Разработка лабораторной технологии получения гиногенных растений моркови in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат сельскохозяйственных наук Домблидес, Артур Сергеевич

• Домблидес, Артур Сергеевич
• кандидат сельскохозяйственных наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат сельскохозяйственных наук Домблидес, Артур Сергеевич

введение. i обзор литературы:

1.1. значение гаплоидов для селекции.

1.2. получение гаплоидов из клеток-гамет.

1.3. получение гаплоидных растений при использовании мужского гаметофита in vitro.

1.4. метод культуры неопыленных семяпочек и завязей in vitro.

1.5. факторы влияющие на процесс гиногенеза in vitro

1.5.1. способы культивирования.

1.5.2. еенотипдонорного растения.

1.5.3. состав питательной среды.

1.5.4. стадия развития зародышевого мешка.

1.6. пути развития гиногенеза in vitro т.

1.7. получение дигаплоидов у моркови W&Itro

1.6. перспективы метода гиногенеза in vitro. ii материалы и методы исследований. ш экспериментальная часть

3.1. изучение взаимосвязи между стадиями развития мужского и женского гаметофитов и морфологическими показателями репродуктивных органов моркови.

3.1.1. развитие мужского гаметофита моркови.

3.1.2. развитие женского гаметофита моркови.

3.1.3. взаимосвязь между стадиями развития мужского и женского гаметофитов моркови.

3.1.4. взаимосвязь между стадией развития микро и макрогаметофита и морфологическими показателями соцветия.

3.2. культура пыльников и неопыленных семяпочек моркови.

3.2.1. культура цветочных бутонов моркови.

3.2.2. культура пыльников моркови in vitro.

3.2.3. культура неопыленных семяпочек in vitro.

3.3. оптимальные стадии развития мужского и женского гаметофитов для индукции гиногенеза и андрогенеза у моркови in vitro.

3.5. цитологическое изучение процесса гиногенеза в культуре неопыленных семяпочек моркови in vitro.

3.5.1. влияние 2,4 Д и ИУК на женский гаметофит моркови.

3.6. регенерация растений моркови.

3.7. особенности анатомического строения андро - и гиногенных растений моркови r 0.

3.7.1. растения-регенеранты моркови репродуктивного периода онтогенеза.

3.8. оценка растений моркови, полученных методом андро- и гиногенеза in vitro.

3.8.1. оценка линии с использованием rapd - анализа.

3.8.2. биохимический анализ.

3.8.3. морфологическая оценка растений.

3.9. адаптация метода гиногенеза на других генотипах морковий.

3.9.1. цитологическое изучение модификаций дифференциации тканей пыльников моркови сорта НИИОХ 336 с петалоидным типом стерильности.

3.9.2. культура неопыленных семяпочек сорта нииох 336 и нантская

3.10. использование тидиазурона в качестве индуктора гиногенеза в культуре неопыленных семяпочек моркови.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка лабораторной технологии получения гиногенных растений моркови in vitro»

Широкое возделывание моркови во всех странах обусловлено высокой питательной ценностью ее корнеплодов. Ее выращивают повсеместно как вкусный овощ и как основной источник соединений изопреновой природы -каротина, или провитамина А (Сечкарев, 1971). На мировом рынке широким спросом пользуются гетерозисные гибриды Fi. В России работа по созданию межлинейных гибридов моркови Fj на базе ЦМС была начата в 70-х годах Н.И. Жидковой с сотрудниками, в результате чего был создан первый отечественный гибрид Fi Калисто (Сазонова, Власова 1990). Для того, чтобы достигнуть однородности линии по определенным селекционно-ценным признакам, используя методы традиционной селекции, требуется 5-7 поколений инбридинга. Поскольку морковь относится к двулетним культурам, то для получения таких линий необходимо затратить 10-14, а то и более лет.

Современная селекционная практика нуждается в новейших методах, которые призваны повысить ее эффективность. Наряду с традиционными, все большее применение в селекции находят биотехнологические методы, позволяющие ускорить селекционный процесс и повысить качество конечного продукта. Используя методы биотехнологии растений такие как культура пыльников и неопыленных семяпочек in vitro, можно сократить сроки создания константных линий моркови в 3-4 раза. При этом, для получения гетерозисных гибридов Fi моркови наряду с фертильными линиями В и С, которые можно получить используя культуру пыльников, необходимы и линии А с мужской стерильностью. Процесс получения стерильных линий моркови методами традиционной селекции довольно длителен и трудоемок и не всегда удается получить линии, отвечающие требованиям гетерозисной селекции (Тюкавин, Шмыкова, 1999).

С целью ускоренного создания выровненных линий с мужской стерильностью в лаборатории биотехнологии ВНИИССОК помимо получения 5 растений методом андрогенеза in vitro проводятся исследования по разработке метода культуры семяпочек моркови.

Цель и задачи исследований

Целью данной работы являлась отработка ряда этапов лабораторной технологии получения гиногенных растений моркови in vitro и оценка полученных дигаштоидных линий in vivo. Исходя из поставленной цели, нами решались следующие задачи:

1. Изучить взаимосвязь между морфологическими показателями соцветий, органов цветка и процессами микро- и макроспорогенеза у моркови для отбора необходимых эксплантов в культуру;

2. Определить оптимальные стадии зародышевого мешка, при которых происходит развитие гиногенных структур у культивируемых in vitro семяпочек;

3. Изучить цитологические особенности гиногенного развития каллусных и эмбриоидных структур из клеток зародышевого мешка;

4. Разработать элементы технологии получения гиногенных растений моркови методом культуры неопыленных семяпочек;

5. Провести оценку андро- и гиногенных растений моркови по морфологическим, биохимическим и молекулярным показателям.

Научная новизна

В работе показаны корреляционные взаимосвязи между стадиями развития микро- и макрогаметофита. Выявлена способность 2,4-Д индуцировать деление клеток зародышевого мешка с последующим образованием из них каллуса и эмбриоидов. Предлагаемая технология позволяет, используя одно фертильное растение моркови, одновременно получать как андрогенные, так и гиногенные линии. Проведенные 6 морфологический, биохимический и молекулярный анализы растений Ri моркови подтвердили андро- и гиногенное происхождение этих линий. Впервые была показана возможность использования тидиазурона в качестве индуктора галогенного развития моркови.

Практическая значимость

Морфологическое и цитологическое изучение развития соцветия моркови и стадий развития мужского и женского гаметофитов позволили выявить морфологические показатели для отбора необходимых эксплантов с донорного растения для культивирования in vitro, без трудоемкого цитологического анализа. Показано, что наиболее информативными морфологическими показателями для отбора необходимых эксплантов с нужными стадиями развития макро- и микроспор являются линейные размеры пыльников. Были разработаны этапы получения гиногенных растений, и показана возможность использования культуры неопыленных семяпочек in vitro как для получения фертильных, так и стерильных линий. Для расширения спектра генетического разнообразия растений-регенерантов моркови, полученных методом гиногенеза, можно рекомендовать использование тидиазурона.

I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Домблидес, Артур Сергеевич

ВЫВОДЫ:

1. Между стадиями развития мужского и женского гаметофитов и линейными размерами зонтичка и цветка наблюдается высокая корреляция. Наибольшее значения коэффициентов корреляции (0.90 - 0.95) отмечались между линейными размерами пыльников и стадиями развития макро- и микроспор. Использование этих показателей позволяет упростить отбор эксплантов моркови с оптимальной стадией развития гаметофита.

2. Стадия развития зародышевого мешка играет важную роль в процессе гиногенного развития при культивировании in vitro неопыленных семяпочек моркови. Индукция гиногенеза у моркови возможна лишь из клеток семиклеточного зародышевого мешка.

122

Заключение:

Исследования по получению гаплоидных растений через культуру пыльников и неопыленных семяпочек в настоящее время имеют три основных направления:

1. Фундаментальное исследования, ставящие своей целью изучение закономерностей дедифференцировки и редифференцировки репродуктивных клеток и регуляцию этих процессов.

2. Прикладное направление, целью которого является получение гаплоидов и гомозиготных диплоидов хозяйственно - ценных культур, используя в основном метод эмпирического подбора оптимальных условий для индукции эмбриогенеза или органогенеза.

3. Оценка полученных линий различными методами и выявление из них наиболее подходящих для дальнейшего использования в селекционных программах.

Экспериментальный материал полученный в процессе исследований осветил основные моменты всех трех основных направлений касающхся получения гаплоидных растений из гамет. Впервые было показано на моркови, что гаплоидные клетки зародышевого мешка моркови способны приступать к гиногенному развитию в условиях in vitro, это открывает достаточно большие возможности для получения дигаплоидных растений из клеток макрогаметофита также как и из микрогаметофита. При этом установлено, что только глубоко дифференцированные клетки макрогаметофита приступают к гиногенезу.

Данная работа показала высокую эффективность применения данного метода и открыла большие прикладные возможности гиногенеза in vitro для решения селекционных задач.

120

Полученные в ходе исследований андро - и гиногенные линии оказались на много более выровненными, чем растения исходного сорта Нантская 4, что было установлено RAPD анализом. Морфологический и биохимический анализы также подтвердили выровненность полученных линий.

Накопленный материал свидетельствует о том, что теоретические и прикладные возможности гаплоидной технологии могут быть успешно реализованы в сочетании с традиционными методами генетико-селекционной работы при условии высокой эффективности и продуктивности андро и гиногенеза.

РЕКОМЕНДАЦИИ К ПРОИЗВОДСТВУ

Предлагаемая технология получения гиногенных растений моркови in vitro может быть использована для ускоренного получения гомозиготных стерильных и фертильных линий при создании гетерозисных гибридов Fi моркови.

Список литературы диссертационного исследования кандидат сельскохозяйственных наук Домблидес, Артур Сергеевич, 2001 год

1. Атанас А Биотехнология в растениводстве /Новосибирск 1993 - С 241.

2. Батыгина Т.Б., Васильева В.Е., Матвеева Т.Б. Проблемы морфогенеза in vivo и in vitro эмбриоидогенез у покрытосеменных растений.//Ботанический журнал 1978 - Т. 63 - № 1 - С. 87-111.

3. Бернд Б. Физиолого-генетические особенности андрогенеза в культуре пыльников дикого картофеля. Автореф. дис.канд. б. н. М., 1985. - С. 18

4. Бугара A.M., Русина JT.B. Гаплоидный каллусогенез в культуре неоплодотворенных семяпочек шалфея мускатного.// Физиология и биохимия культурных растений. 1989. - Т. 21. - № 6. - С. 554 - 560.

5. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе.// МГУ Москва 1999.

6. Давоян Э.И. Получение гаплоидов у риса методом культивирования неоплодотворенных завязей in vitro// Доклады ВАСХНИЛ. 1985

7. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. 5-е издание и доп. М.: Агропроиздат, 1985 - 351 с.

8. П.Дьячук, Т.И. Дьячук, H.A. Культура пыльников злаков: современное состояние, проблемы перспективы.//Сельскохозяйственнаябиотехнология. 1989. - №5 - С. 3-9.

9. Еналеева Н.Х., Тырнов B.C. Хохлов С.С. Выделение зародышевых мешков покрытосеменных растений путем мацерации тканей.// Цитология и генетика. 1972. Т. VI. - № 5.

10. Ермаков И.П., Матвеева Н.П. Диморфизм пыльцы и андрогенез в культуре пыльников и микроспор// Вестн. МГУ Серия 16 Биология 1986 - №3.

11. Гришина Е.В., Зайцева М.И. Получение гаплоидов кукурузы при воздействии химическими мутагенами и физиологическими активными веществами.// Апомиксис и цитоэмбриология растений: Саратов. 1968. С. 65-68.

12. Знаменская В.В. Жужжалова Т.П. Подвигина O.A. Инукция гаплоидов в культуре неоплодотворенных семяпочек Beta vulgaris // Embriology and seed reproduction: Proc. XI Int. Symp. July 3-7, 1990, St. Petesburg, Nauka.

13. Ивановская E.B. Дифференцировка тканей и клеточные деления // Изв. Ан. СССР серия биолог. 1975. С. 237-252.

14. Кордюм E.JI. Цитоэмбриология семейства зонтичных. Киев: Наукова думка, 1967. - 176 с.

15. Кучко A.A., Маруненко И.М. Культура изолированных пыльников картофеля. //Сельскохозяйственая биология 1983 - № 5. - С. 16-18124

16. Ю.Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А., Шеремет A.M. Скрещивание Hordeum vulgare х Seeale cereale как возможность получения гаплоидов.// Научно-техническ. Бюллетень Всесоюзного селекционного-генетического института 1981. - №3 - С. 19-22.

17. Лукьянюк С.Ф. Разработка приемов in vitro для получения гаплоидов ячменя и тритикале. Автореф. дис.канд. б. н. -М., 1983. С. 18.

18. Магешвари П. Эмбриология покрытосеменных. Пер с англ. М.: 1954 -439 с.

19. Нгуен Тхи Дао, Шамина З.Б. Культура изолированных пыльников томатов. //Физиология растений. 1978. - Т. 25 - С. 155-160

20. Ницше В., Венцель Г. Гаплоиды в селекции растений. М.: Колос, 1980. -С. 126.

21. Орел Л.И. Цитоэмбриологическое изучение цитоплазматической мужской стериьности у лука // Тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции 1968. - Т. 40. - № 1 - С. 163-176.

22. Павлова М.К. Культура неолодотворенных завязей и семяпочек возмжности и перспективы // Сельскохозяйственная биология 1987. - № 1 .- С. 23-33.

23. Петров Д.Ф., Белоусова Н.И. Фокина Е.С. Передача апомиксиса от трипсакум к кукурузно-подобным гибридам // Отдаленая гибритизация и апомиксис. Новосибирск, 1982. - С. 32-52.

24. Плохинский H.A. Биометрия. 2-е изд., М.: Изд. МГУ, 1970.

25. Подвигина O.A. Культура неопыленных семяпочек как способ получения гаплоидных растений.// Обеспечение эффективного функционирования производственного потенциала АПК России в условиях различных отношений Воронеж, 1993 - С. 127-128.

26. Рахимбаев И.Р., Тивари Ш., Кударов Б.С. Экспериментальная гаплоидия в культуре пыльников и микроспор зерновых злаков// Сельскохозяйственная биология. 1990. - №3. - С. 44 - 55.125

27. Семенова И.В., Казачек Т.И. Создание через культуру пыльников константных линий табака разных сортотипов для селекции.// Культура клеток растений и биотехнология Кишинев - 1983

28. Симоненко В.К. Развитие пыльника и микроспор в фертильных и ЦМС линиях подсолнечника // Цитология и генетика 1982. - Т. 16. - № 5. - С. 32-36.

29. Солнцева М.П. Левковский В.П. Вариант приготовления постоянных окрашенных по Фельгену препаратов целых зародышевых мешков растений, выделенных путем мацерации тканей.// Ботанический журнал. -1978. -Т 63. № 6.

30. Солнцева М.П. Что же такое апомиксис у цветковых растений? Ботанический журнал 1991. - Т 76- № 6. - С. 801 - 808.

31. Таганов Б.О. Культура пыльников моркови in vitro: Автореф. дис.канд. б. н.-М., 1991.-С. 22.

32. Таратонов Н. А. Влияние эндогенных факторов на рост и развитие регенерантов в процессе формирования дигаплоидных форм сахарной свеклы: Автореф. дис. канд. сельхоз наук. Рамонъ., 1999.

33. Тодуа В.А. Явление гаплоидного и диплоидного апомиксиса у рода Nicotiana // Отдаленная гибритизация и апомиксис. Новосибирск: Наука, 1982.-С. 109-119.

34. Тюкавин Г.Б., Тимин Н.И., Буракова И.А. Использование методов культуры тканей растений in vitro в селекции моркови // Науч.-техн. Бюл. ВИР. Л., 1989. Вып. 192. С. 57-60.

35. Тюкавин Г.Б., Таганов Б.О. Эмбриогенез в культуре пыльников растений моркови in vitro // Сборник научных трудов ВНИИССОК М. 1993, С. 12-15.

36. Тюкавин Г.Б. Шмыкова H.A. Эмбриогенез в культуре пыльников моркови in vitro. // Физиология растений. 1999. - Т. 46. - № 6. - С. 876-883.

37. Тырнов B.C. Завалишина А.Н. Возможности использования гаплоидов для решения селекционных биотехнологических и эволюционных проблем.//Достиж. Биотехнол. Агропром. комплексу: Тез. Докл. -Черновцы, 1991. - Т. 1 - С. 59.

38. Хаченко П.Н. Шиловский В.Н. Использование метода культуры пыльников в ускорении селекционного процесса. // Докл. ВАСХНИЛ. -1982-№9-С. 24-25

39. Харченко П.Н. Индуцирование растений из пыльцевого каллуса гибридного происхождения с целью получения гомозиготных форм для селекции.// Культура клеток и биотехнология 1983 - Кишинев - С. 155156.

40. Хржановский В.Г. Пономаренко С.Ф. Практикум по общей ботаники Учеб пособ. М.: Высш. школа 1979 - 422.С., ил.

41. Чумак М.В. Стимуляция гаплоидного апомиксиса у кукурузы // Сборник научных трудов молодых ученых Краснодар: НИИСХ, 1974 - Вып. 4. -С. 76-79.

42. Шамина З.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культуре микроспор //Культура клеток растений. М.: Наука. 1981. - С. 124-135

43. Юркова Г.М., Левенко Б.А. Изолированная культура пыльников злаков //Эксприментальная генетика растений. Киев : Наук, думка, 1982. - С. 46-65127

44. Шмыкова H.A. Агафонов А.Ф. Изучение вияния тидиазурона на гиногенез у лука репчатого.// Новые методы селекции и создание адаптивных сортов сельскохозяйственных культур: результаты и перспективы: Тез. Докл. Научной сессии. 1-3 июля 1998 Киров

45. AbdallaM.M.F., Hermsen J.G.T. Diploid parthenogenesis and androgenesis in diploid Solanum.//Euphytica. 1972. - V. 21 P. 426 - 431.

46. Andersen S.B. Anther culture in carrot. // Hereditas. Suppl. 1985. - V. 3. - P 132.

47. Asselin de Beauville, M.: Obtention d haploides in vitro a partir d ovaires non fecondes de Riz, Oryza sativa L. //C.R. Acad. Sei. (Paris) 1980. - V 296 - P. 489-492.

48. Arcia, M.A., Wernsman E.A., and Burk L.G. Performance of anther-derived dihaploids and their converntionally inbred parents as lines, in Fl hybrids, and the F2 generations.// Crop. Sei. 1978. - V. 18. - P. 413-418.

49. Arndt, F., Rusch, R., and Stillfried H.V. SN49537, a new cotton defoliant.// Plant Physiol Abstr. 1976 - V. 57 - P. 599.

50. Ao G.M., Zhao S.X., Li G.H. Induction of haploid plantlets from unpollinated maized ovaries in ovaries in vitro.// Acta Genetica Sinica. 1982. - V 9. - №4. -P. 281-283.

51. Baenziger, P.S., Wesenberg, D.M., Smail, V.M., Alexander, W.L., and Schaeffer, G.W. Agronomic performance of wheat doubled haploid lines derived from cultivars by anthers culture.// Plant Breeding. 1989 - V. 103 -P. 101-109.

52. Baenziger F.S., KudirkaD.T., Schaeffer G.W., Lazer M.D. The significance of doubled haploid variations// 16 th Stadler. Genetic. Symp. On Gene Manipulation in Plant Improvement. 1984. P. 384-314.

53. Barclay I.R. High frequencies of haploid production in wheat (Triticum aestivum) by chomosonal elimination.// Nature V 256 - P. 410-411.

54. Bossoutrot, D., Hosemans, D. Gynogenesis in Beta vulgaris L.: From in vitro culture of unpollinated ovules to the production of doubled haploid plants in soil// Plant Cell Rep. 1985 - V. 4 - P. 300-303.

55. Buchter-Larsen A., Jensen C.J. Development of pathenoginesis pathway for the production of haploid sugar beet plants (Beta vulgaris)// Hereditas Suppl. -1985-V. 3.-P. 135.

56. Burk L.G. Haploids in genetically marked progenies of tobaco. //J.Hered. -1962-V.54-P. 222-225.

57. Burk, L.G. and Matzinger Variation among anther-derived doubled haploids from an inbred line of tobacco.//J. Hered. 1976. - V. 67 - P. 381-384.

58. Cagnet-Sitbon, M. (1980): Recherches peliminaires sur la production d haploides de Gerbera jamsonii par culture d antheres et d ovules non fécondés in vitro.// These de 3e cycle, Amelior. Plantes, Université Paris-Sud, Centre d Orsay

59. Campion, B. and Alloni, C. Induction of haploid plants in onion (Allium cepa L.) by in vitro culture of unpollinated ovules.// Plant Cell, Tissue Organ Culture 1990 - V 20 - P 1 - 6.

60. Campion B., Bohanec B., Javornik B. Gynogenic lines of onion (Allium cepa L.): evidence of their homozygosity.// Theor. Appl. Genet. 1995 - V. 91. - P. 598-602.

61. Chase S.S. Androgenesis its use for transfer of maize cytoplasm.// J.Hered. -1963. -V 54-P. 117-167.

62. Chaieff R.S. Isolation of agronomically useful mutants from plant cell cultures.// Science 1983. - V. 219. - P. 676-682.

63. Cooper D.C., Haploid-diploid twin embryos in Lilium and Nicotiana. //Amer. Jour. Bot. 1943 - V 30. - P. 408-413.

64. Crete P., (1949) Un cas de polyembryonie chez une Gentianacee, 1 Erythraea, centaurium Pers., Bull. Soc. Bot. France, 96, 113-115.129

65. Cuny F., R. Dumas de Vaulx, B Longhi and R. Siadons Analyse des plantes de melon (Cucumis melo L.) issues de croisements avec du pollen irradie a différents doses.//Agronomie 1992. -V 12. -P.623-630.

66. Cuny F., M. Grotte, R. Dumas de Vaulx and A. Rieu Effects of gamma irradiation of pollen on parthtnogenetic haploid production in muskmelon (Cucumis melo L.) //Envivon. Exp. Bot. 1993. -V 33. -P. 301-312.

67. De Beauvill M.A. Obtention d'haploides in vitro a partir d'ovaries non fécondés de Riz. Oryza sativa L. // Comptes rendus hebdomadaizes des seances de l'Academie des Sciences 1980 - V 290. - №6. - P. 489-492.

68. Deimling Sabin Was kann die Zell und Gewebe der pflanzenzuchtung.//Mais. 1994. -22, №1 -P. 10-15.

69. Dore C. Obtention de plantes haploides de chou cabus (Brassica oleracea L. ssp. capitata) apres culture in vitro d'ovules pollen irradie// C.R. Acad. Sei. Paris 1989 - №309 - P. 729-734.

70. Dore C., Marie F., Production of gynogenetic plants of onion (Allium cepa L.) after crossing with irradiated pollen.// Plant Breeding 1993. - V. Ill - P. 142-147.

71. Dumas de Vaulx R. Obtention de plantes haploides chez le melon (Cucumis melo L) après pollinisation par Cucumis fîcifolius // A. Rieh. C.R. Acad. Sei. Paris 1979 - №289. - P. 875-878.

72. Dunstan, D.I. and Short K.C. Improved growth of tissue culture of the onion, Allium cepa. // Physiol. Plant 1977 - №41 - P. 70-72.

73. Edwards K., Johnstone C., Thompson C. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis // Nucleic Acids Res. -1991.-V. 19. -№6.-P. 1349.

74. Finnie S.J., Forster B.P., Chalmers K.J., Dyer A.F., Waugh R. Powell W. Genetic stability of microspore-derived doubled haploid of barley: a cytological, biochemical, and molecular study.// Genome 1991. - V.34 - P. 923-928130

75. Flawell R. A model for the mechanism of cytoplasmic male sterility in plants with special reference to maize //Plant Sei. Lett. 1974. - V. 3. - P. 259-263.

76. Friendt W., Breun J., Zuchter S. e. a. Comparative value of androgenetic doubled haploid and convertionally selected spring barley lines.// Plant Breeding. 1986. - № 97 - P. 56-63.

77. Guo G.F., Jia X.J., Chen L.X. Induction of plantles from isolated ovules of Hevea brasiliensis. // Hereditas, China, 1982. - V 4, - №1 - P. 27-28.

78. Guha, S., Johri, B.M. (1966): In vitro development of ovary and ovule of Allium cepa L.// Phytomorphology 1966 - V. 16 - P 353 - 364.

79. Guha, S Maheshawari, S.C. In vitro production of embryos from anthers of Datura II Nature Lond. 1964 - P. 204-497.

80. Haberlandt G. Ueber Zellteilungshormon und ihre Bezehungen zur Wundheilung, Befruchtung, Parthenogenesis und Adventivembryonie// Biol. Zentbl. 1922 - V. 42-P. 145-172.

81. Hakansson, A., Studien über die Entwicklungsgeschichte der Umbrelliferen.// Lunds Univ. Arsskr. 1922. - V.7 - P. 1-118.

82. Hayase H. Cucurbita crosses. Occurrence of haploid twin pair from a Fl progeny of C. maxima and C. moschata. // Jpn. J. Breed. 1954 - V. 4 - P 55.

83. Hoseman P., Bossoutrot D. Induction of haploid plants from in vitro culture of unpollinated ovules Beta (Beta vulgaris L.) //Pflanzenzucht. 1983. - V. 91 -№1,-P. 74-77.

84. Huang, Q.F., Yang, H.Y., Zhou, C. Embryological observations on ovary culture of unpollinated young flowers in Hordeum vulgare L.// Acta Bot. Sin. -1982 -V 24,-P. 295-300.

85. Hu K.L., Matsubara S., Murakami K. Haploid plant production by anther culture in carrot (Daucus carota L.) //J. Jpn. Soc. Hort. Sei. 1993. - V. 62. - P. 561-565.

86. Jensen, W.A., Schulz, P., Ashton, M.E. An ultrastructural study of early endosperm development and synergid changes in unfertilized cotton ovules. //Planta 1977-V. 133. -P 179- 189.

87. Junzhi Z. Application of anthers culture technique to crop improvement in China // Plant Cell Culture Crop., Improv., Proc., Int., Symp., Calcutta, 1983 610 Dec., N.Y.; L.P. 351-363.

88. Kasha K.J. and E. Reinberg, Recent development in the production and utilization of haploids in barley //Barley Genetics 1982 - V 4. - P. 653-665.

89. Kasha K.J. and Kao K.N. High frequency haploid production and utilization of haploid in barley. // Barley Genetics 4:653-665.

90. Katayama Y., Adachi T. Studies on haploidy in relation to plant breeding. V. Further proposal of hahloid method in plant breeding. 1969. Seiken Ziko № 21-P. 37-44.

91. Kostoff D. An androgenic Nicotiana haploid //Ztschr. F. Zellforsch. u. Mikros. Anat. 1929 - V. 9 - P. 640-642.

92. Keller W.A., Amstrong K.C. Production of haploid via anther culture in Brassica oleracea var. italica. // Euphytica 1983 - V. 32 - P. 151-159.

93. Keller E.R.J, and Korzum L. Ovary and ovule culture for haploid production// In vitro haploid production in higher plants, 1996 V. 1, P.217-235.

94. Kermicle J.L. Androgenesis conditioned by a mutation in maize. // Science. -1969.-Y. 166.-P. 1422-1424.

95. Kumashiro, T. and Oinuma Comparison of genetic variability among anther-derived and ovule derived doudled haploid line of tobacco. //Japan J. Breed. -1985.-V. 35.-P. 301-310.

96. Kuo, C.S. The preliminary studies on culture of unfertilized ovary of rice in vitro. Acta Bot. Sin. 1982 - V 24 - P. 33 - 38.132

97. Kusano S. Experimental studies on embryonal development in an anginosperm.// Jour. Col. Agr. Tokyo Imp.Univ. 1915.,№ 6 P. 7 120.

98. Konar R.N. A haploid tissue from the pollen of Ephedra foliata. // Phytomorphology 1963 - V. 13 - P 170-174.

99. Lacadena, J.R. (): Spontaneous and induced parthenogenesis and androgenesis. In: Haploids in higher plants, advances and potential (ed. Kasha, K.J.), 1974, pp. 13 32. Guelph: Univ. Guelph

100. Lebegue A. Embryologie des Saxifragacees. Polyembryonie chez le Bergenia delavayi Engl., Bull. Soc. Bot. France, 1949 № 96, P. 38-39

101. Lux, H., Herrmann, L., Wetzel, C.: Production of haploid Sugar beet by culturing unpollinated ovules.// Plant Breeding 1990 - V. 104. - P. 177 — 183.

102. Machteld C. Mok, David W.S. Mok, Janet E. Turner, and Cesar Mujer V. Biological and biochemical effects of cytokinin-activ phenylurea derivatives in tissue culture systems.// HortScience 1987 - V. 22. - №6. - P. 1194 - 1196.

103. Magnusson, E.,Wremerth-Weich and Bornman Haploidization of Beta vulgaris ovule culture // Hereditas suppl. 1985 - V. 3 - P. 147-148.

104. Maheshwari N. In vitro culture of excised ovules of Papaver somniferum L. Phytomorphology 1961. - V. 11. - P. 307 - 314.

105. Maheshwari, S.C., Rashid, A., Tyagi, A.K. Haploid from pollen grains -retrospect and prospect// Amer. J. Bot. 1982 - V. 69. - P. 865-879.

106. Maheshwari P., Rungaswary N.S. Embryology in relation to physiology and genetics// Advances in botanical reseach // Ed. R. D. Preston. London, 1965, №2 P. 219-321

107. Masuda K., Kikuta Y., Okazava Y. A revision of medium for somatic embryogenesis in carrot suspension culture. J. Fac. Agr. Hokkaido Univ. -1981. Vol. 60. P. 183-193.

108. Meynet J., R. Barrade, A. Duclos and R. Siadons Dihaploid plants of roses (Rosa and hybrida, cv. Sonia) obtained by pathenogenesis induced using133irradiated pollen and in vitro culture of immature seeds. // Agronomie 1994 -V. 14.-P. 169-175.

109. Mok, M.C., D.W.S. Mok, D.J., Armstrong K., Shudo, Y. Isogai, and T. Okamoto Cytokinin activity of N-phenyl-N-l,2,3-thiadiazol-5-ylurea (Thidiazuron).// Phytochemistry 1982 - V. 21. - P. 1509-1511.

110. Montelango-Escobedo H., Rowe P.R. Haploid induction in potato: cytological basis for the pollinator effect. // Euphytica. 1969 - V. 18 - №1 - P. 116-123.

111. Murashige T. and Skoog F.) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobaco tissue culture.// Physiol. Plant. 1962 - V 15. - P. 473-495.

112. Niewkerk, J.P. van, R.H. Zimmerman, and I. Fordham Thidiazuron stimulation of apple shoot proliferation in vitro.// HortScience. 1986 - V21. - P. 516518.

113. Nitsh J. Culture in vitro de tissus de fruits. Mesocarpe et endocarpe de pech.// Bull. Soc. Bot. France. 1965. - V 112. - № V2.-P. 22-25.

114. Norreel, B. Etude cytologique de l'androgenese experimentale chez Nicotiana tabacum et Datura innoxia // Bull. Soc. Bot. Fr 1970 P. 117

115. Oinuma, T. and Yoshida, T. Genetic variation among doubled haploid lines of burley tobacco varieties.// Japan. J. Breed. 1974. - V. 24. - P 211-216.

116. Ran, B.D. Induction of haploid plants from unfertilized tobacco ovules.// Zhongguo Yancao. 1980 - V 3. - 25 - 26.

117. Raghavan, V. Role of the generative cell in androgenesis in henbane. Science. 1976-V. 191.-P. 388-389

118. Raquin C. Induction of haploid plants by in vitro culture of petunia ovaries pollinated with irradiated pollen // Z. Pflanzenzuchtg. 1985. - V 94. - P. 166169.134

119. Roger C. Muren. Haploid plant induction from unpollinated ovaries in Onion. // HortScience 1989. - Y. 24. - №5. - P. 833-834.

120. Sachar, R.C., Kapoor, M. In vitro culture of ovules of Zephyranthes.// Phytomorphology 1959. - V. 9. - P. 147 - 156.

121. San Noeum, L.H. Haploids d'Hordeum Vulgare par culture in vitro non fécondés. //Annual. Amelior. Plantes. 1976. -V. 26. - P. 751-754.

122. San Noeum, L.H. (1979): In vitro induction of gynogenesis in higher plants. Proc. Conf. Broadening Genet. Base Crops, Wageningen, 1978, pp. 327 329, Wageningen: Pudoc

123. Sauton A. Effect of season and genotype on gynogenetic haploid production in muckmelon (Cucumis melo L.). Sei. Hortic. 1988. - V. 35 - P. 71-75.

124. Sauton A. and R. Dumas de Vaulx Obtention de plantes haploides chez le melon (Cucumis melo L.) par gynogenes induite par du pollen irradie.// Agronomie 1987 - V. 7 - P. 141-148.

125. Simpson E. Dihaploid production in Barley // Ann. Rept., 1978. - Plant. Breed. Inst., Trumpington. - P. 131.

126. Sitbon M. Production of haploid Gerbera jamesonii plants by in vitro culture unfertilized ovules // Agronomie. 1981 - V. 1 - №9. p. 807-812

127. Shantz, E.M., Steward, F.C. Coconut milk factor: The growth-promoting substance in coconut milk.// J. Amer. Chem. Soc. 1952. - V. 74. - P. 61336135.

128. Sopory S.K. Maheshwari S.C. Development of pollen embryoids in anther cultures of Datura innoxia. 1. General observations and effects of physical farctors. // J. Exp. Bot., 1976 a V. 27 - № 96 - P. 49-57.

129. Sopory, S.K. Physiology of development of pollen embryoids in Datura innoxia//Mill. Ph.D. thesis, University of Delhi. 1972, Delhi

130. Subrahmanyam N.C. Haploidy from Hordeum in perspecific crossis. Part II Dihaploids of H. brachrantherum and H. depressum // Theor. and Appl. Genet. 1976. - V. 55. - № 3 - P. 139-144.135

131. Sun, C-S. Androgenesis in cereal crops. In proceeding of symposium on plant tissue culture. 1978. - p. 117-123. Science Press, Peking.

132. Sunderland N. Anther culture as a mean of haploid induction// Ed. Kasha K.J. Haploid in higher plants: advances and potential. Guelph: University of Guelph Press, 1974. P. 91 122.

133. Sunderland N., Wicks F.M. Embryoid formation in pollen grains of Nicotiana tabacum.//J. Exp. Bot. 1971. -V. 22. - P. 13-226.

134. Sunderland N., Collins G.B., Dunwell J.M. The role nuclear fusion in pollen embryogenesis of Datura innoxia Mill.// Planta. 1974. - V. 117. - P. 227241.

135. Sunderland N., Dunwell J.M. Anther and pollen culture// Plant tissue and cell culture/Ed. H. E. Street. Oxford, 1978. - P. 223-264

136. Symko S. Haploid barley from crosses of Hordeum bulbosum (2 x) and H. vulgare (2 x).// Can. J. Genet. Cytol. 1969. -V. 11. - P 602-608.

137. Siddigui, S.A. (): In vitro culture of ovule of Nicotiana tabacum L. var. NP. 31.// Naturwissenshaften 1964 - V. 51 - P. 517

138. Truong Andre I., Demarly Y. Obtaining plants by in vitro culture of unfertilized maize ovaries (Zea mays L. ) and preliminary studies on the progeny of gynogenetic plant// Z. Pflanzenzucht. - 1984. - V. 92 - № 4 - P. 309-320

139. Tulecke W.R. The pollen culture of C.D. La Rue a tissue from the pollen of Taxus. // Bull. Torrey. Bot. Club. 1959. - V. 86. - P. 283-289.

140. Tuleck W.R. and Sehgal N. Cell proliferation from the pollen of Torrea nucifera // Conf. Boyce Thompson Inst. 1963 V. 22 P. 153-163.

141. Uchimiya, H., Kameya, T., Takanashi, N. In vitro culture of unfertilized ovules in Solanum melongena and Zea mays. //Jpn. J. Breeding 1971. - V 21.-P. 247-250.

142. Van Geyt, J., Speckmann, Jr., D'Halluin K. and Jacobs M. In vitro induction of haploid from unpollinated ovules and ovaries of the sugarbeet (Beta vulgaris L.).// Theor. Appl. Genet. 1987 - V 73. - P. 920 - 925.136

143. Wang, С.С., Kuang, B.J. : Induction of haploid plants from the female gametophyte of Hordeum vulgare L //Acta Botanica Sinica. 1981. - V 23. -P. 329-330.

144. White Ph., Influence of some environmental conditions on the growth of excised root tips of wheat seeding in liquid media. // Plant Physiol. 1932. - V. 4. -P 613-628.

145. Yun J.U., Ri U.Z. Изучение характера регенерации растений из неоплодотворенных яйцеклеток ячменя. //Acta. Acad. Agr. Sei. D. P. R. Korea.-19905-P. 3-8.

146. Zenkteler M. Microsporogenesis and tapetal development in normal and malesterile carrots (Daucus carota L.). // Amer. J. Bot. 1962. - V. 49. - P. 341348.

147. Zenkteler M., Straub J., Citoembryological studes on the process of fertilization and development of haploid embryos of Triticum aestirum L. (2n=42) after crossing with Hordeum bulbosum (2n=14) // Pflanzenzucht. -1979.-V. 82.-P. 36-44.

148. Zhu, Z.C., Wu, H.S., An, Q.K., Liu, Z.Y. In vitro induction of haploid plantlets from the unpollinated ovaries of Triticum and Nicotiana tabacum. Acta Genet. Sin.-1979-№6-P. 181-183

149. Zhu, Z.C., Wu, H.S., An, Q.K., Liu, Z.Y. Induction of haploid plantles from unpollinated ovaries of Triticum aestivum cultured in vitro.// Acta Genet. Sin. 1981 -V 8. -P. 386-390

150. Zhu, Z.C., Wu, H.S., An, Q.K., Liu, Z.Y. In vitro induction of haploid plantles by tissue culture from the unpollinated ovaries of male sterile line Nicotiana// Hereditas. (Beijing) 1980. - V. 2 - P. 36.137

151. Zhou, C., Yang, H.Y. Induction of haploid plantles from unpollinated young ovaries of Oryza sativa L.// Acta Genet. Sin. 1980. - V. 7 - P. 287 - 288.

152. Zhou, C., Yang, H.Y. Induction of haploid rice plantlets by ovary culture.// Plant Science Letters 1981 a. - V. 20. - P 231 - 237.1. УТВЕРЖДАЮ»диктор вниио1. К%\ С • С. Литвин о в1999 г.1. АКТ

153. О передаче селекционного материала, полученного в лаборатории биотехнологии ВНИИССОК методами культуры пыльников и неопыленных семяпочек in vitro из сорта Нантская 4.

154. Нантская 4 -» пыльник № 11 2 корнеплода Ro

155. Нантская 4 пыльник № 12 3 корнеплода R0

156. Нантская 4 —> семяпочка № 21 5 корнеплодов Ro

157. Нантская 4 семяпочка № 23 4 корнеплода Ro1. Старший научный сотрудник1. Старший научный сотрудник1. С. Д. Сапелкина