Разработка системы противотуберкулезных мероприятий в условиях широкого выявления неспецифических реакций на туберкулин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, доктор ветеринарных наук Харитонов, Михаил Васильевич

• Харитонов, Михаил Васильевич
• доктор ветеринарных наук
• 1998

Оглавление диссертации доктор ветеринарных наук Харитонов, Михаил Васильевич

СОДЕРЖАНИЕ стр.

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1.Эпизоотическая обстановка и причины повторных

вспышек туберкулеза в ранее оздоровленных хозяйствах

2.2.Полиморфизм микобактерий туберкулеза, его устойчивость во внешней среде и роль измененных форм микобактерий в туберкулезном процессе

2.3.Диагностическая эффективность туберкулиновой пробы, неспецифические реакции на туберкулин и современное состояние их дифференциации у крупного рогатого скота

2.4.Методы индикации и идентификации микобактерий

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3 .1. Материалы и методы исследований

3.2.Туберкулез крупного рогатого скота и его распространение в хозяйствах Республики Татарстан

3.3.Выявление скрытого носительства микобактерий с помощью метода провокации при оздоровлении длительно неблагополучных по туберкулезу стад

3.4.Особенности патологоанатомических изменений при туберкулезе у крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Татарстан

3.5.Неспецифические реакции на туберкулин и факторы, обуславливающие их у крупного рогатого скота

3.5.1.Парааллергические туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота, сенсибилизированного атипичными микобактериями

3.5.2.Параалергические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, сенсибилизированного микобактериями птичьего вида

3.5.3.Псевдоаллергические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота и обуславливающие их факторы

3.5.4.Л-формы микобактерий и их роль в эпизоотологии 157 туберкулеза крупного рогатого скота

3.6.Идентификация микобактерий, изолированных из биоматериала животных, реагировавших на туберкулин

3.7. Получение атипичных микобактерий на эксперименте под влиянием высокой температуры

3.8.Исследования по дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций от специфических у крупного рогатого скота

3.8.1.Дифференциация неспецифических аллергических

реакций на туберкулин симультанной пробой

3.8.2.Дифференциация неспецифических аллергических реакций у крупного рогатого скота с применением различных доз туберкулина

3.8.3.Дифференциация неспецифических туберкулиновых реакций от специфических с помощью клеточных реакций крови

3.9.Особенности организации ветеринарно-санитарных мероприятий при неспецифических туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота

3.10.Экономическая эффективность комплексной

дифференциальной диагностики туберкулеза

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка системы противотуберкулезных мероприятий в условиях широкого выявления неспецифических реакций на туберкулин»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Со времени открытия Р. Кохом туберкулезной палочки не прекращаются исследования, доказывающие, что понятие о возбудителе туберкулеза не исчерпывается ею. Изучение микобактерий, в особенности микобактерий туберкулеза, за последние годы значительно расширило и углубило наши знания в этой области. Однако с усовершенствованием методов выделения культур микобактерий значительно участились сообщения о выделении атипичных микобактерий из организма человека и животных.

В системе профилактики и ликвидации туберкулеза животных, решающее место отводиться диагностике. Многолетний опыт использования внутрикожной туберкулиновой пробы в качестве основного прижизненного метода диагностики показывает, что туберкулиновая проба не выявляет всех больных туберкулезом животных в неблагополучном стаде.

Нередко и после оздоровления хозяйств вновь, через различные периоды, отмечаются рецидивы туберкулезной инфекции, что свидетельствует о недостаточной эффективности существующих методов диагностики и мер борьбы с этой инфекцией.

Достаточно большую путаницу в диагностике болезни вызывают и неспецифические реакции на туберкулин, дифференциация которых на сегодняшний день является важнейшей задачей, решение которой имеет исключительно большое практическое значе-

ние, так как ложные реакции на туберкулин могут повлечь за собой необоснованное проведение противотуберкулезных мероприятий и неоправданный убой высокопродуктивных животных, свободных от туберкулеза.

Способность микобактерий туберкулеза персистироваться в Л-формы в организме животных, длительное время сохраняться в различных объектах внешней среды, высокая устойчивость к воздействиям разнообразных неблагоприятных факторов делают эту инфекцию трудноискоренимой.

Своевременная диагностика болезни и выяснение причин сенсибилизации организма животных к туберкулину во многом зависит от качества лабораторных исследований, без проведения которых эпизоотическая ситуация может оставаться невыясненной на протяжении ряда лет, что и случается в некоторых хозяйствах.

Актуальность идентификации выделенных культур микобактерий диктуется необходимостью получения экспериментальных данных о свойствах возбудителя туберкулеза и атипичных микобактерий, циркулирующих среди крупного рогатого скота, реагирующих на туберкулин и во внешней среде в конкретных хозяйствах.

До настоящего времени остается спорным и вопрос о происхождении атипичных микобактерий. Не разработаны профилактические ветеринарно-санитарные мероприятия при неспецифических туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота и свиней.

Актуальность перечисленных вопросов обусловили цели и задачи проведенных исследований.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Целью исследований явилось изучение этиологии аллергических реакций у животных, реагировавших на туберкулин; изучение культуральных и биологических свойств микобактерий, выделенных из биоматериала, реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу; выяснение причин.появления атипичных микобактерий в ранее оздоровленных хозяйствах, а также разработка профилактических мероприятий при неспецифических туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота и свиней.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1.Изучить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу крупного рогатого скота в различных природно-географических зонах Республики Татарстан и соседних республик.

2.Определить роль пастбищ в эпизоотологии туберкулеза, особенно прифермских территорий, площадей озимой ржи, куда в качестве органического удобрения допускается внесение не обезвреженного навоза и навозной жижи.

3.Изучить влияние и эффективность методов провокации на выявляемость скрытых форм туберкулеза при аллергических исследованиях крупного рогатого скота.

4.Определить причины повторных вспышек туберкулезной инфекции в ранее оздоровленных хозяйствах.

5.Изучить этиологию неспецифических туберкулиновых реакций у животных в различных природно-географических зонах Республики Татарстан.

б.Определить видовую принадлежность и изучить культу-ральные биологические свойства микобактерий, изолированных из биоматериала, почвы, фекалий, организма синантропных птиц в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

7.Изучить патогенность и сенсибилизирующие свойства атипичных микобактерий, выделенных из биоматериала реагировавших на туберкулин животных, синантропных птиц, с различных объектов внешней среды.

8.Изучить возможность получения атипичных микобактерий экспериментальным путем из вирулентных культур микобактерий туберкулеза бычьего вида.

9.Разработать и внедрить в производство систему мероприятий по профилактике неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Изучены закономерности эпизоотического процесса при туберкулезе крупного рогатого скота, отражающие особенности эпизоотической ситуации в разных природно-географических зонах в Республике Татарстан. Установлена различная степень неблагополучия районов республики. Наиболее неблагополучными оказались районы черноземной зоны с богатой гумусом почвой. Выяснены постоянно действующие факторы, сдерживающие оздоровление неблагополучных по туберкулезу хозяйств

и обуславливающие повторное возникновение туберкулезной инфекции .

Доказана возможность провокации скрытых форм туберкулезной инфекции и использованием БЦЖ-теста и надплевральной новокаиновой блокады по В.В. Мосину в длительно неблагополучных по туберкулезу хозяйствах.

Получены новые данные об этиологии неспецифических реакций на туберкулин, установлены особенности проявления туберкулиновых реакций в зависимости от сенсибилизирующего фактора микроорганизма.

Определен видовой состав микобактерий, циркулирующих в хозяйствах Республики Татарстан с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу. Установлено, что атипичные микобак-терии имеют довольно широкое распространение во внешней среде не только в благополучных, но и ранее оздоровленных от туберкулеза хозяйствах. Установлено одновременное паразитирование в организме крупного рогатого скота микобактерий туберкулеза бычьего вида и атипичных микобактерий. У выделенных микобактерий изучены культурально-морфологические, биохимические, патогенные и сенсибилизирующие свойства на организм животных.

Впервые на эксперименте получен новый, атипичный штамм 55/96, путем длительного воздействия на вирулентную культуру микобактерий бычьего вида высокой температурой.

Разработаны и внедрены в хозяйствах Республики Татарстан, соседних республиках и областях среднего Поволжья схема дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций от спе-

цифических и мероприятия при неспецифических туберкулиновых реакциях у животных.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Определены масштабы распространения и расшифрована этиология неспецифических туберкулиновых реакций в хозяйствах Республики Татарстан.

Установлена эпизоотическая роль синантропных птиц, обитающих в животноводческих помещениях, как источника инфицирования продуктивных животных атипичными микобактериями и мико-бактериями туберкулеза птичьего вида.

Установлено персистирование микобактерий туберкулеза в виде Л-форм в организме крупного рогатого скота, выращенного в период неблагополучия хозяйств по туберкулезу.

Установлена причастность пастбищ, постоянно используемых летних лагерей, особенно площадей озимой ржи, используемых для подкормки скота, удобренных не обезвреженным навозом и навозной жижей, как активных факторов заражения скота возбудителем туберкулеза в летне-лагерный период его содержания.

Предложена дифференцированная, с учетом конкретной эпизоотической обстановки по туберкулезу хозяйств, схема аллергических исследований крупного скота на туберкулез и дифференциация туберкулиновых реакций.

Экспериментальным методом получен атипичный штамм микобактерий путем длительного воздействия на вирулентную культуру микобактерий бычьего вида высокой температурой.

Разработана и предложена для практического применения рекомендация о мероприятиях, проводимых в хозяйствах при неспецифических туберкулиновых реакциях.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана в 1982-1997 гг.; республиканских научно-производственных конференциях (Казань, 1977-1996 гг.); «Зональном совещании научных и практических ветеринарных специалистов областей, краев и автономных республик Европейской части Российской Федерации по теме «Постановление ЦК КПСС и Совета Министров СССР от 10 сентября 1981 г. № 889 «О дополнительных мерах по борьбе с заболеванием сельскохозяйственных животных бруцеллезом и туберкулезом и задачи по его выполнению» (Казань, 1982 г.); Всесоюзных научных конференциях (Омск, 1980, 1986; Москва, 1983; Тюмень, 1985; Новосибирск, 1991); научно-практической конференции фтизиатров, посвященной 50-летию кафедры фтизиатрии Казанского ГИДУВа (Казань, 1982); научно-технических советах МСХ ТАССР (1982, 1984, 1987); координационных совещаниях .по проблеме туберкулеза сельскохозяйственных животных (Омск, 1987, 1991, 1995); юбилейной научно-производственной конференции, посвященной 120-й годовщине со дня основания Казанского ветеринарного института (Казань, 1993); Первом съезде ветеринарных врачей республики Татарстан (Казань, 1995); заседаниях научно-технического совета ГУВ КМ РТ (Казань, 1996, 1997); научно-производственной ветеринарной конференции

специалистов и ученых Поволжско-Уральской зоны России (Казань, 1997).

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Основные научные положения и практические рекомендации изложены в 37 научных статьях, опубликованных в научных трудах КГАВМ им. Н.Э. Баумана, журнале «Ветеринария», материалах Всесоюзных научных конференций и других научно-производственных изданиях, в том числе в инструкции, двух наставлениях, шести методических указаниях. Выпущены два плаката и получены три удостоверения на рационализаторское предложение. Материалы диссертационной работы вошли в отчет кафедры эпизоотологии КГВАМ (1978-1997 гг. регистрационным № 76093885). Подана заявка на патент и получено положительное решение от 23 июня 1997 г., №97108507/13(008603).

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Научные разработки наших исследований включены в «Наставление по применению ту-беркулинов для аллергической диагностики туберкулеза у млекопитающих и птиц». (Утв. ГУВ МСХ СССР 9 февраля 1978 г.), «Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота». (Утв. ГУВ с ГВИ 26 февраля 1990 г.)

Основные научные разработки наших исследований предусмотрены перспективным планом комплексных мероприятий по профилактике и борьбе с туберкулезом ВНИИБТЖ (тема 03.02.01 и 03.02.02) .

Результаты наших исследований явились основой для пересмотра и дополнения ряда вопросов комплексного плана органи-

зационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий по оздоровлению неблагополучных животноводческих ферм и профилактике туберкулеза сельскохозяйственных животных в хозяйствах Республики Татарстан на 1995-2000 годы, утвержденных постановлением КМ РТ от 10 июля 1995 г. № 441.

Научные разработки по неспецифическим туберкулиновым реакциям явились основой «Рекомендации о мероприятиях, проводимых в хозяйствах Республики Татарстан при неспецифических туберкулиновых реакциях крупного рогатого скота», одобренной НТС ГУВ КМ РТ 1 ноября 1996 г., протокол № 3.

Отдельные разработки, положения и выводы нашей работы включены в монографии: «Туберкулез крупного рогатого скота», Н.З. Хазипов, М.А. Сафин, Г.З. Идрисов, М., Агропромиздат, 1985, 1997 гг.; «Туберкулез сельскохозяйственных животных (Учебное пособие), М.А. Сафин, М.В. Харитонов, Казань,1990.

В 1996 г. работа под названием: «Разработка комплекса мер диагностики, профилактики и ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота и свиней» удостоена диплома Лауреата государственной премии. Республики Татарстан в области науки и техники.

Научные разработки внедрены в сельскохозяйственных предприятиях Республики Татарстан, удмуртской Республики, Ульяновской области, используются в учебном процессе Казанской ГАВМ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1.Особенности проявления и причины распространения туберкулеза крупного рогатого скота в различных природно-географических зонах Республики Татарстан.

2.Мероприятия, проводимые в хозяйствах Республики Татарстан при неспецифических туберкулиновых реакциях крупного рогатого скота.

3.Применение методов провокации в целях выявления скрытых форм туберкулезной инфекции при оздоровлении хозяйств длительно неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота.

4.Этиология неспецифических туберкулиновых реакций в хозяйствах Республики Татарстан, масштабы их природно-географического распространения и возможности дифференциации.

5.Научное обоснование получения атипичных микобактерий на эксперименте из вирулентных культур микобактерий туберкулеза бычьего вида.

Диссертация изложена на 348 страницах машинописного текста: состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и предложений производству, списка литературы, включающего 50 6 источников, из них 132 иностранных автора и приложения; диссертация иллюстрирована 2 0 таблицами и 11 рисунками.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1.Эпизоотическая обстановка и причины повторных вспышек туберкулеза в ранее оздоровленных хозяйствах.

Накопленный наукой и апробированный ветеринарной практикой опыт проведения противотуберкулезных мероприятий, указывает на то, что в системе мер борьбы с туберкулезом животных особое внимание необходимо уделять помимо организационно-хозяйственных и зоотехнических вопросов, широкому комплексу специальных ветеринарных мероприятий. Эта болезнь не только приводит к большим экономическим потерям в животноводстве (334), но главным образом представляет серьезную социальную опасность для здоровья людей (23).

Из домашних животных наиболее часто поражается туберкулезом крупный рогатый скот. По данным (209),эта болезнь особенно распространена в странах.Азии, Южной Америки и Африки, а во всем мире ежегодно заболевает свыше 6 млн. голов скота.

В результате целенаправленной борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в отдельных странах мира достигнуты серьезные успехи в ликвидации этой болезни. Полностью оздоровлены от туберкулеза: Дания, Исландия, Болгария, Голландия, Германия, Англия, Куба и др. страны.

В хозяйствах Российской Федерации плановое проведение противотуберкулезных мероприятий способствовало значительному снижению количества неблагополучных пунктов по туберкулезу. Однако,, как отмечает Ю.Е. Шатохин (1996), несмотря на тенденцию к снижению количества неблагополучных пунктов и заболевших животных, проблема туберкулеза крупного рогатого скота была, есть и, видимо, еще долго будет серьезной проблемой для ряда регионов. В настоящее время неблагополучны по туберкулезу 32 области, имеется 8 94 неблагополучных пункта и на передержке 39,5 тыс. голов больного туберкулезом скота.

Тяжелая эпизоотическая обстановка сложилась в хозяйствах Саратовской, Волгоградской, Омской, Рязанской областей, где до 5 0 неблагополучных пунктов. В Ставропольском крае, Ростовской, Курганской, Челябинской областях резко снизились темпы оздоровления неблагополучных по этой инфекции хозяйств.

В целях стабилизации эпизоотической ситуации и полной ликвидации болезни Правительством Республики Татарстан было принято в 1991 г. Постановление «О мерах по борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота в хозяйствах Республики Татарстан» .

По данным Ф.Ф. Хисамутдинова, P.A. Хамзина (1995), благодаря принятым мерам ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Республике Татарстан стабилизировалась.

Особенность туберкулезной инфекции в том, что она протекает у инфицированных животных длительное время без проявления клинических симптомов болезни. Возбудитель туберкулеза,

по данным (360) , легко распространяется в стаде, если хотя бы одно инфицированное животное остается не выявленным, и это часто сводит на нет усилия по его ликвидации, вынуждая растянуть на долгие годы проведение оздоровительных мероприятий.

В развитие учения о туберкулезе сельскохозяйственных животных под влиянием новых экспериментальных данных возникает необходимость пересмотра и уточнения старых, давно утвердившихся понятий и представлений об этой болезни, а противоэпи-зоотическая эффективность системы мероприятий ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота зависит от внедрения ветеринарной службой на местах новых научных данных по указанной проблеме.

Кроме крупного рогатого скота, туберкулезом болеют и другие виды животных. О заболевании туберкулезом свиней сообщали (135,4,8,195,259,89). Свиньи восприимчивы к возбудителю туберкулеза бычьего и человеческого видов, а также к микобак-териям из группы авиум-интрацеллюляре (21,348). О заболеваемости овец туберкулезом сообщают (119) и др. По данным (324) овцы и козы восприимчивы к бычьему виду микобактерий, причем молодые животные более чувствительны к заражению, чем старые. О туберкулезе птиц имеются сообщения в работах (238) и других авторов. Туберкулез приводит к большим потерям и в звероводческих хозяйствах, где гибнут звери, снижается качество и пригодность шкуры (318). По данным (157) туберкулез наносит значительный ущерб и мараловодству.

Важную роль играет оздоровление хозяйств от туберкулеза и в эпидемиологическом отношении, поскольку больные животные нередко являются источником возбудителя инфекции для людей. По данным (395, 405, 465, 464) в последние годы заболеваемость туберкулезом растет во всех странах мира, независимо от их экономического статуса и социального уровня жизни.

Российская Федерация занимает не последнее место в списке таких государств (235, 194). По данным В.И. Пионтковского (1987) в Кустанайской области у больных туберкулезом людей выделение микобактерий бычьего вида в среднем составляет 7,1%. К общему количеству идентифицированных культур. О взаимосвязи туберкулеза крупного рогатого скота и человека сообщают (23, 285, 237, 71) и другие.

Наряду с изучением различных путей заноса возбудителя туберкулеза, показателей интенсивности эпизоотического процесса и характера влияния различных факторов на его распространение, значительный интерес представляют причины повторного возникновения инфекции в ранее оздоровленных хозяйствах. По данным М.А. Сафина (1992)вновь выявляются неблагополучные по туберкулезу пункты - до 80% оздоровленных хозяйств.

Причину повторного возникновения туберкулеза многие исследователи связывают с двумя факторами: некачественным проведением оздоровительных мероприятий и длительным сохранением возбудителя во внешней среде; дополнительным инфицированием животных путем заноса возбудителя извне.

По данным А.И. Кузина (1992), основной причиной повторных вспышек туберкулеза в ранее оздоровленных хозяйствах являются инфицированные животные, которые оставались не выявленными при аллергических исследованиях на эту болезнь, так как у крупного рогатого скота инфекция может протекать скрыто, в виде так называемого латентного микробизма, при котором чувствительность к туберкулину выражена более слабо. При этом в организме животных отсутствуют специфические туберкулиновые поражения, хотя возбудитель находится в лимфатических узлах. Эта форма инфекции представляет серьезную опасность в эпизоотическом отношении, так как под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды, латентный микробизм может переходить в прогрессирующий активный туберкулез. Чаще всего такие случаи наблюдаются после массовых отелов нетелей.

Таким образом, молодняк крупного рогатого скота неблагополучных по туберкулезу ферм, представляет реальную опасность повторной вспышки болезни в случае использования его для ремонта маточного поголовья.

С установлением Л-форм микобактерий ряд ученых повторные вспышки туберкулеза в ранее оздоровленных хозяйствах связывают с персистенцией микобактерий туберкулеза в организме животных в виде Л-форм (308, 83, 84, 162) и другие.

Скрытое носительство возбудителя любой инфекционной болезни в организме восприимчивых животных, в том числе и при туберкулезе, возможно лишь при состоянии биологического равновесия между паразитом-возбудителем инфекционной болезни и

его облигатным хозяином. Разумеется, стабильность такого равновесия относительна и она зависит от продолжительности совместной эволюции паразита и хозяина. Уровень такого равновесия может быть нарушен воздействием на животное различных факторов внешней среды, определяемых как стресс-факторы.

По данным (62, 350, 70) эту особенность можно применять с большой пользой для повышения точности диагностики латентных форм инфекционных болезней, выделяя из стада скрытых носителей возбудителя инфекции и повышения эффективности оздоровительных мероприятий методом провокации.

2.2.Полиморфизм возбудителя туберкулеза, роль измененных форм микобактерий в туберкулезном процессе и устойчивость микобактерий во внешней среде

Со времени открытия Р. Кохом туберкулезной палочки, ее специфическая роль в этиологии туберкулеза остается неоспоримой и твердо доказанной. Однако, если в период открытия возбудителя туберкулеза, Р. Коху и его современникам казалось, что проблема этиологии туберкулеза разрешена окончательно, то уже ближайшие исследования выявили в этой области так много новых и постоянно возникающих вопросов, что день открытия возбудителя туберкулеза по существу можно считать днем начала его многостороннего экспериментального изучения (99).

Многочисленными исследованиями было показано, что под влиянием воздействия различных факторов внешней среды, возбу-

дитель туберкулеза проявляет широкий диапазон изменчивости морфологии клеток от мельчайших фильтрующихся частиц и зерен до Л-форм (50, 111, 307, 109, 167, 14) и другие.

По данным (286, 19, 82, 128, 165, 442) и других, большого внимания с научной и практической точки зрения заслуживают формы микобактерий с измененной морфологической, физиологической и культуральной характеристикой в результате повреждения или дефекта их клеточной стенки. Повреждения, связанные с дефектом или частичной утратой клеточной стенки, приводят к глубоким морфологическим и функциональным изменениям микроба, результатом которых является возникновение протопластов, сфе-ропластов, форм гетероморфного роста, нестабильных или стабильных Л-форм бактерий.

Способность видоизмененных форм к длительному бессимптомному существованию в макроорганизме и к реверсии в исходный вид бактерий при одновременном восстановлении признака вирулентности обуславливает их важное значение в патогенезе рецидивов при острых и хронических инфекционных заболеваниях (128, 287, 180, 181) и другие.

Первостепенную важность для уточнения роли Л-форм микобактерий имеет вопрос о частоте их обнаружения в биоматериале от животных из хозяйств с различной эпизоотической ситуацией по туберкулезу.

Таким образом, изучение широкой изменчивости возбудителя туберкулеза в процессе его онтогенеза, несомненно, весьма актуально не только в теоретическом плане, но и для решения ря-

да практических задач диагностики, клиники и патоморфологии туберкулеза.

В системе ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на обеспечение благополучия животноводческих ферм по туберкулезу крупного рогатого скота, знание сроков выживаемости микобактерий в почве имеет большое практическое значение, а имеющиеся сведения по данному вопросу разноречивы (122, 124) и другие. Высокая устойчивость микобактерий к воздействию неблагоприятных факторов и способность их длительное время сохраняться в окружающей среде создает постоянную угрозу заражения животных (282, 290, 230, 205, 123) и другие.

Говоря о причинах высокой устойчивости микобактерий, большинство авторов считают, что это связано с большим содержанием липидов типа миколовой кислоты в цитоплазме и оболочке клетки, пятислойной стенкой и ее толщиной (184, 3 62, 355, 37 6) и другие.

Особенно устойчив возбудитель туберкулеза к низким температурам. Даже при охлаждении до - 190°С, возбудитель туберкулеза остается вирулентным (155), а по данным (99) даже выдерживает температуру -260°С.

И.И. Аллахвердиев (1967, 1968) доказал, что микобактерии туберкулеза выдерживают 103-200 кратное замораживание и оттаивание, не теряя своей вирулентности. В экспериментах (375) установил, что культуры микобактерий туберкулеза человеческого вида и атипичных микобактерий при хранении их в заморожен-

ном состоянии на среде Левенштейна-Иенсена, сохраняют жизнеспособность в алюминиевой таре при -20°С в течение З-б лет.

Отмечается высокая устойчивость микобактерий туберкулеза и к дезинфицирующим веществам. Изучение устойчивости микобактерий к химическим факторам тесно связано с практическими задачами дезинфекции. Еще в 194 7 году академик К.И. Скрябин научно обосновал положение о том, что только тотальное уничтожение возбудителей заболеваний во всех фазах их жизненного цикла всеми доступными средствами механического, физического, химического или биологического воздействия может предотвратить инфекционные и инвазионные заболевания у людей и животных .

Обсуждая актуальные аспекты дезинфекционной науки (228, 506) указывают, что при воздействии дезинфицирующих средств., в первые минуты погибает 99% микробной популяции. Оставшиеся в живых клетки немногочисленны, однако они очень важны для практической дезинфекции. Именно из-за этих микроорганизмов приходится завышать концентрацию дезинфектанта и удлинять экспозицию для достижения бактерицидного эффекта.

Традиционными дезинфицирующими средствами при туберкулезе, кроме хлорактивных препаратов, являются альдегиды, нашедшие широкое применение в практике дезинфекции. В отечественной дезинфекционной практике основным средством обеззараживания объектов животноводства при туберкулезе является 3%-ный

щелочной раствор формальдегида, при расходе 1 л/кв.м. и экспозиции 3 часа.

Следует отметить, что большинство исследований посвящено изучению воздействия общепринятых дезинфектантов на возбудителей туберкулеза. Однако, известно, что объекты внешней среды, контаминированные не только микобактериями туберкулеза, но и атипичными микобактериями, обладают аллергизирующей способностью и потенциальной патогенностью для человека и животных, поэтому изучение резистентности этих микроорганизмов к дезинфектантам, наиболее часто применяемым в животноводстве, имеет не только теоретическое, но и практическое значение. Изучение устойчивости атипичных микобактерий к действию дезинфектантов имеет практическое значение и при использовании этих микроорганизмов, как показателей качества дезинфекции (7, 121, 234).

Особый интерес представляет вопрос о выживаемости микобактерий в объектах внешней среды. Сведения, имеющиеся в литературе обширны и они, в основном, касаются возбудителей туберкулеза крупного рогатого скота и птиц, а сведения об атипичных микобактериях немногочисленны. Так, по данным (122, 116, 98, 20) и других, микобактерии туберкулеза выживают в почве от 3 до 24 месяцев, в зависимости от ее состава, глубины нахождения и температуры.

Имеется много сообщений о том, что микобактерии, находясь во внешней среде, в частности, в воде, на протяжении длительного времени не теряют своей жизнеспособности. Так,

(498) на основании проведенных исследований пришел к выводу, что туберкулеза бычьего вида выживают в воде от 2 03 до 237 дней летом и от 245 до 2 95 дней зимой.

П.Е. Савченко, Г.А. Соколова (1979), М.А. Севершаев (1964) установили, что в речной и болотной воде обнаруживаются как патогенные, так и атипичные микобактерии, которые выживают в ней до 10-12 месяцев. Авторы отметили, что условно-патогенные микобактерии в стоячих водоемах находят более благоприятные условия для своего развития за счет присутствия в ней органических и неорганических веществ.

Возможным источником инфицирования животных и птиц возбудителями туберкулеза и атипичными микобактериями может служить подстилка. По данным B.C. Ярных с соав. (1966) микобактерии туберкулеза сохраняют жизнеспособность в глубокой несменяемой подстилке не менее 5 месяцев.

Немаловажное значение в возникновении микобактериозов у животных приписывается опилкам и соломе (17 6). По данным (349, 458, 380) в опилках довольно часто находятся атипичные микобактерии. Авторы предполагают, что микобактерии попадают в опилки с частицами земли, находящимися на стволах сваленных деревьев.

Изучением выживаемости микобактерий туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов занимались (164, 3, 64, 293, 4 09) и другие.

Разноречивость данных о сроках выживаемости и сохранения вирулентных свойств микобактерий туберкулеза в различных объ-

ектах можно объяснить различием в условиях эксперимента: неодинаковостью методик индикации микобактерий, разными штаммами микобактерий, используемых в опытах, влиянием почвенно-географических, климатических, сезонных особенностей и других факторов.

2.3.Диагностическая эффективность туберкулиновой пробы, неспецифические реакции на туберкулин и современное состояние их дифференциации у крупного рогатого скота

Успех в борьбе с туберкулезом обеспечивается, главным образом, осуществлением комплекса противотуберкулезных мероприятий, основу которых составляет диагностика. К ней относятся эпизоотологический, клинический, аллергический, патоло-гоанатомический и лабораторные методы. Диагностическая ценность каждого метода в отдельности зависит от стадии болезни, ее формы течения, вирулентности возбудителя и реактивности самого организма. В специальной литературе имеется много данных об усовершенствовании метода диагностики туберкулеза (158, 136, 121, 276, 347, 422, 21, 16, 41, 206, 317, 278, 91) и другие.

На протяжении многих лет основным методом ранней и массовой прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота является внутрикожный аллергический метод, получивший признание во всех странах мира (198, 237, 300) . Этот метод

при периодических систематических исследованиях выявляет инфицированных животных и позволяет изолировать их от здоровых задолго до появления клинических признаков болезни.

Не умаляя положительных общепризнанных качеств аллергической диагностики туберкулеза, большинство исследователей указывают на необходимость дальнейшего ее совершенствования, улучшения качества, так как на интенсивность проявления туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота влияют упитанность животных, условия содержания, физиологическое состояние, сезон года, климатические условия, транспортировка (31, 35, 47, 139, 340).

В литературе приводятся разноречивые данные о кратности введения туберкулина. Одни из исследователей считают, что аллергическая реакция усиливается и довыявляет зараженных животных при двукратном введении туберкулина (78, 114, 163, 189, 207, 320, 339). Другие (350,460) рекомендуют избегать повторного введения аллергена по причине дополнительного выявления здоровых и сенсибилизированных атипичными бактериями животных, а третьи (456) не находят достоверных различий между одно и двукратным введением аллергена.

Имеются разногласия и в отношении места введения туберкулина (189). В целях снижения количества неспецифических показателей внутрикожных туберкулиновых проб (146, 190, 182) рекомендуют в благополучных хозяйствах крупный рогатый скот исследовать уменьшенными дозами туберкулина.

В связи с изменяющейся эпизоотической обстановкой, в результате проведения мероприятий по ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота, участились случаи, когда в благополучных и ранее оздоровленных хозяйствах выявляются животные, реагирующие на туберкулин, но другими методами исследований у них туберкулез не подтверждается. В подобных ситуациях постановка первичного диагноза на туберкулез весьма затруднительна и эти реакции рассматриваются как неспецифические на туберкулин .

Использование туберкулина, как средства специфической диагностики, основано на том, что туберкулез является инфек-ционно-аллергическим заболеванием. Поэтому широкое применение в ветеринарной практике получила внутрикожная туберкулиновая проба, как достаточно специфический метод диагностики в борьбе с туберкулезом животных.

Оценивая высокую специфичность внутрикожной туберкулиновой пробы для диагностики туберкулеза животных (232, 351, 328, 302, 201, 338, 202) и другие отмечают, что у животных, реагировавших на туберкулин, при других методах исследований не всегда удается выделить возбудителя туберкулеза. Убой таких животных обычно не приводит к прекращению выделения реагирующих животных в стаде. Изучение этого явления, имеющего довольно широкое распространение, является серьезной проблемой не только ветеринарной практики, но и науки.

Частота возникновения подобных аллергических реакций в различных зонах значительно варьирует. Так по данным (349),

эти реакции в Московской области в отдельных случаях достигают 48%, Ростовской - 55%, Ульяновской - 58%, Курганской -15%.

О наличии неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота за рубежом сообщают (467, 454, 428).

При убое таких животных преимущественно из лимфатических узлов по данным (173, 139, 140, 298, 66, 241, 210) изолируют атипичные микобактерии.

Установлено, что атипичные микобактерии отличаются от микобактерий туберкулеза по ряду признаков и обладают собственной морфологией и биологией. Не существует строгой классификации, которая опиралась бы на генетическое развитие отдельных представителей этих групп. Были сделаны попытки систематизировать и идентифицировать атипичные микобактерии (469, 100, 237) .

Вопрос о происхождении атипичных микобактерий все еще остается до конца невыясненным. Их выделяли из опилок (403), из торфа (170), соломы и водопроводной воды (313), из молока (65), из силоса (226).

Установлено наличие атипичных микобактерий в пробах пашни в 92,2% случаев, лугов - 78,7%, воде - 84,7%. (382).

Атипичные микобактерии широко распространены и среди людей. По данным исследователей процент выделения атипичных микобактерий в нашей стране из организма людей колеблется от 0,3 до 30,3% (92, 101, 348, 85, 15, 357).

Единственно достоверным методом диагностики микобакте-риозов является многократное выделение и идентификация возбудителей этих заболеваний. Микобактериозы трудно диагностируются, они могут иметь тяжелое течение и даже вызвать смертельные исходы при запоздалом начале лечения.

Эти микобактерии по своим культуральным и биохимическим свойствам отличаются от микобактерий туберкулеза. Они мало патогенны для морских свинок и обладают естественной лекарственной устойчивостью к большинству противотуберкулезных препаратов и антибиотиков широкого спектра действия.

Наиболее часто встречаются микобактериозы легких (356, 160, 410, 473, 453, 488) и другие.

Для дифференциации атипичных микобактерий от микобактерий туберкулеза ВОЗ дает рекомендации, разработанные на симпозиуме в Праге. Предлагаются две группы тестов: основные и дополнительные. К основным относятся тесты: спиртоучивойчи-вость, рост при температуре 22-37°С, скорость роста, изучение морфологии колоний, пигментообразование. Из биохимических тестов: ниациновый, амидазный, восстановление нитратов и нитритов, ферментативная активность, а также биологические тесты на морских свинках, кроликах, белых мышах.

К дополнительным тестам относятся действие на глициды, чувствительность к туберкулостатикам, каталазная и перокси-дазная активность.

В литературе пока нет единого мнения относительно сроков появления и продолжительность туберкулиновых реакций. Сенси-

билизация организма у отдельных животных достаточно выражена, поэтому они реагируют на однократное введение туберкулина. На повторное введение туберкулина количество реагирующих животных резко увеличивается. По данным (69) в разных субъектах Федерации Сибирского региона на фермах ежегодно реагируют от

2,3 до 5,1% животных.

Кроме крупного рогатого скота атипичные микобактерии выделены от свиней, лошадей, собак, кошек и обезьян (237, 118, 277). По данным (341) атипичные микобактерии выделяются из органов, как реагирующих, так и не реагирующих на туберкулин животных.

Кроме парааллергических реакций, обусловленных атипичными микобактериями, немалую путаницу в диагностике туберкулеза вносят и псевдоаллергические реакции на туберкулин, обусловленные причинами немикобактериального происхождения. Ряд исследователей причину псевдоаллергичеких реакций связывают с поражением организма животных паразитами.

Тенденция нарастания числа неспецифических реакций на туберкулин по мере оздоровления животноводства от туберкулеза побудила исследователей искать методы дифференциации таких реакций. С этой целью у нас в стране и за рубежом широко ис-пытывалась симультанная аллергическая проба.

В странах Западной Европы определились два подхода к оценке симультанной пробы - выявление вида возбудителя, вы-

звавшего сенсибилизацию у отдельного животного, и групповой метод оценки симультанной пробы (253).

Н.П. Назаров (1983) установил, что у коров 4-5 летнего возраста, сенсибилизированных атипичными микобактериями, реакция появляется через 15 дней и сохраняется до б месяцев. При этом характер реакций был различный - тестоватые и плотные, ограниченные и расплывчатые. Увеличение кожной складки -4-11 мм.

Наши исследования показали, что животные, инфицированные атипичными микобактериями, более интенсивно реагировали на видовые аллергены.

Как отмечает (177, 178, 179), при аллергических реакциях припухлость на месте введения туберкулина в большинстве случаев более плотная, ограниченная, менее углубленная в ткани, менее болезненная, однако такие реакции нередко наблюдаются и у больных туберкулезом животных. Характерным признаком инфицирования скота атипичными микобактериями является кратковременность сохранения туберкулиновых реакций, в основном в течение 3-8 месяцев. При повторных исследованиях стада наблюдается выпадение реакции у одних животных и появление их у других.

Основываясь на проведенных исследованиях, в нашей стране была испытана симультанная проба с использованием ППД-туберкулина для млекопитающих и птиц (345, 344, 254) и ППД-туберкулина для млекопитающих и KAM (351, 352, 115, 299).

По данным (134) в явно неблагополучных по туберкулезу гуртах реакции на KAM оказались интенсивнее, чем на ППД туберкулин для млекопитающих. В связи с этим KAM нельзя использовать для уточнения эпизоотической ситуации в неблагополучных по туберкулезу гуртах.

По данным литературы и на основе анализа патентных исследований основным направлением в поисках оптимального метода дифференциальной диагностики туберкулеза у животных в нашей стране является усовершенствование туберкулина и способов его применения: внутрикожной (233); внутривенной (237, 144); симультанной пробы (353, 211); кратность введения туберкулина и его дозы (337, 338, 339, 207, 190, 182).

За рубежом исследования проводятся в плане изыскания вы-сокоочищенных туберкулинов, позволяющих выявлять животных, инфицированных только определенным видом возбудителя туберкулеза (452).

Одним из новых направлений в изыскании эффективных методов диагностики инфекционных болезней человека и животных является иммуноферментный анализ (ИФА), который впервые был применен для диагностики туберкулеза (44 6). Из 4 6 исследованных больных туберкулезом людей положительный результат был получен у 84% больных легочным и у 67% внелегочным туберкулезом.

Аналогичные результаты получили (402, 481), которые, используя ИФА, установили наличие специфических антител у 80%

из 34 бациллопозитивных больных туберкулезом и у 66% из 32 бациллонегативных больных.

Изучение эффективности ИФА продолжали (434, 38 6, 383, 379, 421, 478, 484, 414, 500, 466, 377, 461, 435, 459, 404) и другие.

Достижения зарубежной и отечественной науки в области биотехнологии открывают перспективы в создании нового поколения диагностикумов с высокой чувствительностью и специфичностью. В 1975 году Келлер и Милынтейн разработали методику получения клеточных гибридов-гибридом путем слияния нормальных лимфоцитов иммунизированных животных с культивируемыми в питательной среде клетками миеломных штаммов. Слившиеся гибри-домные клетки получают от лимфоцитов способность синтезировать определенное антитело и выживать в селективной среде., а от миеломных клеток принимают способность бесконечно размножаться. Полученный таким образом гибридомный клон синтезирует моноклоальные антитела в неограниченном количестве и по всем параметрам совершенно идентичные, взаимодействующие только с одной антигенной детерминантой.

Это открытие создало хорошую основу для поиска монокло-альных антител, идеальных диагностикумов для бактериальных и вирусных болезней человека и животных (314, 93, 52) и другие.

Изыскание новых быстрых специфических и высокочувствительных методов диагностики туберкулеза является актуальной задачей. Достижения современной биотехнологии позволяют, ис-

пользуя молекулярно-генетические подходы, разрабатывать сверхчувствительные способы диагностики разных болезней. Одним из таких способов является метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Суть его заключается в быстром многократном увеличении с помощью ДНК-полимеразы количества копий специфического фрагмента генома бактерий, располагающегося между двумя специфичными олигонуклеотидными праймерами (затравками для синтеза ДНК), с последующей регистрацией результатов реакции гельэлектрофорезом.

На основании появившихся в последние годы публикаций можно предполагать и наличие определенного процента гипердиагностики за счет выявления в ПЦР не только живых, но и мертвых микобактерий, получение ложноотрицательных результатов, вызванных эндогенными ингибиторами полимеразы (405, 464, 465) и другие.

Основным недостатком, препятствующим в настоящее время широкому использованию ПЦР в клинической практике диагностики, является относительно высокая стоимость тест-систем и необходимость транспортировки их при температуре не выше +2 0°С, особенно на большие расстояния. Нарушение температурного режима на любом из этапов доставки наборов ведет к уменьшению сроков использования праймеров для проведения ПЦР.

По данным (222) следовые количества положительной ДНК при попадании в реакционную пробирку также вызывают в процессе ПЦР амплификацию специфического фрагмента ДНК и, как следствие, появление ложноположительных результатов.

2.4.Методы индикации и идентификации микобактерий

Вопрос о видовой принадлежности микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота, свиней, голубей и объектов внешней среды, имеет большое практическое и теоретическое значение, так как для успешного проведения мероприятий по профилактике и оздоровлению хозяйств от туберкулеза возникает необходимость идентифицировать микобактерии, в том числе атипичные .

Известно, что атипичные микобактерии по ряду признаков имеют сходство с истинными микобактериями туберкулеза, но вместе с тем обладают рядом свойств, близких сапрофитным ми-кобактериям.

Количество обнаруживаемых видов, подвидов, вариантов атипичных микобактерий постоянно растет. Так по данным (145), известно 160 видов микобактерий, а, по мнению (494), во внешней среде обитают около 200 видов микобактерий. Их удается обнаружить во всех объектах внешней среды: почве, торфе, опилках, соломе, кормах, воде рек, озер, водохранилищ, в организме клещей, диких и домашних животных, а также различных выделениях животных и человека (172, 173, 179, 26, 13, 349, 243, 25, 116, 193, 68, 381, 382, 383, 406, 400) и другие.

Исследования (267, 111) показали, что методы дифференциации микобактерий туберкулеза от кислотоустойчивых сапрофи-тов, основанные на способности последних обесцвечиваться ки-

слотами, щелочами, спиртами, а также различными окислителями - марганцовокислым калием, перекисью, хлорамином не являются надежными. В связи с этим микроскопия мазков не является дифференцирующим тестом патогенных и атипичных микобактерий, но она важна, так как позволяет установить чистоту и кислото-устойчивость изолированной культуры.

Изучение культуральных свойств микобактерий на яичных и простых питательных средах позволяет установить температурный оптимум, сроки появления роста и его характер. Важным тестом дифференциации микобактерий при культивировании на питательных средах является их способность расти при разных температурных режимах. Микобактерии туберкулеза человеческого и бычьего видов растут в диапазоне 37-38°С; при более высоких и низких температурах их рост прекращается. Культуры микобактерий птичьего вида имеют температурный оптимум 42°С, в то же время некоторые штаммы способны расти при температуре 22°С, а также при 42-45°С.

Другим тестом для дифференциации микобактерий является пигментообразование. Для микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов характерна светло-кремовая окраска колоний. Появление желто-оранжевого пигмента при экспозиции колоний на светуприсуще микобактериям первой группы по Раноону. Устрйчивая оранжевая окраска, независимо от света, характерна для микобактерий второй группы.

В качестве дифференциального теста используют способность микобактерий расти на мясопептонном бульоне или агаре.

Такой способностью обладают быстрорастущие и некоторые медленнорастущие микобактерии.

Наиболее достоверные результаты при дифференциации микобактерий туберкулеза дает биологический метод. Сущность метода заключается в различной патогенности возбудителей туберкулеза в отношении лабораторных животных (85, 312).

Я.А. Благодарный (1982) пишет, что несмотря на высокую достоверность типирования микобактерий туберкулеза на лабораторных животных, эта методика не получила широкого распространения и требует дальнейшего совершенствования.

Чтобы облегчить работу по идентификации кислотоустойчивых микроорганизмов в последние годы применяют биологические методы исследования, основанные на отношении микобактерий к химическим агентам и на различной ферментативной активности.

Способность микобактерий туберкулеза человеческого вида вырабатывать больше никотиновой кислоты, чем все остальные микобактерии положена в основу ниациновой пробы, предложенной (424).

Для идентификации микобактерий широко используют амидаз-ную пробу (388) .

В окислительно-восстановительных процессах микробной клетки активное участие принимают ферменты каталаза и перок-сидаза. Важность фермента каталазы для микобактерий определяется его защитной ролью от токсического действия на бактериальные клетки перекиси водорода, который появляется в тканях в результате клеточного обмена. Этот фермент имеется у всех

видов микобактерий, кроме изниазидо устойчивых культур микобактерий туберкулеза (240, 92).

Исследования японских микробиологов показали, что ката-лаза у вирулентных микобактерий нестойкая и разрушается при б5-б8°С, в то время как у атипичных микобактерий она термостабильная. Эти данные подтверждают результаты (450, 159), которые, изучая периксидазно-каталазную активность у туберкулезных и атипичных микобактерий, обнаружили у последних наличие ярко выраженной каталазной и отсутствие пероксидазной активности .

Наряду с этими методами для дифференциации микобактерий используют результаты изучения серологических свойств липид-ного состава клеток, а также данные, полученные при изучении гибридизации ДНК-ДНК, фаготипировании, хромотографии и спектроскопии (104, 224, 130, 56, 280, 491, 418) и др.

Необходимо отметить тот факт, что в эпидемиологии и эпизоотологии туберкулеза проблема видов микобактерий имеет не только теоретическое, но и большое практическое значение, так как создает основу для успешного проведения комплекса противотуберкулезных мероприятий.

Определение видовой принадлежности изолированных культур микобактерий позволяет более точно выявить ареал их распространения, источники инфицирования человека, животных и птиц.

3.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1.Материалы и методы исследований

Работы по изучению эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота и дифференциации неспецифических реакций на туберкулин проводили в 1976-1997 годы на кафедре эпизоотологии Казанской Государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, в районных ветеринарных объединениях, хозяйствах Республики Татарстан, а отдельные вопросы и в хозяйствах Омской области Российской Федерации.

При изучении эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах использовались также показатели: заболеваемость животных, сезонность выявления больных, количество неблагополучных пунктов, коэффициент очаговости, повторяемость заболевания по фермам и степень распространения туберкулеза в зависимости от природно-географических и почвенных особенностей местности.

Анализу подвергали результаты клинических наблюдений, аллергических, патологоанатомических, бактериологических, биологических, гистологических и иммунологических исследований, полученные нами на протяжении всего периода работы в этой области, а также данные, накопленные в районных ветеринарных объединениях, ветеринарных лабораториях ОПВК мясокомбинатов и Главном управлении ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан.

На протяжении всего периода работы принимали непосредственное участие в организации противотуберкулезных мероприятий в республике. Изучали давность возникновения туберкулеза в хозяйствах, пути распространения, ведущие факторы, способствующие распространению возбудителя болезни и инфицирования различных видов животных, устойчивость возбудителя во внешней среде, частоту высеваемости его из объектов окружающей среды, а также особенности эпизоотического процесса на примере конкретных хозяйств республики.

В процессе работы оценивали эффективность профилактических и оздоровительных мероприятий, разрабатывали перспективные планы, дифференцированные для каждого неблагополучного по туберкулезу хозяйства, направленные на предотвращение возникновения и рецидива инфекции в ранее оздоровленных хозяйствах .

Обобщенные результаты эпизоотологического анализа и собственных исследований апробировали в эпизоотологических экспериментах в условиях производства и разрабатывали конкретные рекомендации для внедрения.

Течение туберкулезной инфекции изучали в разные годы в 248 неблагополучных по этой инфекции хозяйствах, проследили динамику аллергических туберкулиновых реакций у 43,6 тыс. голов крупного рогатого скота, в том числе на 727 9 животных испытывали метод провокации скрытых форм туберкулезной инфекции. С учетом длительности неблагополучия, конкретных условий каждого хозяйства и зональных особенностей течения туберку-

лезного процесса разработан и внедрен в производство метод провокации скрытого носительства возбудителя туберкулеза, как тест-БЦЖ и надплевральная новокаиновая блокада по В.В. Моси-ну.

Производственные опыты по изучению эффективности вакцины в качестве провокации скрытых форм туберкулезной инфекции проводили в двух неблагополучных по туберкулезу хозяйствах Агрызского района РТ на 38 90 гол крупного рогатого скота. Для этой цели применяли сухую вакцину БЦЖ в дозе 1,0 мг сухого вещества, растворенного в 0,3 мл. физиологического раствора. Первичный учет реакции на тест-БЦЖ производили через 72 ч. после введения препарата, затем выявление скрыто больных животных проводили на основе внутрикожных туберкулиновых реакций, проведенных через 45 дней после введения вакцины БЦЖ, а в последующем через б, 9, 12, 15, 18 месяцев, т.е. до получения отрицательного результата на введенный туберкулин в целом по стаду.

С целью своевременного удаления из стада потенциально-скрытых источников возбудителя инфекции провели надплевраль-ную новокаиновую блокаду в б неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах Дрожжановского района Республики Татарстан на 338 9 гол. крупного рогатого скота. Для проведения новокаиновой блокады использовали теплый свежеприготовленный 0,5%-ный раствор новокаина на физрастворе. Общую

порцию раствора (100-120 мл) вводили равными порциями с каждой стороны.

Одновременно с блокадой, животных подвергали внутрикож-ной туберкулиновой пробе по общепринятой методике.

В течение всего периода проведения исследований, диагностическому убою было подвергнуто 12170 гол. крупного рогатого скота и более 2000 гол. свиней. Туши и внутренние органы убитых животных подвергали патологоанатомическому осмотру, определяли характер и степень поражения каждого органа в отдельности, а биоматериал от них исследовали с помощью бактерио-скопического, биологического и гистологического исследований.

Для лабораторных исследований отбирали кусочки паренхиматозных органов убитых животных (кусочки печени, легких, почек, селезенки) и лимфатические узлы (заглоточные, подчелюстные, предлопаточные, средостенные, бронхиальные, брыжеечные, паховые).

Исследования проводили согласно «Методическим указаниям по диагностике туберкулеза животных». Исследования подвергали 1610 проб биоматериала. Для постановки биологической пробы использовали 320 кроликов, 830 морских свинок, и 36 кур. Предпосевную обработку биоматериала проводили по методу (158, 9, 196). Для выращивания культур микобактерий применяли среды Левенштейна - Иенсена, Гельберга, ФАСТ_ЗЛ и другие.

Через три дня после посева пробирки просматривали, с не восстановившимся цветом среды и ростом постоянной микрофлоры удаляли, а в остальных ватно-марлевые пробки меняли на рези-

новые. Культивирование проводили при температуре 37°С до трех месяцев в вертикальном положении и еженедельно проводили контроль роста. При проявлении роста из культур готовили мазки, окрашивали по Циль-Нильсену и проводили бактериоскопические исследования, а также определяли их видовую принадлежность методом заражения кроликов и морских свинок.

Гистологические исследования проводили на кафедре патологической анатомии КГАВМ и республиканской ветеринарной лаборатории по общепринятой методике.

Параллельно с указанными методами исследований, с целью выявления возбудителя туберкулеза бычьего и человеческого видов, нами был применен метод амплификации ДНК (полимеразная цепная реакция - ПЦР).

Тест-система представляет собой набор для выделения ДНК из 5 компонентов, набор для проведения ПЦР из 8 компонентов и набор для проведения электрофореза из 3 компонентов. Выделение ДНК из клинического материала проводили с помощью набора «ДНК-сорб-ПЦР».

Идентификацию микобактерий проводили методом ПЦР, включающим три этапа, которые рекомендуется проводить в 3-х, предназначенных только для этих этапов зонах: выделения ДНК (зона - 1 , этап - 1), проведения ПЦР (зона - 2, этап - 2), проведения электрофоретического анализа ПЦР-продуктов (ампликанов) (зона - 3, этап - 3) .

Подготовка проб (выделение ДНК), зона - 1, этап - 1. Для этого использовали кровь и лимфатические узлы. Кровь от pea-

тировавших на туберкулин животных брали в пробирки в количестве 9 мл, в которые предварительно был внесен 3%-ый раствор трилона-Б.

Лимфатические узлы перед исследованием растирали с добавлением равного объемов физраствора, затем для выделения ДНК использовали отстоявшийся в течение 10 минут гомогенат.

Порядок работы: Приготовили отмывочный раствор 2, для этого в отдельном флаконе смешали 20 мл. концентрата из набора, 8 0 мл. дистиллированной воды и 100 мл. 96% этанола.

В плотно закрывающуюся полипропиленовую пробирку на 1,5 мл внесли 300 мкл лизирующего раствора, и 100 мкл предварительно подготовленной исследуемой пробы (отрицательной или положительной), закрывали крышку, перемешивали на вортексе и осаждали на микроцентрифуге при 12 000 об/мин, в течение 2 мин. В случае образования осадка, надосадок переносили в чистую пробирку, добавляли 20 мкл. ресуспендированного сорбента, перемешивали на вортексе, ставили в штатив на 5 мин. и перемешивали на вортексе по мере осаждения.

Затем сорбент осаждали в микроцентрифуге в течение 130 сек. при 3 тыс. об/мин. Из каждой пробирки отдельным наконечником отсасывали супернатант и к осадку добавляли по 300 мкл. отмывочного раствора 1, перемешивали на вортексе до полного ресуспендирования сорбента, осаждали на центрифуге при 5 тыс. об/мин. 30 сек. Из каждой пробирки отдельным наконечником отсасывали супернатант, а к осадку добавляли по 800 мкл. отмы-

вочного раствора 2, перемешивали на вортексе до полного ре-суспендирования сорбента, осаждали на микроцентрифуге при 10 тыс. об/мин. 30 сек. отбором супернатанта. В осадок вновь добавляли по 8 00 мкл. отмывочного раствора 2 , перемешивали на вортексе до полного ресуспендирования сорбента с последующим осаждением на микроцентрифуге при 10 тыс. об/мин. 30 сек. после тщательного отбора супернатанта осадок сорбента высушивали в термостате при температуре 65°С в течение 5 мин при открытых крышках.

Сорбент ресуспендировали в 4 0 мкл. элюирующего буфера, поместили в термостат при температуре 65°С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе при закрытых крышках пробирок.

Подвергали осаждению на микроцентрифуге при 12 000 тыс. об/мин -1 мин. Проба готова к постановке ПЦР, супернатант содержит очищенную ДНК.

В качестве отрицательного контроля на этапе выделения ДНК использовали физраствор, в котором гомогенизировали материал .

В качестве положительной пробы использовали входящий в состав набора для проведения ПЦР - положительный контроль.

Проведение ПЦР, зона - 2, этап - 2 проводили в следующем порядке:

• размораживали все реактивы из набора, кроме Тад-полимеразы, перемешивали, переворачивая, и поместили в охладитель проб. Пробирку с воском прогревали в термостате при 70-80°С до полного расплавления;

• готовили «нижнюю» реакционную смесь для 10 проб, включая контроль, для чего в отдельной пробирке мешали 5 0 мкл. деионизированной воды, 50 мкл. смеси нуклеотидтриофосфатов, 50 мкл. праймеров. Перемешивали и по 15 мкл. раскапывали в микропробирки для ПЦР, а сверху наслоили по 15 мкл. расплавленного воска.

• готовили «верхнюю» реакционную смесь на 10 проб, включая контроль, для чего смешали в отдельной пробирке - 100 мкл. 5-кратного реакционного буфера, 14 0 мкл. деионизированной воды, 10 мкл. Тад-полимеразы и после перемешивания осаждали на центрифуге и по 25 мкл. раскапывали в пробирки на поверхность застывшего воска.

• вносили по 10 мкл. ДНК, выделенной из проб или контрольной ДНК на поверхность раствора в пробирке обязательно с новыми наконечниками.

• сверху очень осторожно, не задевая стенки пробирок, вносили по две капли минерального масла и центрифугировали в течение 2 сек. на микроцентрифуге.

•запустили нужную программу и при достижении температура 95°С пробирки ставили в ячейки амплификатора, закрывали крышку и ждали окончания реакции в течение 1 часа 30 мин.

Электрофоретический анализ продуктов амплификации, зона - 3, этап - 3 проводили в следующем порядке:

• растворяли смесь сухих реактивов и полученным гелем заливали подложку камеры, где ранее была установлена гребенка. Толщина геля не менее 4 и не более 5 мм;

• после полного застывания геля осторожно вынимали из него гребенку, стараясь не повредить лунки;

• помещали подлужку с готовым гелем в камеру, с лунками ближе к отрицательному электроду, так как ДНК двигается к положительному электроду;

• заливали в камеру 1-кратный буфер так, чтобы он покрывал гель на 4-5 мм;

• пробирки с продуктами амплификации выставляли последовательно и из под слоя масла отсасывали по 10-15 мкл. и вносили пробы в лунки геля;

• подключали камеру к источнику тока, соблюдая полярность, и включали источник;

• когда краситель проходил примерно 1 см. От лунки, источник выключали, гель переносили на трансиллюминатор и рассматривали полосы ДНК в ультрафиолетовом свете.

В дорожке, соответствующей положительному контролю, появляется светящаяся полоса оранжевого цвета, которая располагается на определенном расстоянии от лунки.

Положительные пробы исследуемого материала имеют такую же полосу на том же уровне, что и полоса в положительном контроле .

Отрицательные пробы, как и отрицательный контроль, каких-либо полос не имеют.

Основной частью нашей работы явилось выяснение причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота, имеющих место в благополучных по туберкулезу хозяйствах при проведении планово-профилактических аллергических исследований, разработка методов прижизненной их дифференциации, а также соответствующих ветеринарно-санитарных мероприятий с учетом этиологических факторов.

Изучение причин неспецифических реакций на туберкулин проводили в 656 хозяйствах 43 районов Республики Татарстан на 262,6 тыс. головах крупного рогатого скота. В каждом хозяйстве животных подвергали туберкулинизации не менее 4 раз в год. Исследования проводились комиссионно, с участием ведущих ветеринарных специалистов ГУВ КМ РТ, районных ветеринарных объединений и хозяйств.

Характер проявления туберкулиновых реакций изучали путем пальпации воспалительной припухлости на месте введенного туберкулина и измерением ее параметров с помощью кутиметра, сравнительного анализа этих показателей, а также результатами повторных исследований.

Симультанную аллергическую пробу проводили с одновременным введением ПДП-туберкулина для млекопитающих и комплексного аллергена, изготовленного из атипичных микобактерий (KAM) или птичьего туберкулина в дозах по 0,1 и 0,2 мл.

В хозяйствах, где у реагирующих на туберкулин животных туберкулез не подтверждался, и не выделяли атипичных ми-

кобактерий, повторные аллергические исследования проводили введением ПДП-туберкулина для млекопитающих в дозе 5000 МЕ/0,1 мл.

Специфичность и возможность применения эхинококковой жидкости (в разведении 1:1 с растворителем для сухих туберку-линов) для дифференциации туберкулиновых реакций, обусловленных эхинококкозом, изучали в 5 хозяйствах неблагополучных по этой болезни. Аллерген вводили в область шеи, после предварительной подготовки места инъекций с помощью безыгольного инъектора в дозе 0,2 мл. Учет и оценку реакции проводили через 2,6,12,24, и 72 часа после введения препарата.

Дифференциацию неспецифических туберкулиновых реакций с помощью реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) ставили по методике с некоторой нашей модификацией получения лимфоцитов из крови крупного рогатого скота. Оценку состояния специфического клеточного иммунитета проводили при инкубации лимфоцитов с ПДП-туберкулином для млекопитающих.

Реакцию специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) ставили по методике, описанной (2). Для этой цели в пробирку, где содержался 0,1 мл. гепарина, вносили 5 мл. исследуемой крови и тщательно перемешивали. Затем в две пробирки Флоренского вносили по 0,9 мл. гепаринизированной крови. В одну из них добавляли 0,1 мл. аллергена-туберкулина (опытного), а в другую 0,1 мл. физраствора (контрольного). Содержимое пробирок осто-

рожно перемешивали и в течение 2 часов инкубировали при температуре 37°С. Через каждые 30 мин. пробирки осторожно встряхивали. Для подсчета лейкоцитов, после истечения срока инкубации, из каждой пробирки набирали инкубированную кровь в меланжеры для подсчета лейкоцитов. Подсчет числа лейкоцитов проводили в камере Горяева и вычисляли показатели РСЛЛ в процентах по формуле:

РСЛЛ = (Лк - Л0) : Лк х 100, где

Лк - количество лейкоцитов в контрольной пробе;

Л0 - количество лейкоцитов в опытной пробе.

При этом считали, что у несенсибилизированных микобактериями животных показатель РСЛЛ не превышает 7-8%.

Достоверность показателей аллергических, иммунологических исследований контролировали проведением диагностических убоев непосредственно в хозяйствах и на мясокомбинатах. С этой целью подвергали диагностическому убою 6350 голов крупного рогатого скота и 1353 головы свиней.

Для более достоверного установления причин туберкулиновых реакций, большое внимание уделяли отбору животных из числа реагировавших на туберкулин. Кроме учета интенсивности воспалительного отека на туберкулин, от реагировавших на туберкулин животных из яремной вены брали кровь и ставили реакцию на специфическое подавление ретракции кровяного сгустка (РСПРКС) по методике (270) . Для этого в стерильные пробирки с содержанием по 1,0 мл. ППД-туберкулина для млекопитающих вно-

сили 3 мл. венозной крови и после осторожного перемешивания ставили на 20 мин. в термостат при температуре 37°С, а затем в холодильник на 24 часа. По истечении срока отстаивания из пробирки отсасывали образовавшуюся сыворотку, измеряли ее объем и высчитывали индекс ретракции (ИР) по формуле:

ИР = (С - Т): К, где

С - объем ретрагированной сыворотки и туберкулина;

Т - объем туберкулина;

К - объем венозной крови.

У здоровых, несенсибилизированных микобактериями животных Ир составляет 0,6 и выше.

При получении низких и нулевых значений ИР, животных подвергали диагностическому убою с последующим исследованием от них биоматериала в лаборатории на туберкулез.

Микробиологическое исследование биоматериала проводили бактериоскопией окрашенных мазков по Циль-Нильсену и Герману (Б. Дембинский, 1914) :а также провели серию культуральных исследований на выделение не только бактериальных, но и Л-форм микобактерий.

Исследуемый материал перед посевом на выделение Л-форм подвергали щадящей предварительной обработке 3%-ным раствором серной кислоты для подавления сопутствующей неспецифической микрофлоры в течение 10 мин. в спокойном состоянии, 10 мин. при центрифугировании 1500 об/мин. с последующим 2-3 кратным отмыванием осадка стерильным физиологическим раствором и за-

севом его на полужидкую агаровую среду. Инкубацию проводили при температуре 37°С в течение 3-4 недель. В случаях регистрации характерного макроскопического роста готовили из каждой пробирки влажные нативные препараты, которые микроскопировали с помощью устройства для наблюдения фазового контраста КФ-4.

Выросшие колонии пересеивали на пробирки со свежими питательными средами до 5-6 пассажей. Стабильность полученных JI-форм проверяли систематическими контрольными высевами на плотные питательные яичные среды Левенштейна-Иенсена.

Патогенность Л-форм микобактерий изучали путем заражения морских свинок выросшими культурами, для чего колонии Л-форм предварительно переносили с питательной среды, на которой они росли в центрифужные пробирки со стерильным физиологическим раствором, в котором дважды отмывали от питательной среды с помощью механического встряхивания и последующего центрифугирования при 3000 об/мин. в течении 5 мин., а затем суспендировали в 0,5 мл. стерильного физраствора и вводили подкожно, в область паха морским свинкам живой массой 200-250 граммов.

Дифференциацию выделенных культур проводили в соответствии с методическими рекомендациями (95, 426, 487, 501, 482, 88, 483, 501).

Для определения видовой принадлежности микобактерий туберкулеза и степени их патогенности, заражали лабораторных животных по общепринятым методам. Павших и убитых по истечении 3 месяцев после заражения животных, вскрывали, учитывали

наличие и характер туберкулезных изменений во внутренних органах и лимфатических узлах.

С учетом конкретных условий каждого хозяйства, этиологических факторов, обуславливающих туберкулиновые реакции, нами разработана и внедрена в сельскохозяйственное производство дифференцированная комплексная система профилактических и оздоровительных мероприятий при неспецифических туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота.

Вся научно-методическая и практическая работа по внедрению новых разработок осуществлялась при нашем непосредственном участии. Учет эффективности мероприятий оценивали на основании анализа материалов собственных исследований, отчетов хозяйств, районных ветеринарных объединений, а также регулярным проведением контрольных обследований эпизоотологического состояния хозяйств.

Цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики по Стьюденту (305).

3.2. Туберкулез крупного рогатого скота и его распространение в хозяйствах Республики Татарстан

Республика Татарстан расположена в средне-волжской части Российской Федерации. Природные условия характеризуются холмисто-равнинной поверхностью и по ее территории протекают две большие реки Волга и Кама. В приволжских и прикамских регионах поверхность почвы покрыта нечерноземами, а заволжские

и закамские - богатыми гумусом черноземами. Климат умеренно континентальный, иногда с жарким летом и холодной зимой (самая низкая температура была зарегистрирована в январе-феврале 1978 года - 52°С) .

Важное место в сельскохозяйственном производстве Республики Татарстан занимает животноводство, а скотоводство занимает ведущее место среди животноводческих отраслей, как по поголовью скота, так и по объему производства. Развитие товарного молочного скотоводства способствовало, соответственно, и улучшению породного состава животных, которое в широких масштабах началось проводиться с 1935 года. В те годы плановыми были утверждены три породы - холмогорская, бестужевская и щвицкая. В последние годы стали широко внедрять межпородное скрещивание, в частности, в некоторых хозяйствах республики проводят осеменение коров и телок быками голштинно-фризской породы.

Туберкулез сельскохозяйственных животных в Республике Татарстан регистрируется в течение длительного времени, однако сведения об этой инфекции в дореволюционной период крайне скудные, так как из-за отсутствия прижизненных диагностических методов, ее обнаруживали только случайно при убое животных или при вскрытии трупов павших животных. Так по данным (28) при вскрытиях трупов животных, произведенных в Казанском ветеринарном институте (ныне академия ветеринарной медицины) с 1896 по 1904 год, из 1351 трупа туберкулезные поражения бы-

ли установлены: у крупного рогатого скота в 6-ти, у коз - в 1-ом, у собак - в 2-х и у птиц - в 15-ти случаях.

В ученых записках КВИ, выпущенных в последующие годы, имеются данные о том, что в 1897 г. из 269 животных, поступивших в инфекционную клинику с подозрением на туберкулез, выявлены 2 гол. крупного рогатого скота, а в 1924 г. из 5 67 животных с подозрением на туберкулез выявлены: лошадей - 25, крупный рогатый скот - 8, коз - 10, собак - 55, кошек - 1, птиц - 4 головы.

Официально туберкулез крупного рогатого скота в Казанской губернии, как спорадический случай, был установлен в 1895 г. Улучшение породных качеств животных путем ввоза племенных производителей из-за рубежа, при отсутствии массовых диагностических исследований, способствовало распространению туберкулеза (253).

В первые послевоенные годы диагностические исследования на туберкулез проводились также в неполном объеме, а недостатки в кормлении и содержании животных усугубляли эпизоотическую обстановку по туберкулезу. Так в 194 9 г. в республике числилось 698 неблагополучных по туберкулезу пунктов. По данным ветеринарных отчетностей тех лет, основными причинами широкого распространения туберкулеза явились передержка больного скота в хозяйствах и использование молодняка, полученного в период неблагополучия хозяйств, в племенных и производственных целях.

Благодаря огромному усилию практических ветеринарных специалистов, с середины 50-го года эпизоотическая ситуация заметно улучшилась. При проведении оздоровительных меро-

приятий в эти годы все шире стали внедрять достижения ветеринарной науки, которая разработала, и вооружила ветеринарных специалистов-практиков новыми научными методами ускоренного оздоровления хозяйств от туберкулеза, где предусмотрено исследование крупного рогатого скота на туберкулез внутрикожной туберкулиновой пробой через каждые 30-4 5 дней. На первом этапе работы оздоровительных мероприятий, туберкулез был обнаружен, в той или иной степени, во многих хозяйствах республики, где проводили исследования на туберкулез. По данным (253) к началу 1966 г. заболевание крупного рогатого скота туберкулезом регистрировалось в 20 из 3 6 районов Республики Татарстан. Было 138 неблагополучных пунктов, где пораженность скота составила 1,5% к числу исследованных. В течение 1966 г. было выявлено вновь 34 пункта, где заболело 10 248 животных. Наибольшая пораженность крупного рогатого скота туберкулезом была отмечена в хозяйствах Алексеевского, Алькеевского, Агрыз-ского, Бавлинского, Черемшанского и других районов. В некоторых хозяйствах было отмечено заболевание свиней и кур. В дальнейшем, в результате проведения систематических плановых противотуберкулезных мероприятий, заболеваемость животных стала снижаться, но борьба с туберкулезом шла с переменным успехом.

Более радикальные мероприятия по ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота были осуществлены в течение последних 30 лет. В этот период, на основании изучения эпизоотологии, диагностики и опыта борьбы с туберкулезом в других регионах страны, в Республике Татарстан все шире стали внедрять дополнительные мероприятия по своевременному выявлению источников возбудителя инфекции и предупреждению повторных вспышек болезни в оздоровленных хозяйствах.

Благодаря использованию плановых методов борьбы, включая и специфическую профилактику молодняка против туберкулеза вакциной БЦЖ,. произошли положительные изменения в эпизоотической ситуации по туберкулезу в республике. Динамика возникновения и оздоровления неблагополучных по туберкулезу пунктов в Республике Татарстан представлена в таблице 1.

Как видно из таблицы 1 с 1971 по 1997 год включительно, туберкулез был зарегистрирован в 667 хозяйствах республики. За это время оздоровлено 334 неблагополучных пункта и в то же время выявлено вновь 27 6 пунктов. Боле подробный анализ эпизоотической обстановки по туберкулезу крупного рогатого скота за 1978-1988 годы представлен в таблице 2 и за 1989-1997 годы в таблице 3.

Из прилагаемой таблицы 2 видно, что за 1978-1988 годы было оздоровлено 65 неблагополучных по туберкулезу пунктов, и впервые за многие годы неблагополучия на 1 января 198 8 года республика была оздоровлена от туберкулеза. Не оставалось больного туберкулезом скота на передержке. Этот период ха-

59

Таблица 1

Годы Кол-во неблагоп пунктов на 101 Выявлено новых неблагоп. пунктов оровлено Заболело и убито животных (гол.)

Всего в т.ч. с применением вакцины БЦЖ

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Харитонов, Михаил Васильевич

5.ВЫВОДЫ

1.Длительность неблагополучия по туберкулезу крупного рогатого скота и частые рецидивы туберкулеза в оздоровленных хозяйствах в южных и юго-восточных районах Республики Татарстан обусловлены:

• длительным сохранением микобактерий туберкулеза во внешней среде из-за недостаточно эффективного обеззараживания и санации животноводческих помещений, территории ферм, летних лагерей, пастбищ, некачественного проведения дезинфекционных работ, нарушения технологии и режима биотермического обеззараживания навоза;

• использованием свежего необезвреженного навоза из неблагополучных ферм в качестве органического удобрения под посевы сельскохозяйственных культур на зеленый корм и особеноо под корнеплоды;

• нарушением инструктивных норм при комплектовании ферм в оздоравливаемых хозяйствах, несоблюдением принципа изолированного выращивания молодняка и использованием на выпойку телят необеззараженного молока и обрата.

2. В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах, где не уделялось должного внимания качеству ветеринарно-санитарных мероприятий, возбудитель туберкулеза длительно сохранялся в животноводческих помещениях, почве выгульных кард, территорий ферм, летних лагерей и пастбищ. На объектах внешней среды в таких хозяйствах изолированы 34 культуры микобактерий, из них 19 (55%) отнесены к патогенным микобактериям бычьего вида, 15 (44,1%) к кислотоустойчивым атипичным микобактериям.

З.В длительно неблагополучных по туберкулезу хозяйствах у отдельных животных туберкулезная инфекция протекает в латентной форме и проводимые оздоровительные меры не всегда достигают цели. В таких хозяйствах для полного выявления скрыто больных животных следует проводить провокацию латентного туберкулезного процесса с помощью БЦЖ-теста или надплевральную новокаиновую блокаду по В. В. Мосину, что позволяет ускорить сроки выздоровления и предупредить рецидивы туберкулеза после снятия ограничительных мер с хозяйства.

4.Определение вирулентности микобактерий, выделенных из биоматериала, реагировавших на туберкулин животных и объектов внешней среды, целесообразно проводить на морских свинках путем внутрибрюшинного заражения исследуемой культуры, суспендированной на 5 мл стабилизированной крови крупного рогатого скота.

5.Вирклентные культуры микобактерий бычьего вида при длительном культивировании под воздействием высокой температуры переходят в атипичные формы, теряя при этом патогенные свойства для лабораторных животных, но сохраняя аллергизирующие свойства. Атипичные микобактерии в хозяйствах, оздоровленных от туберкулеза, вероятно, появляются из-за нарушений технологии биотермического обеззараживания навоза, изоляция которых из биоматериала реагировавших на туберкулин животных и объектов внешней среды, служат подтверждающим фактором их циркуляции между организмом животных и внешней среды.

6. В оздоровленных от туберкулеза крупного рогатого хозяйствах, при появлении вновь реагирующих на туберкулин животных, биоматериал от них высевали параллельно на питательные среды для выявления бактериальных и Л-форм микобактерий. При отсутствии роста бактериальных форм, нередко получали рост Л-форм микобактерий.

7.Неспецифические реакции на туберкулин в 65 6 благополучных по туберкулезу хозяйствах 43 районов Республики Татарстана имели полиэтиологический характер. Из них, 45,3% связаны с гельминтоносительством, 43,6% - различными воспалительными процессами в органах, 3,3% - сенсибилизацией организма атипичными микобактериями и 1,1% - персистенцией возбудителя в виде Л-форм.

8.Этиологическая роль гельминтов в сенсибилизации организма животных к туберкулину подтверждается аллергическими, гельминтокапролигистическими исследованиями и ветеринарно-санитарным осмотром внутренних органов убитых животных до и после проведенной дегельминтизации. В неблагополучных по эхинококкозу хозяйствах, дополнительным методом дифференциации туберкулиновых реакций может служить одновременное применение туберкулина и жидкости эхинококкозового пузыря в дозе 0,2 мл. У животных, больных эхинококкозом интенсивность воспалительной припухлости на специфический аллерген значительно выше, чем на туберкулин.

9.Псевдоаллергические реакции на туберкулин, независимо от этиологического фактора, в основе имеют воспалительный процесс, протекающий в каком-либо органе животного (абсцессы, травматические ретикулиты, гельминтоносительство, гастроэнтероколиты и др.) • На внутрикожное введение туберкулина в дозе 0,1 мл (50 00МЕ) такие животные, как правило, редко реагируют, что может служить критерием оценки туберкулиновых реакций, как неспецифических.

10.Животные, сенсибилизированные атипичными микобактериями птичьего вида, при исследовании их симультанной аллергической пробой, более интенсивно реагируют на аллерген KAM или птичий туберкулин, что является критерием дифференциации парааллергических реакций. В таких хозяйствах часто реагирует и молодняк 2-6 месячного возраста, а при убое последних, в брыжеечных лимфатических узлах обнаруживаются туберкулезоподобные изменения.

11.Синантропные птицы (голуби, галки), обитающие в животноводческих помещениях, нередко являются источником возбудителя микобактериозов крупного рогатого скота и свиней и параллергических туберкулиновых реакций. Необходимо предусмотреть ограничение доступа таких птиц в животноводческие помещения.

12.Показатели иммунобиологических реакций (РБТЛ, РСЛЛ) с туберкулином для млекопитающих у клинически здоровых, зараженных туберкулезом и сенсибилизированных атипичными микобактериями животных имеют существенные различия, что может быть использовано для дифференциальной диагностики туберкулеза и аллергических реакций на туберкулин:

• у клинически здоровых животных количество властных клеток составляет 1,66±0,2%, а лизис лейкоцитов не превышает 4,81±0,5%;

• у зараженных туберкулезом животных в начале заражения количество бластов повышается до 18,52+1,7 7%, при контроле 3,85±0,63%. По мере прогрессирования туберкулеза этот показатель снижается до 0,4+0,0 8%, при контроле 7,02+0,94%.

Число лизированных лейкоцитов у таких животных составляет 21,87+2,0% в опытных и 4,81+0,55% в контрольных пробирках:

• у сенсибилизированных атипичных микобактериями животных число бластных клеток не превышает 1,72±0,5% при норме 1,66+0,2%, а лизис лейкоцитов не превышает 5,83±0,24%, при норме 4,81±0,5%.

13.Плимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет выявлять скрытые источники возбудителя туберкулеза, хотя при неспецифических туберкулиновых реакциях они не отражают истинную эпизоотическую обстановку. Положительные результаты

ПЦР и исследования на выделение Л-форм микобактерий туберкулеза могут быть решающими в ранней диагностике туберкулеза и подтверждающими рецидивы в оздоровленных от туберкулеза хозяйствах.

14.Своевременное установление диагноза на туберкулез или исключение последнего, дифференциация туберкулиновых реакций у животных с учетом их этиологии, обеспечивают рациональное планирование общих и специальных противотуберкулезных мероприятий, эффективное их проведение со значительной экономией материальных, трудовых и денежных средств сельскохозяйственных предприятий, создает благоприятные условия ускоренного оздоровления хозяйств от туберкулеза.

6.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Научные разработки, положения и выводы нашей работы нашли отражение в законодательных документах, комплексных планах и рекомендациях, принятых для внедрения в ветеринарную практику:

1.Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота. Утв. ГУВ и ГВИ 2 6 февраля 1990 г.

2.Рекомендация о мероприятиях, проводимых в хозяйствах при неспецифических туберкулиновых реакциях крупного рогатого скота. Утв. Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 5 мая 19 98 г.

3.Комплексный план организационно-хозяйственных, ветеринарно-санитарных и специальных мероприятий по оздоровлению неблагополучных животноводческих ферм и профилактике туберкулеза сельскохозяйственных животных в хозяйствах Республики Татарстан на 1995-2000 гг. Утв. Постановлением КМ РТ от 10 июля 1995 г., № 441.

4.Рекомендация о мероприятиях, проводимых в хозяйствах Республики Татарстан при неспецифических туберкулиновых реакциях крупного рогатого скота. Утв. НТС ГУВ КМ РТ 1 ноября 1996 г.

5.Схема проведения противотуберкулезных мероприятий в зависимости от эпизоотической ситуации в хозяйствах Республики Татарстан. Утв. ГУВ КМ РТ 15 сентября 19 97 г.

6.Методические указания по диагностике, профилактике и ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных в хозяйствах Татарской АССР. Утв. НТС МСХ ТАССР 24 декабря 1982 г.

7.Методические указания по дифференциации неспецифических и поствакциальных аллергических реакций на туберкулин от специфических у крупного рогатого скота. Утв. НТС МСХ ТАССР 2 4 декабря 1982 г.

8.Рекомендация по профилактике и ликвидации туберкулеза сельскохозяйственных животных в хозяйствах Татарской АССР. Утв. НТС МСХ ТАССР 17 декабря 198 4 г.

9.Туберкулез животных, методы его диагностики и профилактика. Плакат, 2000 экз. Татарское книжное издательство, 1985 г.

10.Дезинфекция - основа профилактики заболевания животных и птиц. Плакат, 3000 экз. Татарское книжное издательство, 1987 г.

11.Применение иммунофлуоресцентного метода при диагностике некоторых инфекционных болезней. (Методические указания),. Утв. Ученым советом ветеринарного факультета 12 июня 1987 г., проток. №4

12.Туберкулез сельскохозяйственных животных. (Учебное пособие). Казань, 1990 г.

Результаты исследований вошли в монографию Н.3.Хазипова, М.А.Сафина, Г.З. Идрисова «Туберкулез крупного рогатого скота», издание 1-ое, М. Агропромиздат, 1985, 2-ое издание, Казань,1997г.

Список литературы диссертационного исследования доктор ветеринарных наук Харитонов, Михаил Васильевич, 1998 год

к использованию

под наименованием:.

"Насадка к игле для

проведения надплевральной новокаиновой ,Вв Мосину "

¡¡¿¡(¡Ш П.}- , - \ ^-Руководитель предприятия

{.декабря! - э 9Г"""""'

1980-6299

Форма №91 ИЗ, ПО-9'7

402

■ ! J

^ О L Ь

РОССИЙСКОЕ АГЕНТСТВО ПО ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ л т п -

' ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ^ ' ■ - - ■ -

ГОСУДАРСТВЕННОЙ ПАТЕНТНОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ (ВНИИГПЭ)

121858, Москва, Бережковская наб., 30, корп. 1 Телефон [phone] . Телекс 114818 ПДЧ . Факс [phone]

На№264 от 23.06.97. (98) Казанская государственная

акаде^'я ветери'гарной медицины (21) наш №97108507/13(008603) НЛС

420074, г.. "азань.

При переписке просим ссылаться на номер заявки и сообщить дату получения данной корреспонденции

УВЕДОМЛЕНИЕ

о положительном результате формальной экспертизы

Формальная экспертиза по данной заявке завершена

Й 1. Приоритет 20 Мая 1997 установлен в соответствии с пунктом 1 статьи 19

(дата)

Патентного закона Российской Федерции, введеного в действие 14.10.92 (далее - Закон).

□ 2. Ваша просьба об установлении приоритета по дате, указанной в заявлении о выдаче патента, будет

рассмотрена в процессе экспертизы заявки по существу.

И 3. Экспериза заявки по существу будет проведена при поступлении соответствующего ходатайства, которое может быть подано в течение трех лет с даты поступления заявки на изобретение в Патентное ведомство (п. 7 ст. 21 Закона^.С документом об уплате пошлины в установлен- ом

размере.

□ 4.Дополнительные материалы (Ваш исх. № от ) в части, изменяющей сущность заявленного изобретения (промышленного образца), на основании пункта 2 статьи 21 (п. 2 ст. 24) Закона не могут быть приняты во внимание при рассмотрении заявки.

П 5. Формальная экспертиза проведена в отношении пункта (ов) формулы в соот-

ветствии с размером уплаченной пошлины.

Экспертиза заявки по существу в последующем может быть осуществлена в отношении изобретений содержащихся в пункте (ах) формулы, в отношении которого (ых) проведена формальная экспертиза.

П 6. Ходатайство о проведении экспертизы заявки по существу поступило

(дата)

□ результаты его рассмотрения будут сообщены Вам дополнительно

□ для его рассмотрения Вам необходимо представить документ, подтверждающий уплату установленной пошлины (заполняется в случае подачи ходатайства заявителем ).

Заместитель заведующего отделом формальной предварительной экспертизы И.Белоусов (см наобороте)

Информация о дальнейшем делопроизводстве - по телефонам 240 -25 - 90, 240 -64- 73

01/01

ЗАЛ

01.0/.97,

200305

ПОЯСНЕНИЯ И ДОВОДЫ ЭКСПЕРТИЗЫ

Для устранения недостатков в оформлении документов заявки Вам следует в двухмесячный срок с даты получения настоящего уведомления представить:

□ текст описания изобретения, формулу изобретения и реферат, напечатанные шрифтом черного цвета через два интервала с высотой заглавных букв не менее 2,1 мм согласно требованиям п. 6.5 Правил составления, подачи и рассмотрения заявки на выдачу патента на избретение, введенных в действие

09.12.93 (далее - Правила)

□ описание изобретения, формулу изобретения и реферат на листах, имеющих поля в соответствии с требованиями п. 6.3 Правил.

Ваша просьба об учете излишне уплаченной суммы будет удовлетворена после поступления ходатайства о проведении экспертизы по существу < документа,подтверждающего доплату пошлины до установленного размера.

«

#

Форма № 09 ИЗ-97

вниигпэ

2 6 СЕН 1997

РОССИЙСКОЕ АГЕНТСТВО ОТДРЛ № 1 ?

ПО ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ V1HI.II 1Г I О

> всероссийский

./научно-исследовательский i —i

институт государственной (98) 1 420074,г.Казань, 1

ПАТЕ™™П)ЕРТИЗЫ °(74) Казанская го с. акад. ве т. медицины,

121858, Москва, Бережковская наб., 30, корп. 1 НИР

Телефон [phone] Телекс 114818 ПДЧ Факс [phone]

На№ 303 от 21.08.97

(21) Наш № 97108507/13( 008603)

При переписке просим ссылаться на номер заявки и сообщить дату получения данной корреспонденции

УВЕДОМЛЕНИЕ о рассмотрении ходатайства о проведении экспертизы заявки на изобретение по существу

По результатам рассмотрения Вашего ходатайства о проведении экспертизы заявки по существу, поступившего ................., уведомляем Вас о том, что:

XI1

□

□

|2 1

3

□

□

□

экспертиза заявки по существу будет проведена в отношении.........I...................независимых

пунктов формулы изобретения,

принятой к рассмотрению по результатам проведения формальной экспертизы.

представленной после завершения формальной экспертизы....................................

экспертиза заявки по существу будет проведена после завершения проводимого в настоящее время информационного поиска.

экспертиза заявки по существу проводится в отношении пунктов...............................формулы

изобретения в соответствии с указанием заявителя от ................................................................

Такое указание экспертиза расценивает как изменение формулы изобретения с исключением из нее независимых пунктов, не подлежащих экспертизе.

В дальнейшем при представлении просьбы о включении в формулу изобретения исключенных Вами ранее независимых пунктов необходимо будет одновременно представить текст измененной формулы изобретения и уплатить соответствующую пошлину, для решения вопроса о том, считать ли Ваше ходатайство поданным заявителем или третьим лицом, Вам необходимо представить запрашиваемые документы (см. на обороте), для удовлетворения ходатайства Вам необходимо в двухмесячный срок с даты получения настоящего уведомления: (

представить документ, подтверждающий уплату пошлины за проведение экспертизы заявки по существу в размере............................................

в связи с поступлением просьбы о включении в формулу изобретения пунктов, отсутствовавших в ранее предложенной заявителем и принятой к рассмотрению формуле, представить документ, подтверждающий уплату пошлины за внесение изменений в материалы заявки по

инициативе заявителя в размере...............................................................................................

представить документ, подтверждающий наличие оснований для □ освобождения от уплаты пошлины □ уменьшения размера пошлины

привести в соответствие сумму уплаченной пошлины с количеством независимых пунктов формулы изобретения, подлежащей экспертизе, представив: (см. на обороте)

01

ЭСЗ 26.08.97

132501

- документ, подтверждающий доплату пошлины до установленного размера.............................

( Вами уплачена сумма..................................................................................................................)

- либо измененную формулу изобретения, содержащую......................независимых пунктов в

соответствии с уплаченной суммой пошлины <у"МТк

- либо измененную формулу изобретения и документ, подтверждающий уплату пошлины за проведение экспертизы заявки по существу в отношении количества независимых пунктов представленной формулы

—либо указать, в отношении каких независимых пунктов формулы изобретения, принятой к рассмотрению ранее, должна быть проведена экспертиза заявки по существу (в этом случае ; такое указание будет расценено как изменение формулы изобретения с исключением из нее

независимых пунктов, не подлежащих экспертизе по существу ) 6| ходатайство не может быть удовлетворено в связи с тем, что:

□ не представлен документ, подтверждающий уплату установленной пошлины за проведение экспертизы заявки по существу.

О пошлина уплачена ранее чем за 3 месяца до подачи ходатайства.

□ уплаченная сумма пошлины.........................................................недостаточна для проведения

экспертизы заявки по существу в отношении...........................пунктов формулы изобретения.

(уыпть ммтсспо)

Производство по данному ходатайству прекращено, однако в течение трех лет с даты подачи заявки может быть подано новое ходатайство о проведении экспертизы заявки по существу.

□ по заявке принято решение об отказе в выдаче патента по результатам формальной экспертизы

заявка отозвана □ заявка признана отозванной □ заявка считается отозванной

ходатайство считается неподанным в связи с тем, что другим лицом подано ходатайство, имеющее более раннюю дату поступления

ходатайство о проведении экспертизы заявки по существу может быть принято во внимание, если будет представлен подтвержденный организацией Связи документ о сдаче его на почту не позднее........................................................................................................................................

Ставим Вас в известность о том. что:

□ излишне уплаченная сумма пошлины........................................................... по ходатайству

заявителя ( лица, уплатившего пошлину) в установленном порядке может быть возвращена либо, если срок с даты уплаты до даты подачи такого ходатайства не превышает трех месяцев, по просьбе ходатайствующего лица засчитана в счет уплаты других пошлин.

□ данное уведомление является повторным напоминанием о необходимости представления отсутствующих документов. В случае их непредставления в установленный срок производство

по данному ходатайству о проведении экспертизы заявки по существу от..................................

будет прекращено.

Обращаем Ваше внимание на то, что соответствие размера пошлины установленному осуществляется на дату ее уплаты, поэтому в случае законодательного изменения на эту дату минимального размера оплаты труда уплачиваемая сумма должна быть пересчитана.

7

Зам.зав.отделом пищевой, сельскохозяйственной и биотехнологической промышленности

Г.А.Смирнова 240 64 07

Романова 240 64 07

ми п

"реСПУбЛИКАНСКАя ! , ¿«.А ©У.

ВЕТ8РИИАР1ШВНаЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ ДАбОРАТОРИЯ РЕСПУБЛИКА ТАТАРСТАН РЕСПУ6ДИКИ ТАТАРСТАН]

РсицубЛИКЦШжая ввтерияаряая лаборатория

Адрес: г. Казань, ул. Даурская, . Телефон 35-96--60

А п пяг: ^су/мШеМу*^

Ис:х. _________от ,, _"____19 г •

Экспертиза

______

Лаборатория сообщает, что 'при довании

¿и

при сопроводительной № от „ . "_______19 г.

получен следующий результат:

1 ереЯ нА^

¿сиергугсш ? КМ пшлр иЛЯс^Ши Рраа ШсАс ¡с [1/гА. и*

Ветврач:

'Ч I „,....... I, ,, 1 I I И II УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ

V вбГбр^^Сед^ПУБЛИКА ТАТАРСТАН

(екая ветерияаряая лаборатория

'I ||М I I I I ...................^ <^035'96""60

Кому: .

Адрес: 1 &

Vг

Исх. Л'у

от

.19 г

Экспертиза

Лаборатория сообщает, что

м

«Я» -мал

при ЬъЮ-^Ж*! ¿¿¿^¿^^следовации

см &баке.с

доставленого _19^/р. из___

из.

При сопроводительной № от получен следующий результат

Л м^СлЛ СЯМНЛегс&и*

' Ул й.йл /7 ... .

\fctfcHeAtU

19 г.

¿чеес&аг и^сие-

<

ем ¿-^сенггс

ШЩ'¿к

И4

.¿с Ц/ гА^иУ'Ц ш> 'Леш ¿М,

~Г

, нж йеняшкеги

Директор:

Ветврач:

Копия

А К I Колхоз им.Пушкина

от 10 декабря 1386 г. Агрызского района

Татарской АСС?

нижеподписавшиеся,доцент кафедры эпизоотологии КГШ Л.В.притонов, главный ветврач Агрызского района ТАСС? ?»Г,Сабирзяноз,гл.зет-зрач колхоза им.Пушкина М.I.Габдрахманоз, з присутствии заз. МТФ А.Гафурова а Н.Насыровой составили настоящий акт втом, что сего числа проведено комиссионное обследование,клинический осмотр и аллергическое исследование крупного рогатого скота на туберкулез с целью уточнения эпизоотической ситуации хозяйства по туберкулезу,

Туберкулинизации подвергнута 1930 гол. крупного рогатого скота, з т.ч. 767 - коров, 279 - нетелей, 10 - быков-производителей, 384 -молодняка разного возраста. Все поголовье скота привито противотуберкулезной вакциной БЦ1.

Впервые заболевание скота туберкулезом в хозяйстве было установлено з 1977 г. После проведения соотзетстз^-сщмх противотуберкулезных мероприятий,согласно инструкции по борьбе с туберкулезом» з 1979 г, хозяйство было оздоровлено от туберкулеза, С учетом того, что оздоро ленме фермы было достигнуто путем замены неблагополучного поголовья здоровыми животным, 55 коровы* как высокопродуктивные я не реагировавшие при проведенных туберкулнниэациях, были переведены в МТ® Ямур зино и слиты в обще© стадо. ?эагирущие .зизотные в этом отделении стали появляться в 1984 г. знзчале без подтверждения диагноза и лабораторными методами исследований /экс. .Т° 170 от 21 ноября 1984 г./. При позторных исследованиях количество реагирующих животных увеличивалось и в июне 1985 г. диагноз на туберкулез был подтвержден окончательно. С учетом латентного течения туберкулезного процесса в сентябре 1985 г. все наличное поголовье крупного рогатого скота прививали вакциной БЦЖ с целью провокации латентного туберкулезного процесса среди взрослого поголовья и создания противотуберкулезного иммунитета у молодняка. Исследование привитого поголовья скота алле| гической туберкулиновой пробой проводили согласно схемы,разработанной М.В.Харитоновым через 2,5,9,12,15,18 и 21 мес. после иммунизацш При этом наибольшее количество реагировавших было отмечено через 72 часа после введения вакцины, на БЦ1-тест,а затем на внутрикожное введение туберкулина через 2 и 5 мес. Через 9, 12 мес. реагировали единичные животные, а через 15 мес. реагирующие на туберкулин животные не были выявлены. Из числа реагировавших зараженными возбудителем туберкулеза считали тех животных, которые реагировали с разик?"*

_ р _ 343

ко:«ной складки яа 16 мм против нормы на БЦЖ - тест и через 2 и 6 месяцев на туберкултн для млекслитащях на 8 мм через 9, 12, ТС, 13 месяцев после иммунизации.

С учетом объема вьтполненых противотуберкулезных мероприятий, результатов лабораторных исследсгани? и проведенной туберкулин«зации комиссия считает, ограничительные мероприятия введенные по случаю неблагополучия хозяйства туберкулезом снять.

Ко в течение четырех лет после снятия ограничительных мероприятий за хозяйством установить стрсги'*' ветеринарный контроль, особенно за передвижением скота.

Подписи: М.З.Харитонов

Р.Г.Сабкрзянов М.Ш.Габдрз хманов А. Гафуров Н. Насыисв

344 Копия

АКТ Колхоз "Родина"

от 20 сентября 1984г. Агрызского района

Татарской АССР

Мы, нижеподписавшиеся, начальних противоэпизоотического

отряда МСХ ТАССР А.М.Сабитов, главный ветеринарный врач Агрызского района ТАССР Г.Ш.Шакиров, сотрудник Казанского ветеринарного института, к.в.н. М.В.Харитонов, зав. Кучуковским ветучастком В.А.Ма-деев, гл.ветврач колхоза "Родина" Р.М.ЭДухаметов гл.зоотехник Р.С.Абдрашитов, в присутствии председателя колхоза "Родина" А.А. ТУ хвату лли на составили настоящий акт в тем, что нами с 18 по 20 сентября т.г. была проведена комплексная комиссионная проверка, а также исследование всего поголовья крупного рогатого скота, начиная с 2-х месячного возраста на туберкулез внутрикожной и глазной аллергической пробой с целью выяснения эпизоотической ситуации хозяйства по туберкулезу.

Б ходе исследования установлено, что повторное заболевание крупного рогатого скота туберкулезом в данном хозяйстве было установлено 18 сентября 1980 г. макроскопически, при убое 13 коров и 8 телят на Н.Челнинском мясокомбинате, которые реагировали на туберкулин. Данные мясокомбината подтвердились и лабораторными исследованиями биоматериала в Агрызской ветлаборатории (экс. 311-324 от 25 октября 1980, и 325-333 от 27 октября 1980г.). Проведенными исследованиями выделенные ыикобактерии были отнесены бычьему виду.

Решением Агрызского районного Совета народных депутатов за № 183-7 от 23 сентября 1980г. на это хозяйство было наложено ограничение по туберкулезу крупного рогатого скота и одновременно был разработан и утвержден комплексный план профилактических и оздоровительных мероприятий.

Со дня установления неблагополучия по март 1983 года все поголовье крупного рогатого скота, начиная с 2-х месячного возраста систематически исследовался на туберкулез внутрикожной туберкулиновой пробой и были получены сдедухлцие результаты:

в 1980 году после 3-х кратного исследования всего поголовья на туберкулез было выявлено - 55; в 1981г. после 6-ти кратного исследования - 74; з 1982г. после 5-ти кратного исследования - 25 и в 1983 г. перед применением вакцины БЦЖ с целью провокации ту-

_ 2 - 345

беркулезного процесса - 23 головы реагирующего на туберкулин скота разного возраста.На глазное введение реагирующих не оказались.

С учетом изложенного в марте 1983г. после учета результатов проведенной туберкулинизации, нереагирующве поголовье крупного рогатого скота, б количестве 1890 голов, в т.ч. 600 коров, 80 нетелей 120 телок случного возраста и 1090 молодняка были привиты вакциной БЦЖ. При этом преследовали две цели: во-первых, создание противотуберкулезного иммунитета, во-вторых, провокацию латентно больных туберкулезом животных при аллергических исследованиях.

Визуальным осмотром спустя 72 ч. после введения вакцины у взрослого поголовья, в количестве 800 гол.,на месте введения вакцины у 5-ти животных была отмечена кожная воспалительная реакция с увеличением кожной складки на 8 и более мм против нормы. При диагностическом убое у 4-х коров в бронхиальных лимфатических узлах были обнаружены очажки характерные для туберкулеза.

В дальнейшем у части животных положительная воспалительная реакция больших размеров на введение ППД-туберкулина для млекопитающих была отмечена в разные сроки. Особенно по интенсивности и числу выявляемых животных, эти реакции отличались через 45 дней после введения БЦЖ. Утолщение кожной складки при этом составило 16 мм и более выше нормы и характеризовались повышенной болезненностью, повышением местной температуры и тестоватой консистенцией. С такими реакциями были изолированы 14 коров, при убое которых у 9(64%) туберкулез был подтвержден патологоанатомически, а у остальных лабораторными методами исследований.

Затем, все взрослое поголовье скота подвергали аллергическим исследованиям через каждые 3 мес. в течение 18 мес. с момента введения вакцины. При этих исследованиях изоляции подвергались животны* с утолщением кожной складки на 8 мм и более выше нормы, а также реакция у которых при повторных исследованиях имела тенденцию в сторону увеличения. С указанными параметрами изменений были изолированы 15 гол.

При учете и оценке результатов проведенной туберкулинизации 18-20 сентября 1984 г. из 1921 гол. крупного рогатого скота были выявлены, как реагирующие, 2 коровы с разницей кожной складки на 4 мм. Реакция при этом характеризовалась в виде твердой, безболезненной, резко ограниченной припухлости, при убое которых был уста-

_ 3 -346

ноглен дккроцелиоз пзчеки.

В хозяйстве проведен ветеринарка-санитарный ремонт помещений с последующей трехкратной дезинфекцией.

Исходя из изложенного выше комиссия считает:

1. Ограничительные мероприятия введенные по случаю неблагополучия хозяйства туберкулезом снять.

2. В течение двух лет пр.-'с.г^ть з«:-'цинацию нарождающегося молодняка вакциной БЦЖ.

3. В течение четырех лет после снятия ограничения не выводить из хозяйства крупный рогатый скот с племенной и пользовательной целью в другие хозяйства.

Подписи:

А.М.Сабитов Г.Ш.Шакиров М.В.Харитонов

A.A.Тухватудлин

B. А. Мзде ев Р.Ф.Мухаметов P.C.Абдрашитов

Копия верна: Ученый секретарь КГАВМ,доцент -

З.И.Угрюмов

347 Копия

АКТ от 31 августа 1996 г.

Мы, нижеподписавшиеся, начальник отдела пс противоэпизо-отической работе ГУВ КМ РТ Н.Е.Антанов, главный ветеринарный врач Дрожжановского райветобъединения Г.М.Исхаков, доцент кафедры эпизоотологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана М.В.Харитонов составили настоящий акт в том, что нами с 26 по 31 августа 1996 года, с участием ветврачей-эпизоотологов 14 районов Республики Татарстан в шести неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота хозяйствах ("Тан", "Чулпан", "Ирек", "Марс", "Колос", "Авангард") Дрожжановского района РТ была проведена апробация надплевральной новокаиновой блокады по В.В.Мосину, предлагаемого с целью провокации латентного туберкулезного процесса в длительно неблагополучных по туберкулезу стадах.

После проведенной новокаиновой блокады всем .животным была введена внутрикожно стандартный раствор туберкулина для млекопитающих в дозе 0,2 мл с помощью безыгольного инъектора ЕИ-7М с соблюдением правил асептики.

В результате комиссионной читки и оценки туберкулиновых реакций во всех шести хозяйствах, из 2804 исследованных животных у 133(4,7%) была отмечена положительная реакция на месте введения туберкулина с различной интенсивностью воспалительной припухлости. Анализ имеющихся ветеринарных отчетностей по этим хозяйствам показал, что после 3-х кратного аллергического исследования 14684 гол. крупного рогатого скота без новокаиновой блокады было выявлено лишь 279(1,9%) реагирующих животных.

Проведенными комиссионными диагностическими убоями из числа реагировавших на туберкулин животных, непосредственно в хозяй-

- 2 - 348

ствах, диагноз на туберкулез подтверждался и патологоанатомичес-ки. При этом туберкулезные очажки, в основном, были локализованы в оронхиальных лимфатических узлах.

На основании изложенного считаем, что надплевральная новока-иновая блокада по В.В.Мосину, проведенная перед внутрикожным введением туберкулина обуславливает усиление интенсивности местного воспалительного отека, значительно увеличивает число положительно реагирующих животных на туоеркулин, что оу.дет способствовать значительному сокращению сроков оздоровления неблагополучных стад от туберкулеза и поэтому заслуживает более широкого практического внедрения в аналогичных хозяйствах.

Подписи: Н.Л.Антонов

Г.М.Исхаков М.В.Харитонов