Реакция усиленной хемилюминесценции, катализируемая анионными пероксидазами растений, и ее применение в иммуноферментном анализе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат химических наук Вдовенко, Марина Михайловна

• Вдовенко, Марина Михайловна
• кандидат химических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат химических наук Вдовенко, Марина Михайловна

I. ВВЕДЕНИЕ.

П. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Иммуноферментный метод анализа.

2.1.1. Классификация методов ИФА.

2.1.2. Аналитические характеристики иммуноанализа.

2.1.3. Ферменты, используемые в ИФА в качестве меток.

2.2 Пероксидазы.

2.2.1. Классификация и общая характеристика пероксидаз.

2.2.2. Структура пероксидаз.

2.2.3. Реакционный цикл пероксидаз.

2.2.4. Субстратная специфичность пероксидаз.

2.2.5. Методы регистрации ферментативной активности.

2.2.5.1. Реакция усиленной хемилюминесценции.

2.2.5.1.1. Механизм реакции усиленной хемилюминесценции.

2.2.5.1.2. Инактивация пероксидазы пероксидом водорода в ходе реакции хемилюминесцентного окисления люминола.

2.2.5.1.3. Анионные пероксидазы в реакции усиленной хемилюминесценции.

Ш. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Материалы исследований.

3.2. Методы исследований.

3.2.1. Колориметрическое определение активности пероксидазы.

3.2.2. Выделение пероксидазы батата.

3.2.3. Соокисление люминола пероксидом водорода в присутствии усилителей, катализируемое пероксндазой, с хемилюминесцентной детекцией.

3.2.4. Соокисление люминола, ФТПС и МП пероксидом водорода, катализируемое ПС, с хемилюминесцентной детекцией.

3.2.5. Изучение окисления производных фенотиазина.

3.2.6. Синтез коньюгатов пероксидаз сои и хрена с антителами кролика против тиреоглобулина человека.

3.2.7. Синтез коныогата охратоксина А с пероксидазой сои.

3.2.8. Синтез коньюгата пероксидазы сои с 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты.

3.2.9. Пробоподготовка бобов сои для проведения ИФА для определения охратоксина А

3.2.10. Пробоподготовка реальных образцов для проведения ИФА для определения 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты.

3.2.11. Определение тиреоглобулина человека с помощью сэндвич формата ИФА с хемилюминесцентной и спектрофотометрической детекциями.

3.2.12. Определение охратоксина А с помощью конкурентного формата ИФА с хемилюминесцентной и спектрофотометрической детекциями.

3.2.13. Определение 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты с помощью конкурентного формата ИФА с хемилюминесцентной детекцией.

3.2.14. Колориметрическая детекция пероксидазной активности коньюгата антител кролика к тиреоглобулину человека с пероксидазой хрена.

3.2.15. Колориметрическая детекция пероксидазной активности коньюгата охратоксина А с пероксидазой хрена.

3.2.16. Хемилюминесцентная детекция пероксидазной активности коньюгатов.

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. 3-(10'-фенотиазинил)-пропан-1-сулъфанат натрия - усилитель хемилюминесцентного сигнала, продуцируемого анионной пероксидазой сои.

4.1.1. Оптимизация каталитического соокисления люминола и ФТПС пероксидазой сои в реакции усиленной хемилюминесценции.

4.2. ФТПС как усилитель хемилюминесценции, катализируемой пероксидазой батата.

4.2.1. Применение ФТПС в реакции усиленной хемилюминесценции, катализируемой пероксидазой батата.

4.2.1.1. Выделение пероксидазы батата.

4.2.1.2. Оптимизация каталитического соокисления люминола и ФТПС пероксидазой батата в реакции усиленной хемилюминесценции.

4.3. Сравнение производных фенотиазина как усилителей пероксидаза-зависимой хемилюминесценции.

4.4. Вторичное усиление пероксидаза-зависимой хемилюминесценции.

4.5. Применение ПС-зависимой РУХв ИФА.

4.5.1. Применение детектирующей системы ПС/ФТПС/МП в сэндвич формате

4.5.1.1. Разработка сэндвич формата ИФА с хемилюминесцентной детекцией для определения тиреоглобулина человека.

4.5.1.2. Сравнение аналитических параметров ХЛ-ИФА с применением ПС/ФТПС/МП иКОЛ-ИФА.

4.5.1.3. Сравнение аналитических параметров XJI-ИФА с применением ПС/ФТПС/МП и ПХ/4-йодофенол.

4.5.1.4. Определение тиреоглобулина в сыворотке крови человека с помощью ХЛ-ИФ A-ПС/ФТПС/МП.

4.5.2. Применение детектирующей системы ПС/ФТПС/МП в конкурентном формате ХЛ-ИФ А.

4.5.2.1. Применение детектирующей системы ПС/ФТПС/МП в конкурентном формате ХЛ-ИФА для определения охратоксина А.

4.5.2.1.1. Оптимизация условий проведения ХЛ-ИФА-ПС/ФТПС/МП для определения OTA.

4.5.2.1.1.1. Выбор наиболее благоприятных концентраций анти-ОТА-мАТ и конъюгата ОТА-11С при использовании ХЛ-ИФ А-ПС/ФТПС/МП для определения OTA.

4.5.2.1.1.2. Выбор блокирующего раствора.

4.5.2.1.2. Сравнение аналитических параметров КОЛ-ИФА и.ХЛ-ИФА для определения OTA.

4.5.2.1.3. Эффект матрикса образцов экстрактов бобов сои.

4.5.2.2. Применение детектирующей системы ПС/ФТПС/МП в конкурентном формате ХЛ-ИФА для определения 2,4 дихлорфеноксиуксусной кислоты.

4.5.2.2.1. Оптимизация условий проведения ХЛ-ИФ А-ПС/ФТПС/МП для определения 2,4-Д.

4.5.2.2.1.1. Выбор наиболее благоприятных концентраций анти-2,4-Д-мАТ и конъюгата 2,4-Д-ПС в ХЛ-ИФ А-ПС/ФТПС/МП для определения 2,4-Д.

4.5.2.2.1.2. Варьирование концентрации твин-20 в реакционной среде на стадии конкуренции.

4.5.2.2.2. Анализ 2,4-Д в реальных образцах с помощью ХЛ-ИФА-ПС/ФТПС/МП.

4.5.2.2.2.1. Оценка эффекта матрикса образцов экстрактов кожуры апельсинов.Г.

4.5.2.2.2.2. Определение 2,4-Д в реальных образцах.

V. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Реакция усиленной хемилюминесценции, катализируемая анионными пероксидазами растений, и ее применение в иммуноферментном анализе»

Иммуноферментный метод анализа (ИФА) в настоящее время является одним из самых распространенных аналитических методов анализа и используется в различных областях медицины, сельского хозяйства, микробиологической и пищевой промышленности, а также для контроля за состоянием окружающей среды. Это объясняется высокой аффинностью и уникальной специфичностью иммунохимической реакции между антигеном и антителом, а также высокой чувствительностью детекции ферментной метки.

На практике в современных условиях наиболее интенсивно применяется твердофазный вариант ИФА (тИФА). В настоящее время известно несколько форматов тИФА, последним этапом которых является определение каталитической активности фермента-метки. С этой целью в тИФА используют колориметрический, флуоресцентный или хемилюминесцентный методы детекции. Наиболее чувствительным является хемилюминесцентный метод детекции.

Традиционно в качестве фермента-метки используют коммерчески доступный катионный изофермент с пероксидазы хрена (ПХ). И в этом случае субстратом для хемилюминесцентной регистрации активности феремента является люминол. Так как каталитическая активность ПХ в отношении люминола крайне низка, требуется введение в реакционную среду дополнительных соединений, которые называются усилителями. Наиболее известным усилителем для ПХ является 4-йодофенол. Предел обнаружения ПХ при использовании такой реакции усиленной хемилюминесценции составляет 1.0 пМ [1]. Изучение кинетики данной ферментативной реакции показало, что ПХ продуцирует нестабильный аналитический сигнал [2, 3].

В последние годы был выделен ряд новых пероксидаз растений, которые относятся к группе анионных изопероксидаз. Такими ферментами являются пероксидазы пальмы, сои, чая, табака, батата, картофеля и г.д. [4-35]. В огличие от ПХ анионные пероксидазы в отсутствие усилителей продуцируют стабильный во времени аналитический сигнал [3, 36-38]. К сожалению, данная группа ферментов имеет недостаток, а именно: хемилюминесцентный сигнал, продуцируемый ими значительно ниже, чем при усиленной хемилюминесценции с применением ПХ, а введение в реакционную среду усилителей ПХ не дает значительного усиления хемилюминесценции [1, 3, 36, 39, 40]. Тем не менее, этот недостаток не помешал продемонстрировать преимущества использования пероксидазы сои (ПС) по сравнению с ПХ в тИФА с хемилюминесцентной детекцией (ХЛ-тИФА) на примере определения мыши и сульфаметоксипиридазина [41, 42]. Но когда появляется необходимость разрабатывать высокочувствительные иммуноферментные тест-системы, интенсивности хемилюминесцентного сигнала (ХЛС), продуцируемого анионными пероксидазами, может быть недостаточно. Поэтому встает вопрос о поиске эффективных усилителей для анионных пероксидаз, приводящих к высокому и стабильному аналитическому сигналу.

Недавно [43] было продемонстрировано, что одно из производных фенотиазина, а именно натриевая соль 3-(10'-фенотиазинил)-пропан-1-сульфоната (ФТПС), является перспективным усилителем ХЛ, катализируемой ПХ. Поэтому было решено оценить возможности производных фенотиазина в качестве усилителей ХЛС, продуцируемого анионными пероксидазами, и, в случае положительного результата, применить их при разработке высокочувствительных ХЛ тест-систем с использованием анионных пероксидаз в качестве фермента-метки. .

Задачами настоящей диссертационной работы являются:

• Оценить способность 3-(10'-фенотиазинил)-пропан-1-сульфоната натрия

ФТПС) в качестве усилителя ХЛС, продуцируемого анионными пероксидазами сои и батата;

• Сравнить ФТПС с другими производными фенотиазина как потенциальными усилителями ХЛС, продуцируемого ПС;

• Изучить влияние некоторых производных пиридина на усиливающую способность ФТПС;

• Оценить возможности детектирующей системы на основе ПС и ФТПС с 4морфолинопирйдргаШ"(МП)1з~сэндвич и конкурент1?ор^формагах ХЛ-тИФА.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Вдовенко, Марина Михайловна

V. выводы

1. Оценена способность различных производных фенотиазина усиливать интенсивность хемилюминесценции, образующейся в процессе ферментативного окисления люминола пероксидом водорода в присутствии пероксидазы сои. Показано, что соли 3-(10'-фенотиазинил)-пропан-1-сульфоната (ФТПС) и 3-(10'-фенотиазинил)-пропионата являются первыми усилителями люминол-зависимого хемилюминесцентного сигнала, продуцируемого анионными пероксидазами. Найдено, что эффективность производных фенотиазина как усилителей реакции усиленной хемилюминесценции напрямую зависит от их способности окисляться пероксидом водорода в присутствии пероксидаз.

2. Продемонстрировано, что ФТПС является эффективным усилителем люминол-зависимого хемилюминесцентного сигнала, продуцируемого анионными пероксидазами. В оптимизированных условиях каталитического соокисления люминола и ФТПС эффект усиления для пероксидаз сои и батата составил 240 и 139 раз, соответственно.

3. Обнаружено, что введение, помимо ФТПС, в субстратную смесь 4-диметиламинопиридина, 4-морфолинопиридина или 4-пирролидинопиридина приводит к дополнительному повышению интенсивности свечения, катализируемого пероксидазой сои, что позволяет позиционировать эти производные пиридина как вторичные усилители пероксидаза-зависимой хемилюминесценции.

4. Продемонстрировано, что использование системы усиления, включающей ФТПС и 4-морфолинопиридин, позволило понизить предел обнаружения пероксидазы сои до 0.03 пМ. Полученная величина более чем в 30 раз ниже по сравнению с пределом обнаружения пероксидазы хрена в присутствии 4-йодофенола, традиционно используемого усилителя. Дополнительным преимуществом разработанной детектирующей системы является высокая стабильность в течение длительного периода времени хемилюминесцентного сигнала.

5. Оценена возможность системы усиления, включающей ФТПС и 4-морфолинопиридин, в сэндвич формате хемилюминесцентного иммуноферментного анализа на примере метода определения тиреоглобулина в сыворотке человека. Предел обнаружения и рабочий диапазон тест-системы с применением пероксидазы сои как маркерного фермента составили 0.2 нг/мл и 0.2-700 нг/мл, соответственно. Сравнение аналитических характеристик тест-систем с применением пероксидаз сои и хрена показали очевидные преимущества первого фермента. Разработанный метод анализа был успешно применен для определения тиреоглобулина в сыворотке человека.

6. С применением системы усиления, включающей пероксидазу сои, ФТПС и 4-морфолинопиридин, разработаны высокочувствительные конкурентные иммуноферментные тест-системы для определения охратоксина А и 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д). Предел обнаружения и рабочий диапазон хемилюминесцентных тест-систем составили 0.02 нг/мл и 0.02-0.30 нг/мл для охратоксина А и 1.5 нг/мл и 6.5-545 нг/мл для 2,4-Д, соответственно. Разработанные тест-системы позволили успешно оценить содержание охратоксина А и 2,4-Д в образцах соевых бобов и апельсинов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Вдовенко, Марина Михайловна, 2011 год

1. Сахаров И.Ю. (2004) Пероксидазы пальм. Биохимия. 69. 1013-1020.

2. Сахаров И.Ю. (2001) Пероксидаза из листьев африканской мясляничной пальмы дает стабильный хемилюминссцентный сигнал в процессе окисления люминола перекисью водорода. Биохимия. 66. 640-644.

3. Kim S.J., Shoda М. (1999) Purification and characterization of a novel peroxidase from Geotrichum candidum dec 1 involved in decolorization of dyes.Appl Environ Microbiol. 65. 10291035.

4. Thongsook Т., Barrett D.M. (2005) Purification and partial characterization of broccoli (Brassica oleracea Var. Italica) peroxidases. J Agric Food Chem. 53. 3206-3214.

5. Roberts E., Kutchan Т., Kolattukudy P.E. (1988) Potato Peroxidase. Plant Mol Biol. 11. 15-31.

6. Pomar M.F., Bernal A., Diaz J., Merino F. (1997) Purification, characterization a kinetic properties ofpepper fruit acidic peroxidase. Phytochemistry. 46. 1313-1317.

7. Duarte-Vazquez M.A., Whitaker J.R., Rojo-Dominguez A., Garcia-Almendarez B.E., Regalado C. (2003) Isolation and thermal characterization of an acidic isoperoxidase from turnip roots. J Agric Food Chem. 51. 5096-5102.

8. Schmitz N., Giles K.A., van Huystee R.B. (1989) Characterization of anionic soybean (Glycine max) seed coat peroxidase. Can J of Botany. 75. 1336-1341.

9. Brooks J.L. (1986) Oxidase reactions of tomato anionic peroxidase. Plant Physiol. 80. 130-133.

10. Mazza G., Welinder K.G. (1980) Covalent structure of turnip peroxidase 7. Cyanogen bromide fragments, complete structure and comparison to horseradish peroxidase C. Eur J Biochem. 108. 473-479.

11. Clemente E. (1998) Purification and thermostability of isoperoxidase from oranges. Phytochemistry. 49. 29-41.

12. McLcllan K.M., Robinson D.S. (1987) Purification and heat stability of Brussels sprout peroxidase isoenzymes. Food Chem. 23. 305-319.

13. Gazaryan I.G., Urmantseva V.V., Veryovkin A.N., Fechina V.A. (1991) Peroxidase Preparation FromMedicago SativaL-1 Cell Culture. 505-506.

14. Lagrimini L.M., Burkhart W., Moyer M., Rothstein S. (1987) Molecular cloning of complementary DNA encoding the lignin-forming peroxidase from tobacco: Molecular analysis and tissue-specific expression. Proc Natl Acad Sci USA. 84. 7542-7546.

15. Abeles F.B., Dunn L.J., Morgens P., Callahan A., Dinterman R.E., Schmidt J. (1988) Induction of 33-kD and 60-kD Peroxidases during Ethylene-Induced Senescence of Cucumber Cotyledons. Plant Physiol. 87. 609-615.

16. Anthon G.E., Barrett D.M. (2002) Kinetic parameters for the thermal inactivation of quality-related enzymes in carrots and potatoes. J Agric Food Chem. 50. 4119-4125.

17. Мухамеджанов Б.Г. (1983) Новые Источники Пероксидаз. Биология. 48. 14-17.

18. Lee M.Y., Choi Y., Pare J.H., Jang S.G., Kim S.S. ( 1991) Characteristics of One Cationic and Two Anionic Isoperoxidases From Korean-Radish Root. 159-168.

19. Halpin В., Pressey R., Jen J., Mondy N. (1989) Purification and characterization of peroxidase isoenzymes from green peas (Pisum sativum). J Food Sci. 54. 644.

20. Triplett B.A., Mellon J.E. (1992) Purification and characterization of anionic peroxidases from cotton (Gossypium hirsutum). Plant Sci. 81. 147-154.

21. Civello P.M., Martinez G.A., Chaves A.R., Anon M.C. (1995) Peroxidase from strawberry fruit (Fragaria ananassa-Duch)-partial-purification and determination of some properties. J Agric Food Chem. 43. 2596-2601.

22. Buffard D., Breda C., van Huystee R.B., Asemota O., Pierre M., Ha D.B., Esnault R. (1990) Molecular cloning of complementary DNAs encoding two cationic peroxidases from cultivated peanut cells. Proc Natl Acad Sci USA. 87. 8874-8878.

23. Kristensen B.K., Bloch H., Rasmussen S.K. (1999) Barley coleoptile peroxidases. Purification, molecular cloning, and induction by pathogens. Plant Physiol. 120. 501-512.

24. Ito H., Hiraoka N., Ohbayashi A., Ohashi Y. (1991) Purification and characterization of rice peroxidases. Agric Biol Chem. 55. 2445-2454.

25. Salcharov I.Y., Castillo Leon J., Areza J.C., Galaev I.Y. (2000) Purification and stability of peroxidase of African oil palm Elaies guineensis. Bioseparation. 9. 125-132.

26. Sakharov I.Y., Vesga Blanco M.K., Galaev I.Y., Sakharova I.V., Pletiushkina O.Yu. (2001) Peroxidase from leaves of royal palm tree Roystonea regia: purification and properties. Plant Science. 161. 853-860.

27. Castillo Leon J., Alpeeva I.S., Chubar T.A., Galaev I.Yu., Csoregi E., Sakharov I.Yu. (2002) Purification and substrate specificity of peroxidase from sweet potato tubers. Plant Science. 163. 1011-1019.

28. Rompel A., Albers M., Naseri J.I., Gerdemann C., Buldt-Karentzopoulos K., Jasper В., Krebs B. (2007) Purification, cloning and characterization of a novel peroxidase isozyme from sweet potatoes (Ipomoea batatas). Biochim Biophys Acta. 1774. 1422-1430.

29. Alpeeva I.S., Sakharov I.Y. (2005) Soybean peroxidase-catalyzed oxidation of luminol by hydrogen peroxide. J Agric Food Chem. 53. 5784-5788.

30. Алпеева И.С., Сахаров И.Ю. (2007) Окисление люминола, катализируемое пероксидазой, выделенной из листьев королевской пальмы. Прик биохимия и микробиол. 43. 31-35.

31. Alpeeva I.S., Sakharov I.Y. (2007) Luminol-hydrogen peroxide chemiluminescence produced by sweet potato peroxidase. Luminescence. 22. 92-96.

32. Akimoto K., Shinmen Y., Sumida M., Asami S., Amachi Т., Yoshizumi H., Saeki Y., Shimizu S., Yamada H. (1990) Luminol chemiluminescence reaction catalyzed by a microbial peroxidase. Anal Biochem. 189. 182-185.

33. Kim B.B., Pisarev V.V., Egorov A.M. (1991) A comparative study of peroxidases from horse radish and Arthromyces ramosus as labels in luminol-mediated chemiluminescent assays. Anal Biochem. 199. 1-6.

34. Sakharov I.Y., Alpeeva I.S., Efremov E.E. (2006) Use of soybean peroxidase in chemiluminescent enzyme-linked immunosorbent assay. J Agric Food Chem. 54. 1584-1587.

35. Marzocchi E., Grilli S„ Delia Ciana L, Prodi L., Mirasoli M., Roda A. (2008) Chemiluminescent detection systems of horseradish peroxidase employing nucleophilic acylation catalysts. Anal Biochem. 377. 189-194.

36. Swerdlow P.S., Finley D., Varshavsky A. (1986) Enhancement of immunoblot sensitivity by heating of hydrated filters. Anal Biochem. 156. 147-153.

37. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова E.M. (1991) Теория и практика иммуноферментного аиализа. Высш шк. 288

38. Casino P., Morais S., Puchades R., Maquieira A. (2001) Evaluation of enzyme-linked immunoassays for the determination of chloroacetanilides in water and soils. Environ Sci Technol. 35.4111-4119.

39. Xie C., Gao S., Guo Q., Xu K. (2010) Electrochemical sensor for 2,4-dichlorophenoxy acetic acid using molecularly imprinted polypyrrole membrane as recognition element. Microchim Acta. 169. 145-152.

40. Striley C.A.F., Biagini R.E., Mastin J.P., MacKenzie B.A., Robertson S.K. (1999) Development and validation of an ELISA for metolachlor mercapturate in urine. Anal Chim Acta. 399. 109-114.

41. Tessier D.M., Clark J.M. (1998) An enzyme immunoassay for mutagenic metabolites of the herbicide alachlor. Anal Chim Acta. 376. 103-112.

42. Sittampalam G.S., Smith W.C., Miyakawa T.W., Smith D.R., McMorris C. (1996) Application of experimental design techniques to optimize a competitive ELISA. J Immunol Methods. 190. 151161.

43. Золотов Ю.А., Дорохова E.H., Фадеева В.И. (2000) Основы аналитической химии. Общие вопросы. Методы разделения. Высш шк. 1. 359

44. Popelka S.R., Miller D.M., Holen J.T., Kelso D.M. (1981) Fluorescence polarization immunoassay. II. Analyzer for rapid, precise measurement of fluorescence polarization with use of disposable cuvettes. ClinChem. 27. 1198-1201.

45. Miles L.E., Hales C.N. (1968) Labelled antibodies and immunological assay systems. Nature. 219. 186-189.54. van Weemen B.K., Schuurs A. (1971) Immunoassay using antigen-enzyme conjugates. FEBS Letters. 15. 232-236.

46. Engvall E., Perlmann P. (1971) Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. hnmunochemistry. 8. 871-874.

47. Welinder K.G., Rusmussen S.K., Penel C., Greppin H. (1993) Structure and Evolution of Peroxidases. Plant Peroxidases Biochemistry and Physiology. 35-42.

48. Welinder K.G. Plant peroxidases. (1985) Their primary, secondary and tertiary structures, and relation to cytochrome с peroxidase. Eur J Biochem. 151. 497-504.

49. Ryan B.J., Carolan N., O'Fagain C. (2006) Horseradish and soybean peroxidases: comparable tools for alternative niches?. Trends Biotechnol. 24. 355-363.

50. Liu W., Cholli A.L., Nagarajan R., Kumar J., Tripathy S., Bruno F.F., Samuelson L. (1999) Enzymatically synthesized conducting polyaniline. J Am Chem Soc. 121. 71-78.

51. Pina D.G., Shnyrova A.V., Gavilanes F., Rodriguez A., Leal F., Roig M.G., Sakharov I.Yu., Zhadan G.G., Villar E., Shnyrov V.L. (2001) Thermally induced conformational changes in horseradish peroxidase. Eur J Biochem. 268. 120-126.

52. Chattopadhyay K., Mazumdar S. (2000) Structural and conformational stability of horseradish peroxidase: effect of temperature and pH. Biochemistry. 39. 263-270.

53. Березин И.И., Угарова H.H., Кершенгольц Б.М., Бровко Л.Ю. (1975) Влияние простетической группы пероксидазы хрена на стабильность фермента. Биохимия. 40. 297300.

54. Gillikin J.W., Graham J.S. (1991) Purification and Developmental Analysis of the Major Anionic Peroxidase from the Seed Coat of Glycine max. Plant Physiology. 96. 214-220.

55. McEldoon J.P. (1995) Substrate Specifity and Thermal stability of plant peroxidases. Ph.D. Thesis, University of Iowa. 154.

56. McEldoon J.P., Pokora A.R., Dordick J.S. (1995) Lignin peroxidase-type activity of soybean peroxidase. Enzyme microb technol. 17. 359-365.

57. Kamal J.K., Behere D.V. (2003) Activity, stability and conformational flexibility of seed coat soybean peroxidase. J Inorg Biochem. 94. 236-242.

58. Wright H., Nicell J.A. (1999) Characterization of soybean peroxidase for wastewater treatment. Bioresource Technology. 70. 69-79.

59. McEldoon J.P., Dordick J.S. (1996) Unusual thermal stability of soybean peroxidase. Biotechnol Prog. 12. 555-558.

60. Klibanov A.M., Berman Z., Alberti B.N. (1981) Preparative hydroxylation of aromatic compounds catalyzed by peroxidase. J Amer Chem Soc. 103. 6263-6264.

61. Schuller D.J., Ban N., van Huystee R.B., McPherson A., Poulos T.L. (1996) The crystal structure of peanut peroxidase. Structure. 4. 311-321.

62. Gajhede M., Schuller D.J., Henriksen A., Smith A.T., Poulos T.L. (1997) Crystal structure of horseradish peroxidase С at 2.15 A resolution. Nat Struct Biol. 4. 1032-1038.

63. Henriksen A., Welinder K.G., Gajhede M. (1998) Structure of barley grain peroxidase refined at 1.9-A resolution. A plant peroxidase reversibly inactivated at neutral pH. J Biol Chem. 273. 22412248.

64. Mirza О., Henriksen A., Ostergaard L., Welinder K.G., Gajhede M. (2000) Arabidopsis thaliana peroxidase N: structure of a novel neutral peroxidase. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 56. 372375.

65. Хушпульян Д.М. (2007) Рекомбинантная пероксидаза табака: получение и каталитические свойства. Дисс.к.х.н., МГУ. 127

66. Berglund G.I., Carlsson G.H., Smith A.T., Szoke H., Henriksen A., Hajdu J. (2002) The catalytic pathway of horseradish peroxidase at high resolution. Nature. 417. 463-468.

67. Harris R.Z., Newmyer S.L., Ortiz de Montellano P.R. (1993) Horseradish peroxidase-catalyzed two-electron oxidations. Oxidation of iodide, thioanisoles, and phenols at distinct sites. J Biol Chem. 268. 1637-1645.

68. Rodriguez-Lopez J.N., Gilabert M.A., Tudela J., Thomeley R.N., Garcia-Canovas F. (2000) Reactivity of horseradish peroxidase compound II toward substrates: kinetic evidence for a two-step mechanism. Biochemistry. 39. 13201-13209.

69. Staffer В., Rasmussen C.B., Welinder K.G. (1991) Amino Acid Sequence of Acidic Horseradish Peroxidase HRP A. 43-48.

70. Cormier M.J., Prichard P.M. (1968) An investigation of the mechanifm of the luminescent peroxidation of luminol by stopped flow techniques. J Biol Chem. 243. 4706-4714.

71. Whitehead T.P., Thorpe G.H., Carter T.J.N., Groucutt C., Kricka L.J. (1983) Enhanced Luminescence Procedure for Sensitive Determination of Peroxidase-Labelled Conjugates in Immunoassays. Nature. 305. 158-159.

72. Thorpe G.H., Williams L.A., Kricka L.J., Whitehead T.P., Evans H., Stanworth D.R. (1985) A rapid luminescently monitored enzyme immunoassay for IgE. J Immunol Methods. 79. 57-63.

73. Sankolli G.M., Stott R.A., Thorpe G.H., Smith D., Rudd B.T., Kricka L.J. (1988) An enhanced chemiluminescence enzyme immunoassay for serum oestradiol. Ann Clin Biochem. 25 ( Pt 3). 288292.

74. Thorpe G.H., Kricka L.J., Moseley S.B., Whitehead T.P. (1985) Phenols as enhancers of the chemiluminescent horseradish peroxidase-luminol-hydrogen peroxide reaction: application in luminescence-monitored enzyme immunoassays. Clin Chem. 31. 1335-1341.

75. Kuroda N., Nakashima K., Akiyama S., Shiraki H., Maeda Y. (1992) Photographic chemiluminescent ELISA for detection of anti-human T-cell leukemia virus type-I antibodies by using synthetic peptides as antigens. Clin Chim Acta. 211. 113-119.

76. Kricka L.J., Cooper M., Ji X. (1996) Synthesis and characterization of 4-iodophenylboronic acid: a new enhancer for the horseradish peroxidase-catalyzed chemiluminescent oxidation of luminol. Anal Biochem. 240. 119-125.

77. Kuroda N., Kawazoe K., Nakano H., Wada M., Nakashima K. (1999) New phenylboronic acid derivatives as enhancers of the luminol-H(2)0(2)-horseradish peroxidase chemiluminescence reaction. Luminescence. 14. 361-364.

78. Kuroda N., Shimoda R., Wada M., Nakashima K. (2000) Lophine derivatives and analogues as new phenolic enhancers for the luminol-hydrogen peroxide-horseradish peroxidase chemiluminescence system. Anal Chim Acta. 403. 131-136.

79. Lind J., Merenyi G., Eriksen Т.Е. (1983) Chemiluminescence mechanism of cyclic hydrazides such as luminol in aqueous solutions. J Amer Chem Soc. 105. 7655-7661.

80. Easton P.M., Simmonds A.C., Rakishev A., Egorov A.M., Candeas L.P. (1996) Quantitative Model of the Enhancement of Peroxidase-Induced Luminol Luminescence. J Amer Chem Soc. 118. 6619-6624.

81. Капелюх Ю.Л. (1998) Кинетика и механизм инактивации пероксидазы в хемилюминесцентной реакции окисления люминола в присутствии производных фенола. Дисс.к.х.н., МГУ. 74.

82. Вдовенко М.М., Ульрих Р., Хофрихтер М., Сахаров И.Ю. (2010) Окисление люминола пероксидом водорода с образованием хемилюминесцентного сигнала, катализируемое пероксигеназой гриба Agrocybe aegerita V.Brig. Прик биохимия и микробиол. 46. 73-77.

83. Hofiichter М., Ullrich R. (2006) Heme-thiolate haloperoxidases: versatile biocatalysts with biotechnological and environmental significance. Appl Microbiol Biotechnol. 71. 276-288.

84. Kluge M.G., Ullrich R., Scheibner К., Hofrichter M. (2007) Spectrophotometric assay for detection of aromatic hydroxylation catalyzed by fungal haloperoxidase-peroxygenase. Appl Microbiol Biotechnol. 75. 1473-1478.

85. Сахаров И.Ю. (2010) Использование новых пероксидаз растений в иммуноферментном анализе с хемилюминесцентной детекцией. Наука. 349-367.

86. Dzgoev A.B., Gazaryan I.G., Lagrimini L.M., Ramanathan К., Danielsson В. (1999) High-sensitivity assay for pesticide using a peroxidase as chemiluminescent label. Anal Chem. 71. 52585261.

87. Surugiu I., Ye L., Yilmaz E., Dzgoev A., Danielsson В., Mosbach К., Haupt К. (2000) An enzyme-linked molecularly imprinted sorbent assay. Analyst. 125. 13-16.

88. Boscolo В., Laurenti E., Ghibaudi E. (2006) ESR spectroscopy investigation of the denaturation process of soybean peroxidase induccd by guanidine hydrochloride, DMSO or heat. Protein J. 25. 379-390.

89. Kamal J.K., Behere D.V. (2002) Thermal and conformational stability of seed coat soybean peroxidase. Biochem. 41. 9034-9042.

90. Скоупс P. (1985) Методы очистки белков. Мир. 358.

91. Газарян И.Г., Решетникова И.А., Досеева И.И., Беккер Е.Г. (1995) Выделение и сравнительная характеристика пероксидаз гриба Phellinus-Igniarius (L.F.R) QueI-90-l и табака. Биохимия. 60. 1017-1022.

92. Остерман Л.А. (1985) Хроматография белков и нуклеиновых кислот. Наука. 536.

93. Goodwin D.C., Grover T.A., Aust S.D. (1996) Redox mediation in the peroxidase-catalyzed oxidation of aminopyrine: possible implications for drug-drug interactions. Chem Res Toxicol. 9. 476-483.

94. Iervasi A., Iervasi G., Bottoni A., Boni G., Annicchiarico C., Di Cecco P., Zucchelli G.C. (2004) Diagnostic performance of a new highly sensitive thyroglobulin immunoassay. J Endocrinol. 182. 287-294.

95. Iervasi A., Iervasi G., Carpi A., Zucchelli G.C. (2006) Serum thyroglobulin measurement: clinical background and main methodological aspects with clinical impact. Biomed Pharmacother. 60. 414-424.

96. Morgenthaler N.G., Froehlich J., Rendl J., Willnich M. Alonso C., Bergmann A., Reiners C. (2002) Technical evaluation of a new immunoradiometric and a new immunoluminometric assay for thyroglobulin. Clin Chem. 48. 1077-1083.

97. Zophel K., Wunderlich G., Smith B.R. (2003) Serum thyroglobulin measurements with a high sensitivity enzyme-linked immunosorbent assay: is there a clinical benefit in patients with differentiated thyroid carcinoma?. Thyroid. 13. 861-865.

98. Marquette C.A., Blum L.J. (2006) Applications of the luminol chemiluminescent reaction in analytical chemistry. Anal Bioanal Chem. 385. 546-554.

99. Tsukagoshi K., Jinno N., Nakajima R. (2005) Development of a micro total analysis system incorporating chemiluminescence detection and application to detection of cancer markers. Anal Chem. 77. 1684-1688.

100. Fan A., Cao Z., Li H., Kai M., Lu J. (2009) Chemiluminescence platforms in immunoassay and DNA analyses. Anal Sci. 25. 587-597.

101. Schaap A.P., Akhavan H., Romano L.J. (1989) Chcmiluminescent substrates for alkaline phosphatase: application to ultrasensitive enzyme-linked immunoassays and DNA probes. Clin Chem. 35. 1863-1864.

102. Tsuji A., Maeda M., Arakawa H. (1989) Chcmiluminescent enzyme immunoassay, a review. Analyt Sci. 5. 497-506.

103. Dunford H.B. (1999) Heme Peroxidases. Wiley-VCH. 507.

104. Fosset M., Chappelet-Tordo D., Lazdunski M. (1974) Intestinal alkaline phosphatase. Physical properties and quaternary structure. Biochemistry. 13. 1783-1788.

105. Kricka L.J. (2003) Clinical applications of chemiluminescence. Anal Chim Acta. 500. 279286.

106. Cabanes F.J., Accensi F., Bragulat M.R., Abarca M.L., Castella G., Minguez S., Pons A. (2002) What is the source of ochratoxin A in wine?. Int J Food Microbiol. 79. 213-215.

107. Ochratoxin A (1993) IARC Monogr Eval Carcinog Risks Hum. 56. 489-521.

108. Battaglia R., Hatzold T., Kroes R. (1996) Occurrence and significance of ochratoxin A in food. Food Addit Contam. 13. 1-3.

109. Trucksess M.W., Giler J., Young K., White K.D., Page S.W. (1999) Determination and survey of ochratoxin A in wheat, barley, and coffee. J AOAC Int. 82. 85-89.

110. Jorgensen K. (1998) Survey of pork, poultry, coffee, beer and pulses for ochratoxin A. Food Addit Contam. 15. 550-554.

111. The evaluation of carcinogenic risks to human (1997) IARC Monographs. 56. 489-521.

112. European Commission. (2002). 18-20.

113. European Commission. (2005). 3-5.

114. Yu F.Y., Chi T.F., Liu B.H., Su C.C. (2005) Development of a sensitive enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of ochratoxin A. J Agric Food Chem. 53. 6947-6953.

115. Liu B.H., Tsao Z.J., Wang J.J., Yu F.Y. (2008) Development of a monoclonal antibody against ochratoxin A and its application in enzyme-linked immunosorbent assay and gold nanoparticle immunochromatographic strip. Anal Chem. 80. 7029-7035.

116. Reinhard H., Zimmerli B. (1999) Reversed-phase liquid chromatographic behavior of the mycotoxins citrinin and ochratoxin A. J Chromatogr A. 862. 147-159.

117. Romani S., Sacchetti G., Chaves Lopez C., Pinnavaia G.G., Dalla Rosa M. (2000) Screening on the occurrence of ochratoxin A in green coffee beans of different origins and types. J Agric Food Chem. 48. 3616-3619.

118. Гигиенические нормативы содержания пестицидов в объектах окружающей среды. ГН 1.2.1323-03

119. Koester С.J., Simonich S.L., Esser В.К. (2003) Environmental Analysis. Anal Chem. 75. 2813-2829.

120. Vanderlaan M., Watkins B.E., Stankler L. (1988) Environmental monitoring by immunoassay. Environ. Sci Technol. 22. 247-253.

121. Clement R.E., Yang P.W., Koester C.J. (2001) Environmental Analysis. Anal Chem. 73. 27612790.

122. Mallat E., Barcelo D. (2001) Immunosensors for pesticide determination in natural waters. Trends Anal Chem. 20. 124-132.

123. Richardson S.D. (2003) Water Analysis: Emerging Contaminants and Current Issues. Anal Chem. 75.2831-2857.

124. Ahmed F.E. (2001) Analyses of pesticides and their metabolites in foods and drinks. Trends Anal Chem. 20. 649-661.

125. Вдовенко M.M., Пенг Ч.Ф., Щу 4.JI., Вылегжанина Е.С., Комаров А.А., Сахаров И.Ю. , (2011) Иммуноферментный метод определения гексестрола в мясе животных. Прикбиохимия и микробиол. 47. 84-89.