Разработка нового препарата-пробиотика "Витаспорин" и изучение его биологических свойств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат медицинских наук Байгузина, Светлана Назибовна

• Байгузина, Светлана Назибовна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Байгузина, Светлана Назибовна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Препараты-пробиотики на основе бактерий рода

Bacillus и их лечебно-профилактическое действие.

1.2 Технологические основы культивирования бацилл.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

Собственные исследования.

Глава 3. Выделение нового штамма Bacillus subtilis 11В и характеристика его биологических свойств.

Глава 4. Оптимизация процесса периодического гомогенного глубинного культивирования штамма Bacillus subtilis 11В.

4.1 Оптимизация состава питательной среды.

4.2 Выбор фазы и дозы посевного материала.

4.3 Влияние условий аэрации и перемешивания.

4.4 Изучение криорезистентности культуры штамма.

Глава 5. Создание препарата-пробиотика «Витаспорин» и изучение его эффективности.

5.1 Влияние рН среды, желудочного сока и желчи на специфическую активность бацилл, входящих в состав препарата «Витаспорин».

5.2 Изучение иммуномодулирующего действия препарата «Витаспорин».

5.3 Изучение лечебной эффективности препарата «Витаспорин».

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка нового препарата-пробиотика "Витаспорин" и изучение его биологических свойств»

Актуальность темы. В условиях обострившейся экологической обстановки, широкого применения высокоактивных химиотерапевтических препаратов наблюдается тенденция к увеличению патологий, связанных с изменением нормальной микрофлоры человека. Наряду с этим расширяется спектр потенциальных возбудителей микотических поражений. Клинические проявления инфекций, обусловленных грибами, широко варьирует от поверхностных поражений слизистых оболочек и кожи до угрожающих жизни инвазивных микозов, при которых могут поражаться любые органы (O.K. Хмельницкий и др., 2000).

Применение антимикотиков и антибиотиков во многом решало проблему инфекционных осложнений, вызванных условно-патогенными, патогенными бактериями и грибами. Однако в последние годы их эффективность существенно снизилась за счет возникновения к ним широкой резистентности патогенных бактерий и грибов. Кроме того, возросла прослойка населения, страдающих аллергическими реакциями на применение антибиотиков, вплоть до их полной непереносимости.

В этой связи большой интерес представляют препараты-пробиотики из спорообразующих бактерий рода Bacillus, обладающих широким спектром антагонистической активности в отношении условно-патогенных, патогенных бактерий и грибов и способных оказать комплексное лечебно-оздоровительное действие на весь организм (S.Yamada et al., 1990).

Применение препаратов-пробиотиков из бацилл обусловлено их преимуществами перед антибиотиками: широкий диапазон лечебно-профилактического действия, безвредность для организма, экологическая безопасность, относительная дешевизна (И.М.Нахабин, В.В.Перелыгин, 1996).

В настоящее время в отечественной практике выпускается и успешно применяется для профилактики и лечения дисбактериозов, кишечных инфекций, гнойно-воспалительных заболеваний единственный препарат-пробиотик на основе Bacillus subtilis 534 - «Споробактерин жидкий» (М.В. Никитенко и др., 2004).

Вышеизложенное определило актуальность разработки и расширения списка отечественных биопрепаратов на основе штаммов Bacillus subtilis, способных оказать антагонистическое воздействие на возбудителей заболеваний бактериальной и грибковой этиологии.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является выделение природного штамма Bacillus subtilis и разработка на его основе нового медицинского препарата-пробиотика.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Выделить из природного материала наиболее активный штамм бактерий Bacillus subtilis, обладающий широким спектром антагонистической активности в отношении условно-патогенных, патогенных бактерий и грибов.

2. Изучить биологические свойства нового штамма Bacillus subtilis и возможность его использования как основу нового биопрепарата.

3. Разработать оптимальный режим технологического процесса культивирования нового штамма Bacillus subtilis, позволяющий получить биомассу популяции с максимальным количеством жизнеспособных клеток в споровой форме.

4. Создать новый препарат-пробиотик на основе выделенного штамма Bacillus subtilis, изучить его специфическую активность и стабильность свойств при хранении.

5. Изучить эффективность препарата при лечении зоонозной трихофитии в опытах на экспериментальных животных.

Научная новизна

Выделен и идентифицирован штамм Bacillus subtilis 11В, обладающий широким спектром антагонистической активности в отношении условно-патогенных, патогенных бактерий и грибов, вызывающих заболевания человека. Штамм депонирован под номером ВКМ 2218Д во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина и защищен патентом РФ № 2182172 от 10.05.2002 «Штамм бактерий рода Bacillus, обладающий широким спектром антагонистической активности».

Разработаны научные основы периодического гомогенного глубинного культивирования штамма Bacillus subtilis 11В с целью получения максимального выхода биомассы жизнеспособных бактерий и спорообразования в зависимости от состава питательной среды, оптимальной дозы посевного материала, физико-химических параметров.

Создан новый препарат - пробиотик «Витаспорин», сухой, показана его эффективность в комплексном лечении зоонозной трихофитии в опытах на экспериментальных животных, (патент РФ № 2181596 от 27.04.2002 «Лекарственный препарат из бактерий рода Bacillus»).

Научно-практическая значимость

Получен новый производственный штамм бактерий Bacillus subtilis 1 IB и показана возможность его использования в качестве основы нового препарата.

Разработаны научные основы промышленного технологического процесса культивирования штамма Bacillus subtilis 1 IB.

Создан новый медицинский препарат-пробиотик «Витаспорин», сухой. Получено 15 экспериментально-производственных серий препарата -пробиотика «Витаспорин»

Составлена нормативно-техническая документация на препарат «Витаспорин», сухой (ФСП, ЭПР, Инструкция по применению) и передана на экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

Показана эффективность препарата при лечении зоонозной трихофитии в опытах на экспериментальных животных.

Составлена и утверждена программа клинических испытаний для оценки лечебного действия препарата - пробиотика «Витаспорин», сухой в Государственном институте сертификации качества им. Л.А.Тарасевича; в комитете по медицинской этике при Национальном органе контроля медицинских иммунобиологических препаратов МЗ РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Выделен из природной среды штамм Bacillus subtilis 11В, обладающий широким спектром антагонистической активности в отношении широкого спектра условно-патогенных и патогенных бактерий и грибов.

2. Разработан оптимизированный процесс периодического гомогенного глубинного культивирования штамма Bacillus .subtilis 11В на сбалансированной питательной среде, позволяющий получить максимальный выход биомассы жизнеспособных клеток в споровой форме.

3.Создан новый препарат-пробиотик «Витаспорин», сухой, показана его эффективность в комплексном лечении зоонозной трихофитии в опытах на экспериментальных животных.

Апробация работы и публикации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены во Всероссийской научной конференции молодых ученых филиала ФГУП «НПО» Микроген» МЗ РФ «Иммунопрепарат» - «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004).

Апробация диссертации проведена на совместном межкафедральном совещании Башкирского государственного медицинского университета, ФГУП «НПО Микроген МЗ РФ филиал «Иммунопрепарат»» и Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (протокол № 1 от 5 ноября 2004 г.).

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных научных работ и получено 2 патента Российской Федерации на изобретение.

Объем и структура диссертационной работы

Диссертационная работа изложена на 150 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения и выводов. Библиографический список литературы содержит 166 источников (130 отечественных и 36 зарубежных). Работа иллюстрирована 34 таблицами и 6 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Байгузина, Светлана Назибовна

128 Выводы

1.Выделен из природного материала, идентифицирован штамм Bacillus subtilis ИВ, подавляющий рост широкого спектра условно-патогенных и патогенных бактерий и грибов. Штамм депонирован под номером ВКМ 2218Д во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН и запатентован (патент РФ № 2182172 от 10.05.2002).

2. Установлено, что штамм Bacillus subtilis ИВ продуцирует протеазу, амилазу, желатиназу, каталазу и не продуцирует лецитиназу, уреазу, липазу, гиалоуронидазу; не обладает гемолитической активностью. Штамм невирулентен, нетоксичен, нетоксигенен, не вызывает диссеминации внутренних органов, не влияет на нормальную микрофлору кишечника, не вызывает аллергических реакций и переспективен в качестве основы биопрепарата.

3. Разработан оптимальный режим периодического гомогенного глубинного культивирования штамма Bacillus subtilis ИВ на полусинтетической питательной среде, содержащей 1 % пептона и 0,5 % глюкозы с использованием от 3,1x109 до 4,0x109 кл/мл посевной культуры в экспоненциальной фазе, с содержанием в среде растворенного кислорода (70-80)% при перемешивании со скоростью вращения мешалки 250-300 об/мин. и при температуре 37 °С, рН среды 7,9, позволяющий получить максимальный выход биомассы жизнеспособных клеток в споровой форме.

4. На основе нового штамма Bacillus subtilis ИВ с использованием разработанной технологии создан препарат-пробиотик «Витаспорин», сухой, который обладает специфической активностью в отношении широкого спектра условно-патогенных, патогенных бактерий и грибов и стабильностью свойств в процессе хранения.

5. Показана эффективность препарата «Витаспорин» в комплексном применении с антибиотиком - гризеофульвин при зоонозной трихофитии в опытах на экспериментальных животных.

129

Практические рекомендации

1. Создан новый медицинский препарат-пробиотик «Витаспорин», сухой, обладающий высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенных, патогенных бактерий и грибов.

2. Составлена нормативно-техническая документация на препарат «Витаспорин», сухой (ФСП, ЭПР, Инструкция по применению) и передана на экспертизу в ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

3. Утверждена программа клинических испытаний для оценки лечебного действия препарата — пробиотика «Витаспорин», сухой в Государственном институте сертификации качества им. Л.А.Тарасевича; в комитете по медицинской этике при Национальном органе контроля медицинских иммунобиологических препаратов МЗ РФ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Байгузина, Светлана Назибовна, 2004 год

1. Акименко, В.К. Регуляция микробного метаболизма факторами внешней среды / В.К. Акименко // Тезисы докладов и сообщений. Пущино, 1983. — С.105-107.

2. Андреева, Н.Б. Кинетика потребления кислорода клетками Azotobacter vinelandi в периодической и проточной культуре / Н.Б. Андреева, И.А. Хмель // Микробиология. 1970. - Т. 39, № 2. - С. 280-287.

3. Антагонистическое действие культур Bacillus subtilis на бактерии рода Klebsiella / Н.В. Бойко, А.И. Туряница, Е.П. Попович, В.А. Вьюницкая // Микробиол. журн. 1989. - Т. 51, № 1. - С. 87-91.

4. Арзамазцев, Е.В. Изучение общетоксического действия: методические рекомендации / Е.В. Арзамасцев. М: МЗ РФ, 1997. - 160 с.

5. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологии / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Л.: Медицина, 1962. - 111 с.

6. Ю.Бактиспорин в лечении дисбиоза толстого кишечника у детей /

7. B.И. Никитенко. Опубл. 19.10.1989.

8. Балансирование состава микробиологических питательных сред: метод, рекомендации / Л.Г. Иванова, Е.И. Шмелева, В.И. Трифонов и др.. М., 1987.-С. 3-20.

9. Баснакьян, И.А. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза / И.А. Баснакьян, В.В. Бирюков, В.М. Кантере. М.: Наука. - 1985. - 291 с.

10. Баснакьян, И.А. Оптимизация культивирования микроорганизмов в биотехнологии / И.А. Баснакьян // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1989. - №5. - С. 90-96.

11. Баснакьян, И.А. Управляющее действие кислорода на питательные потребности менингококка / И.А. Баснакьян // Журн. микробиол. 1990. -№ 2.- С. 3-7.

12. Баснакьян, И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М., 1992. - 188 с.

13. Баснакьян, И.А. Патология и физиология микробов. Усовершенствование технологии культивирования / И.А. Баснакьян // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1982. —N12. - С. 28-33.

14. Белявская, В.А. Перспективы конструирования иммунопрепаратов на основе рекомбинантных бацилл / В.А. Белявская, И.Б. Сорокулова, А.А. Ильичев // Новые направления биотехнологий: тез. док. VI конф. РФ, 2426 мая, 1994. -Пущино, 1994. С. 68.

15. Белявская, В.А. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования для медицины и ветеринарии / В.А. Белявская, И.Б. Сорокулова, В.А. Масычева // Дисбактериозы и эубиотики: тез. докл. Всерос. науч.-практич. конф. М., 1996. - С. 7.

16. Билай, В.И. Методы экспериментальной микологии. Киев: Наукова думка, 1982.-550 с.

17. Биопрепарат субтикол для профилактики и лечения инфекционных болезней: пат. 2129432 А 61 К 35/74 / В.В. Смирнов, И.Б. Сорокулова, И.Г. Осипова.; опубл. 27.04.99, Бюл. № 12.

18. Бриан, JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам. М., 1984. - 270 с.

19. Вайтилавичус, А.И. Определение бактериальной желатиназы простым методом / А.И. Вайтилавичус // Лабораторное дело. 1977. - № 10. - С. 626-627.

20. Виестурс, У. Некоторые новые биотехнологии и аппаратура для их осуществления / У. Виестурс, М. Лейте // Прикладная биохимия и микробиология. 1977. - Т. 33. - С. 243-256.

21. Влияние условий аэрации на синтез и экскрецию полисахаридов бактериями рода Bacillus при их глубинном культивировании /

22. A.И. Осадчая, В.А. Кудрявцев, С.Р. Резник и др. // Биотехнология. 1993. -№ 3. - С. 12-14.

23. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма / В.А. Кудрявцев, Л.А. Сафронова, А.И. Осадчая и др. // Микробиол. журнал. 1996 - Т. 58, № 2. - С. 46-53.

24. Влияние качества посевного материала на биосинтез цефалоспорина /

25. B.А. Лосев, Б.А. Чагин, Т.Н. Вандышева, Л.В. Шурыгин // Антибиотики и химиотерапия. 1988. - Т. 33, № 7. - С. 493-496.

26. Влияние условий культивирования на некоторые свойства бацилл, составляющих основу пробиотиков / Т.М. Фурзикова, М.Г. Сергейчук, И.Б. Сорокулова, В.В. Смирнов // Мшробюл. журн. 1999 - Т.61, № 5.1. C. 19-23.

27. Воробьев, А.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины / А.А. Воробьев, Н.А. Абрамов, В.М. Бондаренко // Вестн. Российской АМН. - 1999. - № 3. - С. 4-7.

28. Вредная и полезная эндофитная микрофлора хлопчатника / М.Я. Минликеев, А.В. Хотянович, М.Х. Султанова и др. // Известия АН Тадж. ССР. 1987. - № 2. - С. 50-54.

29. Выбор оптимальных условий аэрирования для глубинного культивирования Bacillus thuringirnsis Ни 266/2-1 / А.И. Осадчая, С.Ф. Прокопченко, Н.Д. Костюченко и др. // Микробиол. журн. 1990. - Т. 52, № 6. - С. 34-38.

30. Габидуллин, З.Г. Биологическая характеристика штаммов Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: автореф. дис. д-ра. мед. наук. Саратов, 1990.- 35 с.

31. Герхард, Ф. Методы общей бактериологии. М.: Мир, 1983. - Т. 1. — 35 с.

32. Глухова, М.Н. Спорообразование некоторых видов бактерий рода Bacillus на пептонном кукурузном агаре / М.Н. Глухова, Е.Б. Каневская, Г.М. Субботина // Физиология и биохимия микроорганизмов. Горький, 1974. — С. 53-54.

33. Дементьев, А.А. Новая внеклеточная рибонуклеаза штамма Bacillus sp.BCF 256. Препаративное выделение и характеристика индивидуального фермента / А.А. Дементьев, Н.Ф. Рябченко, И.И. Протасевич // Биотехнология. 1992. - № 5. - С. 84-89.

34. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова, В.А Вьюницкая // Микробиол. журнал. -1992.-Т. 54, №6.-С. 82-92.

35. Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения: метод, рекомендации. РД-42-288-89. -М, 1989.

36. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Высшая школа, 1986.- 447 с.

37. Блинов, Н.ГТ. Основы биотехнологии. СПб.: Наука, 1995. - 560 с. 44.3аварзин, Г.А. Определитель бактерий Берджи. - М.: Мир, 1997. - 430 с.

38. Ивановский, А.А. Новый пробиотик бактоцеллолактин при различных патологиях у животных / А.А. Ивановский // Ветеринария. 1996 - № 11.-С. 34-35.

39. Изучение адгезивных свойств клеток Bacillus polymyxa и роль лектинов бацилл в адгезивном процессе / JI.B. Карпунина, У.Ю. Мельникова, Е.Ф. Соболева и др. // Микробиология. 1999. - Т. 68, № 4. - С. 445-448.

40. Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых пробиотиков / И.Г. Осипова, И.Б. Сорокулова, Н.В. Терешкина, JI.B. Григорьева // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.- 1998.-№ 6.-С. 68-70.

41. Ильницкая, И.Ю. Совершенствование культивирования дифтерийных коринебактерий для получения токсина-анатоксина / И.Ю. Ильницкая, И.А. Баснакьян // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986. - № 7. - С. 40-44.

42. Использование препарата-пробиотика бактиспорина для профилактики дисбактериоза и гнойно-септических осложнений в хирургии /

43. Т.В. Хасанова, Р.А. Хисамутдинов, P.M. Хасанов и др. // Клинические перспективы в инфектологии: тез. Всерос. науч. конф. СПб., 2001. - С. 205.

44. Кандыбин, Н.В. Итоги и перспективы применения бактокулицида / Н.В. Кандыбин, В.П. Ермолова, О.В. Смирнов // Современные достижения биотехнологии: матер. 1 Конф. Сев.- Кавказ, региона. Ставрополь, 1995. -С. 14-15.

45. Кашкин, Г.Н. Руководство по медицинской микологии / Г.Н. Кашкин, Н.Д.Шеклаков. М.: - Медицина, 1978. - 325 с.

46. Коваленко, Э.А. Внеклеточные лектины бактерий / Э.А. Коваленко // Микробиол. журнал. 1990. - Т. 52, № 3. - С. 92-99.

47. Коган, Н.И. Физиология человека и животных / Н.И. Коган . М.: Высшая школа , 1984. - Т.2 - 360 с.

48. Колпакова, С.Д. Исследование влияния количества посевного материала на жизнедеятельность бактериальной популяции / С.Д. Колпакова, А.И. Колпаков. Самара, 1994. - Деп. в ВИНИТИ 13.10.94. N 2359-В94.

49. Корвикова, Е.Р. Применение ударных доз бифидумбактерина-форте для лечения больных острых кишечными инфекциями / Е.Р. Корвикова // Журн. микробиология. — 2000. № 6. - С. 58-61.

50. Кулакова, С.М. Влияние кислорода и субстратов для роста на активность супероксидисмутазы и каталазы у микроорганизмов / С.М. Кулакова, И.Н. Гоготов // Микробиология. 1982. - Т. 51, № 1. - С. 21-25.

51. Лектиновая активность противоопухолевых веществ, синтезируемых Bacillus subtilis В-7025 / B.C. Подгорский, Э.А. Коваленко, Е.И. Гетьман и др. // МИсробюл. журнал. 2002. - Т 64, № 5. - С. 10-16.

52. Лечебно-оздоровительный эффект использования препарата-пробиотика-бактиспорин у женщин фертильного возраста / Р.Х. Гатауллина, Р.А.

53. Хисамутдинов, Т.Н. Кузнецова и др. // Клинические перспективы в инфектологии: тез. Всерос. научн. конф. СПб., 2001. - С. 205.

54. Любимов, Б.И. Оценка аллергизирующих свойств фармакологических средств / Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств / Б.И. Любимов, Л.П. Коваленко, В.Н.Федосеева и др.- 1988. С. 15-21

55. Медведев, Ю.А. Молекулярно-клеточные механизмы иммуногенеза при зоонозной трихофитии: автореф. дис. д-ра мед. наук. — М., 1988. 31 с.

56. Микробная биотехнология: метод, пособие к лабораторным работам / Е.П. Яковлева, О.А. Алексинцева, Н.В. Котова, В.А. Колодязная. СПб., 2000. -С. 21-24.

57. Молчанов O.JT. Применение биоспорина в комплексной терапии бактериального вагиноза / О.Л. Молчанов, А.Л. Позняк // Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней: тез. докл. -СПб., 1999.-С. 187.

58. Морфометрический анализ развития микроорганизмов / Л.А. Музыченко,

59. B.Н. Сенаторова, Л.Л. Альховская и др. // Биотехнология. 1990. - № 3.1. C.3-6.

60. Никитенко, В.И. Споробактерин новый препарат для лечения дисбактериозов и гнойно-воспалительных процессов / В.И. Никитенко, Н.Н. Горбунова, А.В. Жигайлов // Дисбактериозы и эубиотики: тез. докл. Всерос. науч.-практич. конф. М., 1996. - С. 26.

61. Никитенко М.В. Новая форма препарата «споробактерин жидкий» и изучение ее эффективности: автореф. дис.к-та мед. наук.- Оренбург, 2004.- 24 с.

62. B.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова и др. // Микробиол. журнал. 1988. - Т. 50, № 6. - С. 56-59.

63. Оптимизация условий аэрации в процессе культивирования Bacillus thuringiensis ssp kurstaki шт. z-52 с использованием интегральной квазидинамической модели / В.В. Лаврикова, В.А. Ириков, Т.Г. Юдина и др. // Биотехнология. 1992. - № 2. - С. 61-66.

64. Патоморфологическая диагностика микозов, вызываемых условно-патогенными грибами: Пособие для врачей / Под ред. O.K. Хмельницкого, В.Л. Быкова, Н.М. Хмельницкой. С-Пб., 2000. — 36 с.

65. Пробиотики и функциональное питание / Б.А. Шендеров, М.А. Манвелова, Ю.Б. Степанчук, Н.Э. Скиба // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т. 42, № 7. - С. 30-34.

66. Пестеров, П.Н. Трихофития зооантропонозная / П.Н. Пестеров. Томск: Из-во Томского ун-та, 1998. - 124 с.

67. Петров, JJ.H. Конструирование препаратов для лечения и профилактики дисбактериоза на основе представлений о эндоэкологии человека / JI.H. Петров, Н.Б. Вербицкая, Т.Я. Вахитов // Рус. журн. Вич/Спид и родст. пробл. 1997.-Т. 1, № 1.-С. 161-162.

68. Петров Р.В. Иммунофармакологическими требованиями к оценке модуляторов иммунной системы / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Е.В. Кожинова // Научно-методические аспекты биологических исследований новых лекарственных препаратов. Рига, 1987.

69. Перт, С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978.- 331 с.

70. Питательная среда для выращивания спорообразующих аэробных бактерий Bacillus subtilis и Вас. licheniformis: а. с. 1708832 / В.Я. Чаплинский. опубл. 01. 1992, Бюл. № 4.

71. Подберезный, В.В. Культивирование производственных штаммов Bacillus subtilis в подсырной сыворотке / В.В. Подберезный, Н.И. Полянцев, JI.B. Ропаева // Ветеринария. 1996. - № 1. - С. 21-29.

72. Подгорский, B.C. Систематическое положение, экологические аспекты и физиолого-биохимические особенности микроорганизмов, имеющих промышленное значение / B.C. Подгорский // М1кробюл. журнал. 1998. -Т 60, № 5. - С. 27-47.

73. Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека: а. с. 1722502 S.U. А 61 К 39/02 / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова и др.. -опубл. 30.03.92.

74. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов /В.В. Смирнов, Н.К. Коваленко, B.C. Подгорский, И.Б. Сорокулова // Мпсробюл. журнал. 2002. - Т. 64, № 4. - С. 62-79.

75. Профилактический биопрепарат субалин: пат. 2035185 RU А 61 К 35/66 /

76. B.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова и др.. опубл. 20.05.95, Бюл. № 14.

77. Процессы ассимиляции глюкозы и кислорода патогенными микроорганизмами / Л.Г. Жданова, Г.М. Машилова, И.М. Грубер и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1989. - № 9.1. C. 74-77.

78. Профилактический биопрепарат споролакт: пат. 2035186 RU А 61 К 35/66 / С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова, В.А. Вьюницкая и др.. опубл. 20.05.95, Бюл. № 14.

79. Работнова, И.Л. Хемостатное и периодическое культивирование при изучении физиологии микроорганизмов / И.Л. Работнова, И.Н. Позмогова, И.А. Баснакьян // Итоги науки и техники. М.: ВИНИТИ, 1981. - Т.П. - С. 3-54. (Сер. Микробиология).

80. Резник, С.Р. Гематологические и цитохимические показатели телят при даче препарата Бактерии- SL / С.Р. Резник, И.И. Шуст // Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа: тез. докл. Всесоюз. симп. Киев, 1989. - С. 25.

81. Рост и спорообразование Bacillus subtilis в различных условиях аэрации /

82. B.В. Смирнов, А.И. Осадчая, В.А. Кудрявцев, JI.A. Сафронова // Микробиол. журнал. 1993. - Т. 55, № 3. - С. 38-44.

83. Слабоспицкая, А.Т. Ферментативная активность бацилл, перспективных для включения в состав биопрепаратов / А.Т. Слабоспицкая, С.С. Крымовская, С.Р. Резник // Микробиол. журнал. 1990. - № 2. - С. 9-14.

84. Смирнов, В.В. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская. Киев, 1982 — 280 с.

85. Смирнов, В.В. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных / В.В. Смирнов. Киев, 1983. - 49 с.

86. Смирнов, В.В. Спорообразующие аэробные бактерии итоги и перспективы исследований / В.В. Смирнов, С.Р. Резник // XI Украинский Республиканский съезд микробиологов, эпидемиологов и паразитологов: тез. докл. Киев, 1985. - Ч. 1. - С.15-16.

87. Смирнов, В.В. Адгезивные свойства бактерий рода Bacillus-компонентов пробиотика / В.В. Смирнов, И.В. Косюк // Мшробюл. журнал. 1997. - Т. 69, №6.-С. 36-43.

88. Смирнова, Г.В. Изменение количества SH-соединений в культурах Esherichia coli и Bacillus subtilis при переходе в стационарную фазу / Г.В. Смирнова, О.Н. Октябрьский // Микробиология. 1990. - Т. 59, № 3.1. C. 387-393.

89. Способ лечения гнойно-септических послеродовых заболеваний суспензией живых культур: а. с. 1398868 S.U. А 61 К 35/74 / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова и др.. опубл. 30.05.88, Бюл. № 20.

90. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, В.А. Вьюницкая и др. // Микробиол. журнал. 1993. - Т. 55, № 4. -С. 92-112.

91. Сорокулова, И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов / И.Б. Сорокулова // Антибиотики и химиотерапия. 1996. - Т. 41, № 10. - С. 13-15.

92. Сорокулова, И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств биоспорина и других коммерческих препаратов на основе бацилл / И.Б. Сорокулова // Мшробюл. журнал. 1997. - Т. 69, № 6. - С. 43-49.

93. Сорокулова, И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов / И.Б. Сорокулова // Антибиотики и химиотерапия. 1998.-Т. 43, №2.-С. 20-23.

94. Способ получения бактериального препарата из бактерий рода Bacillus: пат. 2076902 С 12 N/20, А 61 К 35/74, С 12 R 1: 07 / A.M. Мишульский. -опубл. 10.04.97, Бюл. № 10.

95. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis: пат. 2105562 Рос. Федерации / А.И. Леляк, В.Г. Костровский, О.И. Рязанкина и др.. опубл. 27.02.98, Бюл. № 6.

96. Споровые пробиотики / И.Г. Осипова, Н.А. Михайлова, И.Б. Сорокулова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2002. -№ 3. - С. 113-119.

97. Способ лечения и профилактики вирусных и бактериальных заболеваний животных: а.с. 1311243 SU/ С.Р. Резник. опубл. 1982.

98. Способ получения биомассы бацилл: пат. 2053293 Россия / А.А. Степин, В.М.'Самыгин, В.П. Кухтин и др.. -опубл. 27.01.96, Бюл. № 3.

99. Сторожук, П.Г. Патогенетическая направленность белкового питания и заместительной ферментотерапии при иммунодефицитных состоянияхорганизма / П.Г. Сторожук, И.М. Быков, А.П. Сторожук // Int. J. Immunorehabil. 1998. - № 10. - С. 110-115.

100. Топчий, М.П. Применение препаратов из живых культур сенной палочки при дисбактериозах у телят: автореф. дис. . канд. биол. наук. Минск, 1997.-21 с.

101. Фазылова, А.А. Клинико-иммунологическое обоснование применения споробактерина и бактиспорина при дисбиозе кишечника у детей раннего возраста: автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа, 1998. - 24 с.

102. Физиологические и биохимические характеристики роста клеток бактерий Bacillus mucilaginosis / А.А. Глухова, Е.В. Чекасина, Ю.В. Евтодиенко и др. // Прикладная биохимия и микробиология. 1993. - Т. 29, №5.-С. 21-27.

103. Фримель, Г. Иммунологичнкие методы / Г. Фримель. М.: Медицина, 1987.-С. 213-218.

104. Харченко, Е.П. Малые пептиды с антибиотической активностью / Е.П. Харченко // Антибиотики и химиотерапия. 1994. - Т. 39, № 7. - С. 15-19.

105. Чернякова, В.И. Бактериологическая и иммунологическая эффективность препарата биоспорина при неспецифическом язвенном колите / В.И. Чернякова, Н.М. Береза, С.И. Селезнева // Микробиол. журнал. 1993. - Т. 55, №3.-С. 63-67.

106. Штамм бактерий Bacillus pumilus для получения препарата против фитопатогенных микроорганизмов: пат. 1817875 Россия F01N 63/00,

107. C12N 1/20 / И.А. Хмель, JI.C. Чернин, Н.Б. Леванова и др.. -опубл. 20.05.95, Бюл. № 14.

108. Штамм Bacillus subtilis МЖ-6 антагонист микобактерий туберкулеза: пат. 2120992 Рос. Федерация С 12N 1/20 / И.И. Марков, И.П. Жданов, А.И. Марков. - опубл. 27.10.98, Бюл. № 30.

109. Штамм бактерий Bacillus subtilis продуцент комплекса гидролитических ферментов, обогащенных b-глюканазой: пат. 2046141 Рос. Федерация, С12 N 9/42 / Н.Г. Бочкарева, Ю.А. Белогорцев, Э.В. Удалова и др.. - опубл. 20.10.95, Бюл. №29.

110. Штамм бактерии В. mucilaginosus в качестве продуцента биостимулятора неспецифического иммунитета у телят: а.с. 1210452 СССР 1/00 / Е.Я. Виноградов, В.П. Шичкина. опубл. 27.04.96, Бюл. № 12.

111. Штамм бактерий Bacillus SP. компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергии: а.с. 1710575, S.U. / Л.И. Никитенко, В.И. Никитенко. -опубл. 5. 1992.

112. Штамм бактерий Bacillus subtilis продуцент L-фенилаланина: а. с. 1693056, С 12 Р 13/22 / Т.А. Ямпольская, Г.А. Великжанина, Н.И. Жданова и др.. - опубл. 23.11.91, Бюл. № 43.

113. Эндофитные растения рода Bacillus перспективные культуры для создания биологических средств защиты растений от болезней / И.А. Козачко, В.А. Вьюницкая, Т.Г. Бережнизкая и др. // Мшробюл. журнал. - 1995. - Т. 57, № 5. - С. 69-78.

114. Эффективность нового бактерийного препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций / Н.М. Грачева, А.Ф. Гаврилов, А.И. Соловьева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996. - № 1. - С. 75-77.

115. Blaznic, J. Sdravljenje kronicne granulomotozne bolezni z acidofilnem mlecom / J. Blaznic, I.M. Kumel, B. Salamum et al. // Zdrav.Vesth. 1976.- N 45. - P. 77-79.

116. Cromwick, A.M. Effects of pH and aeration on y-poly (glutamic acid) formation by bacillus licheniformis in controlled batch fermentor cultures / A.M. Cromwick, G.A. Birrer, R.A. Gross // Biotechnol. Bioeng. 1996. - Vol. 50, N 2. - P. 222-227.

117. Continuos production of the lipopeptide biosurfactant of Bacillus licheniformis JF-2 / S.C. Lin, K.S. Carswell, M.M. Sharma, G. Georgiou // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1994. - Vol. 41, N 3. - P. 281-285.

118. David, L. Enzyme producing of Вас. Bacteria: pat. 6177012 US С 00 F 3/34, C12N 1/14/ L. David, S.Steven, - заявка № 09291053; заявл. 14.04.1999; опубл. 23.01.2001.

119. Danchin, A. Bacillus subtilis devoile ses genes // Biofutur / Danchin A., Glasser P., KunstF. et al.- 1998. N 174. - P. 14-17.

120. Devin, K.M. The Bacillus subtilis genome project: Aims and progress // Trends Biotechnol. 1995. - V. 13, N 6. - P. 210-216.

121. Dercova K., Augustin I., Kraicova D. Cell growth and a-amylase production characteristics of Bacillus subtilis // Folia microbiol. CSSR. 1992. - V. 37, N l.-P. 17-23.

122. Donovan, W.P. Bacillus thuringiensis crytic, protein toxic to coleopteran isects // Патент N 5378625 США A61K 31/00 / W.P. Donovan, M.J. Rupar, A.C. Slanei Опубл. 03.01.95.

123. Gastro, G.R. Simul taneous production of alpha and beta amylases by Bacillus subtilis Mir-5 in batch and continuous culture / G.R. Gastro, M.A., Ferrero C.M. Abate et al // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 1. - P. 49-54.

124. Guida, V. Importansia dos Bacillos esporulados aerobios em gastroenterologia e nutricao / V. Guida, R. Guida // Rev. Brasil. Med. 1978. - Vol. 35, N 12. - P. 702-707.

125. Haldenwang, L. Influence of phosphate concentration on the respiratory activity of Azotobacter vinelandii / L. Haldenwang, V. Behrens // Z. Allg. Microbiol. -1983. Vol. 23, N 8. - P. 491-494.

126. Harrison, D. Study Group on Continuous Culture of Microorganisms / D. Harrison // Proc. 5th Int. Symp. Oxford, 1971. - P. 29.

127. Humbert F. Les probiotigues: un sujet d'actualite / F. Humbert // Bull. Inf. Stat. Exp. Auicult. Ploufragan. 1988. - Vol. 28, N 3. - P. 128-130.

128. Immunomodulation by Bacillus subtilis spores / J. Benedettini et al. // Boll. 1st. Sierote Milan. 1983. - Vol. 62, N 6. - P. 509-516.

129. Kimura, H. Bile acid-converting microorganism Bacillus sp. and a method of use: pat. 5869319 US С 12 P 7/40, C12R 1/07 / H. Kimura, Ogata To-Oru, A. Okamura. опубл. 02.09.1999.

130. Kishko Y.G., Vasylenko M.I., Podgorsky V.S., Kovalenko E.A. Lectin of Bacillus subtilis sp. As overinducer of Y-interferonogenesis // Млкробюлопчний журнал. 1997. -N 6, Т. 59. - С. 20-26.

131. Kubo Kazuhiro. Pure culture of Bacillus subtilis FERM BP-3418//Пат. N 5364738. США. МКИ A01N 25//00 / Kubo Kazuhir.- опубл. 15.11.94.

132. Kudrya V.A., Simonenko L.A. Alkaline serine proteinase and lectine isolation from the culture fluid of Bacillus subtilis // Appl. Microbiol, and Biotechnol. -1994. v. 41,N5. -P. 505-509.

133. Leviveld H.L.M., Bachmayer H., Boon B. et al. Safe biotechnology. Part 6. Safety assessment, in respect of human health of microorganisms used in biotechnology // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1995. V. 43, N 3. - P. 389393.

134. Martins, M. Influence of the oxygen and growth rate on the metabolic activity of Bacillus stearothermophilus grown in glucose-limited cultures / M. Martins, L. Lelis // Rev. Microbiol. 1996. - Vol. 27, N. 3. - P. 166-170.

135. Martins, M. Effect of the dissolved oxygen level on the metabolic activity of Bacillus stearothermophilus when growing on glycerol in chemostat culture / M. Martins, L. Lelis // Rev. Microbiol. 1997. - Vol. 28, N 2. - P. 96-100.

136. Misaghi, I .J. Endophytic Bacteria in Symton tree Cotton Plants / I J. Misaghi, C.R. Doundelinger // Pyitopatology -1990 - V 80, № 9.- P. 808-811.

137. Moszer, I. A relational database for the Bacillus subtilis genome / Moszer I., Glaser P., Danchin A. SubtiList // Microbiology. 1995. - V. 141, N 2. - P. 261-268.

138. Payne Jewel M. Isolates of Bacillus thuringiensis Hist are active ayanist nematodes / Патент N51513 63,C12N 1/20, A 01 N 63/00, заявл. 27.07.90., опубл. 29.09.92.

139. Rodriewicz, A. Wykorzystanie bacterii z rodzaju Bacillus do produckcji pozakomoakowych proteinaz Cz.II / A. Rodriewicz // Zesz. nauk. AR Wroclawiu Technol. Zyw. 1989. - N 5. - P. 207-217.

140. Rychen, G. Effets des flores lactigues des produits laitiers fermentes: Une base scientifigue pour 1'etude des probiotigues microbiens dans l'espece porcine / G. Rychen, C. Simoes Nunes // Prod. Anim. 1995. - Vol. 8, N 2. - P. 97-104.

141. Selim, M.H. Proteases from thermophilic bacilli / M.H. Selim, G. El-Masry Hoda // Microbios. 1990. - Vol. 63, N 254. - P. 55-63.

142. Su Li, Wuhan daxue xuebao. Ziran kexue ban / Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin // J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Ed. 1996. - V. 42, N 4. -C. 516-518.

143. Testolin, G. Batteri lattici e latti fermentati nella functionalita dell apparato gastro intestinale / G. Testolin, M. Gasiraghi // Ind. Latte. - 2000. - Vol. 36, N1-2.-P. 49-65.

144. Touati, D. Regulation and protective role of the microbial superoxide dismutases / D. Touati // Mol. Biol. Free Radic. Scaveng. Syst. Cold. Spring Harbor, 1992.-P. 231-261.

145. Tsuge Kenji Characterization of Bacillus subtilis YB8, coproducer of lipopeptides surfactin and plipastatin B1 / Tsuge Kenji, Ano Takashi, Shoda Macoto // J. Gen. Appl. Microbiol. 1995. - Vol. 41, N 6. - P. 541-545.

146. Yamada S. Biological activity of antifungal substances produced by Bacillus subtilis // S.Yamada,. Y.Takayama, M .Jamanaka.- Pestic. Sci. 1990. - V. 15, N 1. - P. 95-96.

147. Yoshimoto T. Nucleotide sequence of the neutral protease gene from Bacillus subtilis var. amylosacchariticus // T. Yoshimoto, H. Oyama, T. Takechita et aJ. -Ferment. andBioeng. 1990. -V. 70, N 6. P. 370-375.