Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к вирусам лейкоза птиц тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Лазарева, Светлана Петровна

• Лазарева, Светлана Петровна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Лазарева, Светлана Петровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общие сведения о вирусах лейкоза птиц и вызываемых ими заболеваниях

2.1.1. История открытия вирусов лейкоза птиц

2.1.2. Классификация вирусов лейкоза птиц

2.1.3. Морфология, химический состав и структура вирионов

2.1.4. Устойчивость к физическим и химическим воздействиям

2.1.5. Антигенная активность

2.1.6. Эпизоотологические данные

2.1.6.1. Восприимчивые виды птиц

2.1.6.2. Распространение

2.1.6.3. Пути передачи

2.1.7. Клинические признаки инфекции и патоморфологические изменения

2.1.8. Профилактика заболеваний, вызываемых вирусами лейкоза птиц

2.2. Диагностика

2.2.1. Обнаружение генома вирусов лейкоза птиц

2.2.2. Выделение вирусов лейкоза птиц на культурах

клеток

2.2.2.1. Методы выделения ВЛП

2.2.2.2. Криоконсервирование клеток ФЭК

2.2.3. Обнаружение антигена вирусов лейкоза птиц

2.3. Выявление антител к вирусу лейкоза птиц методом иммуноферментного анализа

2.3.1. Сущность и принципы метода

2.3.2. Непрямой вариант ИФА

2.3.2.1. Носители для сенсибилизации антигена

2.3.2.2. Антиген

2.3.2.3. Сенсибилизация планшет антигеном

2.3.2.4. Конъюгат

2.3.2.5. Анализ результатов

2.3.3. Преимущества иммуноферментного анализа перед другими методами выявления антител к вирусам лейкоза птиц

2.3.4. Выявление антител к вирусу лейкоза птиц с помощью иммуноферментного анализа

2.4. Заключение по обзору литературы

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы и методы

3.1.1. Материалы

3.1.2. Оборудование

3.1.3. Растворы и химреактивы

3.1.4. Методы

3.2. Результаты собственных исследований

3.2.1. Серологический мониторинг лейкоза птиц, проведённый с 2008 по 2015 гг. в птицеводческих хозяйствах Российской Федерации

3.2.1.1. Исследование сывороток крови кур на наличие типоспецифического антигена р27, проведённое в период 2008-2015 гг

3.2.1.2. Исследование сывороток крови кур на антитела к ВЛП^, проведённое в период 2008-2015 гг

3.2.1.3. Выявление вирусов лейкоза птиц на территории Российской Федерации

3.2.2. Выявление генома вирусов лейкоза птиц на территории Российской Федерации с 2008 по 2014 гг

3.2.3. Выделение изолятов ВЛП^ из проб патологического материала в первичной культуре клеток ФЭК

3.2.4. Выбор изолята для разработки иммуноферментной тест-системы

3.2.4.1. Определение титра инфекционной активности выделенных изолятов ВЛП^

3.2.4.2. Исследование выделенных изолятов ВЛП^ на контаминацию

3.2.4.3. Определение нуклеотидной последовательности генома выделенных изолятов ВЛП^

3.2.5. Изучение биологических свойств штамма АКУ^/ СЬВ-908и

3.2.6. Получение культурального препарата антигена ВЛП для использования в серологических реакциях

3.2.6.1. Криоконсервирование первично-трипсинизированных клеток фибробластов эмбрионов кур

3.2.6.2. Подбор условий для получения антигена ВЛП

3.2.6.2.1. Определение оптимального срока инкубации штамма вируса АЬУ-1/СЬВ-908и

3.2.6.2.2. Определение оптимальной инфицирующей концентрации штамма АЬУ-1/СЬВ-908и

3.2.6.3. Очистка и концентрирование культурального антигена ВЛП

3.2.7. Разработка тест-системы для выявления антител к ВЛП в непрямом варианте ИФА

3.2.7.1. Определение рабочей концентрации антигена ВЛП

3.2.7.2. Проверка специфичности антигена ВЛП

3.2.7.3. Исследование стабильности антигена ВЛП во время хранения при 4°С

3.2.7.4. Получение контрольных сывороток к ВЛП

3.2.7.5. Определение оптимального разведения исследуемых сывороток и выведение уравнения для вычисления титра исследуемых сывороток

3.2.7.6. Определение позитивно-негативного порога

3.2.7.7. Выбор допустимых значений контрольных сывороток

3.2.7.8. Определение воспроизводимости метода

3.2.7.9. Оценка чувствительности, специфичности, точности, степени согласованности полученных результатов разработанной тест-системы по отношению к коммерческому набору фирмы ГОЕХХ

3.2.8. Применение разработанной тест-системы при проведении скрининговых исследований сывороток крови на антитела к ВЛП

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВЛП - вирусы лейкоза птиц ВЛП-А - вирусы лейкоза птиц подгруппы А ВЛП-В - вирусы лейкоза птиц подгруппы В ВЛП^ - вирусы лейкоза птиц подгруппы J

ОТ-ПЦР-РВ - обратная транскрипция-полимеразная цепная реакция в

режиме реального времени

ИФА - иммуноферментный анализ

РФ - Российская Федерация

ЦПД - цитопатическое действие

ЭД - эффективная доза

IgG - иммуноглобулин G

КРС - крупный рогатый скот

СПФ - свободный от специфических патогенов

ЧДА - чистый для анализа

ТБР-Т - трис-буферный раствор с добавлением твин-20

БСА - бычий сывороточный альбумин

КК - культура клеток

ФЭК - фибробласты эмбрионов кур

ПААГ - полиакриламидный гель

КББ - карбонатно-бикарбонатный буфер

ГТЦ - гуанидин тиоционат

ДСН - додецилсульфат натрия

ФБР - фосфатно-буферный раствор

АЭЭИ - аминоэтилэтиленимин

АБТС - 2,2-азино-ди-3-этилбензотиазолин-6-сульфат

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к вирусам лейкоза птиц»

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность темы. Лейкозы птиц - группа неопластических заболеваний, вызываемых вирусами лейкозов птиц (ВЛП), принадлежащих к семейству Retroviridae [2, 9]. Наиболее часто выявляемые ВЛП делятся на 6 антигенных подгрупп: А, В, С, D, Е, I. Вирусы подгрупп А, В, С, D, I являются экзогенными и распространяются горизонтально (через корма, подстилку и т.д.) и вертикально (от несушки к потомству через альбумин яйца). ВЛП подгруппы Е относятся к группе эндогенных вирусов и передаются через геном от несушки к потомству [2].

ВЛП являются возбудителями таких заболеваний, как лимфоидный лейкоз, миелобластоз, миелоидный лейкоз, глиома, остеопетроз, гемангиомы и т.д. ВЛП, как и вирусы лейкоза КРС [3, 4, 5], вызывают поражение лимфоцитов.Общим признаком заболеваний является образование опухолей на внутренних органах, голове, конечностях [101]. У птицы, поражённой ВЛП, наблюдается снижение репродуктивности, качества яиц, повышается смертность от вторичных инфекций [98]. ВЛП способны пожизненно персистировать в организме птицы, однако под влиянием различных стресс-факторов существует вероятность их активизации [8, 28, 72].

Возбудители лейкоза птиц распространены в коммерческих птицеводческих хозяйствах во всём мире [22, 28, 29, 72, 74, 122, 154]. Чаще всего выделяют ВЛП-А и ВЛП-1. В птицеводческих хозяйствах Северной Америки у больной лейкозом птицы в 80% случаев выделяют изоляты ВЛП-А [77]. В последние годы на птицефабриках стран Юго-Восточной Азии наблюдается увеличение степени распространения инфекции, вызываемой ВЛП-1 [84, 171]. На большинстве птицефабрик РФ установлена циркуляция ВЛП среди поголовья кур яичного и мясного направления. В ходе проведения исследований по выделению изолятов ВЛП из патологического материала, поступавшего из птицефабрик Российской Федерации (РФ), в 69% образцов была установлена принадлежность изолятов к ВЛП-1 [13].

Изоляты других подгрупп ВЛП встречаются существенно меньше [40, 98, 159, 167].

На сегодняшний день коммерческих вакцин против ВЛП не разработано, и методы борьбы с инфекцией заключаются в выявлении вируса среди поголовья птицы, постановке диагноза, выбраковке и уничтожении больной птицы [2, 28, 72, 125, 128]. Своевременное осуществление данных мер возможно в случае постоянного контроля за распространением вируса в птицеводческих хозяйствах. Наиболее эффективными с этой точки зрения являются серологические исследования.

Среди методов выявления антител к ВЛП наиболее распространёнными являются реакция нейтрализации (РН) и ИФА. РН применялась в 70-80-е гг. для серологических исследований [9]. Данный метод обладает высокой чувствительностью, однако он являются трудоёмким для проведения мониторинговых исследований [153]. Непрямой вариант ИФА для выявления антител отличается простотой в исполнении, не требует существенных затрат времени, возможна автоматизация его промежуточных стадий.

1.2. Степень разработанности проблемы. На птицефабриках РФ распространены изоляты ВЛП подгрупп А, В и J [13]. На данный момент широкое применение в диагностике инфекции ВЛП получили коммерческие наборы фирм и ГОЕХХ (США), предназначенные для выявления антител к ВЛП^ и антител, общих для подгрупп А и В. Разработана иммуноферментная тест-система для выявления антител к экзогенным ВЛП, в основе которой - антиген, полученный из штамма ВЛП^ [63]. В РФ отечественных иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВЛП не существует.

1.3. Цели и задачи исследования. Целью работы являлась разработка тест-системы на основе непрямого варианта ИФА для выявления антител к ВЛП. Для выполнения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить распространения ВЛП на птицефабриках РФ в период с 2008 по 2015 гг.;

2. Выделить изоляты ВЛП из проб патологического материала, поступившего из птицефабрик РФ, изучить их биологические и молекулярно-генетические свойства;

3. Выбрать изолят для получения иммуноспецифических компонентов тест-системы для выявления антител к ВЛП, изучить его биологические свойства, подобрать оптимальные параметры культивирования данного изолята;

4. Получить иммуноспецифические компоненты: препарат антигена, вирусспецифические контрольные сыворотки;

5. Разработать тест-систему для выявления антител к ВЛП на основе иммуноферментного анализа при тестировании сывороток в одном разведении.

6. Провести апробацию тест-системы при проведении исследований сывороток крови кур из птицефабрик РФ.

1.4 Научная новизна. Выделено 8 изолятов ВЛП с применением первично-трипсинизированной культуры клеток фибробластов эмбрионов кур (КК ФЭК). Впервые в РФ получены и опубликованы в базе данных Genbank полноразмерные нуклеотидные последовательности геномов 3 выделенных изолятов ВЛП под номерами НМ776937, НМ776937, 1X855935, изучены биологические свойства изолята ВЛП, выбранного для получения антигена, подобраны оптимальные условия культивирования данного изолята. Разработана методика инактивации, очистки и концентрирования антигена ВЛП, получены гипериммунные сыворотки к ВЛП. Впервые в РФ разработана тест-система для выявления антител к ВЛП с помощью непрямого варианта ИФА при тестировании сывороток крови кур в одном разведении, проведена апробация тест-системы при исследовании полевых сывороток крови кур в ряде регионов РФ в 2014-2015гг.

1.5 Теоретическая и практическая значимость исследования.

Из патологического материала с применением разработанных методов выявления и выделения на первично-трипсинизированной КК ФЭК получено 8 полевых изолятов ВЛП. Полные геномные последовательности изолятов ALV-J/ SVR807, ALV-J/CLB-908U, ALV-J/CLB-905M опубликованы в базе данных Genbank.

Проведено депонирование штамма ALV-J/CLB-908U, использованного в дальнейшей работе. На примере штамма изучена возможность получения гипериммунных сывороток крови кур против ВЛП с использованием 40-суточных цыплят-бройлеров, определены оптимальный срок культивирования и инфицирующая концентрация ВЛП для получения вируссодержащего материала.

Получен препарат антигена ВЛП и гипериммунные сыворотки крови к данному вирусу для использования в серологических реакциях. Разработана тест-система для выявления антител к ВЛП с помощью непрямого варианта ИФА при тестировании сывороток крови кур в одном разведении.

В 2010-2015гг. разработаны, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» 5 методических указаний и рекомендаций.

1.6. Методология и методы исследований. Методология проведенных исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно-восприимчивых животных. В работе использовали молекулярно-биологические (ОТ-ПЦР-РВ, секвенирование, анализ нуклеотидных последовательностей), вирусологические (вирусвыделение, культивирование, титрование вируса), физико-химические (составление растворов заданной молярности и оценка концентрации водородных ионов), серологические методы (ИФА).

1.7. Положения, выносимые на защиту:

1. По данным проведенного серологического мониторинга в 20082015гг. ВЛП широко распространены среди коммерческого птицепоголовья РФ;

2. Из патологического материала кур, поступившего из птицефабрик, получены изоляты ВЛП, изучены их молекулярно-генетические свойства, для трех из них определены и опубликованы в базе данных Genbank полногеномные последовательности;

3. Из выделенных изолятов для разработки иммуноферментной тест-системы выбран и депонирован изолят ALV-J/CLB-908U, изучены его биологические свойства, оптимизированы условия культивирования штамма, получены иммуноспецифические компоненты для иммуноферментной тест-системы;

4. Разработанная иммуноферментная тест-система для определения титра антител к ВЛП при тестировании сывороток крови кур в одном разведении обладает высокой специфичностью и чувствительностью;

5. Результаты, полученные при сравнительном испытании более 900 проб сывороток крови кур с применением разработанной тест-системы и коммерческого набора, отличались не более, чем на 1-2%.

1.8. Личный вклад соискателя. Основной объём исследований проведён автором самостоятельно. Автор выражает искреннюю благодарность к.б.н. Волковой М.А., к.б.н. Никоновой З.Б., к.б.н. Шульпину М.И., к.б.н. Меньщиковой А.Э., ведущему технологу Ерошиной Т.И., коллективу референтной лаборатории вирусных болезней птиц, а также коллективу лаборатории эпизоотологии и мониторинга за консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы.

1.9. Степень достоверности и апробации результатов. Достоверность всех наиболее важных экспериментальных данных подтверждена соответствующими статистическими критериями и комиссионными испытаниями. Результаты исследований по теме диссертации были доложены и обсуждены на заседаниях учёного совета ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2008-2016 гг., Международной научной конференции молодых ученых «Инновационное развитие науки в обеспечении биологической безопасности» (респ. Казахстан, 2013г.), на 6-й

Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов «Инновационные процессы в АПК» (Москва, 2014 г.), на IV Международной научной конференции «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 55-летию учреждения аспирантуры для подготовки научных работников в ФГБУ «ВНИИЗЖ».

1.10. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для кандидатских и докторских диссертаций.

1.11. Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

В диссертационной работе представлены результаты исследований биологических свойств изолятов ВЛП, а также результаты исследований по разработке методов оценки гуморального иммунитета птиц.

Результаты научного исследования соответствуют 1, 6, 7, 8 и 10 пунктам паспорта специальности 03.02.02 «Вирусология».

1.12. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 156 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, который состоит из 179 источников, в том числе 159 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 18 рисунками. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную новизну и практическую значимость.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общие сведения о вирусах лейкоза птиц и вызываемых ими

заболеваниях

2.1.1. История открытия вирусов лейкоза птиц. Работы по исследованию лейкоза птиц начались ещё в конце XIX в. В 1868 году Roloff опубликовал сообщение о случае «лимфосаркомата». Сарапш в 1896 году описал лейкемию домашней птицы. В 1905 году ВийегйеМ ввёл понятие «нелейкозного лимфаденоза» при диагностировании заболевших кур [2]. Эллерман открыл восемь штаммов вируса лейкоза птиц и дал названия некоторым формам лейкоза, которые применяются до сих пор: эритроидный, миелоидный и лимфоидный [128].

Множество штаммов ВЛП было изучено исследователями США и в других странах в 20-х и 30-х годах XX века [41]. Начиная с 1960 года было проведено огромное количество исследований, в ходе которых была получена значительная часть информации о лейкозе птиц. В это время были проведены работы по изучению экспериментальной передачи лейкоза, разработаны методики выделения ВЛП в культуре клеток, выявлены особенности взаимодействия вируса и клетки, запускающие механизмы онкогенеза [85, 128].

К настоящему времени расшифрованы нуклеотидные последовательности генома многих штаммов вируса лейкоза птиц [25, 92, 98, 129].

Вирус лейкоза птиц подгруппы J (ALV-J) впервые был выделен в 1988г. в Великобритании от цыплят-бройлеров [72, 121, 125, 126, 154]. Вскоре был выделен и зарегистрирован штамм ВЛП^ HPRS-103 [128]. В 1992г. были доказаны онкогенные свойства ВЛП^ [44, 124, 128]. В 2002г. было установлено, что ВЛП^ может быть патогенным для несушек [154].

2.1.2. Классификация вирусов лейкоза птиц. Согласно данным современной классификации, вирусы лейкозно-саркомной группы относятся

к роду Alpharetrovirus семейства Retroviridae, подсемейства Orthoretrovirinae [1, 2]. Отличительная особенность вирусов семейства Retroviridae заключается в наличии у них фермента обратной транскриптазы, участвующего в образовании ДНК-содержащего провируса во время репликации вируса [1, 15, 45, 170]. ВЛП подразделяются на 6 антигенных подгрупп: А, В, С, D, Е, I. В основе деления - различный набор антигенов в составе вирусной оболочки у представителей данных подгрупп, разная интерферирующая активность в отношении вируса саркомы Рауса и способность поражать определенные фенотипы клеток [72, 125, 128, 173]. В зависимости от способа передачи вируса выделяют экзогенные и эндогенные ВЛП. К экзогенным относятся вирусы подгрупп А, В, С, D, I, передающиеся горизонтальным (контактным) и вертикальным (т.е. от несушки к потомству) путём, а к эндогенным - вирусы подгруппы Е, передающиеся через геном [9, 25, 31, 33, 55, 175]. Имеются также данные о выделении вирусов подгрупп F и G от обыкновенных, алмазных и золотых фазанов [85, 129, 136], подгруппы Н от венгерской куропатки [129] и подгруппы I от шлемоносного хохлатого перепела [162].

2.1.3. Морфология, химический состав и структура вирионов. По

ультраструктурным характеристикам ВЛП имеют одинаковые признаки. Диаметр вириона ВЛП составляет 80-145 нм, молекулярная масса - 5,06,0 109 дальтон. Вирионы имеют шаровидную форму и покрыты липопротеиновой оболочкой. На их поверхности имеются характерные выступы длиной около 8 нм с закруглёнными головками [1, 9, 15, 29, 45, 113]. В результате проведения специфического окрашивания становятся видны нуклеопротеиновые микрофиламенты спиралевидной формы диаметром 3-5 нм. Диаметр сердцевины составляет 35-45 нм. Нуклеокапсид имеет икосаэдрический тип симметрии. Величина плавучей плотности в сахарозе для ВЛП составляет

1,15-1,17г/см [1, 29, 113, 137].

В состав вириона входят 30—35 % липидов, 60—65 % белков, 2,2 % РНК и небольшое количество ДНК, возможно, клеточного происхождения [33].

Геном ВЛП может существовать в двух формах: геномной РНК или в виде ДНК, синтезированной на геномной РНК и встроенной в виде провируса в хромосому клетки-хозяина [1, 15]. Геномная РНК содержится только в зрелых вирионах и имеет молекулярную массу 1,0-1,2-109 дальтон [1]. Аналогичные особенности генома отмечают у вирусов лейкоза КРС [3, 4, 5]. Коэффициент седиментации геномной РНК составляет 60—70S. РНК с 4—5S в основном являются тРНК хозяина. Предположительно, эти РНК не играют никакой роли в репликации вируса. Однако встречается тРНК-праймер, связанный с 70S РНК, который играет определённую роль в жизненном цикле вируса. В составе вириона имеется также небольшое количество 18S и 28S рибосомных РНК, вирусных и клеточных мРНК и ДНК [45, 46, 103].

Молекула РНК ВЛП представлена тремя структурными генами: [10, 16, 20, 35]:

1. gag (около 2 тыс. п. н.), кодирующий внутренние структурные белки вириона;

2. pol (около 3 тыс. п. н.), кодирующий вирусную РНК-зависимую ДНК-полимеразу;

3. env (около 2 тыс. п. н.), кодирующий белки, находящиеся на поверхности вирусной оболочки.

Все ретровирусы, в том числе и ВЛП, характеризуются высокой степенью генетической вариабельности и, как следствие, разнообразием генетических вариантов изолятов. Появление множества генетических вариантов ретровирусов связано с низкой точностью репликации генома обратной транскриптазой. Следствием мутации изолятов ВЛП может

являться устойчивость новых вариантов вирусов к действию антител, сформировавшихся в ответ на исходные изоляты [128, 153, 175].

С помощью молекулярных исследований было показано, что возникновение ВЛП-J является результатом рекомбинации генома экзогенного и эндогенного ВЛП [31, 125, 128, 142]. В 1995 году B. Jirong и M. Skinner обнародовали информацию о полной геномной последовательности штамма ВЛП-J HPRS-103. Согласно полученным данным,

последовательность env гена вируса имеет 97% сходства с геномом штамма ВЛП-E EAV-HP, относящегося к эндогенным. Похожее подсемейство было обнаружено S. Benson, K. Conklin и другими учёными Университета Миннесоты и было названо ev/J. [31, 44, 128]. В начале 2000-х группа учёных под руководством B. Lupiani при исследовании изолята AF115 отметили, что участок гена env, кодирующий белок gp85, имеет высокую степень сходства с аналогичным участком генома ВЛП-В, а участок гена env, кодирующий gp37, гомологичен последовательности эндогенного ВЛП [89]. Таким образом, было показано, что различные изоляты ВЛП-J могут иметь существенные отличия в геномной структуре.

Сердцевина вириона ВЛП состоит из пяти негликозилированных белков, кодированных геном gag. р27, (молекулярная масса 27 кД), главный компонент капсидного антигена (CA), матричный белок р19 (MA) и нуклеокапсидный белок р12 (NC) участвуют в процессинге и упаковке РНК. Белок р15 и протеаза (PR) участвуют в расщеплении предшественников белков р10 [15, 45].

Ген env кодирует два оболочечных гликопротеида. Это gp85 (SU), представляющий собой структуры в виде закругленных головок на поверхности вируса, которые определяют специфичность подгрупп ВЛП, а также gp37 (TM), который прикрепляет головки gp85 к оболочке. Два этих связанных между собой белка образуют димер, названный вирионным гликопротеином (ВГП) [15, 45, 109]. ВГП связывается с рецептором клетки-

мишени. Различия в структуре ВГП определяют антигенные свойства каждой подгруппы ВЛП [38]. В составе генома других представителей семейства Retroviridae имеется участок, выполняющий аналогичные функции. Так, антигены поверхностных мембран вирусов лейкоза КРС кодируются геном env [3, 4, 5].

Ген pol кодирует фермент обратную транскриптазу, представляющую собой комплекс, состоящий из РНК - зависимой ДНК-полимеразы (95 кДа) и ДНК:РНК гибрид-специфической рибонуклеазы Н (63 кДа). Кроме того, выявлены рибонуклеаза, диоксирибонуклеаза, нуклеозидтрифосфат, нуклеотидная киназа, протеинкиназа, нуклеотидтрансферраза, РНК-метилаза, гексокиназа, аминоацил-тРНК-синтетаза. Предположительно, данные ферменты являются клеточными контаминантами [45].

2.1.4. Устойчивость к физическим и химическим воздействиям. ВЛП обладают чувствительностью к эфиру, актиномицину Д, додецилсульфату натрия [52, 134], погибают при 4 °С через 3-4 недели, при 37 °С - в течение 2 суток, при 60°С - за 1,5-2 ч, при 100 °С — за 5—10 мин [9, 75, 120]. Под действием УФ-лучей вирусы инактивируются за 45—60 мин [36]. Вирусы сохраняют свою активность при рН между 5 и 9 [2, 125]. Известно, что ВЛП наиболее успешно проникают в клетки при низких значениях рН [65]. Под действием 30%-ного раствора хлорамина и 5%-ного раствора карболовой кислоты они мгновенно погибают [9]. При температуре ниже минус 60°С ВЛП могут храниться без потери инфекционной активности [39, 168].

2.1.5. Антигенная активность. Антигенная активность ВЛП связана с двумя белковыми комплексами: типоспецифическим антигеном p27 и группоспецифическим антигеном gp85. Типоспецифический антиген является белковым компонентом вирусной оболочки и является общим для представителей всех антигенных подгрупп. На основе антител к типоспецифическому белку р27 разработаны тест-системы для выявления

антигена вируса [29, 128, 175]. Представители разных подгрупп не участвуют в перекрёстной нейтрализации. Между некоторыми изолятами ВЛП одной подгруппы имеет место перекрёстная нейтрализация. [72, 128]. Так, антитела к ADOL-HCI способны к нейтрализации прототипного штамма HPRS-103, выделенного от цыплят-бройлеров в Великобритании, но антитела к HPRS-103 не нейтрализовали штамм ADOL-HCI [27]. Наряду с этим, было доказано, что, ввиду высокой степени вариабельности генома ВЛП, ряд изолятов не нейтрализуются сыворотками, полученными на штаммы, охарактеризованные ранее [128, 153].

У кур, зараженных вирусами лейкоза, вырабатываются специфические антитела на gp85. При постоянной циркуляции вируса в стаде кур у птицы, заражённой контактным путём, через 2-3 месяца в крови начинают формироваться антитела. К 6 месяцам пребывания в таком стаде, при отсутствии симптомов лейкоза, титр антител возрастает в 10-15 раз. Такие птицы регулярно передают антитела потомству, предохраняя его от заражения лейкозом в течение 2 недель с момента вылупления [28].

2.1.6. Эпизоотологические данные

2.1.6.1. Восприимчивые виды птиц. ВЛП выделяют главным образом от кур как мясных, так и яичных пород. Наибольшей восприимчивостью к ВЛП-А и ВЛП-В обладают куры-несушки. ВЛП-1 чаще всего выявляют у бройлеров [72, 105, 110]. Кроме того, вирусы выявляли у фазанов, куропаток и обыкновенных перепелов [85, 87, 104, 129, 136, 162]. Была доказана восприимчивость индеек к ВЛП-А, в ходе экспериментального заражения которых штаммом RAV-1 отмечались формирование антител и повреждения внутренних органов [47]. Индейки чувствительны также к ВЛП-1. Имеются сообщения, что штамм 966 вызывает опухоли острой формы у индеек. Также показано, что индейки чувствительны к экспериментальному заражению прототипным штаммом ВЛП-1 HPRS-103 [152]. Имеется сообщение об обнаружении лимфоидного лейкоза у страусов [97].

Геном эндогенного ВЛП, имеющий высокую степень сходства с RAV-0, был найден в эмбриональных тканях многих видов домашних кур и ряда семейств отряда курообразных. У куропаток, фазана обыкновенного, шотландского тетерева и кустарной дикой курицы была обнаружена нуклеотидная последовательность, комплементарная RAV-0, тогда как у цесарки, перепела, павлина и индейки такой последовательности не было обнаружено [50, 116].

Высокая частота мутаций генома ВЛП приводит к расширению спектра хозяев данного возбудителя. После эмбрионального заражения уток ВЛП выявляют в тканях птицы в течение трех лет [149]. У 528 диких уток в Китае обнаружены 7 изолятов ВЛП-J [57]. Имеется информация, что совместное содержание редкой породы кур-несушек, у которых был выявлен изолят ВЛП-J, и серых куропаток привело к мутации данного изолята, в результате чего он приобрёл способность расти в культуре клеток фибробластов эмбрионов куропатки. [82]. Симптомы миелобластоза, вызванного изолятом ВЛП-J, выявлены у волнистого попугайчика [111]. Для здоровья людей ВЛП не представляют очевидной угрозы [72, 178].

2.1.6.2. Распространение. ВЛП распространены у коммерческих пород кур в различных странах мира [90, 178], в том числе и в Российской Федерации [8, 14]. ВЛП-А встречаются наиболее часто по сравнению с ВЛП-В. В 60-е гг. учёными США было проведено исследование, в ходе которого в 1,6-12,5% эмбрионов, полученных от 8 коммерческих стад кур, обнаружили ВЛП-А. Частота выявления и распространённости ВЛП-В ниже, чем у ВЛП-А [42].

Вирусы подгрупп А и В чаще всего связаны с лимфоидным лейкозом (ЛЛ) [127]. В ходе исследований, проведённых в Нидерландах с 1973 по 1979 гг., было выявлено, что смертность от ЛЛ составляла 2,18% среди 11220 белых несушек и 0,57% среди 7920 коричневых несушек [56].

Несмотря на программы по борьбе с инфекцией, которые активно проводятся с начала 1990-х гг., в странах Запада и Азии периодически

регистрируют спорадические случаи заболеваний, связанных с ВЛП. Так, с 1997 по 1999 гг. у кур-несушек одной из птицефабрик Канады выявляли изоляты MAV-1 - ВЛП-А, ассоциированного с миелобластозом а также изоляты ВЛП-В [70]. В начале 2000-х гг. в ряде яичных хозяйств США по производству СПФ-эмбрионов были отмечены вспышки миелоцитоматоза, вызванного рекомбинантным ВЛП, содержащим в составе генома участки генов ВЛП-В и ВЛП-1 [64]. В одном из яичных хозяйств Японии также в начале 2000-х гг. у 157 цыплят из 42 000 в возрасте 9 недель были обнаружены симптомы саркомы, вызванной ВЛП-А [23]. В конце 2004г. в трёх яичных хозяйствах США были отмечены случаи заболеваемости кур саркомой в возрасте 7 недель. Заболевание было вызвано изолятом MAV-1. У 43-недельных инфицированных кур были снижены показатели яйценоскости. У 50-82% кур в возрасте 47 недель выявляли антитела [139]. В 2010 г. было опубликовано сообщение о вспышке неопластической инфекции, вызванной ВЛП-А, в одном из птицехозяйств США. Заболевание поражало птицу обоих полов. Частота заболеваемости составляла 0,0008-0,008% в неделю. При гистологическом исследовании опухоли охарактеризовали как миксосаркомы [107].

В 1995 г. было опубликовано сообщение о вспышке нефробластомы на трёх птицефермах Италии. Смертность от заболевания составила 6-7% [110].

В 1996 г. в Японии был зафиксирован случай глиомы у карликового бойцового петуха. Позже учёные выяснили, что заболевание было связано с ВЛП [30]. В 2003 г. в 5 яичных хозяйствах Японии были зафиксированы вспышки глиомы. С помощью анализа нуклеотидных последовательностей выделенных изолятов было показано, что они являлись рекомбинантами ВЛП-А, вызывающего миелобластоз, и эндогенного ВЛП [24]. В 2008 г. японскими учёными было опубликовано сообщение о распространённости ВЛП-А, возбудителя глиомы, у 40% декоративных кур, обитающих в зоологическом саду [131]. В 2013 г. было обнародовано сообщение о наличии

изолятов ВЛП-А и ВЛП-В в организме 300 диких птиц, обитавших в различных регионах Китая [26].

В Российской Федерации ВЛП имеет весьма широкую распространённость. Так, согласно исследованиям, проведённым в период 2001-2003 гг. в 17 птицеводческих хозяйствах РФ, частота встречаемости данного возбудителя варьировала в пределах 50-100%. Неблагополучными по инфекции регионами являлись Нижегородская, Тульская, Ростовская и Рязанская области [14]. В период с 2005 по 2011 были проведены мониторинговые исследования. В ходе исследования сывороток из птицехозяйств 47 регионов России было выявлено, что 97% обследованных фабрик яичного направления и более чем 50% бройлерных хозяйств инфицированы ВЛП [13].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Лазарева, Светлана Петровна, 2017 год

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Барышников, П.И. Ветеринарная вирусология: учебное пособие / П.И. Барышников. - Барнаул: АГАУ, 2006. - 113 с.

2. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / Б.У. Кэлнек [и др.] - Москва, 2003. - 1232 с.

3. Генетический полиморфизм вируса лейкоза крупного рогатого скота на территории Российской Федерации / М.И. Гулюкин [и др.] // Российская сельскохозяйственная наука. - 2016. - №5. - С. 56-59.

4. Генотипическая идентификация вируса бычьего лейкоза / Р.Р. Вафин [и др.] // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2014. -№4. - С. 34-40.

5. Генотипическая идентификация изолятов ВЛКРС, выявленных в хозяйствах Республики Татарстан / А.Ю. Шаева [и др.] // Учёные записки Государственной Академии Ветеринарной Медицины им. Н.Э. Баумана. -2011. - Т. 208. - С. 330-337.

6. Гринин, А.С. Очистка, концентрирование и фракционирование вирусов животных / А.С. Гринин, И.Н. Титов. - М.: Колос, 1971. - 240 с.

7. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии)/Под ред. проф. Дьяконова Л.П., проф. Ситькова В.И. - М.: Спутник+, 2000. - 400с.

8. Исследование птицы на наличие вируса лейкоза методом ПЦР / Т.В. Гребенникова [и др.] // Птица и птицепродукты. - 2003. - №6. - с. 35-37.

9. Коровин, Р.Н. Опухолевые болезни птиц / Р.Н. Коровин, В.П. Зеленский. - М.: Колос, 1984. - 223 с.

10. Курненкова, Е.В. Криоконсервирование клеток, содержащих вирус болезни Марека / Е.В. Курненкова, Ш.К. Куляшбекова // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных:

Материалы II Международной научно-практической конференции (г. Ставрополь, 22-24 октября 2003г.). - Ставрополь, 2003. - С. 349-353.

11. Манин Б.Л. Криоконсервирование и культивирование клеточных линий - две фазы существования биологических объектов // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Материалы международной научной конференции «Инфекционная патология животных», посвящённой 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ».- Владимир, 2008. - т. 6. - с. 390-405.

12. Никитин Е.Е., Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов. - М.: «Колос», 1971. - 343с.

13. Плотников, В.А. Молекулярно-генетический анализ и биологическая характеристика полевых изолятов вируса лейкоза птиц, циркулирующих на территории Российской Федерации: дис. ... канд. биол. наук / Плотников Вадим Алексеевич. - Москва, 2014. - 146с.

14. Распространение вируса лейкоза птиц среди птицеводческих хозяйств Российской Федерации / Т.А. Тимофеева [и др.] // Материалы Международной Юбилейной Научно-практической конференции «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве». - С.-Петербург, 2004. - С. 68-69.

15. Сейц, И.Ф. Молекулярная онкология / И.Ф. Сейц, П.Г. Князев - Л.: Медицина, 1986г. - 352 с.

16. Стегний Б.Т. Восстановление клеточных культур после хранения в глубокозамороженном состоянии / Б.Т. Стегний // Ветеринария. - 1994. -№11. - с. 25-28.

17. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М. Егоров [ и др.] - М.: Высшая школа, 1991. - 288 с.

18. Троценко, Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии / Н.И. Троценко Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская - М.: Колос, 1999. - 272с.

19. Филогенетический анализ изолятов вирусов лейкоза птиц, циркулирующих на территории Российской Федерации / Плотников В.А. [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2012. - №5. - с. 38-43.

20. Цуцаева А.А. Криоконсервация культивируемых клеток животных / А.А. Цуцаева, Т.Ф. Петренко // Методы культивирования клеток: Сборник научных трудов. - Л., 1988 - С. 63-69.

21. A novel subgroup of exogenous avian leukosis virus in chickens / L. N. Payne [et al] // Journal of General Virology. - 1991. - Vol. 72. - P. 801-807.

22. An ALV-J isolate is responsible for spontaneous haemangiomas in layer chickens in China / H. Zhang [et al] // Avian Pathology. - 2011. - Vol. 40, N 3. -P. 261-267.

23. An epizootic of subcutaneous tumors associated with subgroup A avian leukosis/sarcoma virus in young layer chickens / M. Ono [et al] // Avian Diseases. - 2004. - Vol. 48, N 4. - P. 940-946.

24. A recombinant avian leukosis virus associated with fowl glioma in layer chickens in Japan / H. Hatai [et al] // Avian Pathology. - 2008. - Vol. 37, N 2. - P. 127-137.

25. Atchley, W. R. Myc and Max: molecular evolution of a family of proto-oncogene products and their dimerization partner / W. R. Atchley, W. M. Fitch // Proc. Nati. Acad. Sci. USA. - 1995. - Vol. 92, N 22. - P. 10217-10221.

26. Avian leukosis virus subgroup A and B infection in wild birds of Northeast China / D. Li [et al] // Veterinary Microbiology. - 2013. - Vol. 163, N 34. - P. 257-263.

27. Avian leukosis virus subgroup J envelope gene product for diagnosis and immunogenic composition: patent US6146641 A, USA / Aly M. Fadly, Henry D. Hunt, Lucy F. Lee. - № W02000004921A9 , declared 24.09.98, published 14.11.2000.

28. Avian leukosis virus subgroup J infection profiles in broiler breeder chickens: association with virus transmission to progeny / R. L. Witter [et al] // Avian Diseases. - 2000. - Vol. 44, N 4. - P. 913-931.

29. Avian leukosis virus subgroup J (ALV-J): Developing laboratory technologies for diagnosis in Australia: A report for the Rural Industries Research and Development Corporation / T. Bagust, S. Fenton, M. Reddy. - Melbourne, 2004. - 66p. - Project N UM-49A.

30. Avian retrovirus infection causes naturally occurring glioma: isolation and transmission of a virus from so-called fowl glioma / N. Iwata [et al] // Avian Pathology. - 2002. - Vol. 31, N2. - P.193-199.

31. Bai, J. HPRS-103 (exogenous avian leukosis virus, subgroup J) has an env gene related to those of endogenous elements EAV-0 and E51 and an E element found previously only in sarcoma viruses / J. Bai, L. N. Payne , M.A. Skinner // J. Virol. - 1995. - Vol. 69, N 2. - P. 779-784.

32. Barbosa, T. Molecular Characterization of three Recombinant Isolates of Avian Leukosis Virus Obtained from Contaminated Marek's Disease Vaccines / T. Barbosa, G. Zavala, S. Cheng // Avian Diseases. - 2008. - Vol. 52, N 2. - P. 245252.

33. Beard, J.W. Biology of avian oncomaviruses / J.W. Beard // Viral Oncology. - New York, 1980. - P. 55-87.

34. Beaudreau, G.S. Virus of avian myeloblastosis. X. Photometric microdetermination of adenosinertiphosphatase activity / G.S. Beaudreau, C. Beker // J. Nati. Cancer Inst. - 1958. - Vol.20, N 3. - P. 339-349.

35. Bieth, E. Complete nucleotide sequence of a highly infectious avian leukosis virus / E. Bieth, J. L. Darlix. // Nucleic Acids Res. - 1992. - Vol. 20, N 2. - P. 367.

36. Biological and biochemical studies on the inactivation of avian oncoviruses by ultraviolet irradiation / K. Bister [et al] // Virology. -1977. - Vol. 77, N 2. - P. 689-704.

37. Biological characteristic of an embryonic fibroblast line from Xiaoshan chicken for genetic conservation / W. Guan [et al] // Journal of Cell and Animal Biology. - 2012. - Vol. 6, N 4. - P. 46-53.

38. Bova, C. A.The avian retrovirus env gene family: molecular analysis of host range and antigenic variants / C. A. Bova, J.C. Olsen, R. Swanstrom // J. Virology. - 1988. - Vol. 62. - P. 75-83.

39. Bryan, W.R. Stable standard preparations of the Rous sarcoma virus preserved by freezing and storage at low temperatures / W.R. Bryan, J.B. Moloney, D. Calnan // J. Natl. Cancer Inst. - 1954. - Vol. 15, N 2. - P. 315-329.

40. Burmester, B.R. Pathogenicity of a Viral Strain (RPL12) Causing Avian Visceral Lymphomatosis and Related Neoplasms. III. Influence of Host Age and Route of Inoculation / B.R. Burmester, A.K. Fontes, W.G. Walter // J. Natl. Cancer Inst. - 1960. - Vol. 24. - P. 1423-1442.

41. Burmester, B. R. The history of avian medicine in the United States. V Insights into avian tumor virus research / B. R. Burmester, H. G. Purchase // Avian Diseases. -1979. - Vol. 23, N 1. - P. 1-29.

42. Calnek, B. W. Morphological alteration of RIF-infected chick embryo fibroblasts / B. W. Calnek // Nat. Cancer Inst. Monogr. - 1964. - Vol. 17. - P. 425447.

43. Chang, S. Gene detection, virus isolation and sequence analysis of avian leukosis viruses in Taiwan Country chickens / S. Chang, M. Hsu, C. Wang // Avian Diseases. - 2013. - Vol. 57, N 2. - P. 172-177.

44. Chesters, P. M. E (XSR) element contributes to the oncogenicity of Avian leukosis virus (subgroup J) / P. M. Chesters, L. P. Smith, V. Nair // J. Gen. Virol. - 2006. - Vol. 87. - P. 2685-2692.

45. Coffin, J.M. Structure and classification of retroviruses / J.M. Coffin // The Retroviridae. - New York, 1992. - Vol 1. - P. 19-49.

46. Coffin, J.M. The viruses and their replication / J.M. Coffin // Fundemental Virology. - Philadelphia: Lippincott-Raven. - 1996.-P. 763-843.

47. Comparative response of turkeys and chickens to avian lymphoid leukosis virus / A.K. Elmubarak [et al] // Avian Pathology - 1983. - Vol. 12, N 2 -P. 235-245.

48. Comparison and verification of quantitative competitive reverse transcription polymerase chain reaction (QC-RT-PCR) and real time RT-PCR for avian leukosis virus subgroup J / Y. Kim [et al] // Journal of Virological Methods.

- 2002. - Vol. 102, N 1. - P. 1-8.

49. Cottral, G. E. Egg Transmission of Avian Lymphomatosis / G. E. Cottral, B. R. Burmester, F. Nelson // Waters Poult. Sci. - 1954. - Vol. 33. - P. 1174-1184.

50. Crittenden, L. B. Exogenous and endogenous leukosis virus genes - a review / L. B. Crittenden // Avian Pathology. - 1981. - Vol. 10, N 2. - P. 101-112.

51. Crittenden, L. B. Incidence of avian leukosis virus infection in broiler stocks and its effect on early growth / L. B. Crittenden, W. Okazaki, J. Smith. // Poult. Sci. - 1983. - Vol. 62, N 12. - P. 2383-2386.

52. Crittenden, L. B. The Epidemiology of Avian Lymphoid Leukosis / L. B. Crittenden // Can. Res. - 1976. - Vol. 36. - P. 570-573.

53. Cummins, T.J. Analysis of hematopoietic and lymphopoietic tissue during a regenerative aplastic crisis induced by avian retrovirus MAV-2(0) / T.J. Cummins, R.E. Smith. // Virology. -1988. - Vol. 163. - P. 452-461.

54. Dark, D.P. Detection of avian oncovirus group-specific antigens by the enzyme-linked immunosorbent assay / D.P. Dark, R.M. Dougherty // J. Gen. Virol.

- 1980. -Vol. 47, N 2. - P. 283-291.

55. De Boer, G.F. Avian Leukosis. - New York: Springer-Verlag, 1987. -

308 p.

56. De Boer, G. The incidence of lymphoid leukosis in chickens in the Netherlands / G. de Boer, O.J.H. Devos, H.J.I. Maas // Zootechnica Intern. - 1981.

- Vol.10. - P. 32-35.

57. Detection and Molecular Characterization of J Subgroup Avian Leukosis Virus in Wild Ducks in China / X. Zeng, L. Liu, R. Hao, C. Han // Plos One. -2014. - Vol. 9, N 3. - P. 1-8.

58. Detection of subgroup J avian leukosis virus gene by polymerase chain reaction from whole blood without DNA extraction / K. Qian, [et al] // African Journal of Microbiology Research. - 2012. - Vol. 6, N 27. - P. 5725-5727.

59. Determination of Subgroup J Avian Leukosis Virus by Surface Plasmon Resonance Immunosensor / H. Ming [et al] // Analytical Letters. - 2014. - Vol. 47, N 5. - P. 807-818.

60. Development and application of SYBR Green I real-time PCR assay for the separate detection of subgroup J Avian leukosis virus and multiplex detection of avian leukosis virus subgroups A and B / M. Dai [et al] // Virology Journal. -2015. - Vol. 12, N 52. - P. 1-10.

61. Development and characterization of monoclonal antibodies to subgroup J avian leukosis virus / A.Quin, [et al] // Avian Diseases. - 2001. -Vol. 45, N 4. -P. 938-945.

62. Development and evaluation of an immunochromatographic strip forrapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus / Q. Kun [et al] // Journal of Virological Methods. - 2015. - Vol. 221. - P. 115-118.

63. Development and validation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of Avian leukosis virus antibodies based on a recombinant capsid protein / Y. Qiu [et al] // J. of Vet. Diagn. Invest. - 2011. -Vol. 23, N 5. - P. 991-993.

64. Diagnosis of myeloid leukosis induced by a recombinant avian leukosis virus in commercial white leghorn egg laying flocks / E. Gingerich [et al] // Avian Diseases. - 2002. - Vol. 46, N 3. - P. 745-748.

65. Diaz-Griffero, F. Cellular uptake of avian leukosis virus subgroup B is mediated by clathrin / F. Diaz-Griffero, A. P. Jackson, J. Brojatsch // Virology. -2005. - Vol. 337, N 1. - P. 45-54.

66. Distribution of viral antigen gp85 and provirus in various tissues from commercial meat-type and experimental White Leghorn Line 0 chickens with different subgroup J avian leukosis virus infection profiles / A. R. Pandiri [et al] // Avian Pathology. - 2008. - Vol. 37, N 1. - P. 7-13.

67. Effect of an in ovo infection with a Dutch avian leukosis virus subgroup J isolate on the growth and immunological performance of SPF broiler chickens / W. J. M. Landman [et al] // Avian Pathology. - 2002. - Vol. 31, N 1. - P.59-72.

68. Enhanced inhibition of avian leukosis virus subgroup J replication by multi-target miRNAs / Q.-W. Meng, Z.-P. Zhang, W. Wang [et al] // Virol. Journal. - 2011. - Vol. 8. - P. 556-565.

69. Evaluation of a multi-epitope subunit vaccine against avian leukosis virus subgroup J in chickens / Q. Xu [et al] // Virus Research. - 2015. - Vol. 210.

- P. 62-68.

70. Evidence for virus closely related to avian myeloblastosis-associated virus type 1 in a commercial stock of chickens / J. Lloyd Spencer [et al] // Avian Pathology. -2003. - Vol. 32, N4. - P. 383-390.

71. Experimental infection of Attwater's/greater prairie chicken hybrids with the reticuloendotheliosis virus / R. L. Bohls [et al] // Avian Diseases. - 2006. -Vol. 50, N 4. - P. 613-619.

72. Fadly, A. M. Isolation and identification of avian leukosis viruses: a review / A.M. Fadly // Avian Pathology. - 2000. - Vol. 29, N 6. - P. 529-535.

73. Fadly, A.M. Variation in tolerance induction and oncogenicity due to strain of avian leukosis virus / A.M. Fadly , L.B. Crittenden , E.J. Smith // Avian Pathology. - 1987. - Vol. 16, N 4. - P. 665-667.

74. Fenton, S. P. Single and concurrent avian leukosis virus infections with avian leukosis virus-J and avian leukosis virus-A in Australian meat-type chickens / S.P. Fenton, M.R. Reddy , T.J. Bagust // Avian Pathology. - 2005. - Vol. 34, N 1.

- P. 48-54.

75. Friesen, B. Some physicochemical and immunological properties of an avian leucosis virus (RIF) / B. Friesen, H. Rubin // Virology. - 1961. - Vol. 15. -P. 387-396.

76. Functional and structural alterations on the nervous system induced by avian retrovirus RAV-7 / L.R. Whalen [et al] // Microbiol. Pathog. - 1988. -Vol. 4, N 6. - P. 401-416.

77. Gagnon, C. Detection of avian leukosis virus in the laboratory and in naturally infected poultry flocks using the polymerase chain reaction / C. Gagnon.

- Ottawa, Canada: University of Ottawa, 1996. - 114p.

78. Gavora, J. S. Influences of avian leukosis virus infection on production and mortality and the role of genetic selection in the control of lymphoid leukosis / J. S. Gavora // Avian Leukosis. - Boston, 1987. - P. 242-260.

79. Generation and evaluation of avian leukosis virus subgroup J envelopeglycoprotein recombinant pseudovirions / Z. Zhanga [et al] // J. Virol. Meth. - 2014. - Vol. 202. - P. 1-7.

80. Generation of Transforming Viruses in Cultures of Chicken Fibroblasts Infected with an Avian Leukosis Virus / E. Stavnezer [et al] // J. Virol. - 1981. -Vol. 39, N 3. - P. 920-934.

81. Genetic diversity and phylogenetic analysis of glycoprotein GP85 of ALV-J isolates from Mainland China between 1999 and 2010: Coexistence of two extremely different subgroups in layers. / P. Wei [et al] // Veterinary Microbiology.

- 2012. - Vol. 156, N 1-2. - P. 205-212.

82. Genetic mutations of avian leukosis virus subgroup J strains extended their host range / Y. Shen [et al] // J. Gen. Virol. - 2014. - Vol. 95, N 9. - P. 691699.

83. Hafner, S. Retroviral inclusions in the enteric smooth muscle of a tumor-bearing young chicken / S. Hafner, S.M. Williams, M.T. Sutton // Avian Diseases.

- 2007. - Vol. 51, N 1. - P. 133-136.

84. Hair-Bejo, M. Emerging of Avian Leukosis Subgroup J (ALV-J) Infections in Broiler Chickens in Malaysia / M. Hair-Bejo, P.T. Ooi, W.S. Phang // International Journal of Poultry Science. - 2004. - Vol. 3, N 2. - P. 115-118.

85. Hanafusa, T. Isolation of leukosis-type virus from pheasant embryo cells: Possible presence of viral genes in cells / T. Hanafusa, H. Hanafusa // Virology. - 1973. - Vol. 51, N 1. -P. 247-251.

86. Histopathological and ultrastructural characteristics of myeloid leukosis in broiler chicken / R. M. Manzan [et al] // Arq. Bras. Med. Vet. Zootec. - 2006 -Vol. 58, N 5. - P.757-761.

87. Host range of Rous sarcoma virus pseudotype RSV (HPRS-103) in 12 avian species: support for a new avian retrovirus envelope subgroup, designated J / L. N. Payne [et al] // J Gen Virol. - 1992. - Vol. 73, N 11. - P. 2995-2997.

88. Hsu, M.-F. Detection of Antibody Against Avian Leukosis Virus Subgroup A by Enzyme-linked Immunosorbent Assay with Baculovirus Expressed gp85 Protein / M.-F. Hsu, C.-H. Wang, C.-H. Wan // Taiwan Vet. J. - 2014. - Vol. 40, N 1. - P. 39-45.

89. Identification and Characterization of Recombinant Subgroup J Avian Leukosis Viruses (ALV) Expressing Subgroup A ALV Envelope / B. Lupiani [et al] // Virology. - 2000. - Vol. 276, N 1. - P. 37-43.

90. Ignjatovic, J. Effect of lymphoid leukosis virus on performance of layer hens and the identification of infected chickens by tests on meconia / J. Ignjatovic, R.A. Fraser, T.J. Bagust // Avian Pathology. - 1986. - Vol. 15, N 1. - P. 63-74.

91. Influence of strain, dose of virus, and age at inoculation on subgroup J avian leukosis virus persistence, antibody response, and oncogenicity in commercial meat-type chickens / A.R. Pandiri [et al]// Avian Diseases. - 2007. -Vol. 51, N 3. - P. 725-732.

92. Isolation, identification, and phylogenetic analysis of two avian leukosis virus subgroup J strains associated with hemangioma and myeloid leukosis / Y. Li [et al] // Vet. Microbiol. - 2013. - Vol. 166, N 3-4. - P. 356-364.

93. Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. - Vol. 227. - P. 680-685.

94. Levine, S. RIF infection in a commercial flock of chickens / S. Levine, D. Nelsen // Avian Diseases. - 1964. - Vol. 8. - P. 358-368.

95. Liposome containing recombinant gp85 proteine vaccine against ALV-J in chickens / L. Zhang [et al] // Vaccine. - 2014. - Vol. 32, N 21. - P. 2452-2456.

96. Loss of cell cycle controls in apoptotic lymphoblasts of the bursa of Fabricius / P. E. Neiman [et al] // Mol. Biol. Cell. - 1994. - Vol.5, N 7. - P. 76372.

97. Lymphoid leukosis in ostrich (Struthio camelus) / R.A. Garcia-Fernandez [et al] // Vet. Res. - 2000. - Vol. 146, N 23. - P. 676-677.

98. Lymphoid leukosis viruses and gs antigen in unincubated chicken eggs / J. Spencer [et al] // Avian Pathology. - 1976. - Vol. 5, N 3. - P. 221-226.

99. Lymphoid leukosis virus infection: Effects on production and mortality and consequences in selection for high egg production / J. S. Gavora [et al] // Poult. Sci. - 1980. - Vol. 59, N 10. - P. 2165-2178.

100. Maternal antibody induced by recombinant gp85 protein vaccine adjuvanted with CpG-ODN protects against ALV-J early infection inchickens / W. Dou [et al] // Vaccine. - 2013. - Vol. 31, N 51. - P. 6144-6149.

101. Mays, J.K. Susceptibility of various parental lines of commercial White Leghorn layers to infection with a naturally occurring recombinant avian leukosis virus containing subgroup B envelope and subgroup J long terminal repeat / J.K. Mays, A.R. Pandiri, A.M. Fadly // Avian Diseases. - 2006. - Vol. 50, N 3. - P. 342-347.

102. McBride, M.A.T. Immune response of chickens inoculated with a recombinant avian leukosis virus / M.A.T. McBride, R.M. Shuman // Avian Diseases. - 1988. - Vol. 32, N 1. - P. 96-102.

103. McNally, M. T. RNA processing control in avian retroviruses // Frontiers in Bioscience. - 2008. - Vol. 13. - P. 3869-3883.

104. Mechanisms of Avian Retroviral Host Range Extension / G. Jonah [et al] // J. Virol. - 2003. - Vol. 77, N 12. - P. 6709-6719.

105. Molecular and biological characterization of a naturally occurring recombinant subgroup B avian leukosis virus with a subgroup J-like Long Terminal Repeat / B. Lupiani [et al] // Avian Diseases. - 2006. - Vol. 50, N4. - P. 572-578.

106. Molecular cloning and characterization of gag-, pol-, and env-related gene sequences in the ev- chicken / C. T. Dunwiddie [et al] // J. Virol. - 1986. -Vol. 59, N 3. - P. 669-675.

107. Myxosarcomas Associated with Avian Leukosis Virus Subgroup A Infection in Fancy Breed Chickens / S. M. Williams [et al] // Avian Diseases. -2010. - Vol. 54, N4. - P. 1319-1322.

108. Naghavi Mojgan, H. Retroviral proteins that interact with the host cell cytoskeleton / H. Naghavi Mojgan, P. Goff Stephen // Current Opinion in Immunology. - 2007. - Vol. 19, N 4. - P. 402-407.

109. Naturally occurring myeloid leukosis in commercial broiler chickens / M.P. Franciosini [et al] // 31-st World Veterinary Congress 150-th Anniversary of the World Veterinary Association. - Prague, Czech Republic. - 2013. - P. 11.

110. Naturally occurring nephroblastomas in light meat broilers / G. Asdrubali [et al] // Avian Pathology. - 1995. - Vol. 24, N 1. - P. 45-53.

111. Natural Unusual Myeloblastosis in a Budgerigar (Melopsittacus undulatus): Histopathologic Diagnosis / M. Khordadmehr [et al] // Avian Diseases. - 2016. - Vol. 60, N 1. - P. 79-81.

112. Novel endogenous retroviral sequences in the chicken genome closely related to HPRS-103 (subgroup J) avian leukosis virus / L. M. Smith [et al] // J. Gen. Virol. - 1999. -Vol. 80 N 1. - P. 261-268.

113. Nowinski, R.C. Structural and serological aspects of the oncomaviruses. Persistent virus infections / R.C. Nowinski, E. Fleissner, N.H. Sarkar // Perspect. Virol. - 1973. - Vol. 8. - P. 31-60.

114. Occurrence of avian leukosis virus subgroup J in commercial layer flocks in China / B. Xu [et al] // Avian Pathology. - 2004. - Vol. 33, N 1. - P. 1317.

115. Okazaki, W. Pathogenicity of Avian Leukosis Viruses / W. Okazaki, H. G. Purchase, L. B. Crittenden // Avian Diseases. - 1982. - Vol. 26, N. 3. - P. 553559.

116. Organization of endogenous and exogenous viral and linked nonviral sequences / S. H. Hughes [et al] // Cold Spring Harb. Symp. Quant Biol. - 1980. -Vol. 44, N 2. - P. 1077-1089.

117. Pathogenesis of avian lymphoid leukosis. I. Histogenesis / Cooper M. D. [et al] // J. Natl. Cancer Inst. - 1968. - Vol. 41, N 2. - P. 373-378.

118. Pathogenicity of avian leukosis viruses related to fowl glioma-inducing virus / S. Nakamura [et al] // Avian Pathology. - 2011. - Vol. 40, N 5. - P. 499505.

119. Pathogenicity of a viral strain (RPL 12) cfusing avian visceral lymphomatosis and related neoplasms. II. Hostvirus interrelations affecting response / B. R. Burmester [et al] //J. Natl. Cancer Inst. - 1959. - Vol. 22, N 1. -P. 103-127.

120. Payne, L.N. A modified feather pulp culture method for determining the genetic, susceptibility of adult chickens to leukosis-sarcoma viruses / L.N. Payne, K. Howes, D.F. Adene // Avian Pathology - 1985. - Vol. 14, N 2. - P. 261-267.

121. Payne, L.N. Biology of avian retroviruses / L.N. Payne // The Retroviridae. - New York, 1992. -Vol.1. - P. 299-404.

122. Payne, L. N. HPRS-103: a retro virus strikes back. The emergence of subgroup J avian leukosis virus / L. N. Payne // Avian Pathology. - 1998. - Vol. 27, N 1. - P. 36-45.

123. Payne, F. E. Immunofluorescent studies of group-specific antigen of the avian sarcoma-leukosis viruses / F.E. Payne, J.J. Solomon, H.G. Purchase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1966. - Vol. 55, N 2. - P. 341-349.

124. Payne, L. N. Myeloid leukaemogenicity and transmission of the HPRS-103 strain of avian leukosis virus / L. N. Payne, A. M. Gillespie, K. Howes // Leukemia. - 1992. - Vol.6. - P.1167-1176.

125. Payne, L.N. Neoplastic diseases: Marek's disease, avian leukosis and reticuloendotheliosis / L.N. Payne, K. Venugopal // Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. -2000. - Vol. 19, N 2. - P. 544-564.

126. Payne, L. N. Recovery of acutely transforming viruses from myeloid leukosis induced by the HPRS-103 strain of avian leukosis virus / L.N. Payne, A.M. Gillespie, K. Howes // Avian Diseases. - 1993. - Vol. 37, N 2. - P. 438-450.

127. Payne, L. N. Retrovirus-induced disease in poultry / L. N. Payne // Poult. Sci. - 1998. - Vol. 77, N 8. - P. 1204-1212.

128. Payne, L. N. The long view: 40 years of avian leukosis research / L.N. Payne, V. Nair // Avian Pathology. - 2012. - Vol. 41, N 1. - P. 1-9.

129. Pheasant virus: New class of ribodeoxyvirus / T. Hanafusa [et al] // Proc. Nati. Acad. Sci. USA. - 1976. - Vol. 73, N 4. - P. 1333-1337.

130. Preparation and immunoprotection of subgroup B avian leukosis virus inactivated vaccine / X. Li [et al] // Vaccine. - 2013. - Vol. 31, N 46. - P. 54795485.

131. Prevalence of fowl glioma-inducing virus in chickens of zoological gardens in Japan and nucleotide variation in the env gene / H. Hatai [et al] // J. Vet. Med. Sci. - 2008. - Vol. 70, N 5. - P. 469-474.

132. Rapid serological profiling by enzyme linked immunosorbent assay. II. Comparison of computation methods for antibody titers in a single serum dilution / D.B. Snyder [et al] // Avian Diseases. - 1982. - Vol. 27, N 2. - P. 474-484.

133. Recombinant env-gp85 of HPRS-103 (subgroup J) avian leukosis virus: antigenic characteristics and usefulness as a diagnostic reagent / K. Venugopal [et al] // Avian Diseases. - 1997. - Vol. 41, N 2. - P. 283-288.

134. Replacement of primary chicken embryonic fibroblasts (CEF) by the DF-1 cell line for detection of avian leucosis viruses / R. Maas [et al] // Biologicals. - 2006. - Vol. 34, N 3. - P. 177-181.

135. Reversion to Subgroup J Avian Leukosis Virus Viremia in Seroconverted Adult Meat-Type Chickens Exposed to Chronic Stress by Adrenocorticotrophin Treatment / A. R. Pandiri [et al] // Avian Diseases - 2012. -Vol. 56, N 3 - P. 578-582.

136. RNA tumor viruses of pheasants: Characterization of avian leucosis subgroups F and G / D.J. Fujita [et al] // Virology. - 1974. - Vol. 60, N 2. - P. 558-571.

137. Robinson, W.S.The chemistry of RNA tumor viruses / W.S. Robinson, P.H. Duesberg // Molecular Basis of Virology. - New York, 1968. - P. 306-331.

138. Rubin, H. A virus in chick embryos which induces resistance in vitro to infection with Rous sarcoma virus / H. Rubin // Proc. Nati. Acad. Sci. USA - 1960. - Vol. 46, N 8. - P. 1105-1119.

139. Sarcomas and myelocytomas induced by a retrovirus related to myeloblastosis-associated virus type 1 in White Leghorn egg layer chickens / G. Zavala [et al] // Avian Diseases. - 2006. - Vol. 50, N 2. - P. 201-208.

140. Sarma, P. S. An avian leucosis group-specific complement fixation reaction. Application for the detection and assay non-cytopathogenic leucosis viruses / P. S. Sarma, H.C. Turner, R.J. Huebner // Virology. - 1964. - Vol. 23. -P. 313-321.

141. Semen traits and fertility of White Leghorn males shown to be positive or negative for lymphoid leukosis virus in semen and feater pulp / J. C. Segura [et al] // Br. Poult. Sci. - 1988. - Vol. 29, N 3. - P. 545-553.

142. Sequence analysis for the complete proviral genome of subgroup J Avian Leukosis virus associated with hemangioma: a special 11 bp deletion was observed in U3 region of 3'UTR / M. Shi, M. Tian, C. Liu // Virology Journal. -2011. - Vol. 8. - P. 158-166.

143. Shu-Wei, C. Gene detection, virus isolation, and sequence analysis of avian leukosis viruses in Taiwan Country Chickens / C. Shu-Wei, H. Meng-Fang, W. Ching-Ho // Avian Diseases. - 2013. - Vol. 57, N 2. - P. 172-177.

144. Silva, R.F. Development of a polymerase chain reaction to differentiate avian leukosis virus (ALV) subgroups: detection of an ALV contaminant in commercial Marek's disease vaccines / R.F. Silva , A.M. Fadly , S.P. Taylor // Avian Diseases. - 2007. - Vol. 51, N 3. - P. 663-667.

145. Silva, R. F. Hypervariability in the envelope genes of subgroup J avian leukosis viruses obtained from different farms in the United States / R. F. Silva, A. M. Fadly, H. D. Hunt // Virology. - 2000. - Vol. 272, N 1. - P. 106-111.

146. Smith, E. J. An enzyme-linked immunosorbent assay for detecting avian leukosis-sarcoma viruses / E.J. Smith, A. Fadly, W. Okazaki // Avian Diseases. - 1979. - Vol. 23, N 3. - P. 698-707.

147. Smith, R. E. Immunology of avian leukosis virus infections / R. E. Smith // Avian Leukosis. - Boston, 1987. - P. 121-129.

148. Smith, E.J. Observations on an enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies against avian leukosis-sarcoma viruses / E.J. Smith, A.M. Fadly, L.B. Crittenden // Avian Diseases. - 1986. - Vol. 30. - P. 488-493.

149. Spencer, J. L. Progress towards eradication of lymphoid leukosis viruses - a review / J. Spencer // Avian Pathology. - 1984. - Vol. 13. - P. 599-619.

150. Spencer, J. L. Relationship between egg size and subgroup J avian leukosis virus in eggs from broiler breeders / J. L. Spencer, M. Chan, S. N. Davis // Avian Pathology. - 2000. - Vol. 29, N 6. - P. 617-622.

151. Subgroup J avian leukosis virus infection inhibits autophagy in DF-1 cells / L. Haixia [et al] // Virology Journal. - 2013. - Vol. 10. - P. 196-205.

152. Subgroup J avian leukosis virus infection in turkeys: induction of rapid onset tumours by acutely transforming virus strain 966 / K. Venugopal [et al] // Avian Pathology. - 2000. - Vol. 29, N 4. - P. 319-325.

153. Subgroup J avian leukosis virus neutralizing antibody escape variants contribute to viral persistence in meat-type chickens / A.R. Pandiri [et al] // Avian Diseases. - 2010. - Vol. 54, N 2. - P. 848-856

154. Sun, S. Epidemiological and pathological studies of subgroup J avian leukosis virus infections in Chinese local "yellow" chickens / S. Sun, Z. Cui // Avian Pathology. - 2007. - Vol. 36, N 3. - P. 221-226.

155. Tam, W. bic, a Novel Gene Activated by Proviral Insertions in Avian Leukosis Virus-Induced Lymphomas, Is Likely To Function through Its

Noncoding RNA / W. Tam, D. Ben-Wehuda, W.S. Hayward // Mol. And Cell. Biol. - 1997. - Vol. 17, N 3. - P. 1490-1502.

156. Temin, H.M. Avian leukosis viruses of different subgroups and types isolated after passage of Rous Sarcoma Virus- Rous Associated Virus-0 in cells from ifferent ring-necked pheasant embryos / H.M. Temin, V.K. Kassner // Journal of Virology. - 1976. - Vol. 19, N 2. - P. 302-312.

157. The DF-1 Chicken Fibroblast Cell Line: Transformation Induced by Diverse Oncogenes and Cell Death Resulting from Infection by Avian Leukosis Viruses / M. Himly [et al] // Virology. - 1998. - Vol. 248, N2. - P. 295-304.

158. The EV-O-Derived Cell Line DF-1 Supports the Efficient Replication of Avian Leukosis-Sarcoma Viruses and Vectors / J. Schaefer-Klein [et al] / Virology. - 1998. - Vol. 248, N2. - P. 305-311.

159. The oncogenic spectrum of two pure strains of avian leucosis / B. R. Burmester [et al]// J. Natl. Cancer Inst. - 1959. - Vol. 23. - P. 277-291.

160. The passage of cells can improve the detection rate of avian leukosis virus to facilitate the elimination of avian leukosis in chickens / X. Wang [et al] // Springer Plus. -2013. - Vol. 2. - P. 138-140.

161. Tolerance and immunity in chickens after congenital and contact infection with an avian leukosis virus / H. Rubin [et al] // Virology. - 1962. - Vol. 17. - P. 143-156.

162. Troesch, C.D. An endogenous virus from Lophortyx quail is the prototype for envelope subgroup I of avian retroviruses / C.D. Troesch, P.K. Vogt // Virology. - 1985. - Vol. 143, N 2. - P. 595-602.

163. Tropism of subgroup J avian leukosis virus as detected by in situ hybridization / S. S. Arshad [et al] // Avian Pathology. - 1999. - Vol. 28, N 2. - P. 163-169.

164. Tsukamoto, K. Detection of avian leukosis virus antigens by the ELISA and its use for detecting infectious virus after cultivation of samples and partial characterization of specific pathogen-free chicken lines maintained in this

laboratory / K. Tsukamoto, H. Hihara, Y. Kono // J. Vet. Med. Sci. - 1991. - Vol. 53, N 3. - P. 399-408.

165. Tumors Associated with Avian Leukosis Virus Subgroup J in Layer Hens during 2007 to 2009 in China / Z. Cheng [et al] // J. Vet. Med. Sci. - 2010. -Vol. 72, N 8. - P. 1027-1033.

166. Turan, N. Investigations on the Presence of Antibodies to Avian Leukosis Virus Subgroup-J (ALV-J) in Broiler Breeders and Broilers / N. Turan, H.Yilmaz // Turk. J. Vet. Anim. Sci. - 2005. - Vol. 29. - P.1255-1258.

167. Viral aetiology of haemangiosarcoma outbreaks among layer hens / H. Burstein [et al] // Avian Pathology. - 1984. - Vol.13, N 4. - P. 715-726.

168. Virus of avian erythromyeloblastic leucosis. VII. Thermal stability of virus infectivity; of the viral particle; and of the enzyme dephosphorylating adenosine-triphosphate / E.A. Eckert [et al] // J. Nati. Cancer Inst. -1955. - Vol. 16. - P. 153-161.

169. Vogt, P.K. Avian tumor viruses / P.K. Vogt // Adv. Virus Res. - 1965. - №11. - P. 293-385.

170. Vogt, P.K. Criteria for the classification of avian tumor viruses / P.K. Vogt, R. Ishizaki // Viruses Inducing Cancer. - Salt Lake City, 1966. - P. 71-90.

171. Wang, C.-H. Occurrence of subgroup J avian leukosis virus in Taiwan / C.-H. Wang, Y.-W. Juan // Avian Pathology. - 2002. - Vol. 31, N 5. - P. 435439.

172. Watts, S.L. Pathology of chickens infected with avian nephroblastoma virus MAV-2 (N) / S.L. Watts, R.E. Smith // Infection and immunity. - 1980. -Vol. 27, N 2. - P. 501-512.

173. Weiss, R. Experimental biology and assay of retroviruses / R.Weiss // RNA Tumor Viruses. - New York, 1984. - P. 209-260.

174. Weiss, R.A. Genetic transmission of RNA tumor viruses / R.A. Weiss // Perspect. Virol. - 1975. - Vol. 9. - P. 165-205.

175. Weiss, R. A. The discovery of endogenous retroviruses: a review / R. A. Weiss // Retrovirology. - 2006. - Vol. 3. - P. 67-78.

176. Weller, S.K. Cell killing by avian leukosis viruses / S.K. Weller, H.M. Temin // Journal of Virology. - 1981. - Vol. 39, N 3. - P. 713-721.

177. Weller, S.K. Correlation between cell killing and massive second-round superinfection by members of some subgroups of avian leukosis virus / S.K. Weller, A.E. Joy, H.M. Temin // Journal of Virology. - 1980. - Vol. 33, N 1. - P. 494-506.

178. Witter, R. L. Reduction of horizontal transmission of avian leukosis virus subgroup J in broiler breeder chickens hatched and reared in small groups / R.L. Witter, A.M. Fadly // Avian Pathology. - 2001. - Vol. 30, N 6. - P. 641-654.

179. Wright, P.F. Standartisation and validation of enzyme-linked immunosorbent assay techniques for the detection of antibody in infectious disease diagnosis // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. - 1993. - Vol. 12, N 2. - P. 435-450.