Разработка методики хромато-масс-спектрометрического контроля качества биологического лекарственного препарата на примере моноклональных антител омализумаб и экулизумаб тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Дегтерев Максим Борисович

• Дегтерев Максим Борисович
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Дегтерев Максим Борисович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ПЕРСПЕКТИВЫ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ В РАЗРАБОТКЕ И КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ БЕЛКОВ (обзор литературы)

1.1. Биотехнологические лекарственные средства

1.1.1. Инновационные препараты и биоаналоги. Требования, предъявляемые к биоаналогичным препаратам

1.1.2. Терапевтические моноклональные антитела

1.2. Строение и классификация антител

1.2.1. Функции антител

1.2.2. Получение моноклональных антител

1.2.3. Виды моноклональных антител

1.2.4. Модифицированные антитела

1.2.4.1. Радиоиммуноконъюгаты

1.2.4.2. Конъюгаты антител с низкомолекулярными соединениями

1.2.4.3. Биспецифические антитела

1.2.4.4. Миметики антител

1.2.5. Номенклатура терапевтических антител

1.2.6. Цели терапии антителами

1.2.7. Выбор объектов исследования и их краткое описание

1.2.7.1. Экулизумаб

1.2.7.2. Омализумаб

1.3. Аналитическое сопровождение разработки и контроль качества моноклональных антител

1.3.1. Установление профиля показателей качества и отбор критических параметров качества терапевтического белка

1.3.2. Масс-спектрометрия в контроле качества терапевтических антител

1.3.2.1. Способы ионизации белка

1.3.2.2. Масс-анализаторы

1.3.2.3. Тандемная МС и МС высоких порядков

1.3.2.4. Типы фрагментации ионов

1.3.3. Разделение компонентов пробы перед масс-спектрометрическим анализом

1.3.4. Стратегии масс-спектрометрического анализа терапевтических белков

1.3.4.1. Измерение массы интактного белка, middle up, top down и middle down

1.3.4.2. Bottom up

1.3.5. Multiple Attribute Method

1.3.5.1. MAM: текущее состояние

1.3.5.2. Перспективы MAM

1.3.5.3. Оценка и нормирование результатов анализа

1.4. Выводы к главе

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Материалы

2.2. Оборудование и методы

2.2.1. Методика подготовки образцов антител для MAM-анализа

2.2.2. Подбор времени трипсинолиза целевых белков

2.2.3. Тандемная хромато-масс-спектрометрия для MAM

2.2.4. Валидация методики MAM

2.2.5. Индуцированная деградация антител

2.2.6. Изоэлектрическое фокусирование

2.2.7. Катионообменная хроматография

2.2.8. Обращённо-фазовая ВЭЖХ интактных антител

2.2.9. Обращённо-фазовая ВЭЖХ субъединиц антител

2.2.10. Гидрофильная хроматография свободных гликанов

2.2.11. Оценка сопоставимости референтных и кандидатных препаратов разработанной методикой MAM

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Тандемная хромато-масс-спектрометрия трипсинолизатов: разработка протокола пробоподготовки

3.2. Выбор условий MAM-анализа трипсинолизатов

3.3. Валидация методики MAM

3.3.1. Специфичность

3.3.2. Предел обнаружения

3.3.3. Линейность и аналитическая область

3.3.4. Правильность

3.3.5. Сходимость

3.3.6. Внутрилабораторная воспроизводимость

3.3.7. Устойчивость

3.4. Валидация аминокислотной последовательности белков

3.5. Исследования посттрансляционных модификаций

3.6. Сравнительный анализ профилей термической деградации

3.7. Сравнительный анализ профилей окислительной деградации

3.8. Сравнительный анализ профилей гликозилирования

3.9. Картирование дисульфидных связей

3.10. Подтверждение сопоставимости препаратов омализумаба и экулизумаба

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методики хромато-масс-спектрометрического контроля качества биологического лекарственного препарата на примере моноклональных антител омализумаб и экулизумаб»

Актуальность темы исследования.

На сегодняшний день биотехнологические разработки являются основным драйвером развития фармацевтической отрасли. С одной стороны, они требуют наибольших затрат, а с другой - дают возможность бороться с ранее неизлечимыми критическими и смертельными заболеваниями. В российском актуальном Перечне ЖНВЛП несколько десятков наименований относятся к биотехнологическим рекомбинантным белкам, и включают в себя противоаутоиммунные, противоопухолевые, противогемофилические и другие препараты, предназначенные для терапии тяжёлых заболеваний. Обязательным условием регистрации как инновационного, так и биоаналогичного терапевтического белка является глубокая характеризация его свойств, обеспечивающая понимание возможных изменений молекулы в результате воздействия на неё различных факторов и связанных с ними отклонений в терапевтической эффективности и безопасности. Как правило, такая цель достигается интенсивными исследованиями разрабатываемой молекулы широким спектром физико-химических методов анализа. Однако, последовательное усложнение и самих биотехнологических лекарственных белков, и процесса их производства ставит перед исследователями новые преграды, преодолеть которые возможно только с применением новых аналитических методик. Одним из наиболее динамично развивающихся направлений такого анализа является хромато-масс-спектрометрия, позволяющая одновременно контролировать широкий ряд показателей качества целевого продукта, что было бы невозможно с использованием других техник. Такой анализ получил название Multiple Attribute Method (MAM); его применение позволяет, с одной стороны, ускорить процессы разработки за счёт быстрой и при этом глубокой оценки профиля критических показателей качества (critical quality attribute, CQA) белка, а с другой -надёжно контролировать производственные серии, своевременно устанавливая отклонения от профиля CQA.

Степень разработанности темы исследования.

К настоящему моменту MAM очень широко применяется в разработке моноклональных антител. Применение этого подхода в выпускающем контроле качества пока не столь распространено, и ограничивается высокими требованиями к квалификации аналитиков и необходимости использования дорогостоящего оборудования. С момента первой публикации по этой теме [Rogers с соавт., 2015] появился ряд работ, направленных на минимизацию появления артефактных изменений в испытуемых молекулах в ходе пробоподготовки, исследована возможность применения MAM для «типичных»

модификаций антител, в том числе N- и C-концевых вариантов, окисления метионина и триптофана, деградации аспарагина, гликозилирования, в том числе и по нескольким сайтам в одной молекуле.

Однако, спектр исследованных таким образом антител очень узок. Также не проводилось попыток картировать при помощи MAM расположение дисульфидных связей в антителах, несмотря на важность этого параметра для формирования правильной пространственной структуры молекулы. И, кроме того, в валидации MAM до сих пор не рассматривался подход с одновременным использованием группы параметров качества, что потенциально позволило бы гораздо глубже охарактеризовать саму методику и очертить границы её применимости. Решение поставленных выше вопросов стало целью данной работы.

Цель исследования.

Разработка хромато-масс-спектрометрического метода характеризации параметров качества биологических лекарственных препаратов на примере моноклональных антител омализумаб и экулизумаб.

Задачи исследования:

1. Разработать способ быстрой подготовки проб моноклональных антител омализумаб и экулизумаб для анализа по стратегии MAM.

2. Разработать методику MAM-анализа для характеризации параметров качества молекул моноклональных антител, включающих в себя валидацию аминокислотной последовательности, идентификацию сайтов и контроль долей значимых посттрансляционных модификаций, таких как окисление, дезамидирование, отщепление С-концевых лизинов, образование пироглутамовой кислоты, гликозилирование, и выбора критических параметров качества.

3. Провести валидацию разработанного метода.

4. Сравнить результаты полуколичественного анализа основных гликоформ и модификаций белков, полученных методом ВЭЖХ-МС/МС, с результатами ортогональных методов.

5. Оценить возможность применения разработанной методики для анализа дисульфидных связей в исследуемых белках.

6. Апробировать предложенные способы контроля качества разрабатываемых и производимых препаратов в повседневной рабочей практике Отдела аналитических методов АО «Генериум».

Научная новизна исследования.

Впервые разработаны условия трипсинолиза моноклональных антител, обеспечивающие высокую скорость и воспроизводимость анализа и минимизацию образования артефактов за счёт выполнения стадий восстановления и алкилирования тиолов после обработки белка трипсином, разработана методика одновременной оценки подлинности и чистоты терапевтических моноклональных антител омализумаб и экулизумаб при помощи ВЭЖХ-МС/МС анализа по методологии MAM.

Впервые проведена валидация методики MAM по группе параметров качества каждого из антител.

Впервые разработана схема выявления сайтов модификаций молекул моноклональных антител омализумаб и экулизумаб с использованием схем принудительной деградации и хромато-масс-спектрометрического анализа; произведено сравнение профилей их окислительной и термической деградации, полученных методами MAM, изоэлектрофокусирования, ионообменной и обращённо-фазовой ВЭЖХ, и подтверждены более высокая специфичность, чувствительность и аналитическое разрешение MAM.

На примере экулизумаба и омализумаба впервые показана пригодность MAM для картирования дисульфидных связей моноклональных антител.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Одновременная оценка критических параметров качества терапевтических моноклональных антител в разработанной методике позволяет использовать ее как ортогональный способ анализа для ряда биофармацевтических исследований, а также применять в контроле качества выпускаемых серий фармацевтических субстанций и/или лекарственных препаратов.

Предложенный способ анализа может стать перспективной заменой для большой группы методов, таких как ионообменная ВЭЖХ, изоэлектрофокусирование, гидрофильная ВЭЖХ фракции свободных гликанов, анализ свободных тиолов по Эллману, ОФ-ВЭЖХ. Это позволит значительно интенсифицировать процесс разработки молекул терапевтических белков.

Разработанный метод внедрен в научно-исследовательскую деятельность Лаборатории физико-химических методов Отдела аналитических методов АО «Генериум» и используется в рутинном анализе фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов при оценке сопоставимости кандидатных и оригинальных препаратов

моноклональных антител, профилировании деградации; производится внедрение метода в этапы разработки молекул терапевтических белков.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационное исследование выполнено в соответствии со Стратегией научно-технологического развития РФ, Указом Президента РФ N 899 "Об утверждении приоритетных направлений развития науки, технологий и техники в Российской Федерации и перечня критических технологий Российской Федерации".

Содержание диссертации соответствует паспорту специальности 3.4.2 -«Фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты исследования соответствуют пунктам 2 и 3 паспорта специальности «Фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Методология и методы исследований.

Эксперименты выполнены с использованием следующих физико-химических методов исследования: изоэлектрофокусирования, гидрофильной ВЭЖХ меченых гликанов с флуориметрическим детектированием, ионообменной ВЭЖХ, ОФ-ВЭЖХ, и ОФ-ВЭЖХ, совмещенной с тандемной масс-спектрометрией высокого разрешения с ионизацией электрораспылением.

Положения, выносимые на защиту.

1. Методика ускоренной подготовки проб моноклональных антител омализумаб и экулизумаб для анализа по методологии Multiple Attribute Method.

2. Методика MAM-анализа трипсинолизатов моноклональных антител омализумаб и экулизумаб и способ её валидации по группе PQA.

3. Способ выбора CQA и поиска лабильных к модифицированию участков молекул моноклональных антител путем воздействия стрессовых условий с последующим MAM-анализом протеолизатов.

4. Возможность картирования дисульфидных связей в молекулах моноклональных антител омализумаб и экулизумаб методом MAM.

5. Подтверждение сопоставимости препаратов омализумаба и экулизумаба по результатам анализа, выполненного методом MAM.

Степень достоверности и апробация результатов исследования.

Результаты диссертационной работы были представлены в виде постеров и докладов на конференциях 64-й Ежегодной конференции Американского масс-спектрометрического общества (Сан-Антонио, США, 2016), 65-ой Ежегодной конференции Американского масс-спектрометрического общества (Индианаполис, США, 2017), Международном форуме «Биотехнология: состояние и перспективы развития. Науки о жизни» (Москва, 2018).

Достоверность экспериментальных результатов и сделанных на их основе выводов определяется комплексным характером работы, использованием независимых друг от друга современных инструментальных методов, широким перечнем привлеченных источников и видов информации. Все результаты проанализированы статистически. Сформулированные в работе выводы обоснованы и вытекают из полученных экспериментальных результатов.

Публикации материалов исследования.

По теме диссертационной работы опубликовано 9 научных работ, в том числе 5 статей научных изданиях, рекомендованных ВАК, и 4 тезиса докладов.

Личный вклад автора.

Автор самостоятельно проводил обзор и анализ литературы, разработку и обсуждение основных идей диссертационной работы; подбор условий специфического ферментативного расщепления исследуемых белков, разработку, валидацию и апробацию методики хромато-масс-спектрометрического анализа, выбор условий ускоренной деградации антител и её проведение, интерпретацию полученных результатов поиска, проверки и полуколичественной оценки посттрансляционных модификаций и профилей деградации исследуемых белков и статистическую обработку полученных результатов.

ГЛАВА 1. ПЕРСПЕКТИВЫ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ В РАЗРАБОТКЕ И

КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ БЕЛКОВ

(обзор литературы).

1.1. Биотехнологические лекарственные средства

К настоящему времени доля стоимости разработок и объёма продаж биофармацевтических препаратов составляет порядка 30% от общего фармацевтического рынка [1]. Еще в 2015 г. инвестиции в исследования и разработки в области биофармацевтики в США составили порядка 58,8 млрд долларов, что больше, чем сумма инвестиций на разработки во всех других областях [2].

Начало масштабным генно-инженерным работам во всем мире положили разработки гибридомной технологии в 1975 г. и метода ПЦР в 1980-х гг. [3], [4]. Первыми успешными примерами проектов выпуска рекомбинантных лекарственных белков стали инсулин (1982 г., Humulin, компания Eli Lilly) и гормон роста человека (1985 г., Protropin, компания Genentech) [5], [6]. С тех пор спектр биофармацевтических пептидных и белковых лекарственных средств неуклонно расширялся, и к настоящему моменту перечень зарегистрированных препаратов только моноклональных антител включает в себя уже сто наименований [7]. Их спектр препаратов представлен различными видами молекул: от относительно небольших пептидных гормонов до комплексов антител, но наиболее значимая его часть - это моноклональные антитела и их производные.

1.1.1. Инновационные препараты и биоаналоги. Требования, предъявляемые к биоаналогичным препаратам

Значительная часть разрабатываемых и выпускаемых в настоящее время препаратов моноклональных антител относится к группе биоподобных препаратов (биоаналогов). Согласно определению FDA, биоаналог - это биопрепарат, не имеющий клинически значимых отличий по качеству, эффективности и безопасности от ранее одобренного биопрепарата [8]. Истечение сроков эксклюзивного права на выпуск оригинальных препаратов для компаний-разработчиков стимулирует разработки биоаналогов, поскольку их производство часто оказывается дешевле и проще, чем оригинальных молекул. Однако, к биоаналогу предъявляются гораздо более строгие регистрационные требования, чем к дженерикам низкомолекулярных соединений: FDA рекомендует проводить всестороннюю характеризацию вновь созданной молекулы. Исследования включают в себя, во-первых, структурный анализ, состоящий из валидации аминокислотной последовательности, анализа структур высоких порядков (вторичной, третичной, четвертичной) и склонности к

агрегированию, а также посттрансляционных и химических модификаций. Во-вторых, выполняют функциональный анализ, подтверждающий подобие механизмов действия, эффективности и безопасности, проводимый как методами in vitro (иммунохимическими и биологическими), так и in vivo (использованием животных моделей). И в-третьих, организуют доклинические испытания для установления токсичности и иммуногенности, оценки фармакокинетики и фармакодинамики. Заключительная, и наиболее дорогая стадия, - это клинические испытания кандидатного белка [9]. Правильно организованные сравнительные исследования позволяют всесторонне изучить свойства разрабатываемой молекулы. Это позволяет не только получить научно обоснованное заключение о биоподобии, но и ускорить процесс регистрации, за счёт сокращения или исключения наиболее дорогостоящей и времязатратной части исследований - клинических испытаний, что также является важным преимуществом разработки биоаналогичных препаратов.

1.1.2. Терапевтические моноклональные антитела

Терапевтические моноклональные антитела на сегодняшний день представляют собой класс перспективных высокоспецифичных, высокоактивных и безопасных лекарственных препаратов, применяющихся в диагностике и лечении тяжелых раковых, аутоиммунных и наследственных заболеваний и воспалительных процессов.

1.2. Строение и классификация антител

Антитела - глобулярные белки, относящиеся к классу иммуноглобулинов, которые продуцируются иммунной системой животного организма в ответ на появление чужеродных молекул и специфически с ними взаимодействуют [10].

Молекула иммуноглобулина (в среднем 148 кДа) состоит из двух соединенных попарно легких (23 кДа) и двух тяжелых (50 кДа) цепей. Цепи соединены друг с другом при помощи дисульфидных связей и нековалентных взаимодействий. Аминокислотные последовательности пар легких и тяжелой цепей идентичны друг другу. Ферментативное расщепление антитела папаином приводит к образованию двух Fab- и одного Fc-фрагмента (приблизительно по 50 кДа). Антиген-связывающие сайты находятся в составе Fab-фрагментов, Fc-фрагмент не способен к связыванию антигенов.

На N-концах легких и тяжелых цепей располагаются гипервариабельные участки антитела (CDR, V), аминокислотные последовательности которых отличаются у разных антител. Наибольшей вариабельностью отличаются участки легкой цепи, расположенные рядом с 30, 55 и 95 аминокислотными остатками. Эти части молекулы формируют антиген-связывающие сайты антитела, определяя его специфичность. Фрагменты полипептидной

цепи, располагающиеся между соседними CDR, отличаются консервативной последовательностью, и называются каркасными участками (framework residues). В легких цепях содержится по два, а в тяжелых - по 4-5 повторяющихся гомологичных доменов. Домены легкой цепи носят название Vl и Cl, а тяжелой - Vh, Ch1, Ch2, Ch3. Трехмерная структура каждого домена напоминает петлю, которая формируется в результате образования дисульфидной связи между сульфгидрильными группами цистеинов, расположенных по краям доменных участков. Домены обладают схожими конформациями, причем V-домены легкой и тяжелой цепи находятся в соседних положениях и формируют V-домен целого антитела, в котором находится антиген-связывающее углубление. На С-концах легких и тяжелых цепей антитела расположены консервативные (C) участки, аминокислотная последовательность которых у разных антител практически идентична. Они отвечают за эффекторные функции антител.

Fab-фрагменты антител способны менять угол относительно друг друга (от 60 до 180°), что играет важную роль в связывании антигена. Этот подвижный участок, формирующий своеобразную вилку в Y-подобной структуре антитела, носит название шарнирной области (hinge region), и располагается между доменами Ch1 и Ch2. Шарнирные области присутствуют только в молекулах иммуноглобулинов G, D и A. Иммуноглобулины также содержат гликаны, состав и сайты прикрепления которых определяются в зависимости от класса антитела [11]. Схема молекулы антитела на примере IgG представлена ниже (Рисунок 1).

В зависимости от особенностей строения тяжелых цепей, все иммуноглобулины делятся на 5 основных классов: IgA, IgD, IgE, IgG, и IgM. 75% все антител человеческой сыворотки крови относится к IgG, которые обладают наибольшим периодом полувыведения, а также единственные способны транспортироваться через плацентарный барьер. Антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимая цитотоксичность (CDC), два основных эффекторных свойства, обладающих наибольшей ценностью в иммунотерапии раковых заболеваний, также инициируются IgG. По этой причине практически все терапевтические антитела разрабатываются на основе структуры

IgG [12].

Антиген-свя(ывающие углублении

Рисунок 1. Схематическая структура IgG [11].

1.2.1. Функции антител

Антитела обеспечивают иммунный ответ тремя основными способами. Во-первых, они осуществляют прямое связывание (нейтрализацию) антигенов с их последующим фагоцитозом или выведением из организма, тем самым препятствуя их адгезии, проникновению в клетки организма-хозяина и блокируя токсический эффект. Во-вторых, связываются с патогеном и стимулируют его поглощение макрофагами и специализированными гранулоцитами. Этот механизм, называемый опсонизацией, лежит в основе антителозависимой клеточной цитотоксичности. И в-третьих, запускают разрушение антигенов путем стимуляции системы комплемента и образования мембраноатакующих комплексов. Последние формируют поры в клеточных стенках патогенных микроорганизмов, что приводит к нарушению их осмотического давления и лизису.

1.2.2. Получение моноклональных антител

Первоначально возможность промышленного производства моноклональных антител была реализована через технологию гибридомы. Ее суть сводится к получению гибридной

линии из двух типов клеток: первый, полученный из организма грызуна, является продуцентом целевого белка, а второй (клетки раковой опухоли, например, миеломы) обладает способностью к неограниченному размножению [13]. Однако, к настоящему времени эта технология вытеснена более простыми и дешёвыми вариантами. Один из самых популярных - получение антител в клетках яичников китайского хомячка (CHO), им в настоящее время производятся большинство рекомбинантных терапевтических белков

[14]. Использование линии CHO отличается высоким выходом продукта (до десяти граммов белка на литр культуры) и относительной простотой генетических манипуляций.

1.2.3. Виды моноклональных антител

Заметным недостатком использования CHO в качестве продуцентов является повышенная иммуногенность продукта, необходимость снижения которой привела к разработке нескольких поколений моноклональных антител:

- моноклональные антитела грызунов: рекомбинантные белки, на 100% состоящие из аминокислотных последовательностей, характерных для грызунов (хомяков). Представляют собой первое поколение рекомбинантных антител, и характеризуются наиболее высокой, в сравнении с последующими, иммуногенностью. Примерами таких белков являются Муромонаб (первое терапевтическое моноклональное антитело, одобренное FDA в 1992 г; применяется в трансплантологии), Эдреколомаб (лечение рака кишечника) и Ибритумомаб (лечение В-клеточной лимфомы).

- гуманизированные моноклональные антитела - белки, состоящие примерно на 34% из последовательностей, характерных для грызунов, и на 66% - для человека, со сниженной иммуногенностью. Характерный представитель - «Мабтера» (Ритуксимаб), использующийся в терапии В-клеточной лимфомы и ревматоидного артрита.

- химерные моноклональные антитела: первичная последовательность состоит из человеческих фрагментов на 90-95%. Наиболее известные препараты: «Герцептин» (Трастузумаб), «Ксолар» (Омализумаб) и «Солирис» (Экулизумаб), применяемые для лечения рака груди, тяжелых случаев астмы, пароксизмальной ночной гемоглобинурии, атипичного гемолитико-уремического синдрома, миастении гравис и оптиконевромиелита.

- человеческие моноклональные антитела на 100% представлены характерной для человека аминокислотной последовательностью, но экспрессируются в клетках грызунов

[15]. Примерами этого класса являются противоревматоидная «Хумира» (Адалимумаб) и противораковый «Вектибикс» (Панитумумаб).

На сегодняшний день рынок терапевтических моноклональных антител представлен по большей части препаратами химерных и человеческих антител [16].

1.2.4. Модифицированные антитела

Попытки повысить терапевтическую эффективность моноклональных антител, привели к появлению широкого спектра модифицированных белков, наиболее заметными из которых радиоиммуноконъюгаты, конъюгаты с низкомолекулярными лекарственными средствами, биспецифические антитела и миметики антител.

1.2.4.1. Радиоиммуноконъюгаты

Радиоиммуноконъюгаты - это моноклональные антитела с введенным в их состав радиоактивным изотопом 131I. К 2016 году FDA одобрило использование в медицинской практике двух веществ такого рода: ибритомумаб тиуксетан и тоситумомаб, предназначенных для лечения лимфомы. К сожалению, их прогресс осложнен необходимостью привлечения специалистов с опытом в области ядерной медицины и развитием альтернативных схем лечения. Исследования радиоиммуноконъюгатов ведутся в области получения новых радиоизотопов, испускающих альфа-лучи, для высокоспецифического воздействия на ткани опухолей и снижения вероятности развития сопутствующих радиационных поражений [17].

1.2.4.2. Конъюгаты антител с низкомолекулярными соединениями

Конъюгаты антител с низкомолекулярными лекарственными веществами для противоопухолевой терапии объединяют высокие цитотоксичность химиотерапевтических агентов и специфичность моноклональных антител. На рынке есть три таких препарата: T-DM1 или «Кадцила» (Roche/Genentech) для терапии негематологических новообразований, брентуксимаб ведотин («Адцетрис», Seattle Genetics) для лечения некоторых видов лимфом, и противолейкемический гемтузумаб озогамицин («Милотарг», Pfizer). Несколько десятков молекул сейчас находятся на различных стадиях клинических испытаний.

Основными проблемами разработки конъюгатов антител являются низкая эффективность доставки, экспрессия целевых антигенов в здоровых тканях и ее гетерогенность в различных областях опухоли. Несмотря на это, их разработка остается одной из наиболее перспективных областей иммунотерапии раковых заболеваний [18].

1.2.4.3. Биспецифические антитела

Биспецифические антитела - это антитела, способные одновременно связывать несколько антигенов. Существует пять основных видов этих молекул:

- симметричные IgG и IgG-подобные молекулы (би- и тетравалентные);

- асимметричные IgG и IgG-подобные молекулы;

- гибридные белки из двух активных фрагментов антител, присоединенных к белку-носителю неиммуноглобулиновой природы (например, альбумину);

- малые белковые молекулы, состоящие только из активных центров антител без использования белка-носителя;

- химические конъюгаты полноразмерных антител (рисунок 2).

Symmetric IgG and IgG-llke molecules

Bivalent Tetravalent

Small molecules Non-lmmunoglobulln

fusion proteins

Рисунок 2. Типы биспецифических антител [19]

Подавляющее большинство биспецификов разрабатываются для противораковой терапии. На рынке представлены два таких препарата: «Катумаксомаб» (Fresenius Biotech) и «Блинатумомаб» (Amgen); еще несколько десятков проходят клинические испытания [19], [20].

1.2.4.4. Миметики антител

Границы терапевтической эффективности моноклональных антител определяются сложностью проникновения в солидные опухоли, иммуногенностью, наличием шести гипервариабельных участков и гликанов и сложной многоцепочечной структурой. Кроме того, часто для достижения лечебного эффекта необходима высокая доза препарата, что удорожает производство и может спровоцировать аномалии в фармакокинетике. Для преодоления этих ограничений стали создавать антитело-подобные соединения - миметики антител. За счет меньших размеров они, в сравнении с «классическими» антителами, более высоким сродством к целевым молекулам, способностью проникать в ткани организма и кровяным клиренсом, а также более выгодным с экономической точки зрения производством.

Миметики антител могут получают направленной эволюцией белка или слиянием гипервариабельных участков. Первая состоит из идентификации кандидатной

последовательности ДНК, увеличения количества ее вариантов ПЦР с использованием неточной полимеразы, амплификации вариантов и отбора молекул по близости свойств к заданным. Слияние гипервариабельных участков осуществляют через каркасный участок антитела в качестве промежуточного звена.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дегтерев Максим Борисович, 2023 год

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

[1] Biopharmaceutical Market Trends [Электронный ресурс]. URL: http://www.strategyr.com/MarketResearch/Biopharmaceuticals Market Trends.asp (дата обращения 14.07.2020).

[2] PhRMA annual 2016 Pharmaceutical Industry Profile [Электронный ресурс]. URL: http://phrma-docs.phrma.org/sites/default/files/pdf/biopharmaceutical-industry-profile.pdf (дата обращения 15.07.2020).

[3] Kohler, G. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. / Kohler, G., Milstein, C. // Nature. 1975. - 256. - P. 495-497.

[4] Rabinow P. Making PCR: A Story of Biotechnology; University of Chicago Press. Chicago, 1996 - 198 p.

[5] Johnson, I.S. Human insulin from recombinant DNA technology. / Johnson, I.S. // Science, 219, Issue 4585. - 1983. - P. 632-637.

[6] Gene [Электронный ресурс]. URL: www.gene.com/media/press-releases/4235/1985-10-18/fda-approves-genentechs-drug-to-trat-ch (дата обращения 15.07.2020).

[7] Nature. Mullard, A. FDA approves 100th monoclonal antibody product. 2021 May 5. [Электронный ресурс] URL: https://www.nature.com/articles/d41573-021-00079-7 (дата обращения 15.07.2020).

[8] US Food and Drug Administration [Электронный ресурс]. URL: http://www.fda.goV/Drugs/DevelopmentApprovalProcess/HowDrugsareDevelopedandApproved/A pprovalApplications/TherapeuticBiologicApplications/Biosimilars/ucm241718.htm (дата обращения 17.07.2020).

[9] U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity to a Reference Product. Guidance for Industry. 2015 [электронный ресурс]. URL: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/scientific-considerations-demonstrating-biosimilarity-reference-product (дата обращения 17.07.2020).

[10] База знаний по биологии человека. Антитела: введение. [Электронный ресурс]. URL: http://humbio.ru/humbio/immunology/imm-gal/00049f5d.htm (дата обращения 24.07.2020).

[11] Klaus D. Elgert. Immunology: Understanding The Immune System, 2nd Edition; Wiley-Blackwell. Hoboken, 2009 - 726 p.

[12] Wang, Y. Structural Characterization of Immunoglobulin G Antibodies with LC-MS Based Approaches : Diss. Ph.D. / Yi Wang ; Northeastern University - Boston, Massachusetts, 2012 -190 p.

[13] National Cancer Institute. Understanding Cancer Series. Hybridoma Technology [Электронный ресурс]. URL: https://web.archive.org/web/20141005163822/http://www.cancer.gov/cancertopics/understandingca ncer/immunesystem/page36 (дата обращения 24.07.2020).

[14] Wikipedia. Chinese hamster ovary cell [Электронный ресурс]. https://en.wikipedia.org/wiki/Chinese hamster ovary cell (дата обращения 24.07.2020).

[15] Chadd, H. Therapeutic antibody expression technology. / Chadd, H., Chamow, S. // Current Opinion in Biotechnology. 2001. - Vol: 12 (2). - P. 188-194.

[16] IMGT Repertoire (IG and TR) [Электронный ресурс]. URL: http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/GenesClinical/monoclonalantibodies/ (дата обращения 24.07.2020).

[17] Weiner G. J. Building better monoclonal antibody-based therapeutics. / Weiner G. J. // Nat Rev Cancer. 2015. - 15(6). - P. 361-370.

[18] Diamantis, N., Antibody-drug conjugates—an emerging class of cancer treatment. / Diamantis, N., Banerji, U. // 2016. - British Journal of Cancer. - 114. - P. 362-367.

[19] Kontermann, R. E., Bispecific antibodies. / Kontermann, R. E., Brinkmann, U. // Drug Discovery Today. 2015. - Vol. 20, Issue 7. - P. 838-847.

[20] Fan, G. Bispecific antibodies and their applications. / Fan, G., Wang, Z., Hao, M., Li, J. // Journal of Hematology & Oncology 2015. - 8:130. doi: 10.1186/s13045-015-0227-0.

[21] Wikipedia. Antibody mimetic [Электронный ресурс]. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Antibody mimetic (дата обращения 01.08.2020).

[22] Baloch, A. R. Antibody mimetics: promising complementary agents to animal-sourced antibodies. / Baloch, A. R., Baloch, A. W., Sutton, B. J., Zhang, X. // Crit Rev Biotechnol. 2016. -36(2). - P. 268-275.

[23] Wikipedia. Nomenclature of monoclonal antibodies [Электронный ресурс]. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Nomenclature of monoclonal antibodies (дата обращения 01.08.2020).

[24] Чехонин, И. В. Моноклональные антитела в терапии низкодифференцированных глиом / Чехонин, И. В., Леопольд, А. В., Гурина, О. И., Семёнова, А. В. // Вестник РАМН. 2014. - 910. - С. 131-139.

[25] Wikipedia. Monoclonal antibody therapy. Targeted conditions [Электронный ресурс]. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Monoclonal_antibody_therapy#Targeted_conditions (дата обращения 01.08.2020).

[26] American Pharmaceutical Review. Monoclonal Antibody Targets and Indications [Электронный ресурс]. URL: http://www.americanpharmaceuticalreview.com/Featured-Articles/177490-Monoclonal-Antibody-Targets-and-Indications/ (дата обращения 08.08.2020).

[27] Регистр лекарственных средств России. Солирис [Электронный ресурс]. URL: http://www.rlsnet.ru/tn index id 49877.htm (дата обращения 08.08.2020).

[28] Регистр лекарственных средств России. Омализумаб [Электронный ресурс]. URL: http://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_3748.htm (дата обращения 08.08.2020).

[29] U.S. Department of Health and Human Services, Food and drug administration. Submission of Quality Information for Biotechnology Products in the Office of Biotechnology Products; Notice of Pilot Program. 2008. [электронный ресурс]. URL: https://casetext.com/federal-register/submission-of-quality-information-for-biotechnology-products-in-the-office-of-biotechnology-products-notice-of-pilot-program (дата обращения 08.08.2020).

[30] Goetze, A. M. Assessing monoclonal antibody product quality attribute criticality through clinical studies. / Goetze, A. M., Schenauer, M. R., Flynn, G. C. // mAbs. 2010. - 2(5). - P. 500-507.

[31] CMC Biotech Working Group. A-Mab: A Case Study in Bioprocess Development, Version 2.1. CASSS: Emeryville, CA, 30 October 2009 [Электронный ресурс]. URL: www.casss.org/associations/9165/files/A-Mab Case Study Version 2-1.pdf (дата обращения 13.08.2020).

[32] European Medicines Agency. Guideline on development, production, characterization and specification for monoclonal antibodies and related products, EMA/CHMP/BWP/532517/2008. 21 July 2016 [электронный ресурс]. URL: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-development-production-characterisation-specification-monoclonal-antibodies-related_en.pdf (дата обращения 13.08.2020).

[33] Torkashvand, F. Main Quality Attributes of Monoclonal Antibodies and Effect of Cell Culture Components / Torkashvand, F., Vaziri, B. // Iran Biomed J. 2017. - 21(3). - P. 131-141.

[34] Руководство по экспертизе лекарственных средств. Том IV / под ред. проф. Миронова А. Н. — М.: ПОЛИГРАФ-ПЛЮС, 2014. - 172 с.

[35] Nowak, C. K. Forced degradation of recombinant monoclonal antibodies: A practical guide / Nowak, C. K., Cheung, J. M., Dellatore, S., Katiyar, A., Bhat, R., Sun, J., Ponniah, G., Neill, A., Mason, B., Beck, A., Liu, H. // mAbs. 2017. - 9(8). - P. 1217-1230.

[36] Development of Therapeutic Protein Biosimilars: Comparative Analytical Assessment and Other Quality-Related Considerations Guidance for Industry. DRAFT GUIDANCE. U.S. Department of Health and Human Services. Food and Drug Administration. Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). May 2019, Biosimilars [Электронный ресурс]. URL: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/development-therapeutic-protein-biosimilars-comparative-analytical-assessment-and-other-quality (дата обращения 14.08.2020).

[37] Liu, H. In vitro and in vivo modifications of recombinant and human IgG antibodies / Liu, H., Ponniah, G., Zhang, H. M., Nowak, C., Neill, A., Gonzalez-Lopez, N., Patel, R., Cheng, G., Kita, A. Z., Andrien, B. // 2014. - mAbs. 6(5). - P.1145-1154.

[38] The Nobel Prize in Chemistry 2002 [Электронный ресурс]. URL: www.nobelprize.org/nobel prizes/chemistry/laureates/2002/ (дата обращения 14.08.2020).

[39] Vekey, K., Telekes, A., Vertes, A. Medical applications of mass spectrometry. - Elsevier. Amsterdam, 2008 - 581 p.

[40] Yates, J. R. A century of mass spectrometry: From atoms to proteomes / John R Yates III // Nature Methods. 2011. - Vol.8. No.8. - P. 633-637.

[41] URL: Wikipedia. Electrospray ionization [Электронный ресурс]. URL: https://en.wikipedia.org/wiki/Electrospray_ionization (дата обращения 14.08.2020).

[42] Konermann, L. Unraveling the Mechanism of Electrospray Ionization. / Konermann, L., Ahadi, E., Rodriguez, A. D., Vahidi, S. // Analytical Chemistry. 2013. - V. 85. - P. 2-9.

[43] Chingin, K. Direct Access to Isolated Biomolecules under Ambient Conditions / Chingin, K., Frankevich, V., Balabin, R. M., Barylyuk, K., Chen, H., Wang, R., Zenobi, R. // Angew. Chem. 2010. - 122. - P. 2408 -2411.

[44] Лебедев, А. Т., Артеменко, К. А., Самгина, Т. Ю. Основы масс-спектрометрии белков и пептидов. - М.: Техносфера, 2012 - 176 с.

[45] National High Magnetic Field Laboratory. Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI) [Электронный ресурс]. URL: https://nationalmaglab.org/user-facilities/icr/techniques/maldi (дата обращения 14.08.2020).

[46] Ehring H. Role of photoionization and photochemistry in ionization processes of organic molecules and relevance for matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry / Ehring H., Karas M., Hillenkamp F. // Org. Mass Spectrom. 1992. - 27. - P. 472-480.

[47] Karas, M. Ion Formation in MALDI: The Cluster Ionization Mechanism / Karas, M. Kruger, R. // Chem. Rev. 2003. - 103. - P. 427-440.

[48] Krüger, R. Analyte Incorporation and Ionization in Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Visualized by pH Indicator Molecular Probes / Krüger, R., Pfenninger, A., Fournier, I., Gluckmann, M., Karas, M. // Anal.Chem. 2001. - 73. - P. 5812-5821.

[49] Karas, M. Ionization in matrix-assisted laser desorption/ionization: singly charged molecular ions are the lucky survivors / Karas, M., Gluckmann, M., Schafer, J. // 2000. - J. Mass Spectrom. 35.

- P. 1-12.

[50] Chang, W. C. Matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mechanism revisited / Chang, W. C., Huang, L. C. L., Wang, Y.-S., Peng, W.-P., Chang, H. C., Hsu, N. Y., Yang, W. B., Chen, C. H. // Analytica Chimica Acta. 2007. - Vol. 582. Issue 1. - P. 1-9.

[51] Katta, V., Top-Down Protein Characterization: Comparison of MALDI-TOFMS versus ESI-FTMS / Katta, V., Zhu, M., Zhang, J. // 2008. - 56th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics. Denver, USA.

[52] Keller, B. O. Detection of 25,000 molecules of Substance P by MALDI-TOF mass spectrometry and investigations into the fundamental limits of detection in MALDI / Keller, B. O., Li, L. // J Am Soc Mass Spectrom. 2001. - 12. - P. 1055-1063.

[53] Yang, Y. A comparison of nLC-ESI-MS/MS and nLC-MALDI-MS/MS for GeLC-based protein identification and iTRAQ-based shotgun quantitative proteomics / Yang, Y., Zhang, S., Howe, K., Wilson, D. B., Moser, F., Irwin, D., Thannhauser, T. W. // J Biomol Tech. 2007. - 18 (4).

- P. 226-237.

[54] Accurate Mass Measurements with ESI-TOF Mass Spectrometers [Электронный ресурс]. URL: http://www.biocompare.com/Editorial-Articles/41563-A-Powerful-Combination-ESI-TOF-Mass-Spectrometers/ (дата обращения 14.08.2020).

[55] Katsila, T. Peptide and protein drugs: The study of their metabolism and catabolism by mass spectrometry / Katsila, T., Siskos, A. P., Tamvakopoulos, C. // Mass Spec Rev. 2012. - 31. - P. 110133.

[56] Ghosh, P. K. Introduction to Protein Mass Spectrometry; Elsevier. Amsterdam, 2016 - 312 p.

[57] Kaltashov, I. A. Advances and challenges in analytical characterization of biotechnology products: mass spectrometry-based approaches to study properties and behavior of protein therapeutics / Kaltashov, I. A., Bobst, C. E., Abzalimov, R. R., Wang, G., Baykal, B., Wang, S. // Biotechnology Advances. 2012. - 30. - P. 210-222.

[58] Spengler, B. Peptide sequencing of charged derivatives by postsource decay MALDI mass spectrometry / Spengler, B., Luetzenkirchen, F., Metzger, S., Chaurand, P., Kaufmann, R., Jeffery, W., Bartlet-Jones, M., Pappin, D. J. C. // Journal of Mass Spectrometry. 1997. - Vol. 32. - P. 10191036.

[59] University of Bristol. School of Chemistry. Mass Spectrometry Facility. Collision Induced Dissociation (CID) [Электронный ресурс]. URL: http://www.chm.bris.ac.uk/ms/cid.xhtml (дата обращения 30.08.2020).

[60] Prasain, J. K. Tandem Mass Spectrometry - Applications and Principles; InTech. London, 2012 - 777 P.

[61] Beck, A. Biosimilar, biobetter, and next generation antibody characterization by mass spectrometry / Beck, A., Sanglier-Cianférani, S., Van Dorsselaer, A. // Anal. Chem. 2012. - 84. -P. 4637-4646.

[62] Beck, A., Characterization of therapeutic antibodies and related products / Beck, A., Wagner-Rousset, E., Ayoub, D., Van Dorsselaer, A., Sanglier-Cianférani, S. // Anal Chem. 2013. - 85(2). -P. 715-736.

[63] Resemann, A. Full validation of therapeutic antibody sequences by middle-up mass measurements and middle-down protein sequencing / Resemann, A., Jabs, W., Wiechmann, A., Wagner, E., Colas, O., Evers, W., Belau, E., Vorwerg, L., Evans, C., Beck, A., Suckau, D // mAbs. 2016. - 8(2). - P. 318-330.

[64] Macht, M. Top-down characterization of biopharmaceuticals // Trends in Analytical Chemistry. 2013. - Vol. 48. - P. 62-71.

[65] Rosati, S. Detailed mass analysis of structural heterogeneity in monoclonal antibodies using native mass spectrometry / Rosati, S., Yang, Y., Barendregt, A., Heck, A. J. // Nature protocols. 2014. - Vol. 9. No. 4. - P. 967-976.

[66] Thompson, N. J. Complex mixtures of antibodies generated from a single production qualitatively and quantitatively evaluated by native Orbitrap mass spectrometry / Thompson, N. J., Hendriks, L. J., de Kruif, J., Throsby, M., & Heck, A. J. // mAbs. 2014. - 6:1. - P. 197-203.

[67] Gennaro, L. A. Capillary electrophoresis-mass spectrometry as a characterization tool for therapeutic proteins / Gennaro, L. A., Salas-Solano, O., Ma, S. // Analytical biochemistry. 2006. -355. - P. 249-258.

[68] Haselberg, R. Capillary electrophoresis-mass spectrometry for the analysis of intact proteins / Haselberg, R., de Jong, G. J., Somsen, G. W. // Journal of Chromatography A. 2007. - 1159. -P. 81-109.

[69] Lies, M. Rapid Characterization of Biologics using a CESI 8000 - SCIEX TripleTOF® 5600+ System / Lies, M., Lew, C., Gallegos-Perez, J.-L., Fonslow, B., Lakshmanan, R., Guttman, A // Biologics Analytical Characterization Compendium. 2014. - P. 56-65 [электронный ресурс]. URL: https://www.fgua.es/wp-

content/uploads/2020/12/Biologics_Analytical_Characterization_Compendium.pdf (дата

обращения 30.08.2020).

[70] Haselberg, R. Low-Flow Sheathless Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry for Sensitive Glycoform Profiling of Intact Pharmaceutical Proteins / Haselberg, R., de Jong, G. J., Somsen, G. W. // Anal Chem. 2013. - 85(4). - P. 2289-2296.

[71] Gahoual, R. Novel sheathless CE-MS interface as an original and powerful infusion platform for nanoESI study: from intact proteins to high molecular mass noncovalent complexes / Gahoual, R., Busnel, J.-M., Wolff, P., François, Y. N., Leize-Wagner, E. // Anal Bioanal Chem. 2014. - 406(4).

- P. 1029-1038.

[72] Gross, - P. C. Analytics of the therapeutic peptide aviptadil by sheathless CE-MS and comparison with nanoRP-HPLC-MS / Gross, - P. C., Burkart S. C., Müller, R. // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2014. - Vol 88. - P. 477-482.

[73] Pullen, F. The fascinating history of the development of LC-MS; a personal perspective [Электронный ресурс]. URL: http://www.chromatographytoday.com/articles/hplc-uhplc-lc-ms/31/frank_pullen/the_fascinating_history_of_the_development_of_lc-

ms a personal perspective/601/ (дата обращения 30.08.2020).

[74] Pabst, M. Glycan analysis by modern instrumental methods / Pabst, M., Altmann, F. // Proteomics. 2011. - Vol. 11. - P. 631-643.

[75] Wuhrer, M. Structural glycomics using hydrophilic interaction chromatography (HILIC) with mass spectrometry / Wuhrer, M., de Boer, A. R., Deelder, A. M. // Mass Spectrometry Reviews. 2009.

- Vol. 28. - P. 192-206.

[76] Melmer, M. HILIC analysis of fluorescence-labeled N-glycans from recombinant biopharmaceuticals / Melmer, M., Stangler, T., Schiefermeier, M., Brunner, W., Toll, H., Rupprechter, A., Lindner, W., Premstaller, A. // Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2010. - Vol. 398. - P. 905-914.

[77] Haberger, M. Rapid characterization of biotherapeutic proteins by size-exclusion chromatography coupled to native mass spectrometry / Haberger, M., Leiss, M., Heidenreich, A. K., Pester, O., Hafenmair, G., Hook, M., Bonnington, L., Wegele, H., Haindl, M., Reusch, D., Bulau, -P. // mAbs. 2016. - 8(2). - P. 331-339.

[78] Kruppa, G. H. A top down approach to protein structural studies using chemical cross-linking and Fourier transform mass spectrometry / Kruppa, G. H., Schoeniger, J., Young, M. M. // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2003. - 17. - P. 155-162.

[79] Bailey, A. O. Charge variant native mass spectrometry benefits mass precision and dynamic range of monoclonal antibody intact mass analysis / Bailey, A. O., Han, G., Phung, W., Gazis, P., Sutton, J., Josephs, J. L., Sandoval, W. // mAbs. 2018. - 10(8). - P. 1214-1225.

[80] Wei, B. Native Hydrophobic Interaction Chromatography Hyphenated to Mass Spectrometry for Characterization of Monoclonal Antibody Minor Variants / Wei, B., Han, G., Tang, J., Sandoval, W., Zhang, Y. T. // Anal Chem. 2019. - 91(24). - P. 15360-15364.

[81] Simpson, D. C. Using size exclusion chromatography-RPLC and RPLC-CIEF as two-dimensional separation strategies for protein profiling / Simpson, D. C., Ahn, S., Pasa-Tolic, L., Bogdanov, B., Mottaz, H. M., Vilkov, A. N., Anderson, G. A., Lipton, M. S., Smith, R. D. // Electrophoresis. 2006. - 27. - P. 2722-2733.

[82] Marie, A. L. Capillary zone electrophoresis and capillary electrophoresis-mass spectrometry for analyzing qualitative and quantitative variations in therapeutic albumin / Marie, A. L., Przybylski, C., Gonnet, F., Daniel, R., Urbain, R., Chevreux, G., Jorieux, S., Taverna, M. // Analytica Chimica Acta. 2013. - 800. - P. 103-110.

[83] Ali, I., Aboul-Enein, H. Y., Gupta, V. K. Nanochromatography and Nanocapillary Electrophoresis: Pharmaceutical and Environmental Analyses; John Wiley & Sons. Hoboken, 2009 - 240 p.

[84] Wang, P. G. High-Throughput Analysis in the Pharmaceutical Industry; CRC Press. Boca Raton, 2008 - 432 p.

[85] Sneekes, E. J., Rieux, L., Swart, R. Nano LC: Principles, Evolution, and State-of-the-Art of the Technique. / Chromatography Online [Электронный ресурс]. URL: http://www.chromatographyonline.com/nano-lc-principles-evolution-and-state-art-technique?id=&sk=&date=&pageID=1 (дата обращения 30.08.2020).

[86] European Pharmaceutical Review. R0berg-Larsen, H. / LC-MS: In-depth focus [Электронный ресурс]. 2015. Vol. 20. Issue 2 (дата обращения 30.08.2020).

[87] Higel, F. Small scale affinity purification and high sensitivity reversed phase nanoLC-MS N-glycan characterization of mAbs and fusion proteins / Higel, F., Seidl, A., Demelbauer, U., Sorgel, F., Friefi, W. // mAbs. 2014. - 6:4. - P. 894-903.

[88] An, B. Toward sensitive and accurate analysis of antibody biotherapeutics by liquid chromatography coupled with mass spectrometry / An, B., Zhang, M., Qu, J. // Drug Metab Dispos. 2014. - 42(11). - P. 1858-1866.

[89] Zhang, K., Wang, J., Tsang, M., Wigman, L., Chetwyn, N. Two-Dimensional HPLC in Pharmaceutical Analysis. 2013, December 27 / American Pharmaceutical Review. [Электронный

ресурс]. URL: http://www.americanpharmaceuticalreview.com/Featured-Articles/151949-Two-Dimensional-HPLC-in-Pharmaceutical-Analysis/ (дата обращения 10.09.2020).

[90] Jiang, H. Fully validated LC-MS/MS assay for the simultaneous quantitation of coadministered therapeutic antibodies in cynomolgus monkey serum / Jiang, H., Zeng, J., Titsch, C., Voronin, K., Akinsanya, B., Luo, L., Shen, H., Desai, D. D., Allentoff, A., Aubry, A. F., Desilva, B. S., Arnold, M. E. // Anal. Chem. 2013. - 85. - P. 9859-9867.

[91] Xu, K. A multiplexed hybrid LC-MS/MS pharmacokinetic assay to measure two coadministered monoclonal antibodies in a clinical study / Xu, K., Liu, L., Maia, M., Li, J., Lowe, J., Song, A., Kaur, S. // Bioanalysis. 2014. - 6(13). - P. 1781-1794.

[92] Shen, Y. Online 2D-LC-MS/MS assay to quantify therapeutic protein in human serum in the presence of pre-existing antidrug antibodies. / Shen, Y., Zhang, G., Yang, J., Qiu, Y., McCauley, T., Pan, L., Wu, J. // Anal Chem. 2015. - 87(16). - P. 8555-8563.

[93] Goto, R., Nakamura, Y., Takami, T., Sanke, T., Tozuka, Z. Quantitative LC-MS/MS Analysis of Proteins Involved in Metastasis of Breast Cancer - D0I:10.1371/journal.pone.0130760 // PLOS ONE - 2015. URL: http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0130760 (дата обращения 10.09.2020).

[94] Tipton, J. D. Analysis of intact protein isoforms by mass spectrometry / Tipton, J. D., Tran, J. C., Catherman, A. D., Ahlf, D. R., Durbin, K. R., Kelleher, N. L. // J Biol Chem. 2011. - 286. -P. 25451-25458.

[95] Paape, R. Fast QC of Intact Monoclonal Antibodies Using MALDI-Top-Down Sequencing / Paape, R., Vorwerg, L., Suckau, D., Resemann, A. // Journal of Biomolecular Techniques: JBT, 2012. - 22(Suppl). - S52.

[96] Muneeruddin, K. Characterization of small protein aggregates and oligomers using size exclusion chromatography with online detection by native electrospray ionization mass spectrometry. / Muneeruddin, K., Thomas, J. J., Salinas, - P. A., Kaltashov, I. A. // Anal. Chem. 2014. - 86. -P. 10692-10699.

[97] Muneeruddin, K. Characterization of intact protein conjugates and biopharmaceuticals using ion-exchange chromatography with online detection by native electrospray ionization mass spectrometry and top-down tandem mass spectrometry / Muneeruddin, K., Nazzaro, M., Kaltashov, I. A. // Anal. Chem. 2015. - 87 (19). - P. 10138-10145.

[98] Beck, A., Cianferani, S. Harnessing the Benefits of Mass Spectrometry for In-depth Antibody Drug Conjugates Analytical Characterization. 2015, October, 2. / Chromatography Online [Электронный ресурс]. URL: http://www.chromatographyonline.com/harnessing-benefits-mass-

spectrometry-depth-antibody-drug-conjugates-analytical-characterization-0 (дата обращения 10.09.2020).

[99] Haselberg, R. Low-flow sheathless capillary electrophoresis-mass spectrometry for sensitive glycoform profiling of intact pharmaceutical proteins / Haselberg, R., de Jong, G. J., Somsen, G. W. // Anal. Chem. 2013. - 85. - P. 2289-2296.

[100] Mazur, M. T. A platform for characterizing therapeutic monoclonal antibody breakdown products by 2D chromatography and top-down mass spectrometry / Mazur, M. T., Seipert, R. S., Mahon, D., Zhou, Q., Liu, T. // The AAPS Journal. 2012. - Vol. 14. Issue 3. - P. 530-541.

[101] Pan, J. Hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry with top-down electron capture dissociation for characterizing structural transitions of a 17 kDa protein / Pan, J., Han, J., Borchers, C. H., Konermann, L. // Journal of the American Chemical Society. 2009. - 131(35). - P. 1280112808.

[102] Tran, J. C. Mapping intact protein isoforms in discovery mode using top-down proteomics. / Tran, J. C., Zamdborg, L., Ahlf, D. R., Lee, J. E., Catherman, A. D., Durbin, K. R., Tipton, J. D., Vellaichamy, A., Kellie, J. F., Li, M., Wu, C., Sweet, S. M., Early, B. P., Siuti, N., LeDuc, R. D., Compton, - P. D., Thomas, - P. M., & Kelleher, N. L. // Nature. 2011. - 480. - P. 254-258.

[103] Levy, N. E. Identification and characterization of host cell protein product-associated impurities in monoclonal antibody bioprocessing. / Levy, N. E., Valente, K. N., Choe, L. H., Lee, K. H., & Lenhoff, A. M. // Biotechnol Bioeng. 2014. - 111(5). - P. 904-912.

[104] Quan, L. CID, ETD and HCD Fragmentation to Study Protein Post-Translational Modifications / Quan, L., Liu, M. // Mod Chem Appl. - 2013. - 1:1.

[105] Reusch, D. Comparison of methods for the analysis of therapeutic immunoglobulin G Fc-glycosylation profiles-Part 2: Mass spectrometric methods. / Reusch, D., Haberger, M., Falck, D., Peter, B., Maier, B., Gassner, J., Hook, M., Wagner, K., Bonnington, L., Bulau, P., Wuhrer, M. // mAbs. 2015. - Vol. 7. Issue 4. - P. 732-742.

[106] Zhang, L. Glycan analysis of therapeutic glycoproteins / Zhang, L., Luo, S., Zhang, B. // mAbs. 2016. - Vol. 8. No. 2. - P. 205-215.

[107] Dubois, M. Immunopurification and mass spectrometric quantification of the active form of a chimeric therapeutic antibody in human serum / Dubois, M., Fenaille, F., Clement, G., Lechmann, M., Tabet, J. C., Ezan, E., & Becher, F. // Anal. Chem. 2008. - 80(5). - P. 1737-1745.

[108] Lin, D. Comparison of protein immunoprecipitation-multiple reaction monitoring with ELISA for assay of biomarker candidates in plasma / Lin, D., Alborn, W. E., Slebos, R. J., Liebler, D. C. // J Proteome Res - 12(12) - 2013. - P. 5996-6003.

[109] Hagman, C. Absolute quantification of monoclonal antibodies in biofluids by liquid chromatography-tandem mass spectrometry / Hagman, C., Ricke, D., Ewert, S., Bek, S., Falchetto, R., Bitsch, F. // Anal Chem. 2008. - 80(4). - P. 1290-1296.

[110] Fania, C. Setup for human sera MALDI profiling: the case of rhEPO treatment. / Fania, C., Vasso, M., Torretta, E., Robach, P., Cairo, G., Lundby, C., Gelfi, C. // Electrophoresis Special Issue: Bioanalysis. 2011. - Vol. 32. Issue 13. - P. 1715-1727.

[111] Dayon, L. Proteomics of human plasma: A critical comparison of analytical workflows in terms of effort, throughput and outcome / Dayon, L., Kussmann, M. // EuPA Open Proteomics. 2013. - Volume 1. - P. 8-16.

[112] Duan, X. A straightforward and highly efficient precipitation/on-pellet digestion procedure coupled with a long gradient nano-LC separation and Orbitrap mass spectrometry for label-free expression profiling of the swine heart mitochondrial proteome / Duan, X., Young, R., Straubinger, R. M., Page, B., Cao, J., Wang, H., Yu, H., Canty, J. M., Qu, J. // J Proteome Res. 2009. - 8(6). -P. 2838-2850.

[113] Qu, J. Reproducible ion-current-based approach for 24-plex comparison of the tissue proteomes of hibernating versus normal myocardium in swine models. / Qu, J., Young, R., Page, B. J., Shen, X., Tata, N., Li, J., Duan, X., Fallavollita, J. A., Canty, J. M., Jr // J Proteome Res. 2014. -13(5). - P. 2571-2584.

[114] Haqqani, A. S. Multiplexed evaluation of serum and CSF pharmacokinetics of brain-targeting single-domain antibodies using a NanoLC-SRM-ILIS method / Haqqani, A. S., Caram-Salas, N., Ding, W., Brunette, E., Delaney, C. E., Baumann, E., Boileau, E., Stanimirovic, D. // Mol. Pharmaceutics. 2013. - 10. - P. 1542-1556.

[115] Picotti, P. Selected reaction monitoring-based proteomics: workflows, potential, pitfalls and future directions / Picotti, P., Aebersold, R. // Nature Methods. 2012. - 9. - P. 555-566.

[116] Murphy, S. A New Quantitative, Automated, Analytical Sample Preparation Platform for Characterization of PTMs. Application note. // Agilent Technologies. 2014.

[117] Hunter, C., Fu, Q., Kowalski, M., Van Eyk, J. E. Automating Protein Digestion for Reproducible Proteomics. SCIEX Protein Digestion Automated Solution using Biomek NXP Laboratory Automated Workstation. 2015. AB Sciex [электронный ресурс]. URL: https://sciex.com/content/dam/SCIEX/pdf/tech-notes/all/protein digestion automation RUO-MKT-02-2364-A.pdf (дата обращения 10.09.2020).

[118] Echeverria, B. Chemo-Enzymatic Synthesis of (13)C Labeled Complex N-Glycans As Internal Standards for the Absolute Glycan Quantification by Mass Spectrometry / Echeverria, B.,

Etxebarria, J., Ruiz, N., Hernandez, A., Calvo, J., Haberger, M., Reusch, D., Reichardt, N. C. // Anal. Chem. 2015. - 87 (22). - P. 11460-11467.

[119] Colquhoun, D. R., Field, B. J. Automated, Online Sample Preparation for LC-MS Analyses: Affinity Capture, Digestion, and Clean-Up / Colquhoun, D. R., Field, B. J. / State-of-the-Art and Emerging Technologies for Therapeutic Monoclonal Antibody Characterization. Volume 3. Defining the Next Generation of Analytical and Biophysical Techniques // ed. by J. E. Schiel, D. L. Davis, O. V. Borisov, ACS Publications. Washington D. C., 2015. - P. 335-356.

[120] Chen, G. Characterization of protein therapeutics using mass spectrometry; Springer. Berlin, 2015 - 404 p.

[121] Cong, Y. Quantitative MS analysis of therapeutic mAbs and their glycosylation for pharmacokinetics study / Cong, Y., Zhang, Z., Zhang, S., Hu, L., & Gu, J. // Proteomics Clin. Appl. 2015. - XX, - P. 1-12.

[122] Marino, J. - P. Emerging Technologies To Assess the Higher Order Structure of Monoclonal Antibodies / Marino, J. - P., Brinson, R. G., Hudgens, J. W., Ladner, J. E., Gallagher, D. T., Gallagher, E. S., Arbogast, L. W., Huang, R. Y.-C. / State-of-the-Art and Emerging Technologies for Therapeutic Monoclonal Antibody Characterization. Volume 3. Defining the Next Generation of Analytical and Biophysical Techniques // ed. by J. E. Schiel, D. L. Davis, O. V. Borisov, ACS Publications. Washington D. C., 2015. - P 17-43.

[123] Mayne L. Hydrogen Exchange Mass Spectrometry // Methods in Enzymology. 2016. -Vol. 566. - P. 335-356.

[124] Rogers, R. S. Development of a quantitative mass spectrometry multi-attribute method for characterization, quality control testing and disposition of biologics / Rogers, R. S., Nightlinger, N. S., Livingston, B., Campbell, P., Bailey, R., Balland, A. // mAbs. 2015. - 7(5). - P. 881-890.

[125] Xu, W. A Quadrupole Dalton-based multi-attribute method for product characterization, process development, and quality control of therapeutic proteins / Xu, W., Jimenez, R. B., Mowery, R., Luo, H., Cao, M., Agarwal, N., Ramos, I., Wang, X., Wang, J. // mAbs. - Vol. 9,7. - P. 11861196.

[126] Rogers, R. S. A View on the Importance of "Multi-Attribute Method" for Measuring Purity of Biopharmaceuticals and Improving Overall Control Strategy / Rogers, R. S., Abernathy, M., Richardson, D. D., Rouse, J. C., Sperry, J. B., Swann, P., Wypych, J., Yu, C., Zang, L., Deshpande, R. // AAPS J. - 2017 Nov 30. - 20(1):7. https://doi.org/10.1208/s12248-017-0168-3.

[127] Hada, V. Recent advancements, challenges, and practical considerations in the mass spectrometry-based analytics of protein biotherapeutics: A viewpoint from the biosimilar industry /

Hada, V., Bagdi, A., Bihari, Z., Timari, S. B., Fizil, A., Szantay, C. Jr. // J Pharm Biomed Anal. 2018 Nov 30. - 161. - P. 214-238.

[128] Duivelshof, B. L. Glycosylation of biosimilars: Recent advances in analytical characterization and clinical implications. / Duivelshof, B. L., Jiskoot, W., Beck, A., Veuthey, J. L., Guillarme, D., D'Atri, V. // Anal Chim Acta. 2019. - 1089. - P. 1-18.

[129] Robotham, A. C. Chapter 1 - LC-MS characterization of antibody-based therapeutics: recent highlights and future prospects / Robotham, A. C., Kelly, J. F. / Approaches to the Purification, Analysis and Characterization of Antibody-Based Therapeutics // ed. by A. Matte, Elsevier. Amsterdam, 2020. - P. 1-33.

[130] Ren, D. Advancing Mass Spectrometry Technology in cGMP Environments // Trends in Biotechnology. 2020. - Vol. 38 (10) - P. 1051-1053.

[131] Lanter, C. Rapid Intact mass based multi-attribute method in support of mAb upstream process development / Lanter, C., Lev, M., Cao, L., Loladze, V. // J Biotechnol. 2020. - 314-315. -P. 63-70.

[132] Martelet, A. Multi-attribute method based characterization of antibody drug conjugates (ADC) at the intact and subunit levels / Martelet, A., Garrigue, V., Zhang, Z., Genet, B., Guttman, A. // J Pharm Biomed Anal. 2021. - 201:114094. https://doi.org/10.1016/jjpba.2021.114094.

[133] Ren, D. An improved trypsin digestion method minimizes digestion-induced modifications on proteins / Ren, D., Pipes, G. D., Liu, D., Shih, L. Y., Nichols, A. C., Treuheit, M. J., Brems, D. N., Bondarenko, P. V. // Anal Biochem. 2009. - 392(1). - P. 12-21.

[134] Brady, L. J. An optimized approach to the rapid assessment and detection of sequence variants in recombinant protein products / Brady, L. J., Scott, R. A., Balland, A. // Anal Bioanal Chem. 2015. - 407. - P. 3851-3860.

[135] Jiang, P. Development of an efficient LC-MS peptide mapping method using accelerated sample preparation for monoclonal antibodies / Jiang, P., Li, F., Ding, J. // J Chromatogr B. 2020. -15. - 1137. - 121895. https://doi.org/10.1016/jjchromb.2019.121895.

[136] Song, Y. E. Automated mass spectrometry multi-attribute method analyses for process development and characterization of mAbs / Song, Y. E., Dubois, H., Hoffmann, M., D Eri, S., Fromentin, Y., Wiesner, J., Pfenninger, A., Clavier, S., Pieper, A., Duhau, L., Roth, U. // J Chromatogr B. 2021 Mar 1. - 1166. - 122540. https://doi.org/10.1016/jjchromb.2021.122540.

[137] Qian, C. Fully automated peptide mapping multi-attribute method by liquid chromatography-mass spectrometry with robotic liquid handling system / Qian, C., Niu, B., Jimenez, R. B., Wang, J., Albarghouthi, M. // J Pharm Biomed Anal. 2021 May 10. - 198. - 113988. https://doi.org/10.1016/jjpba.2021.113988.

[138] Dykstra, A. B. Chip-Based Capillary Zone Electrophoresis Mass Spectrometry for Rapid Resolution and Quantitation of Critical Quality Attributes in Protein Biotherapeutics / Dykstra, A. B., Flick, T. G., Lee, B., Blue, L. E., Angell, N. // J Am Soc Mass Spectrom. 2021 Aug 4. - 32(8). - P. 1952-1963.

[139] Arndt, J. R. High-Resolution Ion-Mobility-Enabled Peptide Mapping for High-Throughput Critical Quality Attribute Monitoring / Arndt, J. R., Wormwood Moser, K. L., Van Aken, G., Doyle, R. M., Talamantes, T., DeBord, D., Maxon, L., Stafford, G., Fjeldsted, J., Miller, B., Sherman, M. // J Am Soc Mass Spectrom. 2021 Aug 4. - 32(8). - P. 2019-2032.

[140] Liu, Y. Simultaneous Monitoring and Comparison of Multiple Product Quality Attributes for Cell Culture Processes at Different Scales Using a LC/MS/MS Based Multi-Attribute Method / Liu, Y., Fernandez, J., Pu, Z., Zhang, H., Cao, L., Aguilar, I., Ritz, D., Luo, R., Read, A., Laures, A., Lan, K., Ubiera, A., Smith, A., Patel, P., Liu, A. // J Pharm Sci. 2020 Nov. - 109(11). - P. 3319-3329.

[141] Haberger, M. Rapid characterization of biotherapeutic proteins by size-exclusion chromatography coupled to native mass spectrometry / Haberger, M., Leiss, M., Heidenreich, A. K., Pester, O., Hafenmair, G., Hook, M., Bonnington, L., Wegele, H., Haindl, M., Reusch, D., Bulau, P. // mAbs. 2016. - 8(2). - P. 331-339.

[142] Liu, P. Subunit mass analysis for monitoring multiple attributes of monoclonal antibodies / Liu, P., Zhu, X., Wu, W., Ludwig, R., Song, H., Li, R., Zhou, J., Tao, L., Leone, A. M. // Rapid Commun Mass Spectrom. 2019. - 33. - P. 31-40.

[143] Wang, T. Application of a Quantitative LC-MS Multiattribute Method for Monitoring Site-Specific Glycan Heterogeneity on a Monoclonal Antibody Containing Two N-Linked Glycosylation Sites / Wang, T., Chu, L., Li, W., Lawson, K., Apostol, I., Eris, T. // Analytical Chemistry. - 89(6). - P.3562-3567.

[144] Wang, Y. Simultaneous monitoring of oxidation, deamidation, isomerization, and glycosylation of monoclonal antibodies by liquid chromatography-mass spectrometry method with ultrafast tryptic digestion / Wang, Y., Li, X., Liu, Y. H., Richardson, D., Li, H., Shameem, M., Yang, X. // mAbs. - 2016. - 8:8. - P. 1477-1486.

[145] Regl, C. Dilute-and-shoot analysis of therapeutic monoclonal antibody variants in fermentation broth: a method capability study / Regl, C., Wohlschlager, T., Esser-Skala, W., Wagner, I., Samonig, M., Holzmann, J., Huber, C. G. // mAbs. - 2019. - 11:3. - P. 569-582.

[146] Li, Y. Assessing in vivo dynamics of multiple quality attributes from a therapeutic IgG4 monoclonal antibody circulating in cynomolgus monkey / Li, Y., Huang, Y., Ferrant, J., Lyubarskaya, Y., Zhang, Y. E., Li, S. P., Wu, S. L. // mAbs. - 2016. - 8:5. - P. 961-968.

[147] D'Atri, V. Hydrophilic Interaction Chromatography Hyphenated with Mass Spectrometry: A Powerful Analytical Tool for the Comparison of Originator and Biosimilar Therapeutic Monoclonal Antibodies at the Middle-up Level of Analysis / D'Atri, V., Fekete, S., Beck, A., Lauber, M., Guillarme, D. // Anal Chem. 2017 Feb 7. - 89(3). - P. 2086-2092.

[148] Leblanc, Y. Charge variants characterization of a monoclonal antibody by ion exchange chromatography coupled on-line to native mass spectrometry: Case study after a long-term storage at +5°C / Leblanc, Y., Ramon, C., Bihoreau, N., Chevreux, G. // J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2017 Mar 24. - 1048. - P. 130-139.

[149] Yan, Y. Online coupling of analytical hydrophobic interaction chromatography with native mass spectrometry for the characterization of monoclonal antibodies and related products / Yan, Y., Xing, T., Wang, S., Daly, T. J., Li, N. // J Pharm Biomed Anal. 2020 Jul 15. - 186. - 113313. https://doi.org/10.1016/jjpba.2020.113313.

[150] Kellie, J. F. Intact Protein Mass Spectrometry for Therapeutic Protein Quantitation, Pharmacokinetics, and Biotransformation in Preclinical and Clinical Studies: An Industry Perspective / Kellie, J. F., Tran, J. C., Jian, W., Jones, B., Mehl, J. T., Ge, Y., Henion, J., Bateman, K. P. // J Am Soc Mass Spectrom. 2021 Aug 4. - 32(8). - P. 1886-1900.

[151] Srzentic, K. Interlaboratory Study for Characterizing Monoclonal Antibodies by Top-Down and Middle-Down Mass Spectrometry / Srzentic, K., Fornelli, L., Tsybin, Y. O., Loo, J. A., Seckler, H., Agar, J. N., Anderson, L. C., Bai, D. L., Beck, A., Brodbelt, J. S., van der Burgt, Y. E. M., Chamot-Rooke, J., Chatterjee, S., Chen, Y., Clarke, D. J., Danis, P. O., Diedrich, J. K., D'Ippolito, R. A., Dupre, M., Gasilova, N., ... Zhou, M. // J Am Soc Mass Spectrom. 2020 Sep 2. - 31(9). - P. 17831802.

[152] WHO Guidelines on evaluation of monoclonal antibodies as similar biotherapeutic products (SBPs), Annex 2, Technical Report Series No. 1004, 2016. [электронный ресурс]. https://www.who.int/biologicals/BS2290 mAb-SBP DB Kai LINE NOs 20 July 2016.pdf (дата обращения 17.10.2020).

[153] U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Guidance for Industry [DRAFT GUIDANCE May 2019]. Development of Therapeutic Protein Biosimilars: Comparative Analytical Assessment and Other Quality-Related Considerations [электронный ресурс]. URL: https://www.fda.gov/media/125484/download (дата обращения 17.10.2020).

[154] U.S. Department of Health and Human Services, Food and drug administration, center for drug evaluation and research, center for biologics evaluation and research. Quality considerations in

demonstrating biosimilarity of a therapeutic protein product to a reference product. Guidance for industry. April 2015 [электронный ресурс]. URL: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/quality-considerations-demonstrating-biosimilarity-therapeutic-protein-product-reference-product (дата обращения 17.10.2020).

[155] European Medicines Agency. Guideline on similar biological medicinal products containing biotechnology-derived proteins as active substance: quality issues (revision 1) [электронный ресурс]. URL: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/guideline-similar-biological-medicinal-products-containing-biotechnology-derived-proteins-active en-0.pdf (дата обращения 17.10.2020).

[156] Tsong, Y. Development of statistical methods for analytical similarity assessment / Tsong, Y., Dong, X., Shen, M. // J Biopharm Stat. 2017. - 27(2). - P. 197-205.

[157] Chow, S.-C. Challenging issues in assessing analytical similarity in biosimilar studies. Biosimilars. - 5. - P. 33-39. https://doi.org/10.2147/BS.S84141

[158] Государственный реестр лекарственных средств. Регистрационное удостоверение № ЛП-006487. «Генолар»® [электронный ресурс]. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/Grls View v2.aspx?routingGuid=7fdaa424-3c72-4e78-a9cf-76bdf41ddf8f&t= (дата обращения 14.12.2020).

[159] Государственный реестр лекарственных средств. Регистрационное удостоверение № ЛП-№(000140)-(РГ^и). «Элизария»® [электронный ресурс]. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/Grls View v2.aspx?routingGuid=0eeb5b3e-fbec-499d-a4ac-d000fb70791e&t= (дата обращения 21.03.2021).

[160] Государственный реестр лекарственных средств. Реестр разрешений на проведение клинических исследований [РКИ] [электронный ресурс]. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/CiPermitionReg.aspx?PermYear=0&DateInc=&NumInc=&DateBeg=& DateEnd=&Protocol=&RegNm=&Statement=&ProtoId=&idCIStatementCh=&Qualifier=&CiPhas e=&Range0fApp=&Torg=&LFDos=&Producer=%d0%93%d0%b5%d0%bd%d0%b5%d1%80%d 0%b8%d1%83%d0%bc&Recearcher=&sponsorCountry=&MedBaseCount=&CiType=&PatientCo unt=&0rgDoc0ut=2&Status=1%2c&NotInReg=0&All=0&PageSize=8&order=dateperm&orderTy pe=desc&pageNum=2 (дата обращения 21.03.2021).