Распределение признаков биодеградации углеводородов и оценка технологически важных свойств нефтеокисляющих бактерий тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Мельников, Дмитрий Александрович

• Мельников, Дмитрий Александрович
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мельников, Дмитрий Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ. ф

ГЛАВА 1 ТИПЫ НЕФТЯНЫХ ПОЛЛЮТАНТОВ, БИОДЕГРАДАЦИЯ

НЕФТЕПРОДУКТОВ НЕФТЕОКИСЛЯЮЩИМИ БАКТЕРИЯМИ.

1.1 Типы углеводородных поллютантов.

1.2 Физико-химические свойства нефти и нефтепродуктов.

1.3 Биодеградация нефтепродуктов микроорганизмами.

1.4 Биотехно логически важные свойства нефтеокисляющих микроорганизмов.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Объекты исследования.

2.2 Питательные среды, используемые для культивирования микроорганизмов.

2.3 Определение способности микроорганизмов к окислению мазута в жидкой минеральной среде.

2.4 Определение способности микроорганизмов к росту на углеводородах.

2.5 Выделение бактерий методом кратных разведений.

2.6 Определение чувствительности штаммов актинобактерий к солям металлов.

Ф 2.7 Выделение диссоциатов актино б актерий по признаку Ф антибиотикочувствительности.

2.8 Определение количества нефтепродуктов в культуральной жидкости весовым методом.

2.9 Определение концентрации нефтепродуктов в почве и нефтешламах.

2.10 Битуминологический анализ нефтепродуктов.

2.11 Хроматографический анализ масляной фракции нефтепродуктов и сырой нефти.

2.12 Математическая обработка результатов.

ГЛАВА 3 ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ К РОСТУ НА УГЛЕВОДОРОДАХ У МИКРОФЛОРЫ, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ МЕСТООБИТАНИЙ С РАЗНЫМ

СОСТАВОМ УГЛЕВОДОРОДНОГО ПОЛЛЮТАНТА.

3.1 Оценка способности к росту на углеводородах у микрофлоры, выделенной на различных средах из загрязненной и чистой почвы.

3.1 Л Способность к росту на углеводородах у микрофлоры, выделенной из почвы, загрязненной тенгизской нефтью.

3.1.2 Характеристика способности к росту на углеводородах у микрофлоры, выделенной из почв, загрязненной и не загрязненной российской нефтью.

3.2 Выделение гетеротрофной и нефтеокисляющей микрофлоры из нефтешламов и чистой почвы и исследование ее способности к росту на углеводородах.

3.3 Особенности распределения признаков биодеградации углеводородов в исследованных группах штаммов микроорганизмов.

ГЛАВА 4 ОЦЕНКА ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ШТАММОВ-ИНТРОДУЦЕНТОВ ПО ТЕХНОЛОГИЧЕСКИ ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ

4.1 Битуминологическая характеристика нефтепродуктов, исследуемых в работе.

4.2 Исследование коллекции штаммов нефтеокисляющих актинобактерий по способности к росту на нефтепродуктах.

4.3 Исследование влияния элементарной серы и сульфида на рост штаммов актинобактерий.

4.4 Оценка роста актинобактерий в присутствии солей тяжелых металлов в питательной среде.

4.5 Проявление R-, S-, М-типа колоний у штаммов исследуемой коллекции актинобактерий.

4.6 Оценка потенциальных штаммов-интродуцентов из коллекции нефтеокисляющих актинобактерий.

4.6.1 Деградация мазута и его компонентов штаммами нефтеокисляющих актинобактерий В2, Fl, К2, Z4, J10.

4.6.2 Контроль диссоциации штаммов нефтеокисляющих актинобактерий 94 ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Распределение признаков биодеградации углеводородов и оценка технологически важных свойств нефтеокисляющих бактерий»

На сегодняшний день все острее возникает проблема углеводородных загрязнений почвы и детоксшсации нефтешламов. Нафтид нефтепшамов длительных сроков хранения отличается от большинства углеводородных поллютантов несколькими особенностями: высоким содержанием неуглеводородных компонентов (смол и асфальтенов), низким содержанием легких углеводородов, это придает поллютанту высокую температуру плавления (30-60 °С) и вязкость (Требин Г.Ф. и др., 1980). Высшие компоненты фракции смол недостаточно исследованы на предмет токсичности. Содержание данных веществ в объектах окружающей среды практически никак не регламентируется. Поэтому деградация всех компонентов нефтешламов является особенно актуальной задачей, и позволит гарантированно детоксицировать объект очистки. Важным обстоятельством является высокое варьирование состава нафтида нефтешламов. Все это затрудняет выбор и применение практически всех известных технологических приемов, используемых в очистке нефтешламов.

Для безопасного решения задачи детоксикации нефтяных загрязнений используются следующие подходы: интродукция нефтеокисляющих микроорганизмов в загрязненный объект и оптимизация жизнедеятельности аборигенной углеводородокисляюгцей микрофлоры объекта очистки (Бельков В.В., 1995; Сидоров Д.Г. и др., 1997). При реализации этих подходов или их сочетании возникают определенные проблемы.

В биотехнологии очистки объектов, загрязненных углеводородными пол-лютантами, применяются нефтеокисляюгцие бактерии разных систематических групп. Широко используются углеводородокисляюгцие актинобактерии. Это объясняется рядом причин: данная систематическая группа бактерий способна к биодеградации широкого спектра углеводородов, обладает устойчивостью к засолению среды обитания, способна переносить действие света и высушивания, отличается высоким сродством к липофильным субстратам и почти отсутствием патогенных дня человека и животных видов, в отличие, от ряда грамот-рицательных родов микроорганизмов, грамположительных бацилл и грибов

Kulakova Arma N, и др., 1996; Whyte Lyle G. и др., 1998; Irvine Valerie А. и др., 2000). В то же время на данный момент недостаточно изучена способность ак-тинобактерий разрушать тяжелые неуглеводородные компоненты нефтепродуктов, ничего неизвестно о распространенности данных признаков среди штаммов нефтеокисляющих актинобактерий и их взаимосвязи с признаками деградации углеводородов. Кроме того, из-за высоковязкого или твердого состояния смолисто-асфальтеновых фракций недостаточно разработаны методики конструирования и приготовления минимальных плотных и жидких сред с данной группой веществ в качестве единственного источника углерода и энергии.

Для штаммов, деградирующих монокомпонентные загрязнения (фенол, пестициды, компоненты ракетного топлива и др.), существует универсальный критерий отбора - способность к полной минерализации поллютанта. Так как нефтепродукты содержат сотни веществ и их состав различается от образца к образцу, возникает вопрос, по каким критериям отбирать и сравнивать нефтео-кислягощие штаммы? Для оценки и отбора культур-интродуцентов необходимо учитывать признаки, связанные со способностью деградировать нефтепродукты, есть необходимость сравнивать потенциал штаммов, причем в контексте конкретного поллютанта и на ранних этапах отбора культур потенциальных ин-тр оду центов. На данный момент неизвестны универсальные критерии отбора углеводородокисляющих микроорганизмов, активных по отношению к широкому кругу нефтяных поллютантов.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключалась в исследовании характера распространения признаков биодеградации углеводородов среди выделяемой в чистой культуре аборигенной аэробной гетеротрофной микрофлоры чистой и загрязненной почвы, нефтешламов различных типов, выяснении закономерностей встречаемости признаков деградации углеводородов и неуглеводородных компонентов нефтепродуктов среди лабораторных штаммов актинобактерий. На основе полученных данных предполагается отобрать культуры нефтеокисляющих актинобактерий - потенциальных интродуцентов, оценить некоторые технологически важные признаки у отобранных штаммов-интродуцентов. В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1) оценить разнообразие спектров потребления углеводородов у микрофлоры, выделяемой из местообитаний с разным характером нефтяных загрязнений;

2) исследовать у нефтеокисляющих штаммов актинобактерий чувствительность к тяжелым металлам, элементарной сере и сульфиду;

3) отобрать штаммы компетентные в отношении конкретных нефтепродуктов, а также их отдельных компонентов с учетом чувствительности к тяжелым металлам;

4) исследовать возможность и степень деградации компонентов мазута отобранными штаммами нефтеокисляющих актинобактерий;

5) исследовать влияние явления диссоциации на технологически важные признаки у потенциальных штаммов интродуцентов.

Научная новизна. На основе исследования микробных популяций, впервые проводится оценка и сопоставление способности к росту на различных углеводородах гетеротрофной микрофлоры чистого и загрязненного нефтью чернозема и нефтешламов с разным характером загрязнения. Предлагается оригинальная система сравнения и оценки штаммов нефтеокисляющих актинобактерий. Предлагается способ выделения диссоциатов актинобактерий по признаку антибиотикорезистентности. В ходе исследований предложен и апробирован способ создания плотных и жидких питательных сред с твердыми нефтешла-мами, битумами и неуглеводородными компонентами нефтепродуктов - смолами и асфальтенами.

Практическая ценность работы. Большая часть современных методов выделения нефтеокисляющих микроорганизмов основывается на получении накопительных культур на различных углеводород окисляющих субстратах, таких как нефть, жидкие нефтешламы, дизельное топливо, индивидуальные углеводороды и их композиции. Результатом данной работы является разработка способа отбора лабораторных штаммов нефтеокисляющих актинобактерий, основанного на общих закономерностях распределения признаков деградации отдельных углеводородов у почвенной микрофлоры и микрофлоры нефтешламов. Проводится скрининг коллекции штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов по комплексу признаков деградации углеводородов, отдельных компонентов нефтепродуктов и нефтешламов. Произведена количественная оценка параметров биодеградации модельного поллютанта у отобранных штаммов, которые рекомендованы к дальнейшему изучению и созданию на их основе бактерийных препаратов для детоксикации нефтешламов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Содержание микроорганизмов, окисляющих отдельные углеводороды нефти выше, чем окисляющих сырую нефть, среди выделяемой гетеротрофной микрофлоры.

2. Характер распределения микроорганизмов с разными спектрами потребляемых углеводородов не отличается у чистых почв, загрязненного нефтью чернозема и нефтешлама, подвергнутого микробиологической очистке.

3. Обоснован способ прогнозирования роста штамма на нефтепродукте-поллютанте на основании спектра потребляемых им углеводородов

4. Показана возможность отбора штаммов актинобактерий, устойчивых к солям тяжелых металлов и при этом способных расти на большом наборе углеводородов.

5. Для исследуемой коллекции штаммов нефтеокисляющих актинобакте-рий установлена повышенная чувствительность к элементарной сере (1 г/л гек-садекана) при росте на углеводородах.

6. Предложен способ контроля процесса диссоциации штаммов нефтеокисляющих актинобактерий по технологически важным признакам.

Апробация работы и публикации.

Результаты исследований, изложенные в данной работе, апробированы на следующих конференциях: "Экология 2000: Эстафета поколений. I международная межвузовская школа", "Актуальные вопросы экологии и охраны природы экосистем южных регионов России и сопредельных территорий, 2000", "Современные проблемы биологических повреждений материалов (Биоповреждения - 2002)", "1th FEMS congress of European microbiologists, 2003". Всего опубликовано девять работ, одна в печати.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Мельников, Дмитрий Александрович

выводы

1. На основании закономерностей распределения признаков биодеградации углеводородов среди 409 штаммов бактерий, выделенных из чистой и загрязненной нефтью почвы, а также бактерий, выделенных из нефтешламов с разным характером загрязнения, установлено, что содержание микроорганизмов, окисляющих отдельные углеводороды нефти выше, чем окисляющих сырую нефть.

2. Характер распределения микроорганизмов с разными спектрами потребляемых углеводородов не отличается у чистых почв, загрязненного чернозема при умеренной степени загрязнения, и нефтешлама после биологической очистки.

3. Признаки деградации ароматических углеводородов среди гетеротрофной микрофлоры встречаются реже (0-10% штаммов), чем способность к росту на н-алканах и нефтепродуктах-поллютантах (10-40% штаммов).

4. Установлена применимость понятия количества потребляемых углеводородов для прогнозирования роста штамма на нефтепродукте-поллютанте. Н-алканы ряда С13-С18 предложены для оценки углеводородокисляющей направленности штамма в качестве минимальной набора, удобного для лабораторного использования.

5. Из 44 коллекционных штаммов нефтеокисляющих актинобактерий отобраны пять, перспективных для промышленного применения. Данные штаммы обладают широким спектром деградации углеводородов, способны к росту на неуглеводородных компонентах мазута, обладают устойчивостью к солям тяжелых металлов.

6. Для исследуемой коллекции штаммов нефтеокисляющих актинобактерий установлена повышенная чувствительность к элементарной сере (1 г/л гексадека-на) при росте на углеводородах.

7. На средах с ингибиторами отмечена диссоциация трех из пяти отобранных культур актинобактерий по технологически важным признаками. Способ определения диссоциации может быть использован для контроля данного явления в случае промышленного применения штаммов Rhodococcus erytropolis В2

ВКМ Ас-2017, Gordonia sp. F1 - BKM Ac-2271, а таюке для определения условий культивирования, предотвращающих диссоциацию.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мельников, Дмитрий Александрович, 2005 год

1. Аристархова, В.И. Электронно-микроскопическое изучение Nocardia rubra, выращиваемой на среде с фенолом / В.И. Аристархова // Микробиология. -1976.- Т. XLV. №2. -С. 324-328.

2. Балашова, Н.В. Штамм BS3 701 деструктор фенантрена и нафталина / Н.В. Балашова, И.А. Кошелева, А.Е. Филонов и др.. // Микробиология. - 1997. -№4.-Т. 66.-С. 488-493.

3. Барышникова, Jl. М. Миксотрофный рост Rhodococcus minimus в периодической культуре / Л.М. Барышникова, Н.В. Ерошина, Я.М. Мясоедова и др.. // Микробиология. 1985. - том 54. - Вып. 2. - С. 284-289.

4. Беляев, С.С. Активация современной геохимической деятельности пластовой микрофлоры как основа биогеотехнологии повышения нефтеизвлечения / С.С. Беляев, И.А. Борзенков, И.Ф. Глумов и др.. // Микробиология. -1998.-том 67.-№ 6.-С. 851-858.

5. Бердичевская, М. В. Особенности физиологии родококков разрабатываемых нефтяных залежей / М.В. Бердичевская // Микробиология. 1989. - Т. 58. -Вып. 1.-С. 60-65.

6. Боровиков, В. STATISTICA: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов. / В. Боровиков СПб.: Питер, 2001. - 656 с.

7. Бошвинко, Л. В. Синтез экзополисахаридов и протеолитических ферментов М-, S— и R-формами Mycobacterium lacticolum / Л. В. Бошвинко, И.С. Егоров, Н.С. Ландау и др..// Микробиология. 1979. - Т. XLVIII. - Вып. 8. - С. 439-442.

8. Велысов, В.В. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы / В.В. Вельков // Биотехнология. 1995. - №3-4. - С. 20-27.

9. Глазачева, Л.Е. Клеточные приспособления Rhodococcus rodochrous и Rhodococcus ruber, усваивающих пропан и н-бутан / Л.Е. Глазачева, И.Б. Ившина, А.А. Оборин // Микробиология. 1990. - №2. - Т. 59. - С. 301-306.

10. Ю.Гоголева, Е.В. Внеклеточные полисахариды, синтезируемые Mycobacterium lacticolum на средах с н-додеканом, н-тетрадеканом и н-гексадеканом / Е.В.101

11. Гоголева, Н.И. Гречушкина, Я.С. Егоров // Микробиология. 1973. - Т. XLII. - Вып. 5. - С. 806-808.

12. П.Головлев, E.JI. Катаболизм ароматических соединений у родококков группы erythropolis / E.JI. Головлев, Н.В. Ерошина // Микробиология. 1982. - Т. 51. -Вып. З.-С. 407-412.

13. Головлева, JI.A. Микробная детоксикация сточных вод коксохимического производства / JI.A. Головлева, З.И. Финкельштейн, Б.П. Баскунов и др.. // Микробиология. 1995. - Т. 64. - №2. - С. 197-200.

14. Головченко, А. В. Влияние нефти на численность, биомассу и жизнеспособность грибов в верховых торфяниках / А.В. Головченко, JI.M. Полянская // Микробиология. 2001. - Т.70. - №1. - С. 111-117.

15. Готтшалк, Г. Метаболизм бактерий / Г. Готтшалк М.: 1982. - 310 с.

16. Гречушкина, Н.Н. Некоторые физиологические особенности Mycobacterium lacticolum 121 при росте в среде с н-додеканом / Н.Н. Гречушкина, С.В. Денисова // Микробиология. 1970. - Т. XXXIX. - №6. - С. 956-969.

17. Гузев, B.C. Влияние масляной кислоты на физиологическую активность уг-леводородокисляющих родококков / B.C. Гузев, М.И. Волде, И.С. Куличев-ская, Л.В. Лысак // Микробиология. 2001. - Т.70. - №3. - С. 313-320.

18. Гузев, B.C. Регуляторное действие глюкозы на активность углеводородокис-ляющих микроорганизмов в почве / B.C. Гузев, Э.М. Халимов, М.И. Волде, И.С. Куличевская // Микробиология. 1997. - Т. 66. - № 2. - С. 154-159.

19. Гузев, B.C. Роль почвенной микробиоты в рекультивации нефтезагрязнен-ных почв. Микробиология и охрана почв. / B.C. Гузев и др.. М.: - 1989. -С.129-149.

20. Дуган, И.Н. Индукция пирокатехин-диоксигеназ у Rhodococcus corallinus / И.Н. Дуган, Е.Л. Головлёв // Микробиология. 1983. - Т. 52. - В. 5. - С.729-734.

21. Дуган, И.Н. Ключевые ферменты катаболизма ароматических соединений Rhodococcus / И.Н. Дуган, Е.Л. Головлев // Микробиология. 1982. - Т. 51. -Вып. 2.-С. 181-186.

22. Дуган, И.Н. Пути катаболизма ароматических субстратов у родококков / И.Н. Дуган, E.JI. Головлев // Микробиология. 1985. - Т. 54. - Вып. 1. - С. 128-134.

23. Дуган, И.Н., Индукция диоксигеназ ароматических субстратов у родококков при лимите питательных веществ / И.Н. Дуган, Е.Л. Головлёв // Микробиология. 1983а. - Т. 52. - В. 6. - С. 951-955.

24. Егоров, Н. С. Сравнение липидного состава R- S- и М-вариантов Rhodococcus rubropertinctus / Н.С. Егоров, Т.В. Коронелли, Е.С. Милько и др.. // Микробиология. 1986. - Т. 55. - Вып. 2. - С. 227-230.

25. Елисеева, И.И., Юзбашев М.М. Общая теория статистики / И.И. Елисеева, М.М. Юзбашев М.: "Финансы и статистика", 2004. - 656 с.

26. Ермоленко, З.М. Биологическая характеристика штамма микобактерий, выделенного из нефти ухтинского месторождения / З.М. Ермоленко, В.П. Хо-лоденко, В.А. Чугунов и др.. // Микробиология. 1997. - Т. 66. - № 5. - С. 650-654.

27. Звягинцева, И.С. Влияние солености среды на деструкцию нефтяных масел нокардиоподобными бактериями / И.С. Звягинцева, М.Н. Поглазова, М.Т. Готоева, С.С. Беляев // Микробиология. 2001. - Т. 70. - №6. - С. 759-764.

28. Звягинцева, И.С. Деградация нефтяных масел нокардиоподобными бактериями / И.С. Звягинцева, Э.Г. Суровцева, М.Н. Поглазова и др.. // Микробиология.-2001.-Т. 70. -№3. С. 321-328.

29. Ившина, И.Б. Методы консервации культур Rhodococcus spp. и их применение в практике поддержания специализированного фонда алканотрофных родококков / И.Б. Ившина, Т.Н. Каменских, М.С. Куюкина и др.. // Микробиология. 1994. - Т.63. - №1. - С. 118-127.

30. Ившина, И.Б. Селективное выделение пропанокисляющих родококков с использованием антибиотических веществ / И.Б. Ившина, М.С. Куюкина // Микробиология. 1997. - Т. 66. - № 4. - С. 494-500.

31. Ившина, И.Б. Фенотипическая характеристика алканотрофных родококков из различных экосистем / И.Б. Ившина, М.В. Бердичевская, JI.B. Зверева и др.. // Микробиология. 1995. - Т.64. -№4. - С. 507-513.103

32. Комарова, Т. И. Роль низкомолекулярных азотистых соединений в осмото-лерантности бактерий родов Rhodococcus и Arthrobacter / Т.И. Комарова, Т.В. Коронелли, Е.А. Тимохина // Микробиология. 2002. - Т. 71. - № 2. -С.166-170.

33. Комарова, Т.И. Влияние серы на рост углеводородокисляющих бактерий разных родов / Т.И. Комарова,,Е-С. Милько, Т.В. Коронелли // Микробиология. 2003. - Т. 72. - № 2. - С. 275-276.

34. Комарова, Т.И. Образование трегалозы клетками R- и S- вариантов Rhodococcus erythropolis / Т.И. Комарова, О.В. Поршнева, Т.В. Коронелли // Микробиология. 1998. - №3. - Т.67. - С. 428-431.

35. Компьютерная биометрика / под ред. В.Н. Носова. М.: Изд-во МГУ, 1990. -232 с.

36. Коронелли, Т.В. Видовая структура углеводородокисляющих бактериоцено-зов водных экосистем разных климатических зон / Т.В. Коронелли, С.Г. Дермичева, В.В. Ильинский и др.. // Микробиология. 1994. - Т.63. - №5. -С. 917-923.

37. Коронелли, Т.В. Выживаемость углеводородокисляющих бактерий в условиях полного голодания / Т.В. Коронелли, С.Г. Дермичева, Е.В. Коротаева // Микробиология. 1988. -Т.57. -№2. - С. 298-304.

38. Коронелли, Т.В. Изменение липидного состава клеток R- и S-вариантов Rhodococcus erythropolis при длительном хранении на лабораторной среде / Т.В. Коронелли, Т.И. Комарова, О.В. Поршнева, С.Г. Дермичева // Микробиология 1998. Т. 67. - №5. - С. 718-720.

39. Коронелли, Т.В. Интродукция бактерий рода Rhodococcus в тундровую почву, загрязненную нефтью / Т.В. Коронелли, Т.И. Комарова, В.В. Ильинскийи др.. // Прикладная биохимия и микробиология. 1997. - Т.ЗЗ. - №2. - С. 198-201.

40. Коронелли, Т.В. Липиды R- и S-вариантов Rhodococcus erythropolis / Т.В. Коронелли, Т.И. Комарова, О.В. Поршнева // Микробиология. 1995. - Т. 64.-№6.-С. 769-771.

41. Коронелли, Т.В. Полярные липиды углеводородокисляющих бактерий / Т.В. Коронелли, Т.И. Комарова, С.Г. Юферова и др.. // Микробиология. 1993.- Т.62. №2. - С. 231-237.

42. Коронелли, Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде (обзор) / Т.В. Коронелли // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т.32. - №6. - С. 579-585.

43. Коронелли, Т.В. Родококки как природный сорбент углеводородов / Т.В. Коронелли, С.Г. Дермичева, М.Н. Семененко // Микробиология. 1986. -Т.55.-№4.-С. 683-685.

44. Коронелли, Т.В. Углеводородокисляющая микрофлора акваторий Балтийского моря и Куршского залива, загрязненных при разливе мазута / Т.В. Коронелли, В.В. Ильинский, В.А. Янушка, Т.И. Красникова // Микробиология.- 1987. Т.56. -№3. - С. 472-477.

45. Коронелли, Т.В. Экологическая стратегия бактерий, использующих гидрофобный субстрат / Т.В. Коронелли, Е.Д. Нестерова // Микробиология. -1990. Т.59. - №6. - С. 993-997.

46. Кулик, Е.С. Окисление гексадекана в пористой системе с образованием жирных кислот / Е.С. Кулик, Ю.П. Сомов, E.JI. Розанова // Микробиология. -1985. Т. 54. - Вып. 3. - С. 381-385.

47. Куликова, А.К. Микроорганизмы, ассимилирующие газообразные углеводороды (С2-С4) (Обзор) / А.К. Куликова // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. -Т.31. -№2. - С. 155-167.

48. Куликова, А.К. Эпоксидирование этилена нативными и иммобилизованными клетками пропанассимилирующей культуры Rhodococcus erythropolis 3/89 / А.К. Куликова, А.М. Безбородов // Прикладная биохимия и микробиология.- 1999. Т.35. - №6. - С. 611-615.

49. Куличевская, И.С. Популяционная динамика углеводородокисляющих дрожжей, интродуцированных в нефтезагрязненную почву /И.С. Куличев-ская, B.C. Гузев, Н.С. Паников // Микробиология. 1995. Т. 64. - № 5, С. 668 -673.

50. Максимов, В.Н. Влияние углеродного, азотного и фосфорного питания на рост R-, S— и М-диссоциантов Pseudomonas aeruginosa в смешанных культурах / В.Н. Максимов, Е.С. Милько, И.А. Ильиных // Микробиология. -1999. Т. - 68. - № 4. - С. 485-490.

51. Матыс, В.Ю. Адаптации к стрессовым условиям у представителей родов Rhodococcus и Gordona / В.Ю. Матыс, JI.M. Барышникова, E.JI. Головлев // Микробиология. 1998. Т. 67. - № 6. - С. 743-747.

52. Методы общей бактериологии в 3 Ч. Ч. 1 / Под общ. ред. Ф. Герхардта. пер. с англ. М.: Мир. - 1983. - 536с.

53. Микроорганизмы и охрана почв / под ред. Д.Г. Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1989.-206 с.

54. Милехина, Е.И. Эколого-физиологические особенности аэробных эубакте-рий из нефтяных месторождений Татарстана / Е.И. Милехина, И.А. Борзенков, И.С. Звягинцева и др.. // Микробиология. 1998. - Т.67. - №2. - С. 208-214.

55. Милько, Е.С. Влияние пониженных концентраций углерода, азота и фосфора в среде на динамику роста трёх диссоциантов Pseudomonas aeruginosa / Е.С. Милько, И.А. Ильиных // Микробиология. 2001. - Т.70. - №5. - С. 607-610.

56. Милько, Е.С. Образование биологически активных соединений S-, R- и М-формами Mycobacterium lacticolum на среде с н-гексадеканом / Е.С. Милько, Н.С. Егоров, Н.Н. Угарова и др.. // Микробиология. 1976. - Т. XLV. -Вып. 5-С. 808-810.

57. Миронова, Р.И. Биодеградация и биосорбция плавающей нефти природными микромицетами / Р.И. Миронова, В.П. Носкова, Г.Е. Расулова, В.П. Холо-денко // Биотехнология. 1996. - №7. - С. 44-48.

58. Муратова, А.Ю. Изучение микробного консорциума, осуществляющего деструкцию минерального масла / А.Ю. Муратова, О.В. Турковская // Прикладная биохимия и микробиология. 1994. - Т.30. - Вып.6. - С.623-627.

59. Назина, Т.Н. Физиологическое и филогенетическое разнообразие термофильных спорообразующих углеводородокисляющих бактерий из нефтяных пластов / Т.Н. Назина, Т.П. Турова, Т.П. Полтараус и др.. // Микробиология. 2000. - Т.69. - №1. - С. 113-119.

60. Нестеренко, О.А. Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии / О.А. Нестеренко, Е.И. Квасников, Т.М. Ногина-Киев: "Наукова дкумка". 1985. - 336 с.

61. Никитина, Е.В. Особенности распределения и физиологического состояния микроорганизмов нефтешлама отхода нефтехимического производства / Е.В. Никитина, О.И. Якушева, С.А. Зарипов и др.. // Микробиология. -2003. - Т.72. -№5. - С. 699-706.

62. Обухова, Н.А. Некоторые физико-химические свойства ДНК умеренного фага и возможное влияние его на изменчивость Mycobacterium lacticolum / Н.А. Обухова, А.А. Колесников, Д.А. Маслов и др.. // Микробиология. -1985. Т. 54. - Вып. 4. - С. 641-645.

63. Определитель бактерий Берджи в 2 Ч. 1-2 Ч. / Под ред. Дж. Хоулта и др.. -9-е изд. М.: Мир, 1997. - 780, с.

64. Петрикевич, С.Б. Оценка углеводородокисляющей активности микроорганизмов / С.Б. Петрикевич, Е.Н. Кобзев, А.Н. Шкидченко // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39. - № 1. - С. 25-30.

65. Плакунов В.К. Взаимосвязь кинетики роста и дыхания у родококков в присутствии высоких концентраций солей / Плакунов В.К., В.Г. Арзуманян, Н.А. Воронина, С.С. Беляев // Микробиология. 1999. - Т. 68. - № 1. - С. 40^44.

66. Плотникова, Е.Г. Бактерии-деструкторы полициклических ароматических углеводородов, выделенные из почв и донных отложений района солеразработок / Е.Г. Плотникова, О.В. Алтынцева, И.А. Кошелева и др.. // Микробиология,-2001. Т.70. -№1. - С. 61-69.

67. Позмогова, И.Н. Некоторые физиологические особенности термотолерантных и термофильных микроорганизмов, развивающихся на средах с ясидким парафином / И.Н. Позмогова, С.Д. Таптыкова, Г.Г. Сотников // Микробиология. 1972. - Т. XLI. - №2. - О. 299-305.

68. Полянская, J1.M. Микронавески ризосферной почвы и лабораторные артефакты / JI.M. Полянская, М.Х. Оразова, О.А. Бурканова, Д.Г. Звягинцев // Микробиология. 2000. - Т. 69. - № 4. - С. 581-585.

69. Пунтус, И.Ф. Выделение и характеристика микроорганизмов деструкторов полициклических ароматических углеводородов / И.Ф. Пунтус, А.Е. Филонов, И.А. Кошелева и др.. // Микробиология. 1997. - Т. 66. - №5. - С. 269-272.

70. Руководство по газовой хроматографии / К. Метунер, Х.Г. Штруппе, В. Лейпниц и др.. -М.: Мир. 1988. -480 с.

71. Рустемов, С.А. Новый путь окисления стирола культурой Pseudomonas putida / С.А. Рустемов, JT.A. Головлева, P.M. Алиева, Б.П. Баскунов // Микробиология. 1992. - Т. 61.-Вып. 1.-С. 5-10.

72. Сборник методик и инструктивных материалов по определению вредных веществ для контроля источников загрязнения окружающей среды. Ч. 5. -Краснодар. -1996.

73. Селифонов, С.А. Катаболизм аценафтена штаммами Alcaligenes eutrophus и Alcaligenesparadadoxus / С.А. Селифонов, А.В. Слепенькин, В.М. Аданин, и др.. // Микробиология. 1993. - Т. 62. - Вып. 1. - С. 120-128.

74. Селифонов, С.А. Окисление дибензофурана штаммами Pseudomonas несущими плазмиды биодеградации нафталина / С.А. Селифонов, А.В. Слепенькин, В.М. Аданин и др.. // Микробиология. 1991. - Т. 60. - Вып. 6. - С. 67-71.

75. Сергиенко, С.Р. Высокомолекулярные неуглеводородные соединения нефти. Смолы и асфальтены / С.Р. Сергиенко, Б.А. Таимова, Е.И. Талалаев М.: Наука,-1979.-270 с.

76. Стабникова, Е.В. Выбор активного микроорганизма-деструктора углеводородов для очистки нефтезагрязненных почв / Е.В. Стабникова, М.В. Селезнева, О.Н. Рева, В.Н. Иванов // Прикладная биохимия и микробиология. -1995. -Т.31. -№5. С. 534-539.

77. Старовойтов, И.И. Катаболизм бифенила штаммом Pseudomonas putida BS 893, содержащим плазмиду биодеградации pBS241 / И.И. Старовойтов, С.А. Селифонов, М.Ю. Нефедова, В.М. Аданин // Микробиология. 1985. - Т. 54. -Вып. 6.-С. 914-918.

78. Старостина, Н.Г. Характеристика гидрофобности клеточной поверхности метанотрофных бактерий по их способности к адгезии на углеводородах /

79. Н.Г. Старостина, А.Г. Кощаев, Е.Н. Ратнер, А.Б. Циоменко // Микробиология. 1997. - Т.66. -№2. - С. f 85-191.

80. Сузина, Н.Е. Изменения в ультраструктурной организации клеток Pseudo-monas aeruginosa под действием додецилсульфата натрия / Н.Е. Сузина, С.С. Ставская, Б.А. Фихте // Микробиология. 1988. - Т.57. - №2. - С. 255-257.

81. Суржко, Л.Ф. Утилизация нефти в почве и воде микробными клетками / Л.Ф. Суржко, З.И. Финкельштейн, Б.П. Баскунов и др.. // Микробиология. -1995. Т. 64. - № 3. - С. 393 - 398.

82. Суровцева, Э.Г. Разрушение ароматической фракции нефти ассоциацией грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов / Э.Г. Суровцева, B.C. Ивойлов, С.С. Беляев // Микробиология. 1997. - Т. 66. - №1. - С. 78-83.

83. Суровцева, Э.Г. Физиолого-биохимические свойства штамма Beijerinckia mobilis 1 ф phn+ деструктора полициклических ароматических углеводородов / Э.Г. Суровцева, B.C. Ивойлов, С.С. Беляев // Микробиология. - 1999. -Т. 68. - № 6. - С. 845-850.

84. Тарасов, АЛ. Динамика микробных процессов в пластовых водах Ромаш-кинского нефтяного месторождения / А.Л. Тарасов, И.А. Борзенков, Е.И. Милехина и др.. // Микробиология. 2002. - Т.71. - №6. - С. 849-857.

85. Требин, Г.Ф. Нефти месторождений Советского Союза / Г.Ф. Требин, Н.В. Чарыгин, Т.М. Обухова М.: Недра, 1980. - 583 с.

86. Успенский В.А. Методы битуминологических исследований. Задачи исследований и пути их разработки / В.А. Успенский, О.А. Радченко, А.И. Горская, А.П. Шишкова Л.: Недра, 1975. - 319 с.

87. Уткин, И.Б. Деградация бензола, толуола и о-ксилола культурой Pseudomo-nas sp. Y13 / И.Б. Уткин, М.М. Якимов, Л.Н. Матвеева и др.. // Микробиология. 1992. - Т. 28. - Вып. 3. - С. 367-370.

88. Уткин, И.Б. Деградация полициклических ароматических углеводородов штаммом Pseudomonas fluorescens 16N2 / И.Б. Уткин, М.М. Якимов, Л.Н. Матвеева и др.. // Микробиология. 1991. - Т. 27. - Вып. 1. - С. 76-81.

89. Финкельнштейн, З.И. Превращение дибензотиофена и диметилдибензоти-фена микроорганизмами / З.И. Финкельнштейн, Б.П. Баскунов, JI.H. Вавилова, Л.А. Головлева// Микробиология. 1997. - Т. 66. №4. С. 481-487.

90. Финкельштейн, З.И. Десульфуризация 4,6-диметилдибензотиофена и дибензотиофена культурой Gordona, aichiensis 51 / З.И. Финкелыдтейн, Б.П. Баскунов, Е.Л. Головлев, Л.А. Головлева // Микробиология. 1999. - Т. 68. - № 2.-С. 187-190.

91. Химическая энциклопедия: в 5 т. // Редкол.: Зефиров Н. С. (гл. ред.) и др.. -М.: Большая российская энцикл. 1998.

92. Ягафарова, Г.Г. Новый нефтеокисляющий штамм бактерий Rhodococcus erythropolis / Г.Г. Ягафарова, И.Н. Скворцова // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т.32. - №2. - С.224-227.

93. Яковлева, Л.М. Некоторые характеристики диссоциантов Pseudomonas sy-ringae pv. maculicola / Л.М. Яковлева, Г.М. Здоровенно, Р.И. Гвоздяк // Микробиология 2002. Т. 71. - №2. - С. 240-246.

94. Bruheim, Per Effects of surfactant mixtures, including Corexit 9527, on bacterial oxidation of acetate and alkanes in crude oil / Bruheim Per, Bredholt Harald, Eimhjellen Kjell // Applied and Environmental Microbiology. Apr. 1999. - P. 1658-1661.

95. Burd, Genrich Bacterial degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons on agar plates: the role of biosurfactants / Burd Genrich, Owen P. Ward // Biotechnology Techniques. May 1996.-Vol. I0.-No.5.-P. 371-374.

96. Cal-Prieto, M. J. Antimony as a tracer of the anthropogenic influence on soils and estuarine sediments / Cal-Prieto M. J., Carlosena A., Andrade J. M., et al.. // Water, Air, and Soil Pollution. 2001. - Vol. 129. - P. 333-348.112

97. Chang, Je Hwan Desulphurization of model and diesel oils resting cells of Gor-dona sp. / Chang Je Hwan, Chang Yong Keun, Cho Kyung-Suk, Chang Ho Nam // Biotechnology Letters. 2000. - Vol. 22. - P. 193-196.

98. Charrie-Duhaut, A. Abiotic oxidation of petroleum bitumens under natural conditions / Charrie-Duhaut A., Lemoine S., Adam P., Connan J., Albrecht P. // Organic Geochemistry. 2000. - Vol. 31. - P. 977-1003.

99. Cheung, Pui-Yi Mycobacterium diversity and pyrene Mineralization in petroleum-contaminated soils / Cheung Pui-Yi, Kinkle Brian K. // Applied and Environmental Microbiology. May 2001. - Vol. 67. - No. 5. - P. 2222-2229.

100. Dean-Ross, Deborah Metabolism of anthracene by a Rhodococcus species / Dean-Ross Deborah, Moody Joanna D., Freeman James P., et al.. // FEMS Microbiology Letters. 2001. - Vol. 204. - P. 205-211.

101. Eckford, Ruth Free-living heterotrophic nitrogen-fixing bacteria isolated from fuel-contaminated antarctic soils / Eckford Ruth, Cook Fred D., Saul David et al.. // Applied and environmental microbiology. Oct. 2002. - Vol. 68. - No. 10.-P. 5181-5185.

102. Giilensoy, Nahide Diversity and correlation of specific aromatic hydrocarbon biodegradation capabilities / Giilensoy Nahide, Alvarez Pedro J.J. // Biodegrada-tion- 1999.-Vol. 10.-P. 331-340.

103. Gramss, Gerhard Degradation of poly cyclic aromatic hydrocarbons with three to seven aromatic rings by higher fungi in sterile and unsterile soils / Gramss Gerhard, Voigt Klaus-Dieter, Kirsche Brigitta // Biodegradation. 1999. - V. 10.-P. 51-62.

104. Groudeva, V.I. Bioremediation of waters contaminated with crude oil and toxic heavy metals / V.I. Groudeva, S.N. Groudev, A.S. Doycheva // Int. J. Miner. Process. 2001. - Vol. 62. - P. 293-299.

105. Iwabuchi, N. Relationships between colony morphotypes and oil tolerance in Rhodococcus rhodochrous / Iwabuchi N., Sunairi M., Anazai H. et al.. // Applied and Environmental microbiology. 2000. - Vol. 66. - No. 11. - P. 50735077.

106. Kulakova, Anna N Isolation of Rhodococcus rhodochrous NCIMB13064 derivatives with new biodegradative abilities / Kulakova Anna N, Reid Karen A., Larkin Michael J. et al. // FEMS Microbiology Letters. 1996. - Vol. 145. - P. 227-231.

107. Lang, S. Surface-active lipids in rhodococci / Lang S., Philp J. C. // Antonie van Leeuwenhoek. 1998. - Vol. 74. - P. 59-70.

108. Morton, Anna C. Diversity of isolates of Rhodococcus equi from Australian thoroughbred hors farms / Morton Anna C., Baseggio Nina, Peters Michelle A., Browning Glenn F. // Antonie van Leeuwenhoek. 1998. - Vol. 74. P. 21-25.

109. Nicodem, David E. Photochemical processes and environmental impact of petroleum spills / Nicodem David E., Conceicao M., Fernandes Z. et al. // Biogeo-chemistry. 1997. - Vol. 39. - P. 121-138.

110. Piehler, M.F. Stimulation of diesel fuel biodegradation by indigenous nitrogen fixing bacterial consortia / Piehler M.F., Swistak J.G., Pinckney J.L., Paerl H.W. // Microb. Ecol. 1999. - Vol. 38. - P. 69-78.

111. Pineda, Flores Petroleum asphaltenes: generated problematic and possible biodegradation mechanisms / Pineda Flores et al. // Rev. Latinoam. Microbiol. -2001.-Vol. 43.-№3.-P. 143-150.

112. Riis, V. Influence of special surfactants on the microbial degradation of mineral oils / Riis V., Brandt M., Miethe D., Babel W. // Chemosphere. 2000. Vol. 41. -P. 1001-1006.

113. Sharma, S. L. Biodegradation and conversion of alkanes and crude oil by a marine Rhodococcus sp. / Sharma S. L., Pant A. // Biodegradation. 2000. - Vol. 11.- P. 289-294.

114. Sikkema, Jan Mechanisms of Membrane Toxicity of Hydrocarbons / Sikkema Jan, De Bont Jan A. M., Poolman Bert / Microbiological Reviews. June 1995.- Vol.59. No.2. - P.201-222.

115. Stephane, Champely Measuring biological diversity using Euclidean metrics / Stephane Champely, Daniel Chessel // Environmental and Ecological Statistics.- 2002. Vol. 9. - P. 167-177.

116. Tiehm, Andreas Degradation of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in the Presence of Synthetic Surfactants / Tiehm Andreas // Applied and Environmental Microbiology. Jan. 1994. - Vol. 60. - No. 1 - P. 258-263.

117. Torben, Madsen Effects of bacterial inoculation and nonionic surfactants on degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil / Torben Madsen, Preben Kristensen // Environmental Toxicology and Chemistry. 1997. - Vol. 16. - № 4.-P. 631-637.

118. Wang, J., Characterization of polycyclic aromatic hydrocarbons created in lubricating oils / Wang J., Jia C. R., Wong С. K., Wong P. K. // Water, Air, And Soil Pollution. 2000. - V. 120. - P. 381-396.

119. Wong, P.K. The accumulation of polycyclic aromatic hydrocarbons in lubricating oil over time a comparison of supercritical fluid and liquid-liquid extraction methods / Wong P.K., Wang J. // Environmental Pollution. - 2001. Vol. 112.-P. 407-415.

120. Zhang, Yimin Effect of a Pseudomonas rhamnolipid biosurfactant on cell hy~ drophobisity and biodegradatin of octadecane / Zhang Yimin, Miller Raina M. // Applied and Environmental Microbiology. 1994. - Vol. 60. - No. 7. - P. 2101