Разработка тест-систем на основе иммуноферментного анализа для диагностики болезни Шмалленберг тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Губенко Олеся Григорьевна

• Губенко Олеся Григорьевна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Губенко Олеся Григорьевна

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Характеристика семейства Буньявирусов

2.2 Характеристика болезни Шмалленберг

2.2.1 Строение вируса болезни Шмалленберг

2.2.2 Устойчивость вируса

2.2.3 Эпизоотическая ситуация в мире

2.2.4 Эпизоотическая ситуация в России

2.2.5 Патогенез и клиническая картина при болезни Шмалленберг

2.2.6 Патологоанатомические изменения

2.2.7 Диагностика болезни Шмалленберг

2.2.7.1 Вирусологические методы диагностики

2.2.7.2 Серологические методы диагностики

2.2.7.3 Генодиагностика

2.2.8 Меры борьбы

2.3 Заключение по обзору литературы

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Материалы

3.1.1 Вирусы

3.1.2 Культуры клеток

3.1.3 Животные

3.1.4 Специфические компоненты для проведения ИФА

3.1.5 Химические реактивы, растворы, буферные смеси

3.1.6 Лабораторное оборудование

3.1.7. Коммерческие наборы

3.2 Методы

3.2.1 Выделение вируса болезни Шмалленберг в культуре клеток

3.2.2 Культивирование вируса болезни Шмалленберг, получение и титрование вируссодержащего материала

3.2.3 Инактивация вируссодержащего материала бета-пропиолактоном

3.2.4 Получение препаратов антигена

3.2.5 Электрофорез

3.2.6 Измерение концентрации белка

3.2.7 ПЦР-РВ

3.2.8 Секвенирование

3.2.9 Иммунизация животных

3.2.10 Постановка непрямого «сэндвич»-варианта ИФА

3.2.11 Постановка конкурентного варианта ИФА

3.2.12 Формулы расчета основных валидационных характеристик

3.3 Компьютерный учет результатов

3.4 Статистическая обработка результатов исследований

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Адаптация вируса болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4» к

культурам клеток

4.1.1 Подбор оптимального режима культивирования вируса болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4» в культурах клеток ВНК-21/13 и ПС

4.2 Разработка тест-системы на основе

непрямого «сэндвич»-варианта ИФА

4.2.1 Получение препаратов антигена вируса болезни Шмалленберг

4.2.2 Получение специфических к вирусу болезни Шмалленберг гипериммунных сывороток крови кроликов и морских свинок

4.2.3 Определение рабочего разведения детекторных антител и антивидового конъюгата

4.2.4 Определение рабочего разведения улавливающих антител

4.2.5 Тестирование очищенных препаратов антигена вируса болезни Шмалленберг с помощью разработанного непрямого «сэндвич»-варианта ИФА

4.3 Разработка конкурентного варианта ИФА (К-ИФА)

4.3.1 Подбор оптимальных условий постановки К-ИФА

4.3.2 Определение оптимальных разведений антигена и гипериммунной сыворотки кролика

4.3.3 Определение оптимального разведения антивидового конъюгата

4.3.4 Определение допустимых значений оптических плотностей

контрольных сывороток

4.3.5 Определение позитивно-негативного порога разработанной

тест-системы К-ИФА

4.3.6 Исследование проб сывороток крови КРС с помощью разработанной тест-системы на основе К-ИФА

4.3.7 Определение основных валидационных характеристик разработанной тест-системы на основе конкурентного варианта ИФА

4.3.7.1 Определение воспроизводимости

4.3.7.2 Определение относительной чувствительности и специфичности

4.3.7.3 Определение точности и согласованности результатов разработанной тест-системы

4.3.7.4 Определение промежуточной прецизионности

4.4 Применение разработанной тест-системы на основе конкурентного

варианта ИФА

4.4.1. Исследования сывороток крови КРС, полученных из регионов РФ на наличие антител к вирусу болезни Шмалленберг

4.4.2 Выявление сероконверсии при исследовании парных проб сывороток крови КРС из Калининградской и Псковской областей

4.4.3 Опыт по изучению сероконверсии среди импортного скота, завезенного на территорию Воронежской области

4.5 Выделение изолята вируса болезни Шмалленберг из проб биоматериала в

культуре клеток

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5.1 Выводы

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка тест-систем на основе иммуноферментного анализа для диагностики болезни Шмалленберг»

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Вирус болезни Шмалленберг (БШ) ^ВУ) был обнаружен в Германии (недалеко от города Шмалленберг) в ноябре 2011 года и с этого времени распространился по странам ЕС - Германии, Голландии, Бельгии, Англии, Франции, Люксембургу, Италии, Дании, Швейцарии, Швеции, Польше и т.д. [3, 59, 74, 87, 88, 90, 91, 92, 93, 95, 98, 103].

Известно, что по генетической характеристике вирус БШ принадлежит к семейству буньявирусы (Bunyaviridae), роду ортобуньявирусы (Orthobunyavirus), серогруппе Симбу ^тЬи serogroup). Анализ вирусных геномных последовательностей выявил сходство данного возбудителя с вирусами Акабане, Айно и Шамонда, все из которых принадлежат к роду Orthobunyavirus из семейства Bunyaviridae [105].

Заболевание характеризуется желудочно-кишечными расстройствами, повышением температуры тела, высокой частотой абортов, мертворождений и смертностью среди новорожденных. Тяжелее заболевание протекает у овец и коз и характеризуется большим процентом гибели, истощением, поражением репродуктивных органов [13, 60].

Главным биологическим переносчиком вируса БШ являются мокрецы рода Culicoides (семейство Сeratopogonidae), одни из самых мелких кровососущих двукрылых насекомых комплекса «гнус» [12, 20]. Распространение возбудителя тесно связано с количеством насекомых, которое обычно достигает максимума в конце лета / начале осени (август / сентябрь) и резко падает, как только начинаются заморозки.

В Россию из зарубежных стран, включая страны ЕС, активно импортируется племенной генетический материал, включая высокопродуктивных животных, эмбрионы, замороженное семя. Через нашу страну пролегает транзит завоза животных в другие страны, в частности, в Казахстан. Уже есть случаи выявления при завозе импортного скота серопозитивных животных, в крови которых выявлены антитела к вирусу [6, 26, 29, 30].

Стремительное распространение БШ обусловлено тем, что Европейские ветеринарные службы практически не предпринимают никаких мер по купированию заболевания и не проводят предохранительных ветеринарных мероприятий. Также в странах ЕС не проводятся мониторинговые исследования, о многих случаях выявления вируса не сообщается. Вследствие того, что БШ не нотифицируется в МЭБ, оценить реальную картину ее распространения не представляется возможным [7].

За 2016-2018 гг. в литературе появлялись многочисленные данные о случаях повторной регистрации выявления антител к вирусу БШ в странах ЕС - Великобритании, Ирландии, Бельгии [28, 61,103].

Также выявлено массовое распространение данного возбудителя среди КРС в Эфиопии, Мозамбике [116, 118], Китае [127], и в популяции лошадей в Республике Иран [97].

Также сообщается о циркуляции вируса Шмалленберга, РНК которого выявлена в пулах мокрецов Culicoides obsoletus, собранных в районе г. Антверпена (Бельгия) в августе 2016 г., причем минимальный уровень заболеваемости самих животных достигал 3% [61].

Диагностику БШ проводят на основании клинических признаков и выявления вирусного генома методом ПЦР в реальном времени, а также выделение в культуре клеток насекомых (KC), золотистого хомячка (ВНК), почек обезьяны (Vero) или при интрацеребральном заражении мышей-сосунов как родственный вирус болезни Акабане. Для серологической диагностики применяют иммуноферментный анализ (ИФА), реакции непрямой иммуно-флюоресценции и вируснейтрализации [52, 85, 112].

В настоящее время широкое распространение в лабораторной диагностике получил метод иммуноферментного анализа (ИФА/ELISA), главными достоинствами которого являются высокая чувствительность и специфичность. Быстрота получения результатов, воспроизводимость и автоматизированный учет результатов реакции, возможность стандартизации условий по-

становки анализа делают этот метод наиболее эффективным, удобным, экономичным для массовых серологических исследований. Этот метод позволяет оценивать сероконверсию антител к вирусу БШ и уровень серопревалент-ности в группах/стадах животных.

Зарубежной коммерческой фирмой ГОУЕТ (Франция) предложены тест-системы на основе непрямого и конкурентного варианта ИФА для определения антител к вирусу БШ в сыворотках крови восприимчивых животных.

В связи с тем, что импортные наборы не всегда доступны и являются дорогостоящими, актуальным является создание отечественных тест-систем для выявления антител к вирусу БШ иммуноферментным методом, чтобы проводить надзор за распространением вируса БШ.

Кроме того, важными остаются проблемы поиска и подбора нового производственного штамма возбудителя, оптимизации методов его культивирования с целью получения высокоактивного вирусного антигена для дальнейшей разработки отечественных диагностических тест-систем.

В связи с этим, актуальной задачей также стала разработка тест-системы на основе непрямого «сэндвич»-варианта ИФА с целью контроля вирусного антигена на различных этапах его получения и в дальнейшем для технологического контроля при производстве вакцины против вируса БШ.

Степень разработанности проблемы. Проблеме появления и распространения вируса БШ посвящены многочисленные отечественные и зарубежные работы [3, 4, 8, 32, 45, 49, 85, 98, 104].

Выявление вирусного генома проводят методом ПЦР в реальном времени [85], а также выделение в культуре клеток насекомых (КС), золотистого хомячка (ВНК), почек обезьяны (Уеш) [51, 110].

Зарубежными коммерческими фирмами (ГОУЕТ) предложены тест-системы на основе непрямого и конкурентного варианта ИФА для определения антител к вирусу БШ в сыворотках крови КРС/МРС.

Исходя из литературных данных, в РФ отсутствует серологический метод диагностики вируса БШ, что говорит о необходимости его разработки.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлась разработка диагностических тест-систем на основе полученного штамма вируса БШ для выявления антигена и антител к нему в сыворотках крови животных при проведении серологических исследований в ИФА.

Для решения поставленной цели необходимо было выполнить следующие задачи:

1) Адаптировать вирус болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4» к перевиваемым линиям культур клеток;

2) Подобрать оптимальные условия культивирования вируса болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4», обеспечивающие стабильное накопление вируссодержащего материала;

3) Получить препараты антигена вируса БШ и специфические сыворотки лабораторных животных;

4) Разработать тест-систему на основе непрямого «сэндвич»-варианта ИФА для выявления антигена вируса БШ;

5) Разработать тест-систему на основе конкурентного варианта ИФА для выявления антител к вирусу БШ в сыворотках крови восприимчивых животных.

6) Применить разработанные тест-системы в лабораторной диагностике.

Научная новизна результатов исследований. Вирус болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4», выбранный в качестве диагностического, адаптирован к перевиваемым линиям культур клеток, оптимизированы параметры культивирования данного штамма.

Разработаны отечественные тест-системы на основе иммунофермент-ного анализа с применением в качестве антигена штамма «ВН80/11-4» вируса болезни Шмалленберг:

Тест-система на основе непрямого «сэндвич»-варианта ИФА для выявления антигена.

Тест-система на основе конкурентного варианта ИФА для выявления антител.

Теоретическая и практическая значимость работы. Вирус болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4», выбранный в качестве диагностического при разработке тест-систем на основе непрямого «сэндвич»-варианта ИФА для выявления антигена вируса БШ и конкурентного варианта ИФА для выявления антител к вирусу БШ, адаптирован к перевиваемым линиям культур клеток.

Выделенный на территории Калининградской области изолят вируса БШ депонирован в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» как штамм «ВБШЖалининград/2016» и может быть использован при разработке диагностических препаратов и их контроля при диагностике БШ.

В ходе выполнения научно-исследовательских работ по теме диссертации разработаны, комиссионно проверены, утверждены на ученом совете ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие методические рекомендации:

1. Методические рекомендации по очистке и концентрированию антигена вируса болезни Шмалленберг;

2. Методические рекомендации по выявлению антигена вируса болезни Шмалленберг в твердофазном непрямом «сэндвич»-варианте иммуно-ферментного анализа;

3. Методические рекомендации по выявлению антител к вирусу болезни Шмалленберг в конкурентном варианте иммуноферментного анализа.

Методология и методы исследования. Методология проведенных исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно восприимчивых животных. В работе использовали вирусологические (вирусовыделение, титрование вируса, РМН) моле-кулярно-биологические (ПЦР-РВ, секвенирование), серологические (непря-

мой и конкурентный вариант ИФА), а также физико-химические (составление растворов заданной молярности, центрифугирование, электрофорез) методы.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на публичное представление:

1. Адаптация вируса болезни Шмалленберг штамм «ВН80/11-4» к перевиваемым линиям культур клеток и выбор оптимальных условий культивирования;

2. Получение препаратов антигена вируса БШ;

3. Тест-система на основе «сэндвич»-варианта ИФА для выявления антигена;

4. Тест-система на основе конкурентного варианта ИФА для выявления антител;

5. Результаты серологического исследования сывороток крови КРС, поступивших в ФГБУ «ВНИИЗЖ», с использованием разработанной тест-системы на основе конкурентного варианта ИФА.

Личный вклад соискателя. Исследования по теме диссертационной работы (планирование и выполнение основных работ экспериментов, обобщение полученных результатов) проведены автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали: к.б.н. Бьядовская О.П., к.б.н Кононова С.В., к.б.н. Спры-гин А.В., к.б.н. Манин Б.Л., за что автор выражает им глубокую признательность.

Исследования по диссертационной работе были выполнены в период с 2015 по 2018 гг. в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Апробация результатов работы. Результаты исследований по теме диссертации были опубликованы и доложены в материалах 4-й Международной научной конференции, посвященной 55-летию аспирантуры ФГБУ

«ВНИИЗЖ» с докладом - «Определение основных характеристик метода ИФА для выявления антител к вирусу болезни Шмалленберга в сыворотке крови крупного и мелкого рогатого скота» (Владимир, 2016), в материалах IX Всероссийской научно-практической конференции с докладом - «Разработка иммуноферментных методов диагностики вируса болезни Шмаллен-берг» (Москва, 2017).

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения и список литературы, который состоит из 127 источников, в том числе 30 работ на русском языке. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 25 рисунками и дополнена приложением документов, подтверждающих внедрение результатов работы в ветеринарную практику.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика семейства Буньявирусов Буньявирусы (от Буньямвера — пункта открытия вирусов в Уганде) — семейство РНК-содержащих оболочечных вирусов, объединяющее более 300 вирусов; относятся к арбовирусам и частично к робовирусам. Заболевания сопровождаются лихорадкой, миалгией, сыпью, увеличением лимфоузлов, явлениями энцефалита [1, 5, 11, 15].

Вирион буньявирусов имеет сферическую форму диаметром 80-120 нм, снабжен липидной оболочкой (толщиной 5 нм) с шипиками (5-10 нм), образованными поверхностными гликопротеинами Оп (прежнее название 01) и Ос (02). Нуклеокапсид образован оц-РНК в комплексе с N белком.

Около 2-7% массы вириона составляют углеводные цепи, N-гликозилирующие Gn и Gc, с высоким содержанием маннозы в случае репликации вируса в клетках млекопитающих (Рис. 1). Буньявирусы чувствительны к действию повышенной температуры, к обработке жирорастворяю-щими агентами, детергентами и формальдегидом [10, 21, 25, 36, 62].

Gc

Gn

Envelope

L (RdRp) N

80-120 nm

Рисунок 1 - Схематическое изображение родовой вирусной частицы буньявируса.

Вирион буньявируса имеет диаметр от 80 до 120 нм. Три РНК-сегмента (S, M и L) связываются с L-полимеразой и N-нуклеопротеидом с образованием рибонулеопротеина (RNP)

[59]

Поверхностные гликопротеины буньявирусов имеют эпитопы для нейтрализующих и антигемагглютинирующих антител. Нуклеокапсидный белок содержит антигенную детерминанту для комплементсвязывающих антител [62].

Геном буньявирусов состоит из трех сегментов одноцепочечной РНК-(Orthobunyavirus, Hantavirus, Nairovirus) или амбиполярных одноцепочечных РНК (Phlebovirus, Tospovirus): L (large - большой сегмент), М (medium - средний сегмент) и S (short - короткий) [5, 21, 80].

Представители рода Ортобуньявирусов кодируют два дополнительных неструктурных белка - NSs и NSm. NSs белок участвует в вирусном патогенезе, блокируя выработку интерферона (ИФН-а и в) путем выключения клеточного синтеза матричной РНК [35, 66, 71, 82].

Между представителями семейства Буньявирусов, как и среди многочисленных вирусов с сегментированным геномом, существует возможность геномной реассортации с образованием новых вариантов при одновременной коинфекции одной клетки [81]. Такими вирусами, имеющими реассортант-ную природу происхождения, являются представители серогруппы Симбу -вирус БШ, Икитос, Акабане, Айно, Питон, Тинару [65, 72, 81].

Семейство буньявирусов состоит из 5 родов: Orthobunyavirus, Phlebo-virus, Nairovirus, Hantavirus, Tospovirus. Вирусы этого семейства заражают позвоночных, за исключением топовирусов, которые являются растительными вирусами [11, 15, 59].

1. Род Orthobunyavirus включает 166 вирусов, типичными представителями которых являются вирус Акабане, Айно, Шмалленберг, Шамонда и

др;

2. Род Phlebovirus включает 23 вируса - вирус лихорадки долины Рифт, сицилийской москитной лихорадки и др.;

3. Род Nairovirus включает 33 вируса - вирус болезни Найроби;

4. Род Hantavirus включает 6 вирусов - вирус Хантаан;

5. Род Tospovirus включает одного единственного представителя -вирус пятнистого увядания томатов [10, 14, 15, 40, 80].

Наибольший интерес представляет серогруппа Симбу, включающая не менее 25 представителей, в которой определены семь видов, серогруппы Буньямвера и Калифорнийского энцефалита (таблица 1).

Таблица 1 — Зоопатогенные ортобуньявирусы: серогруппы, виды,

вирусы, векторы [39, 58, 62]

Серогруппы Виды (virus), серо-комплексы (комплекс) Изоляты, штаммы Векторы

Simbu Akabane Akabane мокрецы, комары

Sabo мокрецы

Tinaroo мокрецы

Manzanilla Buttonwillow мокрецы

Oropouche Ikitos мокрецы

Oropouche мокрецы, комары

Sathuperi Duglas мокрецы

Sathuperi мокрецы, комары

Shamonda Peaton мокрецы

Shamonda мокрецы, комары

Shuni Aino мокрецы, комары

Shuni мокрецы, комары

Simbu Shmallenberg мокрецы

Simbu мокрецы, комары

Bunyamvera Bunyamvera Cache valley мокрецы, комары

California encephalitis California encephalitis California encephalitis комары

La Crosse комары

Репликация генетического материала буньявирусов происходит в цитоплазме клетки хозяина. Геномная (-) РНК вирусов реплицируется сначала сначала в антигеномную (+) РНК и далее в (-) мРНК. Вирусные белки попадают далее в эндоплазматический ретикулум и в аппарат Гольджи и транспортируются к плазматической мембране [5, 21, 25].

2.2 Характеристика болезни Шмалленберг

Болезнь, вызванная вирусом Шмалленберг (Schmallenberg virus), была первоначально зарегистрирована в Германии. В ноябре 2011 года Институт Фридриха-Леффлера (FLI) в Германии обнаружил вирусную РНК, принадлежащую к новому вирусу, в пуле образцов крови у клинически пораженных молочных коров. Название новому заболеванию дали по месту его выявления [83].

Анализ вирусных геномных последовательностей выявил сходство вируса БШ с вирусами Акабане, Айно и Шамонда, все из которых принадлежат к роду Orthobunyavirus из семейства Bunyaviridae [105].

К заболеванию расположен крупный рогатый скот, овцы и козы, независимо от возрастных характеристик. Сведений о заболеваемости людей нет, хотя исследования, проведенные в Голландском национальном институте охраны здоровья и окружающей среды, возможность заражения вирусом Шмалленберг людей не исключают [9, 101, 110].

Существует два пути заражения животных: горизонтальный — при укусах кровососущих насекомых, вертикальный — от материнского организма плоду в процессе внутриутробного развития. Возможен и другой путь заражения — ятрогенный, то есть ветеринарными специалистами при проведении ветеринарно-профилактических (вакцинации, химиотерапевтические обработки, подкожные, внутримышечные инъекции и т. д.) и диагностических мероприятий (взятии крови, соскобов) [41, 61].

В литературе встречается информация, что вирус БШ обнаруживается в сперме и эмбрионах, полученных от заражённого скота [69, 75].

Главным биологическим переносчиком вируса БШ являются мокрецы рода Culicoides (семейство Сeratopogonidae), одни из самых мелких кровососущих двукрылых насекомых комплекса «гнус». Вирус реплицируется в слюнных железах самок мокрецов в течение 4-16 суток в зависимости от температуры окружающей среды и влажности, передается трансовариально и трансстадийно. Вирус БШ выявлен в пулах мокрецов (Сulicoides obsoletus, C.dewulfi, C.pulicaris, С. рипСаш), отобранных на территории ряда стран Европы (Дании, Норвегии, Нидерландов, Германии, Бельгии, Италии и Польши). Ряд исследователей считают, что вирус БШ передается при укусах других кровососущих, в том числе и комарами (СиНс^ае). Важную роль в заражении животных играет сезон года, в зависимости от которого происходит изменение количества насекомых, обычно достигающего максимума в конце лета / начале осени (август / сентябрь) и резко падает, как только начинаются заморозки [7, 12, 20, 48, 49, 50, 55, 64, 121].

2.2.1 Строение вируса болезни Шмалленберг Вирус БШ принадлежит к семейству буньявирусы (Bunyaviridae), роду ортобуньявирусы (Orthobunyavirus), серогруппе Симбу ^тЬи serogroup). Самыми известными представителями этой группы являются: вирус болезни Найроби, вирус болезни Акабане, вирус лихорадки долины Рифт, вирус

крымско-конголезской геморрагической лихорадки, вирус Сатупери, вирус Айно, вирус Дугласа и др. [59].

Первоначальный филогенетический анализ генома вируса БШ показал, что вирус БШ на 69% идентичен с вирусом Акабане по L сегменту, на 71% идентичен с вирусом Айно по М сементу и на 97% идентичен с вирусом Шамонды по S сегменту. Дополнительный анализ последовательности генома выявил, что М сегмент ортобуньявирусов Сатупери и Дугласа демонстрирует более высокую идентичность с вирусом БШ, тогда как S и L сегменты ближе к вирусу Шамонды. Таким образом, установлено, что вирус БШ это реассортант, геном которого представлен S и L сегментами вируса Шамонда и М — вируса Сатупери серогруппы Симбу [18, 67, 83, 105], что наглядно демонстрирует филогенетическое дерево (рис.2)

Рисунок 2 - Филогенетические связи между вирусом Шмалленберга и ортобуньяви-русами серогрупп Simbu, Bunyamwera и California [59]

Вирус БШ имеет сферическую форму и диаметр 100 нм. Геном представлен РНК с отрицательной полярностью, состоящей из трех сегментов (рисунок 3): L - большого, кодирующего РНК-полимеразу (транскриптазу), S - малого, кодирующего нуклеокапсидный белок (N), играющий важную роль

в реакции связывания комплемента и неструктурный протеин (КБш), и М -среднего, кодирующего поверхностные гликопротеины (01 и 02), которые отвечают за фиксацию вируса, слияния его с клеткой, гемагглютинацию и индукцию нейтрализующих антител (рис.3) [4, 31, 42, 57, 122, 120].

Рисунок 3 - Структура генома вируса болезни Шмалленберг [59]

Большинство вирусов из серогруппы Симбу не считаются зоонозны-ми, за исключением вируса Оропуша, который может заражать людей и вызывать сильные симптомы, подобные гриппу. До настоящего времени никаких данных о заражении вирусом БШ у людей не сообщалось, и в сыворотках не было обнаружено нейтрализующих вирус БШ антител от лиц (фермеров и ветеринаров), подвергшихся воздействию вируса [76, 99].

2.2.2 Устойчивость вируса Вирус БШ чувствителен к эфиру и детергентам, быстро инактивиру-ется при температуре 50-60°С в течение 30 минут, чувствителен к дезинфек-тантам, применяемым в отношении микроорганизмов второй группы устойчивости: 1 % глутаральдегиду, 70 % этанолу, формальдегиду. Может сохранять инфекционную активность при замораживании при температуре -70°С, чувствителен к жирорастворителям и детергентам, кислотам, не может длительное время существовать вне хозяина или вектора [44].

2.2.3 Эпизоотическая ситуация в мире Существует несколько версий того, как вирус БШ появился в Европе. Согласно одной из них, возбудитель существовал и раньше, но не вызывал

клинических проявлений болезни у домашних животных. По другой версии, он был занесен в Европу из стран Южного полушария инфицированными птицами или мокрецами (Culicoides) [8, 46, 103].

Также, имеются данные, что возбудитель БШ существовал задолго до появления в Европе в 2011 г., на что указывает наличие серопозитивных сывороток КРС при проведении исследований на территории Турции в 2013г. [32].

По данным доктора M. Beer (FLI, Riems, Германия), животные с антителами к вирусу БШ были выявлены в большинстве стран Европейского союза, а также на территории Казахстана [7, 6, 33].

С 2011 по 2012 гг. БШ выявлена в Норвегии, Швеции и Финляндии -вирус БШ обнаружен в образцах из 3 пулов мошек, отловленных в Швеции. В Норвегии антитела к вирусу выявлены в молоке коров, большая часть образцов продукта имела антитела, выявляемые в ИФА и РН [92]. В это же время в южной Европе вирус был уже обнаружен во Франции, Испании (Андалусия) и Италии (включая Сардинию) [93].

В конце октября 2012 года вирус БШ был обнаружен в Ирландии у КРС [106, 90], а через несколько дней - в Северной Ирландии у теленка [91].

В конце декабря 2012 года вирус БШ впервые был обнаружен в Чешской Республике в связи с рождением уродливых ягнят [33]. В середине января 2013 года первые случаи вируса БШ были подтверждены в Эстонии у плодов овец [86], а в конце января присутствие данного возбудителя было отмечено у овец в Словении [87].

Вирусом БШ было инфицировано более 90 % национального стада КРС Австрии. Первая вспышка БШ в стране развивалась в течение 6 недель c июля по август 2012 г. [95].

В начале октября 2012 года присутствие антител к вирусу БШ было зарегистрировано в западной Польше у коз, в конце июля 2012 года [74, 88] и в Швеции у коров [89].

За 2011-2012 гг. количество зарегистрированных случаев БШ заметно расширилось. В северном регионе Европы болезнь была зарегистрирована в Шотландии и на материковой Скандинавии — в Норвегии, Финляндии и Швеции. На востоке Европы вирус БШ выявлен в Эстонии, Латвии, Венгрии, Словении и Хорватии. Биологическим и серологическим тестами были подтверждено инфицирование КРС, овец, коз, альпаков, бизонов, буйволов, лам, лосей, ланей, косуль и благородных оленей. Вирус БШ был обнаружен методом ОТ-ПЦР у зубров, оленей и лосей. БШ была зарегистрирована в Бельгии (12 случаев), Великобритании (266), Германии (1382), Испании (1), Италии (1), Люксембург (1), Нидерландах (345), Франции (1457) и Швейцарии (19), а также в Дании, Австрии и Польше [7, 59, 98, 109, 119].

Агентство по здоровью животных и растений (APHA) сообщает, что до апреля 2013 г. было 1750 случаев БШ в каждом графстве Англии и Уэльсе, кроме того на большей части Шотландии [83].

В начале 2013 г. БШ была подтверждена в Венгрии и Словении [87], а в июне 2013 г. антитела были обнаружены у КРС в Республике Сербия [104].

С мая 2012 г. ранее неблагополучные страны Европы прекратили отчетность о БШ в WAHID системы МЭБ в качестве «новой болезни». Вероятно в связи с этим, а также другими причинами, с марта 2014 г. заметно снизилось количество случаев БШ в Европе и Азии.

В 2016 году в Ливане проводились исследования по распространенности вируса БШ, а также других вирусов серогруппы Simbu, в результате чего 122 животных были серопозитивными к вирусу БШ. Серопозитивные овцы в основном находились на юге Ливана [31].

В марте 2017 г. APHA подтвердило вирус БШ у ягнят в 84 хозяйствах Англии, 25 в Уэльсе, а также у телят в трех хозяйствах на территории Англии [103].

По данным Института агропищевой промышленности и биологических наук (AFBI), вирус БШ распространился на запад по территории Север-

ной Ирландии. В настоящее время выявлен вирус БШ в 8 случаях абортов ягнят в графствах Фермана и Тирон. Дальнейшие диагностические исследования показали присутствие вируса БШ в пробах головного и спинного мозга, а также легких [28].

Также отмечается рост серопревалентности против вируса БШ в период с июня по сентябрь 2016 года в популяции овец Бельгии [61], а также в стадах овец в центральной Португалии в период с 2015 по 2016 гг. [114].

Из зарубежных источников появляется информация о распространении вируса БШ за пределы Европы и Кавказа. Так, например, в Эфиопии и Мозамбик выявлено массовое распространение данного возбудителя среди КРС [116, 118]. Более того, антитела к вирусу БШ выявлены также у КРС в Китае [127] и популяции лошадей на северо-западе Республики Иран [97].

Важно отметить, что результаты работ ученых из стран ЕС [32, 61, 69, 119] свидетельствует о том, что БШ, возможно, стала эндемичной в Европе.

Таким образом, из всего вышесказанного следует, что БШ распространена повсеместно на территории стран Европы и РФ, а также отмечены случаи выявления БШ в странах африканского континента и Азии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Губенко Олеся Григорьевна, 2020 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Арбовирусы и арбовирусные инфекции / Д.К. Львов, С.М. Клименко, С.Я. Гайдамович [и др.]. - М.: Медицина, 1989. - 336 с.

2. Балашова, Е.А. Разработка средств и методов лабораторной диагностики болезни Акабане: дис. канд. биол. наук: 03.00.06 / Балашова Елена Алексеевна. - Покров, 1993. -24 с.

3. Болезнь Шмалленберг - новое заболевание жвачных в Европе /

A.В. Луницин, Н.И. Сальников, Е.Г. Никитина [и др.] // Ветеринария. - 2012. - № 4. - С. 23-26.

4. Болезнь Шмалленберга: молекулярно-биологические особенности и клиническая картина (обзор) / А.В. Спрыгин, А.В. Кононов, Ю.Ю. Бабин,

B.А. Мищенко // Сельскохозяйственная биология. - 2012. - № 6. - С. 24-34.

5. Букринская, А.Г. Вирусология / А.Г. Букринская. - М.: Медицина, 1986. - 336 с.

6. В Северном Казахстане были уничтожены триста коров, зараженных вирусом Шмалленберга, а в Западном Казахстане они гибнут от бешенства [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://russian.china.org.cn/international/txt/2013-02/19/content_27991998.htm

7. Ветеринарно-эпидемиологическая обстановка в Российской Федерации и странах мира: информационное сообщение № 31 от 27.02.2013 г. / Информационно-аналитический центр Россельхознадзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://emeat.ru/new.php?id=62693

8. Вирус болезни Шмалленберг: пути заражения и диагностика / Д. Колбасов, Н. Сальников, Е. Никитина [и др.] // Агро-Рынок. - 2012. - октябрь. - С. 48-49.

9. Вирус Шмалленберг: появление, распространение, диагностика [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://socialvet.rU/blog/wiki/2594.html#cut

10. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин [и др.]. - М.: ВНИ-ТИБП, 1998. - С. 747-750.

11. Гайдамович, С.Я. Арбовирусы: классификация и таксономия // Арбовирусы. - М.,1986. - С.5-15

12. Глухова, B.M. Фауна СССР. Насекомые двукрылые. Т. 3, вып. 5а / B.M. Глухова - Л., 1989.

13. Заболевание крупного рогатого скота «болезнь Шмалленберг» выявлено на территории Нижегородской области [электронный ресурс]. -Режим доступа: http://www.niann.ru/?id=432255

14. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных: учебное пособие для студентов высших учебных заведений по специальности 31.08.00 «Ветеринария» / Д.А. Васильев, В.Ю. Луговцев, А.А. Колонцов [и др.]. - Ульяновск, 2002. - 268 с.

15. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных: учебное пособие для студентов высших учебных заведений по специальности 31.08.00 «Ветеринария» / Д.А. Васильев, В.Ю. Луговцев, А.А. Колонцов [и др.]. - Ульяновск, 2002. - 268 с.

16. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин — М: Высшая школа, 1990.— 352 с.

17. Львов, Д.К. Буньявирусы / Д.К. Львов // Успехи современной биологии, 1981. - Т.92. - С. 223-242

18. Макаров, В.В. Трансмиссивные экзотические инфекции животных на неэндемичных территориях / В.В. Макаров // Пест-менеджмент. -2012. - №2. - С. 17-30.

19. Методические рекомендации по инактивации вируса гриппа птиц бета-пропиолактоном / И.А. Чвала, С.В. Фролов, Т.Б. Манин [и др.]. - Владимир, 2008 г.

20. Мокрецы рода Culicoides (Díptera: Ceratopogonidae) и их роль в распространении блютанга и болезни Шмалленберга: научное издание / А. В.

Спрыгин, О. А. Федорова, Ю. Ю. Бабин [и др.] // Сельскохозяйственная биология. - 2015. - Т. 50. - № 2. - С. 183-197.

21. Молекулярная биология вирусов / В.И. Агол, И.Г. Атабеков, В.Н. Крылов, Т.И. Тихоненко. - М.: Наука, 1971. - 298 с.

22. Нго, Т.Т. Иммуноферментный анализ / Т.Т. Нго, Г. Ленхофф. -М.: Мир, 1988. - 444 с.

23. Сергеев, В.А. Репродукция и выращивание вирусов животных /

B.А. Сергеев. - М.: Колос, 1976. - 200 с.

24. Статистические методы анализа в клинической практике / П.О. Румянцев, В.А. Саенко, У.В. Румянцева, С.Ю. Чекин. — Режим доступа: http: //www.kantiana. ru/medicinal/ help/StatMethodsInClinics.pdf

25. Частная вирусология: руководство. Т.2 / под ред. В.М. Жданова,

C.Я. Гайдамович. - М.: Медицина, 1982. - С. 340-374.

26. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 10 от

22.01.2013 г. / Информационно-аналитический центр Россельхознадзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/messages/1222.html

27. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 224 от

23.10.2014 г. / Информационно-аналитический центр Россельхознадзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/messages/1222.html

28. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 43 от 28.02.2018 г. / Информационно-аналитический центр Россельхознадзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: 8 URL: http://www.thescottishfarmer.co.uk/news/16035707.Schmallenberg virus spreadi ng_in _Northern_Ireland/

29. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 58 от 9.04.2013 г. / Информационно-аналитический центр Россельхознадзора

[электронный ресурс]. - Режим доступа:

http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/messages/1271 .html

30. Эпизоотическая ситуация: информационное сообщение № 84 от 29.04.2014 г. / Информационно-аналитический центр Россельхознадзора [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/messages/1554.html

31. Abi-Rizk, A. Seroprevalence of virus and other Simbu group viruses among the Lebanese sheep / A. Abi-Rizk, T. Kanaan, J. El Hage // Open Vet J. -2017. - Vol. 7. - P. 290-293.

32. Antibodies to Schmallenberg virus in domestic livestock in Turkey / A.K. Azkur, H. Albayrak, A.Risvanli [et. al.] // Trop Anim Health Prod. - 2013. -Vol.45. - P. 1825-1828.

33. Beer, M. Schmallenberg virus - a novel Orthobunyavirus emerging in Europe / M. Beer, F.J. Conraths, W.H. van der Poel // Epidemiol. Infect. - 2013. -Vol. 141, № 1. - P. 1-8.

34. Bell, R. Prevention of Schmallenberg virus / R. Bell // Vet. Rec. -2012. - Vol. 170, № 8. - P. 212.

35. Blakqori, G. Efficient cDNA-based rescue of La Crosse bunyaviruses expressing or lacking the nonstructural protein NSs / G. Blakqori , F. Weber // J Virol. -2005. - Vol. 79, № 16. - P. 10420-10428.

36. Blakqori, G. The small genome segment of Bunyaamwera orthobun-yavirus harbours a single transcription-termination signal / G. Blakqori, A.C. Lowen, R.M. Elliot // J. Gen. Virol. - 2012. - V. 93, № 7. - P.1449-1455.

37. Bouchemla, F. Epizootiological study on spatiotemporal clusters of Schmallenberg virus and Lumpy skin diseases: The case of Russia / F. Bouchemla, V.A. Agoltsov, S.V. Larionov // Veterinary World. - 2018. - Vol. 11, № 9. - P. 1229-1236.

38. Breard, E. Validation of a commercially available indirect ELISA using a nucleocapside recombinant protein for detection of Schmallenberg virus antibodies/ E. Breard, E. Lara, L. Comtet // PLoS One. - 2013. - Vol. 8: e53446.

39. Bunyaviral diseases of animal // OIE. Manual of Diagnosstic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. - Paris, 2008. - Vol.2. - P 1165-1176

40. Bunyaviridae / D.H.L. Bishop [et.al] // Intervirology. - 1980. - Vol. 14. - P. 125-143.

41. Calzolari, M. Could drought conditions trigger Schmallenberg virus and other arboviruses circulation? / M. Calzolari, A. Albieri // International Journal of Health Geographics. - 2013. - Vol. 12. - P. 7.

42. Characterization of monoclonal antibodies against the G1 and N proteins of LaCrosse and Tahyna, two California serogroup bunyaviruses / F. Gonza-lez-Scarano, R.E. Shope, C.E. Calisher [et.al.] // Virology. -1982. - Vol. 120. - P. 42-53.

43. Comparative analysis to determine the most appropriate tissue for Schmallenberg virus detection by RT-PCR in aborted lambs and calves / N. De Regge, H, Van Loo, G. Bertels [et. al.] // Proc. EPIZONE 6th Annu. Meet. 2012. - Brighton, 2012. - P. 13.

44. Congenital abnormalities in foetal lambs after inoculation of pregnant ewes with Akabane virus / I.M. Parsonson, A.J. Della-Porta, M.D. Murray [et. al.] // Australian Veterinary Journal. - 1975. - Vol. 51. - P. 585-586.

45. Conraths, F.J. Schmallenberg virus, a novel orthobunyavirus infection in ruminants in Europe: potential global impact and preventive measures / F.J. Conraths, M. Peters, M. Beer // N Z Vet J. - 2013. - Vol. 61, №2. - P.63-67.

46. Culicoides biting midges, arboviruses and public health in Europe / S. Carpenter, M. Groschup, C. Garros [et. al.] // Antiviral Research. - 2013- Vol. 100. - P.102-113.

47. Culicoides as vectors of Schmallenberg virus / L.D. Rasmussen, B. Kristensen, C. Kirkeby [et.al.] // Emerg. Infect. Disease. - 2012. - Vol. 18. - P. 1204-1206.

48. De Regge, N. Akabane, Aino and Schmallenberg virus-where do we stand and what do we know about the role of domestic ruminant hosts and Culicoides vectors in virus transmission and overwintering / N. De Regge // Curr Opin Virol. - 2017. - Vol. 27. - P. 15-30.

49. Detection of Schmallenberg virus in different Culicoides spp. by realtime RT-PCR / N. De Regge, I. Deblauwe, R. De Deken [et. al.] // Transbound Emerg Dis. -2012. - Vol. 44. - P. 471-475.

50. Detection of the Schmallenberg virus in nulliparous Culicoides obso-letus/scoticus complex and C. punctatus-The possibility of transovarial virus transmission in the midge population and of a new vector / M. Larska, L. Lechowski , M. Grochowska [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2013. - Vol. 166 № 3-4. - P. 467-473.

51. Development and evaluation of an indirectenzyme-linked immunosorbent assay forserological detection of Schmallenberg virusantibodies in ruminants using whole virusantigen / K. Näslund, G. Blomqvist, C. Vernersson [et al.] // Veterinaria Scandinavica. - 2014. - Vol. 8. - P. 1-8.

52. Development and validation of an indirect enzyme-linked immuno-sorbent assay for the detection of antibodies against Schmallenberg virus in blood samples from ruminants / H.M.J.F. Van der Heijden, R.J. Bouwstra, M.H. Mars [et. al.] // Res. Vet. Science. - 2013. - Vol. 54, №2. - P. 731-735.

53. Development of a pan-Simbu real-time reverse transcriptase PCR for the detection of Simbu serogroup viruses and comparison with SBV diagnostic PCR systems / M. Fischer, H. Schirrmeier, K. Wernike [et al.] // Virol J. - 2013. -Vol. 10. - P. 127-130.

54. Diagnosis of Schmallenberg virus infection in malformed lambs and calves and first indications for virus clearance in the fetus / N. De Regge, T. van den Berg, L. Georges, B. Cay // Vet Microbiol. - 2012. - Vol. 162. - P. 595-600.

55. Diarree en productiedaling op Nederlandse melkbedrijven door het Schmallenbergvirus / J. Muskens, A.J. Smolenaars, W.H. Van der Poel [et al.] // Tijdschr. Diergeneeskd. - 2012. - Vol. 137. - P. 112-115.

56. DNA vaccination regimes against Schmallenberg virus infection in IFNAR-/- mice suggest two targets for immunization / Y. Hani, Boshra, D. Charro [et al.] // Antiviral Research. - 2017. - Vol.141. - P. 107-115.

57. Dynamics of Schmallenberg virus infection within a cattle herd in Germany, 2011 / K. Wernike, C. Silaghi, M. Nieder [et.al.] // Epidemiol Infect. -2014. - Vol. 142. - P. 1501-1504.

58. EFSA. "Schmallenberg" virus: Analysis of the epidemiological data and Impact assessment // EFSA J. - 2012 Vol. 10, №6. - 2012. - P. 2768.

59. Epidemiology, molecular virology and diagnostics of Schmallenberg virus, an emerging orthobunyavirus in Europe / V. Doceul, E. Lara, C. Sailleau [et al.] // Vet. Res. - 2013. - Vol. 44. - P. 31.

60. Epidemiology, Molecular Virology and Diagnostics of Schmallenberg Virus, an Emerging Orthobunyavirus in Europe [электронный ресурс]. -Режим доступа: https://en.engormix.com/dairy-cattle/articles/epidemiology-molecular-virology-diagnostics-t35672.htm

61. Evidence of extensive renewed Schmallenberg virus circulation in Belgium during summer of 2016 - increase in arthrogryposis-hydranencephaly cases expected / C. Sohier, I. Deblauwe, T. Van Loo [et. al.] //Transbound Emerg Dis.-2017.-Vol. 64. - P. 1015-1019.

62. Family Bunyaviridae / A. Plyusnin, B.J. Beaty, R.M. Elliot [et al.] // Virus Taxonomy: classification and nomenclature of viruses: Ninth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. - London, 2012. - P.725-741.

63. Fetopathie effects of experimental Schmallenberg virus infection in pregnant goats / E. Laloyab, E. Breardb, S. Trapp [et al.] // Veterinary Microbiology. - 2017. -Vol. 211. - P. 141-149.

64. First report of Schmallenberg Virus Infection in Cattle and Midges in Poland / M. Larska , M.P. Polak , M. Grochowska [et al.] // Transboundary and Emerging Diseases. - Vol. 60, №2 - 2013. - P. 97-101.

65. Genetic diversity and reassortments among Akabane virus field isolates / T. Kobayashi, T. Yanase, M. Yamakawa [et al.] // Arch.Virol. - 2012. -Vol. 157. - P. 1611-1616.

66. Genetic evidence for an interferon-antagonistic function of rift valley fever virus nonstructural protein NSs / M. Bouloy, C. Janzen, P. Vialat [et al.] // J Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 1371-1377.

67. Genetic reassortment between Sathuperi and Shamonda virus of the genus Orthobunyavirus in nature: implications for their genetic releationship to Schmallenberg virus / T. Yanase, T. Kato, M. Aizawa [et al.] // Archives of Virology. - 2012. - Vol. 157. - P. 1611-1616.

68. Hechinger, S. Single immunization with an inactivated vaccine protects sheep from Schmallenberg virus infection / S. Hechinger, K. Wernike, M. Beer // Vet Res. - 2014. - Vol. 45, №1. - P. 79.

69. Hoffmann, B. First detection of Schmallenberg virus RNA in bovine semen, Germany / B. Hoffmann, C. Schulz, M. Beer // Veterinary Microbiology. -2014. - Vol. 20. - P. 337-339.

70. Inactivated Schmallenberg virus prototype vaccines / K. Wernike, V.M. Nikolin, S. Hechinger [et al.] // Vaccine. - 2013. - Vol. 31. - P. 3558-3563.

71. Inhibition of RNA polymerase II phosphorylation by a viral interferon antagonist / D. Thomas, G. Blakqori, V. Wagner [et.al.] // J Biol Chem. - 2004. -Vol. 27, № 930. - P. 31471-31477.

72. Iquitos Virus: A Novel Reassortant Orthobunyavirus Associated with Human Illness in Peru / P. Aguilar, A. Barrett, M. Saeed [et al.] // Negl. Trop. Dis.

- 2011. - Vol. 5. - P. 1315.

73. Jacobson, R.H. Validation of serological assays for diagnosis of infectious diseases // Rev. Sci. Tech. OIE. -1998. -Vol. 17, № 2. - P.469-486

74. Kaba, J. Schmallenberg virus antibodies detected in Poland / J. Kaba, M. Czopowicz, L. Witkowski // Transbound Emerg Dis. - 2013. - Vol. 60. -P. 1 - 3.

75. K^sik-Maliszewska, J. Detection of schmallenberg virus RNA in bull semen in Poland / J. K^sik-Maliszewska, M. Larska // Polish Journal of Veterinary Sciences. -2016. - Vol. 19. - P. 655-657.

76. Lack of evidence for Schmallenberg virus infection in highly exposed persons / T. Ducomble, H. Wilking, K. Stark [et al.] // Emerg Infect Dis. Germany.

- 2012. - Vol. 18. - P. 1333-1335.

77. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. -Vol. 227. -P. 680 -685.

78. Latest update on the Schmallenberg Virus (SBV) [электронный ресурс] / 2017 г. - Режим доступа: https://www.farminglife.com/farming-news/latest-update-on-the-schmallenberg-virus-sbv-1-8001789

79. Lewis, C. Prevention of Schmallenberg virus / C. Lewis // Vet. Rec. -2012. - Vol. 170, № 9. - P. 236.

80. Molecular biology of the Bunyaviridae / R.M. Elliott // Journal of General Virology. - 1990. - Vol. 71. - P. 501-522.

81. Molecular Epidemiology of Oropouche Virus, Brazil / H.Vasconcelos, M. Nunes, L. Casseb [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2011. - Vol. 17. - P. 800-806.

82. Neumann, G. Reverse genetics systems for the generation of segmented negative-sense RNA viruses entirely from cloned cDNA / G. Neumann, Y. Ka-waoka // Curr Top Microbiol Immunol. - 2004. - Vol. 283. - P. 43-60.

83. Novel orthobunyavirus in Cattle, Europe, 2011 / B. Hoffmann, M. Scheuch, D. Höper, [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2012. - Vol. 18. - P. 469-472.

84. Oral exposure, reinfection and cellular immunity to Schmallenberg virus in cattle / K. Wernike, M. Eschbaumer, H. Schirrmeier [et.al.] // Vet Microbiol.

- 2013. - Vol. 165. - P. 155-159.

85. Organ distribution of Schmallenberg virus RNA in malformed newborns / S. Bilk, C. Schulze, M. Fischer [et al.] // Vet Microbiol. - 2012. - Vol. 159.

- P. 236-238.

86. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (05). Estonia, Sweden, Czech Republic, Clinical. ProMed-mail. - 2013. - Jan, 16 [cited - 2013, Jan 16] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www. promedmail. org/direct.php?id=20130116.1501701

87. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (08). (Slovenia) Suspected, Request For Information, Update. ProMed-mail. - 2013. - Jan, 21 [cited - 2013, Jan 21] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http: // www.promedmail.org/direct.php?id=20130126.1516151.

88. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (61). Poland. ProMed-mail. - 2012. - Oct, 1 [cited - 2012, Oct 1] [электронный ресурс].-Режим доступа: http: //www.promedmail .org/direct.php?id=20121001.1318740

89. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (62). Sweden (Blekinge), Positive Serology. ProMed-mail. - 2012. - Oct, 4 [cited - 2012, Oct 4] [электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.promedmail.org/direct.php? ID = +20121005.1326266

90. Promed-mail: Schmallenberg virus - Europe (69). Ireland (Cork) First Case. ProMed-mail. - 2012. - Oct, 30 [cited - 2012, Oct 30] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http: //www.promedmail. org/direct.php?id=20121031.1380923

91. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (70). UK (Northern Ireland) First Case. ProMed-mail. - 2012. - Nov, 1 [cited - 2012,

Nov 1] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org/direct.php?id=20121102.1387033.

92. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (71). Europe (71): Norway, UK, Netherlands. ProMed-mail. - 2012. - Nov, 16 [cited - 2012, Nov 16] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org/direct.php?id=20121117.1413952.

93. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (72). Italy (Sardinia), France, EU.ProMed-mail. - 2012. - Nov, 23 [cited - 2012, Nov 23] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail.org/direct.php?id=20121124.1422556.

94. ProMed-mail: Schmallenberg Virus - Europe (78). Czech Republic: Ovine, Suspected, Information Request. ProMed-mail. - 2012. - Dec, 21 [cited -2012, Dec 21] [электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.promedmail. org/direct.php?id=20121222.1465298.

95. ProMed-mail: Schmallenberg virus - Europe (60). Austria, UK (Wales), Belgium. ProMed-mail. - 2012. - Sep, 25 [cited - 2012, Sep 25] [электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.promedmail.org/direct.php?id=20120926.1310236.

96. Rapid serorogical profiling by enzyme-linked immunosorbent assay. 2. Comparison of computation methods for measuring antibody titers in a single serum dilution / D.B. Snyder, W.W. Marquardt, E.T. Mallison [et al.] // Avian Diseases. - 1982. - Vol. 27, № 2. - Р. 474-484.

97. Rasekh, M. Detection of Schmallenberg virus antibody in equine population of Northern and Northeast of Iran / M. Rasekh, A. Sarani, S.H. Hashemi // Vet World. - 2018. - Vol. 11. - P.30-33.

98. Reemerging Schmallenberg virus infections / F. Conraths, D. Kämer, K. Teske [et. al.] // Emerg Infect Dis. Germany. - 2013. - Vol. 19. - P.513-514.

99. Reusken, C. Lack of evidence for zoonotic transmission of Schmallenberg virus / C. Reusken, van den Wijngaard C, Van Beek P. // Emerg Infect Dis. -2012. - Vol. 18. - P. 1746-1754.

100. Roberts, H. Schmallenberg virus: Responding to the challenge / H. Roberts, C. Middlemiss, N. Gibbens // Vet. J. - 2012. - Vol. 194, № 1. - P. 1-2.

101. Schmallenberg disease in sheep or goats: Past, present and future / K. Lievaart-Peterson, S. Luttikholt, K. Peperkamp [et.al.] // Veterinary Microbiology. - 2015. - Vol. 181. - P. 147-153.

102. Schmallenberg virus - Two years of experiences / K. Wernike, F. Con-raths, G. Zanella [et al.] // Prev Vet Med. - 2014. - Vol. 116. - P. 423-434.

103. Schmallenberg Virus (SBV) [электронный ресурс] - Режим доступа: http://www.nadis.org.uk/bulletins/schmallenberg-virus-(sbv).aspx

104. Schmallenberg virus antibodies detected in dairy cows in the Republic of Serbia / J. Bojkovski, А. Vasic, D. Bugarski [et. al.] // Bulgarian Journal of Agricultural Science. - 2015. - Vol. 21, №4. - P. 916-918.

105. Schmallenberg virus as possible ancestor of Shamonda virus / K.V. Goller, D. Hoper, H. Schirrmeier [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2012. - Vol. 18. -P. 1644-1646.

106. Schmallenberg virus cases identified in Ireland / B. Bradshaw, J. Mooney, P.J. Ross [et. al.] // Vet Rec. - 2012. - Vol. 171. - P. 540-541.

107. Schmallenberg virus confirmed in Scotland [электронный ресурс]. -Режим доступа:http://www.fwi.co.uk/articles/19/04/2013/13 8709/schmallenberg-virus-confirmed-in-scotland.htm

108. Schmallenberg virus in central nervous system of ruminants / K. Hahn, A. Habierski, V. Herder [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 2013. - Vol. 19. -P.154-155.

109. Schmallenberg Virus in Domestic Cattle, Belgium, 2012 / M.M. Garigliany, C. Bayrou, D. Kleijnen [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2012. - Vol. 18, № 9. - P. 1512-1514.

110. Schmallenberg virus pathogenesis, tropism and interaction with the innate immune system of the host / M. Varela, E. Schnettler, M. Caporale [et al.] // PLoS Pathog. - 2013. - Vol. 9: e 1003133

111. Schmallenberg virus: Analysis of the epidemiological data and Impact assessment / European Food Safety Authority // EFSA J. - 2012. - Vol.10. - P. 2768-2856.

112. Schmallenberg virus: lessons from related viruses / H.J. Zentis, S. Zentis, Y. Stram [et al.] // Vet. Rec. - 2012. - Vol. 171, № 8. - P. 201-202.

113. Schmallenberg virus: Skeletal abnormalities in calves / M. Kerby, O. Jenkins, N. Perkins [et al.] // Vet. Rec. - 2013. - Vol. 172, № 13. - P. 345.

114. Serologic evidence for circulation at high altitude, Central Portugal, 2015-2016. / F. Esteves, R. Cruz, C. Vasconcelos-Nobrega [et al.] // Transbound Emerg Dis. - 2018. - Vol. 65, № 6. - P. 1553-1556.

115. Serological ELISA for SBV currently being evaluated // Vet. Rec. -2012. - Vol. 170, № 18. - P. 453.

116. Serological screening suggests presence of Schmallenberg virus in cattle, sheep and goat in the Zambezia Province, Mozambique / A.L. Blomström, H. Stenberg, I. Scharin [et. al.] // Transbound Emerg Dis. - 2014. - Vol. 61. - P. 289-292.

117. Serological surveillance of Schmallenberg virus infection in local and import cattle in the Russian Federation / O.P. Byadovskaya, E.E. Zimina, A.V. Piskunov [et. al.] // Intern. Conf. «Primed for tomorrow». -Denmark, Copenhagen, 2014. - P. 35-36.

118. Seroprevalence of Schmallenberg virus in dairy cattle in Ethiopia / B. Sibhat, G. Ayelet, E.Z. Gebremedhin [et. al.] // Acta Trop. -2018. - Vol. 178. - P. 61-67.

119. Spatial and temporal patterns of Schmallenberg virus in France in 2016 / K. Gache, S. Zientara, E. Collin [et al.] // Vet Rec. - 2018. - Vol. 182, № 20. - P. 575.

120. Structure of Schmallenberg orthobunyavirus nucleoprotein suggests a novel mechanism of genome encapsidation / H. Dong, P. Li, R.M. Elliott [et.al.] // J Virol. - 2013. - Vol. 87. - P. 593-601.

121. The emergence of Schmallenberg virus across Culicoides communities and ecosystems in Europe / T. Balenghien , N. Pages , M. Goffredo [et al.] // Preventive Veterinary Medicine. - 2014. - Vol. 116, № 4. - P. 360-369.

122. Three-segment RNA genome of Lumbo virus (Bunyavirus) / M. Bou-loy, S. Krams-Ozden, F. Horodniceanu, C. Hannoun // Intervirology. - 1973. -Vol. 2. - P. 173-180.

123. Van der Poel, W.H. Diagnostics for Schmallenberg virus / W.H. van der Poel // Vet Rec. - 2012. - Vol. 171. - P. 294-295.

124. Walter, C.T. Recent advances in the molecular and cellular biology of bunyaviruses / C.T. Walter, J.N. Barr // J Gen Virol. - 2011. - Vol. 92. - P. 24672484.

125. Wernike K., Hoffmann B., Beer M. Schmallenberg Virus // Vaccines and Diagnostics for Transboundary Animal Diseases / ed. J.A. Roth, J.A. Richt, I.A. Morozov. - Dev. Biol. (Basel), 2013. - Vol. 135. - P. 175-182.

126. Yilmaz, H. Detection and partial sequencing of Schmallenberg virus in cattle and sheep in Turkey/ H. Yilmaz, B. Hoffmann, N. Turan // Vector Borne Zoonotic Dis. - 2014. - Vol. 14. - P. 223-225

127. Zhai, S.L. Preliminary serological evidence for Schmallenberg virus infection in China / S.L. Zhai, D.H. Lv, X.H. Wen // Trop. Anim. Health Prod. -2018. - Vol. 50. - P. 449-453.

S. ПРИЛОЖЕНИЯ