Разработка методики хромато-масс-спектрометрического контроля качества биологического лекарственного препарата на примере моноклональных антител омализумаб и экулизумаб тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Дегтерев Максим Борисович

• Дегтерев Максим Борисович
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Дегтерев Максим Борисович

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ПЕРСПЕКТИВЫ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ В РАЗРАБОТКЕ И КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ БЕЛКОВ (обзор литературы)

1.1. Биотехнологические лекарственные средства

1.1.1. Инновационные препараты и биоаналоги. Требования, предъявляемые к биоаналогичным препаратам

1.1.2. Терапевтические моноклональные антитела

1.2. Строение и классификация антител

1.2.1. Функции антител

1.2.2. Получение моноклональных антител

1.2.3. Виды моноклональных антител

1.2.4. Модифицированные антитела

1.2.4.1. Радиоиммунноконъюгаты

1.2.4.2. Конъюгаты антител с низкомолекулярными соединениями

1.2.4.3. Биспецифические антитела

1.2.4.4. Миметики антител

1.2.5. Номенклатура терапевтических антител

1.2.6. Цели терапии антителами

1.2.7. Выбор объектов исследования и их краткое описание

1.2.7.1. Экулизумаб

1.2.7.2. Омализумаб

1.3. Аналитическое сопровождение разработки и контроль качества моноклональных антител

1.3.1. Установление профиля показателей качества и отбор критических параметров качества терапевтического белка

1.3.2. Масс-спектрометрия в контроле качества терапевтических антител

1.3.2.1. Способы ионизации белка

1.3.2.2. Масс-анализаторы

1.3.2.3. Тандемная МС и МС высоких порядков

1.3.2.4. Типы фрагментации ионов

1.3.3. Разделение компонентов пробы перед масс-спектрометрическим анализом

1.3.4. Стратегии масс-спектрометрического анализа терапевтических белков

1.3.4.1. Измерение массы интактного белка, middle up, top down и middle down

1.3.4.2. Bottom up

1.3.5. Multiple Attribute Method

1.3.5.1. MAM: текущее состояние

1.3.5.2. Перспективы MAM

1.3.5.3. Оценка и результатов анализа

1.4. Выводы к главе

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Материалы

2.2. Оборудование и методы

2.2.1. Методика подготовки образцов антител для MAM-анализа

2.2.2. Подбор времени трипсинолиза целевых белков

2.2.3. Тандемная хромато-масс-спектрометрия для MAM

2.2.4. Валидация методики MAM

2.2.5. Индуцированная деградация антител

2.2.6. Изоэлектрическое фокусирование

2.2.7. Катионообменная хроматография

2.2.8. Обращённо-фазовая ВЭЖХ интактных антител

2.2.9. Обращённо-фазовая ВЭЖХ субъединиц антител

2.2.10. Гидрофильная хроматография свободных гликанов

2.2.11. Оценка сопоставимости референтных и кандидатных препаратов разработанной методикой MAM

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Тандемная хромато-масс-спектрометрия трипсинолизатов: разработка протокола пробоподготовки

3.2. Выбор условий MAM анализа трипсинолизатов

3.3. В алидация методики MAM

3.3.1. Специфичность

3.3.2. Предел обнаружения

3.3.3. Линейность и аналитическая область

3.3.4. Правильность

3.3.5. Сходимость

3.3.6. Внутрилабораторная воспроизводимость

3.3.7. Устойчивость

3.4. Валидация аминокислотной последовательности белков

3.5. Исследования посттрансляционных модификаций

3.6. Сравнительный анализ профилей термической деградации

3.7. Сравнительный анализ профилей окислительной деградации

3.8. Сравнительный анализ профилей гликозилирования

3.9. Картирование дисульфидных связей

3.10. Подтверждение сопоставимости препаратов омализумаба и экулизумаба

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методики хромато-масс-спектрометрического контроля качества биологического лекарственного препарата на примере моноклональных антител омализумаб и экулизумаб»

Актуальность темы исследования.

На сегодняшний день биотехнологические разработки являются основным драйвером развития фармацевтической отрасли. С одной стороны, они требуют наибольших затрат, а с другой - дают возможность бороться с ранее неизлечимыми критическими и смертельными заболеваниями. В российском в актуальном Перечне ЖНВЛП несколько десятков наименований относятся к биотехнологическим рекомбинантным белкам, и включают в себя противоаутоиммунные, противоопухолевые, противогемофилические и другие белки, предназначенные для терапии тяжёлых заболеваний. Обязательным условием регистрации как инновационного, так и биоаналогичного терапевтического белка является глубокая характеризация его свойств, обеспечивающая понимание возможных изменений молекулы в результате воздействия на неё различных факторов и связанных с ними отклонений в терапевтической эффективности и безопасности. Как правило, такая цель достигается интенсивными исследованиями разрабатываемой молекулы широким спектром физико-химических методов анализа. Однако, последовательное усложнение и самих биотехнологических лекарственных белков, и процесса их производства ставит перед исследователями новые преграды, преодолеть которые возможно только с применением новых аналитических методик. Одним из наиболее динамично развивающихся направлений такого анализа является хромато-масс-спектрометрия, позволяющая одновременно контролировать широкий ряд показателей качества целевого продукта, что было бы невозможно с использованием других техник. Такой анализ получил название Multiple Attribute Method (MAM); его применение позволяет, с одной стороны, ускорить процессы разработки за счёт быстрой и при этом глубокой оценки профиля критических показателей качества (critical quality attribute, CQA) белка, а с другой -надёжно контролировать производственные серии, своевременно устанавливая отклонения от профиля CQA.

Степень разработанности темы исследования.

К настоящему моменту MAM очень широко применяется в разработке моноклональных антител. Применение этого подхода в выпускающем контроле качества пока не столь распространено, и ограничивается высокими требованиями к квалификации аналитиков и необходимости использования дорогостоящего оборудования. С момента первой публикации по этой теме [Rogers с соавт., 2015] появился ряд работ, направленных на минимизацию появления артефактных изменений в испытуемых молекулах в ходе пробоподготовки, исследована возможность применения MAM для «типичных»

модификаций антител, в том числе N- и C-концевых вариантов, окисления метионина и триптофана, деградации аспарагина, гликозилирования, в том числе и по нескольким сайтам в одной молекуле.

Однако, спектр исследованных таким образом антител очень узок. Также не проводилось попыток картировать при помощи MAM расположение дисульфидных связей в антителах, несмотря на важность этого параметра для формирования правильной пространственной структуры молекулы. И, кроме того, в валидации MAM до сих пор не рассматривался подход с одновременным использованием группы параметров качества, что потенциально позволило бы гораздо глубже охарактеризовать саму методику и очертить границы её применимости. Решение поставленных выше вопросов стало целью данной работы.

Цель исследования.

Разработка хромато-масс-спектрометрического метода характеризации параметров качества биологических лекарственных препаратов на примере моноклональных антител омализумаб и экулизумаб.

Задачи исследования:

1. Разработать способ быстрой подготовки проб моноклональных антител омализумаб и экулизумаб для анализа по стратегии MAM.

2. Разработать методику MAM-анализа для характеризации параметров качества молекул моноклональных антител, включающих в себя валидацию аминокислотной последовательности, идентификацию сайтов и контроль долей значимых посттрансляционных модификаций, таких как окисление, дезамидирование, отщепление С-концевых лизинов, образование пироглутамовой кислоты, гликозилирование, и выбора критических параметров качества.

3. Провести валидацию разработанного метода.

4. Сравнить результаты полуколичественного анализа основных гликоформ и модификаций белков, полученных методом ВЭЖХ-МС/МС, с результатами ортогональных методов.

5. Оценить возможность применения разработанной методики для анализа дисульфидных связей в исследуемых белках.

6. Апробировать предложенные способы контроля качества разрабатываемых и производимых препаратов в повседневной рабочей практике Отдела аналитических методов ООО «МБЦ «Генериум».

Научная новизна исследования.

Впервые разработаны условия трипсинолиза моноклональных антител, обеспечивающие высокую скорость и воспроизводимость анализа и минимизацию образования артефактов за счёт выполения стадий восстановления и алкилирования тиолов после обработки белка трипсином, разработана методика одновременной оценки подлинности и чистоты терапевтических моноклональных антител омализумаб и экулизумаб при помощи ВЭЖХ-МС/МС анализа по методологии MAM.

Впервые проведена валидация методики MAM по группе параметров качества каждого из антител.

Впервые разработана схема выявления сайтов модификаций молекул моноклональных антител омализумаб и экулизумаб с использованием схем принудительной деградации и хромато-масс-спектрометрического анализа; произведена сравнение профилей их окислительной и термической деградации, полученных методами MAM, изоэлектрофокусирования, ионообменной и обращённо-фазовой ВЭЖХ, и подтверждены более высокая специфичность, чувствительность и аналитическое разрешение MAM.

На примере экулизумаба и омализумаба впервые показана пригодность MAM для картирования дисульфидных связей моноклональных антител.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Одновременная оценка критических параметров качества терапевтических моноклональных антител в разработанной методике позволяет использовать ее как ортогональный способ анализа для иных биофармацевтических исследований, а также применять в контроле качества выпускаемых серий фармацевтических субстанций и/или лекарственных препаратов.

Предложенный способ анализа может стать перспективной заменой для большой группы методов, таких как ионообменная ВЭЖХ, изоэлектрофокусирование, гидрофильная ВЭЖХ фракции свободных гликанов, анализ свободных тиолов по Эллману, ОФ-ВЭЖХ. Это позволит значительно интенсифицировать процесс разработки молекул терапевтических белков.

Разработанный метод внедрен в научно-исследовательскую деятельность Лаборатории физико-химических методов Отдела аналитических методов «МБЦ «Генериум» и используется в рутинном анализе фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов при оценке сопоставимости кандидатных и оригинальных

препаратов моноклональных антител, профилировании деградации; производится внедрение метода в этапы разработки молекул терапевтических белков.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационное исследование выполнено в соответствии со Стратегией научно-технологического развития РФ, Указом Президента РФ N 899 "Об утверждении приоритетных направлений развития науки, технологий и техники в Российской Федерации и перечня критических технологий Российской Федерации".

Содержание диссертации соответствует паспорту специальности 3.4.2 -«Фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты исследования соответствуют пунктам 2 и 3 паспорта специальности «Фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Методология и методы исследований.

Эксперименты выполнены с использованием следующих физико-химических методов исследования: изоэлектрофокусирования, гидрофильной ВЭЖХ меченых гликанов с флуориметрическим детектированием, ионообменной ВЭЖХ, ОФ-ВЭЖХ, и ОФ-ВЭЖХ, совмещенной с тандемной масс-спектрометрией высокого разрешения с ионизацией электрораспылением.

Положения, выносимые на защиту.

1. Методика ускоренной подготовки проб моноклональных антител омализумаб и экулизумаб для анализа по методологии Multiple Attribute Method.

2. Методика MAM-анализа трипсинолизатов моноклональных антител омализумаб и экулизумаб и способ её валидации по группе PQA.

3. Способ выбора CQA и поиска лабильных к модифицированию участков молекул моноклональных антител путем воздействия стрессовых условий с последующим MAM-анализом протеолизатов.

4. Возможность картирования дисульфидных связей в молекулах моноклональных антител омализумаб и экулизумаб методом MAM.

5. Подтверждение сопоставимости препаратов омализумаба и экулизумаба по результатам анализа, выполненного методом MAM.

Степень достоверности и апробация результатов исследования.

Результаты диссертационной работы были представлены в виде постеров и докладов на конференциях 64-ой Ежегодной конференции Американского масс-спектрометрического общества (Сан-Антонио, США, 2016), 65-ой Ежегодной конференции Американского масс-спектрометрического общества (Индианаполис, США, 2017),

Международном форуме «Биотехнология: состояние и перспективы развития. Науки о жизни» (Москва, 2018).

Достоверность экспериментальных результатов и сделанных на их основе выводов определяется комплексным характером работы, использованием независимых друг от друга современных инструментальных методов, широким перечнем привлеченных источников и видов информации. Все результаты проанализированы статистически. Сформулированные в работе выводы обоснованы и вытекают из полученных экспериментальных результатов.

Публикации материалов исследования.

По теме диссертационной работы опубликовано 9 научных работ, в том числе 5 статей научных изданиях, рекомендованных ВАК и 4 тезиса докладов.

Личный вклад автора.

Автор самостоятельно проводил обзор и анализ литературы, разработку и обсуждение основных идей диссертационной работы; подбор условий специфического ферментативного расщепления исследуемых белков, разработка, валидацию и апробацию методики хромато-масс-спектрометрического анализа, выбор условий ускоренной деградации антител и её проведение, интерпретацию полученных результатов поиска, проверки и полуколичественной оценки посттрансляционных модификаций и профилей деградации исследуемых белков и статистическую обработку полученных результатов.

ГЛАВА 1. ПЕРСПЕКТИВЫ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ В РАЗРАБОТКЕ И

КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ БЕЛКОВ

(обзор литературы).

1.1. Биотехнологические лекарственные средства

К настоящему времени доля стоимости разработок и объёма продаж биофармацевтических препаратов составляет порядка 30% от общего фармацевтического рынка [1]. Еще в 2015 г. инвестиции в исследования и разработки в области биофармацевтики в США составили порядка 58,8 млрд долларов, что больше, чем сумма инвестиций на разработки во всех других областях [2].

Начало масштабным генно-инженерным работам во всем мире положили разработки гибридомной технологии в 1975 г. и метода ПЦР в 1980-х гг [3], [4]. Первыми успешными примерами проектов выпуска рекомбинантных лекарственных белков стали инсулин (1982 г., Humulin, компания Eli Lilly) и гормон роста человека (1985 г., Protropin, компания Genentech) [5], [6]. С тех пор спектр биофармацевтических пептидных и белковых лекарственных средств неуклонно расширялся, и к настоящему моменту перечень зарегистрированных препаратов только моноклональных антител включает в себя уже сто наименований [7]. Их спектр препаратов представлен различными видами молекул: от относительно небольших пептидных гормонов до комплексов антител, но наиболее значимая его часть - это моноклональные антитела и их производные.

1.1.1. Инновационные препараты и биоаналоги. Требования, предъявляемые к биоаналогичным препаратам

Значительная часть разрабатываемых и выпускаемых в настоящее время препаратов моноклональных антител относится к группе биоподобных препаратов (биоаналогов). Согласно определению FDA, биоаналог - это биопрепарат, не имеющий клинически значимых отличий по качеству, эффективности и безопасности от ранее одобренного биопрепарата [8]. Истечение сроков эксклюзивного права на выпуск оригинальных препаратов для компаний-разработчиков стимулирует разработки биоаналогов, поскольку их производство часто оказываются дешевле и/или проще, чем у оригинальных молекул. Однако, к биоаналогу предъявляются гораздо более строгие регистрационные требования, чем к дженерикам низкомолекулярных соединений: FDA рекомендует проводить всестороннюю характеризацию вновь созданной молекулы. Исследования включают в себя, во-первых, структурный анализ, состоящий из валидации аминокислотной последовательности, анализа структур высоких порядков (вторичной, третичной,

четвертичной) и склонности к аггрегированию, а также посттрансляционных и химических модификаций. Во-вторых, выполняют функциональный анализ, подтверждающий подобие механизмов действия, эффективности и безопасности, проводимый как методами in vitro (иммунохимическими и биологическими), так и in vivo (использованием животных моделей). И в-третьих, организуют доклинические испытания для установления токсичности и иммуногенности, оценки фармакокинетики и фармакодинамики. Заключительная, и наиболее дорогая стадия, - это клинические испытания кандидатного белка [9]. Правильно организованные сравнительные исследования позволяют всесторонне изучить свойства разрабатываемой молекулы. Это позволяет не только получить научно обоснованное заключение о биоподобии, но и ускорить процесс регистрации, за счёт сокращения или исключения наиболее дорогостоящей и времязатратной части исследований - клинических испытаний, что также является важным преимуществом разработки биоаналогичных препаратов.

1.1.2. Терапевтические моноклональные антитела

Терапевтические моноклональные антитела на сегодняшний день представляют собой класс перспективных высокоспецифичных, высокоактивных и безопасных лекарственных препаратов, применяющихся в диагностике и лечении тяжелых раковых, аутоиммунных и наследственных заболеваний и воспалительных процессов.

1.2. Строение и классификация антител

Антитела - глобулярные белки, относящиеся к классу иммуноглобулинов, которые продуцируются иммунной системой животного организма в ответ на появление чужеродных молекул и специфически с ними взаимодействуют [10].

Молекула иммуноглобулина (в среднем 148 кДа) состоит из двух соединенных попарно легких (23 кДа) и двух тяжелых (50 кДа) цепей. Цепи соединены друг с другом при помощи дисульфидных связей и нековалентных взаимодействий. Аминокислотные последовательности пар легких и тяжелой цепей идентичны друг другу. Ферментативное расщепление антитела папаином приводит к образованию двух Fab- и одного Fc-фрагмента (приблизительно по 50 кДа). Антиген-связывающие сайты находятся в составе Fab-фрагментов, Fc-фрагмент не способен к связыванию антигенов.

На N-концах легких и тяжелых цепей располагаются гипервариабельные участки антитела (CDR, V), аминокислотные последовательности которых отличаются у разных антител. Наибольшей вариабельностью отличаются участки легкой цепи, расположенные рядом с 30, 55 и 95 аминокислотными остатками. Эти части молекулы формируют антиген-

связывающие сайты антитела, определяя его специфичность. Фрагменты полипептидной цепи, располагающиеся между соседними CDR, отличаются консервативной последовательностью, и называются каркасными участками (framework residues). В легких цепях содержится по два, а в тяжелых - по 4-5 повторяющихся гомологичных доменов. Домены легкой цепи носят название Vl и Cl, а тяжелой - Vh, Ch1, Ch2, Ch3. Трехмерная структура каждого домена напоминает петлю, которая формируется в результате образования дисульфидной связи между сульфгидрильными группами цистеинов, расположенных по краям доменных участков. Домены обладают схожими конформациями, причем V-домены легкой и тяжелой цепи находятся в соседних положениях и формируют V-домен целого антитела, в котором находится антиген-связывающее углубление. На С-концах легких и тяжелых цепей антитела расположены консервативные (C) участки, аминокислотная последовательность которых у разных антител практически идентична. Они отвечают за эффекторные функции антител.

Fab-фрагменты антител способны менять угол относительно друг друга (от 60 до 180°), что играет важную роль в связывании антигена. Этот подвижный участок, формирующий своеобразную вилку в Y-подобной структуре антитела, носит название шарнирной области (hinge region), и располагается между доменами Ch1 и Ch2. Шарнирные области присутствуют только в молекулах иммуноглобулинов G, D и A. Иммуноглобулины также содержат гликаны, состав и сайты прикрепления которых определяются в зависимости от класса антитела [11]. Схема молекулы антитела на примере IgG представлена ниже (Рисунок 1).

В зависимости от особенностей строения тяжелых цепей, все иммуноглобулины делятся на 5 основных классов: IgA, IgD, IgE, IgG, и IgM. 75% все антител человеческой сыворотки крови относится к IgG, которые обладают наибольшим периодом полувыведения, а также единственные способны транспортироваться через плацентарный барьер. Антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимая цитотоксичность (CDC), два основных эффекторных свойства, обладающих наибольшей ценностью в иммунотерапии раковых заболеваний, также инициируются IgG. По этой причине практически все терапевтические антитела разрабатываются на основе структуры

IgG [12].

Антиген-свя(ывающие углублении

Рисунок 1. Схематическая структура IgG [11].

1.2.1. Функции антител

Антитела обеспечивают иммунный ответ тремя основными способами. Во-первых, они осуществляют прямое связывание (нейтрализацию) антигенов с их последующим фагоцитозом или выведением из организма, тем самым препятствуя их адгезии, проникновению в клетки организма-хозяина и блокируя токсический эффект. Во-вторых, связываются с патогеном и стимулируют его поглощение макрофагами и специализированными гранулоцитами. Этот механизм, называемый опсонизацией, лежит в основе антителозависимой клеточной цитотоксичности. И в-третьих, запускают разрушение антигенов путем стимуляции системы комплемента и образования мембраноатакующих комплексов. Последние формируют поры в клеточных стенках патогенных микроорганизмов, что приводит к нарушению их осмотического давления и лизису.

1.2.2. Получение моноклональных антител

Первоначально возможность промышленного производства моноклональных антител была реализована через технологию гибридомы. Ее суть сводится к получению гибридной

линии из двух типов клеток: первый, полученный из организма грызуна, является продуцентом целевого белка, а второй (клетки раковой опухоли, например, миеломы) обладает способностью к неограниченному размножению [13]. Однако, к настоящему времени эта технология вытеснена более простыми и дешёвыми вариантами. Один из самых популярных - получение антител в клетках яичников китайского хомячка (CHO), им в настоящее время производятся большинство рекомбинантных терапевтических белков

[14]. Использование линии CHO отличается высоким выходом продукта (до десяти граммов белка на литр культуры) и относительной простотой генетических манипуляций.

1.2.3. Виды моноклональных антител

Заметным недостатком использования CHO в качестве продуцентов является повышенная иммуногенность продукта, необходимость снижения которой привела к разработке нескольких поколений моноклональных антител:

- моноклональные антитела грызунов: рекомбинантные белки, на 100% состоящие из аминокислотных последовательностей, характерных для грызунов (хомяков). Представляют собой первое поколение рекомбинантных антител, и характеризуются наиболее высокой, в сравнении с последующими, иммуногенностью. Примерами таких белков являются Муромонаб (первое терапевтическое моноклональное антитело, одобренное FDA в 1992 г; применяется в трансплантологии), Эдреколомаб (лечение рака кишечника) и Ибритумомаб (лечение В-клеточной лимфомы).

- гуманизированные моноклональные антитела - белки, состоящие примерно на 34% из последовательностей, характерных для грызунов, и на 66% - для человека, со сниженной иммуногенностью. Характерный представитель - «Мабтера» (Ритуксимаб), использующийся в терапии В-клеточной лимфомы и ревматоидного артрита.

- химерные моноклональные антитела: первичная последовательность состоит из человеческих фрагментов на 90-95%. Наиболее известные препараты: «Герцептин» (Трастузумаб), «Ксолар» (Омализумаб) и «Солирис» (Экулизумаб), применяемые для лечения рака груди, тяжелых случаев астмы, пароксизмальной ночной гемоглобинурии, атипичного гемолитико-уремического синдрома, миастении гравис и оптиконевромиелита.

- человеческие моноклональные антитела на 100% представлены характерной для человека аминокислотной последовательностью, но экспрессируются в клетках грызунов

[15]. Примерами этого класса являются противоревматоидная «Хумира» (Адалимумаб) и противораковый «Вектибикс» (Панитумумаб).

На сегодняшний день рынок терапевтических моноклональных антител представлен по большей части препаратами химерных и человеческих антител [16].

1.2.4. Модифицированные антитела

Попытки повысить терапевтическую эффективность моноклональных антител, привели к появлению широкого спектра модифицированных белков, наиболее заметными из которых радиоиммуноконъюгаты, конъюгаты с низкомолекулярными лекарственными средствами, биспецифические антитела и миметики антител.

1.2.4.1. Радиоиммунноконъюгаты

Радиоиммуноконъюгаты - это моноклональные антитела с введенным в их состав радиоактивным изотопом 131I. К 2016 году FDA одобрило использование в медицинской практике двух веществ такого рода: ибритомумаб тиуксетан и тоситумомаб, предназначенных для лечения лимфомы. К сожалению, их прогресс осложнен необходимостью привлечения специалистов с опытом в области ядерной медицины и развитием альтернативных схем лечения. Исследования радиоиммуноконъюгатов ведутся в области получения новых радиоизотопов, испускающих альфа-лучи, для высокоспецифического воздействия на ткани опухолей и снижения вероятности развития сопутствующих радиационных поражений [17].

1.2.4.2. Конъюгаты антител с низкомолекулярными соединениями

Конъюгаты антител с низкомолекулярными лекарственными веществами для противоопухолевой терапии объединяют высокие цитотоксичность химиотерапевтических агентов и специфичность моноклональных антител. На рынке есть три таких препарата: T-DM1 или «Кадцила» (Roche/Genentech) для терапии негематологических новообразований, брентуксимаб ведотин («Адцетрис», Seattle Genetics) для лечения некоторых видов лимфом, и противолейкемический гемтузумаб озогамицин («Милотарг», Pfizer). Несколько десятков молекул сейчас находятся на различных стадиях клинических испытаний.

Основными проблемами разработки конъюгатов антител являются низкая эффективность доставки, экспрессия целевых антигенов в здоровых тканях и ее гетерогенность в различных областях опухоли. Несмотря на это, их разработка остается одной из наиболее перспективных областей иммуннотерапии раковых заболеваний [18].

1.2.4.3. Биспецифические антитела

Биспецифические антитела - это антитела, способные одновременно связывать несколько антигенов. Существует пять основных видов этих молекул:

- симметричные IgG и IgG-подобные молекулы (би- и тетравалентные);

- ассимметричные IgG и IgG-подобные молекулы;

- гибридные белки из двух активных фрагментов антител, присоединенных к белку-носителю неиммуноглобулиновой природы (например, альбумину);

- малые белковые молекулы, состоящие только из активных центров антител без использования белка-носителя;

- химические конъюгаты полноразмерных антител (рисунок 2).

Symmetric IgG and IgG-llke molecules

Bivalent Tetravalent

Small molecules Non-lmmunoglobulln

fusion proteins

Рисунок 2. Типы биспецифических антител [19]

Подавляющее большинство биспецификов разрабатываются для противораковой терапии. На рынке представлены два таких препарата: «Катумаксомаб» (Fresenius Biotech) и «Блинатумомаб» (Amgen); еще несколько десятков проходят клинические испытания [19], [20].

1.2.4.4. Миметики антител

Границы терапевтической эффективности моноклональных антител определяются сложностью проникновения в солидные опухоли, иммуногенностью, наличием шести гипервариабельных участков и гликанов и сложной многоцепочечной структурой. Кроме того, часто для достижения лечебного эффекта необходима высокая доза препарата, что удорожает производство и может спровоцировать аномалии в фармакокинетике. Для преодоления этих ограничений стали создавать антитело-подобные соединения - миметики антител. За счет меньших размеров они, в сравнении с «классическими» антителами, более высоким сродством к целевым молекулам, способностью проникать в ткани организма и кровяным клиренсом, а также более выгодным с экономической точки зрения производством.

Миметики антител могут получают направленной эволюцией белка или слиянием гипервариабельных участков. Первая состоит из идентификации кандидатной

последовательности ДНК, увеличения количества ее вариантов ПЦР с использованием неточной полимеразы, амплификации вариантов и отбора молекул по близости свойств к заданным. Слияние гипервариабельных участков осуществляют через каркасный участок антитела в качестве промежуточного звена.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дегтерев Максим Борисович, 2022 год

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

[1] URL:http://www.strategyr.com/MarketResearch/Biopharmaceuticals_Market_Trends.asp

[2] PhRMA annual 2016 Pharmaceutical Industry Profile. URL: http://phrma-docs.phrma.org/sites/default/files/pdf/biopharmaceutical-industry-profile.pdf

[3] Kohler, G. et al. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 256 (1975), pp. 495-497.

[4] Rabinow P. Making PCR: A Story of Biotechnology. - Chicago: University of Chicago Press, 1996.

[5] Johnson, I.S. Human insulin from recombinant DNA technology. Science, 219, Issue 4585 (1983)pp. 632-637

[6] URL: www.gene.com/media/press-releases/4235/1985-10-18/fda-approves-genentechs-drug-to-trat-ch.

[7] Mullard A. FDA approves 100th monoclonal antibody product. Nat Rev Drug Discov. 2021 May 5. doi: 10.1038/d41573-021-00079-7.

[8] URL:http://www.fda.gov/Drugs/DevelopmentApprovalProcess/HowDrugsareDevelopedand Approved/ApprovalApplications/TherapeuticBiologicApplications/Biosimilars/ucm241718.htm

[9] Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity to a Reference Product. Guidance for Industry. U.S. Department of Health and Human Services. Food and Drug Administration. Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Center for Biologics Evaluation and Research (CBER), 2015.

[10] URL: http://humbio.ru/humbio/immunology/imm-gal/00049f5d.htm

[11] Klaus D. Elgert. Immunology: Understanding The Immune System, 2nd Edition. - Wiley, 2009. 726 p.

[12] Yi Wang / Structural Characterization of Immunoglobulin G Antibodies with LC-MS Based Approaches. Diss. Ph.D. Northeastern University. Boston, Massachusetts, 2012.

[13] URL:https://web.archive.org/web/20141005163822/http://www.cancer.gov/cancertopics/un derstandingcancer/immunesystem/page36

[14] https://en.wikipedia.org/wiki/Chinese hamster ovary cell

[15] Chadd H, Chamow S / Therapeutic antibody expression technology. Current Opinion in Biotechnology. 2001 vol: 12 (2) pp: 188-194.

[16] URL:http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/GenesClinical/monoclonalantibodies/

[17] George J. Weiner / Building better monoclonal antibody-based therapeutics. Nat Rev Cancer. 2015 Jun; 15(6): 361-370.

[18] Nikolaos Diamantis, Udai Banerji / Antibody-drug conjugates—an emerging class of cancer treatment. British Journal of Cancer (2016) 114, 362-367.

[19] Roland E. Kontermann, Ulrich Brinkmann / Bispecific antibodies. Drug Discovery Today. Volume 20, Issue 7, July 2015: 838-847.

[20] Gaowei Fan, Zujian Wang, Mingju Hao and Jinming Li / Bispecific antibodies and their applications. Journal of Hematology & Oncology (2015) 8:130.

[21] URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Antibody_mimetic

[22] Baloch AR, Baloch AW, Sutton BJ, Zhang X / Antibody mimetics: promising complementary agents to animal-sourced antibodies. Crit Rev Biotechnol. 2016;36(2):268-75.

[23] URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Nomenclature_of_monoclonal_antibodies

[24] И.В. Чехонин, А.В. Леопольд, О.И. Гурина, А.В. Семёнова / Моноклональные антитела в терапии низкодифференцированных глиом. Вестник РАМН. 2014; 9-10: 131-139.

[25] URL:https://en.wikipedia.org/wiki/Monoclonal antibody therapy#Targeted conditions

[26] URL: http://www.americanpharmaceuticalreview.com/Featured-Articles/177490-Monoclonal-Antibody-Targets-and-Indications/

[27] URL: http://www.rlsnet.ru/tn index id 49877.htm

[28] URL: http://www.rlsnet.ru/mnn index id 3748.htm

[29] US Food and Drug Administration, author. Notice of pilot program for submission of quality information for biotechnology products in the Office of Biotechnology Products FDA, docket number FDA-2008-N-03551. 2008.

[30] Andrew M Goetze, Matthew R Schenauer, Gregory C Flynn / Assessing monoclonal antibody product quality attribute criticality through clinical studies. mAbs. 2010 Sep-Oct; 2(5): 500-507.

[31] CMC Biotech Working Group. A-Mab: A Case Study in Bioprocess Development, Version 2.1. CASSS: Emeryville, CA, 30 October 2009; www.casss.org/associations/9165/files/A-Mab Case Study Version 2-1.pdf.

[32] EMA, Guideline on development, production, characterization and specification for monoclonal antibodies and related products, EMA/CHMP/BWP/532517/2008 (July 2016).

[33] Torkashvand F, Vaziri B. Main Quality Attributes of Monoclonal Antibodies and Effect of Cell Culture Components / Iran Biomed J. 2017 ;21(3). P.: 131-141.

[34] Руководство по экспертизе лекарственных средств. Том IV. — М.: Издание ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России, 2014.

[35] Nowak C, K Cheung J, M Dellatore S, Katiyar A, Bhat R, Sun J, Ponniah G, Neill A, Mason B, Beck A, Liu H. Forced degradation of recombinant monoclonal antibodies: A practical guide / MAbs. 2017 Nov/Dec;9(8). P. 1217-1230.

[36] Development of Therapeutic Protein Biosimilars: Comparative Analytical Assessment and Other Quality-Related Considerations Guidance for Industry. DRAFT GUIDANCE. U.S. Department of Health and Human Services. Food and Drug Administration. Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). May 2019, Biosimilars (https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/development-therapeutic-protein-biosimilars-comparative-analytical-assessment-and-other-quality).

[37] Liu H, Ponniah G, Zhang HM, Nowak C, Neill A, Gonzalez-Lopez N, Patel R, Cheng G, Kita AZ, Andrien B. In vitro and in vivo modifications of recombinant and human IgG antibodies / MAbs. 2014;6(5). P.1145-1154.

[38] URL: www.nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/2002/.

[39] Karoly Vekey, Andras Telekes, and Akos Vertes. Medical applications of mass spectrometry.

- Elsevier, 2008. 581 p.

[40] John R Yates III / Nature Methods. 2011. Vol.8, No.8, 633-637.

[41] URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Electrospray_ionization

[42] Lars Konermann, Elias Ahadi, Antony D. Rodriguez, Siavash Vahidi / Analytical Chemistry. 2013. V. 85. P. 2-9.

[43] Konstantin Chingin, Vladimir Frankevich, Roman M. Balabin, Konstantin Barylyuk, Huanwen Chen, Rui Wang, Renato Zenobi. / Angew. Chem. 2010. 122. P. 2408 -2411.

[44] Lebedev A.T., Artemenko K.A., Samgina T.U. Osnovy mass-spektrometrii belkov I peptidov.

- Moskva: Tehnosfera, 2012. 176 p.

[45] URL: https://nationalmaglab.org/user-facilities/icr/techniques/maldi.

[46] H. Ehring, M. Karas, F. Hillenkamp / Org. Mass Spectrom. 1992. 27. P. 472-480.

[47] M. Karas, R. Kruger / Chem. Rev. 2003. 103. P. 427-440.

[48] Krüger R, Pfenninger A, Fournier I, Gluckmann M, Karas M / Anal.Chem. 2001. 73. P. 58125821.

[49] M. Karas, M. Gluckmann, J. Schafer / J. Mass Spectrom. 2000. 35. P. 1-12.

[50] Wei Chao Changa, Ling Chu Lora Huanga, Yi-Sheng Wanga, Wen-Ping Penga, Huan Cheng Changb, Nien Yeen Hsuc, Wen Bin Yanga, Chung Hsuan Chena / Analytica Chimica Acta2007. 582. P 1-9.

[51] Viswanatham Katta, Mary Zhu, Jennifer Zhang / Abstracts of the ASMS 2008, Denver, USA.

[52] Bernd O. Keller, Liang Li / J Am Soc Mass Spectrom. 2001. 12. P. 1055-1063.

[53] Yong Yang, Sheng Zhang, Kevin Howe, David B. Wilson, Felix Moser, Diana Irwin, Theodore W. Thannhauser / J Biomol Tech. 2007. 18 (4). P. 226-237.

[54] Accurate Mass Measurements with ESI-TOF Mass Spectrometers, URL: http://www.biocompare.com/Editorial-Articles/41563-A-Powerful-Combination-ESI-TOF-Mass-Spectrometers/.

[55] Theodora Katsila, Alexandros P. Siskos, Constantin Tamvakopoulos / Mass Spec Rev 2012. 31. P. 110-133.

[56] Pradip K. Ghosh. Introduction to Protein Mass Spectrometry. - Elsevier, 2016. 312 p.

[57] Kaltashov IA, Bobst CE, Abzalimov RR, Wang G, Baykal B, Wang S / Biotechnology Advances. 2012. 30. P. 210-222.

[58] Bernhard Spengler / Journal of Mass Spectrometry. 1997. Vol. 32. P. 019-1036.

[59] URL: http://www.chm.bris.ac.uk/ms/cid.xhtml

[60] Jeevan K. Prasain. Tandem Mass Spectrometry - Applications and Principles. - InTech, 2012. 777 P.

[61] Alain Beck, Sarah Sanglier-Cianférani, Alain Van Dorsselaer / Anal. Chem. 2012. 84. P. 4637-4646.

[62] Beck A, Wagner-Rousset E, Ayoub D, Van Dorsselaer A, Sanglier-Cianférani S. / Anal. Chem. 2013. 85 (2). P 715-736.

[63] Resemann A, Jabs W, Wiechmann A, Wagner E, Colas O, Evers W, Belau E, Vorwerg L, Evans C, Beck A, Suckau D / mABs, 2016, VOL. 8, NO. 2, P. 318-330.

[64] Marcus Macht / Trends in Analytical Chemistry. 2013. Vol. 48. P. 62-71.

[65] Rosati S, Yang Y, Barendregt A, Heck AJ / Nature Protocols. 2014. Vol. 9. No.4, P. 967-976.

[66] Thompson NJ, Hendriks LJ, de Kruif J, Throsby M, Heck AJ. / mAbs. 2014. 6:1, P. 197-203.

[67] Lynn A. Gennaro, Oscar Salas-Solano, Stacey Ma / Analytical Biochemistry. 2006. 355. P. 249-258.

[68] Rob Haselberg, Gerhardus J. de Jong, Govert W. Somsen / Journal of Chromatography A. 2007. 1159. P. 81-109.

[69] Mark Lies, Clarence Lew, Jose-Luis Gallegos-Perez, Bryan Fonslow, Rajeswari Lakshmanan, Andras Guttman. 2014. SCIEX Separations.

[70] Haselberg R, de Jong GJ, Somsen GW / Anal Chem. 2013. 85(4). P. 2289-2296.

[71] Rabah Gahoual, Jean-Marc Busnel, Philippe Wolff, Yannis Nicolas François, Emmanuelle Leize-Wagner / Anal Bioanal Chem. 2014. 406(4). P. 1029-1038.

[72] Peter C. Grossa, Sonja C. Burkarta, Rolf Müller / Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2014. Vol 88. P. 477-482.

[73] URL: http://www.chromatographytoday.com/articles/hplc-uhplc-lc-ms/31/frank_pullen/the_fascinating_history_of_the_development_of_lc-ms_a_personal_perspective/601/

[74] Martin Pabst, Friedrich Altmann / Proteomics. 2011. Vol. 11. P. 631-643.

[75] Manfred Wuhrer, Arjen R. de Boer, André M. Deelder / Mass Spectrometry Reviews. 2009. Vol. 28.P. 192-206.

[76] Michael Melmer, Thomas Stangler, Mark Schiefermeier, Werner Brunner, Hansjörg Toll, Alfred Rupprechter, Wolfgang Lindner, Andreas Premstaller / Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2010. Vol. 398. P. 905-914.

[77] Haberger M, Leiss M, Heidenreich AK, Pester O, Hafenmair G, Hook M, Bonnington L, Wegele H, Haindl M, Reusch D, Bulau P. / MAbs. 2016. 8(2). P. 331-339.

[78] Gary H. Kruppa1, Joseph Schoeniger, Malin M. Young / Rapid Commun. Mass Spectrom. 2003. 17. P.155-162.

[79] Bailey AO, Han G, Phung W, et al. Charge variant native mass spectrometry benefits mass precision and dynamic range of monoclonal antibody intact mass analysis / MAbs. 2018;10(8). P. 1214-1225.

[80] Wei B, Han G, Tang J, Sandoval W, Zhang YT. Native Hydrophobic Interaction Chromatography Hyphenated to Mass Spectrometry for Characterization of Monoclonal Antibody Minor Variants / Anal Chem. 2019 Dec 17;91(24). P. 15360-15364.

[81] David C. Simpson, Seonghee Ahn, Ljiljana Pasa-Tolic, Bogdan Bogdanov, Heather M. Mottaz, Andrey N. Vilkov, Gordon A. Anderson, Mary S. Lipton, Richard D. Smith / Electrophoresis. 2006. 27. P.2722-2733.

[82] Anne-Lise Marie, Cédric Przybylski, Florence Gonnet, Régis Daniel, Rémi Urbaind, Guillaume Chevreux, Sylvie Jorieux, Myriam Tavernaa / Analytica Chimica Acta. 2013. 800. P. 103110.

[83] Imran Ali, Hassan Y. Aboul-Enein, Vinod K. Gupta. Nanochromatography and Nanocapillary Electrophoresis: Pharmaceutical and Environmental Analyses. - John Wiley & Sons, 2009. 240 p.

[84] Perry G. Wang. High-Throughput Analysis in the Pharmaceutical Industry. - CRC Press, 2008. 432 p.

[85] URL: http://www.chromatographyonline.com/nano-lc-principles-evolution-and-state-art-technique?id=&sk=&date=&pageID=1.

[86] Hanne Raberg-Larsen / LC-MS: In-depth focus. 2015. Vol. 20. Issue 2.

[87] Fabian Higel, Andreas Seidl, Uwe Demelbauer, Fritz Sörgel, Wolfgang Frieß / mAbs. 2014. 6:4. P. 894-903.

[88] Bo An, Ming Zhang, Jun Qu / Drug Metab Dispos. 2014. 42(11). P. 1858-1866.

[89] Kelly Zhang,, Jenny Wang, Midco Tsang, Larry Wigman, Nik Chetwyn / American Pharmaceutical Review. 2013, December 27. URL: http://www.americanpharmaceuticalreview.com/Featured-Articles/151949-Two-Dimensional-HPLC -in-Pharmaceuti cal -Analysi s/

[90] Jiang H, Zeng J, Titsch C, Voronin K, Akinsanya B, Luo L, Shen H, Desai DD, Allentoff A, Aubry AF, Desilva BS, Arnold ME. / Anal. Chem. 2013. 85. P. 9859-9867.

[91] Xu K, Liu L, Maia M, Li J, Lowe J, Song A, Kaur S. / Bioanalysis. 2014. 6(13). P. 17811794.

[92] Shen Y, Zhang G, Yang J, Qiu Y, McCauley T, Pan L, Wu J / Anal Chem. 2015. 87(16). P. 8555-8563.

[93] Rieko Goto, Yasushi Nakamura, Tomonori Takami, Tokio Sanke, Zenzaburo Tozuka / PLOS ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0130760. 2015.

URL: http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0130760

[94] Jeremiah D. Tipton, John C. Tran, Adam D. Catherman, Dorothy R. Ahlf, Kenneth R. Durbin, Neil L. Kelleher / J Biol Chem. 286. P.25451-25458.

[95] Anja Resemann, Nannan Tao, Rainer Paape, Lars Vorwerg, Detlev Suckau / 9th Symposium on the Practical Applications of Mass Spectrometry in the Biotechnology Industry (Mass Spec 2012), San Diego, USA. 2012.

[96] Muneeruddin K, Thomas JJ, Salinas PA, Kaltashov IA / Anal. Chem. 2014. 86. P. 10692-10699.

[97] Khaja Muneeruddin, Mark Nazzaro, Igor A. Kaltashov / Anal. Chem. 2015. 87 (19). P 1013810145.

[98] Alain Beck, Sarah Cianferani. Harnessing the Benefits of Mass Spectrometry for In-depth Antibody Drug Conjugates Analytical Characterization. URL: http://www.chromatographyonline.com/harnessing-benefits-mass-spectrometry-depth-antibody-drug-conjugates-analytical-characterization-Q

[99] Rob Haselberg, Gerhardus J. de Jong, Govert W. Somsen / Anal. Chem. 2013. 85. P. 2289-2296.

[100] Matthew T. Mazur, Richard S. Seipert, David Mahon, Qinwei Zhou, Tun Liu / The AAPS Journal. 2012. Vol. 14. Issue 3. P. 530-541.

[101] Pan, J., Han, J., Borchers, C. H., Konermann, L. / Journal of the American Chemical Society. 2009. 131(35). P. 12801-12808.

[102] Tran JC, Zamdborg L, Ahlf DR, Lee JE, Catherman AD, Durbin KR, Tipton JD, Vellaichamy A, Kellie JF, Li M, Wu C, Sweet SM, Early BP, Siuti N, LeDuc RD, Compton PD, Thomas PM, Kelleher NL / Nature. 480. 2011. P. 254-258.

[103] Levy NE, Valente KN, Choe LH, Lee KH, Lenhoff AM / Biotechnol Bioeng. 2014. 111(5). P. 904-912.

[104] Quan L, Liu M / Mod Chem appl 2013. 1:e102. doi:10.4172/2329-6798.1000e102.

[105] Reusch D, Haberger M, Falck D, Peter B, Maier B, Gassner J, Hook M, Wagner K, Bonnington L, Bulau P, Wuhrer M. / mAbs. 2015. Vol. 7. Issue 4. P. 732-742.

[106] Lei Zhang, Shen Luo, Baolin Zhang / mAbs. 2016. Vol. 8. No. 2. P. 205-215.

[107] Dubois M, Fenaille F, Clement G, Lechmann M, Tabet JC, Ezan E, Becher F. / Anal Chem. 2008. 80(5). P. 1737-1745.

[108] De Lin, William E. Alborn, Robbert J. C. Slebos, Daniel C. Liebler / J Proteome Res. 2013. 12(12). P. 5996-6003.

[109] Hagman C, Ricke D, Ewert S, Bek S, Falchetto R, Bitsch F. / Anal Chem. 2008. 80(4). P. 1290-1296.

[110] Fania C, Vasso M, Torretta E, Robach P, Cairo G, Lundby C, Gelfi C. / ELECTROPHORESIS Special Issue: Bioanalysis 2011. Vol. 32. Issue 13. P. 1715-1727.

[111] Loic Dayon. / EuPA open proteomics. 2013. 1. P. 8-16.

[112] Duan X, Young R, Straubinger RM, Page B, Cao J, Wang H, Yu H, Canty JM, Qu J. / J Proteome Res. 2009. 8(6). P. 2838-2850.

[113] Jun Qu, Rebeccah Young, Brian J. Page, Xiaomeng Shen, Nazneen Tata, Jun Li, Xiaotao Duan, James A. Fallavollita, John M. Canty, Jr. / J Proteome Res. 2014. 13(5). P. 2571-2584.

[114] Haqqani AS1, Caram-Salas N, Ding W, Brunette E, Delaney CE, Baumann E, Boileau E, Stanimirovic D. / Mol. Pharmaceutics. 2013. 10. P. 1542-1556.

[115] Paola Picotti, Ruedi Aebersold / Nature Methods. 2012. 9. P. 555-566.

[116] Steve Murphy. A New Quantitative, Automated, Analytical Sample Preparation Platform for Characterization of PTMs / Agilent Technologies. 2014.

[117] Christie Hunter, Qin Fu, Mike Kowalski, Jennifer E. Van Eyk. Automating Protein Digestion for Reproducible Proteomics. SCIEX Protein Digestion Automated Solution using Biomek NXP Laboratory Automated Workstation. 2015. AB Sciex.

[118] Echeverria B, Etxebarria J, Ruiz N, Hernandez A, Calvo J, Haberger M, Reusch D, Reichardt NC / Anal. Chem. 2015. 87 (22). P. 11460-11467.

[119] David R. Colquhoun, Brian J. Field. Automated, Online Sample Preparation for LC-MS Analyses: Affinity Capture, Digestion, and Clean-Up., In: / John E. Schiel, Darryl L. Davis, Oleg V.

Borisov / State-of-the-Art and Emerging Technologies for Therapeutic Monoclonal Antibody Characterization Volume 3. Defining the Next Generation of Analytical and Biophysical Techniques. USA-ACS, 2015. P 335-356.

[120] G. Chen. Characterization of protein therapeutics using mass spectrometry. US: Springer, 2015. 404 P.

[121] Yuting Cong, Zhang Zhang, Shen Zhang, Lianghai Hu and Jingkai Gu / Proteomics Clin. Appl. 2015, XX, P. 1-12.

[122] J. P. Marino, R. G. Brinson, J. W. Hudgens, J. E. Ladner, D. T. Gallagher, E. S. Gallagher, L. W. Arbogast, R. Y.-C. Huang. Emerging Technologies To Assess the Higher Order Structure of Monoclonal Antibodies., In: / John E. Schiel, Darryl L. Davis, Oleg V. Borisov / State-of-the-Art and Emerging Technologies for Therapeutic Monoclonal Antibody Characterization Volume 3. Defining the Next Generation of Analytical and Biophysical Techniques. — USA-ACS, 2015. P 17-43.

[123] L. Mayne / Methods in Enzymology. 2016. Vol. 566. P. 335-356.

[124] Junhai Yang, Richard M. Caprioli / J. Mass Spectrom. 2014. 49. P. 417-422.

[125] Rogers RS, Nightlinger NS, Livingston B, Campbell P, Bailey R, Balland A. Development of a quantitative mass spectrometry multi-attribute method for characterization, quality control testing and disposition of biologics / MAbs. 2015;7(5). P. 881-890.

[126] Weichen X. et al. A Quadrupole Dalton-based multi-attribute method for product characterization, process development, and quality control of therapeutic proteins / mAbs vol. 9,7: 1186-1196.

[127] Rogers RS, Abernathy M, Richardson DD, Rouse JC, Sperry JB, Swann P, Wypych J, Yu C, Zang L, Deshpande R. A View on the Importance of "Multi-Attribute Method" for Measuring Purity of Biopharmaceuticals and Improving Overall Control Strategy / AAPS J. 2017 Nov 30;20(1):7.

[128] Hada V, Bagdi A, Bihari Z, Timari SB, Fizil A, Szantay C Jr. Recent advancements, challenges, and practical considerations in the mass spectrometry-based analytics of protein biotherapeutics: A viewpoint from the biosimilar industry / J Pharm Biomed Anal. 2018 Nov 30;161: P. 214-238.

[129] Duivelshof BL, Jiskoot W, Beck A, Veuthey JL, Guillarme D, D'Atri V. Glycosylation of biosimilars: Recent advances in analytical characterization and clinical implications / Anal Chim Acta. 2019 Dec 16;1089: P. 1-18.

[130] Anna C. Robotham, John F. Kelly, Chapter 1 - LC-MS characterization of antibody-based therapeutics: recent highlights and future prospects. Editor: Allan Matte, Approaches to the Purification, Analysis and Characterization of Antibody-Based Therapeutics, Elsevier, 2020, P. 1-33.

[131] Da Ren, Advancing Mass Spectrometry Technology in cGMP Environments / Trends in Biotechnology, Vol. 38 (10), 2020. P. 1051-1053.

[132] Lanter C, Lev M, Cao L, Loladze V. Rapid Intact mass based multi-attribute method in support of mAb upstream process development / J Biotechnol. 2020 May 20;314-315: P. 63-70.

[133] Martelet A, Garrigue V, Zhang Z, Genet B, Guttman A. Multi-attribute method based characterization of antibody drug conjugates (ADC) at the intact and subunit levels / J Pharm Biomed Anal. 2021 Jul 15; 201:114094.

[134] Ren D, Pipes GD, Liu D, Shih L-Y, Nichols AC, Treuheit MJ, et al. An improved trypsin digestion method minimizes digestion-induced modifications on proteins / Anal Biochem [Internet]. 2009;392(1): P. 12-21.

[135] Brady LJ, Scott RA, Balland A. An optimized approach to the rapid assessment and detection of sequence variants in recombinant protein products / Anal Bioanal Chem. 2015; 407:P. 3851-3860.

[136] Jiang P, Li F, Ding J. Development of an efficient LC-MS peptide mapping method using accelerated sample preparation for monoclonal antibodies / J Chromatogr B. 2020. Jan 15;1137:121895.

[137] Song YE, Dubois H, Hoffmann M, D Eri S, Fromentin Y, Wiesner J, Pfenninger A, Clavier S, Pieper A, Duhau L, Roth U. Automated mass spectrometry multi-attribute method analyses for process development and characterization of mAbs / J Chromatogr B. 2021 Mar 1;1166:122540.

[138] Qian C, Niu B, Jimenez RB, Wang J, Albarghouthi M. Fully automated peptide mapping multi-attribute method by liquid chromatography-mass spectrometry with robotic liquid handling system / J Pharm Biomed Anal. 2021 May 10;198:113988.

[139] Dykstra AB, Flick TG, Lee B, Blue LE, Angell N. Chip-Based Capillary Zone Electrophoresis Mass Spectrometry for Rapid Resolution and Quantitation of Critical Quality Attributes in Protein Biotherapeutics / J Am Soc Mass Spectrom. 2021 Aug 4;32(8):P. 1952-1963.

[140] Arndt JR, Wormwood Moser KL, Van Aken G, Doyle RM, Talamantes T, DeBord D, Maxon L, Stafford G, Fjeldsted J, Miller B, Sherman M. High-Resolution Ion-Mobility-Enabled Peptide Mapping for High-Throughput Critical Quality Attribute Monitoring / J Am Soc Mass Spectrom. 2021 Aug 4;32(8): P. 2019-2032.

[141] Liu Y, Fernandez J, Pu Z, Zhang H, Cao L, Aguilar I, Ritz D, Luo R, Read A, Laures A, Lan K, Ubiera A, Smith A, Patel P, Liu A. Simultaneous Monitoring and Comparison of Multiple Product Quality Attributes for Cell Culture Processes at Different Scales Using a LC/MS/MS Based MultiAttribute Method / J Pharm Sci. 2020 Nov;109(11). P. 3319-3329.

[142] Haberger M, Leiss M, Heidenreich AK, Pester O, Hafenmair G, Hook M, Bonnington, L, Wegele H, Haindl M, Reusch D, Bulau P. Rapid characterization of biotherapeutic proteins by size-exclusion chromatography coupled to native mass spectrometry / MAbs. 2016;8(2). P. 331-339.

[143] Liu P, Zhu X, Wu W, et al. Subunit mass analysis for monitoring multiple attributes of monoclonal antibodies / Rapid Commun Mass Spectrom. 2019;33. P. 31-40.

[144] Wang, T., Chu, L., Li, W., Lawson, K., Apostol, I., & Eris, T. Application of a Quantitative LC-MS Multiattribute Method for Monitoring Site-Specific Glycan Heterogeneity on a Monoclonal Antibody Containing Two N-Linked Glycosylation Sites / Analytical Chemistry, 89(6). P. 35623567.

[145] Yi Wang, Xiaojuan Li, Yan-Hui Liu, Daisy Richardson, Huijuan Li, Mohammed Shameem & Xiaoyu Yang. Simultaneous monitoring of oxidation, deamidation, isomerization, and glycosylation of monoclonal antibodies by liquid chromatography-mass spectrometry method with ultrafast tryptic digestion / mAbs, 2016, 8:8. P. 1477-1486.

[146] Christof Regl, Therese Wohlschlager, Wolfgang Esser-Skala, Iris Wagner, Martin Samonig, Johann Holzmann & Christian G. Huber Dilute-and-shoot analysis of therapeutic monoclonal antibody variants in fermentation broth: a method capability study / mAbs, 2019, 11:3. P. 569-582.

[147] Yinyin Li, Yu Huang, Janine Ferrant, Yelena Lyubarskaya, Yue (Emma) Zhang, Siyang (Peter) Li & Shiaw-Lin (Billy) Wu. Assessing in vivo dynamics of multiple quality attributes from a therapeutic IgG4 monoclonal antibody circulating in cynomolgus monkey / mAbs, 2016, 8:5. P. 961968.

[148] D'Atri V, Fekete S, Beck A, Lauber M, Guillarme D. Hydrophilic Interaction Chromatography Hyphenated with Mass Spectrometry: A Powerful Analytical Tool for the Comparison of Originator and Biosimilar Therapeutic Monoclonal Antibodies at the Middle-up Level of Analysis / Anal Chem. 2017 Feb 7;89(3). P. 2086-2092.

[149] Leblanc Y, Ramon C, Bihoreau N, Chevreux G. Charge variants characterization of a monoclonal antibody by ion exchange chromatography coupled on-line to native mass spectrometry: Case study after a long-term storage at +5°C / J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017 Mar 24;1048. P. 130-139.

[150] Yan Y, Xing T, Wang S, Daly TJ, Li N. Online coupling of analytical hydrophobic interaction chromatography with native mass spectrometry for the characterization of monoclonal antibodies and related products / J Pharm Biomed Anal. 2020 Jul 15;186:113313.

[151] Kellie JF, Tran JC, Jian W, Jones B, Mehl JT, Ge Y, Henion J, Bateman KP. Intact Protein Mass Spectrometry for Therapeutic Protein Quantitation, Pharmacokinetics, and Biotransformation

in Preclinical and Clinical Studies: An Industry Perspective / J Am Soc Mass Spectrom. 2021 Aug 4;32(8). P. 1886-1900.

[152] Srzentic K, et. al. Interlaboratory Study for Characterizing Monoclonal Antibodies by Top-Down and Middle-Down Mass Spectrometry / J Am Soc Mass Spectrom. 2020 Sep 2;31(9). P. 17831802.

[153] WHO Guidelines on evaluation of monoclonal antibodies as similar biotherapeutic products (SBPs), Annex 2, Technical Report Series No. 1004, 2016. https://www.who.int/biologicals/BS2290 mAb-SBP DB Kai LINE NOs 20 July 2016.pdf

[154] U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Guidance for Industry [DRAFT GUIDANCE May 2019]. Development of Therapeutic Protein Biosimilars: Comparative Analytical Assessment and Other Quality-Related Considerations. https://www.fda.gov/media/125484/download

[155] U.S. Department of Health and Human Services, Food and drug administration, center for drug evaluation and research, center for biologics evaluation and research. Quality considerations in demonstrating biosimilarity of a therapeutic protein product to a reference product. Guidance for industry 2015.

[156] European Medicines Agency. Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: quality issues (revision 1) [Accessed 2018 Feb 27]. https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-similar-biological-medicinal-products-containing-biotechnology-derived-proteins-active en-0.pdf

[157] Tsong Y, Dong X, Shen M. Development of statistical methods for analytical similarity assessment. J Biopharm Stat. 2017;27(2):P.:197-205.

[158] Chow, S.-C. (2015) Challenging issues in assessing analytical similarity in biosimilar studies. Biosimilars 5. P.:33-39.

[159] https://grls.rosminzdrav.ru/Grls_View_v2.aspx?routingGuid=7fdaa424-3c72-4e78-a9cf-76bdf41ddf8f&t=

[160] https://grls.rosminzdrav.ru/Grls View v2.aspx?routingGuid=0eeb5b3e-fbec-499d-a4ac-d000fb70791e&t=

[161] https://grls.rosminzdrav.ru/CiPermitionReg.aspx?PermYear=0&DateInc=&NumInc=&Date Beg=&DateEnd=&Protocol=&RegNm=&Statement=&ProtoId=&idCIStatementCh=&Qualifier=& CiPhase=&Range0fApp=&Torg=&LFDos=&Producer=%d0%93%d0%b5%d0%bd%d0%b5%d1 %80%d0%b8%d1%83%d0%bc&Recearcher=&sponsorCountry=&MedBaseCount=&CiType=&Pa

tientCount=&OrgDocOut=2&Status=l%2c&NotInReg=O&All=O&PageSize=8&order=dateperm& orderType=desc&pageNum=2