Разработка технологии получения растворимой формы тромбопластинового реагента тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат биологических наук Репнякова, Евгения Михайловна

• Репнякова, Евгения Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Репнякова, Евгения Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. ОПТИМАЛЬНЫЕ УСЛОВИЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ СЫРЬЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

ТРОМБОПЛАСТИНА РАСТВОРИМОГО.

3.1. Получение высокоактивного сырья.

3.1.1. Определение условий взятия, отмывки и хранения сырья.

3.1.2. Отработка режимов получения и хранения гомогенатов.

3.1.3. Выбор режимов экстракции тромбопластически активных веществ.

3.2. Условия сохранения активности сырья до и во время сублимационной сушки.

3.2.1. Исследование свойств реагента, приготовленного без использования ограждающих веществ.

3.2.2. Изменение активности и рН в зависимости от использованных ограждающих веществ.

3.2.3. Выбор объема продукта во флаконе.

Глава 4. ПОЛУЧЕНИЕ ТРОМБОПЛАСТИНА РАСТВОРИМОГО

И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО КАЧЕСТВА В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕНИЯ.

4.1. Отработка режимов замораживания и сублимационного высушивания.

4.2. Технология получения реагента тромбопластина растворимого.

4.3. Изучение качества реагента.

4.3.1. Оценка активности, рН и остаточной влажности.

4.3.2. Исследование чувствительности к дефициту факторов VII и X.

4.3.3. Определение Международного индекса чувствительности тромбопластина растворимого.

4.3.4. Оценка сопоставимости результатов исследований при применении различных тромбопластинов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка технологии получения растворимой формы тромбопластинового реагента»

Актуальность

Нарушения системы гемостаза сопутствуют многим заболеваниям и патологическим состояниям. Для их диагностики и коррекции необходимы информативные и стандартизованные методы исследований, основанные на применении качественных диагностических реагентов. Одним из наиболее широко распространенных тестов, обязательных для выполнения в клинико-диагностических лабораториях, является определение протромбинового времени (принцип Квика). Метод широко используется для скринингового исследования свертывающей системы крови, контроля терапии антикоагулянтами непрямого действия (АНД) и диагностики заболеваний печени.

Для его воспроизведения применяется целый спектр тромбопластиновых реагентов, выпускаемых в основном многочисленными зарубежными фирмами. Результаты исследований, полученные при их применении, бывают трудно сравнимы из-за различий в активности и чувствительности реагентов, особенно к низкому уровню факторов свертывания, в том числе тех, которые снижаются под воздействием антикоагулянтов - антагонистов витамина К. Для обеспечения объективности результатов исследований протромбинового времени и современных способов его выражения необходимо применение тромбопластинов, которые стандартизованы согласно требованиям Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Они должны обладать чувствительностью к дефициту фактора VII, белкам PIVKA, не содержать гемоглобин и инфекционные агенты, быть стабильными и откалиброванными по Международному референтному тромбопластину с определением Международного индекса чувствительности (МИЧ).

На качество исследований протромбинового времени влияет также то, что во многих лабораториях определение проводится пробирочными способами и аппаратными, с использованием полуавтоматических и автоматических коагулометров. Воспроизведение метода с помощью приборов облегчает проведение исследований и снижает вариацию результатов; однако, их применение предусматривает использование в тест-системах коммерческих реагентов особо высокого качества, имеющих длительный срок годности (140, 141, 152, 153).

Наиболее широко используются реагенты тромбопластина, приготовленные из тканей организма млекопитающих; в последние годы применяются также рекомбинантные тромбопластины. В настоящее время один из существующих Международных референтных тромбопластинов (rTF/95) также является человеческим рекомбинантным; он рекомендован экспертами ВОЗ в качестве референта производителям тромбопластинов.

При определении протромбинового времени многие отечественные КДЛ используют нерастворимые тромбопластины, которые нестандартны, так как для приготовления рабочего раствора они требуют проведения дополнительных манипуляций, снижающих качество конечных результатов. Растворимые формы реагентов сокращают время проведения исследований и повышают их точность, а также обеспечивают возможность калибровки и выражения результатов не только в %ПИ, но и в единицах Международного нормализованного отношения (MHO), величину которого необходимо определять при контроле терапии АНД.

Поскольку технология приготовления растворимой формы тромбопластинового реагента имеет определенные сложности, до настоящего времени предложены и используются всего два отечественных растворимых реагента: Ренампластин фирмы «Ренам» (Москва) и Техпластин фирмы «Технология-Стандарт» (Барнаул).

Приготовление растворимой формы реагента предусматривает очистку от биологического балласта, проведение которой может привести к снижению активности и чувствительности сырья. В связи с этим важное значение приобретает оптимизация условий выделения из него тромбопластинового экстракта и дальнейшее его хранение до сублимационной сушки и при проведении ее. Основными причинами снижения активности и чувствительности реагента может быть развитие процессов перекисного окисления липидов и активации фосфолипаз, разрушающих фосфолипидную часть тромбопластина. Предотвратить их возможно путем применения ограждающих веществ. При их оптимальном качественном и количественном составе денатурация и окислительная модификация тканевого фактора и его липидной части могут быть значительно уменьшены.

Использование качественного растворимого тромбопластина, МИЧ которого определен и находится в пределах требований ВОЗ, позволит выражать результаты теста Квика в виде MHO. Это особенно важно для обеспечения контроля терапии антикоагулянтами непрямого действия. Создание такого отечественного реагента, сопоставимого по качеству с зарубежными аналогами, пригодного для пробирочного и аппаратного выполнения метода определения протромбинового времени будет во многом способствовать решению проблемы его стандартизации, в том числе выражения результатов.

Цель исследования

Разработать технологию получения реагента тромбопластина растворимого, близкого по активности, чувствительности и стабильности к лучшим зарубежным аналогам, который можно рекомендовать для использования в клинико-диагностических лабораториях страны при определении протромбинового времени.

Задачи исследования:

1. Изучить тромбопластическую активность гомогенатов, выделенных из кадаверного мозга и его серого вещества, в зависимости от режимов гомогенизации, сроков, условий хранения и количества используемых единиц (мозг одного кадавера или объединённый пул).

2. Оптимизировать процесс выделения из гомогенатов экстрактов, обладающих высокой тромбопластической активностью.

3. Определить взаимосвязь между количественным составом фосфолипидов в супернатантах и их тромбопластической активностью; установить минимальное количество гемоглобина в сырье и супернатантах, не влияющее на активность и последующую стабильность реагента.

4. Выбрать и оценить эффективность ограждающих веществ и их концентраций для обеспечения стабильности реагента при длительном хранении.

5. Отработать оптимальный для сохранения тромбопластической активности продукта режим сублимационной сушки.

6. Исследовать чувствительность реагента тромбопластина растворимого к дефициту факторов VII и X; установить МИЧ на основании калибровки относительно зарубежных референтов.

7. Исследовать стабильность активности и чувствительности реагента при длительном хранении; оценить его пригодность для контроля терапии анти коагулянтам и непрямого действия.

Научная новизна

Впервые разработана и запатентована технология производства отечественного реагента тромбопластина растворимого, сырьем для которого является серое вещество кадаверного мозга. Оценена тромбопластическая активность гомогенатов мозга, приготовленных из различных участков его, в зависимости от сроков и режимов хранения, количества единиц при изготовлении пула, режимов гомогенизации и центрифугирования. Выявлена прямая зависимость проявления тромбопластической активности реагента от количественного состава трех фосфолипидов в нем (фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилсерина). Впервые предложены ограждающие вещества и их концентрации, сохраняющие активность реагента до и во время проведения сублимационной сушки и при хранении в течение 1 года.

Практическое значение

Создана технология производства тромбопластинового реагента в растворимой форме, проведена его калибровка и определен Международный индекс чувствительности, близкий к единице в течение всего срока хранения. Утверждена Фармакопейная статья предприятия: ФСП № 42-0335-5799-04 от 29 сентября 2004 года на «Тромбопластин рстворимый, лиофилизат для диагностических целей»; налажено его мелкосерийное производство. Это позволило рекомендовать отечественный реагент для использования в клинико-диагностических лабораториях страны для исследования протромбинового времени и выражения его результатов в виде Международного нормализованного отношения (MHO), что важно при контроле терапии антикоагулянтами непрямого действия.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Обоснование зависимости получения активного и чувствительного реагента тромбопластина от условий хранения, гомогенизации, центрифугирования, экстракции сырья, выбора ограждающих веществ и последующей сублимационной сушки.

2. Технология получения лиофилизированной формы растворимого тромбопластинового реагента со сроком годности не менее 1 года для

О исследования протромбинового времени и определение его

Международного индекса чувствительности (МИЧ). 3. Возможность применения реагента при контроле терапии антикоагулянтами непрямого действия.

Апробация работы

Материалы работы были доложены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемы трансфузионной медицины» (Киров,2000), «Современные проблемы гематологии и трансфузиологии» (Киров, 2002), а также на итоговых научных конференциях Кировского НИИ гематологии и переливания крови и Кировской Медицинской академии (1999-2000 гг.). По теме диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 3 патента и 3 - в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, двух глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, содержащего

У 155 источников. Диссертация изложена на 115 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 2 рисунками и 16 таблицами.

Работа выполнена в лаборатории биохимии крови (руководитель -доктор биол. наук, профессор Тарасова Л.Н.), станции переливания крови (главный врач Куноф В.К.) и научно-производственном отделе ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росздрава» (директор - доктор мед. наук, профессор Шарыгин СЛ.)

Выражаю благодарность дирекции института и ученой части за предоставленную возможность выполнения данной работы.

Выражаю большую благодарность руководителю Людмиле Николаевне Тарасовой за предложенную тему, постоянную помощь, ценные советы и замечания.

Выражаю также благодарность сотрудникам лаборатории биохимии крови: Софье Геннадьевне Владимировой, Наталье Николаевне Переваловой, Галине Карповне Платоновой, Ирине Николаевне Зимиревой, Ольге Викторовне Веселковой, Елене Андреевне Быковой за совместное творческое участие при выполнении работы. Благодарю Екатерину Юрьевну Савиных и сотрудников научно-производственного отдела: Решетникову Надежду Рудольфовну, Блинову Лидию Александровну, Воронову Любовь Николаевну за помощь в проведении исследований, также сотрудников клинической лаборатории и отдела контроля качества.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Репнякова, Евгения Михайловна

ВЫВОДЫ

1. Разработана технология получения растворимого тромбопластинового реагента из серого вещества кадаверного мозга, обладающего высокой чувствительностью к дефициту факторов VII и X.

2. Международный индекс чувствительности (МИЧ) тромбопластина растворимого, установленный на основании калибровки, относительно Международного референтного тромбопластина rTF/95, близок к 1,00 (1,02 и 1,08), что подтверждает его высокую чувствительность и возможность использования при контроле терапии антикоагулянтами непрямого действия.

3. Наиболее высокой тромбопластической активностью (14,6с±0,21; CV=1,4%) обладает пул из серого вещества восьми единиц мозга, подвергнутый двукратной заморозке и последующему оттаиванию. Гомогенизацию сырья необходимо проводить в течение 0,5-1 минуты, полученные гомогенаты допустимо хранить в течение 2-х недель при -(20±2)°С и 4-х - при -(40±2)°С.

4. Наибольшую активность экстрактов обеспечивают соотношения гомогената и воды 1:1 и 1:2, центрифугирование 20 мин при 600 g с последующим трехкратным центрифугированием по 30 мин при 800 g и температуре +(5±2)°С.

5. Супернатанты с высокой активностью получаются после второго, третьего и четвертого центрифугирования (14,4, 13,7 и 14,7с соответственно); количество ФЭ в них не ниже 9%, ФХ не менее 4%, а ФС- 1,5%.

6. Стабильность реагента при хранении обеспечивает применение следующих защитных веществ: 0,05М растворов буферов HEPPSO или HEPESa, антиоксиданта 0,005 М раствора метабисульфита натрия, криопротектора - 2% раствора сахарозы (конечной концентрации).

7. Оптимальными для сохранения тромбопластической активности и допустимой остаточной влажности реагента определены параметры проведения сублимационной сушки: температура материала при сублимации в пределах -(25-40)°С, конденсатора в камере не выше -(60)°С, давление в камере сублиматора на уровне от 7-16 Па, на этапе досушивания - не выше 14 Па. Продолжительность стадии сублимации при отрицательных значениях температуры продукта - 11±1 час, при положительных -12+1 час.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Тромбопластиновый реагент, разработанный в ФГУ «КНИИГиПК Росздрава», в дальнейшем может быть рекомендован для использования в клинико-диагностических лабораториях страны для исследования протромбинового времени и выражения его результатов в виде MHO, необходимого при контроле терапии антикоагулянтами непрямого действия.

2. Для исключения вариаций результатов метода при использовании тромбопластиновых реагентов при их производстве необходимо соблюдать требования по срокам хранения, гомогенизации, отмывки и центрифугированию сырья. При изготовлении пула сырья соблюдать требования по использованию оптимального количества единиц.

3. Определять качество сырья, полуфабриката на промежуточных этапах производства тромбопластинов, исследуя чувствительность к фактору VII в качестве скринингового теста.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Репнякова, Евгения Михайловна, 2005 год

1. Анохина Т.Ю., Соловьев О.Н., Лоскутова С.А., Чупрова А.В., Момот А.П. Совершенствование методов контроля за эффективностью антикоагулянтной терапии ДВС-синдрома у детей //Тромбоз, гемостаз и реология. -2002. -N2. -С.70.

2. А.С. N 1428464 от 06.03.87. Способ получения тромбопластина /Гайда А.В., Монастырский В.А., Магеровский Ю.В., Фадеева И.В., Староверов С.М., Лисичкин Г.В.

3. А.С. N 1474924 от 06.03.87. Сорбент для выделения и очистки тромбопластина и способ его получения /Староверов С.М., Фадеева И.В., Лисичкин Г.В., Магеровский Ю.В., Монастырский В.А., Гайда А.В.

4. А. С. N 1775897 А 61 К 35/30, С 12 N 9/48 от 23.03.90. Способ получения диагностического агента для определения протромбинового времени /Кулене В.В., Стрейкувене И.К., Синкувене Д.С., Герасимене Г.Б., Паулавичене Г.

5. Байкеев Р.Ф. Деструкция тканей и свертывание крови. — Казань.-1994. -217с.

6. Байкеев Р.Ф. Влияние диметилсульфоксида и глицерина на активность тканевого тромбопластина //Казанский мед. журнал.-1983.-T.64.-N4.-C308-309.

7. Байкеев Р.Ф., Азанчеев Н.М. Тепловая инактивация тканевого тромбопластина //Украинский биохимический журнал —1991. -T.64,-N1.-C. 10-16.

8. Байкеев Р.Ф., Зинин В.Н., Ильясов А.В. К вопросу об антитромбопластическом действии криопротекторов биологических мембран //Криобиология.-1989.-N4.-C.52-54.

9. Баркаган З.С. Очерки антитромботической фармакопрофилактики и терапии. -М.: Ныодиамед АО, 2000.-148с.

10. Баркаган З.С., Момот А.П., Тараненко И.А., Шойхет Я.Н. Основы пролонгированной профилактики и терапии тромбоэмболий //Методические указания. -М.: Ныодиамед -АО,-2003. 48с.

11. Баркаган З.С., Цывкина Л.П., Момот А.П. и др. Анализ участия микромембран в гемокоагулирующих эффектах змеиных ядов //Сборник научных трудов Нижегородского медицинского университета. -1995.-С.15-18.

12. Барроуклифф Т.В. Проблемы стандартизации протромбинового времени //Патология гемокоагуляции. Ч.Ш. —М., 1995. -С.10-11.

13. Барский E.JL, Кравцова Т.Р., Самуилов В.Д., Самуилов Л.Д. Действие антиоксидантов фенольной природы на фотосинтетический перенос электронов в хлоропластах // Биохимия. -1992.- Т.57, вып. 9, -С. 1427-1431.

14. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. -Киев: Наукова Думка.- 1982.-С.132-133.

15. Берковский A.JI. Разработка методов получения биологически активных соединений для диагностики системы гемостаза: Автореф. дис. .канд. биол. наук.- М.,-2000. -26с.

16. Берковский A.JI., Ульянова И.С., Сергеева Е.В. и др. Исследование стабильности промышленных серий препаратов тромбопластина при хранении //Клинич. лаб. диагностика.-2003.- N3. -С.41-43.

17. Бобилевич Б. Стандартизация методов в лабораторной медицине //Клинич. лаб. диагностика.-1999.- N9. -С.32.

18. Бойко Н.М., Тонконог JI.A., Руденко С.И., Дегтярев А.В., Мельникова О.В. Особенности влияния криопротекторов на структуру мембран //II Всесоюзный съезд гематологов и трансфузиологов: Тезисы докладов. -Львов -1985.-С.61.

19. Бокарев И.Н. Лабораторные методы в диагностике и лечении патологии свертывания крови //Клинич. лаб. диагностика.1999.-N10.-C.37-38.

20. Бокарев И.Н. Лабораторные методы исследования свертывания крови при обследовании больных в амбулаторных условиях // Клинич. лаб. диагностика. -2001. N9. -С. 16.

21. Бокарев И.Н., Козлова Т.В. Принципы рациональной терапии оральными антикоагулянтами //Тромбоз, гемостаз и реология. —2000.-N4. -С. 16-21.

22. Бокарев И.Н., Козлова Т.В., Гнездилова Н.Ю. Применение варфарина у больных с острым инфарктом миокарда и нестабильной стенокардией //Атеротромбоз проблема современности. -Сборник материалов Международной научной конференции. -М., 1999. -С. 15-18.

23. Бышевский А. Ш., Зубаиров Д. М., Терсенов О. А. Тромбопластин //Новосибирск, 1993. -180с.

24. Бышевский А.Ш., Соколовский С.Р. Потенцирование противосвертывающих эффектов фосфатидилсодержащего антикоагулянта и гепарина //Вопросы мед. химии.-1982.- N2.-C.30-34.

25. Бышевский А. Ш., Мухачева И.А., Гальян С.Л. Фосфатидилсерин-регулятор процессов свертывания крови в организме //IV й Всесоюзный симпозиум по биохимии липидов. Тезисы докладов. Киев.-1983.-С.26-27.

26. Вала М. Инструкция по обслуживанию, уходу и ремонтам установки для сублимационной сушки. -ЧССР: Frigera, 1984. —4.1. — 326с.

27. Вартанян Л.С., Гуревич С.М. Влияние ионола на метаболизм супероксидных радикалов в печени мышей //Вопросы мед. химии. -1999. -Т. 45.-вып. 4. -С.314-320.

28. Гайда Л.В. Хроматография белковых факторов гемостаза.

29. Лвтореф. дис.доктора хим. наук: 02.00.10 /Львов, филиал Киевского

30. НИИ гематологии и переливания крови.- М.: -1993. -51с.

31. Гайда Л.В., Монастырский В.А., Магеровский Ю.В., Торик Ж.Н. Контроль антикоагулянтной терапии при помощи препарата «Тромбопластин растворимый» //Лаб. дело.-1989.- N10. -С.20-23.

32. Гаранина Е.Н. Выбор методов внутрилабораторного контроля качества исследований /Клиническая и лабораторная диагностика — состояние и перспективы: Мат-лы науч.-практ. конф. -СПб., 1996. -С.59-61.

33. Гаранина Е.Н. Качество лабораторного анализа. Факторы, критерии и методы оценки /под ред. В.В. Меньшикова. -М.: Лабинформ,1997.-192с.

34. Гаранина Е.Н., Авдеева Н.А. Стандартизация и контроль качества исследования протромбинового времени //Клинич. лаб. диагностика. -1994. -N6. -С. 23-26.

35. Гаранина Е.Н., Авдеева Н.А. Внешний контроль качества коагулологических исследований //Клинич. лаб. диагностика. -1994. -N5. -С. 52-54.

36. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. /Под ред. Н.Н. Петрищева, Л.Н. Папаян. -СПб., 1999. -117с.

37. Герасименко В.А. Протромбиновый тест новое о старом. /Новости А/О Юнимед -Август, 2001. -С.5-6.

38. Глазунова Г.А. Сравнительное изучение активности мозговых тромбопластинов разных позвоночных животных //Лаб. дело.-1977.-N5.-C.309-310.

39. Гланц С. Медико-биологическая статистика. -М.: Практика,1998.-459 с.

40. Голевцова З.Ш., Мамаева И.В., Супрун Е.В., Мамаев Л.II. Совершенствование методов контроля эффективности лечения непрямыми антикоагулянтами //Клинич. лаб. диагностика.- 1999.-N 10.-С.42-43.

41. Дворянцев С.Н., Петров В.В., Левицкий Д.О., Рууге Э.К. Изучение взаимодействия ионов Na+ с мембранами саркоплазматического ретикулума методом 23 Na-ЯМР /Биол. Мембраны.-1984.-Т. 1.-N1 l.-C.l 179-1183.

42. Добровольский А.Д., Косырев Б. Протромбиновый тест: методика выполнения и клиническое значение /Информационный бюллетень Ассоциации медицинской лабораторной диагностики: Ч. 2. -М., 1995.-С. 34-38.

43. Долгов Б.В., Авдеева Н.А., Щетникович К.А. Методы исследования гемостаза: Пособие для врачей клинической лабораторной диагностики. -М., 1996. -58 с.

44. Заикин Е.В., Малахов В.Н., О приведении критериев внешней оценки качества биохимических исследований ФСВОК в соответствие с требованиями приказа Минздрава России от 07.02.2000 г. №45 //Клинич. лаб. диагностика. -2000. -N7. -С.40-43.

45. Заикин Е.В., Малахов В.Н., Гаранина Е.Н., Делекторская Л.Н. Вопросы практической реализации программы внешнего контроля качества клинических лабораторных исследований //Клинич. лаб. диагностика. -1995. N 4. -С. 11-15.

46. Звягин И.В., Хорьков И.А., Токарик Э.Ф. и др. Методические рекомендации по разработке режимов замораживания-высушивания биологических препаратов. М.: Профиздат, 1981.-34с.

47. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. -Казань: Фен, 2000. -364с.

48. Зубаиров Д.М. Общие рекомендации к лабораторной работе при изучении свертываемости крови //Клинич. лаб. диагностика. -1998. -N7.-C.9-l 1.

49. Исследование системы крови в клинической практике /Под ред. Г.И. Козинца и В.А. Макарова. -М.: Триада-Х, 1997. -480с.

50. Кабаева Е.В., Козлова Т.В. Оральные антикоагулянты -антивитамины К при атеротромбозе //Атеротромбоз проблема современности.-Сборник материалов Международной научной конференции.-М.,-1999.- С.46-49.

51. Качалова Н.Д. Стандартизация определения протромбинового времени и активности фактора VIII в плазме крови //Автореф. дис.канд. биол. наук. М.: -2002. -24с.

52. Качалова Н.Д., Климович Л.Г., Берковский АЛ. и др. Опыт применения отечественных тромбопластинов с аттестованным международным индексом чувствительности при лечении тромбофилий //Клинич. лаб. диагностика.- 2002. -N6.-C.13-16.

53. Качалова Н.Д., Простакова Т.М., Козлов А.А. Исследование чувствительности тромбопластинов //Клинич. лаб. диагностика-2001. -N3. -С.38-40.

54. Климович Л.Г. Противотромботическая терапия у больных сердечно-сосудистыми заболеваниями: проблемы эффективности и контроля //Атеротромбоз проблема современности: Сборник материалов Международной научной конференции. -М., 1999. -С.51-52.

55. Козлов А.А. Возможности комплексной переработки крови //Пробл. гематологии и переливания крови. -1997.-N1. -С.33-37.

56. Козлов А.А., Берковский A.JI. Простакова Т.М., Качалова Н.Д. Проблема качества в коагулометрии //Трансфузиология и служба крови: Тезисы конференции. М., 1998. -С.197.

57. Козлов А.А., Простакова Т.М. и др. Новые реактивы для анализа свертывающей системы крови /Материалы научно-практическойконференции «Клиническая лабораторная диагностика-состояние и перспективы».- СПб. -1996. -С.196-197.

58. Козлов Л.Л., Качалова Н.Д., Берковский A.JL, Простакова Т.М. Ренампластин-новый отечественный реагент с установленным МИЧ //Тромбоз, гемостаз и реология.-2002.-№. -С.76-78.

59. Козлов А.А., Качалова Н.Д., Простакова Т.М. Наиболее распространенные технические ошибки и рекомендации как их избежать при проведении коагулологического тестирования //Тромбоз, гемостаз и реология. -2000.- N3. -С.22-24.

60. Козлова Т.В. Контроль антикоагулянтной терапии: возможности, проблемы, перспективы //Клинич. лаб. диагностика. — 2001.-N9. -С. 19-20.

61. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Тридцать третий доклад. Всемирная организация здравоохранения, Женева, 1985.- С.77-98.

62. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. -М.: Медицина, 1975. -488с.

63. Кузник Б.И., Скипетров В.П. Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз. -М.: Медицина, 1974.-307с.

64. Куриляк О.А. Исследование системы гемостаза в КДЛ //Новости А/О Юнимед. Август, 2001. -С. 1-2.

65. Лабораторный контроль терапии непрямыми антикоагулянтами с использованием MHO. Методические указания МЗ РФ №2003/56 //М.-2003.-12с.

66. Лечение оральными антикоагулянтами (методические рекомендации) /Под ред. Л.Б. Лабезника //М.-2003.-11с.

67. Ляпина Л.А., Азиева Л.Д. Состояние системы гемостаза при действий тромбопластических агентов из высших растений //Поражения сосудистой стенки и гемостаз. -М: АМН СССР, 1983.-С.322-323.

68. Малахов В.Н. Роль и место внешней оценки качества клинических лабораторных исследований //Клинич. лаб. диагностика. -2000. N9. -С.29.

69. Малахов В.Н., Меньшиков В.В. Федеральная система внешней оценки качества клинических лабораторных исследований. Становление системы // Клинич. лаб. диагностика. -1997. N3. -С.23-24, 33-34.

70. Меньшиков В.В. Кадашева О.Г. Качество лабораторных исследований и современные подходы к его оценке (Лекция) //Клинич. лаб. диагностика.-2000. -N6. -С.25-32.

71. Момот А.П., Тараненко И.А. Антикоагулянты непрямого действия и новые возможности лабораторного контроля за их применением//Тромбоз, гемостаз и реология. -2002. -N3. -С. 14-19.

72. Момот А.П. Проблемы обеспечения качества исследования системы гемостаза //Клинич. лаб. диагностика. -2000. -N9. -С.31-32.

73. Монастырский В. А., Магеровский Ю.В., Гайда А.В. Применение полиэтиленгликоля для выделения протромбинового комплекса//Гематология и трансфузиология -1986.-N12.-C.51-53.

74. Нарушения реакций образования тромбина /Под ред. Р.У. Колмена. М.: -Медицина, 1988. -240с.

75. Нежута А.А. Экспериментальное обоснование и совершенствование промышленных режимов сублимационной сушки биопрепаратов //Автореф. дис.канд. тех. наук М.: 1981.-254с.

76. Обеспечение качества в лабораторной медицине: Учебное пособие /В.В. Долгов, Л.В. Мошкин, В.Н. Малахов, М.И. Прищепа и др. -М., 1997.-92 с.

77. Панченко Е.П., Добровольский А.Б. Тромбозы в кардиологии. Механизмы развития и возможности терапии. -М.: Спорт и культура, 1999. -464с.

78. Патент № 2260111 от 07.10.99 г. «Способ получения высокоактивного сырья для изготовления тромбопластина полного растворимого» //ГУ КНИИГиПК Тарасова Д.Н., Репнякова Е.М., Савиных Е.Ю. и др.

79. Патент № 2161975 от 05.01.2000г. «Способ сохранения активности сырья до и во время лиофилизации» // ГУ КНИИГиПК. Репнякова Е.М., Тарасова Л.Н., Савиных Е.Ю.

80. Патент № 2245154 от 16.06.03г. «Способ повышения качества сохранения активности сырья для изготовления реактива тромбопластина до и во время сублимации» // ГУ КНИИГиПК. Репнякова Е.М., Тарасова Л.Н., Владимирова С.Г.

81. Платонова Г.К., Тарасова Л.Н., Савиных Е.Ю. Выпуск биологических стандартов для исследования коагуляционного гемостаза //Клиническая лабораторная диагностика — состояние и перспективы: Мат-лы науч. -практ. конф. -СПб., 1996 г. -С.71-72.

82. Подольский М.В. Высушивание препаратов крови и кровезаменителей. -М., 1973. -192с.

83. Подольский М.В., Епифанов С.Н. Определение гигроскопичных свойств сухой плазмы, фибриногена и тромбопластина. //Лаб.дело., 1975, N 8, С.12-13.

84. Савиных ЕЛО. Получение лиофилизированных субстратов для исследования активности плазменных прокоагулянтов: Автореф. дис.канд. биол. наук. -СПб., 1999. -22с.

85. Савина Л.С., Левачев М.М., Иванова И.В. и др. О роли жирных кислот и поверхностного заряда мембран в проявлении активности тромбопластического фактора эритроцитов //Проблемы гематологии и переливания крови.-1980. -Т.25. N2. -С. 18-22.

86. Самуилов В.Д., Барский Е.Л., Самуилов Ф.Д. Взаимодействие антиоксиданта 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола с фотосистемой 2 хлоропластов / Биохимия. -1995. Т.60. - вып. 11. -С.1853-1859.

87. Старицына Н.Н. Получение и изучение реактива для определения активированного парциального тромбопластинового времени на основе фосфолипидов сои: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- СПб., 1993.-17с.

88. Старицына Н.Н., Шанская А.И. Пучкова С.М., Недачина Н.А. Влияние фракционированых фосфолипидов сои в тесте активированного парциального тромбопластинового времени //Гематология и трансфузиология. -1995.-Т.40. -N4. -С.36-38.

89. Старицына Н.Н., Шанская А.И., Хролова П.В., Папаян Л.П. Новый отечественный фосфолипидный реактив из бобов сои дляисследования активированного парциального тромбопластинового времени //Клинич. лаб. диагностика. 1993. -N6. -С.43-45.

90. Тарасова Л.Н., Владимирова С.Г., Савиных Е.Ю., Платонова Г.К. Показатели качества метода Квика при использовании тромбопластиновых реагентов в ручном и аппаратном исполнении //Клинич. лаб. диагностика.-2000. -N3. -С. 24, 41, 42.

91. Тарасова Л.Н., Платонова Г.К., Старкова Е.В., Савиных ЕЛО. Лиофилизированный реагент для стандартизации активированного парциального тромбопластинового времени //Лаб. дело. -1990. -N6. -С.29-32.

92. Тарасова Л.Н., Платонова Г.К., Савиных Е.Ю. Оценка лиофилизированной плазмы в качестве стандарта для протромбинового комплекса//Лаб. дело.-1991.-Ы7.- С.21-24.

93. Тарасова Л.Н., Платонова Г.К., Савиных Е.Ю. Лиофилизированные диагностикумы для исследования коагуляционного гемостаза //Физиология и патология гемостаза: Тез. докл. Всесоюзной конф. -Полтава, 1991. -С.239-240.

94. Тарасова Л.Н., Платонова Г.К., Савиных Е.Ю. О стандартизации показателей активности протромбинового комплекса //Клиническая лабораторная диагностика — состояние и перспективы: Мат-лы науч.-практ.-конф. СПб., 1996. -С.73-74.

95. Тараненко И.А. Оптимизация оценки внешнего механизма гемокоагуляции и контролируемой терапии антикоагулянтаминепрямого действия. Автореф. дис.канд. мед. наук. Барнаул. -2002. 22с.

96. Терсенов О.А., Чабанов Л.К. Противосвертывающий эффект фосфатидилсерина. //Вопросы мед. химии.-1981.- N7.-C.619-623.

97. Тимербаев В.Н. Молекулярные механизмы участия в гемостазе протромбина и продуктов его активации. Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва-1997. -43с.

98. Токарик Э.Ф., Ковальская Л.Л., Скотникова Т.А., Нежута Л.Л. Принципы методического подхода к конструированию защитных сред для вирусных вакцин. Свободные радикалы и биостабилизаторы. Сб. тезисов 1-го Болгаро-Советского симпозиума, 1987 г. -София.-138с.

99. Управление качеством клинических лабораторных исследований. Нормативные документы /Под ред. В.В. Меньшикова. — М.: Лабпресс, 2000. -152с.

100. Фадеева И.Ю., Фадеева И.В., Лисичкин Г.В., Гайда А.В., Магеровский Ю.В., Монастырский В.А. Гель — хроматография высокомолекулярных комплексов тромбопластина //Высокомол. Соединения.-1987.-Т.29. -сер.А. -N6.-C.1665-1667.

101. Шанская А.И. Старицина Н.Н. Папаян Л.П., Иванова Р.П. Новый контрольный материал пул нормальной плазмы //Клинич. лаб. диагностика. -2000. -N10. -С.26-27.

102. Эммануэль В.Л., Лаевская Н.Д., Вавилова Т.В. Клиническая лабораторная диагностика. Гемограмма и коагулограмма. -СПб., 1996. -69с.

103. Andrew М.В., Brigden М., Bormanis J., Cruickshank M. et al. INR reporting in Canada medical laboratories //Amer. J. Hematol.-1995.-Vol.48, N4.-P.237-239.

104. Astrup J., Glas P., Kok R. Thoromboplastic and fibrinolytic activity in lungs of some mammals \\ Lab. Invest. 1970. - Vol. 22, N 5. -P.381-386.

105. Bach R., Gentry R., Nemerson Y. Factor VII binding to tissue factor in reconstituted phospholipid vesicles: Induction of cooperativity by phosphatidylserine. //Biochemistry.-1986.-Vol. 25, N14. -P.4007-4020.

106. Bach R., Konigsberg W.H., Nemerson Y. Human tissue factor contains thioster-linked palmitate and stearate on the cytoplasmic half-cystine.//Biochemistry. -1988. -Vol. 27, N12. -P.4227-4231.

107. Bach R.R., Moldovv C.F. Mechanism of tissue factor activation on HL-60 cells. //Blood. -1997. -Vol. 89, N9.-P. 3270-3276.

108. Bach R., Nemerson Y., Konigsberg W. Purification and characterization of bovine tissue factor. //J. Biol. Chem.-1981.-Vol. 256,-N16.-P.8324-8331.

109. Bagin Т., Luddington R. Reliability of delayed INR determination: Implications for decentralized anticoagulant care with off-site blood sampling // Brit. J. Haematol. -1997. -Vol.96, N3. -P.431-434.

110. Bagham D. R., Biggs R., Brozovic M., Denson K. W. E. Calibration of five different thromboplastins using fresh and freezedriend plasma // Thromb. death, haemorrh. 1973. - Vol.29, N2. - P.228-239.

111. Becker D., Hamphlies J., Walker F. et al. Standardizing the prothrombin time. Calibration instruments as well as thromboplastin // Arch. Pathol. Lab. Med. -1993. -Vol.117, N6. -P.602-605.

112. Bjorklid E., Storm E. Purification and some properties of the protein component of tissue thromboplastin from human brain. //Biochem. J. -1997. Vol.165, N1. -P.89-96.

113. Bophy M., Fiore L., Lau J. et al. A clinical study monitoring low-intensity antcoagulant therapy with a standart-sensitivity thromboplastin/ Arch. Pathol. Lab. Med.,-1993.-Vol.l 17, N 6.- P.618-621.

114. Craig S.; Brucato С // Expression of recombinant rabbit tissue factor// Thrombosis and Haemostasis: Abstracts XVIIth Congress of the1.ternational Society on Thrombosis and Haemostasis, Washington.- August 1999.- P.548-561.

115. Dijck van P.W.M. Negatively charged phospholipids and their position in the cholesterol affinity sequence // Biochim. Et Biophys. Acta.-1979.-Vol. 555, N1.-P.89-101.

116. Ebert R.F., Valdes-Camin R.P., Akzo N.V. Method for preparing from cultured cells a thromboplastic reagent suitable for use in the prothrombin

117. Gugglielmone H.A., Wides M.A. Prothrombin time in the monitoring of oral anticoagulant: a comparison of results using different thromboplastins // Am.Biol.Clin.-1990.- Vol.48, N8.- P.547-550.

118. Introcaso G, Cuboni A, Ratto A, Foieni F. Mathematical derivative applied to international normalised ratio and analytical variations in oral anticoagulant therapy control // Haemostasis.- 2000.-Vol.30, N6.-P.281-289.

119. Kitchen S, Cartwright I, Woods ТА, Jennings I, Preston FE. Lipid composition of seven APTT reagents in relation to heparin sensitivity // Br. J. Haematol.- 1999.-Vol.106, N3.-P. 801-808.

120. Kitchen S, Preston FE. Standardization of prothrombin time for laboratory control of oral anticoagulant therapy // Semin. Thromb Hemost.-1999.-Vol.25, N 1.-P.17-25.

121. Kitchen S., Woolley A.M., Watson C., Preston F.E. INR determinations using recombinant thromboplastins are influenced by factor V levels. //Thromb. Haemost. -1997. -P. 700

122. Kralisz U., Surewicz W.K., Kotelba-Witkowska В., Pietrucha T. Effect of dimethyl sulfoxide on plasma membrane of human platelets. //Studia biophysica.-1984. -Vol.100, -Nl. -P.33-40.

123. Lang H., Sparthe R., Beeser H. et al. Calibration of a lyophised pooled plasma for standardisation of Prothrombin Time Ration // Hamostaseologie.-1993 .-N13 .-P.96-105.

124. Loeliger Е.Л. //INR determinations using recombinant thromboplastins//Thromb. Hemostas. -1985.-Vol. 54, N2. -P.515-517.

125. Low J., Joseph J., Concannan A. INR discrepancies with recombinant thromboplastin in two patients with the antiphospholipid syndrome // Thromb. Haemost. -1997.- Vol.45, N. 3.-P.701.

126. Navarro J.L., Cesar J.M.,Garsia F.L.J.,Pargo A. et al. Control de la anticoagulacion oral en sangre capilar //Sangre. -1994. -Vol.39, N4. -P.237-260.

127. Neulieb R.L., Neulieb M.K. The diverse actions of dimethylsulphoxide: an indicator of membrane transport activity // Cytobios.-1990.-Vol.63, N1.-P.139-165.

128. Neuenschwander P.F., Bianco-Fisher E., Rezaie A.R., Morrissey Y.H. Phosphatidylethalamine augments factor Vila-tissue factor activity:enhancment of sensitivity to phosphatidylserene. //Biochemistry. -1995. Vol. 34, N43. -P. 13988-13993.

129. Poller L et al. The value of plasma calibrants in correcting coagulometer effects on International Normalized Ratios //American journal of clinical pathology, 1995, Vol.103. P.358-365

130. Poller L., Thomson J.M., Taberner D.A., Clarke D.K. The correction of coagulometer effects on international normalized ratios: A multicentre evaluation // BritJ.Haematol.-1994.-Vol.86, Nl.-P.l 12-117.

131. Poller L, van den Besselaar AM, Jespersen J, et al. The European Concerted Action on Anticoagulation (ECAA): field studies of coagulometer effects on the ISI of ECAA thromboplastins // Thromb. Haemost.- 1998.-Vol.80, N4.-P.615-623.

132. Poller L, van den Besselaar ЛМ, Jespersen J, et al. Correction for lack of coincidence of normal and abnormal calibration slopes in ISI determination // Thromb Haemost 1999.-Vol.81, N 6. -P.935-939.

133. Roper Y.Z., Yeorge A.Y. Is TS the ISI of a thromboplastin dependent on the choice of international reference preparation //Brit. Y. Haematol.-1991.-Vol. 77, Nl.-P.64.

134. Quick A. J. The thromboplastin reaging for the determination of prothrombin \\ Science. 1940. Vol. 92. - P. 113-117

135. Seyfert U., Sorg Z., Wenzel E., Denzler В., Kolde H.-Y. The determination of the prothrombin time in capillary blood using a thromboplastin based on recombinant tissue factor and synthetic phoapholipids //Klin. Zab.-1994.- Vol.40.-N7-8. P.619-628.

136. Smirnov M.D., Ford D.A., Esmon C.T., Esmon N.L. The effect of membrane composition on the hemostatic balance. Biochemistry. 1999.-Vol.38. -NI2. -P.3591-3598

137. Stevenson K.J., Slater P.J., Poller L. The British Comparative Thromboplastin: The relationship between lipid class composition and procoagulant activity.-British Journal of Haematology. -1980. -Vol.44, -P.495-501.

138. Stevenson K.J., Easton A.S., Curry A. et al. The realibility of activated partial thromboplastin time methods and relationship to lipid composition and ultrastructure // Thromb.a.Haemost. -1986. -Vol.55, N2. -P.25-258.

139. Taberner D.A., Poller Z., Thomson J.M. Quality control of the protrombin time and international normalized ratios and international schems.// Ric. clin. e. lab.-1990.-20, N1.- C.59-60.

140. Talstad I. An analysis of the one-stage prothrombin time.-Haemostasis,-1985. -Vol 15. -N 5. -P.304-317.

141. Zang H., Spaethe R. Calibration of the VDYH reference plasma for standardization of the normal value of prothrombin time //Ann.Hematol.-1991.-62, N2-3.-C.46.