Разработка новых методов исследования лимфоцитов и эритроцитов с помощью иммунологических биочипов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат медицинских наук Шишкин, Александр Валентинович

• Шишкин, Александр Валентинович
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шишкин, Александр Валентинович

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I. Методы изготовления биочипов

1. Синтез вещества на биочипе

2. Методы нанесения белков на поверхность биочипа

2.1. Последовательные методы

2.1.1. Нанесение капель автоматической пипеткой

2.1.2. Микроконтактное нанесение 1 б

2.1.3. Микроструйное нанесение

2.1.4. Ближнее электронапыление

2.2. Параллельные методы

2.2.1. Микроконтактная печать

2.2.2. Метод микропроточных сетей

2.2.3. Фотоактивируемая иммобилизация белка

2.2.4. Дальнее электронапыление 20 3 Заключение

II. Методы иммобилизации белка на биочипах

1. Адсорбция

2. Химическое связывание

2.2. Связывание молекул белка с твердой поверхностью с 26 помощью молекул, имеющих альдегидные группы

2.3 Аминирование поверхности твердого субстрата

2.4 «Пришивка» молекул белка через Шиффовы основания 29 и их восстановление

3. Методы, при которых осуществляется ковалентное связывание 30 белка с предварительно адсорбированным на поверхности подложки веществом

3.1 Активация поверхности пластика глутаровым диальдегидом

4. Методы, при которых осуществляется прочное нековалентное 31 связывание молекул белка с предварительно иммобилизованным на поверхности подложки веществом.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка новых методов исследования лимфоцитов и эритроцитов с помощью иммунологических биочипов»

В современных биологических и медицинских исследованиях все большее распространение получает скрининговый подход, требующий параллельного проведения большого числа анализов. Все большее применение в последние годы находят биочипы (микрочипы, микроматрицы)- небольшие аналитические устройства, имеющие в себе компоненты биологического происхождения и предназначенные для проведения одновременного параллельного анализа многих межмолекулярных взаимодействий.Биочип представляет собой твердый субстрат, на поверхность которого нанесен упорядоченный рисунок (чаще всего решетка) микропятен одного или нескольких биологических веществ [28]. Именно это определение биочипа (микроматрицы, микрочипа) и будет в дальнейшем использоваться в данной работе.Применение биочипов открывает большие перспективы. При массовом производстве себестоимость 1 биочипа очень мала, а при его использовании расходуется минимальное количество реактивов.В основу создания биочипов положены следующие принципы: 1)миниатюризация;2) параллельность и одновременность проведения многих тестов; 3) объединение множества аналогичных тест-систем на одном носителе. [22,60] Огромный вклад в развитие микрочипов внесли академик А.Д. Мирзабеков [5,6,22,27,33,58] и профессор из Лондонского университета R. Ekins [60,62], показавшие, что размеры аналитической системы в иммунологии могут быть уменьшены без потери чувствительности.Несколькими годами ранее к подобным выводам пришел Tse-Wen Chang [56].На подложке биочипа могут быть иммобилизированы молекулы различных веществ биологического происхождения. Чаще всего это молекулы белков или нуклеиновых кислот.Работа над глобальным проектом «Геном человека» дала мощный стимул развитию олигонуклеотидных биочипов, на их создание выделялось огромное финансирование. В настоящее время олигонуклеотидные биочипы производятся промышленно и включают свыше 400000 различных нуклеотидов [18]. Они успешно применяются для биологических и медицинских исследований [111].Создание ДНК-биочипов было более простой задачей по сравнению с созданием белковых биочипов. Это связано с тем, что молекулы ДНК менее разнообразны в химическом и биофизическом плане, более стабильны и менее подвержены повреждениям.Для создания белкового биочипа необходимо было преодолеть большое количество технологических и биохимических проблем. В частности, в отличие от нуклеотидов, химические свойства различных белков сильнее отличаются между собой, и химически связать с подложкой одинаковые количества разных белков достаточно сложно. Растворы различных белков обладают различной вязкостью и поверхностным натяжением, что создает проблемы при переносе равных количеств различных белков на подложку контактными методами. При контакте с подложкой нативная'структура белков может изменяться. Молекулы белков имеют различный электрический заряд, в связи с этим между ними и подложкой (также имеющей определенный электрический заряд) действуют силы электростатического притяжения или отталкивания [1,14,16].Тем не менее, в течение последних нескольких лет многие сложности были преодолены, и ряд зарубежных биотехнологических компаний освоил выпуск иммунологических биочипов, предназначенных для различных целей (выявление аллергенов, гаптенов, антигенов возбудителей инфекционных заболеваний, опухолевых антигенов, для выявления антител, для мониторинга наличия белковых токсинов в окружающей среде и др.) [28].Весьма перспективным представляется создание иммунологических биочипов, предназначенных для исследования поверхностных антигенов клеток. Но их создание является еще более сложной задачей по сравнению с созданием обычных белковых биочипов, предназначенных для выявления свободных молекул.Помимо сложностей, общих для всех белковых биочипов, здесь возникают дополнительные ограничения.1) Должны использоваться высокоаффинные антитела, прочно связывающиеся с клетками.2) Молекулы антител должны быть прочно прикреплены к подложке, чтобы не происходило их отрыва после связывания с клетками при отмывке биочипа.3) Сайты неспецифического связывания должны быть блокированы веществом, не способным связываться с молекулами адгезии клеток.4) При контакте с подложкой не должно происходить разрушения клеток.В 1983 г. Chang создал, пожалуй, первый в мире биочип для иммунофенотипирования клеток [56]. С помощью микропипетки он наносил капли растворов антител на покровные стекла в условиях низкой температуры и 100% влажности. Иммобилизация белка на подложке обеспечивалась за счет адсорбции. Созданные им биочипы позволяли определять некоторые поверхностные антигены лимфоцитов. Но эти работы вскоре были надолго забыты, так как нанесение капель вручную было чрезвычайно трудоемким и достаточно длительным.Вместе с тем в современных условиях такие биочипы могут оказаться чрезвычайно полезными для иммунофенотипирования клеток и найти свое применение в области гематологии и онкологии.В гематологии диагноз ставится по совокупности результатов нескольких исследований опухолевых клеток [34]: 1) определения иммунофенотипа; 2) морфологических исследований; 3) цитохимических исследований; 4) кариологических исследований; 5) генетических исследований.Определение иммунофенотипа клеток и морфологическое исследование являются ведущими лабораторными диагностическими методами.Иммунофенотипирование клеток осуществляется с помощью проточной цитофлюориметрии или ряда иммуноцитохимических (иммунофлюоресцентных) методов.Проведение исследований с помощью данных методов является трудоемким, требует высокой квалификации персонала, дорогостоящего оборудования и относительно высокого расхода антител и может быть доступно только в небольшом числе ведущих гематологических учреждений.Создание и последующее внедрение иммунологических биочипов, предназначенных для определения поверхностных антигенов клеток в значительной мере могло бы способствовать решению этих проблем.Автору не известно о проведении работ в данном направлении, в нашей стране. На момент написания данной работы в зарубежной литературе было опубликовано лишь несколько статей, посвященных этой теме [46-49,54,63,73,77,83,101,106,119].Созданные иностранными авторами биочипы еще не вышли за пределы их лабораторий.Кроме того, в опубликованных работах не уделяется внимания морфологическим и иным исследованиям клеток, связавшихся с биочипом.Такой подход не позволяет получить информацию о том, какие именно клетки оказалась связанными с теми или иными антителами на поверхности биочипа. Информация об иммунофенотипе дается в отрыве от информации о других характеристиках связавшихся клеток, что снижает ее диагностическую ценность. Еще не исследованы очень многие вопросы, связанные с закономерностями связывания клеток с биочипом и их отрыва.Целью работы является создание иммунологических биочипов, позволяющих осуществлять определение поверхностных антигенов, а также проводить морфологическое исследование связавшихся клеток.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шишкин, Александр Валентинович

ВЫВОДЫ.

1. Отработана методика изготовления биочипов на выбранных прозрачных и оптически однородных пластиковых подложках, обеспечивающих иммобилизацию антител за счет адсорбции. Созданы экспериментальные биочипы, позволяющие определять до 32 различных поверхностных антигенов лимфоцитов, а также биочипы для определения поверхностных антигенов эритроцитов (А, В, D, с, С, е, Е)

2. Продемонстрировано специфическое связывание на биочипах эритроцитов, а также лимфоцитов здоровых доноров и больных B-XJIJI. При этом может быть определено процентное содержание в исследуемой суспензии клеток, экспрессирующих соответствующие поверхностные антигены.

3. Показана возможность проведения морфологического исследования связавшихся на биочипе клеток.

4. Чувствительность анализа, проводимого с помощью биочипов, может быть значительно повышена за счет использования отмывки в проточной камере.

5. Разработан способ концентрирования в области пятен биочипа клеток, имеющих соответствующие поверхностные антигены, основанный на использовании предложенного циклического режима инкубации/отмывки биочипа в проточной камере при его взаимодействии с клеточной суспензией.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Проведенные исследования показывают перспективность использования предложенных новых подходов в области создания клеточных биочипов. Данная диссертационная работа - лишь начало исследований и разработок в этой области, оказавшейся весьма обширной. Дальнейшие работы могут проводиться еще по целому ряду направлений: 1) создание биочипов на более совершенных подложках; 2) увеличение панели антител; 3) поиск новых подходов, позволяющих сократить время проведения отдельных стадий анализа с помощью биочипов; 4) расширение набора методов дополнительных исследований связавшихся с биочипом клеток; 5) автоматизация различных этапов проведения анализа и процесса считывания результата; 6) совершенствование конструкции проточной камеры; 7) проведение исследований с использованием клеткок различных опухолей системы крови.

Кроме того, необходимо проведение фундаментальных исследований для выявления новых закономерностей и дальнейшего изучения уже найденных.

Недостаточное финансирование и отсутствие некоторых необходимых реактивов и оборудования заставили проделать большую работу по упрощению процессов изготовления биочипов и всех этапов проведения анализа. В результате биочипы могут быть изготовлены при самых минимальных затратах, а исследования с их помощью могут проводиться с использованием минимального набора оборудования, имеющегося в клинической лаборатории любого лечебно-профилактического учреждения. Это особенно валено, поскольку потребность в иммунологическом исследовании клеток огромна, а существующее оборудование (проточные цитофлюориметры, люминисцентные микроскопы и др.) очень дорого и доступно для очень ограниченного числа клинических лабораторий. Внедрение биочипов позволило бы существенно улучшить имеющуюся ситуацию.

Следует заметить, что для внедрения биочипов в клиническую практику необходима автоматизация считывания результата. Одним из возможных путей решения данной задачи может быть создание простой по конструкции и недорогой установки для определения интенсивности флюоресценции пятен биочипа со связавшимися клетками (окрашенными флюоресцентным красителем), аналогичной по конструкции флюоресцентному ридеру, созданному в лаборатории физической биохимии системы крови ГУ ГНЦ РАМН [1].

На поверхности клеток экспрессируется огромное количество молекул, обладающих антигенными свойствами. Все они могут быть определены с помощью иммунологических биочипов при наличии соответствующих антител. Наиболее востребованным должно оказаться создание биочипов для определения антигенов системы HLA, канцер-специфических антигенов, молекул адгезии, антигенов стволовых клеток.

Необходимо подчеркнуть, что использование в будущем подобных биочипов для целей диагностики не означает отказа от использования проточной цитофлюориметрии, поскольку она позволяет определять значительно большее количество признаков у каждой клетки в отдельности. Оба этих метода имеют свои преимущества и недостатки и способны дополнять друг друга. Биочипы должны быть использованы главным образом для скриниговых исследований, что весьма затруднительно при использовании других методов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шишкин, Александр Валентинович, 2008 год

1. Авсеенко Н.В. Разработка метода иммобилизации белков в микрочипах для имму но ферментного анализа: Дис. . канд. биол. наук. Москва. 2002. -158 с.

2. Антитела. Методы/ Под ред. Д. Кэтти.- М.: Мир, 1991-3 84с.

3. Асцатуров И. А. Иммунофенотипирование в диагностике хронических лимфопролиферативных заболеваний: Дис. . канд. мед. наук. Москва. 1997г.- 98 с.

4. Атлас клеток крови и костного мозга/Под ред. Козинца Г.И.- М.: Триада-Х, 1998. -150с.

5. Василисков В.А., Тимофеев Э.Н., Суржиков С.А., Дробышев А.Л., Шик В.В., Мирзабеков А.Д. Метод получения микрочипов с помощью сополимеризации с акриламидом// Мол. Биол.-1998. Т.32, № 5.- С. 923-925

6. Воробьев А.И., Бриллиант М.Д. Лимфоцитома селезенки и классификация лимфоцитом// Тер. Архив- 1982. №8.- С.8-14.

7. Воробьев А.И., Бриллиант М.Д., Тихонова Л.Ю., Самойлова Р.С., Маргулис Е.Я., Кременецкая A.M. Зрелоклеточные лимфоцитарные опухоли.//Тер. Архив.- 1986. №9.-С. 4-8.

8. Воробьев А.И., Кременецкая A.M., Лорие Ю.Ю., Харазиашвилли Д.В., Шкловский-Корди Н.Е. «Старые» и «новые» опухолилимфатической системы// Тер. архив,- 2000. №7.- С.9-13.

9. Гайер Г. Электронная гистохимия.- М.:Мир, 1974- 132с,- С.10-14.

10. Гистология (введение в патологию)/ Под. ред. Улумбекова Э.Г., Челышева Ю.А. М.: ГЭОТАР, 1997. -960с.- С.29-32.

11. Глузман Д.Ф., Сидоренко С.П., Надгорная Н.А. Цитохимия и иммуноцитология злокачественных лимфопролиферативных заболеваний. Киев. Наукова думка, 1982.- 240с.-С.240-244.

12. Донсков С.И. Группы крови системы Rhesus. Теория и практика,- М.: Союзинформбиология, 2005.-392с. -С.62-67.

13. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. «Теория и практика иммуноферментного анализа», М.: Высшая школа, 1991.-142с.

14. Зотиков Е.А., Бабаева А.Г. Путешествие в трансфузиологию- М.: Монолит, 2002. 112с.-С. 60-61.

15. Иммуноферментный анализ/ Под ред. Нго Т.Т., Ленхофф Г.- М.: Мир, 1988.- 444с.

16. Иммуноцитохимия и моноклональные антитела в онкогематологии/ Под ред. Пинчука В.Г. и Глузмана Д.Ф.- Киев, Наук, думка, 1990.-232с.

17. Киселев J1.J1. Геном человека и биология 21 века// Вестник РАН-2000. Т. 70, №5.- С.412-424.

18. Ковальчук J1.B. Антигенные маркеры клеток иммунной системы человека. CD (cluster differentiation) система.- М.: Издательство Российского государственного медицинского университета, 2003 .78с.

19. Козинец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А., Боев С.Ф., Сазонов В.В. Клетки крови и современные технологии их анализа- М.:Триада-фарм, 2002.- 538с.-С.77-137

20. Лимфоциты. Методы/ Под ред. Клауса Дж. М.: Мир, 1990.- 400.с.

21. Лысов Ю., Флорентьев В., Хорлин А., Храпко К., Шик В., Мирзабеков А. Определение нуклеотидной последовательности ДНК гибридизацией с олигонуклеотидами. Новый метод// Доклады Академии Наук СССР- 1988. Т. 303.- С. 1508-1511.

22. Малашенко О.С., Самойлова Р.С., Булычева Т.Н. Двойной иммуноцитохимический метод исследования линейности и пролиферативной активности при различных лимфопролиферативных заболеваниях// Гематология и трансфузиология.- 1994. №3.- С.3-7.

23. Малашенко О.С., Самойлова Р.С., Булычева Т.И. Иммуноцитохимический метод оценки пролиферативного статуса лимфоидных клеток при лимфопролиферативных заболеваниях// Клиническая и лабораторная диагностика.- 1995. №3.- С.51-54.

24. Медведев В. Биочипы, как пример индустриальной биологии// Компьютерра- 2001. №36.- С.25-32 http://offline.computerra.ru/2001/413/12805/

25. Микроскопическая техника, руководство для врачей и лаборантов/ Под ред. Саркисова Д.С. и Перова Ю.Л.- М.: Медицина, 1996.-542с.-С.125-127

26. Нанотехнология в ближайшем десятилетии, прогноз направлений исследований./ Под ред. Роко М.К., Уильямса Р.С., Аливисатоса П.-М.: Мир 2002.-292с.

27. Опухоли лимфатической системы/ под ред. Воробьева А.И. и Кременецкой A.M.- М.:Ньюдиамед, 2007. 294с.- С. 32.

28. Органическая химия (основной курс)/ Под ред. Тюкавкиной Н.А.-М.: Дрофа, 2003.-640с.

29. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Иммуномагнитная сорбция злокачественных клеток.//Клин.-лаб.диагн.- 2000, №12.- С. 43-46.

30. Равич-Щербо М.И., Новиков В.В. Физическая и коллоидная химия.-М.: Высшая школа, 1975.- 255с.

31. Рубина А.Ю., Паньков С.В., Иванов С.М., Дементьева Е.И., Мирзабеков А.Д. Белковые микрочипы// Доклады Академии Наук-2001, Т.381, № 5- С.701-704

32. Руководство по гематологии/ под ред. Воробьева А.И. -М. :Ньюдиамед, 2002., Т1.-280с.

33. Самойлова Р.С., Даровский Б.М., Лукина Е.А., Полянская A.M.

34. Диагностика реактивных лимфаденопатий и стадии лейкемизации лимфосарком с использованием наиболее простых методов иммунологического фенотипирования//Тер. Архив.-1986.№9.- С.72-77.

35. Справочник по лабораторным методам исследования/ Под ред. Даниловой Л.А.- С.-Петербург. Питер, 2003.- 736с.

36. СтрайерЛ. Биохимия-М.: Мир, 1984.-Т1.-232с.

37. ТупицынН.Н. Иммунодиагностика гемобластозов/В кн. Клиническая онкогематология/ Под ред. Волковой М.А.-М. Медицина, 2001.-576с.- С. 124-143.

38. Харамоненко С.С., Ракитянская А.А. Микроэлектрофорез клеток крови в норме и патологии.- Минск. Беларусь, 1974. 143с.

39. Шмаров Д.А., Козинец Г.И. Лабораторно- клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови- М.:Медицинское информационное агентство, 2004.-128с.

40. Ярилин А.А. Основы иммунологии.- М. Медицина, 1999.-720с.

41. Avent N.D., Liu W., Worner K.M., Mawby W J. Jones J. W., Ridgwell K., Tanner M .J.A. Immunochemical analysis of the human erythrocyte Rh polypeptides.//J. Biol. Chem.-1996.-Vol. 271. P.14233-14239.

42. Avseenko N.V., Morozova T.Ya., Ataullakhanov F.I., Morozov V.N. Immobilization of proteins in immunochemical microarrays fabricated by electrospray deposition//Anal. Chem.- 2001.-Vol. 73.-P 6047-6052.

43. Balcells M., Klee D., Fabry M. and Hocker H. Quantitative assessment of protein adsorption by combination of ELISA with radioisotope-based studies.//J. Colloid and Interface Sci.-1999.-Vol.220.- P.198-204.

44. Beier M. and Hoheisel, J.D. Versatile derivatization of solid support media for covalent bonding on DNA-microchips// NAR-1999.-Vol. 27. -P.1970-1977.

45. Belov L, de la Vega O, dos Remedios C.G., Mulligan S.P., Christopherson R.I. Immunophenotyping of leukemias using a cluster of differentiation antibody microarray//Cancer research.- 2001.-Vol.61.-P.483-4489.

46. Belov L., Huang P., Barber N., Mulligan S.P., Christopherson R.I. Identification of repertoires of surface antigens on leukemias using an antibody microarray //Proteomics.-2003.-Vol.3.-P.2147-2154.

47. DNA Chip: New Technique Developed for Attaching Biological Cells to Non-Biological Surfaces// http://enews.lbl.gov (February 6, 2006)

48. Bernard A., Delamarche E., Schmid H., Michel В., Bosshard H.R., Biebuyck H. P. Printing patterns of proteins// Langmuir.- 1998.-Vol.14.-P.2225-2229.

49. Bernard A., Michel B. and Delamarche E. Micromosaic immunoassays// Anal. Chem.-2001. -Vol.73. P.8-12.

50. Blanchard A.P., Kaiser R.J., Hood L.E. High-density oligonucleotide arrays// Biosensors & Bioelectronics.- 1996.-Vol.l 1.- P.687-690.

51. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow

52. Scand.J.Clin.Lab.Investig.-1968.-Vol.21-Suppl.97.-p. 1-9.

53. Campbell С .J., O'Looney N., ChongKwan M., Robb J.S., Ross A.J., Beattie J.S., Petrilc J. & Ghazal P. A cell interaction microarray for blood phenotyping// Anal.Chem.- 2006.-Vol.78.- P.1930-1938.

54. Carton J.P. Defining the Rh blood group antigens -Biochemistry and molecular genetics.// Blood Rev.-1994-Vol. 8.-P.199-212.

55. Chang T.W. Binding of cells of distinct antibodies coated on solid surface// J. Of immunological methods.- 1983.- Vol. 65.- P.217-223.

56. Chapman R.G., Ostuni E., Takayama Sh., Holmlin R.E., Yan L. and Whitesides G.M. Surveying for surfaces that resist the adsorption of proteins// J. Am. Chem. Soc.- 2000.- Vol.122.- P.8303-8304.

57. Elcins R.P. An overview of present and future ultrasensitive non-isotopic immunoassay development// Clin. Biochem. Revs. 1987.- Vol. 8.- P. 1222.

58. Elcins R.P., Berger H., Chu F.W., Finckh P., Krause F. Miniaturized immunoarrays: ultrasensitive multianalyte immunoassays on a chip//Nanobilogy.- 1998.- Vol.4.- p. 197-220.

59. Ekins R.P., Chu F.W. Multianalyte microspot immunoassay -microanalytical "Compact Disk" of the future// Clin. Chem.- 1991.-Vol.37.- P.1955-1967.

60. Ellmark P., Belov L., Huang P., С Soon Lee, Solomon M. J., Morgan D. K., Christopherson R. I. Multiplex detection of surface molecules on colorectal cancers// Proteomics.- 2006.-Vol.6.-P. 1791-1802.

61. Erber WN and Mason DY. Immunoalkaline phosphatase labelling of terminal transferase in hematological samples.//Am. J. Clin. Path. -1986.-Vol.88.-P.43-50.

62. Fodor S.P., Read J.L., Pirrung M.C., Stryer L., Lu A.T., Solas D. Light-directed, spatially addressable parallel chemical synthesis//Science.-1991 .-Vol.251 .-P.767-773.

63. Gerard-Marchant R., Hamlin I., Lennert K., Rilke F., Stansfeld A.G., van Unnik J.A.M. Classification of non-Hodgkin's lymphoma.// Lancet; 1974.- Vol. 2-P.406-408.

64. Guschin D., Yershov G., Zaslavsky A., Gemmel A., Shick V., Proudnikov D., Arenkov P., Mirzabekov A. Manual manufacturing of oligonucleotides, DNA, and protein microchips.//Anal Biochem-1997.-Vol.250.-P.203-211.

65. Haab B.B., Dunham M.J. and Brown P.O. Protein microarreys for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions// Genom Biology.-2001.-Vol.2.- research 0004.10004.13

66. Habeeb A.F.E.A. and Hiramoto R. Reaction of proteins with glutaraldehyde //Archives of Biochem. And Biophys.- 1968. Vol. 126.-P. 16-26.

67. Harris N.L., Jaffe E.S., Stain H., et al. A revised European-American classification of lymphoid neoplasms: a proposal from the International Lymphoma Group.//Blood.-1994.- Vol.84. №5.-P.1361-1392.

68. Hengsakul M., Cass A.E.G. Protein patterning with a photoactivatable derivative of biotin//Bioconjugate Chem.-1996.- Vol. 7.-P.249-254.

69. Hermanson G.T. Bioconjugate Techniques.- N.Y., San Diego, Boston, Acad. Press. 1996-21 Op.

70. Janshoff A., Steinem C., Michalke A., Henke C., Galla H.J. Monofunctionalized b-cyclodextrins as sensor elements for the detection of small molecules/ZElsevier/ Sensors and Actuators.- 2000.- Vol.70.-P.243-253.

71. James C.D., Davis, R.C., Craighhead, H.G., Isaacson, M., Turner, J.N., Shain, W. Patterned protein layers on solid substrates by thin stamp microcontact printing//Langmuir.- 1998.-Vol.14.-P.741-744.

72. Joos Т. O., Schrenk M., Hopfl P., Kroger K., Chowdhury U., Stoll D. Schorner D., Durr M., Herick K., Rupp S., Sohn K. and Hammerle H. A microarray ELISA for autoimmune diagnostics//Electrophoresis.- 2000.-Vol.21 .-P.2641 -2650.

73. Ко I.K., Kato K. & Iwata H. Antibody microarray for correlating cell phenotype with surface marker//Biomaterials.- 2005.- Vol.26.- P.687-696.

74. Lahiri J., Ostuni E., Whitesides G.M. Patterning ligands on reactive SAMs by microcontact printing//Langmuir.- 1999.-Vol.l5.-P.2055-2060.

75. Lee S.H. and Ruckenstein E. Adsorption of proteins onto polymeric surfaces of different hydrophylicities a case study with BSA//J. Colloid and Interface Sci.- 1988. Vol.l25.-P.365-379.

76. Lemmo A.V., Fisher J.T., Geysen H.M., Rose D.J. Characterization of an inkjet chemical microdispenser for combinatorial library synthesis//Anal. Chem.- 1997.-Vol.69.-P.543-551.

77. Lennert K. The non-Hodgkin's lymphomas. /Ed.I. Magrath.-London, Arnold, 1997,- P.133-167.

78. Lin J.-N., Herron J., Andrade J. D. and Brizgys M. Characterization of immobilized antibodies on silica surfaces//IEEE Trans. Biomed. Eng.-1988,-Vol. 35.-P.466-471.

79. Liu A. Y. Differential Expression of Cell Surface Molecules in Prostate Cancer Cells// Cancer Research.-2000.-Vol.60.-P.3429-3434.

80. Lueking A., Horn M., Eickhoff H., Biissow K., Lehrach H., Walter G. Protein microarrays for gene expression and antibody screening//Anal. Biochem.- 1999.-Vol. 270.-P.103-111.

81. Lukes R.J., Collins R.D. New approaches to the classification of lymphomata.//Br. J. Cancer.-1975.-Vol. 31.-P.1-28.

82. Macbeth G., Schreiber S.L. Printing proteins as microarrays for high-throughput function determination//Science.-2000.-Vol.289.-P.1760-1763.

83. Marbrook I. In: Selected Methods in Cellular hninunology/Mishell В. B. and Shigi S. M. (eds.) San Francisco, W. II. Freeman, 1980.-p.188.

84. Martin В., Gaber В. P., Patterson C.H., Turner D.C. Direct protein microarray fabrication using a hydrogel "stamper'V/Langmuir.- 1998.-Vol.21.-P. 3971-3975.

85. Mc Gall G.H., Barone A.D., Diggelmann M., Fodor S.P.A., Gentalen E., Ngo N. The efficiency of light-directed synthesis of DNA arrays on glass substrate//! Am. Chem. Soc.-1997.-Vol.l 19.-P.5081-5090.

86. Melo J.V., Hedge U., Parreira A., Thompson I., Lampert I.A.,Catovsky D. Splenic lymphoma with circulating villous lymphocytes: differential diagnosis of В cell leukaemias with large spleens.// J. Clin. Path.-1987.-Vol. 40.-P. 642-651.

87. Miller R. G. In: Handbook of Experimental Immunology/ Weir D. M Blackwell C, Herzenberg L. A. and Herzenberg L. A. (eds.)-Oxford, Blackwell Scientific Publications, 1986.- p.54.1.

88. Moerman R., Frank J., Marijnissen J. С., M. van Dedem G. W. K., Picoliter dispensing in wells of a micro-array by means of electrospraying//Journal of Aerosol Science.-1999.-Vol.30.-P.551-552.

89. Moerman R., Frank J., Marijnissen J. C.M., Schalkhammer Т., van Dedem G.W.K. Miniaturized electrospraying as a technique for the production of microarrays of reproducible micrometer-sized proteinspots//Anal Chem.- 2001.-Vol. 73.-P.2183-2189.

90. Moody M.D., Van Arsdell S.V., Murphy K.P., Orencole S.F. and Burns C. Array-based ELISAs for high-throughput analysis of cytokines//BioTechniques.- 2001 .-Vol.31 .-P.186-194.

91. Morozov V.N., Morozova T.Ya. Electrospray deposition as a method to fabricate functionally active protein films//Anal. Chem.- 1999.-Vol.71.-P.1415-1420.

92. Morozov V.N., Morozova T.Ya. Electrospray deposition as a method for mass fabrication of mono- and multi-component microarrays of biological and biologically active sub stances//Anal. Chem.- 1999.-Vol.71.-P.3110-3117.

93. Morozov,V.N., Morozova, T.Ya., Kallenbach, N. R. Atomic force microscopy of structures produced by electrospraying polimer solutions//Int. J. Mass. Spectrom. Ion Processes.-1998.-Vol.178.- P.143-159.

94. Mourio I.,Colin Y., Cherif-Zahar В., Carton J.P., Le Van Kim C., Molecular genetic basis of human Rhesus blood system.//Nat. Genet.-1993.-Vol. 5.-P.62-65.

95. Naviroj S., Culler S.R., Koenig J.L. and Ishida H. Structure and adsorption characteristics of silane coupling agents on silica and e-glass fiber: dependence on pH.//J. Colloid Interface Sci.-1984.-Vol.97.-P.308-317.

96. Nilsson K. and Mosbach K. Immobilization of ligands with organic sulfonyl chlorides//Meth. Enzymol.-1984.-Vol.l04.-P.56-69.

97. Norde W. and Zoungana T. Surface-induced changes in the structure and activity of enzymes physically immobilized at solid /liquid interfaces.

98. Biotechnol.-1998.-Appl. Biochem. -Vol.28.-P.133-143.

99. Nuzzo R.G., Allura D.L. Adsorptionof bifunctional organic disulfides on gold surface// J. Amer. Chem. Soc. -1983.-Vol.l05.-P.4481-4483.

100. Nuzzo R.G., Zegarski, B.R., Dubois, L.H. Fundamental studies of the chemisorption of organosulfur coumpounds on Au. Implication for molecular self-assembling on gold surfaces//.!. Amer. Chem. Soc.- 1987.-Vol.l09.-P.773-740.

101. Pease A. N., Solas D., Sullivan E.J., Cronin M.T., Holmes C.P., Fodor P.A. Ligh-generated oligonucleotide arrays for rapid DNA sequence analysis// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-Vol. 91.-P.5022-5026.

102. Penzol G., Armisen P., Fernandez-Lafuente R., Rodes L. And Guisan J. M. Use of dextrans as long and hydrophilic spacer arms to improve the performance of immobilized proteins acting on macromolecules//Biotechnol. and Bioeng.-1998.- Vol.60.-P. 518-523.

103. Pirrung M.C., Huang C.Y. A general method for the spatially defined immobilization of biomolecules on glass surfaces using "caged" biotin// Bioconjugate Chem.- 1996.-Vol.7.-P.317-321.

104. Pritchard D.J., Morgan H., Cooper J.M. Patterning and regeneration of surfaces with antibodies//Anal. Chem.-1995.- Vol.67.- P.3605-3607.

105. Proudnikov D., Timofeev E., Mirzabekov A. Immobilization of DNA in polyacrylamide gel for the manufacture of DNA and DNA-oligonucleotide microchips//Anal Biochem.- 1998.-Vol.259.-P.34-41.

106. Raidt D. G. In: Selected Methods in Cellular Immunology/Mishell В. B. and Shigi S. M. (eds.) San Francisco, V. H. Freeman,-1980. p.193.

107. Schena M., Heller R.A., Theriault T.P., Konrad K., Lachenmeier E., Davis R.W. Microarrays: biotechnology's discovery platform for functional genomics// TIB TECH.- 1998.-Vol.16.-P.301- 306.

108. Shalon, D., Smith, S.J. Brown, P.O. A DNA microarray system for analyzing complex DNA samples using two-color fluorescent probe hybridization//Genome Research.-1996.-Vol.6.-P.639-645.

109. Steinman R. M., Voorhis W. С van, Spalding D. M. In: Handbookof Experimental Immunology/ Weir D. M., Blackwell C, Herzenberg L. A. and Herzenberg L. A. (eds.).-Oxford, Blackwell Scientific Publishers, 1986,-p. 49.1

110. Vandenberg E. Т., Bertilsson L., Leeidberg B.,Uvdal K., Erlandsson R., Elwing H. and Lundstorm I. Structure of 3-aminopropil triethhoxy silane on silicon oxide//J. Colloid Interface Sci.- 1990.-Vol.147.-P. 103-118.

111. Williams C.A., Chase M.W. Methods in immunology and immunocytochemistiy, Vol V.- N. Y., Academic Press, 1976.- 312 p.

112. Winklmair M., Schuetz A. J., Weller M.G. and Niessner R. Immunochemical array for the identification of cross-reacting analytes. //J. Anal. Chem. -1999.- Vol.363.- P.731-737.