Вирусоподобные наноразмерные частицы - носители антигенов вирусов гриппа и краснухи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Котляров, Роман Юрьевич

• Котляров, Роман Юрьевич
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Котляров, Роман Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Вирусоподобные частицы как основа создания новых вакцин

2. Конструирование вирусоподобных частиц на основе ядерного антигена вируса 12 гепатита В

3. Перспективы создания рекомбинантных вакцин против краснухи

4. Перспективы создания противогриппозных вакцин

5. Растения как «биофабрики»

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Продукция вакцинных белков El и El2 вируса краснухи в клетках Е. coli.

2. Конструирование вирусоподобных НВс-частиц, представляющих на своей поверхности эпитопы El белка вируса краснухи и их получение в Е. coli.

3. Конструирование вирусоподобных НВс-частиц, представляющих на своей поверхности внеклеточный домен М2 белка вируса «свиного» гриппа и их получение в Е. coli.

4. Создание самореплицирующихся вирусных векторов для экспрессии целевых белков в растениях

5. Создание фитовирусных систем экспрессии вакцинных белков вирусов краснухи и гриппа в растениях. "

ОБСУЖДЕНИЕ

1. Конструирование вирусоподобных частиц на основе НВс-антигена — носителей эпитопов.

2. Оптимизация вирусных систем экспрессии рекомбинантных белков в растениях

3. Функциональные характеристики вирусоподобных НВс частиц - носителей эпитопов вирусов краснухи и гриппа.

ВЫВОДЫ

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Вирусоподобные наноразмерные частицы - носители антигенов вирусов гриппа и краснухи»

Человечество использует вакцины на протяжении многих веков. Однако в современном понимании, первая вакцина и процедура вакцинации была изобретена в конце 18 века, а термин «вакцина» появился еще век спустя. Самым первым прототипом вакцины было использование ослабленной формы возбудителя заболевания. Позднее были разработаны способы химической и физической обработки микроорганизмов, позволяющие их обезвредить, но сохранить иммуногенные свойства. Следующим этапом явилось создание белковых вакцин, то есть вакцин, использующих один или несколько белков или даже их отдельных фрагментов-эпитопов патогенного организма. Этот подход позволяет создавать безопасные вакцины, так как риск реверсии к патогенной форме сводится к нулю. Однако вследствие значительных отличий в генерации иммунного ответа против целого патогена и против отдельных белков, подобные вакцины могут вызывать гораздо менее выраженный иммунный ответ, чем в случае использования аттенуированных или инакти-вированных возбудителей.

Решением этой проблемы может являться направленное конструирование наноструктур, имитирующих патоген и содержащих отдельные белки патогена на поверхности частицы-носителя. Данный подход позволяет использовать преимущества белковых вакцин и нивелировать их недостатки, имитируя взаимодействие вируса с иммунной системой.

В качестве носителей антигенов могут быть использованы как искусственные структуры, так и объекты биологического происхождения. Способность биологических макромолекул к самосборке и самоорганизации является одной из отличительных черт живых систем и предоставляет поистине неисчерпаемые возможности для использования биомолекул в качестве «строительных» блоков «молекулярного конструктора» для направленного создания новых наноархитектур с заданными пространственными и функциональными свойствами. Одним из наиболее ярких примеров таких структур, обладающих четкой симметрией, обширными возможностями направленной модификации современными методами генной инженерии являются вирусные частицы и имеющие сходную структуру вирусоподобные частицы (ВПЧ), образуемые в результате самособорки кап-сидных белков вирусов. В отличие от вирусов, такие вирусоподобные частицы не содержат генетического материала и являются полностью безопасными. С использованием методов генетической инженерии можно получить «химерные» капсидные белки, к которым присоединен целевой антиген, в результате самосборки таких гибридных белков могут быть получены рекомбинантные ВПЧ, на поверхности которых представлен целевой антиген. Представление антигенных детерминант на поверхности ВПЧ обеспечивает их высокую иммуногенность в сочетании с высоким выходом, легкостью очистки и стабильностью при хранении. Эффективность такого подхода иллюстрируется многочисленными примерами создания ВПЧ для борьбы с такими инфекционными заболеваниями, как малярия, бешенство, вирусные гепатиты и т.д.

Рекомбинантные ВПЧ - вакцины могут быть получены в различных системах гете-рологичной экспрессии, включая бактерии, дрожжи, клетки животных и растения. Растения могут стать недорогой и эффективной «биофабрикой» для получения таких вакцин, поскольку для роста растений требуется лишь почва, вода и солнечный свет. Важными преимуществами растительных систем экспрессии являются безопасность продукта (растения и человека не имеют общих патогенов), возможность получения больших объемов биомассы и наличие у растений многих систем посттрансляционных модификаций белков, характерных для млекопитающих. Традиционные методы получения рекомбинант-ных белков в растениях предполагают проведение генетической трансформации ядерного или хлоропластного генома, однако, обычной проблемой являете я низкий выход рском-бинантного белка, обусловленная им высокая стоимость очистки, а также длительное время, необходимое для создания растений-продуцентов и ограничения их культивирования. Альтернативой являются вирусные системы транзиентной экспрессии. Амплификация целевого гена при репликации вируса-вектора в клетке растения обеспечивает высокий уровень экспрессии в течение нескольких дней.

Предметом настоящей работы является дизайн и получение рекомбинантных вирусоподобных частиц - носителей антигенов возбудителей двух социально-значимых заболеваний, - гриппа и краснухи. В качестве основы для создания рекомбинантных ВПЧ мы использовали ядерный антиген вируса гепатита В (НВс - антиген), мономеры которого самособираются в наноразмерные вирусоподобные НВс-частицы. Мы сконструировали рекомбинантные НВс-частицы, представляющие на своей поверхности эпитопы белка El вируса краснухи и М2 белка вируса гриппа, и разработали методы их получения в бактериях Escherichia coli и в растениях Nicotiana benthamiana с помощью вирусных векторов на основе вируса X картофеля. Иммунологические характеристики рекомбинантных НВс-частиц были определены в экспериментах на лабораторных животных.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Целью работы является конструирование вирусоподобных наноразмерных частиц -носителей вакцинных белков вирусов гриппа и краснухи, и разработка методов их продукции в бактериях и растениях.

При этом были поставлены следующие основные задачи:

1. Создание систем экспрессии в клетках Escherichia coli вакцинных белков вируса краснухи и рекомбинантных НВс-частиц - носителей иммунодоминантных эпитопов белка El.

2. Получение рекомбинантных НВс-частиц, несущих М2е пептид вируса гриппа, в клетках Escherichia coli.

3. Конструирование самореплицирующихся вирусных векторов для экспрессии целевых белков в растениях.

4. Создание систем экспрессии вакцинных белков вируса краснухи и гриппа в растениях Nicotiana benthamiana с помощью вирусных векторов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Котляров, Роман Юрьевич

выводы

1. Сконструированы и получены в клетках Escherichia coli рекомбинантные вирусоподобные частицы на основе НВс антигена вируса гепатита В, содержащие эпитоп белка El вируса краснухи.

2. Сконструированы и получены в клетках Escherichia coli рекомбинантные вирусоподобные частицы на основе НВс антигена вируса гепатита В, содержащие внеклеточный домен М2 белка вируса гриппа.

3. На основе генома X вируса картофеля создан вирусный вектор для продукции рекомби-нантных белков в растениях, содержащий перед целевым геном последовательность 5'-нетранслируемого района РНК 4 вируса мозаики люцерны. Введение этой последовательности в вирус-вектор позволяет повысить уровень продукции целевого белка в растениях в 3-4 раза за счет повышения эффективности трансляции содержащей целевой ген субгеномной РНК.

4. Созданы фитовирусные системы продукции в растениях белка El вируса краснухи и рекомбинантных вирусоподобных частицы на основе НВс антигена вируса гепатита В, содержащих эпитоп белка El.

5. Созданы фитовирусные системы продукции в растениях рекомбинантных вирусоподобных частиц на основе НВс антигена вируса гепатита В, содержащих внеклеточный домен М2 белка вируса гриппа.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Равин Н.В., Марданова Е.С., Котляров Р.Ю., Новиков В.К., Атабеков И.Г., Скрябин К.Г. (2008). Определение полной нуклеотидной последовательности генома нового штамма X вируса картофеля и создание на его основе вирусного вектора для продукции целевых белков в растениях. Биохимия т.73, стр. 54 — 61.

2. Марданова Е.С., Котляров Р.Ю., Равин Н.В. (2009) Повышение эффективности продукции рекомбинантных белков в растениях за счет оптимизации трансляции РНК вируса-вектора. Молекулярная биология т. 43, №3, стр. 568—571.

3. Котляров Р.Ю., Марданова Е.С. (2007) Расшифровка генома нового высокопатогенного штамма Х-вируса картофеля «Ока-2» и клонирование кДНК копии его генома. Тезисы XIV Международной Конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов 2007», т.1., стр. 14, Россия, Москва.

4. Котляров Р.Ю., Марданова Е.С. (2008) Продукция вакцинных белков вируса краснухи в растениях. Тезисы международного симпозиума «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине», стр. 76, Украина, Крым, Судак.

5. Котляров Р.Ю., Марданова Е.С. (2008) Конструирование вирусных векторов для продукции рекомбинантных белков в растениях. Тезисы «12-ой международной Пущинской школы-конференции молодых ученых», стр. 210, Россия, Пущино.

6. Котляров Р.Ю., Марданова Е.С. (2009) Конструирование рекомбинантных вирусоподобных наночастиц - носителей эпитопов вирусов краснухи и гриппа. Тезисы V съезда ВОГИС, т.2, стр. 376, Россия, Москва.

7. Kotlyarov R.Y., Mardanova E.S. (2009) Construction of recombinant virus-like nanoparticles carrying epitopes of rubella and influenza viruses. Abstracts of The 1st Workshop on Plant Molecular Biotechnology - XV Biotechnology Summer School, Gdansk, Poland, p. 61.

8. Котляров Р.Ю., Марданова Е.С. (2009) Создание систем экспрессии в растениях вакцинных белков краснухи и гриппа. Тезисы конференции «Горизонты нанобиотехноло-гии», стр. 51, Россия, Звенигород.

9. Ravin N.V., Kotlyarov R.Y., Kuprianov V.V., Mardanova E.S., Dykov M., Grudinin M.P., Kiselev O.I., Skryabin K.G. (2010) Development of plant viral expression systems for production of influenza virus vaccine proteins in plants. Abstracts of the X European congress of virology, p. 282, Cernobbio, Italy.

По результатам работы получен патент РФ на изобретение № 2390563 (заявка № 2008141402 от 21.10.2008г.):

Котляров Р.Ю., Марданова Е.С., Равин Н.В., Свешников П.Г., Скрябин К.Г. Рекомби-нантный вирусный вектор для продукции в растениях белка Е1 вируса краснухи (варианты) и система экспрессии белка Е1 вируса краснухи в клетках растения (варианты).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Котляров, Роман Юрьевич, 2010 год

1. Гендон Ю.З. (2001) Живые холодоадаптированные реассортантные гриппозные вакцины //Вопр. вирусологии, Т.З, с. 5-12.

2. Гендон Ю.З. (2002) Культуральные гриппозные вакцины // Вопр. Вирусологии, Т.6, с.4-11.

3. Гендон Ю.З. (2007) Вакцины и химиопрепараты для профилактики гриппа // Вопр. Вирусологии, Т.1, с.4-10.

4. Киселев О.И., Цыбалова Л.М., Покровский В.И. (2006) Состояние разработки вакцин против вируса гриппа H5N1 в мире и России. // Журнал микробиол. эпидемиол. имму-нобиол, № 5., С. 28-38.

5. Комарова Т.В., Скулачев М.В., Зверева A.C., Шварц А.М., Дорохов Ю.Л., Атабеков И.Г. (2006) Новый вирус-вектор для эффективной продукции целевых белков в растениях. // Биохимия, т.71(8), с. 1043-1049.

6. Муррей Р. (1969) Производство и испытание в США гриппозной вакцины, приготовленной из вируса гриппа Гонконг в 1968/1969 г. // Бюлл. ВОЗ. Грипп Гонконг, Т.41, с. 509-511.

7. Покровский В.И., Киселев О.И. (2005) Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф. // СПб., Изд-во «Росток», с. 376.

8. Покровский В.И., Киселев О.И. (2009) Пандемия 2009. Новый вирус H1N1 .// СПб.: Изд-во «Росток», с.210.

9. Равин Н.В., Киселев О.И., Скрябин К.Г. (2009) Универсальная вакцина против гриппа птиц. // Патент РФ № 2358981 от 20.06.2009г.

10. Al-Mazrou A., Scheifele D.W., Soong Т., Bjornson G. (1991) Comparison of adverse reactions to whole-virion and split-virion influenza vaccines in hospital personnel. // CMAJ, V. 145(3), P.213-218.

11. Azhakanandam K., Weissinger S.M., Nicholson J.S., Qu R. Weissinger A. K. (2007) Ampli-con-plus targeting technology (APTT) for rapid production of a highly unstable vaccine protein in tobacco plants. // Plant Mol Biol, V.63, p.393-404.

12. Bachmann M.F., Rohrer U.H., Kiindig T.M., Biirki K., Hengartner H., Zinkernagel R.M. (1993) The influence of antigen organization on B cell responsiveness. // Science, V.262(5138), p. 1448-1451.

13. Bardeletti G., Kessler N., Aymard-Henry M. (1975) Morphology, biochemical analysis and neuraminidase activity of rubella virus. // Arch Virol., V.49(2-3). p. 75-86.

14. Belshe R., Lee M.S., Walker R.E., Stoddard J., Mendelman P.M. (2004) Safety, immuno-genicity and efficacy of intranasal, live attenuated influenza vaccine. // Expert Rev. Vaccines, V.3(6), p.643-654.

15. Black R.A., Rota P.A, Gorodkova N., Klenk H.D., Kendal A.P. (1993) Antibody response to the M2 protein of influenza A virus expressed in insect cells. // J. Gen. Virol., V.74(Pt 1), p.143-146.

16. Borisova G., Borschukova O., Skrastina D., Mezule G., Dislers A., Petrovskis I., Ose V., Gusars I., Pumpens P., Grens E. (1997) Display vectors. . Hepatitis B core particle as a display moiety. // Proc Latv Acad Sei., V.51, p. 1-7.

17. Böttcher B., Tsuji N., Takahashi H., Dyson M. R., Zhao S., Crowther, R. A., and Murray K. (1998) Peptides that block hepatitis B virus assembly: Analysis by cryomicroscopy, mutagenesis and transfection. // EMBO J., V.17, p.6839-6845.

18. Burreil, C.J., MacKay, P., Greenaway, P.J., Hofschneider, P.H., Murray, K. (1979) Expression in Escherichia coli of hepatitis B virus DNA sequences cloned in plasmid pBR322. // Nature, V.279, 43^8.

19. Carrington J.C., Freed D.D. (1990). Cap-independent enhancement of translation by a plant potyvirus 5'-nontranslated region. // J. Virol., V.64, p.1590-1597.

20. Chapman S., Kavanagh T., Baulcombe D. (1992). Potato virus X as a vector for gene expression in plants. // Plant J., V.2, p. 549-557.

21. Chaye H.H, Ou D., Chong P., Gillam S. (1993) Human T- and B-cell epitopes of El glycoprotein of rubella virus. // J Clin Immunol., V. 13(2), p. 93-100.

22. Chaye H.H., Mauracher C.A., Tingle A.J., Gillam S. (1992) Cellular and humoral immune responses to rubella virus structural proteins El, E2, and C. // J Clin Microbiol., V.30(9), p. 2323-2329.

23. Chen B.J., Leser G.P., Jackson D., Lamb R.A. (2008) The influenza virus M2 protein cytoplasmic tail interacts with the Ml protein and influences virus assembly at the site of virus budding. // J. Virol., V.82(20), p. 10059-10070.

24. Chen R., Holmes E.C. (2006) Avian influenza virus exhibits rapid evolutionary dynamics. // Mol. Biol. Evol., V.23(12), p.2336-2341.

25. Claas E.C., Osterhaus A.D., van Beek R., De Jong J.C., Rimmelzwaan G.F., Senne D.A., Krauss S., Shortridge K.F., Webster R.G. (1998) Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. // Lancet., V.351(9101), p. 472-477.

26. Clarke, B.E., Newton, S.E., Carroll, A.R., Francis, M.J., Appleyard, G., Syed, A.D., High-field, P.E., Rowlands, D.J., Brown, F. 1987. Improved immunogenicity of a peptide epitope after fusion to hepatitis B core protein. //Nature 330, 381-384.

27. Clarke B.E., Newton S.E., Carroll A.R., Francis M.J., Appleyard G., Syred A.D., Highfield P.E., Rowlands D.J., Brown F. (1987) Improved immunogenicity of a peptide epitope after fusion to hepatitis B core protein. // Nature, V.330, p. 381-384.

28. Cusi M.G., Valassina M., Bianchi S., Wunner W., Valensin P.E. (1995) Evaluation of rubella virus E2 and C proteins in protection against rubella virus in a mouse model. // Vims Res., V.37(3), p. 199-208.

29. De Filette M., Fiers W., Martens W., Birkett A., Ramne A., Lowenadler B., Lycke N., Jou W.M., Saelens X. (2006) Improved design and intranasal delivery of an M2e-based human influenza A vaccine. // Vaccine., V.24(44-46), p. 6597-6601.

30. De Filette M., Martens W., Roose K., Deroo T., Vervalle F., Bentahir M., Vandekerckhove J., Fiers W., Saelens X. (2008) An influenza A vaccine based on tetrameric ectodomain of matrix protein 2. // J. Biol. Chem., V.283(17), p. 11382-11387.

31. De Filette M., Min Jou W., Birkett A., Lyons K., Schultz B., Tonkyro A., Resch S., Fiers W. (2005) Universal influenza A vaccine: optimization of M2-based constructs. // Virology, V.337(1), p. 149-161.

32. De Jong J.C., Palache A.M., Beyer W.E., Rimmelzwaan G.F., Boon A.C., Osterhaus A.D.2003) Haemagglutination-inhibiting antibody to influenza virus. // Dev. Biol. (Basel), V.115, p. 63-73.

33. Del Val M., Schlicht H.J., Volkmer H., Messerle M., Reddehase M.J., Koszinowski U.H. (1991) Protection against lethal cytomegalovirus infection by a recombinant vaccine containing a single nonameric T-cell epitope. // J Virol, V.65, p. 3641-3646.

34. Feng J., Zhang M., Mozdzanowska K., Zharikova D., Hoff H., Wunner W., Couch R.B., Gerhard W. (2006) Influenza A virus infection engenders a poor antibody response against the ectodomain of matrix protein 2. // Virol. J, V.3:102.

35. Fernandez-Fernandez M.R., Martinez-Torrecuadrada J.L., Casal J.I., Garcia J.A. (1998) Development of an antigen presentation system based on plum pox potyvirus. // FEBS Lett., V.427, p. 229-235.

36. Fiers W., De Filette M., Birkett A., Neirynck S., Min Jou W. (2004) A "universal" human influenza A vaccine. // Elsevier. Virus Research, V.103, p. 173-176.

37. FreyT.K. (1994) Molecular biology of rubella virus. //Adv Virus Res., V.44, p. 69-160.

38. Gerhard W., Mozdzanowska K., Zharikova D. (2006) Prospects for universal influenza virus vaccine. // Emerg. Infect. Dis, V.12(4), p. 569-574.

39. Gerna G., Revello M.G., Dovis M., Petruzzelli E., Achilli G., Percivalle E., Torsellini M. (1987) Synergistic neutralization of rubella virus by monoclonal antibodies to viral haemag-glutinin. // J Gen Virol., V.68-7, p. 2007-2012.

40. Gils M., Kandzia R., Marillonnet S., Klimyuk V., Gleba Y. (2005) High-yield production of authentic human growth hormone using a plant virus-based expression system. // Plant Bio-technol J., V.3, p. 613-620.

41. Gleba Y., Klimyuk V., Marillonnet S. (2005) Magnifection a new platform for expressing recombinant vaccines in plants. // Vaccine, V.23, p. 2042-2048.

42. Gleba Y., Marillonnet S., Klimyuk V.: Engineering viral expression vectors for plants: the 'full virus' and the 'deconstructed virus' strategies. // Curr Opin Plant Biol, V.7, p. 182-188.

43. Govaert T.M., Thijs C.T., Masurel N., Sprenger M.J., Dinant G.J., Knottnerus J.A. (1994) The efficacy of influenza vaccination in elderly individuals. A randomized double-blind placebo-controlled trial. // JAMA, V.272(21), p. 1661-1665.

44. Grant S.G., Jessee J., Bloom F.R. and Hanahan D. (1990) Differential plasmid rescue from transgenic mouse DNAs into Escherichia coli methylation-restriction mutants. // Proc. Natl Acad. Sci. USA, V.87, p.4645-^1649.

45. Green K.Y., Dorsett P.H. (1986) Rubella virus antigens: localization of epitopes involved in hemagglutination and neutralization by using monoclonal antibodies. // J Virol., V.57(3), p. 893-898.

46. Grene E., Mezule G., Borisova G., Pumpens P., Bentwich Z., Arnon R. (1997) Relationship between antigenicity and immunogenieity of chimeric hepatitis B virus core particles carrying HIV type 1 epitopes. // AIDS Res Hum Retroviruses, V. 13, p. 41-51.

47. Harris A., Cardone G., Winkler D. C., Heymann J. B., Brecher M., White J. M., Steven A. C. (2006) Influenza virus pleiomorphy characterized by cryoelectron tomography. // Proc Natl Acad Sci U S A, V. 103(50), p. 19123-7.

48. Heermann K.H, Goldmann U., Schwartz W., Seyffarth T., Baumgarten H., Gerlich W.H. (1984) Large surface proteins of hepatitis B virus containing the Pre-S sequence. // J. Virol., V.52, p.396-402.

49. Hildich, C.M., Rogers, L.J., Bishop, D.H.L. (1990) Physicochemical analysis of the hepatitis B core antigen produced by a baculovirus expression vector. J. Gen. Virol. 71, 2755-2759.

50. Hobman T.C., Lundstrom M.L., Mauracher C.A., Woodward L., Gillam S., Farquhar M.G. (1994) Assembly of rubella virus structural proteins into virus-like particles in transfected cells. // Virology, V.202(2), p.574-585.

51. Horzinek M., Maess J., Laufs R. (1971) Studies on the substructure of togaviruses. Analysis of equine arteritis, rubella, bovine viral diarrhea, and hog cholera viruses. // Arch Gesamte Virusforsch., V.33(3), p. 306-318.

52. Jobling S.A., Gehrke L. (1987). Enhanced translation of chimaeric messenger RNAs containing a plant viral untranslated leader sequence. // Nature 1987, V.325, p. 622-625.

53. Joelson T., Akerblom L., Oxelfelt P., Strandberg B., Tomenius K„ Morris T.J. (1997) Presentation of a foreign peptide on the surface of tomato bushy stunt virus. // J Gen Virol, V.78, p. 1213-1217.

54. Johnson J., Lin T., Lomonossoff G. (1997) Presentation of heterologous peptides on plant viruses: genetics, structure, and function. // Annu Rev Phytophathol, V.35, p. 67-86.

55. Kilbourne E.D., Johansson B.E., Grajower B. (1990) Independent and disparate evolution in nature of influenza A virus hemagglutinin and neuraminidase glycoproteins. // Proc. Natl Acad. Sci. USA, V.87(2), p. 786-790.

56. Kimberly S. R., Gregory J. P. (1995) New plasmids carrying antibiotic-resistance cassettes. // Gene, V. 165, p. 141-142.

57. Kitikoon P., Strait E.L., Thacker E.L. (2008) The antibody responses to swine influenza virus (SIV) recombinant matrix 1 (rMl), matrix 2 (M2), and hemagglutinin (HA) proteins in pigs with different SIV exposure. // Vet. Microbiol, V. 126(13), p. 51-62.

58. Klimyuk V., Marillonnet S., Knaeblein J., McCaman M., Gleba Y. (2005) Production of recombinant proteins in plants. // In Modern Biopharmaceuticals. Edited by Knaeblein J. WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, p. 893-917.

59. Kratz P.A, Böttcher B., Nassal M. (1999) Native display of complete foreign protein domains on the surface of hepatitis B virus capsides. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA Biochemistry, V.96, p. 1915-1920.

60. Lamb R.A., Choppin P.W. (1981) Identification of a second protein (M2) encoded by RNA segment 7 of influenza virus. // Virology, V.l 12(2), p. 729-737.

61. Lamb R.A., Zebedee S.L., Richardson C.D. (1985) Influenza virus M2 protein is an integral membrane protein expressed on the infected-cell surface. // Cell 1985, V.40(3), p. 627-633.

62. Larrick J.W., Thomas D.W. (2001) Producing proteins in transgenic plants and animals // Current Opinion Biotechnology, V.l2, p 411-418.

63. Lawrence S. (2004) The Biotech Drug market //Nature Biotechnology 2004, V.22(1496).

64. Liu W., Li H., Chen Y.FI. (2003) N-terminus of M2 protein could induce antibodies with inhibitory activity against influenza virus replication. // FEMS Immunol. Med. Microbiol, V.35(2), p. 141-146.

65. Lombard M., Pastoret P.P., Moulin A.M. (2007) A brief history of vaccines and vaccination // Rev Sei Tech., V.26(l), p. 29-48.

66. Lozzi L., Rustici M., Corti M., Cusi M.G., Valensin P.E., Bracci L., Santucci A., Soldani P., Spreafico A., Neri P. (1990) Structure of rubella El glycoprotein epitopes established by multiple peptide synthesis. // Arch Virol., V.l 10(3-4), p. 271-276.

67. MacDiarmid R. (2005) RNA silencing in productive virus infections. // Annu. Rev. Phytopa-thol., V.43, p. 523-544.

68. Mao C., Solis D.J., Reiss B.D., Kottmann S.T., Sweeney R.Y., Hayhurst A., Georgiou G., Iverson B, Belcher A.M. (2004) Virus-based toolkit for the directed synthesis of magnetic and semiconducting nanowires. // Science, V.303, p.213-217.

69. Marillonnet S., Thoeringer C., Kandzia R., Klimyuk V., Gleba Y. (2005) Systemic Agrobac-terium tumefaciens-mediated transfection of viral replicons for efficient transient expression in plants. // Nat Biotechnol, V.23, p. 718-723.

70. McCown M.F., Pekosz A. (2006) Distinct domains of the influenza a virus M2 protein cytoplasmic tail mediate binding to the Ml protein and facilitate infectious virus production. 11. Virol, V.80(16), p. 8178-8189.

71. Mechtcheriakova I.A., Eldarov M.A., Nicholson L., Shanks M., Skryabin K.G., Lomonossoff G.P. (2006) The use of viral vectors to produce hepatitis B virus core particles in plants. // J Virol Methods., V. 131 (1), p. 10-15.

72. Mitchell L.A., Decarie D., Tingle A.J., Zrein M., Lacroix M. (1993) Identification of immunoreactive regions of rubella virus El and E2 envelope proteins by using synthetic peptides. // Virus Res., V.29(l), p. 33-57.

73. MIV Study Group. (2005) The macro-epidemiology of influenza vaccination in 56 countries, 1997-2003. // Vaccine, V.23(44), p. 5133-5143.

74. Murray K., Shiau A.L. (1999) The core antigen of hepatitis B virus as a carrier for immunogenic peptides. // Biol Chem., V.380(3), p. 277-83.

75. Nandi S., Yalda D., Lu S., Nikolov Z., Misaki R., Fujiyama K., Huang N. (2005) Process development and economic evaluation of recombinant human lactoferrin expressed in rice grain. // Transgenic Res., V.14(3), p. 237-249.

76. Nates S.V., Mersich S.E., Damonte E.B., Zapata M.T. (1989) Comparison of immune response to rubella virus proteins in early and late natural infections. // Microbiologica, V.12, p. 335-338.

77. Natilla A., Hammond R.W., Nemchinov L.G. (2006) Epitope presentation system based on cucumber mosaic virus coat protein expressed from a potato virus X-based vector. // Arch Virol, V. 151(7), p. 1373-1386.

78. Natilla A., Piazzolla G., Nuzzaci M., Saldarelli P., Tortorella C., Antonaci S., Piazzolla P.2004) Cucumber mosaic virus as a carrier of a hepatitis C virus-derived epitope. // Arch Virol, V. 149, p. 137-154.

79. Nayak D.P., Balogun R.A., Yamada H., Zhou Z.H., Barman S. (2009) Influenza virus morphogenesis and budding. //Virus Res., V.143(2), p.147-161.

80. Neirynck S., Deroo T., Saelens X., Vanlandschoot P., Jou W.M., Fiers W. (1999) A universal influenza A vaccine based on the extracellular domain of the M2 protein. // Nat Med, V.5, p. 1157-1163.

81. Nemchinov L.G., Liang T.J., Rifaat MM., Mazyad H.M., Hadidi A., Keith J.M. (2000) Development of a plantderived subunit vaccine candidate against hepatitis C virus. // Arch Virol, V.145, p. 2557-2573.

82. Newcomb L.L., Kuo R.L., Ye Q., Jiang Y., Tao Y.J., Krug R.M. (2009) Interaction of the influenza a virus nucleocapsid protein with the viral RNA polymerase potentiates unprimed viral RNA replication. // J Virol., V.83(l), p. 29-36.

83. Newman M„ Suk F.M., Cajimat M., Chua P.K., Shih C. (2003) Stability and Morphology Comparisons of Self-Assembled Virus-Like Particles from Wild-Type and Mutant Human Hepatitis B Virus Capsid Proteins. // Journal Of Virology, V.77(24), p. 12950-12960.

84. Nicholas B.L., Brennan F.R., Martinez-Torrecuadrada J.L., Casal J.I., Hamilton W.D., Wakelin D. (2002) Characterization of the immune response to canine parvovirus induced by vaccination with chimaeric plant viruses. // Vaccine, V.20, p. 2727—2734.

85. Nicholson K.G., Wood J.M., Zambon M. (2003) Influenza // Lancet., V.362, p. 17331745.

86. Oker-Blom C., Kalkkinen N., Kaariainen L., Pettersson R.F. (1983) Rubella virus contains one capsid protein and three envelope glycoproteins, El, E2a, and E2b. // J Virol., V.46(3), p.964-973.

87. Perrenoud G., Messerli F., Thierry A.C., Beltraminelli N., Cousin P., Fasel N., Vallet V., Demotz S., Duchosal M.A., Moulon C. (2004) A recombinant rubella virus El glycoprotein as a rubella vaccine candidate. // Vaccine, V.23, p. 480-488.

88. Pinto L.H., Holsinger L.J., Lamb R.A. (1992) Influenza virus M2 protein has ion channel activity. // Cell., V.69(3), p. 517-528.

89. Plotkin J.B., Dushoff J. (2003) Codon bias and frequency-dependent selection on the hemagglutinin epitopes of influenza A virus. // Proc. Natl Acad. Sci. USA, V. 100(12), p. 71527157.

90. Porta C., Spall V.E., Loveland J., Johnson J.E., Barker P.J. (1994) Development of cow-pea mosaic virus as a highyielding system for the presentation of foreign peptides. // Virology, V.202, p. 949-955.

91. Pumpens P., Grens E. (2001) HBV core particles as a carrier for B cell/T cell epitopes. // Intervirology, V.44, p. 98-114.

92. Rudenko L.G., Lonskaya N.I, Klimov A.I., Vasilieva R.I., Ramirez A. (1996) Clinical and epidemiological evaluation of a live, cold-adapted influenza vaccine for 3-14-year-olds. //Bull. WHO, V.74(l), p. 77-74.

93. Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. (1989) Molecular cloning: a laboratory manual. Second edition// Cold Spring Harbor Laboratory Press New York USA 1989.

94. Samji T. (2009) Influenza A: understanding the viral life cycle. // Yale J Biol Med., V.82(4), p. 153-159.

95. Santi L„ Giritch A., Roy C.J., Marillonnet S., Klimyuk V., Gleba Y., Webb R., Arntzen

96. C.J., Mason H.S. (2006) Protection conferred by recombinant Yersinia pestis antigens produced by a rapid and highly scalable plant expression system. // Proc Natl Acad Sci USA, V.103, p. 861-866.

97. Schnell J.R., Chou J.J. (2008) Structure and mechanism of the M2 proton channel of influenza A virus. // Nature, V.451(7178), p. 591-595.

98. Schodel F., Milich D.R., Will H. (1990) Hepatitis B virus nucleocapsid/pre-S2 fusion proteins expressed in attenuated Salmonella for oral vaccination. // J Immunol, V.145, p. 4317-4321.

99. Schodel F., Moriarty A.M., Peterson D.L., Zheng J.A., Hughes J.L., Will Ii., Leturcq

100. D.J., McGee J.S., Milich D.R. (1992) The position of heterologous epitopes inserted in hepatitis B virus core particles determines their immunogenicity. // J Virol, V.66, p. 106-114.

101. Schodel F, Wirtz R, Peterson D, Hughes J, Warren R, Sadoff J, Milich D. (1994) Immunity to malaria elicited by hybrid hepatitis B virus core particles carrying circumsporozoiteprotein epitopes. // J Exp Med, V.180, p. 1037-1046.

102. Schotsaert M, De Filette M, Fiers W, Saelens X. (2009) Universal M2 ectodomain-based influenza A vaccines: preclinical and clinical developments. // Expert Rev Vaccines. V.8(4), p. 499-508.

103. Seppanen H., Huhtala M.L., Vaheri A., Summers M.D., Oker-Blom C. (1991) Diagnostic potential of baculovirus-expressed rubella virus envelope proteins. // J. Clin. Microbiol., V.29(9), p. 1877-1882.

104. Shivprasad S., Pogue G.P., Lewandowski D.J., Hidalgo J., Donson J., Grill L.K., Dawson W.O. (1999). Heterologous sequences greatly affect foreign gene expression in tobacco mosaic virus-based vectors. // Virology, V.255, p. 312-323.

105. Sleat D.E., Gallie D.R., Jefferson R.A., Bevan M.W., Turner P.C., Wilson T.M. (1987). Characterisation of the 5-leader sequence of tobacco mosaic virus RNA as a general enhancer of translation in vitro. // Gene., V.60, p. 217-225.

106. Slepushkin V.A., Katz J.M., Black R.A., Gamble W.C., Rota P.A., Cox N.J. (1995) Protection of mice against influenza A virus challenge by vaccination with baculovirus-expressed M2 protein. // Vaccine, V.13(15), p. 1399-1402.

107. Stahl S.J., Murray K. (1989) Immunogenicity of peptide fusions to hepatitis B virus core antigen. // Proc Natl Acad Sci USA, V.86, p. 6283-6287.

108. Sullivan S.J., Jacobson R.M., Dowdle W.R., Poland G.A. (2010) 2009 H1N1 Influenza. // Mayo Clin Proc, V.85(l), p. 64-76.

109. Sylvan S.P., Hellstrom U.B., Flehmig B. (1987) Characterization of cell mediated immune responses to the hepatitis B core protein in man. // Clinical and Experimental Immunology, V.68, p.233-241.

110. Tarar M.R., Emery V.C., Harrison T.J. (1996) Expression of a human cytomegalovirus gp58 antigenic domain fused to the hepatitis B virus nucleocapsid protein. // FEMS Immunol Med Microbiol, V.16, p. 183-192.

111. Terry G.M., Ho-Terry L., Londesborough P., Rees K.R. (1988) Localization of the rubella El epitopes. // Arch Virol., V.98(3-4), p. 189-197.

112. Touze A., Enogat N., Buisson Y., Coursaget P. (1999) Baculovirus expression of chimeric hepatitis B virus core particles with hepatitis E virus epitopes and their use in a hepatitis E immunoassay. // J Clin Microbiol, V.37, p. 438-441.

113. Treanor J.J., Tierney E.L., Zebedee S.L., Lamb R.A., Murphy B.R. (1990) Passively transferred monoclonal antibody to the M2 protein inhibits influenza A virus replication in mice. // J. Virol, V.64(3), p. 1375-1377.

114. Trudel M., Nadon F., Séguin C., Amarouch A., Payment P., Gillam S. (1985) El glycoprotein of rubella virus carries an epitope that binds a neutralizing antibody. // J Virol Methods. V. 12(3-4), p.243-250.

115. Tsuda, S., Yoshioka, K., Tanaka, T., Iwata, A., Yoshikawa, A., Watanabe, Y., Okada, Y., 1998. Application of the human hepatitis B core antigen from transgenic tobacco plants for serological diagnosis. // Vox Sang. 74, 148-155.

116. Turpen T.H., Reini S.J., Charoenvit Y., Hoffrnan S.L., Fallarme V., Grill L.K. (1995) Malarial epitopes expressed on the surface of recombinant tobacco mosaic virus. // Biotechnology, V. 13, p. 53-57.

117. Varsani A., Williamson A.L., Stewart D., Rybicki E.P. (2006) Transient expression of Human papillomavirus type 16 LI protein in Nicotiana benthamiana using an infectious to-bamovirus vector. // Virus Res, V.120, p. 91-96.

118. Wanli Liu., Hua Li., Ying-Hua Chen. (2003) N-terminus of M2 protein could induce antibodies with inhibitory activity against influenza virus replication. // FEMS Immunology and Medical Microbiology, V.35, p. 141-146.

119. Watelet B., Quibriac M., Rolland D., Gervasi G., Gauthier M., Jolivet M., Letourneur O. (2002) Characterization and diagnostic potential of hepatitis B virus nucleocapsid expressed in E. coli and P. pastoris. // J Virol Methods, V.99(l-2), p. 99-114

120. Waxham M.N., Wolinsky J.S. (1985A) A model of the structural organization of rubella virions. // Rev Infect Dis., V.7-1, p. 133-139.

121. Waxham M.N., Wolinsky J.S. (1985B) Detailed immunologic analysis of the structural polypeptides of rubella virus using monoclonal antibodies. // Virology., V.143(l), p. 153165.

122. Webster R.G. (1998) Influenza: an emerging disease. // Emerg Infect Dis., V.4(3), p. 436-441.

123. Werner S., Marillonnet S., Hause G., Klimyuk V., Gleba Y. (2006) Immunoabsorbent nanoparticles based on a tobamovirus displaying protein. // A. Proc Natl Acad Sci USA, V.103,p. 17678-17683.

124. Wingfield P.T., Stahl S.J., Williams R.W., Steven A.C. (1995) Hepatitis core antigen produced in Escherichia coli: subunit composition, conformational analysis, and in vitro cap-sid assembly. // Biochemistry, V.34(15), p. 4919-4932.

125. Wolinsky J.S., Sukholutsky E., Moore W.T., Lovett A., McCarthy M., Adame B. (1993) An antibody- and synthetic peptide-defmed rubella virus El glycoprotein neutralization domain. // J Virol., V.67(2), p. 961-968.

126. Wynne S.A., Crowther R.A., Leslie A.G. (1999) The crystal structure of the human hepatitis B virus capsid. // Mol Cell., V.3(6), p. 771-780.

127. Wu F., Huang J.H., Yuan X.Y., Huang W.S., Chen Y.H. (2007) Characterization of immunity induced by M2e of influenza virus. // Vaccine, V.25(52), p. 8868-8873.

128. Yon J., Rud E., Corcoran T., Kent K., Rowlands D., Clarke B. (1992) Stimulation of specific immune responses to simian immunodeficiency virus using chimeric hepatitis B core antigen particles. // J Gen Virol, V.73, p. 2569-2575.

129. Zakis V., Skrastina D., Borisova G., Kuranova I. (1992) Immunodominance of T-cell epitopes on foreign sequences of the hepatitis B virus nucleocapsid fusion proteins // in Brown

130. F., Chanock R.M., Ginsberg H.S., Lerner R.A. (eds): Vaccines 92. Cold Spring Harbor, Cold Spring Harbor Laboratory Press, p, 341-347.

131. Zebedee S.L., Lamb R.A. (1988) Influenza A virus M2 protein: monoclonal antibody restriction of virus growth and detection of M2 in virions. // J. Virol, V.62(8), p. 2762-2772.

132. Zhao Y., Hammond R. W. (2005) Development of a candidate vaccine for newcastle disease virus by epitope display in the cucumber mosaic virus capsid protein. //Biotechnol Lett, V.27, p. 375-382.

133. Zharikova D., Mozdzanowska K., Feng J., Zhang M, Gerhard W. (2005) Influenza type A virus escape mutants emerge in vivo in the presence of antibodies to the ectodomain of matrix protein 2. // J. Virol, V.79(l 1), p. 6644-6654.

134. Zheng D.P., Frey T.K., Icenogle J., Katow S., Abernathy E.S., Song K.J., Xu W.B., Ya-rulin V., Desjatskova R.G., Aboudy Y., Enders G., Croxson M. (2003) Global distribution of rubella virus genotypes. // Emerg Infect Dis., V.9(12), p. 1523-1530.

135. Zheng J., Schôdel F., Peterson D.L. (1992) The structure of hepadnaviral core antigens. Identification of free thiols and determination of the disulfide bonding pattern. // J Biol Chem., V.267(13),:9422-9.