Разработка рациональных подходов к внутриполостной ультразвуковой химиотерапии на модели рака яичников тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Николаев, Андрей Леонидович

• Николаев, Андрей Леонидович
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Николаев, Андрей Леонидович

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Применение ультразвука в клинической медицине.

1.2. Физико-химические эффекты воздействия УЗ на биологические структуры

1.3. Биологические (тканевые) эффекты воздействия УЗНЧ.

1.4. Применение УЗ в онкологии.

1.5. Современные подходы к лечению распространенных форм рака яичников.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Источник акустических колебаний.

2.2 Изучение действия УЗНЧ на опухолевые клетки в экспериментах in vitro.

2.2.1 Объект исследования в экспериментах in vitro.

2.2.2. Концентрации химиотерапевтических препаратов.

2.2.3. Оценка эффективности различных воздействий на опухолевые клетки в экспериментах in vitro.

2.3 Исследование влияния УЗНЧ в экспериментах in vivo.

2.3.1. Объект исследования в экспериментах in vivo.

2.3.2 Техника выполнения подкапсульного теста.

2.3.3 УЗНЧ обработка в экспериментах in vivo.

2.3.4 Оценка чувствительности опухолей к химиотерапии и УЗ воздействию в подкапсулъном тесте.

2.4 Клинический материал.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Исследование влияния УЗНЧ в различных режимах на метаболизм опухолевых клеток человека в условиях in vitro.

3.1.1. Влияние УЗНЧ в кавитационном режиме (амплитуда колебаний 35,5 ± 5,0 мкм) на окислительно-восстановительную активность клеток перевивных опухолевых линий.

3.1.2. Влияние УЗНЧ в режиме кавитации (амплитуда колебаний 35,5 + 5,0 мкм) на синтез ДНК в клетках перевивных опухолевых линий.

3.1.3. Влияние УЗНЧ в кавитационном режиме (амплитуда колебаний 12,0 ±2,0 мкм) на окислительно-восстановительную активность клеток перевивных опухолевых линий.

3.1.4. Действие УЗНЧ в режиме субкавитации на окислительно-восстановительную активность клеток перевивных опухолевых линий.

3.1.5. Влияние УЗНЧ в режиме докавитации на окислительно-восстановительную активность клеток MCF-7.

3.1.6. Действие УЗНЧ в режиме субкавитации на окислительно-восстановительную активность клеток РЯ человека.

3.2. Оценка величины механических напряжений в клеточной мембране.

3.3. Выявление оптимальных условий проведения экспериментов по изучению УЗНЧ в качестве модулятора эффективности химиопрепаратов.

3.3.1. Исследование модифицирующего влияния УЗНЧ на эффективность цитостатиков в отношении клеток перевивной опухолевой линии яичников человека SKOV-3.

3.3.2. Исследование химиомодифицирующего эффекта УЗНЧ на модели клеток рака яичников человека.

3.4. Разработка метода УЗ химиотерапии in vivo на моделях лабораторных животных.

3.5. Клинические испытания переносимости интраоперационной ультразвуковой химиотерапии.

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка рациональных подходов к внутриполостной ультразвуковой химиотерапии на модели рака яичников»

Проблема лечения больных с диссеминацией опухолевого процесса в брюшной или плевральной полостях далека от разрешения. Это касается больных раком яичников, органов желудочно-кишечного тракта, мезотелиомой плевры и других. Наилучших результатов лечения удаётся достичь при сочетании операции с длительной агрессивной адьювантной химиотерапией, однако следует отметить, что стойкий эффект от адьювантной химиотерапии наблюдается только у небольшой части больных. Причинами этого являются как наличие у ряда больных первичной, так и развитие (в процессе комплексного лечения распространённых форм новообразований) вторичной химиорезистентности [39,40,61].

Эти обстоятельства являются основанием для разработки подходов к повышению эффективности консервативной терапии. Сюда можно отнести разработку новых классов химиопрепаратов с иными механизмами действия, осуществляются и попытки улучшения результатов лечения сочетанием иммунотерапии и химиотерапии, однако этот подход скорее пока направлен на коррекцию нарушений гомеостаза как исходно имеющихся, так и возникающих в результате химиотерапии [12,13,16,72,80].

Особое внимание в аспекте повышения эффективности хорошо зарекомендовавших себя в клинике цитостатиков уделяется способам повышения внутриклеточной их концентрации. Теоретически этот подход обоснован, так как в многочисленных работах in vitro путем анализа кривых доза-эффект показано, что при терапевтически эквивалентных дозах (ТЭД) не достигается максимально возможный эффект. Это, в частности, явилось обоснованием для эскалации доз цитостатиков (высокодозная химиотерапия), что требует дорогостоящей поддержки гемопоэза. Другой возможностью является преодоление множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток (как первичной, так и приобретенной) — направление, активно развивающееся в последнее 10-летие. Определенные надежды в этом плане связаны с локорегионарной химиотерапией, в частности, с внутрибрюшинным введением цитостатиков в виде полимерлекарственных комплексов. Данный подход направлен на создание в зоне опухоли в течение длительного времени сравнительно высокой концентрации цитостатиков и имеет определенные преимущества перед традиционной химиотерапией [35]. Дальнейший поиск подходов, во-первых, к повышению эффективности химиотерапии, а во-вторых, к усилению и усовершенствованию непосредственного воздействия на опухолевые структуры является, таким образом, актуальным и сейчас.

Одним из возможных вариантов решения этой задачи может являться сочетание химиотерапии с физическими факторами воздействия на опухоль, а именно, ультразвуком низкой частоты. Выбор обусловлен прежде всего тем, что ультразвук различных частотных диапазонов уже сегодня широко ♦ используется в медицине, причем спектр его эффектов чрезвычайно широк: от деструкции до стимуляции биологических процессов в тканях. Так, достаточно широко используется в последнее время ультразвуковые колебания в онкохирургии, при этом достигается прецизионное рассечение тканей, гемостаз капиллярного русла, абластика в операционном поле [19,27,93,102,103, 111].

В отечественной и зарубежной литературе достаточно широко освещены результаты использования ультразвуковых колебаний низкой частоты в сочетании с антисептиками и антибиотиками, стимулирующими препаратами в профилактике и лечении гнойной хирургической инфекции, длительно незаживающих ран, где показана высокая эффективность их одновременного применения за счёт активизации биологических процессов в тканях [30,36,88,111].

В экспериментальных условиях на клетках показано цитотоксическое действие ультразвуковых колебаний низкой частоты, которое зависит от параметров ультразвуковой волны, вязкости среды, степени насыщенности жидкостью тканей [9,71, 87].

В отдельных сообщениях есть указания и на то, что воздействие одного ультразвука в определенном частотном диапазоне, интенсивности, времени воздействия, не приводя к прямому разрушению раковых клеток, повышает эффективность противоопухолевых препаратов [19,67,83,102].

Привлекательность УЗНЧ в качестве модулятора действия цитостатиков обусловлена как разработанными теоретическими основами его использования, так и наличием ряда экспериментальных и клинических данных. Так, показан эффект увеличения проницаемости биологических мембран под влиянием УЗНЧ. Ответственными за этот эффект являются кавитация и акустические микропотоки в жидкой среде. Поэтому УЗ воздействие для достижения модулирующего эффекта, вероятно, должно оказываться не контактно, а через слой жидкости определенной толщины [1].

Теоретические основы УЗ воздействия свидетельствуют о том, что повышение проницаемости биологических мембран должно сохраняться некоторое время (что необходимо для достижения в клетках эффективных концентраций цитостатиков). Аргументом в пользу испытания УЗ в качестве модулятора для цитостатиков является и то, что УЗ воздействие можно регулировать (усиливать или ослаблять), изменяя величины каждого из основных факторов УЗ поля (мощность источника, время воздействия, акустические свойства промежуточной проводящей среды).

Таким образом, к настоящему моменту в литературе описаны разнообразные биологические эффекты ультразвука разной частоты, интенсивности и продолжительности действия [23,88,101]. В то же время следует отметить, что разрозненность исследований является причиной того, что использование ультразвука в медицине ограничено несколькими областями: ультразвуковой скальпель, стимулирующее общебиологическое действие, антисептическое действие. Имеющиеся в литературе указания на противоопухолевый эффект ультразвука низкой частоты, а также его модифицирующее воздействие на эффективность противоопухолевой терапии единичны и в настоящее время в онкологии с этими целями ультразвук пока не используется.

Поэтому тема работы - исследование возможностей использования ультразвука низкой частоты для усиления эффективности противоопухолевых препаратов на модели рака яичников, актуальна.

Цель исследования

Экспериментальная разработка и клиническая апробация метода внутриполостной ультразвуковой химиотерапии при раке яичников.

Задачи исследования

1. Изучить in vitro влияние воздействия ультразвука на процессы жизнедеятельности (окислительную активность и синтез ДНК) опухолевых клеток первичных и перевивных культур человека.

2. Исследовать возможности модулирования ультразвуком цитостатической активности химиопрепаратов in vitro на перевивных и первичных культурах опухолевых клеток человека.

3. Разработать модель роста в брюшной полости мышей первичных опухолей человека и перевивных опухолей мышей.

4. Исследовать влияние разных режимов ультразвуковой обработки на параметры роста перевивных опухолей мышей и рака яичников человека in vivo.

5. Исследовать влияние УЗНЧ на цитостатическую активность химиопрепаратов in vivo у животных - опухоленосителей.

6. Изучить переносимость интраоперационной ультразвуковой обработки брюшной полости у больных с доброкачественными и злокачественными опухолями женской половой сферы.

7. Оценить переносимость интраоперационной ультразвуковой химиотерапии у больных раком яичников III- IV стадий.

Научная новизна

Установлено, что навигационный режим (амплитуда 35,0±5,0 мкм, 12,0±2,0мкм) УЗНЧ вызывает гибель опухолевых клеток in vitro (цитотоксический эффект), при этом доля погибших клеток пропорциональна времени озвучивания. Докавитационный режим УЗНЧ (2,0±0,5 мкм) и субкавитационный режим (6,0±1,0 мкм) оказывают in vitro на опухолевые клетки принципиально разные эффекты при разной длительности озвучивания: от незначительной стимуляции пролиферации, окислительных процессов и синтеза ДНК- до гибели опухолевых клеток.

В экспериментах in vitro и in vivo при субкавитационном режиме УЗНЧ вызывает усиление цитостатического эффекта цисплатина, причем в выбранном режиме цитостатический эффект сочетания УЗНЧ с половиной терапевтически эквивалентной дозы цисплатина приблизительно равен эффекту целой терапевтически эквивалентной дозы цисплатина.

Практическая значимость

Показано в экспериментах in vitro и in vivo, что УЗНЧ в докавитационном режиме может стимулировать процессы жизнедеятельности и пролиферацию опухолевых клеток, что необходимо учитывать при назначении физиотерапевтических процедур с использованием УЗНЧ (интраоперационная санация полостей, стимуляция регенерационных процессов при обработке операционных ран).

В экспериментальных исследованиях показано, что интраоперационная ультразвуковая обработка брюшной полости при наличии в ней опухолевых структур с последующим введением химиопрепаратов позволяет увеличить цитостатический индекс примерно вдвое.

Эти данные свидетельствуют о перспективности интраоперационной УЗ химиотерапии.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Николаев, Андрей Леонидович

выводы

1. Установлено, что УЗНЧ ( частота 26,5 кГц) в кавитационном режиме (амплитуды колебаний 35,0±5,0 мкм и 12,0±2,0мкм) in vitro вызывает быструю (в течении 1 часа) гибель опухолевых клеток первичных культур рака яичников и перевивных (MCF-7, SKOV-3) линий; субкавитационный режим (амплитуда <5,0±1,0мкм) индуцирует репродуктивную гибель опухолевых клеток, которая нарастает с продолжительностью озвучивания; докавитационный режим (амплитуда 2,0±0,5мкм) незначительно стимулирует процессы жизнедеятельности опухолевых клеток.

2. Ультразвуковая обработка опухолевых клеток РЯ (первичные и перевивные культуры) in vitro (субкавитационный режим - амплитуда 6,0±1,0мкм) повышает цитостатическую эффективность химиопрепаратов (платидиама, Тио-ТЭФ, 5-ФУ, этопозида, фарморубицина, карбоплатина и таксотера), что выражается в достоверном уменьшении их значения 1С50.

3. Показано, что УЗНЧ в докавитационном режме (амплитуда 2,0±0,5мкм, время обработки 15-30 сек) стимулирует рост Са-755 у мышей; субкавитационный режим (амплитуда 6,0±1,0мкм, время обработки 90-120 сек) вызывает торможение роста этой опухоли.

4. Обработка УЗНЧ (амплитуда 6,0±1,0 мкм, время обработки 120 сек) брюшной полости иммунодепрессированных мышей с трансплантированным РЯ человека под капсулу почки, повышает цитостатическую активность платидиама: эффект сочетания УЗНЧ с 0,5 МПД Цп близок к таковому для

1.0 МПД этого препарата.

5. Показана хорошая переносимость интраоперационной обработки УЗНЧ брюшной полости онкогинекологических больных (с начальными стадиями процесса и доброкачественными опухолями) и интраоперационной ультразвуковой химиотерапии (карбоплатином) больных диссеминированным раком яичников (по гемодинамическим показателям, течению послеоперационного периода и состоянию брюшины по гистологическим препаратам).

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Николаев, Андрей Леонидович, 2004 год

1. Акопян В.Б., Физические основы ультразвуковой терапии. Материалы I Евразийского Конгресса. Медицинская Физика. Часть IX. Медицинская акустика. N1. стр.9. 2001.

2. Андронова Н.В., Калишьян М.С., Николаев А.Л. и др. Комбинированная терапия злокачественных опухолей с использованием ультразвукового воздействия ( экспериментальное исследование) III Съезд онкологов и радиологов СНГ. Минск, 25-28 мая 2004.

3. Бильданова Л.А. Оценка индивидуальных реакций на химиотерапию не мелкоклеточного рака легкого с помощью подкапсульного теста. Москва. Диссерт. канд. мед. наук. 1993

4. Верморкен Я., Эпителиальный рак яичников: состояние проблемы. Материалы второй ежегодной конференции «Современные тенденции развития лекарственной терапии опухолей». М., 1998, с.85-88.

5. Винокуров В.JI. Лучевая терапия у больных раком яичников. Практическая онкология, 2000, №4, с.38-41.

6. Воронина Л.А. Роль лучевой терапии в комплексном лечении злокачественных опухолей яичников. Автореферат дисс. к.м.н., М.1998-18 с.

7. Гаврилова Л.Р., Сарвазян А.П. Применение ультразвука в медицине. Физические основы (под редакцией К.Хилла). Москва «Мир» 1989

8. Горбунова В.А., Новые платиновые производные. В кн. "Новые цитостатики в лечении злокачественных опухолей", М., 1998, с.9-24

9. Горбунова В.А.,Современные возможности лекарственной терапии рака яичников // Современные эксперементальные и клинические подходы к диагностике и рациональному лечению рака яичников, М.,2001.- С.92-115.

10. Горшкова В.М., Квашнин С.Е., Нестеров А.В. Система для чрезкожного введения лекарственных веществ. Российская научно-техническая конференция "Медико-технические технологии на страже здоровья" Сборник докладов. Москва, стр. 40-41.2000.

11. Долматова O.K. Аутогемохимиотерапия далеко зашедшего рака яичников. Автореферат дисс. канд. мед. наук. Ростов-на-Дону. 1995

12. Жордания К.И., Некоторые аспекты хирургического лечения рака яичников; Практическая онкология, 2000, №4, с. 19-24.

13. Злокачественные новообразования в России в 2000 году (Заболеваемость и смертность). Под ред. акад. В.И. Чиссова, проф. В .В.Старинского, М., 2002,264 с.

14. Кабисов Р.К. Ультразвуковые технологии в онкологии. Дисс. доктора мед.наук. Москва. 2000г.

15. Китаев А.В., Петров В.П., Зуев В.К. и др. Опыт применения интраоперационной гипертермической химиотерапии в лечении больных колоректальным и овариальным раком. Вестник Московского Онкологического Общества, N 2, стр. 6, 2000.

16. Комаров Ф.И., Насанова В.А., Гогин Е.Е. Диагностика и лечение внутренних болезней. Руководство для врачей. В Зт. М.: Медицина, 1991.

17. Культура животных клеток. Методические рекомендации под редакцией Фрешни Р., Москва, "Мир", стр. 256-270,1989.

18. Куриляк О.А. Микротетрозолиевый тест в прогнозировании химиочувствительности карцином яичников человека. Дисс. канд. биологических наук. М., стр.166, 1993.

19. Мастихин И.В., Николин В.П., Тесленко B.C., Зеленцов E.JI. и др. Повышение чувствительности опухолевых клеток к циклофосфану в результате ударно-волнового воздействия. ДАН. Том 3-42,2. стр.262-264. 1995.

20. Меняев Ю.А. Разработка фотоультразвуковой биотехнической системы для обработки раневой инфекции. Автореферат дисс. к.т.н., Москва, 2004.

21. Михина З.П. Лучевая терапия в комплексном лечении эпителиальных опухолей яичников. Сборник статей «Современные экспериментальные и клинические подходы к диагностике и рациональному лечению рака яичников» под ред. В.А. Горбуновой. М., 2001, с. 145-163.

22. Николаев А.Л., Раевский П.М. Сонодинамическая терапия злокачественных опухолей.

23. Николаев Г.А., Лощилов В.И. Ультразвуковая технология в хирургии. -М: Медицина, 1980.31 .Носов Д.А. Ингибиторы рецептора эпидермального фактора роста. Материалы V ежегодной Российской онкологической конференции, М., 2001, стр. 48-51.

24. Павлова Т.Д. Рак яичников. Международный медицинский журнал. 1997, 3.№3, стр. 61-65

25. Птушкин В.В. Трансплантация костного мозга в современной химиотерапии злокачественных новообразований. Русский Медицинский Журнал, 2001, т.9, №22, стр.984-988.

26. Руденко О.В., Сарвазян А.П. Нелинейная акустика и биомедицинские приложения. Биомедицинская радиоэлектроника. ТомЗ. стр.6-19. 2000.

27. Русаков И.Г. Разработка, экспериментальное изучение и клиническая апробация полимер лекарственных комплексов в онкологии. Автореф. дисс. док. мед. наук- М.,1989.

28. Стенина М.Б. Химиотерапия первой линии при раке яичников: стандарты и нерешенные вопросы. Практическая онкология. №4. 2000, стр.25-31.

29. Титова В.А., Ашрафьян JI.A., Жданов Г.П., Горбунова В.А. и др. Автоматизированная сочетанная лучевая терапия в комплексном лечении распространенного рака матки и яичников: Методические рекоменд.-М., 1996, с.1-14.

30. Тюляндин С.А. Первые результаты клинического применения ингибиторов передачи внутриклеточных сигналов. Практическая онкология, 2002, т.З, №4, стр.236-245.

31. Тюляндин С.А. Рак яичников. М., 1996. стр. 60 .

32. Тюляндин С.А. Рак яичников: химиотерапия второй линии. Практическая онкология, №4, 2000.

33. Урманчеева А.Ф. Современная химиотерапия рака яичников. Практическая онкология, 2002, т.З, №4, с.295-304.

34. Урманчеева А.Ф., Мешкова И.Е. Вопросы эпидемиологии и диагностики рака яичников. Практическая онкология, 2000, №4, с.7-13.

35. Урманчеева А.Ф., Кутушева Г.Ф. Диагностика и лечение опухолей яичника: Пособие для врачей. СПб., Гиппократ, 2001. - 48с.

36. Ухов А.Я., Петрус B.C., Швайдецкая Г.В., Яцкевич Я.Е. Усиление действия антибиотиков ультразвуком. Журнал "Антибиотики и медицинская биотехнология". N9-14. стр. 684-687. 1985.

37. Франкфурт О.С. Клеточные механизмы химиотерапии опухолей. М., "Медицина", 1976, 390 стр.

38. Шарыпова Д.А. Комплексное лечение первичного и рецидивного серозного рака яичников. Автореферат дисс. к.м.н., М., 1999. 19 с.

39. Шутко А.Н. Итоги конференции "Материалы I Всероссийской научно-практической конференции". Виброакустика в медицине. Санкт-Петербург, 2000,стр. 140-143.

40. Akiyama M, Ishibashi T, Yamada T, Furuhata H. Low-frequency ultrasound penetrates the ranium and enhances thrombolysis in vitro. Neurosurgery 1998;43:828-832

41. Alberts D.S., Liu P.Y., Hannigan E.V. et al. Intraperitoneal cisplatin plus intravenous cyclophosphamide versus intravenous cisplatin plus intravenous cyclophosphamide for stage III ovarian cancer. N. Engl. J. Med. 1996,335, p. 1950-1955.

42. Alberts D.S., Salmon S.E., Chen H.S., Moon Т.Е., Young L, Survit E.A. Pharmacologic studies of anticancer drugs with the human tumor stem cell assay. Cancer Chemotherapy. Pharmacology, V. 6, p-253-264,1981.

43. Bogden A.E., Cobb W.R. The surenal cansule assay. Eur. J Clin. Oncol. V.22,N 9,1033-1036,1986.

44. Bristow R.E., Tomacruz R.S., Armstrong D.K. Survial effect of maximal cytoreductive surgery for advanced ovarian carcinoma during the platinum era: a meta-analysis//J.Clin.Oncol. -2002.-Vol.20(5).-P. 1248-1259.

45. Chapelon JY, Ribault M, Vernier F, Souchon R, Gelet A. Treatment of localised prostate cancer with transrectal high intensity focused ultrasound. Eur.J. Ultrasound 1999 Mai; 9(l):31-38

46. Cochran S. A. and Prausnitz M. R. Sonoluminescence as an indicator of cell membrane disruption by acoustic cavitation. Schools of Biomedical

47. Engineering and Chemical Engineering, Georgia Institute of Technology, Atlanta, QA, USA. Ultrasound in Med. & Biol., Vol. 27, No. 6, pp. 841-850, 2001

48. Einhorn N., Lundell M., Nilsson B. et al. Is there place for radiotherapy in the treatment of advanced ovarian cancer. Radiother. Oncol., 1999, v.53.

49. Feigl T; Vilklein B; Iro H; Ell C; Schneider T. Biophysical effects of high-en Tgy pulsed ultrasound on human cells. Ultrasound Med Biol, 1996, 22:9, 1267-75.

50. Finkler N., Gordon A., Crazier M. et al. Phase 2 evaluation of OSI-774, a potent oral antagonist of the EGFR-TK in patients with advanced ovarian carcinoma. Proc. ASCO, 2001, 20, abstr. 831.

51. Fuijiwara K., Yamauchi H., Suzuki S. et al. Survival of patients with epithelial ovarian cancer after intraperitoneal carboplatin-bazed chemotherapy. ASCO. 2000, № 1587.

52. Harrison GH; Balcer-Kubiczek EK; Gutierrez PL. In vitro action of continuous-wave ultrasound combined with adriamycin, X rays or hyperthermia. Source RadiatRes., 1996 Jan, 145:1, 98-101

53. Hill CR; ter Haar GR. Review article: high intensity focused ultrasound-potential for cancer treatment. Br J Radiol, 1995 Dec, 68:816,1296-1303

54. Jeffers RJ; Feng RQ; Fowlkes JB; Hunt JW; Kessel D; Cam С A., Dimethylformamide as an enhancer of cavitation-induced cell lysis in vitro. J. Acoust. Soc. Am., 1995 Jan, 97:1, 669-76.'

55. Jin Z.H., Miyoshi N., Ishiguro K., Umemura S. et all. Combination effect of photodynamic and sonodynamic therapy on experimental skin squamous cell carcinoma in СЗН/ HeN mice. J. Dermatol. 2000 May ; 27 (5) : 294-306

56. Kodama Т., Takayama K. Dynamic behavior of bubbles during extracorporeal shock-wave lithotripsy. Ultrasound in Med. & Biol., Vol. 24, No. 5, pp. 723-738,1998

57. Kondo I, Mizushige K, Ueda T, Masugata H, Ohmori K, Matsuo H. Histological observations and the process of ultrasound contrastagent enhancement of tissue plasminogen activator thrombolysiswith ultrasound exposure. Jpn Circ 1999; 63:478-484

58. Lejbkowisc F., Salsberg S. Distinct sensitivity of normal and malignant cells of ultrasound in vitro. Environ Health Perspekct; 1997 Dec- vol. 105 Suppl.6-P. 1575-8•

59. Levin L., Hryniuk W. Dose intensity analyses of chemotherapy regimens in ovarian carcinoma. J. Clin. Oncol., 1987, vol.5, p.756.

60. Levin L.,Simon R., Hryniuk W. et al. Importance of multiagent chemotherapy regimens in ovarian carcinoma: dose intensity analysis. J. Nath. Cancer Inst. 1993, vol. 85, p. 1732.

61. Los G. Experimental Basis of Intraperitoneal Chemotherapy. PhD Thesis, Amsterdam, The Netherlands: Vrije Universiteit 1990.

62. Loverock By Pam, Phil M., ter Haar Gail,. Ormerod M. G. and Imrie P. R. The effect of ultrasound on the cytoxicity of adriamycin. The British Journal of Radiology. 1990. 63. p.542- 546

63. Markman M, Brady M.F., Spirtos N.M. Hanjani P., Rubin S.C. Phase II trial of intraperitoneal paclitaxel in carcinoma of the ovary, tube and pheritoneum: a Gynecologic Oncology Group study. J. Clin. Oncol., 1998, vol.8, p. 26202624.

64. Markman M., Reichman В., Hakes T. et al. Impact on survival of surgically defined favorable responses to salvage intraperitoneal chemotherapy insmall-vol. residual ovarian cancer. J. Clin. Oncol., 1992, vol. 10, p. 14791484.

65. McGuire W.P., Hoskins W.J., Brady M.F. et al. Cyclophosphamide and cisplatin compared with paclitaxel and cisplatin in patients with stage TIT and stage IV ovarian cancer // N.Engl. J.Med.-1996.-Vol.7.-P.242.

66. McGuire W.P., Ozols R.F. Chemotherapy of advanced ovarian cancer. Semin. Oncol. 1998, vol. 25,p. 340-348.

67. Meunieri A., Guillemini F., Louis Merlini Jean-Louis, Edcermann K., Stoss M., Hopfel D., Barth G., Bolotina U. Can ultrasounds induce cytotoxicity in presence of hematoporphyrin derivative as photodynamic therapy ? SPIE Vol-2625/419-426

68. Miller D. L. and Song J. Tumor growth reduction and DNA transfer by cavitation-enhanced high-intensity focused ultrasound in vivo. Ultrasound in Med. & Biol., Vol. 29, No. 6, pp. 887-893,2003

69. Miller D.L. and Song J. Lithotripter shock waves with cavitation nucleation agents produce tumor growth reduction and gene transfer in vivo. Ultrasound in Med. &Bibl., Vol. 28, No. 10, pp. 1343-1348,2002

70. Miller M.W., Miiller D. L. et al. A review of in vitro bioeffects of intertial ultrasonic cavitation from a mechanistic perspective. Ultrasound in Med. & Biol. Vol. 22, No. 9. pp. 1131-1154, 1996

71. Mir L.M., Orlowski S. Mechanisms of electrochemotherapy. Adv. Drug. Deliv Rev. 1999; Vol.35: pp. 107-118

72. Mossman Т. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and citotoxity assays. J. Immunol. Methods, V.65, p-55-63, 1983.

73. Nyborg Wesleyk L. Biological effects of ultrasound; Development of safety guidelines. Part I: Personal histories. Ultrasound in Med. & Biol., Vol. 26, pp. 911-964,2000.

74. Ozols R.F. Treatment of recurrent ovarian cancer: increasing options -"recurrent" results. J. Clin. Oncology 1997;15:2177-80.

75. Ozols R.F. Chemotherapy for ovarian cancer. Seminars of Oncology.- 1999.-Vol. 26.- P. 14.

76. Raaphorst G.P., Yang H. Interaction of low dose rate irradiation, Cisplatin and mild hyperthermia in human glioma cells. Proceedings of the 7-th International Congress on Hyperthermic oncology. Italy, April 9-13, 1996. Hiperthermic Oncology, 1996, v.2.

77. Rivens IH, Rowland IJ, Denbow M, et al. Vascular occlusion usingfocused ultrasound surgery for use in fetal medicine. Eur J Ultrasound. 1999; 9:89 -97.

78. Rixe O., Ortuzer W., Alwarez M. et all. Oxaliplatin, tertraplatin, cisplatin: spectrum of activity in drug-resistant cell lines and in the cell lines of the

79. National Cancer Institute's Anticancer drug Screen panel. Biochem. Pharmacol., 1996, -52, N 12, p 1855-1865.

80. Rolland A.P. From genes to gene medicines: Recent advances in nonviral gene delivery. Crit. Rev. Ther Drug carrier Syst. 1998; Vol.15: pp. 143-198.

81. Saad Alie H. and Hahn George M. Ultrasound Enhanced Drug Toxicity on Chinese Hamster Ovary Cells in Vitro. Department of Radiation Oncology, Stanford University Medical Center, Stanford, California 94305 Cancer research 49, 5931-5934, November 1,1989.

82. Sigursson K. Advanced stage III ovarian carcinoma. Prospective randomized trials comparing radiotherapy and chemotherapy. Acta Obstet. Gynaecol. Scand., 1986, vol. 65, p.65-74.

83. Sjovall K., Elnfrorn N. Preoperative radiation therapy in advanced carcinoma of the ovary. Radiother. Oncol., 1985, v.4, p.329-333.

84. Sood A.K., Buller R.E. Drug resistans in ovarian cancer: from the ladoratory to the clinic. Obstet. Gynecol., 1998,92:2, p. 312-319.

85. Stiff P. J., Veum-Stone J., Zazarus H.M. et.al. High-dose chemotherapy and autologous stemcell transplantation for ovarian cancer: An autologous blood and marrow transplant. Registy report. Ann. Intern. Med. 2000, 133:504-515

86. Tissman G., Herbert V., Eollis H. Determination of therapeutic index of drugs by in vitro sensitivity tests using human host and tumor cell suspensions. Cancer Chemother.Rep., V.57, Nl,p 11-19,1973.

87. Umemura K; Yumita N; Nishigaki R; Umemura S. Sonodynamically induced antitumor effect of pheophorbide a. Cancer Lett, 1996 Apr 19, 102:1-2, 151-7

88. Vassey P. Improving the therapeutic index in first-line ovarian cancer: the SCOTROC experience // Proc. ESGO (Special Aventis satellite symposium during ESGO).-Brussel, 2003.

89. Vergote I., Kristensen G., Stuart G. et al. First line treatment ovarian cancer FIGO stages Ilb-IV with paclitaxel/ epirubicin/ carboplatin (TEC) vs paclitaxel/ carboplatin (TC).Interim results // Int. J. Gynecol.0ncol.-2002.-Vol. 12(5).-abstr. OV007.

90. Volm M use of tritiated nucleotide incorporation for prediction of tumors to cytostatik agent. Behring Inst. Mitt.,v. 74,273,1984.

91. Wan-Joo Hur, Jon C. Lyons, Yasushi et al. Effects of acidicy on the hyperthermic enhancement of drug cytotoxity. Proceedings of the 7-th International Congress on Hyperthermic oncology. Italy, April 9-13,1996. Hiperthermic Oncology, 1996, v.2.

92. Wilson J.K., Sergent J.M., Eglie A.W. et all. A feasibility study of the MTT assay for chemosensitivity testing in ovarian malignancy. Br. J. Cancer, V.62, N2, p-189-194,1990.