Исследование роли белка врожденного иммунитета Tag7 в развитии иммунного ответа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Шарапова Татьяна Николаевна

• Шарапова Татьяна Николаевна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Шарапова Татьяна Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Белок врожденного иммунитета Tag7

1.2. Пептидогликан-распознающие белки

1.3. Моноциты, макрофаги и дендритные клетки

1.4. Адаптивный иммунный ответ

1.5. Активация Т-лимфоцитов

1.6. Роль цитокинов в индукции иммунного ответа

1.7. Программируемая клеточная смерть

1.7.1. Апоптоз

1.7.2. Некроптоз

1.8. Механизм избегания иммунного ответа

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Получение и очистка белков

2.2. Культивирование трансформированных клеточных линий

2.3. Выделение лимфоцитов из лейкомассы

2.4. Выделение моноцитов, ^Ж, CD4+ и CD8+ лимфоцитов

2.5. Измерение цитотоксичности

2.6. Ингибирование

2.7. Проточная цитофлуориметрия

2.8. Электрофорез и вестерн-блоттинг

2.9. Биотинилирование пептидов

2.10. MALDI

2

2.11. Хроматография

2.12. ИФА

2.13. Количественный ПЦР

2.14. Пептиды

2.15. Статистический анализ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Инкубация РВМС с белком врожденного иммунитета Tag7 приводит к формированию цитотоксических лимфоцитов

3.2. Инкубация Tag7 с РВМС приводит к формированию 3 цитотоксических субпопуляций лимфоцитов: NK (CD16+CD56+), CD3+CD4+, CD3+CD8+

3.3. Сравнение действия Tag7, Тйогапе и ГЬ2 на формирование цитотоксических субпопуляций лимфоцитов

3.4. Tag7-активированные лимфоциты способны индуцировать 2 типа клеточной смерти: апоптоз и некроптоз

3.5. Определение минимальных структурных фрагментов белка врожденного иммунитета Tag7, необходимых для связывания и активации TREM1

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

GM-CSF - гранулоцит-макрофаг колониестимулирующий фактор

HLA - лейкоцитарный антиген человека (Human Leucocyte Antigen)

Hsp70 - белок теплового шока молекулярной массы 70кДа

IL - интерлейкин

IFN - интерферон

JAK - тирозинкиназа человека

MAPK - митоген-активируемая протеинкиназа

MHC - главный комплекс гистосовместимости

MLKL - псевдокиназа

Mts1 - метастазин

Nec1 - некростатин

NK - естественные киллеры

NKG2D - рецептор семейства лектинов C-типа.

NOD - паттерн - распознающий рецептор

PAMP - патоген-ассоциированный молекулярный паттерн

PBMC - мононуклеарные клетки периферической крови

PGN - пептидогликан

PGRP - пептидогликан распознающий белок

PI3K - фосфатидилинозитол-3-киназы

RIG - рецептор опознавания паттерна

RIP - серин/треониновая киназа, содержащая домен смерти

STAT - сигнально-трансдуцирующие активаторы транскрипции

Tag7 / PGRP-S / PGLYRP1 - пептидогликан распознающий белок

TCR - Т-клеточный рецептор

TNFa - фактор некроза опухоли

TNFR1 - рецептор фактора некроза опухоли

TREM1 - активирующий рецептор миелоидных клеток

ULBP - ^16-связывающие белки

4

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование роли белка врожденного иммунитета Tag7 в развитии иммунного ответа»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность и степень разработанности темы исследования

Одна из основных целей молекулярной иммунологии - понять механизмы функционирования иммунной системы человека. Защита организма от чужеродных агентов осуществляется кооперативно врожденным и адаптивным иммунитетом. Изучение белков, вовлеченных в работу врожденного и приобретенного иммунитета, позволяет глубже понять механизмы работы иммунитета в норме и причины сбоев, характерные для различных патологий, а также подойти к поиску препаратов иммунной терапии.

Существуют факторы, которые стимулируют активность клеток врожденного и адаптивного иммунного ответа. Одним из таких факторов является система пептидогликан-распознающих белков (PGRPs). Белки семейства PGRPs узнают пептидогликан (PGN) и липополисахарид (LPS), присутствующие на поверхности патогенов, и активируют противомикробный иммунный ответ [1]. В институте биологии гена изучали роль белка Tag7 (PGLYRP1 или PGRP-S) в реализации противоопухолевого иммунного ответа [1]. Последние исследования демонстрируют, что один из белков семейства PGRPs, Tag7 является лигандом для рецептора врожденного иммунитета TREM1, который экспрессируется на поверхности моноцитов [2].

Важным направлением развития современной биологии является изучение механизмов активации цитотоксических субпопуляций лимфоцитов и способов индукции программируемой клеточной смерти в клетках-мишенях. Это позволит определить ключевые факторы, которые приводят к формированию цитотоксических субпопуляций лимфоцитов, описать механизмы регуляции этого процесса, а также охарактеризовать способы реализации цито-токсической функции лимфоцитов.

Изучение влияния белка врожденного иммунитета Tag7 в развитии иммунного ответа, направленного против опухолевых клеток, позволит лучше понять механизмы функционирования и взаимодействия клеток иммунной системы. Важно исследовать пути передачи активационного сигнала от белка врожденного иммунитета Tag7 к цитотоксическим субпопуляциям лимфоцитов, которые приобретают способность элиминировать опухолевые клетки. Особое место в исследовании роли белка Tag7 в противоопухолевом иммунном ответе поиск регуляторных элементов, которые являются ключевыми в развитии иммунной реакции.

Другим актуальным направлением исследования является поиск и определение пептидов собственного белка Tag7, которые могут дублировать или регулировать функцию данного белка. Исследование роли Tag7, а также его пептидов в организме человека поможет оценить перспективу использования его в качестве дополнительной иммунотерапии в противоопухолевой защите.

Цели и задачи исследования

Цель работы - изучение молекулярных механизмов активации цито-токсических субпопуляций лимфоцитов под действием белка врожденного иммунитета Tag7.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Определить основные этапы передачи активационного сигнала, которые необходимы для формирования цитотоксических субпопуляций лимфоцитов в модельной системе in vitro.

2. Определить механизм формирования цитотоксических субпопуляций лимфоцитов под действием Tag7 в модельной системе in vitro.

3. Сравнить действие Tag7 с известными активаторами иммунной системы: Tilorone и IL2.

4. Определить и описать молекулярные механизмы индукции клеточной смерти под действием Tag7-активированных лимфоцитов.

5. Выявить минимальные фрагменты белка врожденного иммунитета Tag7, необходимые для активации и ингибирования активационного сигнала.

Научная новизна и практическая значимость исследования

Был детально изучен механизм передачи сигнала от Tag7 к цитотоксиче-ским субпопуляциям лимфоцитов. Показано ключевое участие CD4-лимфоцитов в секреции цитокинов, в частности ^2, и активации эффектор-ных лимфоцитов. Продемонстрированы факторы формирования и время возникновения цитотоксической активности лимфоцитов при инкубации с Tag7. Установлено, что формирование цитотоксических Т-лимфоцитов зависит от экспрессии на поверхности альфа-субъединицы ГЬ2-рецептора, которая обеспечивает высокую аффинность связывания цитокина и проведения сигнала активации.

Детально изучено, какие молекулярные механизмы используют цито-токсические лимфоциты для узнавания и элиминации клеток-мишеней. Показано, что Tag7-активированные лимфоциты способы индуцировать два типа программируемой клеточной смерти: апоптоз и некроптоз, вызванные FasL-Fas взаимодействием.

Проведено сравнение действия Tag7 на РВМС с известными активаторами иммунного ответа Tilorone и ^2.

В результате исследования найдены пептиды Tag7, которые связываются с рецептором TREM1 на поверхности моноцитов. Обнаружен пептид из 24 аминокислот, который, как и Tag7, приводит к формированию цитотоксиче-ских субпопуляций лимфоцитов при инкубации с РВМС. Был выделен фрагмент Tag7 из 10 аминокислот, блокирующий связывание Tag7 или активирующего пептида с TREM1.

Полученный ингибиторный пептид в дальнейшем может быть использован в качестве препарата, препятствующего развитию хронического воспале-

ния, вызванного активностью TREM1. Перспектива использования активирующего пептида может быть связана с областью дополнительной активации противоопухолевого иммунного ответа, в качестве дополнительной иммунотерапии.

Методология и методы исследования

В работе использовались современные методы молекулярной биологии, такие как полимеразная цепная реакция в реальном времени, совмещенная с обратной транскрипцией, иммунноферментативный анализ (ИФА), проточная цитофлуориметрия, хроматография, электрофорез белков, иммуноблот-тинг, выделение и очистка лимфоцитов, культивирование клеточных линий млекопитающих.

Положения, выносимые на защиту

1. Tag7 стимулирует появление цитотоксических субпопуляций лимфоцитов: (CD16+CD56+), CD3+CD4+ и CD3+CD8+ - лимфоцитов. В передаче активационного сигнала от Tag7 к эффекторным клеткам принимают участие моноциты и CD3+CD4+-лимфоциты.

2. Основным фактором формирования цитотоксической активности лимфоцитов является секретируемый CD3+CD4+ - лимфоцитами !Ь2.

3. Tag7, также как и Tilorone, и !Ь2, приводит к образованию цитотоксических субпопуляций лимфоцитов, активных по отношению к опухолевым и вирус-инфицированным клеточным линиям. Моноциты принимают участие в передаче сигнала от Tag7 и Tilorone и не влияют на созревание цитотоксических популяций лимфоцитов при инкубации с ГЬ2.

4. Tag7-активированные лимфоциты способны убивать клетки-мишени, индуцируя в них апоптоз или некроптоз.

5. Определены последовательности белка врожденного иммунитета Tag7, которые вызывают активацию TREM1 - рецептора на поверхности моноцитов или ингибируют его связывание с Tag7.

Степень достоверности и апробация результатов

По теме проведенного исследования были опубликованы 4 статьи в рецензируемых научных журналах, входящих в перечень ВАК. Результаты работы были представлены на 3 международных конференциях.

1. Sharapova T.N., Ivanova O.K., Prasolov V.S., Romanova E.A., Sashchenko L.P., Yashin D.V. Innate immunity protein Tag7 (PGRP-S) activates lymphocytes capable of Fasl-Fas-dependent contact killing of virus-infected cells // IUBMB Life. - 2017. - V. 69(12). - P. 971-977.

2. Sharapova T.N., Romanova E.A., Sashchenko L.P., Yashin D.V. FasL on the surface of Tag7 (PGRP-S)-activated lymphocytes induces necroptosis in HLA-negative tumor cells with the involvement of lysosomes and mitochondria // Biochimie. - 2018. -V. 152. -P. 174-180.

3. Sharapova T.N., Romanova E.A., Sashchenko L.P., Yashin D.V. Tilorone activates NK cells and cytotoxic lymphocytes that kill HLA-negative tumor cells // IUBMB Life. - 2018. -V. 71(3). -P.376-384.

4. Шарапова Т.Н., Романова Е.А., Сащенко Л.П., Гнучев Н.В., Яшин Д.В. Белок врожденного иммунитета Tag7 после инкубации с лимфоцитами стимулирует появление цитотоксических NK-клеток // Доклады Академии наук. 2019. - Т. 484(6). - С. 777-780.

Конференции:

1. Sharapova T.N., Ivanova O.K., Romanova E.A., Sashchenko L.P., Yashin D.V. Tag7 (PGLYRP1) induces antitumor cytotoxic activity in human lymphocytes via TREM-1 receptor // 2nd International Conference on Cytokine Signaling in Cancer. Heraklion, Crete, Greece. 30/05/2017 - 04/06/2017. Abstract 64. -P.91.

2. Sharapova T.N., Ivanova O.K., Romanova E.A., Sashchenko L.P., Yashin D.V. Tag7-activated lymphocytes induce necroptosis via FasL-Fas interaction // FEBS Open Bio. - 2018. - V. 8. - P.375.

3. Sharapova T.N., Romanova E.A., Ivanova O.K., Sashchenko L.P., Yashin D.V. Tilorone promotes the emergence of cytotoxic active lymphocytes // FEBS Open Bio. - 2019. V. 9. -P.329.

Личное участие автора в исследовании

Основные экспериментальные данные были получены лично автором. Автор принимал непосредственное участие в планировании экспериментов, самостоятельно выполнил основную часть экспериментальной работы: получение белков; культивирование клеточных культур, выделение лейкоцитов и отдельных субпопуляций лимфоцитов; характеристика лимфоцитов с использованием методов проточной цитофлуориметрии; цитотоксическая активность активированных лимфоцитов была проанализирована в присутствии специфических ингибиторов методом Cytotox, проведены эксперименты по ИФА и ПЦР. При участии автора проведены такие эксперименты как биотинилирование и разделение пептидов, хроматография. Анализ последовательности пептидов был проведен Торопыгиным И.Ю.(ФГБУ «ИБМХ» РАМН им. М.В. Ореховича). Полученные данные экспериментов были обработаны и проанализированы автором и подготовлены к публикации.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав («Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Заключение» и выводов. Работа изложена на 100 страницах, содержит 29 рисунков, а также 3 таблицы. Список литературы включает 112 источников.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Белок врожденного иммунитета Tag7

В 1996 году в Институте Биологии Гена РАН путем вычитания библиотек из метастазирующей и не метастазирующей опухолевых линий клеток VMR-Liv и VMR-0 был обнаружен новый белок Tag7 [3]. Данный белок классифицируют как один из пептидогликан-узнающих белков (peptidoglycan recognition proteins, PGRPs).

1.2. Пептидогликан-распознающие белки

PGRPs впервые были найдены в гемолимфе насекомых как белки, связывающие пептидогликан клеточной стенки бактерий и активирующие антимикробный иммунный ответ [4].

Клонирование генов PGRPs позволило определить их у насекомых, моллюсков и позвоночных, при этом гены подобных белков у нематод и растений найдены не были. Например, у Drosophila обнаружено 13 генов, кодирующих 19 видов PGRPs. Стоит отметить, что у каждого белка семейства есть по крайней мере один консервативный домен, похожий на N-acetylmuramyl-alanine amidases: бактериальные амидазы и лизоцимы бактеориофагов, что может указывать на происхождение этой группы белков [5].

PGRPs насекомых классифицируют по длине транскриптов: экстраклеточные PGRP-S (короткая форма) и PGRP-L длинная форма. Связывание PGN клеточной стенки бактерий приводит к активации Imd- или Toll- сигнальных путей. Активация Imd - пути происходит в ответ на бактериальную инфекцию и вызывает синтез антимикробных пептидов, в частности дипте-рицина. Взаимодействие с грамположительными бактериями и грибами приводит к запуску Toll-пути и секреции дрозомицина [6].

Связывание пептидогликана всегда является только первым шагом в активации сигнальных путей. Например, связывание PGRP-SA с пептидоглика-ном грамположительных бактерий (Lys-type PGN) запускает каскад серино-вых протеаз, которые переводят лиганд Толл-рецептора proSpätzle в активную форму Spätzle (Spz) [7].

Активация Imd - пути зависит от участия трансмембранных белков PGRP-LC и PGRP -LE, которые распознают пептидогликан грамотрицатель-ных бактерий экстраклеточными доменами и передают сигнал на Imd, используя внутриклеточные домены [8].

У человека обнаружены 4 формы PGRPs: PGLYRP1, PGLYRP2, PGLYRP3 и PGLYRP4. PGLYRP1 (20кДа) имеет сигнальный пептид и один PGRP домен. PGLYRP1, PGLYRP3 и PGLYRP4 обладают прямым бактерицидным действием против грамположительных и грамотрицательных бактерий. PGLYRP2 - фермент с пептидогликан - аминогидролазной активностью.

Ген PGLYRP1 или PGRP-S (Tag7) экспрессируется преимущественно в костном мозге и полиморфонуклеарных клетках и их предшественниках, белок обнаруживается в секреторных гранулах. Сравнительно низкий уровень экспрессии PGLYRP1 характерен для многих не иммунных клеток, в частности, для эпителиальных клеток и фибробластов [5,9].

PGLYRP2 экпрессируется клетками печени, где он секретируется в кровь. Но его экспрессия может быть индуцирована также в эпителиальных клетках и фибробластах в ответ на бактериальную инфекцию [10].

Белки PGLYRP3 и PGLYRP4 обнаружены в клетках эпидермиса кожи, волосяных фолликулах, потовых и сальных железах, эпителии рта и ЖКТ [11].

Анализ кристаллической структуры PGLYRP1 и PGLYRP3 показал, что PGRP домен несет лиганд-связывающую петлю, которая узнает специфическую последовательность пептидогликана, связывая тетра- и пента- пептиды

GlcNAc- МжЫАс с высокой аффинностью и при этом не взаимодействует с димером или пептидом без Мш^Ас [12-14].

Мыши с нокаутом гена РОЯР-8 (РОЯР-8 - / -) обладают повышенной восприимчивостью к внутрибрюшинной инфекции грамположительными бактериями с низкой патогенностью, но не с более патогенными грамполо-жительными или грамотрицательными бактериями. Мыши PGRP-S - / - демонстрируют нормальные воспалительные реакции и продукцию фактора некроза опухоли альфа (Т№а) и интерлейкина 6 (ГЬ6). Нейтрофилы от мышей PGRP-S - / - обладают нормальным фагоцитарным поглощением бактерий, но имеют дефекты при внутриклеточном уничтожении и переваривании относительно непатогенных грамположительных бактерий. Следовательно, PGRP-S млекопитающих принимает участие во внутриклеточном уничтожении бактерий. Таким образом, от насекомых до млекопитающих сохраняется только распознавание бактерий PGRP-S, но не его эффекторная функция [15].

Механизм действия PGRPs остается до конца не изученным. Очевидно, что PGRPs способны встраиваться в клеточную стенку бактерий и запускать разные виды стресса (оксидативный, тиоловый и металл-индуцированный), которые приводят к гибели чужеродной клетки. Оксидативный стресс наступает при блокировании дыхательной цепи в результате гиперпродукции Н202. PGRPs также увеличивают концентрацию внутриклеточных ионов Zn2+ и способствуют уменьшению количества тиола в цитозоле.

Механизм бактерицидной активности PGRPs отличается от активности антибиотиков, ингибирующих синтез пептидогликана, РНК или ДНК и отличается от противомикробных пептидов, пермеабилизирующих мембрану и ферментов, гидролизующих клеточную стенку.

При контакте с грамположительными бактериями, PGRPs связывают пептидогликан бактериальной клеточной стенки в сайте ферментативного гидролиза (ЬуЕ LytF B. SubtШs). У грамотрицательных бактерий распознавание происходит по всей мембране [15-17]. Взаимодействие PGRPs - PGN,

13

возможно, индуцирует олигомеризацию в ленточные структуры и активируют двухкомпонентную систему: деполяризация мембраны, продукция ОН, ингибирование главных внутриклеточных процессов биосинтеза [18,19]. Последовательность, возможно, инициируется истощением энергетических ресурсов, таких как АТФ, накопление которого зависит от мембранного потенциала [20,21].

Функционирование группы пептидогликан-распознающих белков не ограничивается бактерицидным действием: показана роль PGLYRP1 в противоопухолевом иммунитете.

PGLYRP1(Tag7) способен образовывать комплекс с белком теплового шока Hsp70 в молярном соотношении 1:1. Полученный комплекс вызывает гибель HLA(-) опухолевых клеток, путем индукции в них двух видов программируемой клеточной смерти: апоптоза и некроптоза. При этом, Tag7 не проявляет никакой цитотоксической активности. В экспериментах in vitro показано, что Tag7- Hsp70 комплекс связывается с TNFR1 - рецептором на поверхности опухолевых клеток и индуцирует сигнальные каскады, которые приводят к гибели клетки. Было также установлено, что один из компонентов комплекса - Tag7, может связываться с TNFR1, блокируя последующее цито-токсическое действие Tag7- Hsp70 или TNF-a [22]. Одним из источников Tag7- Hsp70 комплекса являются цитотоксические Т-лимфоциты. В частности, было показано, что в PBMC здоровых доноров, инкубированных в течение 6 суток с IL2, появляется субпопуляция цитотоксически активных лимфоцитов, которые секретируют данный комплекс после взаимодействия с К562 клетками [23]. Интересно, что формирование комплекса Tag7- Hsp70 происходит при межклеточном контакте. Экспериментально доказано, что Tag7 может быть экспрессирован на поверхности цитотоксических Т-лимфоцитов, и способен распознавать белок теплового шока Hsp70 на мембране опухолевых клеток. Такое взаимодействие является важным элементом

узнавания цитотоксическим лимфоцитом клетки-мишени и необходимо для дальнейшей индукции клеточной смерти [24].

В системе in vivo используют трансфицированные геном Tag7 опухолевые клетки. Опухолевые клетки, полученные от больных с меланомой и метастатическим почечно-клеточным раком, трансфицировали геном Tag7, облучали и вводили каждые 3 недели. Прививки хорошо переносились всеми пациентами без клинически значимых признаков токсичности. Гиперчувствительность замедленного типа наблюдалась в 48% случаев. Противоопухолевый иммунный ответ наблюдался у 95% пациентов. Не было никаких полных или частичных ответов; однако, у одного пациента с почечно-клеточным раком был достигнут незначительный ответ. Стабилизация опухолевого заболевания наблюдалась у восьми пациентов (семь с злокачественной меланомой и один с почечно-клеточным раком). Среднее время до прогрессирования опухоли было 3 месяца [25].

В данном случае механизм противоопухолевого иммунного ответа до конца не изучен и требует дальнейших исследований.

Действие Tag7 не ограничивается проявлением его цитотоксической активности против опухолевых клеток. Было показано, что он способен связываться с белком Mts1/S100A4, который характерен для некоторых метастази-рующих опухолей, а также выделяется в среду лимфоцитами. Образованный Tag7-Mts1 комплекс обладает хемоаттрактивной активностью по отношению к некоторым субпопуляциям лимфоцитов, в большей степени к натуральным киллерам. Стоит также отметить, что между тремя белками: Tag7, Hsp70 и Mtsl имеет место быть конкурентное связывание, иными словами, наличие в среде Mtsl может разрушать цитотоксический комплекс Tag7- Hsp70, инги-бируя его активность [26].

Недавно обнаружена еще одна функция Tag7 - его способность связываться с TREM1 рецептором на поверхности моноцитов/макрофагов и нейтрофилов [2].

Активация TREM1 не приводит к прямой активации антимикробной защиты. Передача сигнала от TREM1 стимулирует синтез провоспалительных хемокинов (MIP-^ IL8) и цитокинов. Вовлечение TREM-1 в комбинации с микробными лигандами (LPS), которые активируют Toll-подобные рецепторы, увеличивает продукцию провоспалительных цитокинов TNF-а и GM-CSF, одновременно ингибируя выработку IL 10, противовоспалительного ци-токина. Первичные моноциты дифференцируются в незрелые дендритные клетки после активации через TREM-1, о чем свидетельствует более высокая экспрессия молекул CD1a, CD86 и MHC класса II [27].

Очевидно, что активация TREM-1 на моноцитах приводит к развитию ранних индуцированных и адаптивных иммунных реакций, участвующих в защите организма от патогенов.

1.3. Моноциты, макрофаги и дендритные клетки

Клетки врожденного иммунитета первыми реагируют на проникновение антигена в организм. Они запрограммированы распознавать консервативные мотивы, образы патогенности, РАМР, характерные для разных групп патогенов, индуцировать быстрый иммунный ответ и, при необходимости, активировать ресурсы адаптивного иммунитета. Рецепторы, распознающие РАМР, как правило, подразделяют на 4 группы:

1. Толл-подобные рецепторы: активируются различными ли-гандами, главным образом структурными компонентами оболочки бактерий, вирусов и грибов.

2. С-лектиновые рецепторы: распознают гликаны клеточной стенки грибов и некоторых бактерий.

3. NOD - цитоплазматические рецепторы, распознающие мотив пептидогликана клеточной стенки бактерий.

4. RIG - внутриклеточные рецепторы, которые узнают 5'-некэпированную вирусную РНК [28].

Выделяют также отдельные рецепторы, например, TREM1, который нельзя отнести к определенной группе, но их действие синергично с функциями Толл-подобных рецепторов.

Широкий спектр рецепторов, распознающих РАМР, представлен, главным образом, на эффекторных клетках системы врожденного иммунитета: моноцитах и макрофагах, NK-клетках и разного рода гранулярных клетках.

Группа клеток моноцитарного происхождения, как правило, является первым препятствием при проникновении инфекции. Они представляют собой крупные гранулярные клетки с общим миелоидным предшественником. На основе фенотипических маркеров их классифицируют на три подгруппы по уровню экспрессии CD14+ , CD 16+ и CCR2-рецептора хемокина [29]. В зависимости от их функций и локализации в организме, их можно разделить на три типа: моноциты, макрофаги и дендритные клетки (ДК).

Моноциты присутствуют, главным образом, в крови и составляют около 10 % от общего количества лейкоцитов. Ранее считалось, что моноциты -это промежуточная стадия между миелоидным предшественником в костном мозге и макрофагами, ДК в тканях. На данный момент показано, что большинство зрелых макрофагов закладываются еще в эмбриогенезе, а классические ДК происходят из собственного миелоидного предшественника [30]. Тем не менее, при возникновении воспаления моноциты мигрируют к очагу и трансформируются в макрофаги, реализуя аналогичные функции (фагоцитоз).

Активация моноцитов может происходить классическим путем через TLR-MyD88, но также за счет взаимодействия с TNF и IFN I типа [31].

Способность моноцитов функционировать подобно классическим ДК позволяет классифицировать их в качестве одной их субпопуляций ДК. С точки зрения выполняемых функций, ДК, полученные из моноцитов, являются стимулированными моноцитами, которые определяются не только на основе экспрессии молекул MHC класса II и CD11c, но также их антигенпре-

17

зентирующими возможностями. Известно, что высоко функциональные ДК происходят от классических CD14+ моноцитов под действием GM-CSF и IL4 [32]. ДК моноцитарного происхождения обладают широким спектром действий, включая способность стимулировать наивные CD4+ T клетки, кросс-презентировать антиген CD8+ T клеткам и секретировать провоспалительные цитокины: IL1, IL6, TNFa, ГЬ12и IL23 [33]. Очевидно, что антигенпрезенти-рующая функция моноцитов также способствует более эффективному созреванию Т-клеток. Они приобретают антиген в периферических тканях, сохраняют и обрабатывают антигенные пептиды и транспортируют антиген в лимфатические узлы. Исследования, основанные на модели с использованием Aspergillus fumigatus, позволяют определить роль моноцитов как регуля-торных элементов в Т-клеточном ответе, в первую очередь за счет экспрессии цитокинов, необходимых для созревания Т-хелперов: IL 12 и IFNy [34] . Антигенпрезентирующие клетки (АПК) доставляют три основных сигнала наивным Т-клеткам, чтобы стимулировать их активацию, клональное расширение и приобретение эффекторных функций. Первый сигнал включает активацию Т-клеточного рецептора (TCR) пептид-MHC комплексами; второй реализуется ко-стимулирующими молекулами, такими как CD80 и CD86; и третий сигнал доставляется секретируемыми от АПК медиаторами, например, IL27. Все три сигнала должны происходить от одного и того же типа АПК, чтобы вызвать дифференцировку эффекторных T-клеток (цис-активация). Моноциты, по-видимому, нуждаются в тех же свойствах, что и дендритные клетки для стимуляции активации Т-клеток, клональной экспансии и приобретения эффекторных функций.

Дендритные клетки традиционно считают переходным звеном от врожденного иммунитета к адаптивному. Кроме того, существует также ряд лим-фоцитарных субпопуляций, которые участвуют в первичной реакции на патоген (NK-клетки). Таким образом, провести однозначное деление на врожденный и приобретенный иммунитет невозможно, поскольку иммунный ответ - это система последовательных и синхронизированных этапов активации

18

определенных типов клеток. Только совместное координированное действие всех ветвей иммунитета может обеспечить надежную защиту организма.

1.4. Адаптивный иммунный ответ

Адаптивный иммунитет переводит защиту организма от чужеродных агентов на более сложноорганизованный уровень. В отличие от врожденного иммунитета, реакция возникает не на стандартизированные бактериальные мотивы патогенности, а на определенный антиген, особенный в каждом случае. Иммунитет при этом сохраняется на протяжении всей жизни. Центральное положение здесь занимают лимфоциты. В отличие от гранулоцитов и макрофагов, у них лимфоидный предшественник. Дифференцировка Т- и В-лимфоцитов происходит в разных органах. Т-клеточная линия созревает в тимусе, В - клетки - в костном мозге. Лимфоциты циркулируют в крови и лимфоидных органах (лимфоузлы, селезенка, лимфоидная ткань) и активируются после представления антигена. Антиген распознается только в комплексе с МНС при контакте со специализированными клетками: ДК или макрофагами в лимфоузлах. Лимфоциты одновременно взаимодействуют и с антигеном, и с МНС, это явление названо «двойным распознаванием».

Активированные В-клетки дифференцируются в плазмоциты, способные секретировать антитела для элиминации патогена. Плазмоциты, в отличие от В -клеток, способны к секреции 1Ь3, 1Ь7 и выработке специфических антител. В зависимости от типа антигена функции антител заключаются в 3 основных реакциях:

1. Нейтрализация. Связывание антител с антигеном препятствует дальнейшему взаимодействию патогена с клетками (характерно для различного ряда токсинов).

2. Опсонизация. Антитела активно прикрепляются к поверхности патогена, блокируя его контакты с другими клетками. Опсонизированные клетки - приманка для макрофагов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шарапова Татьяна Николаевна, 2020 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Cho J.H. et al. Human peptidoglycan recognition protein S is an effector of neutrophil-mediated innate immunity // Blood. 2005. Vol. 106, № 7. P. 25512558.

2. Read C.B. et al. Cutting Edge: Identification of Neutrophil PGLYRP1 as a Ligand for TREM-1 // J. Immunol. Author Choice. 2015. Vol. 194, № 4. P. 1417-1421.

3. Kiselev S.L. et al. [tag7 Gene and gene therapy of cancer] // Genetika. 2000. Vol. 36, № 11. P. 1431-1435.

4. Yoshida H., Kinoshita K., Ashida M. Purification of a peptidoglycan recognition protein from hemolymph of the silkworm, Bombyx mori // J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271, № 23. P. 13854-13860.

5. Kang D. et al. A peptidoglycan recognition protein in innate immunity conserved from insects to humans // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. Vol. 95, № 17. P. 10078-10082.

6. Hoffmann J.A., Reichhart J.-M. Drosophila innate immunity: an evolutionary perspective // Nat. Immunol. 2002. Vol. 3, № 2. P. 121-126.

7. Weber A.N.R. et al. Binding of the Drosophila cytokine Spätzle to Toll is direct and establishes signaling // Nat. Immunol. 2003. Vol. 4, № 8. P. 794-800.

8. Cho J.H. et al. Human peptidoglycan recognition protein S is an effector of neutrophil-mediated innate immunity // Blood. 2005. Vol. 106, № 7. P. 25512558.

9. Liu C. et al. Peptidoglycan recognition proteins: a novel family of four human innate immunity pattern recognition molecules // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276, № 37. P. 34686-34694.

10. Zhang Y. et al. Identification of serum N-acetylmuramoyl-l-alanine amidase as liver peptidoglycan recognition protein 2 // Biochim. Biophys. Acta. 2005. Vol. 1752, № 1. P. 34-46.

11. Lu X. et al. Peptidoglycan recognition proteins are a new class of human bactericidal proteins // J. Biol. Chem. 2006. Vol. 281, № 9. P. 5895-5907.

12. Kim M.-S., Byun M., Oh B.-H. Crystal structure of peptidoglycan recognition protein LB from Drosophila melanogaster // Nat. Immunol. 2003. Vol. 4, № 8. P. 787-793.

13. Guan R. et al. Crystal structure of the C-terminal peptidoglycan-binding domain of human peptidoglycan recognition protein Ialpha // J. Biol. Chem. 2004. Vol. 279, № 30. P. 31873-31882.

14. Guan R. et al. Structural basis for peptidoglycan binding by peptidoglycan recognition proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2004. Vol. 101, № 49. P. 17168-17173.

15. Dziarski R. et al. Defect in neutrophil killing and increased susceptibility to infection with nonpathogenic gram-positive bacteria in peptidoglycan recognition protein-S (PGRP-S)-deficient mice // Blood. 2003. Vol. 102, № 2. P. 689-697.

16. Tydell C.C. et al. Bovine peptidoglycan recognition protein-S: antimicrobial activity, localization, secretion, and binding properties // J. Immunol. Baltim. Md 1950. 2006. Vol. 176, № 2. P. 1154-1162.

17. Chang C.-I. et al. Structure of tracheal cytotoxin in complex with a heterodi-meric pattern-recognition receptor // Science. 2006. Vol. 311, № 5768. P. 1761-1764.

18. Kashyap D.R. et al. Peptidoglycan recognition proteins kill bacteria by activating protein-sensing two-component systems // Nat. Med. 2011. Vol. 17, № 6. P. 676-683.

19. Lim J.-H. et al. Structural basis for preferential recognition of diaminopimelic acid-type peptidoglycan by a subset of peptidoglycan recognition proteins // J. Biol. Chem. 2006. Vol. 281, № 12. P. 8286-8295.

20. Dimroth P., Kaim G., Matthey U. Crucial role of the membrane potential for ATP synthesis by F(1)F(o) ATP synthases // J. Exp. Biol. 2000. Vol. 203, № Pt 1. P. 51-59.

21. Hurdle J.G. et al. Targeting bacterial membrane function: an underexploited mechanism for treating persistent infections // Nat. Rev. Microbiol. 2011. Vol. 9, № 1. P. 62-75.

22. Yashin D.V. et al. Tag7 (PGLYRP1) in Complex with Hsp70 Induces Alternative Cytotoxic Processes in Tumor Cells via TNFR1 Receptor // J. Biol. Chem. 2015. Vol. 290, № 35. P. 21724-21731.

23. Sashchenko L.P. et al. Peptidoglycan Recognition Protein Tag7 Forms a Cytotoxic Complex with Heat Shock Protein 70 in Solution and in Lymphocytes // J. Biol. Chem. 2004. Vol. 279, № 3. P. 2117-2124.

24. Sashchenko L.P. et al. Cytotoxic T lymphocytes carrying a pattern recognition protein Tag7 can detect evasive, HLA-negative but Hsp70-exposing tumor cells, thereby ensuring FasL/Fas-mediated contact killing // Blood. 2007. Vol. 110, № 6. P. 1997-2004.

25. Moiseyenko V.M. et al. Phase I/II trial of gene therapy with autologous tumor cells modified with tag7/PGRP-S gene in patients with disseminated solid tumors: miscellaneous tumors // Ann. Oncol. Off. J. Eur. Soc. Med. Oncol. 2005. Vol. 16, № 1. P. 162-168.

26. Dukhanina E.A. et al. Opposite roles of metastasin (S100A4) in two potentially tumoricidal mechanisms involving human lymphocyte protein Tag7 and Hsp70 // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2009. Vol. 106, № 33. P. 1396313967.

27. Bleharski J.R. et al. A Role for Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells-1 in Host Defense During the Early-Induced and Adaptive Phases of the Immune Response // J. Immunol. 2003. Vol. 170, № 7. P. 3812-3818.

28. Jr C.A.J. et al. Immunobiology. 5th ed. Garland Science, 2001. V.1. P. 60-67.

29. Geissmann F. et al. Development of Monocytes, Macrophages, and Dendritic

Cells // Science. 2010. Vol. 327, № 5966. P. 656-661.

30. Guilliams M., Mildner A., Yona S. Developmental and Functional Heterogeneity of Monocytes // Immunity. 2018. Vol. 49, № 4. P. 595-613.

31. Jia T. et al. MyD88 and Type I Interferon Receptor-Mediated Chemokine Induction and Monocyte Recruitment during Listeria monocytogenes Infection // J. Immunol. Baltim. Md 1950. 2009. Vol. 183, № 2. P. 1271-1278.

32. Dauer M. et al. Mature dendritic cells derived from human monocytes within 48 hours: a novel strategy for dendritic cell differentiation from blood precursors // J. Immunol. Baltim. Md 1950. 2003. Vol. 170, № 8. P. 4069-4076.

33. Sung S.J. Monocyte-derived dendritic cells as antigen-presenting cells in T-cell proliferation and cytokine production // Methods Mol. Med. 2008. Vol. 138. P. 97-106.

34. Serbina N.V. et al. Distinct Responses of Human Monocyte Subsets to Aspergillus fumigatus Conidia // J. Immunol. Baltim. Md 1950. 2009. Vol. 183, № 4. P. 2678-2687.

35. Rodriguez-Pinto D. B cells as antigen presenting cells // Cell. Immunol. 2005. Vol. 238, № 2. P. 67-75.

36. Nakayama M. Antigen Presentation by MHC-Dressed Cells // Front. Immunol. 2015. Vol. 5, № 672. P. 1-8.

37. Charles A Janeway J. et al. The recognition and effector mechanisms of adaptive immunity. 2001. P. 64-69.

38. Charles A Janeway J. et al. The production of armed effector T cells. 2001. V. 8. P. 310-318.

39. Zhang J.-M., An J. Cytokines, Inflammation and Pain // Int. Anesthesiol. Clin. 2007. Vol. 45, № 2. P. 27-37.

40. Akdis M. et al. Interleukins, from 1 to 37, and interferon-y: Receptors, functions, and roles in diseases // J. Allergy Clin. Immunol. 2011. Vol. 127, № 3. P. 701-721.

41. Nelson B.H., Willerford D.M. Biology of the interleukin-2 receptor // Adv. Immunol. 1998. Vol. 70. P. 1-81.

42. Nelson B.H. IL-2, Regulatory T Cells, and Tolerance // J. Immunol. 2004. Vol. 172, № 7. P. 3983-3988.

43. Kim H.P., Kelly J., Leonard W.J. The basis for IL-2-induced IL-2 receptor alpha chain gene regulation: importance of two widely separated IL-2 response elements // Immunity. 2001. Vol. 15, № 1. P. 159-172.

44. Malek T.R., Castro I. Interleukin-2 Receptor Signaling: At the Interface between Tolerance and Immunity // Immunity. 2010. Vol. 33, № 2. P. 153-165.

45. Stauber D.J. et al. Crystal structure of the IL-2 signaling complex: Paradigm for a heterotrimeric cytokine receptor // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2006. Vol. 103, № 8. P. 2788-2793.

46. Mahmud S.A., Manlove L.S., Farrar M.A. Interleukin-2 and STAT5 in regulatory T cell development and function // JAK-STAT. 2013. Vol. 2, № 1. P. e23154-1-23154-6.

47. BENSIMON G. et al. Use of low dose il-2 for treating autoimmune - related or inflammatory disorders: pat. WO2012123381 A1 USA. 2012.

48. Minami Y. et al. The IL-2 receptor complex: its structure, function, and target genes // Annu. Rev. Immunol. 1993. Vol. 11. P. 245-268.

49. Waldmann T., Tagaya Y., Bamford R. Interleukin-2, interleukin-15, and their receptors // Int. Rev. Immunol. 1998. Vol. 16, № 3-4. P. 205-226.

50. Fehniger T.A. Interleukin 15: biology and relevance to human disease // Blood. 2001. Vol. 97, № 1. P. 14-32.

51. Taniguchi T. et al. IL-2 signaling involves recruitment and activation of multiple protein tyrosine kinases by the IL-2 receptor // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1995. Vol. 766. P. 235-244.

52. Saikh K.U. et al. IL-15-induced conversion of monocytes to mature dendritic cells // Clin. Exp. Immunol. 2001. Vol. 126, № 3. P. 447-455.

53. Mattei F. et al. IL-15 is expressed by dendritic cells in response to type I IFN, double-stranded RNA, or lipopolysaccharide and promotes dendritic cell activation // J. Immunol. Baltim. Md 1950. 2001. Vol. 167, № 3. P. 1179-1187.

54. Stetson D.B. et al. Constitutive cytokine mRNAs mark natural killer (NK) and NK T cells poised for rapid effector function // J. Exp. Med. 2003. Vol. 198, № 7. P. 1069-1076.

55. Chu W.-M. Tumor necrosis factor // Cancer Lett. 2013. Vol. 328, № 2. P. 222-225.

56. Browne K.A. et al. Cytosolic delivery of granzyme B by bacterial toxins: evidence that endosomal disruption, in addition to transmembrane pore formation, is an important function of perforin // Mol. Cell. Biol. 1999. Vol. 19, № 12. P. 8604-8615.

57. Motyka B. et al. Mannose 6-phosphate/insulin-like growth factor II receptor is a death receptor for granzyme B during cytotoxic T cell-induced apoptosis // Cell. 2000. Vol. 103, № 3. P. 491-500.

58. Barry M., Bleackley R.C. Cytotoxic T lymphocytes: all roads lead to death // Nat. Rev. Immunol. 2002. Vol. 2, № 6. P. 401-409.

59. Magnusson C., Vaux D.L. Signalling by CD95 and TNF receptors: Not only life and death // Immunol. Cell Biol. 1999. Vol. 77, № 1. P. 41-46.

60. Waring P., Mullbacher A. Cell death induced by the Fas/Fas ligand pathway and its role in pathology // Immunol. Cell Biol. 1999. Vol. 77, № 4. P. 312317.

61. Kagi D. et al. Molecular mechanisms of lymphocyte-mediated cytotoxicity and their role in immunological protection and pathogenesis in vivo // Annu. Rev. Immunol. 1996. Vol. 14. P. 207-232.

62. Colotta F. et al. Cancer-related inflammation, the seventh hallmark of cancer: links to genetic instability // Carcinogenesis. 2009. Vol. 30, № 7. P. 10731081.

63. Lundin K.U. et al. CD4+ T cells kill Id+ B-lymphoma cells: FasLigand-Fas interaction is dominant in vitro but is redundant in vivo // Cancer Immunol. Immunother. CII. 2004. Vol. 53, № 12. P. 1135-1145.

64. Haabeth O.A.W. et al. How Do CD4+ T Cells Detect and Eliminate Tumor Cells That Either Lack or Express MHC Class II Molecules? // Front. Immunol. 2014. Vol. 5. P.1-13

65. Czabotar P.E. et al. Control of apoptosis by the BCL-2 protein family: implications for physiology and therapy // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2014. Vol. 15, № 1. P. 49-63.

66. Yuan S., Akey C.W. Apoptosome structure, assembly, and procaspase activation // Struct. Lond. Engl. 1993. 2013. Vol. 21, № 4. P. 501-515.

67. Elmore S. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death // Toxicol. Pathol. 2007. Vol. 35, № 4. P. 495-516.

68. Strasser A., Jost P.J., Nagata S. The many roles of FAS receptor signaling in the immune system // Immunity. 2009. Vol. 30, № 2. P. 180-192.

69. Nagata S., Golstein P. The Fas death factor // Science. 1995. Vol. 267, № 5203. P. 1449-1456.

70. Krammer P.H. CD95's deadly mission in the immune system // Nature. 2000. Vol. 407, № 6805. P. 789-795.

71. O' Reilly L.A. et al. Membrane-bound Fas ligand only is essential for Fas-induced apoptosis // Nature. 2009. Vol. 461, № 7264. P. 659-663.

72. Lavrik I.N., Krammer P.H. Regulation of CD95/Fas signaling at the DISC // Cell Death Differ. 2012. Vol. 19, № 1. P. 36-41.

73. Kothakota S. et al. Caspase-3-Generated Fragment of Gelsolin: Effector of Morphological Change in Apoptosis // Science. 1997. Vol. 278, № 5336. P. 294-298.

74. Oberoi-Khanuja T.K., Murali A., Rajalingam K. IAPs on the move: role of inhibitors of apoptosis proteins in cell migration // Cell Death Dis. 2013. Vol. 4, № 9. P. e784.

75. Ho L.H. et al. Labile zinc and zinc transporter ZnT4 in mast cell granules: role in regulation of caspase activation and NF-kappaB translocation // J. Immunol. Baltim. Md 1950. 2004. Vol. 172, № 12. P. 7750-7760.

76. Hanayama R. et al. Identification of a factor that links apoptotic cells to phagocytes // Nature. 2002. Vol. 417, № 6885. P. 182-187.

77. Chen D., Yu J., Zhang L. Necroptosis: an alternative cell death program defending against cancer // Biochim. Biophys. Acta. 2016. Vol. 1865, № 2. P. 228-236.

78. Kaczmarek A., Vandenabeele P., Krysko D.V. Necroptosis: the release of damage-associated molecular patterns and its physiological relevance // Immunity. 2013. Vol. 38, № 2. P. 209-223.

79. Zhang Q. et al. Circulating Mitochondrial DAMPs Cause Inflammatory Responses to Injury // Nature. 2010. Vol. 464, № 7285. P. 104-107.

80. Danial N.N., Korsmeyer S.J. Cell death: critical control points // Cell. 2004. Vol. 116, № 2. P. 205-219.

81. Varfolomeev E. et al. IAP antagonists induce autoubiquitination of c-IAPs, NF-kappaB activation, and TNFalpha-dependent apoptosis // Cell. 2007. Vol. 131, № 4. P. 669-681.

82. Wang L., Du F., Wang X. TNF-alpha induces two distinct caspase-8 activation pathways // Cell. 2008. Vol. 133, № 4. P. 693-703.

83. Geserick P. et al. Cellular IAPs inhibit a cryptic CD95-induced cell death by limiting RIP1 kinase recruitment // J. Cell Biol. 2009. Vol. 187, № 7. P. 10371054.

84. Moquin D.M., McQuade T., Chan F.K.-M. CYLD deubiquitinates RIP1 in the TNFa-induced necrosome to facilitate kinase activation and programmed necrosis // PloS One. 2013. Vol. 8, № 10. P. e76841.

85. Wertz I.E. et al. De-ubiquitination and ubiquitin ligase domains of A20 down-regulate NF-kappaB signalling // Nature. 2004. Vol. 430, № 7000. P. 694699.

86. Lin Y. et al. Cleavage of the death domain kinase RIP by Caspase-8 prompts TNF-induced apoptosis // Genes Dev. 1999. Vol. 13, № 19. P. 2514-2526.

87. Oberst A. et al. Catalytic activity of the caspase-8-FLIPL complex inhibits RIPK3-dependent necrosis // Nature. 2011. Vol. 471, № 7338. P. 363-367.

88. Li J. et al. The RIP1/RIP3 Necrosome Forms a Functional Amyloid Signaling Complex Required for Programmed Necrosis // Cell. 2012. Vol. 150, № 2. P. 339-350.

89. Wang H. et al. Mixed lineage kinase domain-like protein MLKL causes necrotic membrane disruption upon phosphorylation by RIP3 // Mol. Cell. 2014. Vol. 54, № 1. P. 133-146.

90. Dondelinger Y. et al. MLKL compromises plasma membrane integrity by binding to phosphatidylinositol phosphates // Cell Rep. 2014. Vol. 7, № 4. P. 971-981.

91. Cai Z. et al. Plasma membrane translocation of trimerized MLKL protein is required for TNF-induced necroptosis // Nat. Cell Biol. 2014. Vol. 16, № 1. P. 55-65.

92. Chen X. et al. Translocation of mixed lineage kinase domain-like protein to plasma membrane leads to necrotic cell death // Cell Res. 2014. Vol. 24, № 1. P. 105-121.

93. He S. et al. Toll-like receptors activate programmed necrosis in macrophages through a receptor-interacting kinase-3-mediated pathway // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2011. Vol. 108, № 50. P. 20054-20059.

94. Schenk B., Fulda S. Reactive oxygen species regulate Smac mimetic/TNFa-induced necroptotic signaling and cell death // Oncogene. 2015. Vol. 34, № 47. P. 5796-5806.

95. Dunai Z., Bauer P.I., Mihalik R. Necroptosis: Biochemical, Physiological and Pathological Aspects // Pathol. Oncol. Res. 2011. Vol. 17, № 4. P. 791-800.

96. Ouyang L. et al. Programmed cell death pathways in cancer: a review of apop-tosis, autophagy and programmed necrosis // Cell Prolif. 2012. Vol. 45, № 6. P. 487-498.

97. Degterev A., Yuan J. Expansion and evolution of cell death programmes // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2008. Vol. 9, № 5. P. 378-390.

98. Raulet D.H. et al. Regulation of ligands for the NKG2D activating receptor // Annu. Rev. Immunol. 2013. Vol. 31. P. 413-441.

98

99. Murphy M.E. The HSP70 family and cancer // Carcinogenesis. 2013. Vol. 34, № 6. P. 1181-1188.

100.Multhoff G., Hightower L.E. Distinguishing integral and receptor-bound heat shock protein 70 (Hsp70) on the cell surface by Hsp70-specific antibodies // Cell Stress Chaperones. 2011. Vol. 16, № 3. P. 251-255.

101. Sashchenko L.P. et al. Peptidoglycan recognition protein tag7 forms a cytotox-ic complex with heat shock protein 70 in solution and in lymphocytes // J. Bi-ol. Chem. 2004. Vol. 279, № 3. P. 2117-2124.

102. Sharapova T.N. et al. Innate Immunity Protein Tag7 Induces 3 Distinct Populations of Cytotoxic Cells That Use Different Mechanisms to Exhibit Their Antitumor Activity on Human Leukocyte Antigen-Deficient Cancer Cells // J. Innate Immun. 2017. V.9. P.598-608.

103.Artis D., Spits H. The biology of innate lymphoid cells // Nature. 2015. Vol. 517, № 7534. P. 293-301.

104. Rosenberg S.A., Lotze M.T. Cancer Immunotherapy Using Interleukin-2 and Interleukin-2-Activated Lymphocytes // Annu. Rev. Immunol. 1986. Vol. 4, № 1. P. 681-709.

105.Boyman O., Sprent J. The role of interleukin-2 during homeostasis and activation of the immune system // Nat. Rev. Immunol. 2012. V.12. -P.180-190.

106.Mayer G.D., Krueger R.F. Tilorone hydrochloride: mode of action // Science. 1970. Vol. 169, № 3951. P. 1214-1215.

107. Gehrmann M. et al. Tumor-Specific Hsp70 Plasma Membrane Localization Is Enabled by the Glycosphingolipid Gb3 // PLOS ONE. 2008. Vol. 3, № 4. P. e1925.

108. Gross C. et al. Cell Surface-bound Heat Shock Protein 70 (Hsp70) Mediates Perforin-independent Apoptosis by Specific Binding and Uptake of Granzyme B // J. Biol. Chem. 2003. Vol. 278, № 42. P. 41173-41181.

109. Ivanova O.K. et al. CD3+ CD8+ NKG2D+ T Lymphocytes Induce Apoptosis and Necroptosis in HLA-negative Cells via FasL-Fas Interaction // J. Cell. Bi-ochem. 2017. V. 118, №10. P.3359-3366.

99

110.Hu J.-S. et al. Mechanism of lysophosphatidylcholine-induced lysosome de-stabilization // J. Membr. Biol. 2007. Vol. 215, № 1. P. 27-35.

111.Degterev A. et al. Identification of RIP1 kinase as a specific cellular target of necrostatins // Nat. Chem. Biol. 2008. Vol. 4, № 5. P. 313-321.

112. Schulze-Osthoff K. et al. Cytotoxic activity of tumor necrosis factor is mediated by early damage of mitochondrial functions. Evidence for the involvement of mitochondrial radical generation. // J. Biol. Chem. 1992. Vol. 267, № 8. P. 5317-5323.