильные внеклеточные ловушки, состоят из ДНК с солокализованными на ней гистонами, и для их формирования необходима активность НАДФ - оксидазы [Aulik N.A. et al., 2012; Jonsson В., 2009].

Биологическая роль стероидных гормонов в развитии беременности велика, поэтому изучение их влияния на клетки врожденного иммунитета, которые являются важным фактором защиты репродуктивной системы женщины от инфекций, на сегодняшний день актуально.

Цель настоящей работы - изучить in vitro влияние женских половых стероидных гормонов на функциональную активность нейтрофилов и моноцитов.

Основные задачи исследования:

1. Исследовать фагоцитоз, внутриклеточный кислородзависимый метаболизм, количество внеклеточных ловушек нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови женщин в разные фазы менструального цикла.

2. Оценить дозозависимый эффект половых стероидных гормонов (эстриола, эстрадиола, прогестерона) на фагоцитоз, внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность, формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами, выделенными из периферической крови здоровых небеременных женщин в первую и вторую фазы менструального цикла.

3. Изучить совместное действие каждого из гормонов (эстриола, эстрадиола, прогестерона) с пирогеналом на фагоцитоз, внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность, формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами, выделенными из периферической крови здоровых небеременных женщин в первую и вторую фазы менструального цикла.

Научная новизна. Впервые изучено влияние женских половых стероидных гормонов на формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами, выделенными из периферической крови, in vitro. Обнаружено стимулирующее действие изучаемых гормонов на экструзию ДНК во внеклеточное пространство.

Выявлены отличия в функциональной активности нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови женщин в первую и вторую фазы менструального цикла: у женщин во вторую фазу менструального цикла происходит увеличение фагоцитарной активности,

снижение ' внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности нейтрофилов, а также увеличение количества внеклеточных ловушек моноцитов.

Установлено, что эстриол, эстрадиол и прогестерон в концентрациях, характерных для беременности, по отдельности и в комбинации с пирогеналом по-разному модулируют функциональную активность нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови женщин в первую и вторую фазы менструального цикла. Обнаружено, что половые стероидные гормоны увеличивают фагоцитоз и снижают внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов, выделенных у женщин в первую фазу менструального цикла. У женщин во вторую фазу прогестерон в минимальной дозе уменьшает фагоцитоз и активность индуцированного НСТ-теста нейтрофилов. Установлено также, что независимо от фазы цикла эстриол стимулирует формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек, максимальный эффект наблюдается в средней концентрации гормона. Эстрадиол и прогестерон в первую фазу менструального цикла статистически значимо увеличивают количество нейтрофильных ловушек в минимальной и средней концентрациях, а во вторую фазу - в средней концентрации по сравнению с контролем.

Изучаемые гормоны не влияют на фагоцитоз моноцитов периферической крови женщин независимо от фазы цикла. Эстрогены увеличивают внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность моноцитов периферической крови, выделенных у женщин в первую фазу менструального цикла. У женщин во вторую фазу прогестерон в минимальной концентрации уменьшает показатели спонтанного НСТ-теста, а эстриол в средней дозе увеличивает показатели спонтанного НСТ-теста моноцитов периферической крови. Также определено, что женские половые стероидные гормоны в первую фазу менструального цикла статистически

значимо увеличивают количество моноцитарных ловушек во всех концентрациях, а во вторую фазу - в минимальной и средней концентрациях.

Пирогенал независимо от фазы цикла стимулирует образование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами, а также увеличивает показатели индуцированного НСТ-теста моноцитов, выделенных из периферической крови. У женщин в первую фазу менструального цикла пирогенал увеличивает фагоцитоз, а во вторую фазу - показатели индуцированного НСТ-теста нейтрофилов, выделенных из периферической крови.

Несмотря на стимулирующее действие пирогенала в отношении функциональной активности нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови, при комбинации каждого из гормонов с пирогеналом происходит снижение фагоцитоза и внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности фагоцитов по сравнению с эффектом одного пирогенала.

Теоретическое и практическое значение работы. Проведенные исследования позволяют расширить представление о роли стероидных гормонов в антимикробной защите организма беременной женщины и определить их действие на некоторые функции клеток врожденного иммунитета - нейтрофилы и моноциты, не только в физиологических условиях, но и в условиях повышенной бактериальной нагрузки, которые моделировались in vitro путем добавления пирогенала - бактериального липополисахарида.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эстриол, эстрадиол, прогестерон, а также пирогенал стимулируют формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами, выделенными из периферической крови.

2. Женские половые стероиды увеличивают фагоцитарную и снижают внутриклеточную кислородзависимую бактерицидную активность нейтрофилов чистой фракции.

3. Эстриол, эстрадиол и прогестерон не влияют на фагоцитоз моноцитов, выделенных их периферической крови. Эстрогены стимулируют внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность моноцитов мононуклеарной фракции.

4. Независимо от модулирующего действия стероидного гормона (эстриола, прогестерона, эстрадиола) и эффекта пирогенала в отношении внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности и фагоцитоза нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови, их совместная инкубация приводит к подавлению функциональной активности нейтрофилов и моноцитов по сравнению с моноэффектом пирогенала.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на II Международной (IX итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2011), IX Конференции Иммунологов Урала, посвященной 90-летию профессора Льва Яковлевича Эберта (Челябинск, 2011), III Международной (X итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2012), научно-практической всероссийской конференции (школы-семинара) молодых ученых (Тольятти, 2012). Основные результаты проведенных исследований представлены в 20 печатных работах, в том числе 11 статей в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов диссертационных исследований.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3-х глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего работы 74 отечественных и 182 иностранных авторов. Диссертация изложена на 167 страницах компьютерного текста, включает 38 таблиц и 9 рисунков.

ГЛАВА I. РОЛЬ ЖЕНСКИХ ПОЛОВЫХ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Состояние врожденного иммунитета во время беременности

Состояние беременности является иммунологической загадкой, в течение которого организм матери должен предотвратить отторжение антигенно - чужеродного плода и в то же время сохранить достаточную материнскую иммунную защиту необходимую для борьбы с инфекцией [Посидеева Л.В., Сотникова Н.Ю., 2007; Сидорова И.С. и др., 2006; Davis D. et al., 1998]. Уникальность процесса беременности заключается в становлении новых эндокринных взаимодействий, обеспечивающих на качественно новом уровне нормальное сосуществование и развитие двух организмов [Ширшев C.B., 2002]. Существует взаимосвязь иммунной и гуморальной систем в поддержании гомеостаза организма беременной женщины. Большие сдвиги в секреции гормонов, появление дополнительных, связанных с беременностью, индуцируют новые взаимосвязи в этих двух системах, новые уровни взаиморегуляции.

Известны две формы иммунного ответа: врожденный (неспецифический) и приобретенный (адаптивный, специфический), которые рассматриваются как две стадии единого процесса защиты организма. Неспецифический иммунитет является более древней линией защиты организма от инфекций и функционирует, опираясь на воспаление и фагоцитоз [Семенов Б.Ф., Зверев В.В., 2007]. Механизмы врожденного иммунитета обеспечивают быструю элиминацию патогенов и предотвращение инфекции на ранних этапах. Система приобретенного иммунитета выполняет промежуточные функции специфического распознавания и запоминания болезнетворного агента (или чужеродного вещества) и основана на специфических функциях лимфоцитов, которые

распознают чужеродные макромолекулы и реагируют на них либо непосредственно, либо выработкой защитных белковых молекул [Булатова Е.М. и др., 2008].

Для объяснения иммунных механизмов поддержания беременности существует современная гипотеза, основанная на наблюдениях за отношением плацентарных и децидуальных цитокинов у мышей. Согласно этой гипотезе беременность характеризуется усиленным гуморальным и ослабленным клеточноопосредованным ответами, что отражает возросшую активность Т - хелпер 2 лимфоцитов и снижение Т - хелпер 1 [Ширшев C.B., 2009; Min L., Huang S.G., 2009]. Кроме того во время беременности обнаруживаются различия в составе лимфоцитов [Смирнова Т.Д. и др., 2009; Moncharmont P. et al., 1992; Plum J. et al., 1978]. Происходит увеличение количества Т-супрессоров и уменьшение количества Т-хелперов [Аутеншлюс А.И. и др., 1998; Берлев И.В., 1995; Сидорова И.С. и др., 1999; Сидорова И.С. и др., 2006; Luppi P. et al., 2002]. Т.е. перестройка лимфоидных органов при беременности сопровождается мобилизацией супрессорных клеток.

Некоторые авторы придерживаются мнения, что супрессия специфического звена иммунного ответа матери при беременности компенсируется активацией системы естественного (неспецифического, врожденного) иммунитета [Гузов И.И., 2003; Сидорова И.С. и др., 1999; Сидорова И. С. и др., 2006; Davis D. et al., 1998; Herberts С. et al., 2010; Luppi P. et al., 2002; Shibuya T. et al., 1987; Shmagel' K.V, 1994;]. Врожденный иммунитет является первой линией защиты слизистой от патогенов, он исследован в меньшей степени, чем специфический и включает в себя эпителиальный барьер, систему цитокинов, активацию комплемента и фагоцитарный ответ [Лебедева О.П. и др., 2009]. Гранулоциты и мононуклеарные фагоциты контролируют первую линию обороны организма от инфекций, обеспечивают неспецифическую противоинфекционную защиту [Кривохижина Л.В., Осиков М.В., 2005; Шмагель К.В., 2003]. В

цервикальном и вагинальном секретах содержится значительное количество лейкоцитов, среди которых доминирующими являются нейтрофилы [Шишкова Ю.С., 2010]. Покидая ткани и выходя в слизистый биослой, нейтрофильные гранулоциты секретируют биоцидные продукты, которые участвуют в антимикробной защите репродуктивного тракта [Шишкова Ю.С., 2010].

Во время беременности количество лейкоцитов значительно возрастает от первого до второго триместра и остается высоким в третьем триместре [Айламазян Э.К., 2003; Belo L. et al., 2005; Dadelszen P. et al., 1999; MacLean M.A. et al., 1992; Miller E.M., 2009; Shibuya T. et al., 1987]. Лейкоцитоз беременных женщин объясняется нейтрофилией [Айламазян Э.К., 2003; Шмагель К.В., 2003; Dadelszen P. et al., 1999; Davis D. et al., 1998; Faas M.M. et al., 1995; Luppi P. et al., 2002; Matthiesen L. et al., 1995; Minagawa M. et al., 1999; Naccasha N. et al., 2001; Plum J. et al., 1978; Shibuya T. et al., 1987]. По данным литературы, увеличение доли гранулоцитов обнаруживается в первом триместре и остается повышенным на всех этапах беременности по сравнению с небеременными женщинами [Luppi P. et al., 2002; Matthiesen L. et al., 1995; Miller E.M., 2009; Minagawa M. et al., 1999].

Исследование лейкоцитарной формулы крови в течение физиологического гестационного периода показало, что относительное и абсолютное содержание миелоцитов и юных нейтрофилов к концу беременности увеличивается по сравнению с показателями I триместра в 6-7 раз [Балика Ю.Д. Шехтман М.М., 1984]. Авторы отмечают также возрастание численности палочкоядерных нейтрофилов [Шмагель К.В., 2003].

На сегодняшний день взгляды ученых на активацию нейтрофилов при беременности расходятся. Одни авторы сообщают, что функционально нейтрофилы крови беременных находятся в состоянии покоя по данным, полученным в III триместр гестации [Шмагель К.В., 2003; Crocker I.P. et al., 1999]. Показатели спонтанной хемилюминисценции, уровня экспрессии на

мембране молекул адгезии CDllb/CD18 и L-селектина, содержание в плазме лактоферрина, свидетельствующее об активации процессов дегрануляции, не отличаются от таковых, установленных для здоровых небеременных женщин [Crocker I.P. et al., 1999]. У нейтрофильных гранулоцитов также отмечается прогрессирующее в течение беременности уменьшение активности миелопероксидазы, белка, который образуется и вырабатывается активированными нейтрофилами [El-Maallem Н. et al., 1980; Hung Т.Н. et al., 2012; Tsakonas D.P. et al., 1994]. Другие исследователи сообщают, что беременность характеризуется наличием генерализованной активации лейкоцитов [Luppi Р. et al., 2002] с признаками фенотипической и функциональной активации [Dadelszen Р. et al., 1999; Luppi P. et al., 2002; Naccasha N. et al., 2001; Sacks G.P.et al., 1998; Shibuya T. et al., 1991]. Например, циркулирующие гранулоциты демонстрируют повышение спонтанной и стимулированной ФМА-продукции ИЛ-8 по сравнению с нейтрофилами небеременных женщин [Luppi Р. et al., 2002]. Кроме того, циркулирующие уровни продуктов нейтрофильной активации: СРВ, ГМ-КСФ „ и лактоферрин также повышаются при беременности [Belo L. et al., 2005; Miller Е.М., 2009].

Исследование фагоцитарной функции нейтрофилов в течение всего периода развития беременности показало, что процент фагоцитирующих нейтрофилов возрастает с развитием беременности, достигая максимального уровня во второй половине гестации, при этом отмечается не только достоверное увеличение численности потенциальных фагоцитов, но также обнаруживается усиление их поглотительной способности [Шмагель К.В., 2003; Himmelfarb J.H. et al., 1992; Luppi P. et al., 2002; Naccasha N. et al., 2001; Sacks G.P.et al., 1998; Shibuya T. et al., 1987; Shmagel K.V., 1994;]. Например, захват, поглощение и переваривание Candida albicans нейтрофилами беременных выше относительно контроля в исследованиях Barriga С, 1994 [Barriga С. et al., 1994]. Однако встречаются данные, указывающие на то, что

фагоцитоз и фагоцитарный индекс значительно снижаются у беременных в третьем триместре по сравнению с группой небеременных женщин [Guerra-Infante F.M. et al., 1999]. Кроме того в исследовании, проведенном Е1-Maallem, обнаруживается подавление способности убивать и переваривать грибы рода Candida у беременных по сравнению с небеременными женщинами [El-Maallem Н. et al., 1980].

Гранулоциты беременных обладают повышенным количеством поверхностных молекул адгезии [Luppi Р. et al., 2002; Shibuya Т. et al., 1991] и увеличением производства активных форм кислорода [Shmagel' K.V., 1994; Tsukimori К. et al., 2006]. Отмечается возрастание люминолзависимой хемилюминесценции полиморфноядерных лейкоцитов цельной крови и в чистой фракции в течение всей беременности [Shibuya Т. et al., 1987], а также при стимуляции Escherichia coli, частицами пластика, опсонизированным зимозаном. Кроме того, на основе теста спонтанного восстановления НСТ показано повышение бактерицидного потенциала полиморфноядерных лейкоцитов беременных, которое достигает максимального уровня во время родов. В ответ на ФМА нейтрофилы беременных отвечают более интенсивным респираторным взрывом по сравнению с клетками небеременных [Шмагель К.В., 2003]. Но некоторые авторы показывают, что нейтрофилы периферической крови в течение нормальной беременности снижают образование активных форм кислорода [Crocker I.P. et al., 1999; Crocker I.P. et al., 2000]. Отмечают подавление бактерицидной функции нейтрофилов беременных в отношении Candida guilliermondii, Staphylococcus aureus, Escherichia coli [Шмагель K.B., 2003].

Причины противоречий в отношении фагоцитоза и бактерицидности нейтрофилов пока малопонятны. Даже внутри одной работы, посвященной исследованию фагоцитоза при беременности, можно встретить разнонаправленные результаты, однозначная интерпретация которых затруднительна. Так в работе Bjorksten В. в 1978 году показано

одновременное снижение показателей НСТ-теста и усиление хемилюминисценции нейтрофилов беременных при сравнении с соответствующими значениями небеременных [Bjorksten В. et al., 1978]. Кроме того, во время беременности может наблюдаться диссоциация между различными функциями фагоцитов: продукцией супероксид - аниона, адгезией, хемотаксисом и поглощением [Ishida К. et al., 1995]. Одной из возможных причин данного явления может быть изменение липидного спектра сыворотки и мембран нейтрофилов. Снижение уровня ненасыщенных жирных кислот проявляется в ослаблении текучести мембран и блокирует распространение свободно-радикальных процессов и развитие провоспалительных явлений [Шмагель К.В., 2003].

Накопление нейтрофилов в течение гестационного процесса является, с одной стороны, фактором усиления защитного потенциала материнского организма на фоне развивающейся иммуносупрессии, с другой -представляет потенциальную опасность в случае их активации в кровотоке. Последнее требует ужесточения контроля над процессами респираторного взрыва, дегрануляции, экспрессии молекул адгезии и т.д. Отсюда можно предположить, что существующие в литературе противоречия, скорее всего, отражают две стороны одного процесса: нарастание общего фагоцитарного потенциала и лимитирование его проявления на неадекватных стимулах. Ограничения в первую очередь касаются развития деструктивных явлений [Шмагель К.В., 2003].

В отношении изменения количества моноцитов во время беременности существуют различные данные. Одни авторы сообщают, что количество моноцитов возрастает во время беременности [Сидорова И.С. и др., 2006; Davis D. et al., 1998; Faas M.M. et al., 2008; Luppi P. et al., 2002; Naccasha N. et al., 2001; Plum J. et al., 1978], в то время как другие пишут о том, что доля моноцитов остается стабильной на протяжении беременности, однако, наблюдается увеличение регуляторных поверхностных маркеров:

CD 14, CDlla, CD54, CD64 [Сидорова И.С. и др., 2006; Davis D. et al., 1998; Luppi P. et al., 2002].

Моноциты периферической крови беременных находятся в активированном состоянии. Они направляются в фето-плацентарный комплекс, где вырабатывают различные лимфокины и цитокины [Vinatier D., Monnier J.C., 1988]. Наличие провоспалительных факторов в плазме беременной женщины было определено Faas и соавт., которые показали, что инкубация моноцитов с плазмой от беременных женщин активировала этот тип клеток [Faas М.М. et al., 2008]. В ответ на действие эндотоксина моноциты беременных женщин выделяют больше провоспалительных цитокинов, а именно ИЛ-12 [Sacks G.P. et al., 2003; Trinchieri G., Gerosa F., 1996] и Ил-lß [Luppi P. et al., 2002], по сравнению с моноцитами небеременных женщин.

Люминолзависимая хемилюминесценция моноцитов крови и чистой фракции значительно увеличивается в течение всей беременности [Shibuya Т. et al., 1987]. Для моноцитов здоровых беременных женщин характерно ' повышение внутриклеточных активных форм кислорода и поглотительной активности в отношении IgG-опсонизированных эритроцитов человека [Davis D. et al., 1998] и частиц латекса [Plum J. et al., 1978] по сравнению с моноцитами небеременных женщин [Алешкин В.А. и др., 2004; Naccasha N. et al., 2001].

Таким образом, налицо активация системы естественного иммунитета при беременности. Активация системы естественного иммунитета во время беременности обеспечивает эффективную защиту организма от большинства бактериальных инфекций [Гузов И.И., 2003].

1.2. Эффекты женских половых стероидных гормонов на системном и местном уровнях

Жизнедеятельность организма беременной женщины направлена на обеспечение оптимальных условий для развития плода, в создании которых основное участие принимают железы внутренней секреции [Айламазян Э.К., 2003]. Гормоны, продуцируемые при беременности эндокринными железами, как самой женщины, так и её плода, являются одним из ведущих звеньев биологических механизмов. Они обеспечивают интеграциию всех процессов, лежащих в основе эмбрионального и фетального онтогенеза [Минкина Э.П. и др., 1987].

С началом беременности в яичниках прекращаются циклические процессы и овуляция. В одном из них функционирует желтое тело, которое продуцирует прогестерон и эстрогены, необходимые для нормального развития беременности. Желтое тело активно функционирует и обеспечивает развитие беременности в первые 10-12 недель, затем оно начинает постепенно регрессировать, и к 16-й неделе беременности гормональная функция практически полностью переходит к фетоплацентарному комплексу [Айламазян Э.К., 2003; Сидорова И.С. и др., 2006]. Во время беременности возникает новая функциональная система мать-плацента-плод, обусловливающая множество изменений в организме женщины. Мать и плод взаимно влияют друг на друга через плаценту, которая, с одной стороны, объединяет их, с другой - обеспечивает определенную автономность плоду [Сидорова И.С. и др., 2006].

Среди различных продуктов фето-плацентарного комплекса, активно участвующих в гестационном процессе, особое место занимает многочисленная группа стероидных гормонов. Ведущая роль в ней, с точки зрения репродуктивной функции, принадлежит эстрогенам, прогестерону и глюкокортикостероидам. Значение этих соединений в развитии плода,

поддержании беременности и реализации родовой деятельности трудно переоценить [Шмагель К.В., 2003].

Эстрогены регулируют биохимические процессы в миометрии, обеспечивают нормальный рост и развитие матки во время беременности, влияют на ее сократительную активность, увеличивают активность ферментных систем, способствуют повышению энергетического обмена, накоплению гликогена и АТФ, которые необходимы для развития плода. Также эстрогены вызывают пролиферативные изменения в молочных железах и в синергизме с прогестероном участвуют в подготовке их к лактации [Баграмян Э.Р., 1984; Сидорова И.С. и др., 2006], повышают уровень маточно-плацентарного кровотока, поддерживают в этой зоне процессы васкуляризации, чем обеспечивают оптимальный газообмен и питание плода, стимулируют синтез прогестерона в плаценте [Шмагель К.В., 2003].

Эстриол способствует развитию оплодотворенного овоцита, регулирует контрактильную активность матки, является протектором • беременности [Cohen S.L., 2010]. Кроме того, эстриол обладает выраженным влиянием на морфогенез плода, стимулирует рост матки [Айламазян Э.К., 2003; Минкина Э.П. и др., 1987]. С 12-15 недели беременности продукция эстрогенов возрастает, а среди их фракций начинает преобладать эстриол. Уровень эстриола в крови при беременности возрастает в 5-10 раз (по сравнению с небеременными), а экскреция его с мочой в сотни раз [Айламазян Э.К., 2003].

Эстриол, как и другие плацентарные гормоны, секретируется с помощью синцитиотрофобласта, но его синтез требует комплексных взаимодействий между плацентой и плодом. Синтезированный в плаценте эстриол, находящийся в неконъюгированной форме, секретируется в материнский кровоток [Некрасова И.В., 2010]. В отличие от эстрадиола, неконъюгированный эстриол не взаимодействует с гормон связывающим

протеином и находится в крови женщины в свободном состоянии. Именно по этой причине, начиная со II триместра, неконъюгированный эстриол становится основным эстрогеном материнского организма.

Эстрадиол способствует накоплению в мышце матки контрактильных белков (актина и миозина), увеличению запаса фосфорных соединений, обеспечивающих использование углеводов мышцей матки [Айламазян Э.К., 2003]. Концентрация эстрадиола у небеременных женщин в периферической крови колеблется от 0,03 до 0,7 нг/мл; при беременности его уровень не превышает 17 нг/мл [Кеворков H.H. и др., 1993].

Эстрогены принимают активное участие в реализации эффектов прогестерона и регуляции его биосинтеза. Известно, что экспрессия прогестероновых рецепторов в матке млекопитающих усиливается при экзогенном введении эстрогенов [Шмагель К.В., 2003].

Прогестерон является одним из наиболее важных гормонов, влияющих на развитие беременности, и обладает многообразием функций [Young S.L., Lessey В.А., 2009]. Само название гормона второй фазы менструального цикла обеспечивает его основное предназначение "pro gestatio", т.е. "для беременности" [Татарчук Т.Ф., Сольский Я.П., 2003]. Под действием этого гормона происходит децидуальная трансформация эндометрия, обеспечивающая имплантацию плодного яйца [Баграмян Э.Р., 1984; Минкина Э.П. и др., 1987; Сидорова И.С. и др., 2006; Szekeres-Bartho J. et al., 2011]. Прогестерон подавляет сократительную активность матки и способствует поддержанию тонуса ее истмико-цервикального отдела, создавая опору для растущего плодного яйца [Айламазян Э.К., 2003]. Обладая иммуносупрессивным действием [Шмагель К.В., 2003], прогестерон влияет на подавление реакций отторжения плодного яйца [Mai Н.М. et al., 2002; Rothchild J., 1983], является предшественником синтеза стероидных гормонов плода, а также влияет на обмен натрия в организме беременной, способствуя увеличению объема внутрисосудистой жидкости и адекватному

удалению продуктов метаболизма плода [Баграмян Э.Р., 1984; Shmagel K.V., Chereshnev V.A., 2004]. Кроме того, прогестерон оказывает защитное действие на оплодотворенную яйцеклетку и матку, способствует росту матки во время беременности [Айламазян Э.К., 2003].

В I триместре беременности прогестерон синтезируется в яичниках, позднее эта функция переходит к плаценте [Шмагель К.В., 2003; Kase N.G., Reyniak J.V., 1985; Wittliff J.L., Raffelsberg W., 1995]. Из холестерина, содержащегося в материнском организме, в синцитиотрофобласте вырабатывается прегненолон, который преобразуется в прогестерон [Сидорова И.С. и др., 2006]. В печени плода возможно превращение прогестерона в эстрадиол и эстриол.

На протяжении беременности содержание прогестерона в крови постепенно возрастает с 10-30 нг/мл до 100-300 нг/мл. Плацента к концу беременности синтезирует до 250 мг прогестерона в сутки [Айламазян Э.К., 2003].

Таким образом, гормоны плаценты обеспечивают возникновение специфических изменений в органах репродукции, регулируют антенатальное развитие плода и обмен веществ во время беременности в целом [Баграмян Э.Р., 1984].

Половые стероиды обладают не только системным воздействием на организм беременной женщины, но и оказывают значительное влияние на состояние местного иммунитета, а именно: защитного иммунитета слизистых половых путей [Зароченцева Н.В., 2007; Leimola-Virtanen R. et al., 1997]. Основными звеньями антиинфекционной защиты репродуктивного тракта являются клетки иммунной системы и продуцируемые ими биологически активные вещества, эпителий слизистой оболочки половых путей и нормальная микрофлора влагалища [Лебедева О.П. и др., 2009].

Врожденная иммунная система обладает способностью немедленно реагировать на патоген и определяет барьерную функцию пограничных

тканей, особенно слизистой. В ходе подготовки к имплантации и с наступлением беременности в эндометрий мигрирует большое количество материнских лейкоцитов [De M.I. et al., 1991; Trundley A., Moffett A., 2004], формирующих его локальную иммунную систему [Быков В.Л., 2001; Gustafsson С., 2007]. Иммунокомпетентные клетки репродуктивной системы и регионарных лимфатических узлов, реагируя на эмбрион, обеспечивают местный иммунитет матки при беременности [Сидорова И.С. и др., 2006]. Показано, что число вагинальных полиморфноядерных лейкоцитов, в том числе жизнеспособных и мертвых, у беременных женщин значительно возрастает с увеличением срока беременности [Yamada Т. et al., 2002]. Также во время беременности в матке содержится большое количество макрофагов, располагающихся в эндометрии и миометрии, приток которых индуцируется эстрогенами [Tibbetts Т. A. et al., 1999]. В пролиферативную фазу менструального цикла, когда уровень эстрогенов максимален, отмечается увеличение числа макрофагов, гранулоцитов и дендритных клеток в строме эндометрия и в железистом эпителии [Beagley K.W., Gokel С.М, 2003]. Макрофаги, играющие важную роль в местном иммунитете слизистых, особенно чувствительны к эффектам прогестерона [Grossman C.J. et al., 1994]. Исследования J. Huber в 2001 году показали, что вводимый во влагалище прогестерон увеличивал численность клеток Лангерганса в эпителии влагалища у самок грызунов в состоянии течки [Huber J.C., 2001].

По данным литературы, иммунная защита слизистой поверхности полового тракта реализуется, в основном, под влиянием яичниковых гормонов [Lemola-Virtanen R. et al., 1997]. Эстрогены способствуют повышению IgM [Зароченцева Н.В., 2007] и повышают экспрессию Ig-рецептора опосредовано через транспорт IgA и IgM через эпителий слизистой оболочки полового тракта [Milson G. et al., 1991; Molland J.G. et al., 1990]. Кроме этого, эстрогены увеличивают толщину влагалищного эпителия и способствуют секреции муцинов и других важных защитных факторов, таких как

компоненты комплементарной системы (Сз) [White H.D. et al, 1997], повышают количество цервикальной слизи [Айламазян Э.К., 2003]. Эстрогены стимулируют появление рецепторов для лактобактерий на эпителиальных клетках слизистых оболочек влагалища и индуцируют накопление в вагинальном эпителии гликогена, являющегося субстратом роста для лактобактерий. Лактобактерии расщепляют гликоген с образованием молочной кислоты, что сдвигает рН в кислую сторону (до 4,4-4,6) и ограничивает рост и размножение микроорганизмов, чувствительных к кислой среде [Алешкин В.А. и др., 2004; Сидорова И.С. и др., 2006]. На фоне эстрогенной недостаточности развивается дисбактериоз влагалища, проявляющийся снижением лактобактерий и нарастанием количества бактерий фекальной группы [White H.D. et al, 1997]. Дефицит эстрогенов влияет на макрофагальное звено, угнетая индукцию хемокиновых рецепторов, ингибирует продукцию хемокинов [Дранник Г.Н., 2003; Татарчук Т.Ф., Сольский Я.П., 2003; White H.D. et al, 1997]. Прогестерон влияет на изменение биохимических характеристик секрета. Цервикальная слизь становится вязкой, тягучей, непрозрачной и заполняет ячеистую структуру эндоцервикса, действуя как механический и иммунологический барьер [Айламазян Э.К., 2003]. Прогестерон способен усиливать секрецию иммуноглобулинов [Русакевич П.С., 1998]. Эстрогены и прогестерон значительно улучшают иммунитет слизистых и, соответственно, обеспечивают защиту от инфекций [Brunelli R. et al., 1996; Grossman C.J. et al., 1994].

Таким образом, репродуктивный тракт женщины является мощным иммунокомпетентным гормоно - регулируемым органом [Зароченцева Н.В., 2007; Ширшев C.B., 2009; Milson G. et al., 1991; Nagy E. et al., 1999; White H.D. et al., 1997]. Матка - наиболее значительный орган в системе репродуктивного тракта женщин, которая приспособлена не только для поддержания беременности, но и одновременно выполняет барьерную

функцию, которая характерна для всех слизистых тканей [Ширшев C.B.,

2002]. Предупреждение инфекции матки имеет решающее значение для успешной репродукции человека [Ширшев C.B., 2002]. Нарушение флоры влагалища в период беременности - это достаточно опасное явление, которое может стать причиной как самопроизвольного выкидыша, так и преждевременного излития околоплодных вод, а также инфицирования плода. Функциональная активность системы естественного иммунитета во время беременности регулируется половыми гормонами и обеспечивает эффективную защиту материнского организма от большинства бактериальных инфекций.

1.3. Влияние женских половых стероидных гормонов на клетки врожденного иммунитета

Половые стероидные гормоны играют важную роль в нейроэндокринной регуляции функций иммунной системы и определяют уникальные иммунные сдвиги на системном и местном уровнях, связанные с репродукцией. Их действие осуществляется через специфические гормонсвязывающие рецепторы в клетках иммунной системы [Груздева Е.А.,

2003]. Стероиды регулируют экспрессию различных генов, участвуют практически во всех аспектах развития и физиологических реакциях организма [Beato M. et al., 1996; Beato M., Klug J., 2000; Evans R.M., 1988].

Действие стероидных гормонов реализуется двумя путями (рис. 1): 1) классическим геномным или медленным и 2) быстрым негеномным [Токмаков A.A., Фуками Я., 2009].

1.3.1. Геномный механизм действия стероидных гормонов

Считается, что стероидные гормоны проникают в клетки из кровотока путем простой пассивной диффузии [Allera A., Wild L., 1992; Beato M., Sanchez-Pacheco A., 2006; O'Malley B.W. et al., 1991], проявляя активность

только в клетках, в которых они взаимодействуют со специфическим цитоплазменньш рецептором [Beato М et al., 1996; Beato М., Klug J., 2000]. Эти рецепторы транскрипционно неактивны в отсутствие лиганда и изолированы в больших олигомерных комплексах белка теплового шока в клетках-мишенях [Bagchi M.K et al., 1990; Pratt W.B., Toft D.O., 1997]. При связывании с лигандом, рецепторы подвергаются активации и конформационным изменениям, что способствует отсоединению ингибиторных белков [Allan G.E. et al., 1992; Beato M et al., 1996; Beato M., Klug J., 2000; Clark J. H., Peck E.J., 1979]. Связь с рецепторным белком необходима для поступления стероидного гормона в ядро, где происходит его взаимодействие с ядерным рецептором, т.е. с определенными участкам ядерной ДНК [Потемкин В.В., 1986; Bagchi M.K et al., 1988]. ДНК -связанные рецепторы могут оказывать положительное или отрицательное влияние на транскрипцию гена-мишени. Следствием такого взаимодействия является образование особой матричной РНК. Последняя выходит из ядра и способствует синтезу на рибосомах белка или белка-фермента. Все эти явления требуют длительного (часы, сутки) присутствия гормон-рецепторного комплекса в ядре [Потемкин В.В., 1986; Falkenstein Е.А. et al., 2000; Механизм действия стероидных гормонов. Геномный механизм действия [Сайт]. URL: http://meduniver.com/Medical/Physiology/60.html. (проверено 10.10.12.)].

Кроме того, обнаружено прямое взаимодействие стероидов с ядерной ДНК. Основная связь устанавливается между парами оснований частично раскручивающейся двухцепочечной ДНК. Гетероатомы половых стероидных гормонов формируют стереоспецифической донор-акцепторый участок с помощью водородных связей на ДНК. Структура донор - акцепторной связи является уникальной для каждого типа гормональной активности [Hendry L.B., 1988]. Взаимодействие стероид-рецепторных комплексов с хроматином может приводить к изменению структуры хроматина и тем самым

регулировать доступ к определенным участкам ДНК, участвующих в регуляции транскрипции [Рецепторы стероидных гормонов: механизм действия. [Сайт]. URL:

http://medbiol.ru/medbiol/0112200 l/progest/000067ac.htm. (проверено

10.10.12.)].

Геномные эффекты чувствительны к ингибиторам транскрипции и трансляции, например, актиномицину D и циклогексимиду [Beato М., 1989; Falkenstein Е. et al., 2000; Evans R.M., 1988; Fuller P.J., 1991]. Стероиды взаимодействуют со специфическими внутриклеточными рецепторами представляющие стероид - тиреоид - ретиноидное рецепторное суперсемейство [Falkenstein Е. et al., 2000]. Внутриклеточные рецепторы стероидных гормонов были тщательно описаны и клонированы. Они состоят из лиганд-связывающего домена, ДНК связывающего домена, С-концевого домена, шарнирного региона и вариабельного N-концевого домена [Груздева Е.А., 2003; Beato М., 1989; Evans R.M., 1988; Fuller P.J., 1991].

1.3.2. Негеномный механизм действия стероидных гормонов

Эффекты стероидных гормонов проявляются не только спустя несколько часов, что требуется для ядерного влияния, часть из них проявляется очень быстро, в течение нескольких минут, например повышение проницаемости мембран, освобождение лизосомальных ферментов [Falkenstein Е. et al., 2000]. Весьма вероятно, что передача сигнала происходит через специфические рецепторы мембраны и связана с каскадом вторичных посредников, в том числе фосфолипазы С [Civitelli R. et al., 1990] внутриклеточного pH [Jenis L.G. et al., 1993, Wehling M. et al., 1996], свободного внутриклеточного кальция Ca++ [De Boland A.R., Norman A.W., 1990; Wehling M. et al., 1990] и протеинкиназы С [Sylvia V.L. et al., 1993]. Примером негеномного действия эстрогена является поступление Са++ в клетки эндометрия [Pietras R.J., Szego С.М., 1975].

Молекула стероидного гормона

Мембранный рецептор

л , Клеточная мембрана „

Рис. 1. Схема действия стероидных гормонов.

1 — классический геномный путь действия (гормон проникает через клеточную мембрану и цитоплазму в ядро, где после взаимодействия с ядерным рецептором воздействует на гены-мишени, активируя их). 2а и 26 — негеномные пути действия через мембранные рецепторы: 2а — пути, связанные с мембранным рецептором и образованием вторичного посредника, ведущего к активации протеинкиназ. Последние через фосфорилирование в ядре белка - коактиватора (БКА) активируют гены-мишени; 26 — пути, связанные с ионными каналами клеточной мембраны, в результате чего гормон -рецепторный комплекс активирует ионные каналы, меняя возбудимость клетки. 3 — альтернативный негеномный путь действия (молекула гормона, проникая через мембрану в цитоплазму, взаимодействует с цитозольным рецептором, что приводит к активации цитозольных киназ) [Негеномный механизм действия стероидных гормонов [Сайт] URL: http://meduniver.com/Medical/Physiology/61 .html, (проверено 10.10.12.)].

В отличие от геномного действия стероидных гормонов, негеномные стероидные эффекты главным образом характеризуется их нечувствительностью к ингибиторам транскрипции и синтеза белка [Falkenstein Е. et al., 2000].

Некоторые авторы считают, что геномный механизм взаимодействия гормона с рецептором приводит, как правило, к ингибированию функций клеток, тогда как негеномный - к стимуляции. При этом негеномные

эффекты эстрадиола и прогестерона в основном опосредуются Са++ [Куклина Е.М., 2003].

Стероидные гормоны могут влиять на продукцию цитокинов при посредничестве транскрипционного ядерного фактора - kB (NF-kB). Этот фактор положительно регулирует экспрессию провоспалительных генов. Стероид - рецепторный комплекс взаимодействует с NF-kB и подавляет его трансактивирующую деятельность [McKay L.I., Cidlowski J.А., 1999].

Также возможно прямое взаимодействие стероидов с мембраной, происходящее без участия рецептора, которое изменяет физико-химические свойства мембраны, такие как текучесть и микроокружение мембранных рецепторов. Эта интеркаляция стероидов в фосфолипидный бислой может возникнуть при высоких, нефизиологических концентрациях стероидов. Показано, что прогестерон вызывает слияние мембранных везикул, снижает текучесть мембран и делает их проницаемыми для гидрофильных молекул. Напротив, эстрадиол очень незначительно влияет на текучесть мембран [Falkenstein Е. et al., 2000; Lamche H.R. et al., 1990].

1.3.3. Основные функции клеток врожденного иммунитета

Гранулоциты и мононуклеарные фагоциты контролируют первую линию обороны организма от инфекций, обеспечивают неспецифическую противоинфекционную защиту за счет реализации своих функций фагоцитоза, дегрануляции и выделения во внеклеточное пространство ДНК [Долгушин И.И. и др., 2009], киллинга, переваривания поглощенных частиц, синтеза и секреции регуляторных цитокинов, запускающих общие ответные реакции организма на повреждение [Долгушин И.И. и др., 2009; Дранник Т.Н., 2003; Кривохижина Л.В., Осиков М.В., 2005].

Фагоцитарная активность клеток врожденного иммунитета

Нейтрофилы и моноциты относятся к фагоцитирующим клеткам. Нейтрофильные гранулоциты благодаря ряду уникальных свойств (высокой подвижности, способности легко передвигаться в тканях, наличию мощных бактерицидных и цитотоксических продуктов) рассматриваются как высокопрофессиональные «убийцы», составляющие своеобразный «отряд быстрого реагирования» в системе противоинфекционной защиты организма [Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001]. В очаге острого воспаления в первые часы моноциты/макрофаги составляют менее 5% инфильтрирующих клеток, значительно уступая по численности гранулоцитам, однако через 24-48 часов от начала воспаления макрофаги становятся доминирующими клетками инфильтрата, приходя на смену быстро погибающим нейтрофилам [Фрейдлин И.С., 1998]. Моноциты играют важную роль в поддержании гомеостаза внутренней среды, участвуют в удалении апоптических клеток и очистки организма от токсичных соединений [Auffray С. et al., 2009].

Фагоцитоз нейтрофилов и моноцитов включает в себя следующие стадии: хемотаксис, адгезию, эндоцитоз, образование фаголизосомы или эндосомы и стадию переваривания. Стадия хемотаксиса (приближение к объекту) характеризуется тем, что фагоцит направленно перемещается к объекту фагоцитоза, реагируя на хемоаттрактанты: вещества микробов, активированные компоненты комплемемента (С5а, СЗа) и цитокины. Далее происходит адгезия частиц к цитоплазматической мембране. Адгезивная способность лейкоцитов обеспечивается особыми рецепторными молекулами [Pardi R., 1992]. Например, рецепторы для комплемента — CR3 (интегрин CDllb/CD18) и CR4 (интегрин CDllc/CD18) связывают ряд бактериальных продуктов: липополисахариды, поверхностные структуры дрожжевых клеток родов Candida и др. [Новиков Д.К., 2005]. Молекула CD14 на макрофагах — рецептор для комплексов бактериальных ЛПС [Хаитов P.M., 2000]. Также на фагоцитах присутствуют рецепторы для Fc - фрагментов иммуноглобулинов

[Хаитов P.M., 2000] и большое количество других рецепторов. Стадия захвата и образование фаголизосомы заключается в образовании фагоцитом псевдоподий при контакте с частицей. Вследствие сокращения актиновых волокон и изменения вязкости цитоплазмы частица полностью охватывается мембраной фагоцита, которая «застегивается» над частицей. Фагосома, погруженная внутрь клетки, сливается с лизосомами, в результате чего формируется фаголизосома - гранула, в которой существуют оптимальные условия для бактериолиза и расщепления убитой микробной клетки (рис. 2) [Новиков Д.К., 2005; Ярилин A.A., 1999].

Только в макрофагах (в нейтрофилах нет) происходят образование внутри клеток комплексов из продуктов расщепления фагоцитированного вещества с собственными молекулами МНС-II и экспрессия этого комплекса на поверхность клетки с «целью» представления антигена для распознавания Т-лимфоцитами. Таким образом, макрофаги способны осуществлять функции АПК [Хаитов P.M., 2000].

Ядро

Втачивание мембраны

Первичные гоиооомы

Рис. 2.Механизм фагоцитоза. [Северин Е.С., 2004].

Внутриклеточная кислородзависимая бактерицидность

фагоцитов

Активация клеток врожденного иммунитета индуцируется внешними стимулами и реализуется в виде одного из основных событий данного процесса - «кислородного взрыва» (рис. 3). Кислородный, или дыхательный, взрыв - это процесс образования продуктов частичного восстановления кислорода, свободных радикалов, перекисей и других продуктов, обладающих высокой антимикробной активностью, типичными чертами которого является быстрое увеличение потребления кислорода и утилизации глюкозы. Этот процесс развивается в течение нескольких секунд, что и определило его обозначение как «взрыв». Место генерации бактерицидных продуктов - это фаголизосома [Ярилин A.A., 1999].

Рис. 3. Образование активных форм кислорода фагоцитирующими клетками при респираторном взрыве [Северин Е.С., 2004].

Ферментный комплекс мембраны фагосом - НАДФ - оксидаза восстанавливает 02, образуя супероксидный анион, который спонтанно или при участии фермента супероксиддисмутазы превращается в пероксид водорода. Под действием миелопероксидазы, проникающей в фагосому при её слиянии с лизосомой, из пероксидов в присутствии галогенов (йодидов и

хлоридов) образуются дополнительные токсичные окислители - гипойодид и гипохлорид. Все эти молекулы являются сильными окислителями и оказывают бактерицидное действие. Активные формы кислорода инициируют свободнорадикальные реакции, разрушающие липиды клеточных мембран поглощённых фагоцитами бактерий [Северин Е.С., 2004].

Внеклеточная кислородзависимая бактерицидность фагоцитов

Свои бактерицидные и цитотоксические свойства нейтрофилы могут реализовывать не только путем фагоцитоза. Не меньшую роль играет и внеклеточный киллинг. Полагают, что любое поглощение начинается с выброса наружу токсических продуктов, которые обезвреживают микроорганизмы, расположенные за пределами нейтрофила. При этом как вне -, так и внутриклеточный киллинг обеспечивается по сути теми же механизмами бактерицидности. Увеличение размеров атакуемого объекта приводит, в конце концов, к срыву фагоцитоза и дегрануляция становится особенно интенсивной, она заключается в перемещении гранул к переферии клетки и слияние их с плазматической мембраной. Таким образом, любая дегрануляция сочетается с направленной мобилизацией гранул, которые перемещаются либо к фагосоме (секреторная внутрифагосомная), либо к плазматической мембране и, сливаясь с ней, содержимое гранул выливается в околоклеточное пространство. Такую дегрануляцию принято обозначать секреторной экстрацеллюлярной [Маянский А.Н., Маянский Д. Н., 1989].

Внеклеточная бактерицидная активность у моноцитов/макрофагов выражена несколько слабее, чем у нейтрофилов. Макрофаги не вызывают массированного аутолиза, приводящего к формированию гноя. Это связано с особенностями выделяемых ферментов (миелопероксидазы, протеиназ, гидролаз), а также с их количеством и особенностями динамики процесса,

который никогда не бывает столь бурным и «концентрированным» во времени, как реакция нейтрофилов [Ярилин А.А.,1999].

Недавно был открыт и расшифрован новый кислородзависимый механизм внеклеточной бактерицидности. Согласно данным исследования, проведенного специалистами отдела клеточной микробиологии под руководством Arturo Zychlinsky, нейтрофилы могут "выбрасывать" сетевидные образования, в которых задерживаются, нейтрализуются, а затем и погибают микроорганизмы. Эти новые структуры получили название нейтрофильных экстрацеллюлярных ловушек (NET-Neutrophil Extracellular Traps) (рис. 4). Количество погибающих в сетях бактерий сопоставимо с количеством микроорганизмов, уничтожаемых нейтрофилом при жизни. Ловушки связывают микроорганизмы как граммположительные, так и граммотрицательные, предотвращают их распространение и обеспечивают высокую местную концентрацию антимикробных агентов. Кроме того, NETs способны нейтролизовать не только широкий спектр патогенов, но и их токсинов (например, а-токсин стафилококка) [Fuchs Т.A. et al., 2007].

Рис. 4. Shigella flexneri в нейтрофильных ловушках. Сканирующая электронная микроскопия. Институт инфекционной биологии им. Макса Планка, Берлин [Medina Е., 2009].

НВЛ образуются при активации нейтрофилов ФМА, ИЛ-8, ЛПС или патогенами, такими как Shigella flexneri, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium и др. [Medina E., 2009].

HBJI представляет собой новую активную форму гибели нейтрофила, отличную от некроза и апоптоза [Brinkmann V., Zychlinsky А., 2007; Fuchs Т.А. et al., 2007], которая была названа термином «NETosis» [Wartha F., Henriques-Normark В., 2008]. При формировании нейтрофильных ловушек ядерная мембрана растворяется и эу- и гетерохроматин гомогенизируются. Мембраны бактерицидных гранул распадаются, и ядерный материал вступает в непосредственный контакт с компонентами этих гранул. На завершающем этапе клеточная мембрана разрывается, и ловушки высвобождаются одновременно с гибелью клетки (Рис. 5) [Fuchs Т.А. et al., 2007].

Рис. 5. Схема образования HBJI. Первоначально происходит взаимодействие рецепторов нейтрофильных гранулоцитов с сигнальными веществами и активация фермента НАДФ-оксидазы, что приводит к образованию супероксида (1), вследствие чего происходит растворение ядерной мембраны и гранул (2), содержимое клетки перемешивается (3), цитоплазматическая мембрана разрывается, формируется HBJI (4).

Иммунофлюоресцентный анализ показал, что HBJI содержат белки азурофильных (первичных) гранул, такие как нейтрофильная эластаза, катепсин-G и миелопероксидаза; вторичных - лактоферрин и третичных гранул - желатиназу [Brinkmann V. et al., 2004]. Существует несколько

доказательств того, что генерация реактивных форм кислорода НАДФ-оксидазой необходима для формирования ловушек [Nishinaka Y. et al., 2011]. Кроме того, экзогенный Н2О2 является мощным индуктором образования ловушек [Medina Е., 2009].

Одним из важнейших вопросов является значимость NET формирования in vivo. HBJI обнаруживаются в большом количестве в участках инфекции. Например при экспериментальном шигеллезе у кроликов, а также при спонтанном аппендиците у человека [Brinkmann V. et al., 2004].

Помимо того, что HBJI нейтрализуют патогены и их токсины, ловушки способны обеспечивать физический барьер, который препятствует дальнейшему распространению микроорганизмов.

На сегодняшний день известна и определена новая функция мононуклеарных фагоцитов. В исследовании, проведенном в 2010 году немецкими учеными, опубликованы данные о том, что внеклеточные ловушки, которые захватывают и уничтожают патогены, способны образовывать не только нейтрофилы, но и моноциты, и макрофаги в ответ на воздействие наночастиц [Matthias В. et al., 2010]. Швейцарские ученые обнаружили формирование моноцитарных внеклеточных ловушек в ответ на Mycobacterium abscessus и выяснили, что они так же, как и нейтрофильные, состоят из ДНК и гистонов, не покрыты цитоплазматической мембраной и разрушаются ДНКазами позже чем HBJ1 (2 минуты для HBJI и 1 час для MBJI)[Jonsson В., 2009]. Кроме того, стало известно, что моноциты/макрофаги высвобождают внеклеточные ловушки после воздействия таких бактерий как Escherichia coli и Klebsiella pneumonia [Webster J. et al., 2010], под влиянием статинов [Chow О. et al.,2010] и в ответ на гемолизин кишечной палочки [Aulik N.A. et al., 2012]. Использование конфокальной и сканирующей электронной микроскопии показало, что макрофаги крупного рогатого скота образуют внеклеточные ловушки или

сети ДНК фибрилл с солокализованными на них гистонами при активации Mannheimia haemolytica или лейкотоксином. Обнаружено, что для формирования моноцитарных и макрофагальных внеклеточных ловушек необходима активность НАДФ - оксидазы, что уже было неоднократно доказано для HBJI [Aulik N.A. et al., 2012; Brinkmann V., Zychlinsky A., 2007; Medina E., 2009].

Таким образом, клетки врожденного иммунитета, нейтрофилы и моноциты, являются первой линией защиты от инфекций, осуществляя функции внутри- и внеклеточной бактерицидное™. Они армированы богатым арсеналом цитотоксических продуктов, которые способны в целом обеспечить с большим запасом широкий спектр антимикробной активности.

1.3.4. Рецепторы женских половых стероидных гормонов на клетках врожденного иммуннитета

Половые стероидные гормоны оказывают свое регуляторное действие на клетки-мишени посредством взаимодействия со специфическими рецепторными белками [Груздева Е.А., 2003]. В различных исследованиях было показано, что классические рецепторы стероидных гормонов также могут быть вовлечены не только в геномные механизмы, но и в быстрые негеномные эффекты [Falkenstein Е. et al., 2000]. Стероидные гормоны (эстрогены и прогестерон) являются важными регуляторами костной, сердечно-сосудистой, центральной нервной и иммунной систем [Татарчук Т.Ф., Сольский Я.П., 2003; Ben Hur Н. et al., 1995; Giannoni E. et al., 2011; Kramer P.R. et al., 2007; Lamote I. et al., 2006; McDonnel D.P., 2000; Molero L. et al., 2002; Murphy A.J. et al., 2009; Stygar D. et al., 2006, 2007; Suenaga R. et al, 1996, 1998; Wada K. et al., 1992; Weusten J.J. et al, 1986; White M.M. et al, 1995].

Рецепторы к эстрогенам присутствуют на лейкоцитах и выполняют различные функции. Традиционно считается, что действие эстрогена опосредуется через ядерные рецепторы эстрогена - ER: ERa и ERß [Deroo

B.J., Korach K.S., 2006; Kuiper G.G. et al., 1996; Mosmann T.R., Sad S., 1996]. Взаимодействие эстрогена с ERa- или ERP-рецепторами может привести к противоположным эффектам в одной и той же системе [Paech К. et al., 1997]. Классические внутриклеточные рецепторы ERa и ER[3 были обнаружены у полиморфноядерных лейкоцитов [Klebanoff S.J., 1977; Lamote I. et al., 2004; Molero L. et al., 2002; Stygar D. et al., 2007] и моноцитов, выделенных из периферической крови у мужчин и женщин [Ben Hur Н. et al., 1995; Giannoni E. et al., 2011; Kramer P.R. et al., 2007; Murphy A.J. et al., 2009; Stygar D. et al., 2006; Suenaga R. et al., 1996, 1998; Wada K. et al., 1992; Weusten J.J. et al., 1986; White M.M. et al., 1995]. В 2000 году доказано существование мембранной формы ER, которая структурно похожа на классический внутриклеточный ER и также существует в форме двух изотипов - ERa и ERp [Falkenstein Е. et al., 2000]. Негеномный эффект 17(3-эстрадиола скорее всего опосредуется мембраной формой ER [Deroo В.J., Korach K.S., 2006; Falkenstein Е. et al., 2000; Prossnitz E.R. et al., 2007]. Недавно был описан связанный с мембраной G-белковый парный эстрогеновый рецептор - GPER. GPER состоит из семи трансмембранных спиралей и способствует с эстроген - зависимой активации киназ [Prossnitz E.R. et al., 2007]. В последнее время обнаружено, что экспрессия ERa или ER(3 на клетках системы мононуклеарных фагоцитов и их ответ на эстрогены зависит от стадии дифференцировки моноцитов, т.е. моноциты экспрессируют ERp, а макрофаги экспрессируют ERa [Мог G. et al., 2003]. Японские исследователи открыли эстрогеновые сайты связывания на моноцитах типа I, которые характеризуется высокой афинностью (сродством) и низкой прочностью связывания - это классический рецептор эстрогена, и типа II, характеризующиеся низкой афинностью и высокой прочностью связывания [Wada К. et al., 1992].

Используя метод проточной цитометрии, Butts C.L. и соавторы показали, что на поверхности CD45 позитивных клеток, т.е. лейкоцитов

селезенки, печени и тимуса, присутствуют рецепторы для прогестерона PR, которые обнаруживаются примерно в 20-30% случаях [Butts, C.L. et al., 2007]. Некоторые авторы указывают на наличие рецепторов к прогестерону у нейтрофилов и макрофагов [Tibbetts Т.А. et al., 1999]. Другие сообщают о том, что для моноцитов [Schust D.J. et al., 1996] и нейтрофилов [Aerts J.L. et al., 2002] нет никаких доказательств присутствия рецептора прогестерона и предполагают, что прогестерон может оказывать свое действие на иммунные клетки, связываясь с глюкокортикоидными рецепторами [Татарчук Т.Ф., Сольский Я.П., 2003; Kontula К. et al., 1981]. Но в зарубежной литературе встречаются данные о том, что негеномное действие прогестерона опосредуется мембранными рецепторами, которые были описаны и частично охарактеризованы для некоторых тканей и клеток [Falkenstein Е. et al., 2000]. На наличие мембранных прогестероновых рецепторов на моноцитах указано в 2011 году [Giannoni Е. et al., 2011]. Быстрые эффекты прогестерона [Токмаков А.А., Фуками Я., 2009] связаны с его способностью индуцировать очень быстрое увеличение внутриклеточного Са++, происходящие в течение нескольких секунд после добавления стероида [Baldi Е. et al., 1991; Turner К.О. et al., 1994]. В настоящее время тип Са++ каналов, участвующих в данном процессе, не известен [Blackmore P.F. et al., 1990].

1.3.5. Влияние женских половых стероидных гормонов на функциональную активность моноцитов

Эстрогены оказывают выраженное влияние на систему мононуклеарных фагоцитов в системе in vivo. Введение эстрогенов значительно повышает скорость очищения крови от чужеродного коллоидного материала [Nicol Т., Ware С.С., 1960]. Помимо увеличения поглотительной активности макрофагов эстрогены способны усиливать метаболические процессы и бактерицидные функции фагоцитирующих клеток [Tsakonas D.P., 1994]. Стимулирующий эффект эстрогенов также

проявляется в повышении резистентности животных к инфекциям, вызванных пневмококами [Шмагель К.В., 2003]. Изучая влияние эстрадиола на фагоцитарную активность моноцитов, установлено, что введение эстрадиола овариэктомированным крысам приводит к активации моноцитарного фагоцитоза [Груздева Е.А., 2003]. Таким образом, эстрогены являются эффективными стимуляторами фагоцитарных клеток организма в системе in vivo.

Однако in vitro, эстрадиол в концентрации, соответствующей его уровню в крови беременных в I и III триместры беременности, значимо угнетает фагоцитарную активность моноцитов [Ширшев C.B. и др., 2008]. При изучении влияния эстриола на фагоцитарную активность моноцитов в системе in vitro по степени снижения свечения люминесцентных бактерий обнаружено, что эстриол не оказывает статистически значимого действия на фагоцитоз моноцитов [Некрасова И.В., 2010].

Cassidy R.A. установил, что терапевтические уровни эстрадиола снижают оксиданты в мононуклеарных лейкоцитах [Cassidy R.A., 2003]. А, эстрадиол в дозах, характерных для беременности, не оказывает статистически значимого влияния на спонтанную люминолзависимую хемилюминисценцию моноцитов. При активации моноцитов опсонизированным зимозаном интенсивность люминолзависимой хемилюминисценции достоверно угнетается дозой эстрадиола, соответствующей таковой в крови женщин в I триместр беременности [Ширшев C.B. и др., 2008]. В НСТ-тесте эстрадиол снижает кислородозависимый микробицидный потенциал фагоцитов крови [Груздева Е.А., 2003]. Также обнаружено, что эстриол не изменяет спонтанную окислительную активность моноцитов. Уровень стимулированной люминолзависимой хемилюминесценции повышается под действием эстриола в дозе, соответствующей I триместру беременности [Некрасова И.В.,2010].

В отношении влияния прогестерона на фагоцитоз в системе in vivo обнаружено, что однократное введение прогестерона овариэктомированным крысам практически не изменяет фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови [Груздева Е.А., 2003]. А в системе in vitro прогестерон в концентрациях, характерных для крови в I и III триместры беременности, приводит к достоверному угнетению процесса фагоцитоза моноцитов на 10 минуте [Ширшев C.B. и др., 2008]. При изучении бактерицидной активности обнаружено, что прогестерон в концентрации, соответствующей таковой в плаценте при беременности, значимо увеличивает образование Ог и Н2Ог в ФМА- стимулированных моноцитах человека [Martinoli С. et al., 1985]. Также получены данные о том, что прогестерон не влияет на окислительный потенциал моноцитов in vitro [Ширшев C.B. и др., 2008].

1.3.6. Влияние женских половых стероидных гормонов на функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов

Исследуя действие эстриола на фагоцитарную функцию нейтрофилов, установлено, что данный гормон в дозе, соответствующей I и III триместрам беременности, снижает фагоцитарную активность нейтрофилов чистой фракции [Некрасова И.В., 2010], но не изменяет фагоцитарную активность нейтрофилов мышей по отношению к грибам рода Candida [Nohmi T. et al., 1995].

Одни авторы сообщают, что эстриол независимо от дозы в тесте спонтанной люминолзависимой хемилюминисценции повышает уровень окислительного метаболизма активированных полиморфно-ядерных нейтрофилов человека [Некрасова И.В., 2010; Jansson G., 1991], а также активирует стимулированную люминолзависимую хемилюминесценцию нейтрофилов в дозе, соответствующей I и III триместрам беременности [Некрасова И.В., 2010]. Этот факт может означать, что система фермента миелопероксидазы клеток является мишенью для действия эстриола [Jansson

G., 1991]. Однако другие исследователи изучали влияние эстриола на образование супероксид аниона человеческими нейтрофилами, используя фотометрические методы, и обнаружили, что при добавлении эстриола к нейтрофильной суспензии клеток продукция супероксид - аниона снижалась [Bekesi G. et al., 2007].

На сегодняшний день установлены различные иммуномодулирующие эффекты эстрадиола на функциональную активность нейтрофилов [Ito I. et al., 1995]. Некоторые авторы указывают на повышение фагоцитоза Staphylococcus aureus нейтрофилами периферической крови под влиянием эстрадиола [Roth J. A. et al., 1983]. Введение эстрадиола овариэктомированным животным приводит к повышению абсолютных показателей фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови [Груздева Е.А., 2003; Magnusson U., Einarsson S., 1990]. При изучении фагоцитоза кишечной палочки нейтрофилами маточного секрета установлено, что активность фагоцитоза в секрете матки кроликов получавших 17(3-эстрадиол была несколько выше, чем в группе контроля [Matsuda Н., Sasai Н., 1986]. Фагоцитоз дрожжей нейтрофилами матки кобыл при воздействии эстрадиола было значительно выше по сравнению с фагоцитозом нейтрофилов крови [Watson E.D. et al., 1987]. Часть исследователей указывает на отсутствие какого-либо эффекта при действии эстрадиола на нейтрофильные гранулоциты: например, при введении эстрадиола овариэктомированным крысам не наблюдалось существенных изменений фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов брюшной полости; нейтрофильная антистафилококковая активность не изменялась при добавлении эстрадиола in vitro и in vivo [Strzemienski P.J. et al., 1987] и эстрадиол не изменял фагоцитарную активность нейтрофилов мышей по отношению к грибам рода Candida [Nohmi Т. et al., 1995]. Другие исследователи сообщают, что доза эстрадиола, соответствующая его уровню

в крови I триместр беременности, на 1 Ой минуте инкубации достоверно угнетает фагоцитарную активность нейтрофилов [Ширшев C.B. и др, 2008].

Ранее считалось что, эстрогены оказывают тормозящее влияние на образование супероксид аниона, причем эстрадиол производит антиоксидантный эффект при низких концентрациях [Bekesi G. et al, 2007]. Позднее было обнаружено, что эстрадиол угнетает спонтанную люминолзависимую хемилюминисценцию нейтрофилов вне зависимости от исследуемой дозы [Ширшев C.B. и др, 2008] и на уровне фармакологических концентраций значительно ингибирует выработку (3 - глюкуронидазы и лизоцима [Buyon J.P. et al, 2005]. В пупочной вене человека культивировали эндотелиальные клетки с эстрадиолом (1-100 нмоль/л), который вызвал зависимое от времени и концентрации уменьшение экспрессии субъединицы НАДФ - оксидазы gp91phox, в результате чего происходило до 60% ингибирования синтеза мРНК и белка [Wagner А.Н. et al, 2001]. Влияние экзогенного 17(3-эстрадиола на лейкоциты крови изучали на овариэктомичных свинках и выяснили, что время, необходимое для достижения максимального значения хемилюминесценции была значительно продлено после применения эстрадиол a [Magnusson U, Einarsson S, 1990]. На уровне фармакологических концентраций 17(3-эстрадиол в большей степени, нежели прогестерон, является ингибитором продукции реактивных форм кислорода, а также дегрануляции [Buyon J.P. et al, 2005].

Позднее выяснилось, что эстрадиол в физиологических концентрациях может выступать в качестве окислителя, повышать пероксидаз - опосредованное окисление липопротеинов низкой плотности. Физиологические концентрации эстрадиола повышают дегрануляцию нейтрофилов и количество маркеров окислительного стресса [Santanam N. et al, 1998; Chaveiro A, Moreira da Silva F, 2009]. Например, 10 нМ эстрадиола значимо увеличивает высвобождение миелопероксидазы, эластазы и супероксида [Santanam N. et al, 1998]. С помощью проточной цитометрии

ученые определили способность нейтрофилов, полученных от высококачественных молочных коров в период после родов, к генерации Н2О2 при инкубации с различными концентрациями эстрадиола в течение 4 часов, и обнаружили, что увеличение Н202 наблюдается в концентрации эстрадиола 15 и 45 пг/мл, затем при применении нефизиологических концентраций происходит снижение уровня Н2О2 [Chaveiro А., Moreira da Silva F., 2010]. Также увеличение окислительного метаболизма нейтрофильных гранулоцитов наблюдалось при применении микромолярных концентраций эстрадиола в тесте с люминолзависимой хемилюминисценцией [Jansson G., 1991].

Есть немалочисленные данные о том, что эстрадиол не влияет на окислительный метаболизм нейтрофилов при изучении как физиологических, так и фармакологических концентраций эстрадиола [Cassidy R.A., 2003; Roth J.А. et al., 1982; Shibuya Т. et al., 1991; Winters K.R. et al., 2003]. Например, при введении эстрадиола овариэктомированным крысам не наблюдалось существенных изменений суммарных показателей кислородозависимого микробицидного потенциала нейтрофильных гранулоцитов брюшной полости в HCT - тесте [Груздева Е.А., 2003]. Повышение концентрации эстрадиола в сыворотке здоровых коров в течение эстрального цикла не влияло на восстановление HCT [Roth J.A. et al., 1983]. И нейтрофилы, выделенные из женского организма в течение третьего триместра беременности, не различались по способности к хемотаксической пептид -стимулированной О " генерации по сравнению с небеременными женщинами [Buyon J.P. et al., 2005].

Изучая эффекты прогестерона на нейтрофильные гранулоциты, мнения ученых расходятся. Одни считают, что влияние прогестерона на процессы фагоцитоза противоположно действию эстрогенов [Шмагель К.В., 2003, Strzemienski P.J. et al., 1987]. На сегодняшний день есть большое количество доказательств ингибирующего действия прогестерона на

фагоцитоз нейтрофилов [Watson E.D. et al., 1987]. Эндогенные и экзогенные концентрации прогестерона снижают способность нейтрофилов матки свинок противостоять инфекциям [Lewis G.S., 2004; Wulster-Radcliffe М.С. et al., 2003]. Встречаются данные о том, что прогестерон in vitro в концентрациях, наблюдаемых при беременности, значительно снижает активность перитонеальных нейтрофилов мышей, предварительно стимулированных введением эстрадиола, в отношении Candida albicans [Nohmi T. et al., 1995]. В опытах in vivo прогестерон в концентрации, соответствующей беременности, оказывает значимое подавляющее воздействие на клиренс макрофагами селезенки чужеродных эритроцитов, покрытых IgG. Это связано со снижением плотности Fe рецепторов на фагоцитах [Schreiber A.D. et al., 1988]. При назначении прогестерона происходит значительное снижение активности фагоцитоза кишечной палочки нейтрофилами маточного секрета [Matsuda H., Sasai H., 1986]. У кобыл, которым вводили прогестерон, фагоцитоз нейтрофилов матки был значительно ниже, чем в группе контроля и был таким же как у нейтрофилов периферической крови [Watson E.D. et al., 1987]. Прогестерон в концентрации, соответствующей III триместру беременности, подавляет анти - кандидозную активность нейтрофилов мышей [Nohmi T. et al., 1995]. Другие исследователи сообщают о том, что прогестерон не влияет на уровень фагоцитарной активности нейтрофилов (при введении овариэктомированным крысам) [Ширшев C.B. и др., 2008] и на способность полиморфноядерных лейкоцитов поглощать золотистый стафилококк [Roth J.A. et al., 1982].

Влияние прогестерона на нейтрофилы, полученные от молочных коров после родов, исследовали с помощью проточной цитометрии и обнаружили подавление окислительного взрыва ФМА-стимулированных нейтрофилов [Bekesi G. et al., 2000; Chaveiro A., Moreira da Silva F., 2010]. Нейтрофилы, выделенные из периферической крови здоровых добровольцев, при инкубации с прогестероном демонстрировали значительное сокращение

продукции супероксида, кроме того происходило ингибирование ß-глюкуронидазы и выработки лизоцима [Buyon J.P. et al., 2005]. Довольно часто снижение восстановления HCT, сокращение йодирования нейтрофилов исследователи связывают с повышением сывороточного прогестерона [Roth J.A. et al., 1982]. Прогестерон снижает интенсивность люминолзависимой хемилюминисценции нейтрофилов в дозе 100 нг/мл [Ширшев C.B. и др., 2008]. Введение высоких доз прогестерона in vivo приводит к снижению активности миелопероксидазы-Н202-галоидной антибактериальной системы (йодирование) нейтрофилов. Таким образом, высокие дозы прогестерона нарушают бактерицидный механизм нейтрофилов [Roth J.A. et al., 1982].

Часть исследователей указывает на стимулирующее действие прогестерона в отношении кислород зависимого бактерицидного механизма. Например, прогестерон незначительно стимулировал люминол - зависимую хемилюминесценцию нейтрофилов у женщин, но не влиял на мужчин и беременных женщин [Shibuya T. et al., 1991]; увеличивал образование 02 и Н202 в системе in vitro [Martinoli С. et al., 1985]. Повышение реакций йодирования и синтеза супероксидных анионов гранулоцитами при беременности коррелирует с концентрацией прогестерона [Некрасова И.В., 2010].

Некоторые авторы не обнаруживали статистически значимые отличия в активности окислительного взрыва ПЯЛ при изучении влияния физиологических и фармакологических уровней прогестерона на нейтрофильные гранулоциты [Winters K.R. et al., 2003].

Таким образом, при изучении влияния стероидных гормонов на функциональную активность нейтрофилов и моноцитов результаты исследований и мнения авторов отличны и даже противоположны. Причины данных противоречий пока неизвестны. Возможно, это связано с различиями в моделях экспериментов, методах или условиях проведения. Однозначное влияние стероидов на клетки иммунной системы еще предстоит установить.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Смирнова, Татьяна Георгиевна

ВЫВОДЫ

1. У женщин во вторую фазу менструального цикла по сравнению с первой фазой изменяется функциональная активность нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови: возрастает фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов при снижении их внутриклеточного кислородзависимого метаболизма, и увеличивается количество моноцитарных внеклеточных ловушек.

2. Под влиянием эстриола, эстрадиола и прогестерона, изменяется функциональная активность нейтрофилов, выделенных из периферической крови: в первую фазу менструального цикла гормоны оказывают однонаправленное действие, которое выражается в снижении внутриклеточного кислородзависимого метаболизма, усилении эндоцитоза и формирования нейтрофильных внеклеточных ловушек; во вторую фазу менструального цикла гормоны в средней концентрации приводят к повышенной экструзии дезоксирибонуклеиновой кислоты.

3. Под влиянием женских половых стероидных гормонов изменяется функциональная активность моноцитов, выделенных из периферической крови: в первую фазу эстрогены усиливают внутриклеточный кислородзависимый метаболизм; независимо от фазы менструального цикла эстриол, эстрадиол и прогестерон стимулируют формирование моноцитарных внеклеточных ловушек.

4. Под влиянием пирогенала в концентрации, соответствующей разовой терапевтической дозе, изменяется функциональная активность нейтрофилов, выделенных из периферической крови: в первую фазу менструального цикла увеличивается фагоцитоз; во вторую фазу -внутриклеточный кислородзависимый метаболизм. Пирогенал независимо от фазы менструального цикла увеличивает внутриклеточный кислородзависимый метаболизм моноцитов и стимулирует формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами.

5. Независимо от модулирующего действия препаратов эстриола, эстрадиола, прогестерона и пирогенала на внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность и эндоцитоз фагоцитов, их совместное действие снижает эти функции у нейтрофилов и моноцитов по сравнению с моноэффектом пирогенала. Изучая количество внеклеточных ловушек фагоцитов при комбинации женских половых стероидных гормонов с пирогеналом, не обнаружено значимых различий по сравнению с действием пирогенала.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для возникновения и нормального течения беременности необходимы условия, в создании которых чрезвычайно большое участие принимают железы внутренней секреции [Айламазян Э.К., 2003]. Стероидные гормоны играют ключевую роль в становлении, развитии, завершении гестации [Шмагель К. В., Черешнев В. А., 2004] и в нейроэндокринной регуляции функций иммунной системы, определяют уникальные иммунные сдвиги на системном и местном уровнях, связанные с репродукцией [Груздева Е.А., 2003].

Данные литературы свидетельствуют о том, что на иммунных клетках обнаружены рецепторы к различным гормонам и нейромедиаторам, что определяет возможность модулирующего влияния этих агентов на функции иммунокомпетентных клеток [Butts, C.L. et al., 2007; Deroo В. J., Korach K.S., 2006; Kuiper G.G. et al., 1996; Mosmann T.R., Sad S., 1996].

Согласно современным представлениям, беременность приводит к существенным изменениям иммунной системы матери, что обеспечивает защиту и стимуляцию развития плода, а также достаточный уровень иммунореактивности материнского организма [Куклина Е.М. 2003; Сидорова И.С. и др. 2006; Das С. et al, 2001]. Предупреждение инфекции матки имеет решающее значение для успешной репродукции человека [Ширшев C.B., 2009]. Известно, что нейтрофилы и моноциты являются ключевыми клетками в реализации врожденной защиты организма и в значительном количестве присутствуют в эндометрии, миометрии и слизистых оболочках репродуктивного тракта [Телешева Л.Ф., 2000; Ширшев C.B., 2009; Tibbetts T.A. et al., 1999]. Фагоциты обеспечивают защиту организма от инфекций, реализуя механизмы внутри- и внеклеточной бактерицидности, которые еще недостаточно изучены.

В связи с этим целью данной работы явилось изучение влияния женских половых стероидных гормонов (эстриола, эстрадиола и прогестерона) на функциональную активность моноцитов и нейтрофилов, выделенных из периферической крови, в системе in vitro.

Для достижения поставленной цели за период с 2010 по 2011 год на базе НИИ иммунологии ЧелГМА было проведено исследование, в котором приняли участие 60 практически здоровых небеременных женщины в возрасте от 18-35 лет в первую и вторую фазы менструального цикла. У женщин был определен эндогенный уровень прогестерона, эстрадиола и эстриола методом иммуноферментного анализа. В дальнейшее исследование было включено 36 женщин, чьи показатели концентрации всех исследуемых гормонов находились в пределах нормативных значений.

Материалом для исследования являлись чистая фракция нейтрофилов и фракция мононуклеаров, выделенных из периферической крови на двойном градиенте плотности фиколл-верогрофина. Для оценки влияния половых стероидных гормонов на фагоциты, клетки инкубировали с эстриолом, эстрадиолом и прогестероном в минимальной, средней и максимальной концентрациях, которые соответствуют I, II и Ш-му триместрам беременности. В качестве контроля использовали взвесь нейтрофилов или мононуклеаров с физиологическим раствором. Для активации клеток врожденного иммунитета использовали пирогенал в концентрации, соответствующей разовой терапевтической дозе, и проводили совместную инкубацию клеток врожденного иммунитета с пирогеналом и с гормонами. Контролем в данном случае являлась взвесь клеток с пирогеналом. Все пробы инкубировали в одинаковых условиях при температуре 37°С в течение 30 минут. Проводили оценку внутриклеточного кислород зависимого метаболизма нейтрофилов и моноцитов с использованием НСТ-теста, исследовали фагоцитарную функцию и количество нейтрофильных и моноцитарных внеклеточных ловушек.

На первом этапе была изучена функциональная активность нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови женщин в в первую и вторую фазы менструального цикла, и обнаружено, что во вторую фазу менструального цикла по сравнению с первой происходит увеличение фагоцитарной активности, снижение внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов и увеличение количества МВЛ. Вероятно, это обусловлено изменением гормонального фона, а именно, увеличением концентрации прогестерона и эстрадиола в сыворотке крови женщин в лютеиновую фазу менструального цикла. Кроме того, на изменение функциональной активности иммунных клеток может оказывать влияние микрофлора влагалища, которая в репродуктивном возрасте подвержена циклическим колебаниям в зависимости от фаз менструального цикла. В первые дни цикла увеличивается рН среды влагалища до 5,0-6,0. Это связано с попаданием во влагалище большого числа дегенерированных клеток эндометрия и элементов крови. На этом фоне уменьшается общее количество лактобацилл и увеличивается численность факультативных и облигатных анаэробных бактерий. Приведённые данные позволяют предположить, что в пролиферативной фазе менструального цикла ! восприимчивость организма женщины к инфекции возрастает. По окончанию менструации влагалищный биотоп быстро возвращается к исходному состоянию. Популяция лактобацилл быстро восстанавливается и достигает максимального уровня в середине секреторной фазы, когда содержание гликогена в эпителии влагалища самое большое. Этот процесс сопровождает увеличение содержания молочной кислоты и снижение рН до 3,8-4,5. Во второй фазе менструального цикла доминируют лактобациллы, а количество облигатных анаэробов и колиформных бактерий снижается [Кулакова В.И. и др., 2009].

Традиционно считается, что нейтрофилы и моноциты обеспечивают неспецифическую противоинфекционную защиту благодаря реализации функций эндоцитоза, бактерицидности и киллинга микроорганизмов. Поэтому на следующем этапе исследования был изучен дозозависимый эффект женских половых стероидных гормонов на фагоцитоз, внутриклеточную кислородзависимую бактерицидную функцию нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови здоровых небеременных женщин в первую и вторую фазы менструального цикла.

Эстриол, прогестерон и эстрадиол, независимо от концентрации, оказывают однонаправленное действие на нейтрофильные гранулоциты, выделенные из периферической крови женщин в первую фазу менструального цикла, которое выражается в снижении внутриклеточного кислородзависимого метаболизма и усилении эндоцитоза. У женщин во вторую фазу менструального цикла прогестерон в минимальной концентрации уменьшает фагоцитоз и внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов, выделенных из периферической крови.

Под влиянием стероидных гормонов изменяется функциональная активность моноцитов, выделенных из периферической крови: у женщин независимо от фазы менструального цикла эстриол, эстрадиол и прогестерон не влияют на фагоцитоз моноцитов; в первую фазу менструального цикла -эстрогены усиливают внутриклеточный кислородзависимый метаболизм; у женщин во вторую фазу менструального цикла эстриол в средней концентрации увеличивает, а прогестерон в минимальной концентрации снижает внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность моноцитов.

Результаты, полученные при изучении влияния половых стероидных гормонов на функциональную активность нейтрофилов и моноцитов, выделенных из периферической крови женщин, отличаются в зависимости от фазы менструального цикла. Возможно, полученные нами различия можно объяснить преовулярным пиком эстрадиола, ЛГ и ФСГ в стадию овуляции и увеличением концентрации эстрадиола и особенно прогестерона во вторую фазу менструального цикла. Известно, что, обладая выраженными эффектами при действии на многие органы - мишени, ткани, клетки, ферментативные реакции, гормоны не только могут оказывать взаимное влияние на процессы биосинтеза внутри группы, но также способны регулировать биологическую активность друг друга [Шмагель К.В., 2003].

Образование внеклеточных ловушек фагоцитирующими клетками было признано новым и важным механизмом врожденной иммунной защиты организма хозяина против инфекций [Долгушин И.И. и др., 2009; Aulik N.A. et al., 2012; Brinkmann V. et al., 2004; Fuchs, T.A. et al., 2007; Jonsson В., 2009; Von Köckritz-Blickwede M., Nizet V., 2009; Wartha F. et al., 2008; Webster J. et al., 2010]. НВЛ - это экстрацеллюлярные сетеподобные структуры, которые формируются и высвобождаются активированными нейтрофилами (в ответ на микробные и немикробные стимулы) и состоят из ядерной ДНК в качестве основы со встроенными антимикробными пептидами, гистонами и специфичными клеточными протеазами. Основная функция внеклеточных ловушек - захват и уничтожение микроорганизмов [Долгушин И.И. и др., 2009; Fuches Т. А. et al., 2007; Kumar V., Sharma A., 2010; Urban C.F. et al., 2006]. Внеклеточные ловушки образуют различные клетки иммунной системы, такие как нейтрофилы, моноциты, тучные клетки и эозинофилы после стимуляции митогенами, цитокинами или патогенами. Поэтому кроме фагоцитарной и внутриклеточной кислородзависимой бактерицидной функции было исследовано дозозависимое влияние эстрадиола, эстриола и прогестерона на формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами периферической крови здоровых небеременных женщин в первую и во вторую фазы менструального цикла. Обнаружено, что изучаемые гормоны стимулируют формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами, выделенными из периферической крови женщин: независимо от фазы цикла эстриол стимулирует формирование нейтрофильных внеклеточных ловушек, максимальный эффект наблюдается в средней концентрации гормона; эстрадиол и прогестерон в первую фазу менструального цикла статистически значимо увеличивают количество нейтрофильных ловушек в минимальной и средней концентрациях, а во вторую фазу - в средней концентрации по сравнению с контролем. Определено также, что женские половые стероидные гормоны в первую фазу менструального цикла статистически значимо увеличивают количество моноцитарных ловушек во всех концентрациях, а во вторую фазу - в минимальной и средней концентрациях.

Рассмотрим возможные механизмы, посредством которых стероидные гормоны могут запускать внутри- и внеклеточную кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов и моноцитов.

Действие стероидных гормонов реализуется двумя путями: классическим геномным, который принято считать медленным (действие обнаруживается спустя часы, сутки) и быстрым негеномным (эффект проявляется в течение нескольких минут) [Токмаков А.А., Фуками Я., 2009]. Т.к. мы регистрировали изменения функциональной активности клеток врожденного иммунитета через 30 минут после добавления гормонов, то логично, что данный эффект реализуется негеномным путем. В этом случае передача сигнала от стероидных гормонов происходит через специфические рецепторы мембраны клетки-мишени [Giraldi Т. et al., 2010].

Механизм фагоцитоза и внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности у нейтрофилов и моноцитов схож [Aderem A., Underhil D.M., 1999; Lee W.L. et al., 2003], а вот процесс формирования МВД на сегодняшний день недостаточно изучен, в отличие от механизма образования HBJI [Remijsen Q. et al., 2011; Савочкина А.Ю., 2012]. В связи с вышесказанным, наиболее подробно рассмотрим механизмы, приводящие к изменению функциональной активности нейтрофилов.

Активация клетки происходит вследствие взаимодействия рецепторов цитоплазматической мембраны (TLR, FcR, ER, PR и др.) [Phagocytosis of microbes [Сайт]. URL: https://www.qiagen.com/geneglobe/path wayview.aspx?pathwayID=355. (проверено от 20.12.12.)] с провоспалительными факторами (ЛПС, микроорганизмами) [Neeli I. et al., 2008; Wang Y. et al., 2009], a также половыми стероидными гормонами (эстрогенами и прогестероном).

Наиболее изучены сигналы от Fe - рецепторов (рис. 9). Для активации трансмембранного Fe - рецептора необходимо фосфорилирование тирозинового остатка внутри ITAM (иммунорецепторный активационный мотив на основе тирозина) [Lee W.L. et al., 2003], которое осуществляет расположенная рядом Src - киназа (нерецепторная, цитоплазматическая тирозинкиназа семейства Src). В результате чего активируется тирозин-киназа Syk (Spleen tyrosine kinase, нерецепторная, цитоплазматическая тирозинкиназа семейства Syk). Аналогичные события происходят при активации TLR [Johnsen I.B. et al., 2006], ER и PR [Giraldi T. et al., 2010; GeneGlobe Pathways [Сайт] URL: https://www.qiagen.com/geneglobe/pathwayview.aspx?pathwayID=166. (проверено от 20.12.12.)]. Привлечение Syk сопровождается стимуляцией PI3K (фосфатидилинозитол-3-киназы), которая активирует PLC (фосфолипазу С). PLC производит активационные (классические) и новые изоформы РКС (протеинкиназы С), а также вызывает высвобождение Са++ из внутриклеточного депо - ЭПС [Deffert D.M., 1986]. Кроме того, Syk активирует киназу фокальной адгезии (focal adhesion kinase, FAK), белок паксиллин (paxillin), Rae и Cdc42 (надсемейство малых GTP-связываюших белков), которые необходимы для актиновой сборки после стимуляции Fe -рецептора. Эффекты белков, киназ и Са++ индуцируют полимеризацию актина и ремоделирование мембраны, что имеет важное значение для осуществления адгезии и фагоцитоза [Lee W.L. et al., 2003].

Также хотелось обратить внимание на НАДФ - оксидазу (мембраносвязанный мультимолекулярный ферментный комплекс), которая является необходимым, но не единственным звеном реализации фагоцитоза и формирования внеклеточных ловушек. НАДФ - оксидаза состоит из шести гетеросубъединиц, которые в неактивном состоянии пространственно разобщены во внутриклеточном континууме. Инициализация процесса сборки НАДФ - оксидазы связана с двумя внутриклеточными сигнальными факторами — с активностью PI3K, РКС и с повышением внутриклеточной концентрации ионов Са++ [Абатуров А.Е. Активированные кислородсодержащие метаболиты - компонент системы неспецифической защиты респираторного тракта [Сайт]. URL: http://www.nbuv.gov.ua/Portal/ChemBiol/Zd/20092/articles/09aaezrt.pdf. (проверено 21.12.12.); Маянский А.Н., 2007].

В результате активации НАДФ - оксидазы происходит повышение уровня перекиси водорода и, соответственно, свободных форм кислорода в цитоплазме, которые осуществляют бактерицидный эффект внутри фаголизосом, а также приводят к повреждению митохондрий и далее к повышению уровня Са++, который в свою очередь активирует Са+ -зависимую PAD-4 (пептидиларгининдеиминзу - 4), которая запускает один из ключевых процессов формирования HBJI - цитруллинацию гитонов [Remijsen Q. et al., 2011]. Цитруллинация - это превращение положительно заряженного аргинина гистонов в полярный, но незаряженный цитруллин путем деиминации. Эта посттрансляционная модификация катализируемая PAD-4 способствует деконденсации хроматина, ослаблению взаимодействия гистонов и ДНК [Савочкина А.Ю., 2012; Von Köckritz-Blickwede М., Nizet V., 2009].

Кроме того, образованию HBJT предшествуют процессы внутриклеточного взаимодействия аутофагии и микротрубочек (которые опосредуется PI3K) [Савочкина А.Ю., 2012; Remijsen Q. et al., 2010], в результате происходит разрушение ядерной и эндоплазматических мембран [Remijsen Q. et al., 2011] и образование внеклеточной ловушки.

Аутофагия - это процесс самопереваривания, который направлен на деградацию ненужных «отработанных» органелл и белковых молекул [Савочкина А.Ю., 2012]. Для обеспечения надлежащего временного и пространственного развертывания HBJI необходимо скоординированное взаимодействие между микротрубочками и актиновыми филаментами. Актиновый цитоскелет участвует в разрыве ядерных и цитоплазматических мембран. Микротрубочки являются необходимым звеном в процессе формирования HBJI [Савочкина А.Ю, 2012; Neeli I. et al, 2008].

Имеющиеся на сегодняшний день данные свидетельствуют о том, что стероидные гормоны активируют внутриклеточные белки и киназы, играющие важную роль в регуляции функциональной активности клетки (на рис. 9 указано стрелками).

Изучено, что передача сигнала от стероидных гормонов связана с каскадом вторичных посредников PI3K [Giraldi Т. et al, 2010; GeneGlobe Pathways [Сайт] URL: https://www.qiagen.com/geneglobe/pathwayview.aspx?pathwayID= 166. (проверено от 20.12.12.)], PLC [Civitelli R. et al, 1990] и PKC [Sylvia V.L. et al, 1993; GeneGlobe Pathways [Сайт] URL: https ://www. qiagen.com/geneglobe/pathwayview. aspx?pathwayID=166. (проверено от 20.12.12.)]

Эстрогены и прогестерон повышают количество маркеров окислительного стресса [Santanam N. et al, 1998; Chaveiro A, Moreira da Silva F, 2009] и вызывают быстрое производство внутриклеточных АФК в нейтрофилах [Felty Q. et al, 2005; Martinoli С. et al, 1985; Scheibl P, Zerbe H, 2000].

Половые стероидные гормоны принимают участие в регуляции цитоскелета и микротрубочек [Giretti M.S., Simoncini Т, 2008; Lee S.J. et al, 2009]. In vitro изучено прямое влияние эстрадиола на цитоскелет человеческих остеобластов и показано, что эстрадиол значительно снижает модуль упругости остеобластов (на 43-46%), изменяя структуру F-актина [Muthukumaran Р. et al, 2012]. Кроме того, эстрогены вызывают нарушения микротрубочек в клетках китайского хомячка V79 [Aizu-Yokota Е. et al.

1995] и распад напряженных фибрил актинового цитоскелета клеток эндометрия, что приводит к активному накоплению актина на периферии клетки, формированию ламеллоподий, филоподий и мембраных шипов [Acconcia F. et al., 2006]. В экспериментальных моделях обнаружено, что 17ß-эстрадиол и прогестерон оказывают стимулирующее действие на аутофагию клеток молочной железы коров in vitro [Sobolewska А. et al., 2009].

Кроме того, стероидные гормоны, образуя гормон - рецепторный комплекс с неклассическим рецептором на мембране клетки [Lösel R., Wehling М., 2003], активируют ионные каналы, меняя возбудимость клетки. Эффекты эстрогенов на клетки-мишени проявляются в изменении мембранных ионных токов - Ca44" через активацию Са++ - каналов [Карева E.H., 2003; De Boland A.R., Norman A.W., 1990; Yang X. et al., 2012; Wehling M. et al., 1990]. Примером негеномного действия эстрогена является поступление Ca44" в клетки эндометрия [Pietras R.J., Szego С.М., 1975]. Известно, что ЭПС и другие эндогенные кальциевые хранилища (цистерны комплекса Гольджи, секреторные гранулы) чувствительных к действию гормонов [Deffert D.M. et al., 1986]. Кроме того, показано, что в бескальциевой среде nß-эстрадиол стимулирует выход из моноцитов и нейтрофилов внутриклеточного кальция [Stefano G.B., 1999, 2000].

Таким образом, стероидные гормоны могут влиять на сигнальные молекулы PI3K, PLC и PKCs, которые запускают механизмы как внутри - , так и внеклеточной бактерицидности. лпс

Бактерии

Рис. 9. Предполагаемый механизм действия стероидных гормонов на внутри- и внеклеточную кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов.

В проведенном исследовании установлено, что эстриол, эстрадиол и прогестерон изменяют функциональную активность нейтрофилов и моноцитов периферической крови не только в физиологических условиях, но и в условиях повышенной бактериальной нагрузки, которые моделировались in vitro путем добавления пирогенала - бактериального липополисахарида.

Определено действие отдельно пирогенала и совместные эффекты каждого из гормонов (эстрадиола, эстриола и прогестерона) с пирогеналом на способность моноцитов и нейтрофилов, выделенных из периферической крови женщин в первую и вторую фазы менструального цикла, к образованию внеклеточных ловушек, фагоцитоз и бактерицидную функцию. И установлено, что вне зависимости от фазы цикла пирогенал стимулирует формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами периферической крови. У женщин в первую фазу меструального цикла пирогенал увеличивал фагоцитоз нейтрофилов периферической крови; снижал фагоцитарное число и увеличивал активность и индекс индуцированного НСТ-теста моноцитов периферической крови; а во вторую фазу меструального цикла пирогенал повышал показатели индуцированного НСТ-теста нейтрофилов и моноцитов периферической крови. У женщин независимо от фазы менструального цикла пирогенал в комбинации с эстриолом, эстрадиолом или прогестероном приводил к снижению внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности и фагоцитоза нейтрофилов и моноцитов периферической крови по сравнению с моноэффектом пирогенала. Таким образом, можно заключить, что независимо от модулирующего действия стероида (активирует, подавляет или не влияет) и стимулирующего эффекта пирогенала в отношении внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности, фагоцитоза нейтрофилов и моноцитов, их совместная инкубация приводит к подавлению функциональной активности клеток врожденного иммунитета в системе in vitro. Возможно, угнетающий эффект сочетания стероидных гормонов и ЛПС 1 является защитным механизмом при беременности для предотвращения гиперактивация системы естественного иммунитета, которая является одним из факторов развития таких нарушений, как невынашивание беременности и нефропатия беременных (системная эндотелиальная дисфункция) [Гузов И.И., 2003]. Известно, что во время фагоцитоза и гибели нейтрофилов происходит выделение из них медиаторов воспаления, секреция биологически активных веществ, которые увеличивают функциональную активность мононуклеарных фагоцитов [Долгушин И.И., Бухарин О., 2001]. Как следствие взаимодействия моноцитов и макрофагов с объектами фагоцитоза происходит индукция синтеза и секреции ряда цитокинов: ИЛ-1,6,8 и 12, TNF-a, интерферонов, которые получили общее название "провоспалительные цитокины". Избыточное количество провоспалительных цитокинов в организме женщины ведет к преждевременному прерыванию беременности [Сидельникова В.М., 2009]. При беременности, осложненной гестозами, наблюдается гиперактивация нейтрофильных гранулоцитов периферической крови [Кравцова Е.И. и др., 2004] и отмечается возрастание уровня TNF-a и ИЛ-6 в плазме крови, увеличение продукции ИЛ-6 моноцитами [Павлов О.В., Сельков С.А., 2004].

В связи с тем, что сочетания различных концентраций стероидных гормонов и ЛПС уменьшают фагоцитоз и внутриклеточную кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов и моноцитов в системе in vitro, назначение иммуномодуляторов во время беременности следует проводить с осторожностью.

Нужно отметить, что комбинация пирогенала с каждым из гормонов (эстриолом, эстрадиолом, прогестероном) не приводит к изменению количества внеклеточных ловушек фагоцитов в системе in vitro по сравнению с действием пирогенала, в отличие от показателей фагоцитоза и внутриклеточной кислородзависимой бактерицидности. Возможно, это связано с тем, что НВЛ, связывая микроорганизмы, гарантируют высокую местную концентрацию антимикробных агентов, необходимую для уничтожения бактерий [Brinkmann V. et al., 2004], в то же время минимизируют тканевое повреждение [Долгушин И.И. и др., 2009]. Кроме того, образование нейтрофильных внеклеточных ловушек - это функция, являющаяся не только альтернативой фагоцитозу, но и более эффективной [Савочкина А.Ю., 2012].

Известно, что сыворотка и плазма крови блокируют выброс нитей ДНК нейтрофилами во внеклеточное пространство [Рыжкова А.И., 2010], и существует мнение, подтвержденное экспериментальными данными, о том, что образование HBJI - это механизм защиты, работающий преимущественно в тканях и на поверхности слизистых оболочек, а не в циркуляции. Скорее всего, формирование внеклеточных ловушек является одним из важных механизмов участия нейтрофила в противоинфекционной защите именно слизистых оболочек [Савочкина А.Ю., 2012].

На сегодняшний день показано, что HBJI захватывают и уничтожают не только бактерии и грибы [Medina Е., 2009; Fuchs Т.А. et al., 2007; Urban C.F. et al., 2006], но и некоторые вирусы, например, ВИЧ. НВЛ предотвращают распространение ВИЧ и обеспечивают высокую локальную концентрацию миелопероксидазы и а-дефенсина, что способствует инактивации вируса. Показано, что гистоны, входящие в состав НВЛ, богаты положительно заряженными основными аминокислотами, благодаря чему происходит их взаимодействие с отрицательно заряженной оболочкой ВИЧ [Saitoh Т. et al., 2012].

Таким образом, образование нейтрофильных внеклеточных ловушек, возможно, является одним из основных механизмов защиты урогенитального тракта женщины и особенно плода от инфекций (бактерий, грибов и вирусов).

Недавние исследования показали, что помимо положительной роли НВЛ в защите организма от микроорганизмов, эти структуры участвуют в патогенезе преэклампсии, при которой происходит активация нейтрофилов, и повышение уровня внеклеточной ДНК в плазме матери. Плацентарные микрочастицы синцитиотрофобласта, образующиеся в больших количествах при преэклампсии, индуцируют формирование HBJI изолированными нейтрофилами. Кроме того, доказано увеличение количества HBJI в межворсинчатом пространстве плаценты при преэклампсии [Gupta А.К. et al., 2006, 2007].

Компоненты врожденного иммуннитета крайне важны для нормального течения беременности и послеродового периода, они обеспечивают защиту от различных инфекций [Кузнецов П.А., 2009; Макаров О.В. и др., 2007]. Многочисленные исследования различных авторов показывают, что состояние плода и здоровье новорожденного во многом определяются характером течения гестационного процесса и состоянием иммунной системы женщины во время беременности [Анциферова Ю.С. 1996; Сотникова Н.Ю. и др., 1998, 2005; Sargent H.J., 1998]. Большие надежды, возлагаемые на коррекцию врожденного иммунитета, естественно с учетом других компонентов иммунной системы, позволят в будущем эффективно решить проблему невынашивания и предупреждения инфицирования плода и новорожденного [Макаров О.В. и др., 2007].

В настоящее время считается доказанной неспецифическая регуляция эндокринной системой иммунологических функций. Результаты проведенного исследования показали, что в зависимости от фазы менструального цикла изменяется функциональная активность клеток врожденного иммунитета. Женские половые стероиды влияют на внутри- и внеклеточную бактерицидность фагоцитирующих клеток, при этом их действие на нейтрофилы и моноциты различно и зависит от дозы гомона, фазы менструального цикла и наличия ЛПС.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Смирнова, Татьяна Георгиевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абатуров, А. Е. Активированные кислородсодержащие метаболиты - компонент системы неспецифической защиты респираторного тракта [Электронный ресурс] / А.Е. Абатуров // Теоретична медицина ; Днепропетр. гос. мед. академия. - Режим доступа : http://www.nbuv.gov.ua/Portal/Chem_Biol/Zd/2009_2/articles/09aaezrt.pdf. -Проверено 21.12.12.

2. Айламазян, Э.К. Акушерство / Э.К. Айламазян. - СПб. : СпеиЛит, 2003.-528 с.

3. Алешкин, В.А. Иммунология репродукции / В.А. Алешкин, А.Н. Ложкина, Э.Д. Загородняя. - Чита, 2004. - 79 с.

4. Анашкина, Г.А. Гормональные параметры овуляции менструального цикла женщин в норме и при различных нарушениях репродуктивной функции : дис. ... канд. биол. наук / Г.А. Анашкина. - М., 1984.- 124 с.

5. Анциферова, Ю.С. Иммуномодулирующее действие нейтрофилов и их роль при беременности : автореф. дис. ... канд. биол. наук / Ю.С. Анциферова. - М., 1996. - 19 с.

6. Аутеншлюс, А.И. Состояние клеточного иммунитета у беременных с воспалительным заболеванием почек / А.И. Аутеншлюс, О.В. Иванова, Т.Н. Коновалова // Иммунология. - 1998. -№ 4. - С. 52-55.

7. Баграмян, Э.Р. О гормональной регуляции гестационного процесса / Э.Р. Баграмян // Акуш. и гин. - 1984. - № 4. - С. 8-12.

8. Балика, Ю.Д. Показатели крови и мочи при физиологическом течении беременности и послеродового периода / Ю.Д. Балика, М.М. Шехтман // Акуш. и гин. - 1984. - № 3. - С. 23-26.

9. Берлев, И.В. Клинико-лабораторная диагностика бактериального амнионита : автореф. дис. ... канд. мед. наук / И.В. Берлев. - СПб., 1995. - 16 с.

10. Булатова, Е.М. Иммунитет: традиционные представления и новые данные о формировании иммунного ответа в онтогенезе / Е.М. Булатова, Н.М. Богданова, Т.В. Габрусская и др. // Педиатрическая фармакология. - 2008. - Т. 5, № 5. - С. 78-87.

11. Быков, B.J1. Функциональная морфология больших гранулярных лимфоцитов эндометрия / B.JI. Быков // Морфология. - 2001. - № 2. - С. 7075.

12. Гадиева, Ф.Г. Взаимосвязь иммунной и эндокринной систем у женщин репродуктивного возраста / Ф.Г. Гадиева // Акуш. и гин. - 2001. - № 1.-С. 11-13.

13. Груздева, Е.А. Половые стероидные гормоны в регуляции функций фагоцитирующих клеток : дис. ... канд. биол. наук / Е.А. Груздева. -Пермь, 2003.-209 с.

14. Гузов, И.И. Иммунология и иммунопатология беременности / И.И. Гузов / Новости прикладной иммунологии и аллергологии. - 2003. - № 7.-С. 3-6.

15. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. - Екатеринбург, 2001. - 259 с.

16. Долгушин, И.И. Нейтрофильные внеклеточные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов : монография / И.И. Долгушин, Ю.С. Андреева, А.Ю. Савочкина. - М. : РАМН, 2009. - 208 с.

17. Дранник, Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Дранник. - М. : МИА, 2003. - 604 с.

18. Зароченцева, Н.В. Особенности местного иммунитета шейки матки и беременность / Н.В. Зароченцева // Рос. вестн. акушера гинеколога. -2007.-Т.7, № 1.-С. 19-22.

19. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения прогестерона в сыворотке крови человека «СтероидИФА-прогестерон-01» / Р.У. Хабриев. - 20. 11. 2000. - 16 с.

20. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения эстриола в сыворотке (плазме) крови «свЭстриол-ИФА» / Д.С. Кострикин. - 11.06. 2008. - 16 с.

21. Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения эстрадиола в сыворотке (плазме) крови «Эстрадиол-ИФА» / Д.С. Кострикин. - 22.11. 2007. - 16 с.

22. Карева, E.H. Молекулярные механизмы действия женских половых стероидов и их антагонистов : дис. д-ра мед. наук / E.H. Карева. -М., 2003.-273 с.

23. Kapp, Я. Макрофаги: обзор ультраструктуры и функции : пер. с англ. / Я. Kapp. - M., 1987. - 188 с.

24. Кеворков, H.H. Гормоны репродукции в регуляции процессов иммунитета / H.H. Кеворков, Ю.И. Шилов, C.B. Ширшев и др. -Екатеринбург : УИФ Наука, 1993. - 173 с.

25. Кравцова, Е.И. Диагностические маркеры степени тяжести поздних гестозов беременных / Е.И. Кравцова, Н.В. Колесникова, Б.Г. Ермошенко и др. // Акуш. и гин. - 2004. - № 1 (3). - 4-10 с.

26. Кривохижина, JI.B. Современные представления о регуляции неспецифической защиты в организме / JI.B. Кривохижина, М.В. Осиков // Вестн. ЮУрГУ. - 2005. - № 4. - С. 88-93.

27. Кузнецов, П.А. Оценка факторов врожденного иммунитета слизистой цервикального канала в прогнозировании преждевременных родов : дис. канд. мед. наук / П.А. Кузнецов. - М., 2009. - 139 с.

28. Куклина, Е.М. Клеточные и молекулярные механизмы иммуномодулирующей активности репродуктивных гормонов : дис. д-ра биол. наук / Е.М. Куклина. - М., 2003. - 236 с.

29. Кулакова, Г.М. Гинекология - национальное руководство / В.И. Кулакова, Г.М. Савельева, И.Б. Манухина. - M : ГЭОТАР-Медиа, 2009. -1088 с.

30. Лебедева, О.П. Врожденный иммунитет женских половых путей и его гормональная регуляция (мини-обзор) / О.П. Лебедева, П.В. Калуцкий, С.П. Пахомов и др. // Науч. ведомости БелГУ. - 2009. - №8 (48). - С. 25-30.

31. Макаров, О.В Невынашивание беременности, инфекция, врожденный иммунитет / О.В. Макаров, Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская и др. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 176 с.

32. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д. Н. Маянский. - Новосибирск : Наука, 1989. - 328 с.

33. Маянский, А.Н. НАДФН-оксидаза нейтрофилов: активация и регуляция / А. Н. Маянский // Цитокины и воспаление. - 2007. - № 3. - С 313.

34. Механизм действия стероидных гормонов. Геномный механизм действия [Электронный ресурс] // Меёишуег Физиология человека : медицинский информационный портал. - Режим доступа: http://meduniver.com/Medical/Physiology/60.html. - Проверено 10.10.12.

35. Минкина, Э.П. Гормональные аспекты физиологической беременности / Э.П. Минкина, Э.П. Рымашевская, Л.С. Курганова. - Ростов н/д., 1987.- 122 с.

36. Монтгомери, Д.К. Планирование эксперимента и анализ данных : пер. с англ. / Д.К. Монтгомери. - Л. : Судостроение, 1980. - 384 с.

37. Не геномный механизм действия стероидных гормонов [Электронный ресурс] // Meduniver Физиология человека : медицинский информационный портал. - Режим доступа: http://meduniver.com/Medical/Physiology/61.html. - Проверено 10.10.12.

38. Некрасова, И.В. Половые стероидные гормоны беременности как регуляторы функциональной активности клеток иммунной системы : дис. канд. биол. наук. - Пермь, 2010.- 133 с.

39. Новиков, Д.К. Медицинская иммунология / Д.К. Новиков. -Минск : Высшая школа, 2005. - 305 с.

40. Павлов, О.В. Иммунология репродукции: старые догмы и новые представления / О.В. Павлов, С.А. Сельков // Журн. акушерства и женских болезней. - 2004. - Т. 8, Вып. 1. - С. 89-96.

41. Пат. РФ на изобретение № 2384844 «Способ обнаружения НВЛ» / И.И. Долгушин, Ю.С. Андреева. - 0.04.2008.

42. Поллов, К. Введение в репродуктивную эндокринологию / К. Поллов. - Мейнц, 2000. - 200 с.

43. Посидеева, Л.В. Иммунология беременности / Л.В. Посидеева, Н.Ю. Сотникова // Акуш. и гин. - 2007. - № 5. - С. 42-45.

44. Потемкин, В.В. Эндокринология / В.В. Потемкин. - М. : Медицина, 1986.-432 с.

45. Рецепторы стероидных гормонов: механизм действия. [Электронный ресурс] // тес!Ью1 Биология и медицина : медицинский информационный портал. - Режим доступа: http://medbiol.ru/medbiol/01122001/рго§е5М00067ас.Мт - Проверено 10.10.12.

46. Русакевич, П.С. Заболевания шейки матки / П.С. Русакевич. -Минск : Высшая школа, 1998. - 367 с.

47. Рыжкова, А.И. Влияние микробных и немикробных факторов на формирование внеклеточных ловушек нейтрофилами периферической крови : дис. ... канд. мед. наук / А.И. Рыжкова. - Челябинск, 2010. - 143 с.

48. Савочкина, А.Ю. Нейтрофильные внеклеточные ловушки: механизмы образования, методы обнаружения, биологическая роль : дис. ... д-ра мед. наук / А.Ю. Савочкина. - Челябинск, 2012. - 210 с.

49. Северин, Е.С. Биохимия : учеб. для вузов / Е.С. Северин. - 2-е изд., испр. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 779 с.

50. Семёнов, Б.Ф. Концепция создания быстрой иммунологической защиты от патогенов / Б.Ф. Семёнов, В.В. Зверев // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2007. - № 4. - С. 93-100.

1

51. Серов, В.Н. Гинекологическая эндокринология / В.Н. Серов, В.Н. Прилепская, Т.В. Овсянникова. - М., 2004. - 528 с.

52. Сидельникова, В.М. Применение дидрогестерона у пациенток с неполноценной лютеиновой фазой до и во время беременности / В.М. Сидельникова // Гинекология. - 2009. - Т. 11, № 1. - С. 68-70.

53. Сидорова, И.С. Руководство по акушерству / И.С. Сидорова, Макаров В.И. Кулаков и др. - М. : Медицина, 2006. - 841 с.

54. Сидорова, И.С. Состояние иммунной системы у беременных и новорожденных группы высокого риска по внутриутробному инфицированию / И.С. Сидорова, В.А. Алешкин, H.A. Матвиенко // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. - 1999. - № 6. - С. 10-16.

55. Смирнова, Т.Л. Иммунитет и беременность / Т.Л. Смирнова, Е.В. Портнова, В.Е. Сергеева // Вестн. ЧГУ. - 2009. - № 2. - С. 79-85. - (Сер. «Естественные и технические науки»).

56. Сотникова, Н.Ю. Участие в процессе активации лимфоцитов факторов, продуцируемых нейтрофилами женщин с физиологической беременностью и с беременностью, осложненной поздним ОПГ-гестозом / Н.Ю. Сотникова, Ю.С. Анциферова, Н.В. Крошкина и др. // Клин. лаб. диагностика. - 1998. - № 6. - С. 51 -54.

57. Сотникова, Н.Ю. Иммунологическая загадка беременности / И.Ю. Сотникова, Ю.С. Анциферова, A.B. Кудряшова и др. - Иваново, 2005. -272 с.

58. Татарчук, Т.Ф. Эндокринная гинекология (клинические очерки) / Т.Ф. Татарчук, Я.П. Сольский. - Киев, 2003. - 300 с.

59. Телешева, Л.Ф. Иммунологические факторы секретов репродуктивного тракта женщин : дис. ...д-ра мед. наук / Л.Ф. Телешева. -Челябинск, 2000. - 324 с.

60. Тимошенко, Л.В. Акушерская эндокринология / Л.В. Тимошенко. -Киев : Здоровье, 1981.-278 с.

61. Токмаков, A.A. Внегеномные механизмы действия прогестерона / A.A. Токмаков, Я. Фуками // Цитология. - 2009. - Т. 51, № 5. - С. 403-416.

62. Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. - СПб. : Наука, 2000. - Т. 2. - 231 с.

63. Фрейдлин, И.С. Система мононуклеарных фагоцитов / И.С. Фрейдлин. - М. : Медицина, 1984. - 272 с.

64. Фрейдлин, И.С. Иммунная система и ее дефекты : руководство для врачей / И.С. Фрейдлин. - СПб. : НТФФ Полисан, 1998. - 113 с.

65. Хаитов, P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 1995. - № 4. - С. 3-8.

66. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. - М. : Медицина, 2000. - 430 с.

67. Ширшев, C.B. Механизмы иммуномодулирующего действия гормонов репродукции : дис. д-ра мед. наук / C.B. Ширшев. - Пермь, 1996. -400 с.

68. Ширшев, C.B. Механизмы иммунноэндокринного контроля процессов репродукции : в 2 т. / C.B. Ширшев. - Екатеринбург : УрО РАН, 2002.-Т. 2.-585 с.

69. Ширшев, C.B. Влияние эстрадиола на фагоцитарную и окислительную активность моноцитов и нейтрофилов / C.B. Ширшев, Е.М. Куклина, У.С. Гудина // Вестн. пермского ун-та. - 2008. - Вып. 9 (25). - С. 96-99.

70. Ширшев, C.B. Иммунология материнско-фетальных взаимодействий / C.B. Ширшев. - Екатеринбург, 2009. - 577 с.

71. Шишкова, Ю.С. Роль нейтрофилов в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек : дис. ... д-ра мед. наук / Ю.С. Шишкова. - Челябинск, 2010. - 265 с.

72. Шмагель, К.В. Иммунитет беременной женщины / К.В. Шмагель.

- М. : Медицинская книга, 2003. - 226 с.

73. Шмагель, К.В Стероидные гормоны: физиологическая роль и диагностическое значение в период беременности / К.В Шмагель, В.А. Черешнев // Успехи физиол. наук. - 2004. - Т. 35, № 3. - С. 61-71.

74. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. - М. : Медицина, 1999.-602 с.

75. Acconcia, F. Estrogen and tamoxifen induce cytoskeletal remodeling and migration in endometrial cancer cells / F. Acconcia, C.J. Barnes, R. Kumar // Endocrinology. - 2006. - Vol. 147 (3). - P. 1203-1212.

76. Aderem, A. Mechanisms phagocytosis in macrophages / A. Aderem, D. M. Underhill //Annu. Rev. Immunol. - 1999. - Vol. 17. - P. 593-623.

77. Aerts, J.L. Evaluation of progesterone receptor expression in eosinophils using real-time quantitative PCR / J.L. Aerts, M.R. Christiaens, P. Vandekerckhove // Biochim. Biophys. Acta. - 2002. - Vol. 1571. - P. 167-172.

78. Aizu-Yokota, E. Natural estrogens induce modulation of microtubules in Chinese hamster V79 cells in culture / E. Aizu-Yokota, A. Susaki, Y. Sato // Cancer Res. - 1995. - Vol. 55 (9). - P. 1863-1868.

79. Allan, G.E. Ligand- dependent conformational changes in the progesterone receptor are necessary for events that follow DNA binding / G.E. Allan, S.Y. Tsai, M.J. Tsai et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1992. - Vol. 89. -P. 11750-11754.

80. Allera, A. Glucocorticoid-recognizing and -effector sites in rat liver plasma membrane. Kinetics of corticosterone uptake by isolated membrane vesicles- II. Comparative influx and efflux / A. Allera, L. Wildt // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. - 1992. - Vol. 42. - P. 757-771.

81. Armitage, P. Statistical methods in medical research / P. Armitage, G. Berry, J.N.S. Matthews. - 4th ed. - Oxford : Blackwell Publishing company, 2002.

- 816 p.

82. Auffray, C. Blood monocytes: development, heterogeneity, and relationship with dendritic cells / C. Auffray, H.M. Sieweke, F. Geissmann // Annu. Rev. Immunol. - 2009. - Vol. 27. - P. 669-692.

83. Aulik, N.A. Mannheimia haemolytica and its leukotoxin causes macrophage extracellular trap (MET) formation by bovine macrophages / N.A. Aulik, K.M. Hellenbrand, C.J. Czuprynski // Infect. Immun. - 2012. - Vol. 80 (5). -P. 1923-1933.

84. Bagchi, M.K. Steroid hormone-dependent interaction of human progesterone receptor with its target enhancer element / M.K. Bagchi, J.F. Elliston, S.Y. Tsai et al. // Mol. Endocrinol. - 1988. - Vol. 2. - P. 1221-1229.

85. Bagchi, M.K. Identification of a functional intermediate in receptor activation in progesterone-dependent cell-free transcription / M.K. Bagchi, S.Y. Tsai, M.J. Tsai et al. // Nature. - 1990. - Vol. 345. - P. 547-550.

86. Baldi, E. Intracellular calcium accumulation and responsiveness to progesterone in capacitating human spermatozoa / E. Baldi, R. Casano, C. Falsetti et al. // J. Androl. - 1991. - Vol. 12. - P. 323-330.

87. Barriga, C. Increased phagocytic activity of polymorphonuclear leucocytes during pregnancy / C. Barriga, A.B. Rodriquez, E. Ortega // Eur. J. Obst. Ginecol. Reprod. Biol. - 1994. - Vol. 57, № 1. - P. 43-46.

88. Beagley, K.W. Regulation of innate and adaptive immunity by the female sex hormones oestradiol and progesterone / K.W. Beagley, C.M. Gockel // FEMS Immunol. Med. Microbiol. - 2003. - Vol. 38 (1). - P. 13-22.

89. Beato, M. Gene regulation by steroid hormones / M. Beato // Cell. -1989.-Vol. 56.-P. 335-344.

90. Beato, M. Transcriptional regulation by steroid hormones / M. Beato, S. Chavez, M. Truss // Steroids. - 1996. - Vol. 61. - P. 240-251.

91. Beato, M. Steroid hormone receptors: An update / M. Beato, J. Klug // Hum. Reprod. Update. - 2000. - Vol. 6. - P. 225-236.

92. Beato, M. Interaction of steroid hormone receptors with the transcription initiation complex / M. Beato, A. Sánchez-Pacheco // J. Clin. Invest.

- 2006. - Vol. 116 (3). - P. 561-570.

93. Békési, G. In vitro effects of different steroid hormones on superoxide anion production of human neutrophil granulocytes / G. Békési, R. Kakucs, S. Várbíró et al. // Steroids. - 2000. - Vol. 65 (12). - P. 889-894

94. Bekesi, G. The effect of estrogens on superoxide anion generation by human neutrophil granulocytes: possible consequences of the antioxidant defense / G. Bekesi, Z. Tulassay, K. Racz et al. // Gynecol. Endocrinol. - 2007. - Vol. 23 (8).-P. 451-454.

95. Belo, L. Fluctuations in C-reactive protein concentration and neutrophil activation during normal human pregnancy / L. Belo, A. Santos-Silva, S. Rocha et al. // Eur. J. Obst. Gynecol. Reprod. Biol. - 2005. - Vol. 123 (1). - P. 46-51.

96. Ben Hur, H. Menopause is associated with a significant increase in blood monocyte number and a relative decrease in the expression of estrogen receptors in human peripheral monocytes / H. Ben Hur, G. Mor, V. Insler et al. // Am. J. Reprod. Immunol. - 1995. - Vol. 34. - P. 363-369.

97. Bjorksten, B. Polymorphonuclear leucocytes function during pregnancy / B. Bjorksten, T. Soderstroom, M.G. Damber et al. // Scand. J. Imunol.

- 1978.-Vol. 8.-P. 257-264.

98. Blackmore, P.F. Progesterone and 17a-hydroxyprogesterone. Novel stimulators of calcium influx in human sperm / P.F. Blackmore, S.J. Beebe, D.R. Danforth et al. // J. Biol. Chem. - 1990. - Vol. 265. - P. 1376-1380.

99. Boland, R. Modulation of tyrosine phosphorylation signalling pathways by 1 alpha, 25(OH)2-vitamin D3 / R. Boland, C. Buitrago, A.R. De Boland. // Trends Endocrinol. Metab. - 2005. - Vol. 16 (6). - P. 280-287.

100. Brinkmann, V. Neutrophil extracelllulartraps kill bacteria / V. Brinkmann, U. Rechard, C. Goosmann et al. // Sciense. - 2004. - Vol. 303. - P. 1532-1535.

101. Brinkmann, V. Beneficial suicide: why neutrophils die to make NETs / V. Brinkmann, A. Zychlinsky // Nat. Rev. Microbiol. - 2007. - Vol. 5. - P. 577582.

102. Bruneiii, R. Hormone replacement therapy affects various immune cell subsets and natural cytotoxity / R. Bruneiii, D. Frasca, C. Perrone et al. // Gynecol. Obst. Invest. - 1996. - Vol. 88.-P. 128-131.

103. Butts, C.L. Evaluation of steroid hormone receptor protein expression in intact cells using flow cytometry / C.L. Butts, S.A. Shukair, K.M. Duncan et al. // Sternberg Nucl. Recept. Signal. - 2007. - Vol. 5. - P. 1-6.

104. Buyon, J.P. Female hormones reduce neutrophil responsiveness in vitro / J.P. Buyon, H.M. Korchak, L.E. Rutherford et al. // Arthritis Rheum. -2005. - Vol. 27 (6). - P. 623-630.

105. Cassidy, R.A. Influence of steroids on oxidant generation in activated human granulocytes and mononuclear leukocytes / R.A. Cassidy // Shock. - 2003. -Vol. 20.-P. 85-90.

106. Chaveiro, A. Effect of oestrous cycle on the oxidative burst activity of blood polymorphonuclear leucocytes in cows / A. Chaveiro, F. Moreira da Silva // Reprod. Dornest. Anim. - 2009. - Vol. 44 (6). - P. 900-906.

107. Chaveiro, A. In vitro effect of the reproductive hormones on the oxidative burst activity of polymorphonuclear leucocytes from cows: a flow cytometric study / A. Chaveiro, F. Moreira da Silva // Reprod. Dornest. Anim. -2010.-Vol. 45 (5).-P. 40-45.

108. Chow, O. Statins enhance formation of fhagocyte extracellular traps / O. Chow, M. Kockritz-Blickwede, T. Bright et al. // Cell. Host Microbe. - 2010. -Vol. 8.-P. 445-454.

"S

109. Civitelli, R. Nongenomic activation of the calcium message system by vitamin D metabolites in osteoblast-like cells / R. Civitelli, Y.S. Kim, S.L. Gunsten et al. // Endocrinology. - 1990. - Vol. 127. - P. 2253-2262.

110. Clark, J.H. Female sex steroids: receptors and function / J.H. Clark, E.J. Peck. - NY. : SpringerVerlag, 1979. - 245 p.

111. Cohen, S.L. A function for estriol during human pregnancy—a hypothesis / S.L. Cohen// Semin. Reprod. Med. - 2010. - Vol. 28 (1). - P. 5-16.

112. Crocker, I.P. Neutrophil function in women with preeclampsia / LP. Crocker, R.P. Wellings, J. Fletcher et al. // Br. J. Obst. Gynaecol. - 1999. - Vol. 106 (8).-P. 822-828.

113. Crocker, I.P. Neutrophil function in pregnancy and rheumatoid arthritis / I.P. Crocker, P.N. Baker, J. Fletcher // Ann. Rheum. Dis. - 2000. - Vol. 59 (7).-P. 555-564.

114. Dadelszen, P. Maternal neutrophil apoptosis in normal pregnancy, preeclampsia, and normotensive intrauterine growth restriction / P. Dadelszen, R.W. Watson, F. Noorwali et al. // Am. J. Obst. Gynecol. - 1999. - Vol. 181 (2). -P. 408-414.

115. Das, C. Network of cytokines, integrins and hormones in human trophoblast cells / C. Das, V. Kumar, S. Gupta et al. // J. Reprod. Immunol. - 2001. -Vol. 53.-P. 257-268.

116. Davis, D. Nonspecific immunity in pregnancy: monocyte surface Fey receptor expression and function / D. Davis, R. Kaufmann, E. Moticka // J. Reprod. Immunol. - 1998.-Vol. 40.-P. 119-128.

117. De, M.I. Determination of the number and distribution of macrophages, lymphocytes, and granulocytes in the mouse uterus from mating through implantation / M.I. De, R. Choudhuri, G. Wood // J. Leukoc. Biol. - 1991. -Vol. 50(3).-P. 252-262.

118. De Boland, A.R. Influx of extracellular calcium mediates 1,25-dihydroxyvitamin D3-dependent transcaltachia (the rapid stimulation of duodenal

Ca21 transport) / A.R. De Boland, A.W. Norman // Endocrinology. - 1990. - Vol. 127.-P. 2475-2480.

I

119. Deffert, D. M. Myo-inositol 1,4,5-trisphosphate mobilizes Ca from isolated adipocyte endoplasmic reticulum but not from plasma membranes / D. M. Deffert, S. Hill, H. A. Pershadsingh et al. // Biochem. J. - 1986. - Vol. 256. - P. 37-44.

120. Deroo, B.J. Estrogen receptors and human disease / B.J. Deroo, K.S. Korach // J. Clin. Invest. - 2006. - Vol. 116, № 3. - P. 561-570.

121. El-Maallem, H. Impaired neutrophil function and myeloperoxidase deficiency in pregnancy / H. El-Maallem, J. Fletcher // Br. J. Haematol. - 1980. -Vol. 44 (3).-P. 375-381.

122. Erickson, G.F. Ovarian anatomy and physiology. Menopause. Biology and pathobiology / G.F. Erickson, R.A. Lobo, J. Kelsey et al. // Academic Press. -2000.-P. 3-32.

123. Evans, R.M. The steroid and thyroid hormone receptor superfamily / R.M. Evans // Science. - 1988. - Vol. 240. - P. 889-895.

124. Faas, M.M. Glomerular inflammation in pregnant rats after infusion of low dose endotoxin: an immunohistological study in experimental preeclampsia / M.M. Faas, G.A. Schuiling, J.F.W. Bailer et al. // Am. J. Pathol. - 1995. - Vol. 147 (5).-P. 1510-1518.

125. Faas, M.M. Plasma of pregnant and preeclamptic women activates monocytes in vitro / M.M. Faas, R.B. Donker, M.G. Van Pampus et al. // Am. J. Obst. Gynecol. - 2008. - Vol. 199 (1). - P. 84.

126. Falkenstein, E.A. multiple actions of steroid hormones-A focus on rapid, nongenomic effects / E. Falkenstein, H.-C. Tillmann, M. Christ et al. // Pharmacol. Rev. - 2000. - Vol. 52, №. 4. - P. 513-555.

127. Felty, Q. Estrogen-induced mitochondrial reactive oxygen species as signal-transducing messengers / Q. Felty, W. C. Xiong, D. Sun et al. // Biochemistry. - 2005. - Vol. 44 (18). - P. 6900-6909.

128. Fuchs, Т.A. Novel cells death program leads to neutrophil extracelllular traps / T.A. Fuchs, U. Abed, C. Goosmann et al. // J. Cell. Biol. -

2007. - Vol. 176, № 2. - P. 231 -241.

129. Fuller, P.J. The steroid receptor superfamily: Mechanisms of diversity /P.J. Fuller//FASEB J. - 1991. - Vol. 5.-P. 3092-3099.

130. GeneGlobe Pathways [electronic resource] // Sample & Assay Technologies ; www.qiagen.com, © 2003-2012. - URL: https://www.qiagen.com/geneglobe/path wayview.aspx?pathwayID= 166. -Проверено от 20.12.12.

131. Giannoni, E. Estradiol and progesterone strongly inhibit the innate immune response of newborn mononuclear cells / E. Giannoni, L. Guignard, M.K. Reymond et al. // Infect. Immun. - 2011. - Vol. 79 (7). - P. 2690-2698.

132. Giraldi, T. Steroid signaling activation and intracellular localization of sex steroid receptors / T. Giraldi, P. Giovannelli, M. Di Donato et al. // J. Cell. Commun. Signal. - 2010. - Vol. 4 (4). - P. 161 -172.

133. Giretti, M.S. Rapid regulatory actions of sex steroids on cell movement through the actin cytoskeleton / M.S. Giretti, T. Simoncini // Steroids. -

2008. - Vol. 73 (9-10). - P. 895-900.

134. Grossman, C.J. Bilateral communication between the endocrine and immune systems / C.J. Grossman, B.M. Cruden, H.W. Stimson // Springer-Verlag. - 1994.-P. 36-43.

135. Guerra-Infante, F.M. Phagocytic activity of polymorphonuclear leukocytes of pregnant women / F.M. Guerra-Infante, I. Estrada-Carlos, M. López-Hurtado // Rev. Latinoam. Microbiol. - 1999. - Vol. 41 (2). - P. 47-51.

136. Gupta, A.K. Occurrence of neutrophil extracellular DNA traps (NETs) in pre-eclampsia: a link with elevated levels of cell-free DNA? / A. K. Gupta, P. Hasler et al. // Ann N. Y. Acad. Sei. - 2006. - Vol. 1075.-P. 118-122.

137. Gupta, A.K. Neutrophil NETs: a novel contributor to preeclampsia-associated placental hypoxia? / A. K. Gupta, P. Hasler, W. Holzgreve et al. // Seminlmmunopathol. - 2007. - Vol. 29 (2). - P. 163-167.

138. Gustafsson, C. Local immune regulation in human pregnancy : Doctoral Dissertation / C. Gustafsson. - Sweden, 2007. - P.78.

139. Hendry, L.B. Stereochemical complementary of DNA and steroid agonists and antagonists / L.B. Hendry // J. Steroid. Biochem. - 1988. - Vol. 31. -P. 493-523.

140. Herberts, C. Adjuvanted vaccines in pregnancy: what is known about their safety? / C. Herberts, B. Melgert // Pregnancy & the immune system expert rev vaccines. - 2010. - Vol. 9(12). - P. 1411-1422.

141. Himmelfarb, J. H. Detection of granulocyte rective oxygen species formation in whole blood using flow cytometry / J. H. Himmelfarb, R.M. Hakim, D.G. Holbrook et al. // Cytometry. - 1992. - Vol. 13. - P. 83-89.

142. Huber, J.C. Immunological and dermatological impact of progesterone /J.C.Huber//Gynecol. Endocrinol.-2001.-Vol. 15 (6).-P. 18-21.

143. Hung, T.H. Myeloperoxidase in the plasma and placenta of normal pregnant women and women with pregnancies complicated by preeclampsia and intrauterine growth restriction / T.H. Hung, S.F. Chen, L.M. Lo et al. // Placenta. -2012.-P. 294-303.

144. Ishida, K. Is there a critical gestational age in neutrophil superoxide production activity? / K. Ishida, K. Tsukimori, H. Nagata et al. // Blood. - 1995. -Vol. 85 (5).-P. 1331-1333.

145. Ito, I. Physiological concentration of estradiol inhibits polymorphonuclear leukocyte chemotaxis via a receptor mediated system / I. Ito, T. Hayashi, K. Yamada et al. // Life Sci. - 1995. - Vol. 56 (25). - P. 2247-2253.

146. Jansson, G. Oestrogen-induced enhancement of myeloperoxidase activity in human polymorphonuclear leukocytes—a possible cause of oxidative

stress in inflammatory cells / G. Jansson // Free Radic. Res. Commun. - 1991. -Vol. 14(3).-P. 195-208.

147. Jenis, L.G. 1 a,25-dihydroxyvitamin D3-induced changes in intracellular pH in osteoblast-like cells modulate gene expression / L.G. Jenis, J.B. Lian, G.S. Stein et al. // J. Cell. Biochem. - 1993. - Vol. 53. - P. 234-239.

148. Johnsen, I. B. Toll-like receptor 3 associates with c-Src tyrosine kinase on endosomes to initiate antiviral signaling / I. B. Johnsen, T. T. Nguyen, M. Ringdal // EMBO J. - 2006. - Vol. 25 (14). - P. 3335-4336.

149. Jonsson, B. Epidemiological and immunological studies of environmental mycobacteria with focus on Mycobacterium abscessus: thesis doctor of medicine / B. Jonsson // Sweden, 2009. - P.78.

150. Kase, N.G. Endocrinology of pregnancy / N.G. Kase, J.V. Reyniak // Mount Sinai J. Med. - 1985. - Vol. 52. - P. 11-34.

151. Klebanoff, S.J. Estrogen binding by leukocytes during phagocytosis / S.J. Klebanoff// J. Exp. Med. - 1977. - Vol. 145, № 4. - P. 983-998.

152. Kontula, K. Glucocorticoid receptors in human polymorphonuclear' and mononuclear leucocytes. Concentrations and binding characteristics / K. Kontula, G. Myllyla, L.C. Andersson // Scand. J. Haematol. - 1981. - Vol. 27. - P. 145-151.

153. Kramer, P.R. 17beta-Estradiol utilizes the estrogen receptor to regulate CD 16 expression in monocytes / P.R. Kramer, V. Winger, S.F. Kramer // Mol. Cell. Endocrinol. - 2007. - Vol. 279, № 1-2. - P. 16-25.

154. Kuiper, G.G. Cloning of a novel receptor expressed in rat prostate and ovary / G.G. Kuiper, E. Enmark, M. Pelto-Huikko et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1996. - Vol. 93. - P. 5925-5930.

155. Kumar, V. Neutrophils: Cinderella of innate immune system // V. Kumar, A. Sharma // Int. Immunopharmacol. - 2010. - Vol. 10 (11). - P. 13251334.

156. Lamche, H.R. Steroids decrease granulocyte membrane fluidity, while phorbol ester increases membrane fluidity. Studies using electron paramagnetic resonance / H.R. Lamche, P.T. Silberstein, A.C. Knabe et al. // Inflammation. -1990.-Vol. 14.-P. 61-70.

157. Lamote, I. Influence of 17beta-estradiol, progesterone, and dexamethasone on diapedesis and viability of bovine blood polymorphonuclear leukocytes /1. Lamote, E. Meyer, L. Duchateau et al. // J. Dairy Sei. - 2004. - Vol. 87 (10).-P. 3340-3349.

158. Lamote, I. Expression of the estrogen receptor in blood neutrophils of dairy cows during the periparturient period /1. Lamote, E. Meyer, A. De Ketelaere et al. // Theriogenology. - 2006. - Vol. 65 (6). - P. 1082-1098.

159. Lee, S.J. pl50/glued modifies nuclear estrogen receptor function / S.J. Lee, C. Chae, M.M. Wang // Mol. Endocrinol. - 2009. - Vol. 23 (5). - P. 620-629.

160. Lee, W. L. Phagocytosis by neutrophils / W. L. Lee, R. E. Harrison, S. Grinstein // Microbes Infect. - 2003. - Vol. 5. - P. 1299-1306.

161. Leimola-Virtanen, R. Estrogen response in buccal mucosa — a cytological and immunohistological assay / R. Leimola-Virtanen, R. Pennanen, K. Syrjänen et al. // Maturitas. - 1997. - Vol. 27 (1). - P. 41-45.

162. Lewis, G.S. Steroidal regulation of uterine immune defenses / G.S. Lewis // Anim. Reprod. Sei. - 2004. - Vol. 82/83. - P. 281 -294.

163. Lösel, R. Nongenomic actions of steroid hormones / R. Lösel, M. Wehling // Nature Rev. Mol. Cell. Biol. - 2003. - Vol. 4. - P. 46-55.

164. Luppi, P. By society for leukocyte biology monocytes are progressively activated in the circulation of pregnant women / P. Luppi, G. Haluszczak, D. Betters et al. // J. Leukocyte Biol. - 2002. - Vol. 72. - P. 874-884.

165. Luppi, P. Monocytes are progressively activated in the circulation of pregnant women / P. Luppi, C. Haluszczak, D. Betters et al. // J. Leukoc. Biol. -2002. - Vol. 72 (5). - P. 874-884.

166. ■ Luppi, P. Normal pregnancy is associated with peripheral leukocyte activation / P. Luppi, C. Haluszczak, M. Trucco et al. // Am. J. Reprod. Immunol. -2002.-Vol. 47.-P. 72-81.

167. MacLean, M.A. Immunological changes in normal pregnancy / M.A. MacLean, R. Wilson, J.A. Thomson et al. // Eur. J. Obst. Gynecol. Reprod. Biol. -1992.-Vol. 43 (3).-P. 167-172.

168. Magnusson, U. Effects of exogenous oestradiol on the number and functional capacity of circulating mononuclear and polymorphonuclear leukocytes in the sow / U. Magnusson, S. Einarsson // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1990. -Vol. 25 (3).-P. 235-247.

169. Mai, H.M. The potential role of progesterone during pregnancy as an induction of infantile hemangiom / H.M. Mai, J.W. Zheng, Y.A. Wang // Am. J. Reprod. Immunol. - 2002. - Vol. 47 (2). - P. 98-103.

170. Martinoli, C. Effetto del progesterone sulla produzione di specie reattive dell'ossigeno (O e H202) da parte di monociti umani in vitro / C. Martinoli, E. Zocchi, F. Querzola et al. // Therapeutika. - 1985. - Vol. 2. - P. 277299.

171. Matsuda, H. Uterine secretions induce phagocytosis of escherichia coli by neutrophils / H. Matsuda, H Sasai // Zentralbl. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg. A. - 1986. - Vol. 262 (4). - P. 474-482.

172. Matthias, B. Phagocytosis independent extracellular nanoparticle clearance by human immune cells / B. Matthias, A. Heidrun, Z. Gabriele et al. // Nano Lett. - 2010. - Vol. 10. - P. 59-63.

173. McDonnel, D.P. Molecular pharmacology of estrogen and progesterone receptors / D.P. McDonnel // Menopause Biol. Pathobiol. - San Diego ; Tokyo : Academic press, 2000. - P. 3-11.

174. McKay, L.I. Molecular control of immune/inflammatory responses: interactions between nuclear factor-kappa B and steroid receptor-signaling

pathways / L.I. McKay, J.A. Cidlowski // Endocrinol. Rev. - 1999. - Vol. 20. - P. 435-459.

175. Medina, E. Neutrophil extracellular traps: a strategic tactic to defeat pathogens with potential consequences for the host / E. Medina // J. Innate Immun. -2009.-Vol. l.-P. 176-180.

176. Miller, E.M. Changes in serum immunity during pregnancy / E.M. Miller // Am. J. Hum. Biol. - 2009. - Vol. 21 (3). - P. 401-403.

177. Milson, G. Vaginal immunoglobulin A (Ig A) levels in postmenopausal women: influence of oestriol therapy / G. Milson, L.A. Nilsson, A. Brandberg et al. // Maturitas. - 1991. - Vol. 52. - P. 56-62.

178. Min, L. Innate immunity, coagulation and placenta-related adverse pregnancy outcomes / L. Min, S.J. Huang // Thromb. Res. - 2009. - Vol. 124 (6). -P. 656-662.

179. Minagawa, M. Mechanisms underlying immunologic states during pregnancy: possible association of the sympathetic nervous system / M. Minagawa, J. Narita, T. Tada et al. // Cell. Immunol. - 1999. - Vol. 196. - P. 1-13.

180. Molero, L. Expression of estrogen receptor subtypes and neuronal nitric oxide synthase in neutrophils from women and men: regulation by estrogen / L. Molero, M. Garcia-Duran, J. Diaz-Recasens et al. // Cardiovasc. Res. - 2002. -Vol. 56.-P. 43-51.

181. Molland, J.G. Susceptibility of postmenopausal women to infection with HIV during vaginal intercourse (letter) / J.G. Molland, B.H. Barraclough, V. Gebski et al. // Med. J. Aust. - 1990. - Vol. 60. - P. 24-37.

182. Moncharmont, P. Study of the immune profile of pregnant women / P. Moncharmont, M. Bonnard, J. Bernaud et al. // J. Gynecol. Obst. Biol. Reprod. -1992. - Vol. 21 (2). - P. 214-218.

183. Mor, G. Interaction of the estrogen receptors with the fas ligand promoter in human monocytes / G. Mor, E. Sapi, V.M. Abrahams et al. // J. Immunol.-2003.-Vol. 170.-P. 114-122.

184. Mosmann, T.R. The expanding universe of T cell subsets: Thl, Th2 and more / T.R. Mosmann, S. Sad // Immunol. Today. - 1996. - Vol. 17. - P. 138146.

185. Murphy, A.J. Estradiol regulates expression of estrogen receptor ERalpha46 in human macrophages / A.J. Murphy, P.M. Guyre, C.R. Wira // PLoS One. - 2009. - Vol. 4 (5). - P. 138-146.

186. Muthukumaran, P. Estradiol influences the mechanical properties of human fetal osteoblasts through cytoskeletal changes / P. Muthukumaran, C.T. Lim, T. Lee // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2012. - Vol. 423 (3). - P. SOSSOS.

187. Naccasha, N. Phenotypic and metabolic characteristic of monocytes and granulocytes in normal pregnancy and maternal infection / N. Naccasha, M.T. Gervasi, T. Chaiworapongsa et al. // Am. J. Obst. Gynecol. - 2001. - Vol. 185. -P. 1118-1123.

188. Nagy, E. Immune system estrogens and antiestrogens I / E. Nagy, E. Baral, I. Berczi; Ed by M. Oettel, E. Schillenger. - 1999. - P. 343-349.

189. Neeli, I. Histone deimination as a response to inflammatory stimuli in neutrophils / I. Neeli, S.N. Khan, M. Radic // J. Immunol. - 2008. - Vol. 180. - P. 1895-1902.

190. Nicol, T. Minimum dose of diethylstiboestrol required to stimulate the phagocytic activity of the reticuloendothelial system / T. Nicol, C.C. Ware // Nature. - I960,-Vol. 185.-P. 42-43.

191. Nishinaka, Y. Singlet oxygen is essential for neutrophil extracellular trap formation / Y. Nishinaka, T. Arai, S. Adachi et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2011. - Vol. 413 (1). - P. 75-79.

192. Nohmi, T. Suppression of anti-Candida activity of murine neutrophils by progesterone in vitro: a possible mechanism in pregnant women's vulnerability to vaginal candidiasis // T. Nohmi, S. Abe, K. Dobashi et al. // Microbiol. Immunol. - 1995. - Vol. 39 (6). - P. 405-409.

193. O'Malley, B.W. Molecular mechanism of action of a steroid hormone receptor / B.W. O'Malley, S.Y. Tsai, M. Bagchi et al. // Recent. Prog. Horm. Res. -1991.-Vol. 47.-P. 1-26.

194. Paech, K. Differential ligand activation of estrogen receptors ERalpha and ERbeta at API sites / K. Paech, P. Webb, G.G. Kuiper et al. // Science. - 1997. -Vol. 277.-P. 1508-1510.

195. Pardi, R. Regulatory mechanisms in leukocyte adhesion: flexible receptors for sophisticated travellers / R. Pardi, L. Inverardi, J.R. Bender // Immunol. Today. - 1992. - Vol. 13. - P. 224-230.

196. Pietras, R.J. Endometrial cell calcium and oestrogen action / R.J. Pietras, C.M. Szego // Nature . - 1975. - Vol. 253. - P. 357-359.

197. Phagocytosis of microbes [electronic resource] // Sample & Assay Technologies ; www.qiagen.com, © 2003-2012. - URL: https://www.qiagen.com/geneglobe/pathwayview.aspx?pathwayID=355. -Проверено от 20.12.12.

198. Plum, J. Distribution of mononuclear cells during pregnancy./ J. Plum, M. Thiery, L. Sabbet // Clin. Exp. Immunol. - 1978. - Vol. 31. - P. 45-49.

199. Pratt, W.B. Steroid receptor interactions with heat shock protein and immunophilin chaperones / W.B. Pratt, D.O. Toft // Endocrin. Rev. - 1997. - Vol. 18.-P. 306-360

200. Prossnitz, E.R. GPR30: A G protein-coupled receptor for estrogen / E.R. Prossnitz, J.B. Arterburn, L.A. Sklar // Mol. Cell. Endocrinol. - 2007. - Vol. 265.-P. 138-142.

201. Remijsen, Q. Neutrophil extracellular trap cell death requires both autophagy and superoxide generation / Q. Remijsen, T. Vanden Berghe, E. Wirawan et al. // Cell. Res. - 2010. - Vol. 21(2) P. 290-304.

202. Remijsen, Q. Dying for a cause: NETosis, mechanisms behind an antimicrobial cell death modality / Q. Remijsen, T.W. Kuijpers, E. Wirawan et al. // Cell. Death. Different. - 2011. - Vol. 18. - P. 581-588.

203. Rothchild, J. Role of progesterone in initiating and maintaining pregnancy / J. Rothchild // Progesterone and Progestins - NY. : Raven Press, 1983. -P. 219-229.

204. Roth, J.A. Effect of estradiol and progesterone on lymphocyte and neutrophil functions in steers / J.A. Roth, M.L. Kaeberle, W.H. Hsu // Infect. Immun. - 1982. - Vol. 35 (3). - P. 997-1002.

205. Roth, J.A. In vitro effect of the reproductive hormones on the oxidative burst activity of polymorphonuclear leucocytes from cows: a flow cytometric study / J.A. Roth // Am. J. Vet. Res. - 1983. - Vol. 44 (2). - P. 247253.

206. Sacks, G.P. Normal pregnancy and preeclampsia both produce inflammatory changes in peripheral blood leukocytes akin to those of sepsis / G.P. Sacks, K. Tudena, I.L. Sargent et al. // Am. J. Obst. Gynecol. - 1998. - Vol. 179. -P. 80-86.

207. Sacks, G.P. Monocytes are primed to produce the Thl type cytokine IL-12 in normal human pregnancy: an intracellular flow cytometric analysis of peripheral blood mononuclear cells / G.P. Sacks, G.P. Sacks, C.W. Redman et al. // Clin. Exp. Immunol.-2003.-Vol. 131 (3).-P. 490-497.

208. Saitoh, T. Neutrophil extracellular traps mediate a host defense response to human immunodeficiency virus-1 / T. Saitoh, J. Komano, Y. Saitoh et al. // Cell. Host. Microbe. - 2012. - Vol. 12 (1). - P. 109-116.

209. Sanchez, A.M. Actin cytoskeleton remodelling by sex steroids in neurons / A.M. Sanchez, M.I. Flamini, K. Polak et al. // J. Neuroendocrinol. -2012. - Vol. 24(1).-P. 195-201.

210. Santanam, N. Estradiol as an antioxidant: incompatible with its physiological concentrations and function / N. Santanam, R. Shern-Brewer, R. McClatchey et al. // J. Lipid. Res. - 1998. - Vol. 39 (11). - P. 2111-2118.

211. Sargent, H.J. Erythrocyte glutatione balance and membrane stability during preeclampsia / H.J. Sargent // Free Pradic. Biol. Med. - 1998. - Vol. 24, № 6.-P. 1049-1055.

212. Scheibl, P. Effect of progesterone on the immune system in consideration of bovine placental retention / P. Scheibl, H. Zerbe // Dtsch, Tierarztl. Wochenschr. - 2000. - Vol. 107 (6). - P. 221-227.

213. Schreiber, A.D. Effect of endogenous and synthetic sex steroids on the clearance of antibody-coated cells / A.D. Schreiber, F.M. Nettl, M.C. Sanders et al. // J. Immunol. - 1988. - Vol. 141 (9). - P. 2959-2966.

214. Schust, D.J. Progesterone-induced immunosuppression is not mediated through the progesterone receptor / D.J. Schust, D.J. Anderson, J.A. Hill //Hum. Reprod.- 1996. -Vol. 11. - P. 980-985.

215.

216. Shibuya, T. Study on nonspecific immunity in pregnant women: increased chemiluminescence response of peripheral blood phagocytes / T. Shibuya, K. Izuchi, A. Kuroiwa et al. // Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol. -1987.-Vol. 15(1).-P. 19-23.

217. Shibuya, T. Study on nonspecific immunity in pregnant women: II. Effect of hormones on chemiluminescence response of peripheral blood phagocytes / T. Shibuya, K. Izuchi, A. Kuroiwa et al. // Am. J. Reprod. Immunol. -1991.-Vol. 26 (2).-P. 76-81.

218. Shmagel', K.V. Increase of nonspecific resistance of the body in normal pregnancy / K.V. Shmagel' // Akush. Ginekol. - 1994. - Vol. 6. - P. 18-21.

219. Shmagel', K.V. Steroid hormones: their physiological role and diagnostic value during pregnancy / K.V. Shmagel', V.A. Chereshnev // Usp. Fiziol. Nauk. - 2004. - Vol. 35 (3). - P. 61-71.

220. Sobolewska, A. IGF-I, EGF, and sex steroids regulate autophagy in bovine mammary epithelial cells via the mTOR pathway / A. Sobolewska, M.

Gajewska, J. Zarzynska et al. // Eur. J. Cell. Biol. - 2009. - Vol. 88 (2). - P. 117130.

221. Sopelak, V.M. Regulation of the ovarian-menstrual cycle / V.M. Sopelak // Clinical reproductive medicine. - Philadelphia; NY., 1997. - P. 61-68.

222. Stefano, G. B. Estradiol coupling to human monocyte nitric oxide releasels dependent on intracellular calcium transients: evidencefor an estrogen surface receptor / G. B. Stefano, V. Prevot, J. C. Beauvillain et al. // J. Immunology. - 1999. - Vol. 163. - P. 3758-3763.

223. Stefano, G.B. Estradiol-stimulated nitric oxide release in human granulocytes is dependent on intracellular calcium transients: evidence of a cell surface estrogen receptor / G.B. Stefano, P. Cadet, C. Breton et al. // Blood. -2000. - Vol. 95 (12). - P. 3951-3958.

224. Strzemienski, P.J. Effect of estradiol and progesterone on antistaphylococcal activity of neutrophils from ovariectomized mares / P.J. Strzemienski, R.M. Dyer, R.M. Kenney // Am. J. Vet. Res. - 1987. - Vol. 48 (11). -P. 1638-1641.

225. Stygar, D. Identification of wild type and variants of oestrogen receptors in polymorphonuclear and mononuclear leucocytes / D. Stygar, P. Westlund, H. Eriksson et al. // Clin. Endocrinol. - 2006. - Vol. 64, № 1. - P. 7481.

226. Stygar, D. Studies on estrogen receptor (ER) alpha and beta responses on gene regulation in peripheral blood leukocytes in vivo using selective ER agonists / D. Stygar, B. Masironi, H. Eriksson et al. // J. Endocrinol. - 2007. - Vol. 194(1).-P. 101-119.

227. Suenaga, R. Binding affinity and quantity of estrogen receptor in peripheral blood monocytes of patients with systemic lupus erythematosus / R. Suenaga, K. Mitamura, M.J. Evans et al. // Lupus. - 1996. - Vol. 5. - P. 227-231.

228. Suenaga, R. Peripheral blood T cells and monocytes and B cell lines derived from patients with lupus express estrogen receptor transcripts similar to

those of normal cells / R. Suenaga, M.J. Evans, K. Mitamura et al. // J. Rheumatol. - 1998.-Vol. 25.-P. 1305-1312.

229. Sylvia, V.L. Maturation-dependent regulation of protein kinase C activity by vitamin D3 metabolites in chondrocyte cultures / V.L. Sylvia, Z. Schwartz, L. Schuman et al. // J. Cell. Physiol. - 1993. - Vol. 157. - P. 271-278.

230. Szekeres-Bartho, J. Progesterone in pregnancy; receptor-ligand interaction and signaling pathways / J. Szekeres-Bartho, M. Halasz, T. Palkovics // Shanghai Kou Qiang Yi Xue. - 2011. - Vol. 20 (6). - P. 669-672.

231. Tibbetts, T.A. Progesterone via its receptor antagonizes the proinflammatory activity of estrogen in the mouse uterus / T.A. Tibbetts, O.M. Conneely, B.W. O'Malley // Biol. Reprod. - 1999. - Vol. 60 (5). - P. 1158-1165.

232. Trinchieri, G. Immunoregulation by interleukin-12 / G. Trinchieri, F. Gerosa // J. Leukoc. Biol. - 1996. - Vol. 59. - P. 505-511.

233. Trundley, A. Human uterine leucocytes and pregnancy / A. Trundley, A. Moffett // Tissue Antigens. - 2004. - Vol. 63. - P. 1-12.

234. Tsakonas, D.P. Myeloperoxidase activity and nuclear segmentation of maternal neutrophils during normal pregnancy / D.P. Tsakonas, C.P. Tsakona, C.P. Worman et al. // Clin. Lab. Haematol. - 1994. - Vol. 16 (4). - P. 337-342.

235. Tsukimori, K. Neutrophil function during pregnancy: is nitric oxide production correlated with superoxide production? / K. Tsukimori, K. Fukushima, H. Komatsu et al. // Am. J. Reprod. Immunol. - 2006. - Vol. 55 (2). - P. 99-105.

236. Turner, K.O. Progesterone initiation of the human sperm acrosome reaction: The obligatory increase in intracellular calcium is independent of the chloride requirement / K.O. Turner, M.A. Garcia, S. Meizel // Mol. Cell. Endocrinol. - 1994. - Vol. 101. - P. 221-225.

237. Urban, C.F. Neutrophil extracellular traps capture and kill Candida albicans yeast and hyphal forms / C.F. Urban, U. Reichard, V. Brinkmann et al. // Cell. Microbiol. - 2006. - Vol. 8. - P. 668-676.

238. Vinatier, D. Non-specific immune defenses present in pregnancy / D. Vinatier, J.C. Monnier // J. Gynecol. Obst. Biol. Reprod. - 1988. - Vol. 17 (7). - P. 861-868.

239. Von Kockritz-Blickwede, M. Innate immunity turned inside-out: antimicrobial defense by phagocyte extracellular traps / M. Von Kockritz-Blickwede, V. Nizet // J. Mol. Med. - 2009. - Vol. 87. - P. 775-783.

240. Wada, K. Estrogen binding sites in peripheral blood monocytes and effects of danazol on their sites in vitro / K. Wada, T. Itoh, M. Nakagawa et al. // Gen. Pharmacol. - 1992. - Vol. 23. - P. 693-700.

241. Wagner, A.H. 17p-Estradiol inhibition of NADPH oxidase expression in human endothelial cells / A.H. Wagner, M.R. Schroeter, M. Hecker // Faseb. J. -2001.-Vol. 15.-P. 2121-2130.

242. Wang, Y. Histone hypercitrullination mediates chromatin decondensation and neutrophil extracellular trap formation / Y. Wang, M. Li, S. Stadler et al. // J. Cell. Biol. - 2009. - Vol. 184. - P. 205-213.

243. Wartha, F. ETosis: a novel cell death pathway / F. Wartha, B. Henriques-Normark // Sci Signal. - 2008. - Vol. 1. - P. 25.

244. Watson, E.D. Influence of administration of ovarian steroids on the function of neutrophils isolated from the blood and uterus of ovariectomized mares / E.D. Watson, C.R. Stokes, F.J. Bourne // J. Endocrinol. - 1987. - Vol. 112 (3). -P. 443-448.

245. Webster, J. Distinct cell death programs in monocytes regulate innate responses causes of invasive bacterial disease following challenge with common / J. Webster, M. Daigneault, M. Bewley et al. // J. Immunol. - 2010. - Vol. 185. - P. 2968-2979.

246. Wehling, M. Aldosterone influences free intracellular calcium in human mononuclear leukocytes in vitro / M. Wehling, J. Kasmayr, K. Theisen // Cell. Calcium. - 1990. - Vol. 11. - P. 565-571.

247. Wehling, M. Nongenomic effects of aldosterone on intracellular pH in vascular smooth muscle cells / M. Wehling, M.M. Bauer, A. Ulsenheimer et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1996. - Vol. 223.-P. 181-186.

248. Weusten, J.J. Presence of oestrogen receptors in human blood mononuclear cells and thymocytes / J.J. Weusten, M.A. Blankenstein, F.H. Gmelig-Meyling // Acta Endocrinol. - 1986. - Vol. 112. - P. 409-414.

249. White, H.D. CD3+, CD8+, CTL-activity nithin the human female reproductine tract: influence of stage of the menstrnal cycle and menopause / H.D. White, K.M. Crassi, A.L. Givan et al. // J. Immunol. - 1997. - Vol. 158. - P. 30173027.

250. White, M.M. Estrogen, progesterone, and vascular reactivity: potential cellular mechanisms / M.M. White, S. Zamudio, T. Stevens et al. // Endocr. Rev. -1995.-Vol.16.-P. 739-751.

251. Winters, K.R. Sex steroid hormones do not influence the oxidative burst activity of polymorphonuclear leukocytes from ovariectomized cows in vitro / K.R. Winters, E. Meyer, V.M. Van Merris et al. // Steroids. - 2003. - Vol. 68 (5). -P. 397-406.

252. Wittliff, J.L. Mechanisms of signal transduction: sex hormones, their receptors and clinical utility / J.L. Wittliff, W. Raffelsberg // J. Clin. Ligand Assay. - 1995.-Vol. 18.-P. 211-235.

253. Wulster-Radcliffe, M.C. Progesterone increases susceptibility of gilts to uterine infections after intrauterine inoculation with infectious bacteria / M.C. Wulster-Radcliffe, R.C. Seals, G.S. Lewis. // J. Anim. Sci. - 2003. - Vol. 81 (5). -P. 1242-1252.

254. Yamada, T. Changes in the number of polymorphonuclear leukocytes and concentrations of IL-8 and granulocyte elastase in the vaginas of normal pregnant women / T. Yamada, H. Minakami, S. Matsubara et al. // Am. J. Reprod. Immunol. - 2002. - Vol. 47 (2). - P. 98-103.

255. Yang, X.J. Oestrogen upregulates L-type Ca2+ channels via oestrogen-receptor- by a regional genomic mechanism in female rabbit hearts / X. Yang, G. Chen, R. Papp et al. // Physiol. - 2012. - Vol. 590. - P. 493-508.

256. Young, S.L. Progesterone function in human endometrium: clinical perspectives / S.L. Young, B.A. Lessey // J. Reprod. Immunol. - 2009. - Vol. 83 (1-2).-P. 60-64.