Разработка энантиоселективных биокатализаторов кинетического разделения рацемических спиртов, кислот и эфиров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат технических наук Хабибуллина, Ирина Ифировна

• Хабибуллина, Ирина Ифировна
• кандидат технических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат технических наук Хабибуллина, Ирина Ифировна

ВВЕДЕНИЕ

1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Введение. Ферменты и клетки - биокатализаторы реакций

1.2 Липолитические ферменты

1.2.1 Биосинтез липаз

1.2.2 Скрининг микроорганизмов-продуцентов липаз

1.3 Структурно - функциональные взаимодействия, возникающие при катализе липазами

1.4 Влияние органических растворителей на активность ферментов

1.4.1 Активность ферментов в присутствии органических растворителей

1.4.2 Суспензия биокатализаторов в неполярных и полярных органических растворителях

1.4.3 Модификация ферментов

1.4.3.1 Физическая модификация

1.4.3.2 Химическая модификация

1.4.3.3 Модификация с помощью методов генной инженерии

1.4.3.4 Специфические методы - внешняя модификация

1.4.3.4.1 «Твердые ферменты»

1.4.3.4.2 Методы увеличения энантиоселективности липаз

1.5 Ферментативные реакции в органических растворителях

1.6 Методы получения оптически активных веществ

1.6.1 Стереоселективный синтез на основе прохиральных предшественников и мезо-соединений

1.6.2 Дерацемизация рацемических смесей с помощью ферментов

1.6.3 Физико-химические методы разделения

1.7 Практическое применение липаз в разделении рацемических смесей

1.7.1 Кинетическое разделение рацемических спиртов с помощью липаз

1.7.2 Кинетическое разделение рацемических спиртов с помощью цельноклеточных биокатализаторов

1.8 Получение оптически активных хроманов

1.9 Получение оптически активного 8-(+)-кетопрофена

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка энантиоселективных биокатализаторов кинетического разделения рацемических спиртов, кислот и эфиров»

Актуальность работы. Важнейшими синтонами при производстве лекарственных препаратов и биологических средств защиты растений являются оптически чистые энантиомеры спиртов, кислот и сложных эфиров. Наиболее эффективными способами получения таких соединений является кинетическое разделение их рацемических смесей парциальным ацилированием или энантио-селективным гидролизом с помощью гидролаз микроорганизмов (эстераз и липаз), отличающихся высокой селективностью, широкой субстратной специфичностью, активностью, стабильностью, способностью работать как в воде, так и в органических растворителях.

Клетки микроорганизмов с успехом применяются в качестве катализаторов во многих процессах регио- и энантиоселективной трансформации органических соединений. Использование их в качестве биокатализаторов кинетического разделения более перспективно по сравнению с ферментными препаратами, учитывая, с одной стороны, высокие затраты материалов и энергии на концентрирование и выделение внеклеточных и внутриклеточных ферментов, а с другой - значительный расход ферментов во время трансформации. Кроме того, важнейшим преимуществом интактных клеток перед ферментными препаратами явлется возможность их регенерации и многократного использования.

Принимая во внимание успехи, достигнутые в создании со-функциональной боковой изопреноидной цепи а-токоферола с 2-мя хиральны-ми центрами R-конфигурации на основе хлорофилла, разработка биокаталитического метода получения S-хроманилэтанола - ключевого синтона полного аналога природного а-токоферола - является важной задачей на пути создания альтернативной технологии получения витамина Е на основе доступного растительного и нефтехимического сырья.

Использование методов энантиоселективной биотрансформации с применением клеток микроорганизмов также является перспективным подходом к синтезу оптически активного S-кетопрофена - ценного предшественника в синтезе нестероидных противовоспалительных препаратов.

В связи с этим создание доступных, технологичных и энантиоселективных катализаторов для синтеза оптически активных S-хроманилэтанола (ключевого синтона в синтезе витамина Е) и S-кетопрофена (синтона нестероидных противовоспалительных препаратов) является актуальной задачей.

Цель работы. Разработка энантиоселективных биокатализаторов для получения оптически активных 8-(-)-6-бензилокси-2(2-гидроксиэтил)-2,5,7,8-тетраметилхромана и 8-(+)-2(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты на основе микроорганизмов, обладающих гидролазной активностью. Поиск методов интенсификации процессов кинетического разделения оптически активных спиртов, кислот и эфиров.

В связи с этим задачами работы являлись:

• осуществление скрининга микроорганизмов, обладающих липолитиче-ской и эстеразной активностью;

• исследование свойств перспективных штаммов с целью их идентификации;

• разработка энантиоселективных биокатализаторов парциального разделения спиртов, кислот и эфиров в процессах этерификации и гидролиза на основе клеток микроорганизмов с целью получения оптически активных S-хроманилэтанола, энантиомеров других спиртов и S-кетопрофена;

• исследование условий эффективной работы и стабильности биокатализаторов;

• разработка методов получения оптически активных S-хроманилэтанола и S-кетопрофена с использованием созданных биокатализаторов;

• исследование подходов к интенсификации процессов кинетического разделения спиртов и эфиров.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с Федеральной целевой программой «Государственная поддержка интеграции высшего образования и фундаментальной науки в 2002-2006 гг.» (2004-2006 гг., госконтракт № 02.438.11.7003), региональной программой РФФИ "Агидель" (2005г.), планами научно-исследовательских работ Уфимского государственного нефтяного технического университета (2003-2006 гг.), ведомственной научной программой "Развитие научного потенциала высшей школы" (проект «Научно-образовательная деятельность музея, созданного на базе кафедры биохимии и технологии микробиологических производств Уфимского государственного нефтяного технического университета» 2005-2006 гг.).

Научная новизна. Выделены и идентифицированы новые микроорганизмы родов Rhodococcus (77-32), Microbacterium (77-9) и Bacillus (КЗ-2), на основе которых созданы энантиоселективные биокатализаторы, проявляющие каталитическую активность при парциальном ацилировании Ы^-хроманилэтанола, переэтерификации Я^-кетопрофена и энантиоселектив-ном гидролизе их рацемических эфиров.

Научно обоснованы методы синтеза оптически активных 8-(-)-6-бензи-локси-2(2-гидроксиэтил)-2,5,7,8-тетраметилхромана и 8-(+)-2-(3-бензоилфе-нил)пропионовой кислоты с использованием биокатализаторов на основе микроорганизмов родов Rhodococcus (77-32), Microbacterium (77-9) и Bacillus (КЗ-2). Обнаружена инверсия Я-(+)-хроманилэтанола в 8-(-)-хроманилэтанол в присутствии биокатализатора на основе культуры микроорганизма, относящегося к роду Rhodococcus (77-32). Найдены условия (температура, рН, растворитель), в которых биокатализаторы проявляют наивысшую активность. Разработаны методы увеличения активности биокатализаторов путем их обработки органическими растворителями. Показано, что в условиях кинетического разделения биокатализаторы проявляют высокую стабильность. Доказана возможность многократного использования разработанных биокатализаторов.

Практическая значимость. На основе найденных культур микроорганизмов родов Rhodococcus (77-32), Microbacterium (77-9) и Bacillus (КЗ-2) созданы энантиоселективные биокатализаторы и эффективные методы получения 8-(-)-хроманилэтанола - ключевого синтона витамина Е и 8-(+)-кетопрофена -предшественника нестероидных противовоспалительных препаратов высокой оптической чистоты.

Разработаны методы увеличения активности ранее описанных катализаторов энантиоселективного гидролиза рацемических эфиров вторичных спиртов не снижающие энантиоселективность.

Результаты научных исследований легли в основу создания новых лабораторных работ и используются в учебном процессе при подготовке инженеров по специальности 240901 - «Биотехнология».

Апробация работы. Основные результаты исследования были представлены на 55,56 и 57-й научно-технических конференциях студентов, аспирантов и молодых ученых УГНТУ (Уфа, 2004-2006), V Всероссийском научном семинаре и Молодежной научной школе «Химия и медицина» (Уфа, 2005), IV Всероссийской научной INTERNET-конференции «Интеграция науки и высшего образования в области био- и органической химии и биотехнологии» (Уфа,

2005), научно-практической республиканской конференции «Успехи интеграции академической и вузовской науки по химическим специальностям» (Уфа,

2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 4 статьи.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов, материалов и методов исследования (глава 2), обсуждения результатов (глава 3), выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 20 рисунков и 10 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Хабибуллина, Ирина Ифировна

114 ВЫВОДЫ

1 В результате скрининга выделены и идентифицированы микроорганизмы Rhodococcus (77-32), Microbacterium (77-9) и Bacillus (КЗ-2), обладающие высокой липолитической и эстеразной активностью.

2 На основе культур микроорганизмов созданы энантиоселективные биокатализаторы родов Rhodococcus (77-32) для энантиоселективного гидролиза эфиров: хроманилэтилацетата и бутилового эфира кетопрофена, Microbacterium (77-9) для парциального ацилирования Я,8-хроманилэтанола и Bacillus (КЗ-2) для переэтерификации Я^-кетопрофена. Определены условия роста биомассы и трансформации на активность биокатализаторов. Показана возможность многократного применения созданных биокатализаторов в течение длительного времени.

3 Разработаны методы кинетического разделения рацемического хроманилэтанола путем его парциального ацилирования винилацетатом в присутствии биокатализаторов на основе клеток микроорганизма Microbacterium (77-9) и энантиоселективного гидролиза рацемического хроманилэтилацетата на основе клеток микроорганизма Rhodococcus (77-32), позволяющие получать 8-(-)-хроманилэтанол высокой оптической чистоты - 76 и 99% ее соответственно.

4 Разработан метод кинетического разделения рацемического бутилового эфира 2-(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты путем энантиоселективного гидролиза с помощью катализаторов на основе культур микроорганизмов рода Bacillus (КЗ-2), позволяющих получать Я-(-)-кетопрофен высокой оптической чистоты (78% ее).

5 Разработан метод кинетического разделения рацемической 2-(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты путем переэтерификации с винилацетатом в присутствии биокатализатора на основе культуры микроорганизма Bacillus (КЗ-2), позволяющий получать кетопрофен высокой оптической чистоты.

6 Предложен метод увеличения активности энантиоселективных биокатализаторов парциального ацилирования вторичных спиртов и гидролиза их эфиров, полученных на основе культур микроорганизмов Rhodococcus (78-5), Bacillus (77-1) и Bacillus (79-54), в 1,1-4,5 раза путем обработки их органическими растворителями без снижения их энантиоселективности.

7 Доказана возможность осуществления однореакторного хемо-биокаталитического синтеза оптически активных вторичных спиртов из кето-нов (на примере октанола-2) с использованием биокатализатора на основе клеток микроорганизма Bacillus (77-1), катализирующего энантиоселективное ацилирование рацемического октанола-2.

8 Научно обоснованы принципиальные технологические схемы получения оптически активных синтонов предшественников витамина Е и нестероидных противовоспалительных препаратов: 8-(-)-хроманилэтанола и 8-(+)-кетопрофена.

1.10 Заключение

Таким образом, приведенный литературный анализ показывает, что наиболее эффективным при создании оптически активных синтонов является энан-тиоселективный биокатализ. На сегодняшний день не существует универсальных ферментных препаратов и цельноклеточных биокатализаторов, способных эффективно разделять рацематы. В связи с этим поиск новых эффективных биокатализаторов на основе целых клеток микроорганизмов, содержащих сте-реоспецифичные гидролазы для получения оптически активных соединений, является важной задачей.

Поэтому особенно актуальной является задача поиска новых стабильных биокатализаторов кинетического разделения рацемических смесей спиртов, кислот и их эфиров, обладающих широкой субстратной специфичностью и осуществляющих биотрансформацию субстрата с высоким выходом и оптической чистотой.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

Объектом исследования служили штаммы микроорганизмов, выделенных из почвенных образцов нефтеперерабатывающих предприятий, лесопарковой зоны г. Уфы, а также образцов, отобранных в сельских районах и лесных массивах республики Башкортостан, содержащихся в музее кафедры биохимии и технологии микробиологических производств.

2.2 Материалы и реагенты

Материалами исследования были чистые реактивы, синтезированные в химических лабораториях Уфимского государственного нефтяного технического университета и институте нефтехимии и катализа Российской Академии наук (г. Уфа).

Рацемические втор-бутилацетат, октанол-2, этил-3-оксибутират, 2-(3-бензоилфенил)пропионовая кислота, бутиловый эфир

2-(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты) были синтезированы в лаборатории биоорганического синтеза кафедры биохимии и технологии микробиологических производств УГНТУ.

Рацемические смеси 6-бензилокси-2(2-ацетоксиэтил)-2,5,7,8-тетраме-тилхромана и 6-бензилокси-2(2-гидроксиэтил)-2,5,7,8-тетраметилхромана были синтезированы в лаборатории ИНК РАН (г. Уфа) и любезно предоставлены д-ром хим. наук, профессором Одиноковым В.Н. и канд. хим. наук Спивак A.IO.

Материалами исследования также были чистые реактивы, произведенные шосткинским заводом химреактивов: этил ацетат, бутилацетат, толуол, диэти-ловый эфир, изопропиловый спирт, уксусная кислота, олеиновая кислота. Ви-нилацетат приобретен в компании «Мерк» (Германия). Гексан, ацетон были приобретены в «Компонент-реактив» (г. Москва), ацетонитрил, изооктан - в «Криохром» (г. Санкт-Петербург).

Физические свойства исследуемых соединений:

Октанол-2: Формула С8Н180; М=130,228; ТКИП=177,9°С; плотность при 20°С р=0,821±0,06 г/см3; [a]D -15,89. Спектр ЯМР 'Н в (CDC13) 5, м.д.: 0,88 t (ЗН); 1,19 d (ЗН); 1,30-1,44 m (ЮН); 1,61 s (1Н); 3,80 m (1Н).

Втор-бутилацетат. СбИ^СЬ; М=116,16; плотность при 20°С р=0,872 г/см3; ТКИП=111°С; показатель преломления 1,3890. Спектр ЯМР 13С в (CDCI3) 8, м.д.: 9,67 (СН3); 19,1(СН3); 21,19 (СН3); 28,7 (СН2); 71,8 (СН); 170,1 (С).

Втор-бутанол. С4Н10О, М=74,12; ТКИП=100°С, Тпл=-114,7 °С, плотность при 20 °С р=0,808 г/см3, показатель преломления 1,3949 при 25°С. Спектр ЯМР ,3С в (CDCI3) 5, м.д.: 10 (СН3); 22,7 (СН3); 32,1 (СН2); 68,85 (СН).

Этил-З-оксибутират. М=132,1; массовая доля СбН^Оз не менее 98,5%; ТКИп=184°С; плотность при 20°С р=1,017 г/см3; показатель преломления 1,4195. Спектр ЯМР 13С в (CDCI3) (5, м.д.): 14,95 (СН3); 22,4 (СН3); 43,6 (СН2); 60,7 (СН2); 64,4 (СН); 172,4 (С).

З-Оксимаслянная кислота С6НюОз; М=130,15; плотность при 20°С р= 1,024-1,028 г/см3; показатель преломления 1,419-1,420. Спектр ЯМР 13С в (CDCI3) 5, м.д.: 22,9 (СН3); 43,72 (СН2); 64,22 (СН); 176,06 (С).

6 - бензилокси - 2(2 - гидроксиэтил) - 2,5,7,8 - тетраметилхроман (хроманилэтанол) С22Н2803; М=340,456; плотность при 20°С р=1,083±0,06 г/см3; ТКИП=485°С; показатель преломления 1,556±0,02. Спектр ЯМР !Н в (CDCI3) (5, м.д., J/Гц): 1,35 (с, 3 Н, 2-СН3); 1,78-2,50 (м, 4 Н, С (3)Н2 и С(1')Н2); 2,14 (с, 4 Н, Аг-СНз); 2,23 (с, 3 Н, Аг-СЩ; 2,27 (с, 3 Н, Аг-СНз); 2,67 (т, 2 Н, С(4)Н2, J=7,l); 3,86-4,02 (м, 2 Н, С(2')Н2); 4,74 (с, 2 Н, РЬСШО); 7,35-7,50 (м, 5 Н, Ar-Н). Спектр ЯМР ,3С в (CDC13) (5, м.д.): 11,89 (Аг-СН3); 11,95 (Аг-СН3); 12,79 (Аг-СНз); 20,36(С(4)), 23,24 (2-СН3); 31,62 (С(3)); 41,91 (С(1')); 58,98 (С(2')); 74,63 (С(2')); 75,41 (PhCH20); 117,38 (С(8а)); 122,61 (С(8)); 126,18 (С(7)); 127,63 (С(2")/С(6")); 127,72 (С(4")); 128,09 (С(5)); 128,35 (С(3")/С(5")); 137,74 (С(1")); 147,10 (С(4а)); 148,52 (С(6)).

6 - бензилокси - 2(2 - ацетоксиэтил) - 2,5,7,8 - тетраме-тилхроман (хроманилэтилацетат) С24Н30О4; М=382,493. Спектр ЯМР !Н в (CDCI3) (5, м.д., J/Гц): 1,35 (с, 3 Н, 2-СН3); 1,85-1,95 (м, 4 Н, С (3)Н2 и С(1')Н2); 2,08 (с, 3 Н, СОСНз); 2,13 (с, 3 Н, Аг-СНз); 2,18 (с, 3 Н, Аг-СНз); 2,24 (с, 3 Н, Аг-СНз); 2,65 (т, 2 Н, С(4)Н2, ./=6,5); 4,32 (м, 2 Н, СШОАс); 4,75 (с, 2 Н, PhQLO); 7,40-7,55 (м, 5 Н, Аг-Н). Спектр ЯМР 13С в (CDC13) (8, м.д.): 11,90 (Аг-СНз); 12,01 (Аг-СНз); 12,88 (СОСНз); 12,90(Аг-СН3); 20,42 (С(4)); 24,81 (2-СН3); 31,95(С(3)); 52,34 (С(1')); 73,59 (СН2ОАс); 74,73 (С(2)); 117,02 (С(8а)); 123,12 (С(8)); 126,21 (С(7)); 127,69 (С(2")/С(6")); 127,81 (С(4")); 128,44 (С(5), (С(3")/С(5")); 146,90 (С(4а)); 148,77 (С(6)); 201,75 (СОСН3).

2-(3-бензоилфенил)пропионовая кислота) (кетопрофен) С16Н14О3; М=254,28; плотность при 20°С р= 1,198+0,06 г/см3; Ткип=431,3 °С; Тпл=75-78 °С; показатель преломления 1,591±0,02. Спектр ЯМР 'Н (CDC13)(5, м.д., У/Гц): 1.55 д (ЗН, СНз), 3,82 к (Н, СН), 7,46-7,84 м (9Н, С6Н5СОС6Н4).

Бутиловый эфир 2-(3-бензоилфенил)пропионовой кислоты) С20Н22О4; М=326,28; ТКИП=75-78°С. Спектр ЯМР *Н (CDCI3) (5, м.д., J/Гц): 0,9 (т, ЗН, СНз), 1,5-1,65 (м, 4Н,(СН2)2СН3), 3,7 (м, Н, СНСН3), 4,1 (т, 2Н, ОСН2), 7,4-7,9 (м, 9Н, С6Н5СОС6Н4).

Виниловый эфир 2-(3-бензоилфе11ил)пропионовой кислоты) Спектр ЯМР 'н (CDCI3) 8, м.д.: 1,28 (g, ЗН, СН3), 3,7 (к, Н, СН), 4,2-4,3 (м, 2Н, СН=СН2), 5,12-5,35 (м, 2Н, СН=СН2), 6,9 (с, Н, СН=СН2), 7,4-7,8 (м, 9Н, С6Н5СОС6Н4).

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Хабибуллина, Ирина Ифировна, 2007 год

1. Гладилин А.К., Левашов А.В. Стабильность ферментов в системах с органическими растворителями // Биохимия 1998. - Т.63, Вып.З. - С. 408-421.

2. Tejo В. A., Salleh А. В., Pleiss J. Structure and dynamics of Candida rugosa lipase: The role of organic solvent // Journal of Molecular Model. 2004. - V. 10. - P. 358-366.

3. Серебряков Э.П. Стереодивергентный синтез хиральных низкомолекулярных биорегуляторов с применением доступных липаз // Известия Академии наук. Серия химическая. 2001. - №11. - С. 1896.

4. Горохова И.В., Иванов А.Е., Зайцев С.Ю., Зубов В.П. Изучение взаимодействия и активации липазы из Pseudomonas jluorescens в монослоях и преципитатах ПАВ // Известия Академии наук. Серия химическая. 2003. - № 4. - С. 961-969.

5. Reetz М.Т. Lipases as practical biocatalysts // Current Opinion in Chemical Biology. 2002.- V. 6. - P. 145-50.

6. Faber K. Biotransformations in Organic Chemistry. Springer, Berlin, 1997.-229c.

7. Santaniello E., Ferraboschi P., Grisenti P., Manzocchi A. The biocatalytic approach to the preparation of enantiomerically pure chiral building blocks // Chem. Rev. 1992. - V. 92, № 5. - P. 1071-1140.

8. Roberts S. M. Preparative biotransformations // Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions. 2001. - V. 1 - P. 1475.

9. Зорин B.B., Петухова Н.И. Регио- и стереоселективная биотрансформация органических соединений // Панорама современной химии России. Современный органический синтез: Сб. обз. статей.- М.: Химия, 2003. С.439-462.

10. Nardini М., Dijkstra B.W. а/р Hydrolase fold enzymes: the family keeps growing // Current Opinion in Chemical Biology. 1999. - V. 9. - P. 732-737.

11. Брокерхоф X., Дженсен, пер. с анг. Липолитические ферменты.М:- 1978.

12. Brune А.К, Gotz F Degradation of lipids by bacterial lipases. In: Winkelman G (ed) Microbial degradation of natural products. VCH: Weinhein, 1992. - P. 243-266.

13. Aires-Barros M.R., Taipa M.A., Cabral J.M.S. Isolation and purification of lipases. In: Wooley P, Petersen SB (eds) Lipases-their structure, biochemistry and application. Cambridge University Press: Cambridge, 1994. - P. 243-270.

14. Kim S.S., Kim E.K., Rhee J.S. Effects of growth rate on the production of Pseudomonas Jluorescens lipase during the fedbatch cultivation of Escherichia coli II Biotechnology Progress. 1996. - V. 12. - P. 718-722.

15. Lotti M., Monticelli S., Montesinos J.L. , Brocca S., Valero F., Lafuente J. Physiological control on the expression and secretion of Candida rugosa lipase // Chemistry and Physics of Lipids. 1998. - V. 93. - P. 143-148.

16. Ghosh P.K., Saxena R.K., Gupta R, Yadav R.P., Davidson W.S. Microbial lipases: production and applications // Science Progress. 1996. -V. 79.-P.119-157.

17. Rathi P., Saxena R.K., Gupta R. A novel alkaline lipase from Burkholderia cepacia for detergent formulation // Process Biochemistry. 2001. - V. 37. - P. 187192.

18. Gilbert E.J., Drozd J.W., Jones C.W. Physiological regulation and optimization of lipase activity in Pseudomonas aeruginosa EF2 // Journal of General Microbiology. -1991. V. 137 - P. 2215-2221.

19. Dharmsthiti S., Kuhasuntisuk B. (1998) Lipase from Pseudomonas aeruginosa LP602: biochemical properties and application for wastewater treatment // Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology.-V. 21-P. 75-80.

20. Rashid N, Shimada Y, Ezaki S, Atomi H, Imanaka T Lowtemperature lipase from psychrotrophic Pseudomonas sp. Strain KB700A // Applied and Environment Microbiology. 2001. V. 67. - P. 4064-4069.

21. Dongzhi Wei, Li-ying Zhang, Qingxum Song Studies on a novel carbon source and cosolvent for lipase production by Candida rugosa И Applied and Environment Microbiology. 2004. - V. 31. - P. 133-136.

22. Ghosh P.K., Saxena R.K., Gupta R., Yadav R.P., Davidson W.S. Microbial lipases: production and applications // Science Progress. 1996.-V. 79.-P. 119-157.

23. Волкова И.М., Лебедева Ж.Д. Влияние липидного компонента среды на биосинтез липазы грибами // Микробиология 1979. - Т. 58, Вып. 4. - С. 653657.

24. Mahler GF, Kok RG, Cordenons A, Hellingwerf KJ, Nudel ВС Effects of carbon sources on extracellular lipase production and lipA transcription in Acinetobacter calcoaceticus I/ Applied and Environment Microbiology. -2000. -V. 24. P. 25-30.

25. Табак М.Я., Щелокова C.C. Влияние твинов на липазную активность // Микробиология. 1979. - Т. 58, Вып. 4. - С. 658-662.

26. Ogino H., Ishikawa H. Enzymes which are stable in the presence of organic solvents // Journal of Bioscience and Bioengineering.-2001.-V. 91,№ 3.-P.109-116.

27. Kanwar L., Gogoi B.K., Goswami P. Production of a Pseudomonas lipase in n-alkane substrate and its isolation using an improved ammonium sulfate precipitation technique // Bioresource Technology. 2002. - V. 84. - P. 207-211.

28. Liu I.L., Tsai S.W. Improvements in lipase production and recovery form Acinetobacter radioresistens in presence of polypropylene powders filled with carbon sources //Applied Biochemistry and Biotechnology. -2003 .-V. 104.-P.129-140.

29. Wu H.-Y., Xu J.-H., Shen D., Xin Q. Improved production of (S)-ketoprofen ester hydrolase by a mutant of Trichosporon brassicae CGMCC 0574 // Journal Ind Microbiol. Biotechnol. 2003. - V. 30. - P. 357-361.

30. Gupta R., Gupta N., Rathi P. Bacterial lipases: an overview of production, purification and biochemical properties // Applied and Environment Microbiology. -2004.-V. 64.-P 763-781.

31. Bradoo S., Saxena R.K., Gupta R. Two acidothermotolerant lipases from new variants of Bacillus sp. II World Journal Microbiol. Biotechnol. 1999. - V. 15. - P. 87-91.

32. Dharmsthiti S., Luchai S. Production, purification and characterization of thermophilic lipase from Bacillus sp. THL027. FEMS // Microbiol. Letters. 1999. -V. 179.-P. 241-246.

33. Sharma R., Soni S.K., Vohra R.M., Jolly R.S., Gupta L.K., Gupta J.K. Production of extracellular alkaline lipase from a Bacillus sp. RSJ1 and its application in ester hydrolysis // Ind J Microbiol 2002.- V. 42.- P.49-54.

34. Sugihara A., Tani Т., Tominaga Y. Purification and characterization of a novel thermostable lipase from Bacillus sp. // Journal of Biochemistry.- 1991.- V. 109.-P.211-216.

35. Dong H., Gao S., Han S., Cao S. Purification and characterization of a Pseudomonas sp. lipase and its properties in non-aqueous media // Appl Microbiol Biotechnol. 1999. - V. 30. - P. 251-256.

36. Reetz M.T., Jaeger K.-E. Overexpression, immobilization and biotechnological application of Pseudomonas lipases // Chem Phys Lipids.- 1998.- V. 93.- P.3-14.

37. Oh B.-C., Kim H.-K., Lee J.-K., Kang S.-C., Oh T.-K. Staphylococcus haemolyticus lipase: biochemical properties, substrate specificity and gene cloning // FEMS Microbiology Letters. 1999. - V. 179.- P. 385-392.

38. Schmidt-Dannert С., Luisa R. M., Schmid R.D. Two novel lipases from the thermophile Bacillus thermocatenulatus: Screening, purification, cloning, overexpression and properties // Methods Enzymol. 1997. - V. 284. - P. 194-219.

39. Schuepp C., Kermasha S., Michalski M.-C., Morin A. Production, partial purification and characterization of lipases from Pseudomonas fragi CRDA 037 // Process Biochemistry. 1997.- V. 32.- P. 225-232.

40. Sierra G. A simple method for the detection of lipolytic activity of microorganisms and some observations on the influence of the contact between cells and fatty substrates // Antonie van Leeuwenhoek 1957. - V.23.- P.15-22.

41. Yeoh H.H., Wong F.M., Lin G. Screening for fungal lipases using chromogenic lipid substrates // Mycologia. 1986. - V. 78. - P. 298-300.

42. Wang Y., Srivastava K.C., Shen G.J., Wang H.Y. Thermostable alkaline lipase from a newly isolated thermophilic Bacillus strain, A30-1 (ATCC 53841) // Journal of Ferment Bioengineering 1995. - V. 79. - P. 433-438.

43. Ahmad R., Yahya M., William A. Anderson, Murray Moo-Young Ester synthesis in lipase-catalyzed reactions // Enzyme and Microbial. Technology 1998. -V.23.-P. 438-450.

44. Leonard V., Lamare S., Legoy M.-D., Graber M. Enantioselective acylation of R-2-pentanol in a solid/gas reactor catalysed by lipase В from Candida antarctica II Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2004. - V. 32. - P. 53-59.

45. Jernigan R., Rughunathan G., Bahar I. Characterization of interactions and metal ion binding sites in proteins // Current Opinion in Chemical Biology. -1994.-V. 4.-P.256-263.

46. Шульц Г., Ширмер P. Принципы структурной организации белков. -М.:Мир, 1982.-354 с.

47. Wangikar P.P., Michels P.C., Clark D.C., Dordick j.S. Structure and Function of Subtilisin BPN' Solubilized in Organic Solvents" // Journal of the American Chemical Society 1997. - V. 119, № 1. - P. 70-76.

48. Hailing P.J. Thermodynamic predictions for biocatalysis in nonconventional media: theory, tests and recommendations for experimental design and analysis // Enzyme and Microbial. Technology 1994. - V. 16. - P. 178-206.

49. Cowan D.A. Thermophilic proteins: stability and function in aqueous and organic solvents // Comparative Biochemistry and Physiology A: Physiology. 1997. -V.1I8A.-P. 429-438.

50. Schulze В., Klibanov A.M. Inactivation and stabilization of subtilisins in neat organic solvent // Biotechnology and Bioengineering. 1991. - V. 38. - P. 1001-1006.

51. Gorman L.A.S., Dordick J.S. Organic solvents strip water off enzymes // Biotechnology and Bioengineering 1992. - V. 39. - P. 392-397.

52. Ghatorae A.S., Bell., Hailing P.J. Inactivation of enzymes by organic solvents: new technique with well-defined interfacial area // Biotechnology and Bioengineering. 1994. - V. 43. - P. 331-336.

53. Yamamoto Y., Kise H. Catalysis of enzyme aggregates in organic solvents: An attempt at evaluation of intrinsic activity of proteases in ethanol // Biotechnology Letters.- 1993. V. 15, № 6. - P. 647-652.

54. Klibanov A.M. Asymmetric transformations catalyzed by enzymes in organic solvents // Accoounts Chem. Res. 1990. - V. 23. - P. 114-120.

55. Gupra M.N. Enzyme function in organic solvents // European Journal of Biochemistry. 1992. - V. 203. - P. 25-32.

56. Dordick J.S. Designing enzymes for use in organic-solvents // Biochem. Prog. -1992.-V. 8.-P. 259-267.

57. Белова А.Б., Можаев B.B., Левашов A.B., Сергеева М.В., Мартинек К., Хлельницкий Ю.Л. Взаимосвязь физико-химических органических растворителей с их денатурирующей способностью по отношению к белкам // Биохимия. -1991.-V. 56.-Р. 1923-1940.

58. Leon R., Fernandes P., Pinheiro H.M., Carbal J.M.S. Whole-cell biocatalysis in organic media // Enzyme Microbial. Technology 1998. - V. 23. - P. 483-500.

59. Ceen E.G., Dunnill P., Herrmann J.P.R. Two-liquid phase reactor studies of 11-a-hydroxylation of progesterone by Aspergillus ochraceus II Biotechnology and Bioengineering. 1988. - V. 31. - P. 743-746.

60. Fitzpatrick P.A., Klibanov A.M. How can the solvent affect enzyme enantioselectivity? //Journal of the American Chemical Society. 1991. - V. 113. - P. 3166-3171.

61. Sakurai J. H., Margolin A.L, Rassel A.J., Klibanov A.M. Control of enzyme enantioselectivity by the reaction medium // Journal of the American Chemical Society. 1988. - V. 110. - P. 7236-7237.

62. Parida S., Dordick J.S. Substrate structure and solvent hydrophobicity control lipase catalysis and enantioselectivity in organic media // Journal of the American Chemical Society. -1991. V. 113. - P. 2253-2259.

63. Villeneuve P., Muderhwa J. M., Graille J., Michael J. Haas Customizing lipases for biocatalysis: a survey of chemical, physical and molecular biological approaches Review // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2000. - V. 9. - P. 113-148.

64. Клесов А. А. Биотехнология. Ферментативный катализ. M.: Изд-во МГУ, 1984 - с.203-216.

65. Inada Y., Nishimura H., Takahashi K., Yoshimoto Т., Saha A.R., Saito Y. Ester synthesis catalyzed by polyethylene glycol-modified lipase in benzene // Biochemical and Biophysical Research Communications. 1984. - V. 122. - P. 845-850.

66. Takahashi K., Ajima A., Yoshimoto Т., Inada Y. Polyethylene glycol-modified catalase unexpectedly high activity in benzene // Biochemical and Biophysical Research Communications. 1984. - V. 125. - P. 761-766.

67. Y. Kimura, A. Tanaka, K. Sonomoto, T. Nihira, S. Fukui Application of immobilized lipase to hydrolysis of triacylglyceride // European Journal Appl. Microbiol. Biotechnol. 1983. - V. 17. - P. 107

68. Inada Y., Takahashi K., Yoshimoto Т., Ajima A., Matsushima A., Saito Y., Application of polyethylene glycol-modified enzymes in biotechnological processes: organic solvent-soluble enzymes // Trends Biotechonol. 1986. - V. 4. - P. 190-194.

69. Delgado C., Francis G.E., Fisher D. The uses and properties of PEG-linked proteins // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 1992. - V. 9. P. 249-304.

70. DeSantis G., Jones J.B. Chemical modification of enzymes for enhanced functionality // Current Opinion Biotechnol. 1999. - V. 10. - P. 324-330.

71. Mingarro I, Gonzales-Navarro H, Braco L. Trapping of different lipase conformers in water restricted environments // Biochemistry. 1996. - V. 35. - P. 9935-9944.

72. Jernigan R., Raghunathan G., Bahar I. Characterization of interactions and metal ion binding sites in proteins // Current Opinion In Structural Biology. 1994. - V. 4, №2,-P. 256.

73. Dai L., Klibanov A.M. Striking activation of oxidative enzymes suspended in nonaqueous media//Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1999. - V. 96. - P. 9475-9478.

74. Dabulis K., Klibanov A.M. Dramatic enhancement of enzymatic activity in organic solvents by lyoprotectants // Biotechnology and Bioengineering. 1993. - V. 41.-P. 566-571.

75. Secundo F., Carrea G., Varinelli D., Soregaroli C. Activity of different Candida antarctica lipase В formulations in organic solvents // Biotechnology and Bioengineering. 2001. - V. 73. - P. 157-163.

76. Klibanov A.M. Why are enzymes less active in organic solvents than in water? // Trends. Biotechnol. 1997. - V. 15. - P. 97-101.

77. Lee S. H., Choi J.H., Park S.H., Choi J.-I., Lee S.Y. Enantioselective resolution of racemic compounds by cell surface displayed lipase // Enzyme and Microbial Technology. 2004. - V. 35. - P. 429-436.

78. Klibanov A.M. Enzymatic catalysis in anhydrous organic solvents // Trends. Biotechnol. Sci. 1989. - V. 14. - P. 141-144.

79. Zaks A., Klibanov A.M. Enzyme-catalyzed processes in organic solvents // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1985. - V. 82. - P. 3192-3196.

80. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Мубаракова А.И. «Разработка энантиоселективных биокатализаторов парциального ацилирования спиртов» по спциальности 03.00.23 «Биотехнология».- Уфа: УГНТУ. 2002.- 125 с.

81. Fontanille P., Larroche С. Optimization of isonovalal production from a-pinene oxide using permeabilized cells of Pseudomonas rhodesiae CIP 107491 I I Appl Microbiol. Biotechnol. 2003. -V. 60. - P. 534-540.

82. Helenius A., Simons K. Solubilization of membranes by detergents // Biochim. Biophys. Acta. 1975. - V. 415. - P. 29-79.

83. Liu Y.-Y., Fujita Y., Kondo A., Fukuda H. Preparation of High-Activity Whole Cell Biocatalysts by Permeabilization of Recombinant Yeasts with Alcohol // Journal of Bioscience and Bioengineering. 2000. - V. 89. - P. 554.

84. Colton I. J., Ahmed S. N., Kazlauskas R. J. A 2-Propanol Treatment Increases the Enantioselectivity of Candida rugosa Lipase toward Esters of Chiral Carboxylic Acids // Journal of Organic Chemistry. 1995. - V. 60. - P. 212-217.

85. Kim M.G., Lee E.G., Chung B.H. Improved enantioselectivity of Candida rugosa lipase towards ketoprofen ethyl ester by a simple two-step treatment // Process Biochemistry. 2000. - V. 35. - P. 977-982.

86. Matsuda Т., Nakajima Y., Harada Т., Nakamura K. Asymmetric reduction of simple aliphatic ketones with dried cells of Geotrichum candidum // Tetrahedron: Asymmetry. 2002. - V.l 3. - P. 971-974.

87. Мубараков А.И., Хабибуллина И.И., Петухова Н.И., Зорин В.В. Синтез эфиров гераниола в присутствии клеток микроорганизмов // Башкирский химический журнал,- 2003. -Т 10, №1.- с.56.

88. Jackson R.W., DeMoss J.A. Effects of toluene on Escherichia coli // Journal of Bacterid. 1965. - V. 90. - P. 1420-1425.

89. Lin G., Liu H.-C. Ultrasound-promoted lipase-catalyzed reactions // Tetrahedron Letters. 1995. - V. 36, № 34. - P. 6067.

90. Boye E., Alver S., Skarstad K. Deoxyribonucleic Acid Replication in Permeable and Fully Viable Escherichia coli Cells // Journal of Bacteriol. 1981. -V. 145.-P. 1413-1416.

91. Mowshowitz D.B. Permeabilization of yeast for enzyme assays: an extremely simple method for small samples // Anal. Biochemistry. 1976. - V. 70. - P. 94.

92. Oliveira D.E., Santos Neto A.L., Panek A.D. Permeabilization of yeast for in situ determination of alpha-glucosidase // Anal Biochemistry. 1981. - V. 113, № 1. -P. 188-192.

93. Rao В., Rehman A., Krishnakumari H., Yadav B. Lipase catalysed kinetic resolution of racemic (n)2,2-dimethyl-3-(2-methyl-l-propenyl)-cyclopropane carboxyl esters // Tetrahedron Letters. 1994. - V. 35, № 16. - P. 2611.

94. Shen D., Xu J.-H., Wu H.-Y., Liu Y.-Y. Significantly improved esterase activity of Trichosporon brassicae cells for ketoprofen resolution by 2-propanol treatment // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2002. - V. 18. - P. 219224.

95. Wu S. H., Guo Z. W., Sih C. J. Enhancing the enantioselectivity of Candida lipase-catalyzed ester hydrolysis via noncovalent enzyme modification // Journal of the American Chemical Society. 1990. - V. 112, № 5. - P. 1990-1995.

96. Kometani Т., Isobe Т., Goto M., Takeuchi Y., Haufe G. Enzymatic resolution of 2-fluoro-2-arylacetic acid derivatives // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 1998.-V. 5.-P. 171-174.

97. Chamorro S., Sanchez-Montero J.M., Alcantara A.R., Sinisterra J.V. Treatment of Candida rugosa lipase with short-chain polar organic solvents enchants its hydrolytic and synthetic activities // Biotechnology Letters. 1998. - V. 20, № 5. - P. 499-505.

98. Tsai S.-W., Wu G.-H., Chiang C.-L. Kinetics of enzymatic hydrolysis of olive oil in biphasic organic-aqueous system // Biotechnology and Bioengineering. 1991. - V. 38. - P. 761-766.

99. Chae H.J., Yoo Y.J. Mathematical analysis of an enzymatic reaction in an aqueous/organic two-phase system: Tyrosinase-catalysed hydroxylation of phenol // Journal of Chem. Technol. Biotechnol. 1997. - V. 70. - P. 163-170.

100. Klibanov A.M. Improving enzymes by using them in organic solvents // Nature. 2001. - V. 409. - P. 241.

101. Davison B.H., Barton J.W., Peterson G.R. Nomenclature and methodology for classification of nontraditional biocatalysis // Biotechnol. Prog. 1997. - V. 13. - P. 512.

102. Eliel E.L., Wilken S.H., Mander L.N. Stereochemistry of Organic Compounds. John Wiley: New York, 1994. - P. 1267.

103. Collins A.N., Sheldrake G.N., Crosby J. Chirality in Industry. John Wiley: Chichester. UK, 1997. 127 p.

104. Strauss U. Т., Felfer U., Faber К. Biocatalytic transformation of racemates into chiral building blocks in 100% chemical yield and 100% enantiomeric excess // Tetrahedron: Asymmetry. 1999. - V. 10. - P. 107-117.

105. Reinhold D. F., Firestone R. A., Gaines W. A., Chemerda J. M., Sletzinger L Selective Amidase with Extremely Broad Substrate Specificity from Ochrobactrum anthropi NCIMB 40321 M I I Journal of Organic Chemistry. 1968. - V. 33. - P. 1209-1213.

106. Ghanem A, Aboul-Enein H.Y. Lipase-mediated chiral resolution of racemates in organic solvents. Tetrahedron: Asymmetry Report Number 78 // Tetrahedron: Asymmetry. 2004. -V. 15. - P. 3331-3351.

107. Leffingwell J.C., Shakelford R.E. Laevo menthol synthesis and organoleptic properties //Journal of Cosmet Perfume. 1974. - V. 89. - P. 69-89.

108. Fadnavis N.W., Radhika K.R. Enantio- and regiospecific reduction of ethyl 4-phenyl-2,4-dioxo // Tetrahedron Asymmetry. 2004. - V. 15. - P. 3443.

109. Zymanczyk-Duda, E. Kafarski, P. Lejczak, B. Reductive biotransformation of diethyl b-, g- and d-oxoalkylphosphonates by cells of baker s yeast // Enzyme And Microbial Technology. 2000. - V. 26, № 2-4. - P. 265-270.

110. Grison C., Coutrot F., Coutrot P. New glycosyl a-hydroxyesters as key intermediates in a convenient route to glycosyl a-aminoester chirons // Tetrahedron. -2002. 58, № 14. - P. 2735-2741.

111. Haeffner F., Norm Т., Hult K. Molecular modeling of the enantioselectivity in lipase-catalyzed transesterification reactions // Biophys. Journal. 1998. - V. 74. - P. 1251-1262.

112. Orrenius C., Haeffner F., Rottici D., Ohrner N., Norin Т., Hult K. Chiral recognition of alcohol enantiomers in acyl transfer reactions catalysed by Candida antarctica lipase В // Biocatalysis and Biotransformation. 1998. - V. 16. - P. 1-15.

113. Patel R.N., Banerjee A., Nanduri V., Goswami A., Comezoglu F.T. Enzymatic resolution of racemic secondary alcohols by lipase В from Candida antarctica II Journal American Oil Chemists Society. 2000. - V. 77, № 10. - P. 1015-1020.

114. Kamal A., Sandbhor M., Venkata Ramana K. One-pot lipase-catalyzed synthesis of enantiopure secondary alcohols from carbonyl compounds: a new protocol for lipase-mediated resolution // Tetrahedron: Asymmetry Pergamon. 2002. -V. 13.-P. 815-820.

115. Brackenridge I., McCague, R. M.; Roberts, S. M.; Turner, N. J. Enzymatic resolution of oxalate esters of a tertiary alcohol using porcine pancreatic lipase // Journal of Chemical Society Perkin Transactions. 1993. - № 10. - P. 1093.

116. Chen, S.-T., Fang, J.-M. Preparation of Optically Active Tertiary Alcohols by Enzymatic Methods. Application to the Synthesis of Drugs and Natural Products // Journal of Organic Chemistry. 1997. - V. 62, № 13. - P. 4349-4357.

117. Matsumoto Т., Ito M., Fukuda H., Kondo A. Enantioselective transesterification using lipase-displaying yeast whole-cell biocatalyst // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2004. - V. 64. - P. 481.

118. Grochulski. P., Li, Y., Schrag. J. D., Bouthhillier. F., Smith. P., Harrison, D., Rubin, В., Cygler. M. Insights into interfacial activation from an open structure of Candida rugosa lipase // Journal of Biol. Chemistry. 1993. - V. 268 - P. 1284312847.

119. Grochulski, P., Li, Y., Schrag, J. D., and Cygler, M. Two conformational states of Candida rugosa lipase // Protein Sci. 1994. - V. 3. - P. 82-91.

120. Derewenda, Z. S., Derewenda, U., and Dodson, G. G. The crystal and molecular structure of the Rhizomucor miehei triglyceride lipase at 1.0 A resolution // Journal of Biol. Chemistry. 1993. - V. 227. - P. 818-839.

121. Schrag, J. D., Cygler M. 1.8 A Refined structure of the lipase from Geotrichum candidum II Journal of Molecular Biol. 1993. - V. 230. - P. 575-591.

122. Коновалов А.А., Петухова Н.И., Ишмуратов Г.Ю., Зорин B.B. Гидролазная активность для кинетического разделения рацемической смеси этил-3-оксибутирата // Башкирский химический журнал. 2000. - Т. 7, № 5 - С. 34-36.

123. Zorin V.V., Petukhova N.I. New microbial biocatalysts for kinetic resolutions racemic mixtures of some epoxides, alcohols and esters In Book of Abstracts of 9th Meeting on Stereochemystry. Prague. 2001. - P. 215.

124. Idogaki H., Kasai N., Takeuchi M., Hatada M., Suzuki T. Preparation of (R)-and (S)-4-chloro-3-acetoxybutyronitrile using microbial resolution // Tetrahedron: Asymmetry.-2001.- V. 12, № 3.- p. 369 373

125. Ко C-S., Chu I-M. Immobilized cells biocatalyst for the production of S-acetylthio-2-methyl propionic acid // Enzyme and Microbial Technology. 2004.- V. 35, №6-7.- p. 619-623

126. Коновалов A.A., Петухова Н.И., Зорин B.B. Разработка метода микробиологического разделения рацемических втор-бутанолов // Башкирский химический журнал. 2000. - Т. 7, № 5 - С. 49-50.

127. Molinari F., Cavenago K.S., Romano A., Romano D. Gandolfi R. Enantioselective hydrolysis of (RS)-isopropylideneglycerol acetate with Kluyveromyces marxianus // Tetrahedron: Asymmetry 2004.- V. 15.- p. 1945-1947

128. Kumar I., Manju K., Jolly R.S. A new biocatalyst for the preparation of enantiomerically pure 2-arylpropanoic acids // Tetrahedron: Asymmetry.- 2001,- V. 12, №3-p. 1431-1433

129. Duan Shen; Jian-He Xu; Peng-Fei Gong; Hui-Yuan Wu; You-Yan Liu Isolation of an esterase-producing Trichosporon brassicae and its catalytic performance in kinetic resolution of ketoprofen // Canadian Journal of Microbiology.- 2001. V. 47,№ 12.-P. 1101.

130. Мубараков А.И., Петухова Н.И., Гареев B.M., Зорин B.B. Поиск новых микробных биокатализаторов для энантиоселективного ацилирования гептано-ла-2 //Башкирский химический журнал. 2000. - Т. 7, № 5 - С. 37-39.

131. Molinari F., Mantegazza L., Villa R., Aragozzini F. Resolution of 2-alkanols by microbially-catalyzed esterification // Journal of Fermentation and Bioengineering.- 1998.- V.86, № 1.- P. 62-64.

132. Mizuguchi E., Suzuki Т., Achiwa K. Lipase-catalyzed synthesis of optically active N,N,N-trimethylethanaminium a-tocopherol analog MLD-73404 // School of Pharmaceutical Sciences University of Shizuoka, 52-lYada, Synlett. 1994. - №11. -P. 929-930.

133. Czompa A., Kovacs Т., Antus S. Lipase-catalysed kinetic resolution of hydroxymethylchromanes // Journal of Heterocyclic Chemistry. 2000. - V. 37. - P. 991-995.

134. Ramadas S., David G.L., Krupadanam Enantioselective acylation of chroman-4-ols catalysed by lipase from Pseudomonas cepecia (Amano PS) // Tetrahedron: Asymmetry. 1997. - V. 8, № 18. - P. 3059-3066.

135. Подчуфарова E.B. Болевые синдромы в неврологии лечение острых болевых синдромов пояснично-крестцовой локализации // Консилиум медикум Журнал доказательной медицины для практикующих врачей.

136. Gajraj N.M. Cyclooxygenase-2 Inhibitors // Anesthes Analges. 2003. - V. 96. -P. 1720-1738.

137. Leman P., Kapadia Y., Herington J. Randomised controlled trial of the onset of analgesic efficacy of dexketoprofen and diclofenac in lower limb injury // Emergency medicine journal.- 2003.- V. 20, № 6.- P. 511-513.

138. Hutt A.J., Caldwell J. The importance of stereochemistry in the clinical pharmacokinetics of the 2-arylpropionic acid nonsteroidal anti-inflammatory drugs // Clin Pharmacokin. 1984. - V. 9. - P. 371.

139. Heefner D.L., Zepp M. Enantioselective hydrolysis of ketoprofen esters by Beauveria bassiana and enzymes derived therefrom. PCT Int Appl WO 94. 1994. -P. 20635 Al

140. Liu J., Zhang Y., Qiu L. H., Yang F., Ye L., Xia Y. Kinetic resolution of ketoprofen ester catalyzed by lipase from a mutant of CBS 5791 // Journal Ind. Microbiol. Biotechnol. 2004. - V. 31. - P. 495-499.

141. Liu Y.-Y., Xu J.-H., Hu Y.Enhancing effect of Tween-80 on lipase performance in enantioselective hydrolysis of ketoprofen ester // Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. 2000. - V. 10. - P. 523-529.

142. Gong P.-F., Wu H.-Y., Xu J.-H., Shen D„ Liu Y.-Y. Biocatalytic preparation of enantiopure (^-ketoprofen from its racemic ester by a new yeast isolate Citeromyces matriensis CGMCC 0573 // Appl Microbiol Biotechnol. 2002. - V. 58. - P. 728-734.

143. Lee K. W., Shin G.-S., Bae H.-A., Shin H.-D., Lee Y.-H. Isolation and characterization of Acinetobacter sp. ES-1 excreting a lipase with high enantioselectivity for (^-ketoprofen ethyl ester // Biotechnology Letters. 2004. - V. 26.-P. 1639-1642.

144. Liu Y.-Y., Xu J.-H., Xu Q.-G., Hu Y. Significant enhancement of lipase enantioselectivity toward (5)-ketoprofen ester at pH 2 // Biotechnology Letters. -1999.-V. 21.-P. 143-146.

145. Park H. J., Choi W. J., Huh E. C., Lee Z. Y., Choi C. Y. Production of Optically Active Ketoprofen by Direct Enzymatic Esterification // Journal Of Bioscience And Bioengineering. 1999. - V. 87, № 4. - P. 545-547.

146. Duan G., Ching C.B., Lim E., Ang C.H. Kinetic study of enantioselective esterification of ketoprofen with n-propanol catalysed by an lipase in an organic medium//Biotechnology Letters. 1997.-V. 19, № 11. - P. 1051-1055.

147. Antona N.D., Lombardi P., Nicolosi G., Salvo G. Large scale preparation of enantiopure S-ketoprofen by biocatalysed kinetic resolution // Process Biochemistry.-2002,- V. 38.- P. 373 -377.

148. Cui Y.-M., Wei D.-Z., Yu J.-T. Lipase-catalyzed esterification in organic solvent to resolve racemic naproxen // Biotechnology Letters. 1997. - V. 19, № 9. -P. 865-868.

149. Mustranta A. Use of lipases in the resolution of racemic ibuprofen // Appl Microbiol. Biotechnol. 1992. - V. 38. - P. 61-66.

150. Henke E., Schuster S., Yang H., Bornscheuer U.T. Lipase-Catalyzed Resolution of Ibuprofen // Monatshefie fuer Chemie. 2000. - V. 131. - P.633-638.

151. Duan G., Chen J.Y. Effects of polar additives on the enzyme enantioselectivity of an esterification reaction in organic solvents // Biotechnology Letters. 1994. - V. 16, №10. -P. 1065-1068.

152. Практикум по микробиологии. / Под ред. H.C. Егорова. М.: Изд-во МГУ, - 1976.-306 с.

153. Определитель бактерий Берджи. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Сни-та, Дж. Стейли, С. Уилльямса. М.: Мир, 1997. - Т. 1. - 430 е., Т.2. - 800 с.

154. Методы общей бактериологии. /Под ред. Ф. Герхардта-М.: Мир, 1984. -Т. 1.-С. 54-57, Т. 3. С. 263.

155. Практикум по биохимии. / Под ред. С. Е. Северина, Г.А. Соловьева. М.: Изд-во МГУ, - 1989. - 93-96 с.

156. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высш. Школа, - 1980.-271 с.

157. Методы общей микробиологии. / Под ред. Ф. Герхфрдта М.: Мир, -1984.-Т. 2.-С. 24-25

158. Башкатова Н.А., Северина JI.O. // Прикладная микробиология и химия. -1978.-Т. 14,№6.-С. 838-864.

159. ФГУН «Уфимский НИИ медицины труда и экологии человека» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Аттестат аккредитации ГСЭН.1Ш.ЦОА.155

160. Зарегистрирован в Госреестре № РОСС RU.0001.510411 от 10.06.2003. Экспертное заключение № 49от 16 ноября 2006 года

161. Культура микроорганизма род Microbacterium (77-9)наименование образца продукции) кафедра биохимии и технологии микробиологических производств УГНТУорганизация-производитель)

162. Микробиологическая характеристика культуры микроорганизма род Microbacterium (77-9).

163. Источник выделения культуры: образцы почв с территорий, прилегающих к нефтеперерабатывающим предприятиям.

164. В работе использовались белые мыши с исходной массой тела 16-18 г. Содержание животных соответствовало санитарным правилам.

165. Вирулентность культуры микроорганизма оценивалась в острых опытах на белых мышах и крысах при различных путях введения взвеси бактерий в физиологическом растворе (внутрибрюшинно, пероралыш и интраназально).

166. Вводимая доза выражалась величиной десятичного логарифма, соответствующей количеству микробных клеток, полученных животными; каждая доза испытывалась не менее, чем на 6 животных.

167. Результаты приведены в таблице.