Роль адреномедуллина и его рецепторов в функционировании эндотелиальной клетки человека: в норме и при некоторых патологиях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, доктор биологических наук Никитенко, Леонид Леонидович

• Никитенко, Леонид Леонидович
• доктор биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор биологических наук Никитенко, Леонид Леонидович

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Современные представления о роли эндотелиальной клетки в патогенезе сердечно-сосудистых и опухолевых заболеваний (обзор литературы).

1.1. Роль эндотелиальной клетки в норме и при патологии.

1.1.1. Эндотелиальные клетки: роль в развитии и функции сосудистой системы и влияние на здоровье человека.

1.1.2. Молекулярные механизмы дифференцировки, функции и дисфункции эндотелия.

1.2. Адреномедуллин: и его многофункциональная роль в физиологии: неразрешенные вопросы и проблемы.

1.2.1. Адреномедуллин: открытие и первоначальное изучение функции.

1.2.2. Регуляция экпрессии и биодеградации адреномедуллина

1.2.3. Адреномедуллиновые рецепторы: ключевая роль CALCRL и RAMP генов.

1.2.4. G-белок-связанный рецептор CL - ключевая молекула адреномедуллиновых рецепторов.

1.2.5. Белки, модифицирующие активность рецептора (RAMPs).

1.2.6. Другие компоненты рецепторной системы, регулирующие ее функцию.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль адреномедуллина и его рецепторов в функционировании эндотелиальной клетки человека: в норме и при некоторых патологиях»

В настоящее время большое внимание уделяется исследованию процессов развития и функционирования кровеносной и лимфатической сосудистых систем в норме и при патологии. Эндотелиальные клетки микроциркуляторного русла (ЭКМР) играют ключевую роль в развитии и функционировании кровеносных и лимфатических сосудов. Избыточная пролиферация и трансформация, либо нарушение функции ЭКМР приводит к патологическому ангиогенезу/ лимфангиогенезу или дисфункции сосудистой системы - являющимся показателями злокачественных опухолей и многих других заболеваний [Адамян, 1998; Давыдов, 2002; Carmeliet, 2003 и 2005].

Существенный прогресс был достигнут за несколько последних лет в исследовании молекулярных механизмов развития и функционирования сосудистой системы, и в выявлении ключевых ангиогенных и лимфангиогенных факторов, а также в использовании данных знаний для ингибирования ангиогенеза и лимфангиогенеза при опухолевых процессах и неоплазмах/новообразованиях различной этиологии, а также для терапии сердечно-сосудистых заболеваний у экспериментальных животных [Alitalo et al., 2005; Ferrara and Kerbel, 2005].

Одной из современных задач в "транслировании" (применении в практике для терапии человека) данных открытий в области исследования механизмов ангиогенеза и лимфангиогенеза на животных является проверка роли известных и новых факторов в биологии эндотелиальных клеток человека и выявление механизмов, регулирующих экспрессию и функцию их рецепторов, а также определение их потенциальной роли в патогенезе опухолевых и сердечно-сосудистых заболеваний.

В связи с этим разработка методов получения и культивирования эндотелиальных клеток кровеносного и лимфатического микроциркуляторного русла человека, а также исследование роли новых ангиогенных и лимфангиогенных факторов в биологии данного типа клеток, представляет собой актуальную задачу в области биомедицины.

Несмотря на то, что проведенные на животных эксперименты указывали на роль нового ангиогенного фактора адреномедуллина (AM) при развитии сосудистой системы в эмбриогенезе и при опухолевых процессах, существовал ощутимый недостаток подобного рода исследований с использованием клеток человека. Кроме того, информация о распределении и функционировании эндогенных адреномедуллиновых рецепторов, экспрессированных в клетках и тканях человека, также оставалась неизученной до настоящего времени. В связи с этим неизвестными оставались как роль AM и его рецепторов в тканях человека, так и возможности их использования для лечения раковых и других заболеваний. Данная проблема существует и для других ангиогенных факторов. Так, несмотря на несомненную роль одной из ключевых ангиогенных молекул - фактора роста эндотелия (vascular endothelial growth factor, VEGF) в развитии раковых опухолей в экспериментальных исследованиях на животных, применение ингибиторов данного ангиогенного фактора не всегда приводит к положительным результатам [Ferrara and Kerbel, 2005].

Трудности в данной области обусловлены отсутствием системного подхода в анализе экспрессии и функции факторов ангиогенеза и их рецепторов in vitro и in vivo в клетках и тканях человека. Под системным подходом подразумевается проведение исследований не только роли данных факторов на эндотелиальные клетки человека, но и исследование транскрипции и трансляции генов, кодирующих данные рецепторы в органах и клетках; изучение механизмов, регулирующих экспрессию рецептора на поверхности клетки; специфичности его взаимодействия с потенциальными лигандами (фармакология рецептора), а также механизмов десенситизации и ресенситизации.

Данный подход позволяет рассматривать не только механизм действия определенного ангиогенного фактора на молекулярном и клеточном уровнях, но и потенциал использования данных знаний в теоретической биологии, а также при разработке методов диагностики, интервенции и терапий для прогнозирования эффективности применения ингибиторов и активаторов данных механизмов, выявления типов раковых опухолей (а также индивидуальных пациентов), в которых действие данных реактивов может быть наиболее результативным, и потенциального использования в клинике для лечения широкого спектра сердечно-сосудистых, раковых, инфекционных и других заболеваний, связанных с патологическим (лимф)ангиогенезом или дисфункцей сосудистой системы.

Исходя из этого, целью данного исследования являлось оценка роли пептида адреномедуллина (AM) в биологии эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека и механизмов, регулирующих экспрессию и функцию его рецепторов в норме и при некоторых патологиях на основе комплексного морфо-функционального и молекулярно-генетического исследования (Рисунок 1).

Механизмы, регулирующие функцию рецептора

Механизмы, регулирующие транскрипцию

-Экспрессия на поверхности клетки - Фармакология рецептора специфичность вааимодеиспня с двпндип) -Десенситизация и ресенситизация

Трансляционные подходы

-Изучение экспрессии лиганда и рецептора в клетках и тканях человека

- в норме

- при патологиях

Разработка ингибиторов и методов диагностики заболеваний

Комплексный систематический подход

Рисунок 1. Изучение роли адреномедуллина и его рецепторной системы с помощью комплексно-систематического подхода.

Для достижения поставленной цели последовательно решались следующие задачи:

1. Разработать методы получения и культивирования эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла (ЭКМР) из тех тканей человека, в которых происходят процессы физиологического ангиогенеза, а именно эндометрия и миометрия;

2. Исследовать роль AM в первичных культурах ЭКМР человека;

3. Исследовать экспрессию адреномедуллинового рецептора - рецептора, подобного кальцитониновому рецептору (calcitonin receptor-like receptor, CL, кодируемого CALCRL геном) в клетках и тканях человека;

4. Исследовать механизмы, регулирующие экспрессию CALCRL гена человека в ЭКМР в норме и при патологии, путем клонирования и описания промотора, определения субхромосомной организации данного гена и влияния онкогенных вирусов (на примере вируса саркомы Капоши) на его транскрипцию;

5. Произвести и охарактеризовать антитела против CL рецептора;

6. Исследовать специфичность к различным лигандам, а также механизмы сенситизации и десенситизации, CL рецептора в эндотелии человека;

7. Исследовать роль адреномедуллина и его рецепторов в ангиогенезе при развитии раковых опухолей и патологических заболеваний органов репродукции, путем изучения экспрессии пептида и локализации функциональной формы CL рецептора в тканях человека в норме и при патологии (в опухолях почек и яичников и тканях саркомы Капоши);

8. Исследовать возможность использования разработанных реактивов и методов для диагностики неоплазм, раковых опухолей и других заболеваний;

9. Исследовать возможность модулирования функционирования адреномедуллиновых рецепторов с целью коррекции их функции при патологиях развития и функции сосудистой системы.

Научная новизна работы

Впервые на основе модифицированных методов получены эндотелиальные клетки микроциркуляторного русла (ЭКМР) человека из тех тканей, в которых происходят процессы физиологического ангиогенеза, а именно эндометрия и миометрия.

Впервые продемонстрирована роль пептида AM в биологии ЭКМР и ангиогенезе в тканях человека.

Впервые описаны механизмы, регулирующие экспрессию CALCRL гена человека и функцию CL рецептора в ЭКМР человека. Впервые продемонстрирована роль CL как рецептора для AM и CGRP (пептида, относящегося к гену кальцитонина) в ЭКМР человека, а также выявлены механизмы его десенситизации.

Впервые разработан метод определения трехмерной субхромосомной структуры генов. Сконструированы плазмидные векторы, позволяющие эффективно оценивать экспрессию CALCRL гена человека, активность его промотора и осуществлять экспрессию CL рецептора в клетках млекопитающих. Клонированы новые, ранее неохарактеризованные транскрипты CALCRL гена человека и создана лентивирусная «библиотека», включающая 27 генов, кодирующих различные вирусные белки вируса саркомы Капоши.

Впервые получены уникальные реактивы - поликлональные антитела против человеческого CL рецептора и блокирующие моноклональные антитела против гетеродимера CL/RAMP, экспрессированого на поверхности клетки. Показана специфичность данных антител и возможность их применения для оценки функционального статуса CL рецептора либо регуляции его функции в клетках человека.

Впервые продемонстрирована экспрессия CL рецептора в клетках и тканях человека в норме и при патологиях (на примере опухолевых тканей почек, яичников, лейомиомы и саркомы Капоши).

Разработан и применен комплексный систематический подход к изучению ангиогенного фактора адреномедуллина и его рецепторной системы.

Впервые выявлены и обобщены роль многоступенчатой регуляции специфической экспрессии и свойств CL рецептора в полноценном функционировании эндотелиальной клетки человека в норме и при патологии.

Теоретическая и практическая значимость работы

Разработанные реактивы и методы могут быть использованы для дальнейших исследований биологии эндотелиальных и стволовых клеток человека, экспрессии и функции CL рецептора в нормальных и опухолевых клетках и тканях человека, а также для диагностики раковых, сердечнососудистых и других заболеваний.

Полученные плазмидные векторы могут быть использованы в области биотехнологии, а полученные поликлональные антитела против CL рецептора человека - как для научно-исследовательских работ, так и для применения в области диагностики и практической медицины.

Разработанные моноклональные антитела против гетеродимеров CL/RAMP могут являться эффективным методом коррекции патологий, связанных с функцией адреномедуллиновых рецепторов, как например патологический ангиогенез и гиперпроницаемость эндотелия.

Изученная роль AM в биологии ЭКМР человека и полученные данные о механизмах, регулирующих экспрессию и функцию адреномедуллиновых рецепторов, представляют собой значительный интерес при поиске эффективных методов противоопухолевой терапии и сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с ангиогенезом и дисфункцией эндотелия в тканях человека.

Результаты проведенных исследований расширяют понимание комплексной регуляции адреномедуллиновых рецепторов и позволяют оценить возможность применения ингибиторов/активаторов действия AM для трансляционных исследований и терапии заболеваний, связанных с избыточной или недостаточной экспрессией самого пептида, либо его рецепторов, а также проводить предварительные исследования по воздействию различных веществ на экспрессию, транспорт и функцию CL рецептора в эндотелиальных клетках, как источнике его локализации in vivo в тканях человека.

Полученные данные свидетельствуют о необходимости продолжения исследования фармакологии адреномедуллиновых рецепторов как в эндотелиальных клетках опухолей, так и в самих опухолевых клетках, а также выявления различий рецептора, экспрессированного в нормальном и опухолевом эндотелии.

На основе применения полученных поликлональных антител против CL рецептора человека и использования векторных плазмид, содержащих промотор CALCRL гена человека, а также разработанной технологии определения трехмерной субхромосомной структуры генов, предложены методы использования данных реактивов для диагностики раковых и других заболеваний, а также оформлено и получено два патента на изобретение.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Адреномедуллин является ангиогенным фактором в тканях человека за счет своей способности активировать пролиферацию и миграцию, а также ингибировать апоптоз эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла.

2. G-белок связанный рецептор CL непосредственно взаимодействует с адреномедуллином и осуществляет роль рецептора для данного пептида в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека.

3. Разработан и применен комплексный систематический подход к изучению ангиогенного фактора адреномедуллина и его рецепторной системы, в результате чего впервые выявлены и обобщены роль многоступенчатой регуляции специфической экспрессии и свойств CL рецептора в полноценном функционировании эндотелиальной клетки человека в норме и при патологии.

4. Разработанные реактивы и методы могут применяться для диагностики и коррекции патологий, связанных с функцией адреномедуллиновых рецепторов, например патологического ангиогенеза и гиперпроницаемости эндотелия.

Апробация работы

Результаты исследований по теме диссертации доложены на конференциях: Xth Hamburg Symposium on Tumor Markers, Hamburg, Germany, 1999; Xlth International Congress of Histochemistry and Cytochemistry, York, United Kingdom, 2000; Annual ICRF Colloquium, Warwick, United Kingdom, 2000; Introduction to Molecular and Cellular Research, San-Diego, USA, 2000; 8th IFPA Meeting, Melbourne, Australia, 2002; "Angiogenesis: basic mechanisms and therapeutic implications", Ascona, Switzerland, 2002; 5th Imperial College School of Medicine Symposium "Vascular endothelium: Role in disease pathogenesis and as a therapeutic target", London, United Kingdom, 2002; 676th Biochemical Society Meeting, Edinburgh, United Kingdom, 2002; 6th International Engelhardt Conference on Molecular Biology, Москва и Санкт-Петербург, Российская Федерация, 2003; Special FEBS 2003 Meeting on Signal Transduction, Brussels, Belgium, 2003; The 40th American Association for Cancer Research Annual Meeting, New Orleans, USA, 2003; Joint International Symposium on CGRP, Amylin and Calcitonin 4th Symposium on Adrenomedullin and Proadrenomedullin N-20 Peptide, Zurich, Switzerland, 2004; XXXIV Congress of Nordic Federation of Obstetrics of Obstetrics and Gynaecology, Helsinki, Finland, 2004; XI European Placenta Group Meeting, Glasgow, United Kingdom, 2005; Xlth Biennial International Gynecologic cancer Society Meeting, Santa Monica, USA, 2006; The 24th European Conference on Microcirculation. From Vascular Biology to

Clinical Microcirculation, Amsterdam, Netherlands, 2006; The 9th International Workshop on Kaposi's Sarcoma Associated Herpesvirus (KSHV) and Related Agents, Cape Cod, USA, 2006; The Physiological Society 2006 Main Meeting, London, United Kingdom; The 21st Scientific Meeting of the International Society of Hypertension (ISH2006), Fukuoka, Japan, 2006.

Внедрение результатов исследований

Полученные данные используются в учебном процессе в Кибл Колледже (Keble College) (Оксфорд,. Великобритания) и в учебном пособии «Embryonic development: Tutorials for biomedical students. Collection MCQ». Материалы диссертации вошли в монографию «Роль адреномедуллина в биологии эндотелиальной клетки человека», издательство «Гэотар-Медиа» (Москва, 2007), и книг для биологов и медиков «Cell and Molecular Biology of Endometrium in Health and Disease», издательство «Soeshi Publishing» (Soeshi, 2002) и «Handbook of Experimental Pharmacology, The Vascular Endothelium», издательство «Springer-Verlag» (Berlin-Heidelberg, 2006).

Разработаны способы определения субхромосомной организации генов и механизмов, регулирующих экспрессию CALCRL гена человека (международные патенты «Chromosomal conformation footprints in diagnostics of aberrant gene expression» No.0603251.0 / A. Akoulitchev, A. Ramadass, L.L. Nikitenko (United Kingdom) Submitted 17.02.2005; Published 17.02.2006 и «Transcriptional Regulation of Therapeutically Useful Gene: (GOIN 33/50) L.L. Nikitenko, D.M. Smith, R. Bicknell, M.C.P. Rees (United Kingdom) Submitted 17.11.2002; Published 17.11.2003), позволяющие оценивать транскрипционную активность генов для диагностики раковых и других заболеваний.

По результатам выполненных по теме диссертации исследований опубликованы в открытой печати 38 научных работ, в том числе в журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ, - 11, одна монография издательства «Гэотар-Медиа» (г. Москва), в материалах международных научных конференций - 21, руководство по эмбриологии и две главы книг международных издательств, и два оформленных патента на изобретение.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 194 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, изложения материалов и методов исследования, четырех глав результатов собственных исследований и их обсуждения, общего заключения и выводов, и указателя цитируемой литературы (45 отечественных и 189 иностранных источников). Работа иллюстрирована 10 таблицами и 62 рисунками в виде графиков, схем и фотографий.

Работа выполнена на базе лабораторий патофизиологии репродукции (зав. отд. д.м.н. Колесникова Л.И.) Института педиатрии и репродукции человека ГУ "Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук» (и.о. директора д.м.н., профессор Долгих В.В.) (Иркутск, Российская Федерация), молекулярных механизмов ангиогенеза (зав. отд. д.м.н. Риис М.К.П.) кафедры акушерства и гинекологии Оксфордского Университета (Оксфорд, Великобритания), биохимии ядерной динамики (зав. отд. к.б.н. Акуличев А.) школы патологии сэра В. Данна Оксфордского Университета (Оксфорд, Великобритания), молекулярных механизмов ангиогенеза (зав. отд. к.б.н. Бикнелл Р.) Института молекулярной медицины (Оксфорд, Великобритания), вирусной онкологии (зав. отд. д.м.н., профессор Бошофф К.) Института биомедицинских исследований Вулфсона Лондонского Университета (Лондон, Великобритания), кафедры эндокринологии (зав. отд. д.м.н., профессор Фуджита Т.) медицинской школы Токийского Университета (Токио, Япония) и кафедры биохимии (зав. отд. д.б.н., профессор Робберехт П.) Брюссельского Университета (Брюссель, Бельгия).

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Никитенко, Леонид Леонидович

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Эндотелиальная клетка играет ключевую роль в развитии и функции кровеносных и лимфатических сосудов. Избыточная пролиферация и трансформация эндотелиальных клеток ведет к патологическому ангиогенезу/лимфангиогенезу или дисфункции сосудистой системы — являющимся показателями злокачественных опухолей и других заболеваний (Таблица 1) [Folkman et al., 2000; Carmeliet et al., 2000; Alitalo et al., 2005].

В данной работе представлены результаты нашего исследования роли пептида адреномедуллина [Kitamura et al., 1993], охарактеризованного в 1998 году как потенциальный новый ангиогенный фактор [Zhao et al., 1998], а также его рецепторов в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека.

Несмотря на то, что эксперименты, проведенные с использованием хориоаллантоисной мембраны цыпленка [Zhao et al., 1998], а также впоследствии на мышах с использованием in vivo моделей [Oehler et al., 2002], указывали на возможную роль петида адреномедуллина в процессе развития сосудистой системы животных, существовал ощутимый недостаток подобного рода исследований с использованием клеток и тканей человека. Кроме того, информация о распределении и функционировании эндогенных адреномедуллиновых рецепторов, экспрессированных в клетках человека, до настоящего времени также остается недостаточно изученной, на что было впервые указано в нашем литобзоре [Nikitenko et al., 2006а].

В связи с этим неизвестными оставались как роль AM и его рецепторов в тканях человека, так и возможности их использования для лечения раковых заболеваний. Данная проблема существует и для других ангиогенных факторов. Например, несмотря на несомненную роль ключевого ангиогенного фактора VEGF в развитии раковых опухолей при проведении экспериментальных исследований на животных, применение ингибиторов данного ангногенного фактора не всегда приводит к положительным результатам [Ferrara and Kerbel, 2005]. С нашей точки зрения, трудности в данной области обусловлены отсутствием системного подхода в анализе экпрессии и функции факторов ангиогенеза in vitro и in vivo в клетках и тканях человека.

Поэтому целью наших исследований являлся комплексный систематический подход к изучению роли ангиогенного фактора AM и его рецепторной системы в клетках и тканях человека (Рисунок 1). Под системным подходом мы подразумеваем исследования по изучению не только роли адреномедуллина в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека, но также транскрипции и трансляции генов, кодирующих компоненты его рецепторной системы (CL, RAMP и др.), механизмов, регулирующих экспрессию функционально активных рецепторов, их локализации в тканях человека, специфичности взаимодействия с потенциальными лигандами (фармакология рецептора), а также механизмов десенситизации и ресенситизации. Для достижения данной цели нами был использован спектр современных молекулярно-биологических, цитологических, гистологических и функциональных методов и моделей.

В настоящем исследовании прежде всего исследовалась роль AM в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла (Глава 3) и характеризовался спектр и механизмы экпрессии AM и его рецептора (Главы 4 и 5) в организме человека. Были выявлены следующие характеристики системы: неспецифифическая экспрессия лиганда различными клетками организма (особенно при стимуляции цитокинами и при гипоксии) и специфическая экспрессия рецептора эндотелием, обуславливающие спектр паракринных, автокринных и эндокринных механизмов действия лиганда на сосудистую систему. Также в работе обоснована возможная роль адреномедуллиновых рецепторов в росте и функционировании кровеносной и лимфатической систем человека в физиологически нормальных и раковых процессах.

Кроме того, системный подход включал исследование трансляционных подходов (Глава 6), а именно возможности применения полученных знаний о AM и его рецепторной системе для разработки методов диагностики и лечения спектра заболеваний, связанных с дисфункцией сосудистой системы и развитием раковых заболеваний. Данный подход позволил рассмотреть не только механизм работы определенной биологической системы на молекулярном уровне (в данном случае адреномедуллиновых рецепторов в эндотелиальной клетке), но и потенциал использования данных знаний в теоретической биологии, а также при разработке терапий для использования в клинике при лечении широкого спектра заболеваний (от раковых опухолей до сердечно-сосудистых заболеваний и направленной дифференцировки стволовых клеток в эндотелиальные клеточные линии).

В диссертации использованы результаты собственных исследований, проведенных автором с применением модифицированных методов получения первичных культур эндотелиальных клеток человека, изолированных из микроциркуляторного русла кожной и маточных тканей, по изучению экспрессии AM и его рецепторов в различных нормальных тканях и раковых опухолях. Использовано несколько оригинальных и современных методик, позволяющих изучить и определить роль адреномедуллиновых рецепторов в физиологии человека на клеточном и тканевом уровнях. В экспериментах с использованием первичных клеточных линий и тканей человека выявлена специфичность экспрессии адреномедуллинового рецептора (G-белок-связанного рецептора (GPCR) CL, кодированного CALCRL геном) в эндотелиальных клетках in vitro и in vivo.

В диссертации приводится экспериментальное обоснование причин такой специфической экспрессии гена (субхромосомной организации) адреномедуллинового рецептора в эндотелии (Глава 4), а также его регуляции различными факторами, включая онкогенный вирус саркомы Капоши (Глава 6). Дается понятие о дальнейшей «специализации» рецептора при узнавании лигандов, а также механизмов регулирующих его «сенситизацию» и «десенситизацию» (Главы 5 и 6).

Проведенное исследование имеет теоретическое и практическое значение. Полученные данные раскрывают молекулярную основу «специфической экспрессии рецепторов, связанных с G-белком (GPCRs)» на примере селективной транскрипции CALCRL гена, играющего важную роль в биологии эндотелиальной клетки. В настоящих исследованиях использованы методология клонирования и сравнительного функционального анализа промотора в комбинации с изучением субхромосомной структуры индивидуального гена в транскрипционно — позитивных (пермессивных) и -негативных (непермессивных) клеточных линиях, а также в нормальных тканях и раковых опухолях человека.

Знание основных принципов и механизмов экпрессии и функции ткане-или клеточно-специфических GPCR рецепторов, включая CL, может позволить в будущем разрабатывать более специфические методы ингибирования либо активирования данных рецепторов, способствующих полноценному функционированию их лигандов, и играющих роль в биологии кровеносной и лимфатической систем человека (Глава 6).

Кроме того, созданный комплексный методический подход и разработанные методы позволят более полно характеризовать роль других новых ангиогенных факторов (на примере AM в данной работе) в физиологии человека, что, несомненно, имеет значение для эффективного применения соответствующих методов терапии с применением знаний о механизмах эспрессии и функционирования данных факторов и их рецепторов в клетках и тканях человека (Глава 6).

Некоторые из разработанных нами методов и реактивов могут быть использованы в диагностике различных заболеваний, включая спектр сердечно-сосудистых, раковых, и, возможно, инфекционных болезней и диабета (Глава 6).

Принцип сравнительного исследования эспрессии лиганда и рецептора в тканях человека позволяет прогнозировать эффективность применения ингибиторов и активаторов ангиогенеза и дисфункции эндотелия, а также выявлять типы раковых опухолей (а также индивидуальных пациентов), в (у) которых действие данных препаратов может быть наиболее результативным.

Таким образом, в результате проведенных нами исследований была впервые изучена роль адреномедуллина в биологии эндотелиальных клеток человека (результаты обобщены на Рисунке 20) и изучены механизмы экспрессии и функции G-белок связанного рецептора CL (результаты обобщены на Рисунках 31,45 и 59).

Применение комплексно-систематического подхода по изучению роли AM и его рецептора CL в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека привело к получению данных, позволяющих оценить возможность применения ингибиторов/активаторов действия адреномедуллина (Таблица 11) для трансляционных исследований и терапии заболеваний, связанных с избыточной или недостаточной экспрессией самого пептида либо его рецепторов, а также проводить предварительные исследования по воздействию различных веществ на экспрессию, транспорт и функцию CL рецептора в эндотелиальных клетках, как источнике его локализации in vivo в тканях человека (Рисунок 34; Таблица 9).

Для ясности необходимо, очевидно, свести ряд важнейших выводов в единую схему, которая была бы универсальной и объясняющей механизмы экспрессии и функции адреномедуллиновых рецепторов в эндотелиальной клетке, а также их роль в норме и при патологии (Рисунок 62).

Регуляция транскрипции CAI\CRhгена

М\ киши ifi/.i.

Эксирееепя на 1|(>1н'рхм(К"111 R \ \h

Активностьрсц

J (сдостаточная iipo y\ iviliui океп va a;toi.i 1 ннсрирошщасмос п>

- 1It дос la iDMMi.iii к \ii naio\ni iiMCCKiiii

1111 IIOI CllC.t

13a !o\n \aiамии -(AiiM(|»)aiii iioi c'lic.i I'lin nfjiipoiiaiiiic ROS, iinomota и iнперпронимаемоеiн Aii(|)(|>cpciiiinpoitK.i

-C I 1!ОЛОШ.1\ KU'IOK

Дисфункция г)НА<)1елиал1>1Н)п к u- i км ционирокание )(})срснциацим шальной клетки

Опухолевые ткани Ишемия Репродукция

Рисунок 62. Роль CL рецептора в биологии эндотелиальной клетки человека в норме и при патологии.

Экспрессия рецептора на поверхности эндотелиальной клетки обеспечивает взаимодействие с лигандами и нормальную функцию эндотелиальных клеток в норме и при патологии (например, при ангиогенезе и лимфангиогенезе в раковых опухолях). Нарушение функции рецептора в результате недостаточной экспрессии рецептора либо его десенситизации могут приводить к дисфункции эндотелиальной клетки при патологиях различной этиологии.

Резюмируя изложенные в данной диссертации результаты проведенных экспериментальных исследований, нами сделаны следующие выводы:

1. С помощью использования лектина Ulex Europeus Agglutinin 1 (UEA1), связанного с магнитными шариками, впервые получены чистые популяции эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека из тех тканей, в которых происходят процессы физиологического ангиогенеза, а именно эндометрия и миометрия, позволяющие изучать роль ангиогенных и других факторов в их биологии.

2. Обоснована роль ангиогенного фактора адреномедуллина в биологии эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека, в том числе его влияние на пролиферацию и миграцию этих клеток, а также ингибирование апоптоза и регуляцию проницаемости эндотелиального монослоя.

3. Клонированы и охарактеризованы промотор и новые гетерогенные транскрипты CALCRL гена человека, а также разработан метод определения трехмерной субхромосомной структуры генов. Показано, что экспрессия CALCRL гена зависит прежде всего от клеточно- и ткане-специфического фона. При этом ключевым фактором экспрессии CALCRL гена является его трехмерная структура, а активность промотора играет вторичную роль. Продемонстрированы влияние гипоксии на активность промотора CALCRL гена человека и роль онкогенного вируса саркомы Капоши на экспрессию CL рецептора в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека.

4. В экспериментах с использованием первичных клеточных культур и тканей человека, а также разработанных плазмидных векторов, позволяющих производить зонды для гибридизации in situ и Northern блоттинга, показана специфическая экспрессия CALCRL гена человека, а также CL рецептора, в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла in vitro и in vivo.

5. Впервые определены функциональные свойства G-белок связанного рецептора CL, экспрессированного в тканях и эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека. Продемонстрировано, что именно GPCR CL непосредственно взаимодействует с адреномедуллином и осуществляет роль рецептора для данного пептида в эндотелии человека, обеспечивая работу нисходящих сигнальных каскадов, ассоциированных со стимуляцией эндотелия адреномедуллином. В экспериментах по изучению интернализации рецептора с использованием антагонистов AM и CGRP рецепторов показано, что CL рецептор также играет роль CGRP рецептора в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека.

6. Продемонстрировано, что избыточная экспрессия одного или другого лиганда (AM или CGRP) приводит к потере функции (десенситизации) эндотелиального CL рецептора к обоим лигандам, и поэтому может играть роль при развитии сердечно-сосудистых заболеваний различной этиологии. При этом десенситизация рецептора обусловлена его интернализацией только в случае взаимодействия с AM.

7. Разработаны поликлональные антитела против человеческого CL рецептора и продемонстрирована их способность распознавать дегликозилированный, основно-гликозилированный и терминально-гликозилированные формы рецептора, а также возможность их использования для определения локализации рецептора в клетках человека in vitro и in vivo.

8. Впервые продемонстрирована экспрессия CL рецептора в тканях человека в норме и при патологии (на примере опухолевых тканей почек, яичников, лейомиомы и саркомы Капоши). Показано, что в раковых опухолях рецептор может быть экспрессирован либо только в эндотелиальных клетках (лейомиома и саркома Капоши), либо в эндотелиальных клетках и в раковых клетках (опухолевые заболевания почек и яичников). Впервые выявлена необходимость исследования фармакологии адреномедуллиновых рецепторов как в эндотелиальных клетках опухолей, так и в самих опухолевых клетках; а также необходимость выявления различий свойств рецептора, экспрессированного в нормальном и опухолевом эндотелии.

9. Показано, что существует корреляция между экспрессией лиганда, либо его рецептора, и развитием/прогрессированием опухолевых заболеваний человека. Выявлено, что в опухолевых тканях экспрессия рецептора в раковых клетках может быть ассоциирована с появлением раковых клеток в сосудах микроциркуляторного русла.

10. Продемонстрировано, что онкогенные вирусы (например, вирус саркомы Капоши) обладают способностью регулировать экспрессию CL рецептора в эндотелиальных клетках микроциркуляторного русла человека. Сконструированная лентивирусная «библиотека» позволила выявить роль индивидуального вирусного гена К2 (кодирующего vIL6) в регуляции экспрессии CL рецептора. Полученные данные впервые указывают на необходимость дальнейшего изучения роли адреномедуллиновых рецепторов в трансформированном вирусом эндотелии, а также выявления различий свойств CL рецептора, экспрессированного в нормальном и трансформированном эндотелии человека.

11. Получены моноклональные антитела против гетеродимера CL/RAMP, экспрессированного на поверхности клетки, и показана возможность их использования для регуляции свойств эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека, что указывает на возможность их применения в качестве эффективного реактива для коррекции патологий, связанных с функцией адреномедуллиновых рецепторов, как например патологический ангиогенез и гиперпроницаемость эндотелия.

12. Экспрессия адреномедуллиновых рецепторов на ранних стадиях эмбриогенеза и дифференцировки стволовых клеток во взрослом организме указывает на их возможную роль в процессе дифференцировки клеток человека.

13. Разработан и применен комплексный систематический подход к изучению ангиогенного фактора адреномедуллина и его рецепторной системы, в результате чего впервые выявлены и обобщены роль многоступенчатой регуляции специфической экспрессии и свойств CL рецептора в полноценном функционировании эндотелиальной клетки человека в норме и при патологии (Рисунки 59 и 62).

Адреномедуллиновые рецепторы и будущее

В заключение представляется необходимым отметить, что в данной диссертации впервые обобщены результаты исследований молекулярных механизмов, регулирующих экспрессию и функцию адреномедуллиновых рецепторов в клетках человека. Данная работа является основой для дальнейшего изучения роли адреномедуллина и его рецепторов в биологии эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла человека.

Результаты наших исследований указывают на необходимость более детального изучения AM, CALCRL и RAMP генов ( в том числе возможных мутаций и полиморфизма нуклеотидов) [Ishimitsu et al., 2001; Nakazawa et al., 2001] и эпигенетических механизмов, регулирующих их экспрессию; механизмов десенситизации и ресенситизации CL рецептора; роли адреномедуллина и CGRP в (лимф)ангиогенезе в процессе эмбриогенеза и развития, либо прогрессирования (метастазирования), раковых опухолей; фенотипических различий CL рецептора, экспрессированного в нормальном и раковом эндотелии (в том числе в трансформированных онкогенным вирусом клетках саркомы Капоши); и разработки специфических ингибиторов и активаторов адреномедуллиновых рецепторов (Таблица 11) [см. также Doods et al., 2000; Zhang et al., 2000 для высокоспецифичных антагонистов CGRP рецепторов].

Несомненно то, что результаты подобного рода исследований позволят расширить наши знания о роли адреномедуллина и его рецепторов в микроциркуляторном эндотелии, а также соответствующих молекулярных механизмах, и будут являться дальнейшей основой для разработки трансляционных подходов для диагностики, либо терапии, сердечнососудистых и опухолевых заболеваний человека.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Никитенко, Леонид Леонидович, 2007 год

1. Адамян Л.В.Эндометриозы: руководство для врачей / JI.B. Адамян, В.И. Кулаков . Москва: Медицина, 1998. - 320 с.

2. Амчиславский Е.Е. Изучение влияния цитокинов на функции эндотелиальных клеток человека перевиваемой линии ЕА.Ну926. Автореферат дис. канд. мед.наук. 14.00.36 / Российская академия медицинских наук. СПб, 2007. - 25 с.

3. Антитела. Методы: в 2-х кн. / Пер. С англ.; под ред. Д. Кэтти. М.: Мир, 1991.-Кн.2.-384 с.

4. Бикел П. Математическая статистика / П. Бикел, К. Доксам. Москва: Финансы и статистика, 1983. - Вып. 2. - 287 с.

5. Бокерия J1.A. Новые подходы к лечению ишемической болезни сердца: терапевтический ангиогенез в сочетании с хирургической реваскуляризацией миокарда / JI.A. Бокерия, Е.З.Голухова, М.В.Еремеева и др. // Терапев. Архив. 2004. - №6. - С. 25-30.

6. Буравкова Л.Б. Участие протеинкиназы С в десентизации рецепторов в культивируемых эндотелиальных клетках при гипоксии / Л.Б. Буравкова, Т.Ю. Мирзапоязова, В.А. Ткачук // J. Hypoxia Medical. 1998. - Vol. 6 (2). - P. 31.

7. Гагуа И.Р. Лейомиосаркома матки (клиника, диагностика, лечение, факторы прогноза): Автореферат дис. канд. мед.наук. 14.00.14 / Российская академия медицинских наук. Москва, 2007. - 31 с.

8. Гарин A.M. Злокачественные опухоли пищеварительной системы. / A.M. Гарин, И.С. Базин/ М: Инфомедиа Паблишерз, 2003. - 264 с.

9. Глуховец Б.И. Патология последа. / Б.И. Глуховец, Н.Г. Глуховец-СПб.: ГРААЛЬ, 2002. 448 с.

10. Гельман В.Я. Медицинская информатика: практикум. / В.Я. Гельман. -СПб.: Питер. 2-е изд. - 2002. - С. 480.

11. Гомазков О.А. Физиологически активные пептиды (справочное руководство) / О.А. Гомазков. Мсоква: ИПГМ, 1995. - 144 с.

12. Гомазков О.А. Система эндотелиновых пептидов: механизмы кардио-васкулярных патологий / О. А. Гомазков // Вопросы мед. химии. 1999. -Т.45 (4). - С. 290-303.

13. Гомазков,О. А. Пептиды в кардиологии: Биохимия. Физиология. Патология. Информация. Анализ/ О. А. Гомазков. Москва: Материк Альфа, 2000. - 143 с.

14. Давыдов М.И. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2000 г./ М.И. Давыдов / Москва: РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2002.-281 с.

15. Данилов Р.К. Общая и медицинская эмбриология. / Р.К. Данилов, Т.Г. Боровая. СПб.:СпецЛит, 2003. - 231 с.

16. Дроздова Г.А. Клеточные механизмы артериальной гипертензии / Г.А. Дроздова // Патологическая физиология. 2000. - №3. - С.26-31.

17. Калашникова Е.П. Плацента человека и ее роль в норме и при патологии /Е.П. Калашникова// Архив патологии.-1985.-Т.47.-Ш.-С.З-11.

18. Кудряшева О.В. Эндотелиальный гемостаз: система тромбомодулина и её роль в развитии атеросклероза и его осложнений / О.В. Кудряшева, Д.А. Затейщиков, Б.А. Сидоренко // Кардиология. 2000. - 40. - №8. - С.65-70.

19. Кетлинский С.А. Цитокины и их антагонисты: теория и практика/ С.А. Кетлинский, A.M. Ищенко // Медицинская иммунология. 1999. - Том1, № 3-4.-С. 16-18.

20. Климов П.К. Эндогенные пептиды как единая система регуляторных веществ / П.К. Климов, Г.М. Барашков // Физиол. Журн. Им. Сеченова. -1993. -Т.79, №3. С. 80-87.

21. Коган Е.А. Межклеточные взаимодействия при опухолевом росте // М.А. Пальцев, А.И. Иванов. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995.-С. 127-189.

22. Коган Е.А. Морфологическая характеристика, морфогенез и гистогенез опухолей. Патологическая анатомия: Курс лекций / Под ред. В.В. Серова, М.А. Пальцева. М.: Медицина, 1998. - С. 247-262.

23. Манухина Е.Б. Эндотелиальная дисфункция и артериальная гипертензия: механизмы и пути коррекции / Е.Б. Манухина, И. Ю. Малышев, В.И. Бувальцев // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2003. - №4. - С. 26-30.

24. Никитенко Л.Л. Роль адреномедуллина в биологии эндотелиальной клетки человека / Л.Л. Никитенко, С.И. Колесников. Москва: «Гэотар-Медиа», 2007. - 160 с.

25. Парфенова Е.В. Перспективы генной терапии сердечно-сосудистых заболеваний / Е.В. Парфенова, Ткачук В.А.// Вопросы мед. химии. 2000. -Т. 19, вып. 3. - С. 36-40.

26. Петрищев Н.Н. Новые способы защиты миокарда от ишемического повреждения: молекулярные механизмы и перспективы клинического применения. Часть II. / Н.Н. Петрищев, Е.В. Шляхто, М.М. Галагудза и др.// Кардиология СНГ. Том 5, №2. - 2007. - С. 124-131.

27. Протопопова Н.В. Роль изменений метаболизма и гемодинамики в патогенезе осложнений беременности и артериальной гипертензии: Дис. . докт. мед. Наук. Иркутск. - 1999. - 398 с.

28. Репин B.C. Стволовые клетки и старение: идеи и реальности / В.С.Репин // Клин. Геронтология. 2001. - №12. - С. 29-36.

29. Репродуктивная эндокринология. // Под ред. С.С.К. Йена, Р.Б. Джаффе. -в 2-х томах. М.: Медицина, 1998. - 704 с.

30. Розен В.Б. Основы эндокринологии / В.Б. Розен. Москва: Изд-во МГУ, 1994-384 с.

31. Романов Ю.А. Морфологические и функциональные особенности ответа эндотелия человека на гипертермию in vitro / Ю.А. Романов, Н.В. Кабаева, Л.Б. Буравкова // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2001. - Т. 35, №5. - С. 40-46.

32. Сергиенко В.И. Математическая статистика в клинических исследованиях / В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева. М.: «Гэотар-Медицина». -2000. - 304 с.

33. Тумилович Л.Г. Неоперативная гинекология: Руководство для врачей / Л.Г. Тумилович, В.И. Бодяжина. М.: Медицина. - 1990. - 223 с.

34. Ткачук В.А. Введение в молекулярную эндокринологию / В.А. Ткачук. -Москва: Изд-во МГУ, 1983 256 с.

35. Ткачук В.А. Эстафетная передача регуляторного сигнала / В.А. Ткачук // Соросовский Образовательный Журнал. 2000. - 11. - С. 13-16.

36. Ткачук В.А. Молекулярные механизмы нейроэндокринной регуляции / В.А. Ткачук // Соросовский Образовательный Журнал. 2000. - 6. - С. 16-20.

37. Ткачук В.А. Фундаментальные исследования и достижения в кардиологии / В.А. Ткачук, А.В. Воротников, З.В. Гришина, В.В. Степанова. -Москва: 2002. С.31-39.

38. Хмельницкий O.K. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний./ O.K. Хмельницкий -СПб.:Сотис, 1994.- 478 с.

39. Чазов Е.И. Перспективы применения пептидов в медицине / Е.И. Чазов // Перспективы биоорганической химии и молекулярной биологии; Под ред. Ю.А. Овчинникова. М., 1986. - С. 116-119.

40. Шляхто Е. В. Клеточные и молекулярно-генетические аспекты эндотелиальной дисфункции / Е.В. Шляхто, О.А. Беркович, О.М. Моисеева // Вестник российской академии наук. 2004. - №10. - Р. 50-53.

41. Aiyar N. A cDNA encoding the calcitonin gene-related peptide type 1 receptor / N. Aiyar, K. Rand, N.A. Elshourbagy, Z. Zeng, J.E. Adamou, DJ. Bergsma, Y.Li //J. Biol. Chem.- 1996.- 271(19). P. 11325-11329.

42. Chromosomal conformation footprints in diagnostics of aberrant gene expression: Patent No.0603251.0 / A. Akoulitchev, A. Ramadass, L.L. Nikitenko (United Kingdom) Submitted 17.02.2005; Published 17.02.2006.

43. Alitalo K. Lymphangiogenesis in development and human disease / K. Alitalo, T. Tammela, T. Petrova // Nature. 2005. - 438. P. 946-953.

44. Auerbach R. Expression of organ-specific antigens on capillary endothelial cells / R. Auerbach, L. Alby, L.W. Morrissey, M. Tu, J. Joseph // Microvasc. Res. 1985.-29(3). P. 401-411.

45. Bais С. Kaposi's sarcoma associated herpesvirus G protein-coupled receptor immortalizes human endothelial cells by activation of the VEGF receptor-2/KDR. / C. Bais, G.A. Van, P. Eroles et al. // Cancer Cell. 2003. -3. -P. 131-43.

46. Barleon B. Differential expression of the two VEGF receptors fit and KDR in placenta and vascular endothelial cells / B. Barleon, S. Hauser, C. Schollmann et al. // J. Cell Biochem. 1994. - 54. P. 56-66.

47. Bicknell R. Endothelial cell culture (Handbooks in Practical Animal Cell Biology) / R. Bicknell R. Cambridge University Press, 1994. 148 p.

48. Boshoff C. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus infects endothelial and spindle cells / C. Boshoff, T.F. Schulz, M.M. Kennedy, A.K. Graham, G. Fisher, A. Thomas, J.O. McGee, R.A. Weiss, J.J. O'Leary // Nat. Med. 1995. - 1(12). P. 1274-1278.

49. Brain S.D. Vascular actions of calcitonin gene-related peptide and adrenomedullin / S.D. Brain and A.D. Grant // Physiol. Rev. 2004. - 84(3). P. 903-934.

50. Bukh A. The multimeric structure of plasma FVIII:Rag studied by electroelution and immunoperoxidase detection / A.Bukh, J. Ingerslev, S. Stenbjerg et al. // Thromb. Res. 1986. - 43. P. 579-584.

51. Campaign C.R. CRC Cancer Statistics Mortality / C.R. Campaign. United Kingdom: CRC, 2001. - 112 p.

52. Cancer: Principles and Practice of Oncology, 6th edition / Lippincott Williams & Wilkins, 2001.-276 p.

53. Carmeliet P. Molecular analysis of blood vessel formation and disease. / P. Carmeliet, D. Collen // Am. J. Physiol. 1997. - 273. - P. 2091-2104.

54. Carmeliet P. Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis / P. Carmeliet // Nat. Med. 2000. - 6(4). P. 389-395.

55. Carmeliet P. Angiogenesis in cancer and other diseases/ P. Carmeliet, R.K. Jain // Nature.- 2000. 407. - P. 249-257.

56. Carmeliet P. Angiogenesis in health and disease / P. Carmeliet // Nature Med. 2003. - 9(6). - P. 653-660.

57. Carmeliet P. Angiogenesis in life, disease and medicine / P. Carmeliet // Nature. 2005. - 438(7070). - P. 932-936.

58. Caron K.M. Extreme hydrops fetalis and cardiovascular abnormalities in mice lacking a functional adrenomedullin gene / K.M. Caron, O. Smithies // Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 2001. - 98(2). - P. 615-619.

59. Charalambous C. Functional and phenotypic differences between glioblastoma multiforme-derived and normal human brain endothelial cells / C. Charalambous, F.M. Hofman, T.C. Chen // J. Neurosurg. 2005. - 102(4). - P. 699-705.

60. Chenchik A. Full length cDNA cloning and determination of mRNA 5' and 3' ends by amplification of adaptor-ligated cDNA / A. Chenchik, L. Diachenko, F.F. Moqadam, V. Tarabykin, S.A. Lukianov, P.D. Siebert // Biotechniques. 1996. -21.-P. 526-534.

61. Chromosomal conformation footprints in diagnostics of aberrant gene expression: Patent No.0603251.0 / A. Akoulitchev, A. Ramadass, L.L. Nikitenko (United Kingdom) Submitted 17.02.2005; Published 17.02.2006.

62. Chomczynski P. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. / P. Chomczynski, N. Sacchi. // Anal. Biochem. 1987. - 162. - P. 156-159.

63. Cook P.R. Characterization of nuclear structures containing superhelical DNA / P.R. Cook, I.A. Brazell, E. Jost // Journal Cell Sci. 1976. - 22(2). - P. 303-324.

64. Conway E.M. The diversity of endothelial cells: a challenge for therapeutic angiogenesis / E.M. Conway, and P. Carmeliet // Genome Biol. 2004. - 5(2). P. 207.

65. Dawson C. ABC of Urology: urological Malignancy—III: renal and testicular carcinoma / C. Dawson, and H. Whitfield, // Br. Med. J. 1996. - 312. P. 11461148.

66. Dekker J. Capturing chromosome conformation / J. Dekker, K. Rippe, M. Dekker, and N. Kleckner // Science. 2002. - 295(5558). - P. 1306-11.

67. Dennis Т. hCGRP8-37, a calcitonin gene-related peptide antagonist revealing calcitonin gene-related peptide receptor heterogeneity in brain and periphery. / T. Dennis, A. Fournier, A. Cadieux et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1990. - 254. -P. 123-128.

68. Di Iorio R. Adrenomedullin, a new vasoactive peptide, is increased in preeclampsia / R. Di Iorio, E. Marinoni, C. Letizia, P. Alo, B. Villaccio, E.V. Cosmi // Hypertension. 1998. - 32(4). - P. 758-63.

69. Di Iorio R. Adrenomedullin in perinatal medicine / R. Di Iorio, E. Marinoni, C. Letizia, E.V. Cosmi // Regul Pept.- 2003. 112(1-3). - P. 103-113.

70. Doods H. Pharmacological profile of BIBN4096BS, the first selective small molecule CGRP antagonist. / H. Doods et al.,// Br. J. Pharmacol. 2000. - 129. -P. 420-423.

71. Evans B.N. CGRP-RCP, a novel protein required for signal transduction at calcitonin gene-related peptide and adrenomedullin receptors. / B.N. Evans et al. // J. Biol. Chem.- 2000. 275. - P. 31438-31443.

72. Falini B. PG-M1: a new monoclonal antibody directed against a fixative-resistant epitope on the macrophage-restricted form of the CD68 molecule. / B. Falini, L. Flenghi, S. Pileri et al. // Am. J. Pathol. 1993. - 142. - P. 1359-1372.

73. Ferrara N. Angiogenesis as a therapeutic target / N. Ferrara, R.S. Kerbel // Nature. 2005. - 438. - P. 967-974.

74. Fluhmann B. A human orphan calcitonin receptor-like structure / B. Fluhmann, R. Muff, W. Hunziker, J.A. Fischer, and W. Born // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - 206(1). - P. 341-347

75. Flake G.P. Etioligy and pathogenesis of uterine leiomyomas: a review / G.P. Flake, J. Andersen, D. Dixon // Environmental Health Perspectives. 2002. -111(8).-P. 1037-1054.

76. Fliss P. Calcitonin receptor-like receptor is upregulated in Kaposi's sarcoma/ P. Fliss, R. Vart, M. Trotter, C. Boshoff, L.L. Nikitenko. // The 9th International

77. Workshop on Kaposi's Sarcoma Associated Herpesvirus (KSHV) and Related Agents. Hyannis. - USA, 2006. - P. 64.

78. Folkman J. Tumour angiogenesis / Holland J.F. et al. // Cancer Medicine. -Ontario: Decker, 2000. P. 132-152.

79. Fox S.B. Histological quantitation of tumor angiogenesis / S.B. Fox, A.L. Harris // APMIS. 2004. - 112(7-8). - P. 413-430.

80. Fujita Y. Involvement of adrenomedullin induced by hypoxia in angiogenesis in human renal cell carcinoma / H. Mimata, N. Nasu, T. Nomura, Y. Nomura, M. Nakagawa // Int. J. Urol. 2002. - 9(6). - P. 285-95.

81. Gargett C.E. Isolation, characterization and long-term culture of human microvascular endothelial cells. / C.E. Gargett, K. Bucak, P.A.W. Rogers // Hum. Reprod., 2000. - 15. - P. 293-301.

82. Gebb S. On lung endothelial cell heterogeneity / P.A. Godley, and Т.Е. Stinchcombe // Microvasc. Res. 2004. - 68(1). - P. 1-12.

83. Godley P.A. Renal cell carcinoma / P.A. Godley, and Т.Е. Stinchcombe // Curr. Opin. Oncol. 1999. - 11. P. 213-217.

84. Grimwood J. Isolation, characterization and culture of human decidual endothelium / P.A. Godley, and Т.Е. Stinchcombe // Human Reproduction. 1995. -10.-P. 2142-2148.

85. Grisotto M.G. The human herpesvirus 8 chemokine receptor vGPCR triggers autonomous proliferation of endothelial cells. / M.G. Grisotto, A. Garin, A.P. Martin et al. // J. Clin. Invest. 2006. -116. - P. 1264-73.

86. Hagner S. Calcitonin receptor-like receptor: identification and distribution in human peripheral tissues / S. Hagner, U. Stahl, B. Knoblauch, G.P. McGregor, R.E. Lang // Cell Tissue Res. 2002. - 310(1). - P. 41-50.

87. Hague S. In-vivo angiogenesis and progestogens. / S. Hague, I.Z. MacKenzie, R. Bicknell, M.C.P. Rees // Human Reprod. 2002. - 17. - P. 786793.

88. Harris A.L. Hypoxia a key regulatory factor in tumor growth / A.L. Harris // Nat. Rev. Cancer. - 2002. - 2(1). - P. 38-47.

89. Hata T. Decreased circulating adrenomedullin in pre-eclampsia / T. Hata, K. Miyazaki, K. Matsui // Lancet. 1997. - 350(9091). - P. 1600.

90. Hata K. Expression of the adrenomedullin gene in epithelial ovarian cancer / K. Hata, Y. Takebayashi, S. Akiba, R. Fujiwaki, K. Iida, K. Nakayama, S. Nakayama, M. Fukumoto, and K. Miyazaki // Mol. Hum. Reprod. 2000. - 6. - P. 867-872.

91. Hay D.L. Desensitisation of adrenomedullin and CGRP receptors / D.L. Hay, D.R. Poyner, D.M. Smith // Regul. Pept. 2003. - 112(1-3). - P. 139-145.

92. Hay D.L. The pharmacology of CGRP-responsive receptors in cultured and transfected cells / D.L. Hay, A.C. Conner, S.G. Howitt, M.A. Takhshid, J. Simms, K. Mahmoud, D.R. Poyner // Peptides. 2004. - 25(11). - P. 2019-2026.

93. Hay D.L. Pharmacological discrimination of calcitonin receptor: receptor activity-modifying protein complexes / D.L. Hay, G. Christopoulos, A.

94. Christopoulos, D.R. Poyner, P.M. Sexton // Mol. Pharmacol. 2005. - 67(5). - P. 1655-1665.

95. Hewett P.W. Isolation, culture and properties of microvessel endothelium from human breast adipose tissue. / P.W. Hewett, J.C. Murray // Endothelial Cell Culture: R. Bicknell (ed). Cambridge:Cambridge University Press. - 1996. - P. 55-76.

96. Hideshima T. Characterization of signaling cascades triggered by human interleukin-6 versus Kaposi's sarcoma-associated herpes virus-encoded viral interleukin 6. / T. Hideshima, D. Chauhan, G. Teoh et al. // Clin. Cancer Res. -2000.-6.-P. 1180-9.

97. Hinson J.P. Adrenomedullin, a multifunctional regulatory peptide / J.P. Hinson, S. Kapas, and D.M. Smith // Endocr. Rev. -2000, 21. - P. 138-67.

98. Hippenstiel S. Adrenomedullin reduces endothelial hyperpermeability / S. Hippenstiel, M. Witzenrath, B. Schmeck, А. Носке, M. Krisp, M. Krull, J. Seybold, W. Seeger, W. Rascher, H. Schutte, and N. Suttorp // Circ. Res. 2002. -91(7).-P. 618-25.

99. Hurwitz H. Bevacizumab plus irinotecan, fluorouracil, and leucovorin for metastatic colorectal cancer / H. Hurwitz, L. Fehrenbacher, W. Novotny, et al. // New Engl. J Med. 204. - 350(23). - P. 2335-42.

100. Husmann K. Mouse receptor-activity-modifying proteins 1, -2 and -3: amino acid sequence, expression and function. / K. Husmann, P.M. Sexton, J.A. Fischer et al. // Mol. Cell. Endocrinol. 2000. - 162. - P. 35^13.

101. Jackson C.J. Binding of human endothelium to Ulex europaeus I-coated dynabeads: application to the isolation of microvascular endothelium / C.J. Jackson, P.K. Garbett, B. Nissen et al. // J Cell Sci. 1990. - 96. - P. 257-262.

102. Jenner R.G. The molecular pathology of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus. / R.G. Jenner, C. Boshoff // Biochim Biophys Acta. 2002. - 1602. -P. 1-22.

103. Jones N. Rescue of the early vascular defects in Tek/Tie2 null mice reveals an essential survival function. / N. Jones, D. Voskas, Z. Master, R. Sarao, J. Jones, D.J. Dumont. // EMBO Rep. 2001. - 2. - P. 438-45.

104. Kamitani S. The RAMP2/CRLR complex is a functional adrenomedullin receptor in human endothelial and vascular smooth muscle cells. / S. Kamitani, M. Asakawa, Y. Shimekake, et al. // FEBS Letts. 1999. - 48. - P. 111-114.

105. Karkkainen M.J. Lymphatic endothelial regulation, lymphoedema, and lymph node metastasis. / M.J. Karkkainen, K. Alitalo // Semin. Cell Dev. Biol. 2002. -13.-P. 9-18.

106. Kato H. Adrenomedullin as an autocrine/paracrine apoptosis survival factor for rat endothelial cells / H. Kato, M. Shichiri, F. Marumo, and Y. Hirata // Endocrinology. 1997. - 138(6). - P. 2615-2620.

107. Kato J. Plasma adrenomedullin concentration in patients with heart failure / H. Kato, M. Shichiri, F. Marumo, Y. Hirata // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1996. -81(1).-P. 180-183.

108. Kato J. Adrenomedullin: a protective factor for blood vessels / J. Kato, T. Tsuruda, T. Kita, K. Kitamura, T. Eto // Arterioscler Thromb. Vase. Biol. 2005. - 25(12). - P. 2480-2487.

109. Kerbel R. Clinical translation of angiogenesis inhibitors / R. Kerbel, J. Folkman // Nature Rev. Cancer. 2002. - 2(10). - P. 727-739.

110. Kim W. Angiogenic role of adrenomedullin through activation of Akt, mitogen-activated protein kinase, and focal adhesion kinase in endothelial cells / W. Kim, S.O. Moon, M.J. Sung, S.H. Kim, S. Lee, J.N. So, S.K. Park // FASEB J. -2003.-17.-P. 1937-9.

111. Kitamura K. Adrenomedullin: a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma / K. Kitamura, K. Kangawa, M. Kawamoto, Y. Ichiki, S. Nakamura, H. Matsuo, T. Eto // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993a. -192(2).-P. 553-560.

112. Kobayashi K. Immunoreactive adrenomedullin (AM) concentration in maternal plasma during human pregnancy and AM expression in placenta. / K. Kobayashi, T. Kubota, T. Aso et al. // Eur. J. Endocrinol. 2000. - 142. - P. 683687.

113. Kuwasako K. Adrenomedullin receptors: pharmacological features and possible pathophysiological roles / K. Kuwasako, Y.N. Cao, Y. Nagoshi, K. Kitamura, and T. Eto // Peptides. 2004. - 25(11). - P. 2003-12.

114. Kwek K.Y. U1 snRNA associates with TFIIH and regulates transcriptional initiation / K.Y. Kwek, S. Murphy, A. Furger, B. Thomas, W. O'Gorman, H. Kimura, NJ. Proudfoot, A. Akoulitchev // Nat. Struct. Biol. 2002. - 9(11). - P. 800-5.

115. LeCouter J. Endocrine gland-derived VEGF and the emerging hypothesis of organ-specific regulation of angiogenesis / J. LeCouter, R. Lin, N. Ferrara // Nat. Med.-2002.-8.-P. 913-17.

116. Li M. Reduced maternal expression of adrenomedullin disrupts fertility, placentation, and fetal growth in mice / M. Li, D. Yee, T.R. Magnuson, O. Smithies, K.M. Caron // J. Clin. Invest. 2006. - 116(10). P. 2653-62.

117. Marinoni E. Immunoreactive adrenomedullin in human fetoplacental tissues. / E. Marinoni, R. Dilorio, C. Letizia, et al. // Am. J. Obstet. Gynaecol. 1998. -179.-P. 784-787.

118. McLatchie L.M. RAMPs regulate the transport and ligand specificity of the calcitonin-receptor-like receptor / L.M. McLatchie, N.J. Fraser, M.J. Main, A. Wise, J. Brown, N. Thompson, R. Solari, M.G. Lee, S.M. Foord // Nature. 1998. -393.-P. 333-9.

119. Meduri G. Expression of vascular endothelial growth factor receptors in the human endometrium: modulation during the menstrual cycle. / G. Meduri, P. Bausero, M. Perrot-Applant. // M. Biol. Reprod. 2000. - 62. - P. 439-447.

120. Michelsen J. Tissue expression and plasma levels of adrenomedullin in renal cancer patients / J. Michelsen, H. Thiesson, S. Walter, P.D. Ottosen, O. Skott, and B.L. Jensen // Clin. Sci. (Lond). 2006. - 111(1). - P. 61-70.

121. Michishita M. Expression of adrenomedullin in the endometrium of the human uterus. / M. Michishita, T. Minegishi, K. Abe et al. // Obstet. Gynecol. -1999.-93.-P. 66-70.

122. Miller M.J. Adrenomedullin expression in human tumour cell lines. Its potential role as an autocrine growth factor. / M.J. Miller, A. Martinez, E.J. Unsworth et al. // J. Biol. Chem. 2000. - 271. - P. 23345-23351.

123. Minamino N. Adrenomedullin: a new peptidergic regulator of the vascular function. / N. Minamino et al. // Clin. Hemorheol. Microcirc. 2000. - 23. - P. 95-102.

124. Minegishi T. Adrenomedullin and atrial natriuretic peptide concentrations in normal pregnancy and pre-eclampsia. / T. Minegishi, M. Nakamura, K. Abe et al. // Mol. Hum. Reprod. 1999. - 5. - P. 767-770.

125. Moncada S. Nitric oxide and the vascular endothelium / S. Moncada, and E.A. Higgs // In handbook Expt Pharm. 2006. - (176 Pt 1):213-54.

126. Moriyama Т. Expression of adrenomedullin by human granulosa lutein cells and its effect on progesterone production. / T. Moriyama, T. Otani, T. Maruo // Eur. J. Endocrinol. 2000. - 142. - P. 671-676.

127. Muff R. Receptor activity modifying proteins regulate the activity of a calcitonin gene-related peptide receptor in rabbit aortic endothelial cells. / R. Muff, K. Leuthauser, N. Buhlmann et al. // FEBS Lett. 1998. - 441. - P. 366-368.

128. Murakami S. Physiological significance and therapeutic potential of adrenomedullin in pulmonary hypertension / S. Murakami, H. Kimura, K. Kangawa, N. Nagaya // Cardiovasc.Hematol. Disord. Drug Targets. 2006. - 6(2). - P. 125-32.

129. Nagae T. Rat receptor-activity-modifying proteins (RAMPs) for adrenomedullin/CGRP receptor: cloning and upregulation in obstructive nephropathy. / T. Nagae, M. Mukoyama, A. Sugawara et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - 270. - P. 89-93.

130. Naiem M. The value of immunohystologycal screening in the production of monoclonal antibodies / M. Naiem, J. Gerdes, Z. Abdulaziz et al. // J. Immunol. Methodol., 1982. - 50. - P. 145-160.

131. Nakayama M. Induction of adrenomedullin by hypoxia in cultured human coronary artery endothelial cells / M. Nakayama, K. Takahashi, O. Murakami, K. Shirato, S. Shibahara // Peptides. 1999. - 20(6). - P. 769-72.

132. Nakazawa I. Human calcitonin receptor-like receptor for adrenomedullin: genomic structure, eight single-nucleotide polymorphisms and haplotype analysis. /1. Nakazawa et al. // J. Hum. Genet. 2001. - 46. - P. 132-136.

133. Naldini L. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. / L. Naldini, U. Blomer, P. Gallay et al. // Science. 1996. -272. - P. 263-7.

134. Nikitenko L.L. Adrenomedullin is an autocrine regulator of endothelial growth in human endometrium / L.L. Nikitenko, I.Z. MacKenzie, M.C.P. Rees, R. Bicknell // Molecular Human Reproduction. 2000 (a). - Vol. 6 (9). - P. 811 -819.

135. Nikitenko L.L. Isolation, culture and growth factor responsiveness of human endometrial endothelium / L.L. Nikitenko, I.Z. MacKenzie, M.C.P. Rees, R. Bicknell // Annual ICRF Colloquium. Warwick. - United Kingdom, 2000 (6). -P. 54.

136. Nikitenko L.L. Adrenomedullin/CGRP receptors in the human uterus / L.L. Nikitenko, I.Z. MacKenzie, M.C.P. Rees, R. Bicknell II Xlth International Congress of Histochemistry and Cytochemistry. York. - United Kingdom, 2000 (в). - P. 234.

137. Nikitenko L.L. Localisation by in situ hybridisation of S100A4 (p9Ka) mRNA in primary human breast tumour specimens / L.L. Nikitenko, B.H. Lloyd, Ph.S. Rudland, R. Barraclough // International Journal of Cancer. 2000 (r). - Vol. 86. -P. 219-228.

138. Nikitenko L.L. Adrenomedullin is an autocrine regulator of endothelial growth in human endometrium / L.L. Nikitenko, I.Z. MacKenzie, M.C.P. Rees, R. Bicknell // Introduction to Molecular and Cellular Research. San-Diego. - USA, 2000. - P. 97.

139. Nikitenko L.L. Differential and cell-specific expression of calcitonin-receptor-like receptor and receptor activity modifying proteins in the human uterus / L.L.

140. Nikitenko, N.S. Brown, D.M. Smith, I. MacKenzie, R. Bicknell, M.C.P. Rees // Molecular Human Reproduction. 2001. - Vol. 7(7). - P. 655-664.

141. Nikitenko L.L. Adrenomedullin and the Microvasculature / L.L. Nikitenko, D.M. Smith, S. Hague, C.R. Wilson, R. Bicknell, M.C.P. Rees // Trends in Pharmacological Sciences. 2002 (a). - Vol. 23(3). - P. 101-103.

142. Nikitenko L.L. Transcriptional regulation of human CRLR in microvascular endothelial cells/ Nikitenko LL, Smith DM, Bicknell R, Rees MCP. // 676th Biochemical Society Meeting, Heriot-Watt University. Edinburgh. - United Kingdom, 2002 (a).-P. 81.

143. Transcriptional Regulation of Therapeutically Useful Gene: International Patent GOIN 33/50 / L.L. Nikitenko, D.M. Smith, R. Bicknell, M.C.P. Rees (United Kingdom) Submitted 17.11.2002; Published 17.11.2003.

144. Nikitenko L.L. Molecular mechanisms of the adaptive response of endothelial cells to hypoxia/ Nikitenko L.L. // 6th International Engelhardt Conference on

145. Molecular Biology. Москва и Санкт Петербург. - Российская Федерация, 2003 (б).-Р. 17.

146. Nikitenko L.L. Molecular mechanisms of the adaptive response of endothelial cells to hypoxia/ Nikitenko L.L. // 6th International Engelhardt Conference on Molecular Biology. Москва и Санкт Петербург. - Российская Федерация, 2003 (г).-Р. 17.

147. Nikitenko L.L. Endothelial Cells and Cancer/ L.L. Nikitenko, C. Boshoff // Handbook of Experimental Pharmacology, The Vascular Endothelium. Berlin, Heidelberg, Springer-Verlag -2006. - Vol. 176. - P. 637-664.

148. Nikitenko L.L. Adrenomedullin and tumour angiogenesis/ L.L. Nikitenko, S. Fox, S. Kehoe, M.C.P. Rees, R. Bicknell. // British Journal of Cancer. 2006(a). -Vol. 94.-P. 1-7.

149. Nishimatsu H. Adrenomedullin induces endothelium-dependent vasorelaxation via the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt-dependent pathway in rat aorta. / H. Nishimatsu et al. // Circ. Res. 2001. - 89. - P. 63-70.

150. Njuki F. A new calcitonin-receptor-like sequence in rat pulmonary blood vessels / F. Njuki, C.G. Nicholl, A. Howard, J.C. Мак, P.J. Barnes, S.I. Girgis, S. Legon// Clin Sci (Colch). 1993. - 85(4). - P. 385-8.

151. Oehler M.K. Adrenomedullin promotes formation of xenografted endometrial tumors by stimulation of autocrine growth and angiogenesis / M.K. Oehler, S. Hague, M.C. Rees, R. Bicknell // Oncogene. 2002. - 21. - P. 2815-21.

152. Osborne J. KSHV-encoded viral IL-6 activates multiple human IL-6 signaling pathways. / J. Osborne, P.S. Moore, Y. Chang // Hum. Immunol. 1999. -60. - P. 921-7.190.0sborn M. Monoclonal antibodies specific for vimentin / M. Osborn, E.

153. Debus, K. Weber // Eur. J. Cell. Biol. 1984. - 34. - P. 137-143.191.0uafik L. Neutralization of adrenomedullin inhibits the growth of humanglioblastoma cell lines in vitro and suppresses tumor xenograft growth in vivo / L.

154. Ouafik, S. Sauze, F. Boudouresque, et al. II Am. J. Pathol. 2002. - 160(4). - P.1279-1292.

155. Parameswaran N. RAMPs: The past, present and future / N. Parameswaran, and W.S. Spielman // Trends Biochem Sci. 2006. - 31(11). - P. 631-638.

156. Parums D.V. JC70: a new monoclonal antibody that detects vascular endothelium associated antigen on routinely processed tissue sections / D.V. Parums, J.L.Cordell, K. Micklem et al. // J. Clin. Pathol. 1990. - 43. - P. 752757.

157. Pavel M.E. Adrenomedullin is a novel marker of tumor progression in neuroendocrine carcinomas / M.E. Pavel, S. Hoppe, T. Papadopoulos, V. binder, B. Mohr, E.G. Hahn, T. Lohmann, D. Schuppan // Horm. Metab. Res. 2006. -38(2).-P. 112-118.

158. Peek M.J. A new reliable method of culturing and measuring human decidual capillary endothelial cells. / M.J. Peek, I.S. Fraser, E. Johannison et al. // Exp. Toxicol. Pathol. 1994. - 46. - P. 149-154.

159. Pio R. Complement factor H is a serum-binding protein for adrenomedullin, and the resulting complex modulates the bioactivities of both partners. / R. Pio et al. // J. Biol. Chem. 2001. - 276. - P. 12292-12300.

160. Prestridge D.S. Computer software for eukaryotic promoter analysis / D.S. Prestridge // Methods Mol. Biol. 2000. - 130. - P. 265-295.

161. Rask-Madsen C. Mechanisms of disease: endothelial dysfunction in insulin resistance and diabetes / C. Rask-Madsen, G.L. King // Nat. Clin. Pract. Endocrinol. Metab.- 2007. 3(1). - P. 45-56.

162. Rees M.C.P. Endometrial angiogenesis / M.C.P. Rees, L.L. Nikitenko, S. Hague, R. Bicknell // Cell and Molecular Biology of Endometrium in Health and Disease. -Soeshi: Soeshi Publishing, 2002. P. 145-155.

163. Rees M.C.P. Angiogenesis in the endometrium / M.C.P. Rees, R. Bicknell // Angiogenesis. 1998. - 2(1). - P. 29-35.

164. Roberts J.M. Pre-eclampsia: more than a pregnancy-induced hypertension / J.M. Roberts, C.W. Redman // Lancet. 1993. - 341(8858). - P. 1447-1451.

165. Rosenfeld M.G. Production of a novel neuropeptide encoded by the calcitonin gene via tissue-specific RNA processing. / M.G. Rosenfeld, J.J. Mermod, S.G. Amara et al. // Nature. 1983. - 304. - P. 129-135.

166. Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd edn). / J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis. // Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory press, 1989.

167. Sata M. Adrenomedullin and nitric oxide inhibit human endothelial cell apoptosis via a cyclic GMP-independent mechanism. / M. Sata et al. // Hypertension. 2000. - 36. - P. 83-88.

168. Sexton P.M. Receptor activity modifying proteins / P.M. Sexton, A. Albiston, M. Morfis, M. Tilakaratne // Cellular Signalling. 2001. - 13. - P. 73-83.

169. Shichiri M. Induction of max by adrenomedullin and calcitonin gene-related peptide antagonizes endothelial apoptosis / M. Shichiri, H. Kato, M. Doi, F. Marumo, Y. Hirata // Mol. Endocrinol. 1999. - 13(8). - P. 1353-63.

170. Shimosawa T. Adrenomedullin, an Endogenous Peptide, Counteracts Cardiovascular Damage / T. Shimosawa, Y. Shibagaki, K. Ishibashi, K. Kitamura, K. Kangawa, S. Kato, K. Ando, T. Fujita // Circulation. 2002. -105. - P. 106-111.

171. St Croix В. Genes expressed in human tumor endothelium / B. St Croix, C. Rago, V. Velculescu, G. Traverso, K.E. Romans, E. Montgomery, A. Lai, GJ. Riggins, C. Lengauer, B. Vogelstein, K.W. Kinzler // Science. 2000. - 289(5482). -P. 1197-202.

172. Tait C.R. Angiopoietins in tumours: the angiogenic switch. / C.RTait, P.F. Jones // J. Pathol. 2004. - 204. - P. 1-10.

173. Takahashi K.Adrenomedullin from a phaeochromocytoma to the eye: implications of the adrenomedullin research for endocrinology in the 21st century. / K. Takahashi. // Tohoku J. Exp. Med. 2001. - 193. - P. 79-114.

174. The International Human Genome Mapping Consortium. A physical map of the human genome / The International Human Genome Mapping Consortium // Nature. 2001. - 409. - P. 934-941.

175. The Celera Genomics Sequencing Team. The sequence of the human genome / The Celera Genomics Sequencing Team. // Science. P. 1304-1351.

176. Ucar B. Plasma adrenomedullin levels in patients with polycystic ovary syndrome / B. Ucar, V. Noyan, O. Caglayan, A. Yucel, N. Sagsoz // Fertil. Steril. -2006. 86(4). - P. 942-948.

177. Vart R. Viral CPCR and FLIP upregulate angiopoietin-2 expression in lymphatic endothelium via МАРК pathway/ R. Vart, L.L. Nikitenko, D. Lagos, M. Trotter, C. Boshoff. // The 9th International Workshop on Kaposi's Sarcoma

178. Associated Herpesvirus (KSHV) and Related Agents. Cape Cod. - USA, 2006. -P. 53.

179. Weber C. The role of junctional adhesion molecules in vascular inflammation / C. Weber, L. Fraemohs, E. Dejana // Nat. Rev. Immunol. 2007. - 7(6). - P. 46777.

180. Wilson C.R. Expression of adrenomedullin and its receptors in placenta and decidua / C.R. Wilson, L.L. Nikitenko, D.M. Smith, I.L. Sargent, M.C.P. Rees // 8th IFPA Meeting. Melbourne. - Australia, 2002. - P. 121.

181. Wilson C.R. Adrenomedullin: multiple functions in human pregnancy/ C.R. Wilson, L.L. Nikitenko, I.L. Sargent, M.C.P. Rees // Angiogenesis. 2004. - Vol. 7(3).-P. 203-12.

182. Yancopoulos G.D. Vascular-specific growth factors and blood vessel formation. / G.D. Yancopoulos, S. Davis, N.W. Gale, J.S. Rudge, S.J. Wiegand, J. Holash // Nature. 2000. - 407. - 242-8.

183. Yurugi-Kobayashi T. Adrenomedullin/cyclic AMP pathway induces Notch activation and differentiation of arterial endothelial cells from vascular progenitors

184. BJ. Wilson, M.S. Watson, GJ. Prescott, S. Sunderland, D.M. Campbell, P. Hannaford, W.C. Smith // Atheroscler. Thromb. Vase. Biol. 2006. - 26(9). - P. 1977-84.

185. Zhang J.J. Human adrenomedullin gene delivery protects against cardiac hypertrophy, fibrosis and renal damage in hypertensive dahl salt-sensitive rats. / J.J. Zhang et al. // Hum. Gene Ther. 2000. - 11. - P. 1817-1827.

186. Zhang X. cAMP signal transduction cascade, a novel pathway for the regulation of endothelial nitric oxide production in coronary blood vessels / M. Zuker // Atheroscler. Thromb. Vase. Biol.- 2001. 21(5). - P. 797-803.

187. Zudaire E Adrenomedullin and cancer / Y. Zhao, S. Hague, S. Manek, L. Zhang, R. Bicknell, M.C.P. Rees // Regul. Pept. 2003. - 112. - P. 175-83.

188. Zuker M. Mfold web server for nucleic acid folding and hybridization prediction / M. Zuker // Nucleic Acids Res. 2003. - 31 (13). - P. 3406-15.