Лабораторная модель для оценки иммуногенности вакцин против ринопневмонии лошадей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Алексеенкова, Светлана Валерьевна

• Алексеенкова, Светлана Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Алексеенкова, Светлана Валерьевна

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Герпесвирусные инфекции лошадей

1.2 Патогенез и иммуногенез ВГЛ-1

1.3 Вакцины : живые, инактивированные, генно - инженерные

1.4 Биологическая активность вакцин для лабораторных животных и методы контроля иммуногенности вакцин

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Материалы

2.2 Методы

2.2.1 Культивирование вируса в культурах клеток

2.2.2 Культивирование вируса в организме лабораторных животных

2.2.3 Иммунизация лабораторных животных

2.2.4 Полимеразная цепная реакция

2.2.5 Гистохимические исследования

2.2.6 Серологические исследования

2.2.7 Статистическая обработка полученных результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение гуморального иммунного ответа у мышей

3.1.1 Изучение гуморального иммунного ответа в динамике у мышей зависимости от природы иммуногена

3.1.2 Эффективность комбинированного введения вакцинных препаратов при использовании различных схем иммунизации

3.2 Оценка напряжённости поствакцинального иммунного ответа на модели ВГЛ-1 энцефалита у мышей

3.2.1 Изучение нейропатогенных свойств ВГЛ-1

3.2.2 Селекция нейротропного штамма ВГЛ-1 патогенного для взрослых мышей

3.2.3 Оценка возможности использования адаптированного штамма «ПП1/1» для контроля иммуногенности вакцин против РПЛметодом контрольного заражения

3.2.4 Определение оптимальной заражающей дозы адаптированного штамма для мышей

3.2.5 Лабораторное испытание иммуногенности вакцинного штамма «СВ/69»

3.2.6 Определение оптимальной иммунизирующей дозы для различных вакцин

3.2.7 Экспериментальная оценка иммуногенности вакцин при однократной и двукратной иммунизации мышей против РПЛ

3.3 Оценка напряжённости поствакцинального иммунного ответа на модели ВГЛ-1 аборта у мышей

3.3.1 Изучение влияния ВГЛ-1 на беременность

3.3.2 Оценка напряжённости иммунного ответа на модели ВГЛ-1 аборта у мышей

4.0БСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Лабораторная модель для оценки иммуногенности вакцин против ринопневмонии лошадей»

Актуальность темы

Вирус герпеса лошадей 1 типа - возбудитель широко распространённой инфекции лошадей. Основными клиническими формами заболевания, вызываемого ВГЛ-1, являются аборты, миелоэнцефалопатия, респираторный синдром, кератоконъюнктивиты.

В последние годы герпесвирусная миелоэнцефалопатия в США и странах

Европы получила широкое распространение, несмотря на масштабную программу вакцинопрофилактики болезни. Неэффективность специфической профилактики неврологической формы ВГЛ-1 приводит к тому , что в период энзоотических вспышек заболеваемость лошадей достигает 90 %, смертность может составить до 50%.

При этом нет единого мнения по вопросу патогенеза миелоэнцефалопатии ВГЛ-1 инфекции. Предполагают, что сипмтомокомплекс болезни формируется в результате воспаления и тромбоза мелких кровеносных сосудов под влиянием образующихся цитотоксических иммунных комплексов, что приводит к гипоксической дегенерации клеток головного мозга. Результаты иммуногистохимических исследований свидетельствуют о локализации вирусного антигена главным образом в клетках эндотелия артериол и капилляров (Edington at al., 1986; Whitwell and Blunden, 1992), однако, при этом удалось подтвердить гибридизацией in situ и иммуногистохимическими методами инфекцию нейронов и астроцитов

Schmidt at al., 1994; Schultheiss at al., 1997). Ряд авторов полагают, что вакцинация способна усилить формирование цитотоксических иммунных комплексов и повысить шанс проявления миелоэнцефалопатии в результате нарушения функции кровеносных сосудов головного мозга (Allen GP, Kydd JH, Slater JD, et aL, 2002).

Другое мнение заключается в том, что в популяции лошадей появляются новые доминантные штаммы ВГЛ-1 с мутацией генов, кодирующих вирусную ДНК - полимеразу, ранее не регистрировавшиеся. Новые эпизоотические штаммы ВГЛ-1 характеризуются также чрезвычайно важным свойством -способностью к преодолению видового барьера (известны случаи энцефалитов с летальным исходом у антилоп, зебр, жирафов) и высокой вирулентностью для естественновосприимчивых животных (Nugent et al, 2006). Как правило, интродукция ВГЛ-1 в гетерологичную популяцию животных сопровождается летальностью до 100 %.

Представленные данные свидетельствуют об актуальности исследований, направленных на совершенствование средств специфической профилактики инфекции. Учитывая экономический фактор, естественно восприимчивые животные (лошади) в экспериментальной работе могут быть использованы в весьма ограниченном количестве. Эффективное решение может быть достигнуто путем моделирования инфекционного процесса на лабораторных животных.

Проведённые ранее исследования на сирийских хомяках (Е. Doll et al,

1953) показали, что ВГЛ-1 не обладает для хомяков (в отличие от лошадей) эндотелиотропными свойствами. Интрацеребральная инокуляция адаптированного штамма КуД ВГЛ-1 хомякам вызывала энцефалит, характеризуемый репликацией вируса в нейронах и глиальных клетках. По мнению большинства исследователей такая лабораторная модель имеет ограничение использования при выяснении ряда вопросов патогенеза и иммуногенеза инфекции ВГЛ-1.

Рядом работ (A.R. Awan et al., 1990; A. Kukreja et al., 1998; С. Walker et al., 2000; R. Hasebe et al., 2002; A.RJ. Frampton et al., 2004; N. Virmani et al., 2005; P.M. Smith et al., 2005) было показано, что при экспериментальном заражении ВГЛ - 1 мышей линии BALB/c удается воспроизвести инфекционный процесс достаточно приближенный к естественному заболеванию лошадей.

Моделирование на лабораторных животных иммунной реакции на различные препапаты герпесвируса лошадей с целью изучения особенностей иммунного ответа, обусловленного различной природой использованных вирусных препаратов, представляет значительный интерес. Успешное решение ряда аспектов этой задачи позволяет существенно продвинуться в познании иммуногенеза при герпесвирусной инфекции лошадей, что обеспечивает перспективу создания более эффективных и безопасных средств специфической профилактики болезни.

Цель и задачи исследования

В связи с этим целью работы было разработать лабораторную модель ВГЛ - 1 инфекции и изучить особенности формирования гуморальных реакций и устойчивости к ВГЛ-1 на введение различных вирусных антигенов.

В ходе исследования были поставлены следующие задачи:

1) Определить в ИФА, РН, РТГА возможность индуцирования гуморального иммунного ответа у мышей на введение: инактивированного вируса, аттенуированного вируса и рекомбинантной плазмиды pIYT. 1, содержащей в своём составе ген, кодирующий гликопротеин D ВГЛ-1;

2) провести сравнительный анализ формирования гуморального иммунного ответа у мышей линии BALB/c после введения рекомбинантной конструкции pIYT.l, экспрессирующей гликопротеин D ВГЛ-1; инактивированного ВГЛ-1 и вакцинных штаммов «СВ/69» и «Rhinomune»;

3) изучить антигенные свойства вакцинных препаратов при использовании различных схем иммунизации;

4) изучить чувствительность мышей к ВГЛ-1 при различных способах заражения;

5) провести селекцию вирулентного штамма ВГЛ-1 для последующей работы по изучению напряженности вакцинального иммунитета у мышей;

6) изучить напряжённость иммунитета у мышей в зависимости от природы антигена, дозы антигена, кратности иммунизации и способа контрольного заражения.

Научная новизна исследования

Впервые изучены иммуногенные свойства рекомбинантной плазмиды pIYT.l, содержащей в своём составе ген, кодирующий гликопротеин D ВГЛ-1, в сравнении с аттенуированным и инактивированным ВГЛ-1 на мышах линии

BALB/c. Установлено, что рекомбинантная плазмида pIYT.l вызывает образование специфических антител к вирусу в титрах, сопоставимых с реакцией на аттенуированный или инактивированный ВГЛ-1. Антитела могут быть выявлены в РН, РТГА и ИФА. Изучена динамика формирования иммунного ответа в зависимости от природы антигенов.

Впервые разработана лабораторная модель неврологической формы ВГЛ-1 инфекции на мышах линии BALB/c. Полученный селекцией штамм «ПП1/1» ВГЛ-1, патогенный для мышей в возрасте до 40 дней, вызывает у них геморрагический энцефалит с летальным исходом до 100% после интраназальной или интрацеребральной инокуляции.

Впервые изучены абортогенные свойства типичного эпизоотического штамма «ПП1» ВГЛ-1, циркулирующего на территории РФ, для лабораторных животных. Показано, что у беременных мышей линии BALB/c штамм «ПП1» после подкожной инокуляции вызывает гибель эмбрионов с последующей их резорбцией или рождение нежизнеспособного приплода.

Впервые на модели неврологической и абортивной форм ВГЛ-1 инфекции на мышах линии BALB/c изучена напряжённость иммунного ответа в зависимости от природы антигенов, дозы антигенов, кратности иммунизации и способа контрольного заражения.

Обнаружено усиление иммунного ответа при комбинированном введении рекомбинантной плазмиды pIYT.l и вакцинного штамма «СВ/69».

Практическое значение работы

Полученные результаты являются основанием для составления рекомендаций по контролю инактивированных и вирус-вакцин против ринопневмонии лошадей, а также испытанию на реактогенность аттенуированнных штаммов и вакцин на их основе. Предлагаемый метод с использованием лабораторной модели существенно снижает затраты биопреприятий при производстве вакцин против ринопневмонии и позволяет, вследствие его доступности, проводить контроль на любой стадии производства препарата. Кроме того разработанная методика может быть использована в научных исследованиях: полученный в ходе работы штамм, нейровирулентный для мышей линии BALB/c, может быть использован для изучения патогенеза и в частности иммуногенеза инфекции ВГЛ-1, а также при испытании препаратов для антивирусной терапии.

Разработаны (в соавторстве) «Рекомендации по получению рекомбинантной плазмиды, содержащей гены гликопротеинов вируса ринопневмонии лошадей, и их применению с использованием оптимальных доз для иммунизации восприимчивых лабораторных животных», утверждённые директором ВИЭВ в 2007 г.

Разработана (в соавторстве) «Временная инструкция по ретроспективной диагностике ринопневмонии лошадей (выявление специфических антител) иммуноферментным анализом (ИФА)», утверждённая директором ВИЭВ в 2007 г.

Материалы диссертации использованы в дополнении, подготовленном Референтной лабораторией МЭБ по ринопневмонии лошадей (эксперт К.П. Юров) для нового издания «Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines», раздел Equine diseases in list В, глава Equine rhinopneumonitis, Office International des Epizooties.

Апробация работы

Материалы работы были представлены на 2-м Московском международном Конгрессе «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ». Секция 2 - Биотехнология и сельское хозяйство (Москва, 2003), на Международной научной конференции «Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в ветеринарной медицине» (Москва, 2003), на Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном научно-производственном совещании научных сотрудников ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Москва, 2007 г.). Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 149 страницах машинописного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, результаты исследования, обсуждение выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Список литературы содержит 132 источника, из них

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Алексеенкова, Светлана Валерьевна

выводы

1. Разработана методика лабораторной оценки антигенных и иммуногенных свойств различных препаратов вируса герпеса лошадей 1. Найдена лабораторная модель - мыши линии BALB/c для оценки антигенных свойств и напряженности иммунитета.

2. Охарактеризован иммунный ответ у мышей линии BALB/c, на различные иммуногены ВГЛ 1: коммерческие вирусвакцины против ринопневмонии лошадей «СВ/69» и «Rhinomune»; инактивированный вирус и рекомбинантную плазмиду pIYT.l, содержащую в своём составе ген, кодирующий гликопротеин D ВГЛ-1.

3. Антитела, индуцированные у мышей рекомбинантной плазмидой pIYT.l определяются в тестах вируснейтрализации, РТГА и ИФА в титрах, сопоставимых с реакцией на аттенуированный или инактивированный ВГЛ-1.

4. Разработана лабораторная модель для изучения нервно-паралитической и абортогенной форм ВГЛ -1 инфекции на мышах.

5. Получен (методом перемежающихся пассажей) штамм ВГЛ-1 «ПП1/1», адаптированный к мышам линии BALB|c, вызывающий у 6-ти недельных мышей при интрацеребральной или интраназальной инокуляции симптомы поражения центральной нервной системы, характерные для герпесвирусной миелоэнцефалопатии лошадей. Эпизоотический штамм «ПП1» ВГЛ-1 вызывает у беременных мышей гибель эмбрионов после подкожной инокуляции.

6. Вакцинный штамм «СВ/69», в оптимальной иммунизирующей дозе, обеспечивает полную защиту мышей от экспериментальной инфекции вирулентным штаммом ВГЛ1. Вакцинный штамм «Rhinomune»; инактивированный вирус (штамм «ПП1»); рекомбинантная конструкция pIYT.l создают частичную защиту от инфекции.

7. Комбинированное введение рекомбинантной конструкции pIYT.l и цельновирионных вакцинных препаратов (инактивированного или аттенуированного ВГЛ-1) повышает гуморальный иммунитет у мышей и устойчивость их к контрольному заражению.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны (в соавторстве) «Рекомендации по получению рекомбинантной плазмиды, содержащей гены гликопротеинов вируса ринопневмонии лошадей, и их применению с использованием оптимальных доз для иммунизации восприимчивых лабораторных животных», утверждённые в 2007 г.

Разработана (в соавторстве) «Временная инструкция по ретроспективной диагностике ринопневмонии лошадей (выявление специфических антител) иммуноферментным анализом (ИФА)», утверждённая в 2007 г.

Материалы диссертации использованы в дополнении, подготовленном Референтной лабораторией МЭБ по ринопневмонии лошадей (эксперт К.П. Юров) для нового издания «Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines», раздел Equine diseases in list В, глава Equine rhinopneumonitis, Office International des Epizooties.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Алексеенкова, Светлана Валерьевна, 2007 год

1. Амирбеков А. М., Юров К. П., Крюков Н. Н. Иммуногенные свойства вирус вакцины против ринопневмонии лошадей. //Ветеринария. - 1984. - № 8. - С. 28-30.

2. Амирбеков М. А., Юров К. П. Иммунодепрессивные свойства вируса ринопневмонии лошадей. // Труды ВИЭВ. 1983. - №57. - С. 110 - 112.

3. Сансызбаев А. Р., Будулов Н. Р. Изучение антигенной активности инактивированного вируса ринопневмонии лошадей. // В кн.: Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных: Тез. докл. Всесоюз. научной конф. М. 1985.-С.230.

4. Супотницкий М. В. ДНК-иммунизация в профилактике инфекционных болезней сельскохозяйственных животных // Ветеринария. 1998. -№5. - С.18 -24.

5. Татаурова А. В., Юров К. П., Алексеенкова С. В. //Нейропатогенные штаммы возбудителя ринопневмонии вирусного аборта лошадей. // Ветеринария, 3,20 - 23.2006.

6. Юров Г. К., Народицкий Б. С., Юров К. П. Конструирование и использование ДНК вакцин. // Ветеринария. -1998. - №12. - С.25 - 27.

7. Юров К. П. Инфекционные болезни лошадей.// Изд во «Грааль». -2000. - С.19 -36.

8. Юров К. П. Антигенная структура возбудителей, совершенствование диагностики и борьбы с некоторыми вирусными болезнями лошадей. // Труды ВИЭВ. 1984. - №58. - С.22 - 28.

9. Allen G. P., Bryans J. T. Molecular epizootiology, pathogenesis and prophylaxis of equine herpesvirus-1 infections. //In: Pandey, R. (Ed.), Progress in Veterinary Microbiology and Immunology, vol. 2. Karger, Basel, Switzerland. 1986. - pp. 78-144.

10. Allen G. P., Kydd J. H., Slater J. D. Equid herpesvirus-1 (EHV-1) and equid herpesvirus-4 (EHV-4) infections. // In: Coetzer JAW, Thomson GR, Tustin, eds. Infectious diseases of livestock. Capetown: Oxford University Press. -2002.-pp. 862-891.

11. Allen G. P., Yeargan M., Costa L. R. R., Cross R. Major histocompatibility complex class I-restricted cytotoxic T-lymphocyte responses in horses infected with equine herpesvirus-1.// J. Gen. Virol. 1995. - 69: 606 - 612.

12. Awan A. R., Baxi M. and Field H. J. EHV-1 -induced abortion in mice and its relationship to stage of gestation. // Res. Vet. Sci. 1995. - 59: 139 -145.

13. Awan A. R., Chong Y. C., Field H. J. The pathogenesis of equine herpesvirus type 1 in the mouse: a new model for studying host responses to the infection // J. Gen. Virol. 1990. -71:1131-1140.

14. Awan A .R., Gibson J. S. and Field H. J. A murine model for studying EHV-1-induced abortion. //Res. Vet. Sci. 1991. - 51: 94 - 99.

15. Azmi M. and Field H. J. Cell-mediated antiviral response to equine herpesvirus type 1 demonstrated in a murine infection model by means of adoptive transfer of immune cells.// J. Gen. Virol. 1993a. - 74: 275 - 280.

16. Azmi M. and Field H. J. Interactions between equine herpesvirus type 1 and equine herpesvirus type 4: T cell responses in a murine infection model.// J. Gen. Virol. 1993b. - 74: 2339 - 2345.

17. Bagust T. J., Clark L. Pathogenesis of meningoencephalitis produced in calves by infectious bovine rhinotracheitis herpesvirus. // J. Сотр. Pathology. -1972.-82:375-383.

18. Bass E. P. Immunization with a modified live virus equine rhinopneumonitis vaccine and an aluminum hydroxid adsorbed equine influenza vaccine.// Proc. 24th ann Conf. Am. Ass. Equine Pract. 1979. - pp. 65 - 74.

19. Baxi M. К., Borchers К., Bartels Т., Schellenbach A., Baxi S. and Field H.J. Molecular studies of the acute infection, latency and reactivation of equine herpesvirus-1 (EHV-1) in the mouse model.// Virus Res. 1996. - 40: 33 -45.

20. Breathnach С. C., Soboll G., Suresh M., Lunn D. P. Equine herpesvirus-1 infection induces IFN-gamma production by equine T lymphocyte subsets. //Vet. Immunol. Immunopathol. -2005. 103: 207 - 215.

21. Breathnach C., Yeargan M. R., Sheoran A. S., Allen G. P. The mucosal humoral immune response of the horse to infective challenge and vaccination with equine herpesvirus-1 antigens. // Equine Vet. J. 2001. - 33: 651 - 657.

22. Browning G. F., Ficorilli N., Studdert M. J. Asinine herpesvirus genomes: Comparison with those of the equine herpesviruses. // Arch. Vir. 1988. -101:183- 190.

23. Bryans J. T. On immunity to disease caused by equine herpesvirus-1. //J. Am. Vet. Med. Assoc. 1969. - 155:294 - 300.

24. Bryans J. T. Serologic responses of pregnant Thoroughbred mares to vaccination with an inactivated equine herpesvirus vaccine. // Am. J. Vet. Res. -1980.-41: 1743-1746.

25. Burki F., Rossmanith W., Nowotny N., Pallan C., Mostl K., Lussy H. Viraemia and abortions are not prevented by two commercial equine herpesvirus-1 vaccines after experimental challenge of horses. // Vet. Q. -1990. 12: 80 - 86.

26. Burrows R., Goodridge D., Denyer M. S. Trials of an inactivated equid herpesvirus I vaccine: challenge with a subtype 1 virus. // Vet. Rec. 1984. -114: 369-374.

27. Burrows, R., Goodridge D. Equid herpesvirus 1 (EHV-1): Some observations on the epizootology of infection and on the innocuity testing of live virus vaccines. Proc. 24 th ann. Conf. Am Ass. Equine Pract. - 1979. - pp 17 -29.

28. Campbell Т. M., Studdert M. J. Equine herpesvirus type 1 (EHV1) Commonwealth.// Bureau Anim. Health Vet. Bull. 1983. - 53: 135 - 146.

29. Chowdhury S. I., Kubin G., Ludwig H. Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) induced abortions and paralysis in a Lipizzaner stud: a contribution to the classification of equine herpsviruses. //Arch. Virol. 1986. - 90: 273 - 288.

30. Colle C. F., Tarbet E. В., Grafton W. D., Jennings S. R. and O'Callaghan D.J. Equine herpesvirus-1 strain KyA, a candidate vaccine strain, reduces viral titers in mice challenged with a pathogenic strain, RacL. //Virus Res. 1996. -43: 111 -124.

31. Crabb B. S., Studdert M. J. Epitopes of glycoprotein G of equine herpesviruses 4 and 1 located near the С termini elicit type specific antibody responses in the natural host. // J. Virol. 1993. - 67: 6332 - 6338.

32. Crabb B. S., Studdert M. J. Equine rhinopneumonitis (equine herpesvirus-4) and equine abortion (equine herpesvirus-1). //In: Studdert M. J. (Ed.), Virus Infections of Vertebrates, vol. 6.Elsevier, Amsterdam, (Chapter 2). 1996. -pp. 11-37.

33. Csellner H., Whalley J. M. and Love D. N. Equine herpesvirus 1 HVS25A isolated from an aborted foetus produces disease in BALB/c mice.// Aust. Vet. J. 1995.-72:68-69.

34. Dolby C. A., Hannant D., Mumford J. A. Response of ponies to adjuvanted EHV-1 whole virus vaccine and challenge with virus of the homologous strain. //Br. Vet. J.- 1995.- 151: 27-37.

35. Doll E.R. Immunization against viral rhinopneumonitis of horses with live virus propagated in hamsters. //J. Am. Vet. Med. Assoc. 1961. - 139: 13241330.

36. Doll, E.R., Bryans, J.T. Immunization of young horses against viral rhinopneumonitis. //Cornell Vet. 1963a. - 53: 24-41.

37. Doll E. R., Bryans J. T. A planned infection program for immunizing mares against viral rhinopneumonitis. //Cornell Vet. 1963b. - 53: 249 - 262.

38. Doll E. R., Crowe M. E. W., McCollum W. H., Bryans J. T. In vitro serum neutralization of hamster propagated equine rhinopneumonitis virus. //Cornell Vet.- 1959.-49: 28-33.

39. Doll E. R., Richards M. G., Wallace M. E. Adaptation of the equine abortion virus to sukling hamsters.// Cornell. Vet. 1953. - 43: 551 - 558.

40. Dutta S. К., Myrup A. C. Infectious centre assay for intracellular virus and infective virus titre of equine lymphocytes; infected in vivo and in vitro withequine herpesviruses. //Can. J. Сотр. Med. 1983. - 47: 64 - 69.

41. Dutta S. K., Shipley W. D. Immunity and the level of neutralization antibodies in foals and mares vaccinated with a modified live-virus rhinopneumonitis vaccine. // Am. J. Vet. Res. 1975. - 36: 445 - 448.

42. Edington N., Bridges C. G., Griffiths L. Equine interferons following exposure to equid herpesvirus-1 or -4. J. //Interferon Res. 1989. - 9: 389 - 392.

43. Edington N., Bridges C. G., Patel J. R. Endothelial cell infection and thrombosis in paralysis caused by equid herpesvirus- 1: equine stroke. // Arch. Virol.- 1986.-90: 111-124.

44. Fauquet С. M., Mayo M. A., Maniloff J., Desselberger U., Ball, L. A. Virus Taxonomy. Classification and Nomenclature of Viruses.// Eight Report of the International Committee on the Taxonomy of Viruses. 2005. - pp. 193 -211.

45. Ficorilli N., Studdert M. J. and Crabb B. S. The nucleotide sequence of asinine herpesvirus 3 glycoprotein G indicates that the donkey virus is closely related to equine herpesvirus 1. // Arch. Vir. 1995. - 140 :1653 - 1662.

46. Fukushi N., Tomita Т., Taniguchi A., Ochiai Y., Kirisawa R., Matsumura Т., Yanai Т., Masegi Т., Yamaguchi T. and Hirai K. Gazelle Herpesvirus 1: A new neurotropic herpesvirus immunologically related to equine herpesvirus 1.//Virology.- 1997.-226:34-44.

47. Charlton К. M., Mitchell D., Girard A., Corner A. H. Meningoencephalomyelitis in horses associated with equine herpesvirus 1 infection // Vet. Pathol. 1976. - 13 (1): 59 - 68.

48. Gerber J. D., Marron A. E., Bass E. P., Beckenhauer W. H. Effect of age and pregnancy on the antibody and cell-mediated immune responses of horses to equine herpesvirus 1. // Can. J. Сотр. Med. -1977. 41 (4): 471 - 478.

49. Gerst S., Borchers K., Gower S. M., Smith К. C. Detection of EHV-1 and EHV-4 in placental sections of naturally occurring EHV-1- and EHV-4 -related abortions in the UK: use of the placenta in diagnosis. //Equine Vet. J. -2003.-35:430-433.

50. Gleeson L. J., Coggins L. Response of pregnant mares to equine herpesvirus 1 (EHV-1). // Cornell Vet. -1980. 70: 391 - 400.

51. Goehring L. S., Sloet van Oldruitenborgh-Oosterbaan M. M. The mystery of equine herpes myeloencephalopathy.// Equine Vet. Educ. 2001. — 13: 36 -42.

52. Guo P. X. Characterization of the gene and an antigenic determinant of equine herpesvirus type-1 glycoprotein 14 with homology to gB-equivalent glycoproteins of other herpesviruses. // Gene. 1990. - 87 (2): 249 - 255.

53. Hannant D. Immune responses to common respiratory pathogens: problems and perspectives in equine immunology. //Equine Vet. J. (Suppl.). 1991. -pp. 10-18.

54. Hannant D., O'Neill Т., Jessett D. M., Mumford J. A. Evidence for nonspecific immunosuppression during the development of immune responses to equid herpesvirus-1. //Equine Vet. J. (Suppl.). 1991. - pp. 41 - 45.

55. Hannant D., Jessett D., O'Neill Т., Dolby C. A., Cook R. F., Mumford J. A. Responses of ponies to equid herpesvirus-1 ISCOM vaccination and challenge with virus to the homologous strain.// Res. Vet. Sci. 1993. - 54: 299 - 305.

56. Hannant D., O'Neill Т., Ostlund E. N., Kydd J. H., Hopkin P., Mumford J. A. Equid herpesvirus-induced immunosuppression is associated with lymphoidcells and not soluble circulating factors. //Viral Immunol. 1999. — 12:313 -321.

57. Hasebe R., Kimura Т., Nakamura K., Ochiai K., Okazaki K., , Wada R., Umemura T. Differential susceptibility of equine and mouse brain microvascular endothelial cells to equine herpesvirus 1 infection. // Arch. Virol. 2006. - 151 (4): 775 - 786.

58. Hasebe R., Kimura Т., Sato E., Okazaki K., Ochiai K., Wada R., Umemura T. Equine herpesvirus-1 -induced encephalomyelitis in mice: a comparative study of neuroadapted virus and its parental strain. // J. Сотр. Pathol. 2002. - 127 (2-3): 118-125.

59. Inazu M., Tsuha O., Kirisawa Y., Kawakami Y. and Iwai H. Equid herpesvirus 1 infection in mice.//J. Vet. Med. Sci.- 1993.-55: 119- 121.

60. Iqbal J., Edington N. Equid herpesvirus 1 is neurotropic in mice, but latency from which infectious virus can be reactivated does not occur. // Acta Vet. Hung.-2002.-50(1): 117-129.

61. Kaschula V. R., Beaudette F. R and Byrne R. J. The adaptation of equine influenza virus to infant mice by the intracerebral route.// Cornell Vet. 1957. -47: 137-143.

62. Kirisawa R., Endo A., Iwai H. and Kawakami Y. Detection and identification of equine herpesvirus 1 and - 4 by polymerase chain reaction. // Vet. Microbiol. -1993. - 36: 57 - 67.

63. Klingeborn B. Studies on differentiation between attenuated and wild type strains of equid. // Herpesvirus 1, Uppsala. - 1976.

64. Kukreja A., Love D. N., Whalley J. M. and Field H. J. Study of protective immunity of co-expressed glycoprotein H and L of equine herpesvirus-1 in a murine intranasal infection model. //Vet. Microbiol. 1998a. - 60: 1 -11.

65. Kukreja A., Walker C., Fitzmaurice Т., Awan A., Love D. N., Whalley J. M., Field H. J. Protective effects of equine herpesvirus-1 (EHV-1) glycoprotein В in a murine model of EHV-1-induced abortion. // Veterinary Microbiology. -1998b.-62: 303 -311.

66. Kydd J. H., Smith К. C., Hannant D., Livesay G. L., Mumford J. A. Distribution of equid herpesvirus -1 (EHV-1) in the respiratory tract of ponies: implications for vaccination strategies. // Equine Vet. J. 1994a. - 26: 466 -469.

67. Kydd J. H., Smith К. C., Hannant D., Livesay G. L., Mumford J. A. Distribution of equid herpesvirus-1 (EHV-1) in the respiratory tract associated lymphoid tissue: implications for cellular immunity. //Equine Vet. J. 26: 470 -473. 1994b.

68. Kydd J. H., Hannant D., Mumford J. A. Residence and recruitment of leucocytes to the equine lung after EHV-1 infection. //Vet. Immunol. Immunopathol. 1996. - 52 : 15 - 26.

69. Kydd J. H., Townsend H. G., Hannant D. The equine immune response to equine herpesvirus 1: The virus and its vaccines. // Vet. Immunology and Immunopathology. - 2006. - 111: 15 - 30.

70. Laemly V. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. - 227: 680 - 684.

71. Marshall K. R. and Field H. J. Demonstration of equine herpesvirus-1 neuronal latency in murine olfactory bulbs using a novel combined in situ PCR and protein synthesis method.// Virology. 1997. - 229: 279 - 282.

72. Mayr A., Pette J. First experiments concerning the vaccination of horses against rhinopenumonia (viral abortion of mares) with a live vaccine from cell cultures. //Bull. Off. Int. Epizoot. 1968. - 70: 133 - 140.

73. Mayr A., Pette J., Petzoldt K., Wagener K. Studies on the development of a live vaccine against rhinopneumonitis (mare abortion) of horses.// Zbl Vet. Med.- 1968.- 15:406-408.

74. Mukaiya R., Kimura Т., Ochiai K., Wada R., Umemura T. Demonstration of equine herpesvirus-1 gene expression in the placental trophoblasts of naturally aborted equine fetuses. // J. Сотр. Pathol. 2000. - 123: 119 - 125.

75. Mumford J. A., Hannant D. Equine respiratory viral vaccines. //In: Peters, A. R. (Ed.), Vaccines for Veterinary Applications. Butterworth Heinemann. -1993.-pp. 117-148.

76. Mumford J. A., Rossdale P. D., Jessett D. M., Gann S. J., Ousey J., Cook R. F. Serological and virological investigations of an equid herpesvirus 1 (EHV-1) abortion storm on a stud farm in 1985. //J. Reprod. Fert. Suppl. 1987. - 35: 509-518.

77. Neeley D. P., Hawkins D. L. A two year study of the clinical and serological responses of horses to a modified live-virus equine rhinopneumonitis vaccine. //J. Equine Med. Surg. 1978. - 2: 532 - 540.

78. O'Neill Т. T lymphocyte responses to equid herpesviruses 1 and - 4 in horses. //Ph.D. Thesis. Open University, London, UK. - 1995.

79. O'Neill Т., Kydd J. H., Allen G. P., Wattrang E., Mumford J. A., Hannant D. Determination of equid herpesvirus 1-specific, CD8+, cytotoxic T lymphocyteprecursor frequencies in ponies. //Wet. Immunol. Immunopathol. 1999. - 70: 43-54.

80. Patel J. R., Bateman H., Williams J., Didlick S. Derivation and characterisation of a live equid herpesvirus-1 (EHV-1) vaccine to protect against abortion and respiratory disease due to EHV-1. // Equine Vet. J. -2003a.- 91:23 -39.

81. Patel J. R., Didlick S., Bateman H. Efficacy of a live equine herpesvirus 1 (EHV-1) strain С147 vaccine in foals with maternally - derived antibody: protection against EHV-1 infection. //Equine Vet. J. - 2004. - 36: 447 - 451.

82. Patel J. R. and Edington N. The pathogenicity in mice of respiratory, abortion and paresis isolates of equine herpesvirus-1 // Vet. Microbiol. 1983. -8 (3): 301 -305.

83. Patel J. R., Foldi J., Bateman H., Williams J., Didlick S., Stark R. Equid herpesvirus (EHV-1) live vaccine strain С147: efficacy against respiratory diseases following EHV types 1 and 4 challenges. IN el. Microbiol. 2003b. -92: 1-17.

84. Piatt H., Singh H., Whitwell К. E. Pathological observations on an outbreak of paralysis in broodmares. // Equine Vet J. 1980. - 12 (3): 118 - 126.

85. Ruitenberg К. M., Walker C., Wellington J. E., Love D. N„ Whalley J. M. DNA-mediated immunization with glycoprotein D of equine herpesvirus (EHV-1) in a murine model of EHV-1 respiratory infection. // Vaccine. -1999.- 17(3): 237-244.

86. Семерджиев Б., Христов Ст. Възприемчивост на морските свинчета към вируса на аборта по кобилите.// Известия НИВИ, София. 1958. - 1: 101 -115.

87. Семерджиев Б., Христов Ст. Реакцията за свързване на комплемента за диагноза на вирусния аборт по кобилите. // Известия НИВИ, София. -1959.- 1:86-92.

88. Schultheiss P. C., Collins J. K., Hotaling S. F. Immunohistochemical demonstration of equine herpesvirus-1 antigen in neurons and astrocytes of horses with acute paralysis. // Vet. Pathol. 1997. - 34 (1): 52 - 54.

89. Slater J. C., Borchers K., Thackray A. M., Field H. The trigeminal ganglion is a site of equine herpsvirus-1 (EHV-1) latency and reactivation in the horse.// J. Gen. Virol. 1994b. - 75:2007 - 2016.

90. Smith К. C., Blunden A. S., Whitwell К. E., Dunn K. A., Wales A. D. A survey of equine abortion, stillbirth and neonatal death in the UK from 1988 to 1997. //Equine Vet. J. 2003. - 35: 496 - 501.

91. Smith К. C., Borchers K. A study of the pathogenesis of equid herpesvirus-1 (EHV-1) abortion by DNA in-situ hybridisation. //J. Сотр. Pathol. 2001. -125:304-310.

92. Smith К. C., Mumford J. A., Lakhani K. A comparison of equid herpesivurs-1 (EHV-1) vascular lesions in the early versus late pregnant equine uterus. // J. Сотр. Pathol. 1996. - 114: 231 - 246.

93. Smith К. C., Whitwell К. E., Binns M. M., Dolby C. A., Hannant D., Mumford J. A. Abortion of virologically negative fetuses following experimental challenge of pregnant pony mares with equid herpesvirus 1.// Equine Vet. J. - 1992.-24:256- 259.

94. Smith К. C., Whitwell К. E., Mumford J. A., Gower S. M., Hannant D., Tearle, J. P. An immunohistological study of the uterus of mares following experimental infection with equid herpesvirus -1. Equine Vet. J. 1993. - 25: 36-40.

95. Studdert M. J., Crabb B. S., Ficorilli N. The molecular epidemiology of equine herpesvirus 1 (equine abortion virus) in Australasia 1975 to 1989. // Austr. Vet. J. 1992. - 69: 104 - 111.

96. Tewari D., Whalley J. M., Love D. N. and Field H. J. Characterization of immune responses to baculovirus-expressed equine herpesvirus type 1 glycoproteins D and H in a murine model. // J. Gen. Virol. 1994. - 75:1735 -1741.

97. Thomson G. R., Mumford J. A., Campbell J., Griffiths L., Clapham P. Serological detection of equid herpesvirus 1 infections of the respiratory tract. //Equine Vet. J. 1976. - 8: 58 - 65.

98. Virmani N., Verma P. C., Panisup A. S., Singh В. K. and Batra M. Comparative studies on neurotropic properties of indigenous strains of equine herpes virus-1 // Indian J. of Animal Sci. 2005. - 75 (4): 393 - 396.

99. Walker С., Packiarajah P., Gilkerson J. R., Love D. N. and Whalley J. M. Primary and secondary infection of mice with equine herpesvirus 1, strain HVS25A. // Virus Res. 1998. - 57: 151 - 162.

100. Walker C., Perotti V. M., Love D. N. and Whalley J. M. Infection with equine herpesvirus 1 (EHV-1) strain HVS25A in pregnant mice.// J. Сотр. Path.- 1999.- 120: 15-27.

101. Welch H. M., Bridges C. G., Lyon A. M., Griffiths L., Edington N. Latent equid herpesviruses 1 and 4: detection and distinction using the polymerase chain reaction and cocultivation from lymphoid tissues. // J. Gen. Virol. -1992.-73:261 -268.

102. Whitwell К. E. and Blunden A. S. Pathological findings in horses dying during an outbreak of the paralytic from of Equid herpesvirus type 1 (EHV-1) infection.// Equine vet. J. 1992. - 24: 13 - 19.