Эколого-функциональные аспекты микробной ремедиации нефтезагрязнённых почв тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.08, доктор биологических наук Плешакова, Екатерина Владимировна

• Плешакова, Екатерина Владимировна
• доктор биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации доктор биологических наук Плешакова, Екатерина Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Загрязнение окружающей среды нефтяными углеводородами.

1.2. Микробная деградация нефтяных углеводородов.

1.2.1. Микроорганизмы-деструкторы нефтяных углеводородов и их физиологические особенности.

1.2.2. Бактерии рода Шос1ососст, их экологическое значение и генетическая организация.

1.2.3. Пути микробной деструкции нефтяных углеводородов.

1.3. Технологии ремедиации нефтезагрязнённых почв.

1.3.1. Микробная очистка почв от углеводородного загрязнения.

1.3.2. Интродукция нефтеокисляющих микроорганизмов в загрязнённую почву: проблемы и перспективы.

1.3.3. Методы контроля биоремедиации.

1.4. Влияние нефтяного загрязнения на ферментативную активность почв. Использование показателей активности почвенных ферментов для мониторинга технологий биоремедиации.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Микроорганизмы.

2.2. Среды.

2.3. Методы изучения биологических и деструктивных свойств штаммов.

2.4. Методы генетических исследований.

2.5. Условия проведения лабораторных и микрополевого экспериментов по биоремедиации нефтезагрязнённых почв и методы исследований, применяемые в этих экспериментах.

2.6. Методы оценки токсичности почвы.

2.6.1. Определение токсичности почвы по дегидрогеназной активности бактерий.

2.6.2. Метод определения фитотоксичности почвы.

2.7. Методы мониторинга и количественной оценки бактерий

D. maris АМЗ, интродуцированных в нефтезагрязнённую почву.

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ РЯДА БИОЛОГИЧЕСКИХ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ УГЛЕВО ДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ ШТАММОВ.

3.1. Морфологические и физиолого-биохимические характеристики исследованных штаммов.

3.1.1. Морфологические и физиолого-биохимические характеристики штамма D. maris АМЗ.

3.1.2. Оценка чувствительности штамма!), maris АМЗ к различным антибиотикам.

3.2. Рост исследованных штаммов в жидкой питательной среде в интервале pH.

3.3. Субстратный'спектр штаммов-деструкторов нефтяных углеводородов.

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ ШТАММОВ.

4.1. Плазмидный скрининг углеводородокисляющих штаммов

4.2. Генетическая природа свойства биодеградации углеводородов нефти у штамма D. maris АМЗ.

4.2.1. Стабильность свойства биодеградации нефтяных углеводородов у штамма D. maris АМЗ в условиях культивирования на неселективных питательных средах и при действии элиминирующих агентов.

4.2.2. Генетический перенос признака деструкции нефтяных углеводородов у штамма D. maris АМЗ.

4.3. Генетические особенности ацидотолерантности и деструктивной активности у исследованных штаммов.

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫХ ШТАММОВ ДЛЯ РЕМЕДИАЦИИ НЕФТЕЗАГРЯЗНЁННОЙ ПОЧВЫ.

5.1. Изучение процессов ремедиации нефтезагрязнённой почвы на основе интродукции штамма Bacillus sp. УН2/5.

5.2. Микробиологические аспекты интродукции штамма!), maris АМЗ в нефтезагрязнённую почву.

5.2.1. Определение конкурентной способности штамма!), maris АМЗ по отношению к аборигенным УОМ.

5.2.2. Динамика развития нефтеокисляющего штамма!), maris АМЗ в почве в процессе биоаугментации.

5.2.2.1. Разработка метода слежения за интродуцированными бактериями в почве.

5.2.2.2. Оценка возможности применения иммуноферментного анализа для количественного определения содержания штамма!), maris АМЗ, внесённого в почву.

5.2.2.3. Изучение динамики численности интродуцированного штамма в почве в процессе биоаугментации методом твердофазного иммуноферментного анализа и микробиологическим методом.

5.3. Изучение реизолятов штамма D. maris АМЗ после его культивирования на углеводородных субстратах.

5.3.1. Оценка показателя гидрофобности клеток и эмульгирующей активности у реизолятов штамма D. maris АМЗ.

5.3.2. Деструкция нефтяных углеводородов реизолятами штамма

D. maris АМЗ.

5.3.3. Исследование ряда биологических свойств у реизолятов штамма

D. maris АМЗ.

ГЛАВА 6. СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ САМООЧИЩЕНИЯ НЕФТЕЗАГРЯЗНЁННОЙ ПОЧВЫ И ТЕХНОЛОГИЙ БИОРЕМЕ ДИАЦИИ НА ОСНОВЕ ИНТРОДУКЦИИ ШТАММА D. maris АМЗ И СТИМУЛЯЦИИ ЕСТЕСТВЕННЫХ МИКРОБНЫХ

СООБЩЕСТВ.

6.1. Динамика развития микробных сообществ в нефтезагрязнённой почве в процессе самоочищения, стимуляции и аугментации.

6.1.1. Изменение общей численности гетеротрофных микроорганизмов в процессах очистки нефтезагрязнённой почвы.

6.1.2. Изменение численности углеводородокисляющих микроорганизмов в процессах очистки нефтезагрязнённой почвы.

6.1.3. Динамика численности микроорганизмов азотного цикла в процессах очистки нефтезагрязнённой почвы.

6.2. Изменение показателей биологической активности почвы в процессе ремедиации. Оценка возможности использования этих показателей для мониторинга процессов очистки.

6.2.1. Динамика почвенного дыхания.

6.2.2. Динамика активности ферментов в нефтезагрязнённой почве при самоочищении и при использовании биоремедиационных приёмов.

6.3. Оценка токсичности почвы после ремедиации.

6.4. Изменение содержания нефтепродуктов в ходе ремедиации.

6.5. Изменение ряда агрохимических показателей в процессе ремедиации загрязнённого грунта.•.

ГЛАВА 7. ПОЛУЧЕНИЕ НЕФТЕОКИСЛЯЮЩЕГО БИОПРЕПАРАТА ПУТЁМ СТИМУЛЯЦИИ АБОРИГЕННОЙ

УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩЕЙ МИКРОФЛОРЫ.

7.1. Условия проведения экспериментов.

7.2. Получение жидкой и твёрдой обогащённой культуры.

7.3. Апробация эффективности полученных «биопрепаратов» для ускорения очистки загрязнённых объектов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эколого-функциональные аспекты микробной ремедиации нефтезагрязнённых почв»

В настоящее время в результате антропогенной деятельности происходит широкомасштабное загрязнение окружающей среды токсичными веществами. Нефть и нефтепродукты признаны основными загрязнителями окружающей среды (Eurosoil 2008., 2008). Потери нефти и нефтепродуктов в России при добыче, транспортировке, переработке и хранении по официальным данным оцениваются в 8-9 млн т в год. Особую нагрузку при этом испытывает почва, что проявляется в ухудшении её морфологических и физико-химических свойств, угнетении самоочищающей способности и негативных изменениях развития и функциональной активности организмов почвенного биоценоза (Ииковскийи др., 2003; Stroud et al., 2007). Аварийные и хронические разливы нефти приводят к быстрой потере продуктивности земель или полной деградации ландшафтов; Ограниченность, земельных ресурсов! ставит неотложную задачу возврата в хозяйственное использование, всех нарушенных и деградированных почв (Ьурмистрова, 2003).

Поскольку на современном уровне развития нефтяной промышленности; не. представляется; возможным; полностью исключить её негативное воздействие на, окружающую среду, возникает необходимость разработки методов и технологий восстановления почв,, загрязнённых нефтяными углеводородами (Сулейманов и др;, 2005).

Экологически перспективными являются микробиологические способы очистки от нефтезагрязнений. Углеводородокисляющие микроорганизмы (УОМ), к которым относятся . представители многих родов бактерий; дрожжей и мицелиальных грибов, отличаются от других членов гетеротрофного микробоценоза способностью к поглощению гидрофобных соединений и наличием углеводородокисляющих ферментов (Balba, 1998; Quatrini et al., 2008). Основные направления микробной ремедиации почв: биостимуляция — обработка почвы ^ля обеспечения оптимальных условий развития собственной почвенной микрофлоры (внесение азотно-фосфорных удобрений, аэрация и др.) и биоаугментация. - внесение в почву г

1 1 микроорганизмов-деструкторов загрязнений наряду с добавками солей азота и фосфора (Хабибуллина и др., 2002; Нечаева и др., 2009; Киреева и др., 2009; Ouyang et al., 2005).

При выборе способа очистки загрязнённых почв всё чаще отдают предпочтение биостимуляции аборигенной микробной популяции in situ, например, при больших масштабах загрязнения. Важным этапом при этом является подбор приёмов для интенсификации функциональной активности природных микробных ценозов, и особенно группы углеводородокисляющих микроорганизмов. В ряде случаев, когда физико-химические характеристики ' места загрязнения делают невозможным рост естественной микрофлоры или загрязнитель устойчив к её воздействию, а также, если концентрация загрязнителя в почве относительно высока или низка — биоаугментация оказывается более эффективной (Mishra et al., 2001; Wilkinson et al., 2002). В то же время вопросы целесообразности использования и преимуществ технологий биостимуляции и биоаугментации остаются спорными.

Учитывая, что деструкция нефти в окружающей среде - сложный многофакторный процесс, на который оказывают влияние физико-химический состав, концентрация и срок действия загрязнителя, почвенно-климатические и биологические особенности экосистемы и другие факторы, сведения по этой проблеме нередко противоречивы. В связи с этим, проблема i поиска оптимальных и адаптированных к конкретным условиям методов остаётся весьма актуальной.

Очистку нефтезагрязнённых -„территорий затрудняют пониженная , температура и низкая биодоступность гидрофобных углеводородов нефти, повышенное содержание соли или повышенная кислотность почв. Большинство известных бактерий-деструкторов нефти, как правило, устойчивы к различным неблагоприятным условиям окружающей среды и i стабильно сохраняют свои биодеградирующие свойства (Стабникова, 1995; Киреева, 1996; Vasudevan, 2001). Несмотря на многочисленные исследования ■< микроорганизмов-деструкторов нефтяных углеводородов в окружающей среде, механизмы их функционирования в экстремальных условиях, например, в кислых почвах, изучены недостаточно. Хотя на территории России и других стран существует немало почв, в том числе и нефтезагрязнённых, с повышенной кислотностью, которая обусловлена естественными или антропогенными факторами (Широких, 2004; Орлов и др., 2005; Rothschild, Mancinelli, 2001).

Для эффективной реализации технологий биоаугментации большое значение имеет поиск и селекция микроорганизмов с высокой деструктивной активностью, а также всестороннее их изучение, в том числе, исследование генетической регуляции процессов деструкции. Изучение генетики штаммов-деструкторов, накопление знаний о функционировании плазмид и генов биодеградации, их экспрессии и передаче, применение генетических методов к этим бактериям необходимо для их длительной биотехнологической эксплуатации (Larkin et al., 1998; van Hamme et al., 2003).

Многие экологические аспекты проблемы биоаугментации, касающиеся жизнеспособности и активности интродуцированных микроорганизмов в почве, их взаимоотношений с аборигенным микробоценозом, требуют всестороннего изучения. В связи с этим, разработка высокоспецифичных и чувствительных мониторинговых методов для идентификации внесённых в почву бактерий особенно актуальна.

Эффективность приёмов биоремедиации загрязнённых почв традиционно оценивают с помощью химико-аналитических методов, нередко дорогих и трудоёмких. Биотестирование, наряду с методами аналитической химии, позволяет получить интегральную токсикологическую характеристику загрязнённой среды, построить наиболее полную картину деградации почв, т.к. уменьшение концентрации загрязнителя в почве не всегда отражает снижение его токсичности для живых организмов (Киреева и др., 2004). В связи с этим, активно продолжается поиск оптимальных методов биотестирования для оценки степени загрязнённости и токсичности почвы и уровня её очистки после применения биоремедиационных технологий.

Понимание общих принципов функционирования микробных сообществ нефтезагрязнённых почв и выявление ключевых биологических факторов и механизмов, определяющих эффективность биоремедиации, о1 , создаст, в свою очередь, основу для разработки и улучшения способов очистки.

Цель настоящей работы — выявление особенностей функционирования естественных микробных сообществ нефтезагрязнённых почв и интродуцированных в почву специализированных микроорганизмов при использовании приёмов биоремедиации.

Для достижения поставленной цели были определены задачи:

1. Исследовать биологические и эколого-функциональные свойства микробного сообщества нефтешлама с низким значением pH. Изучить генетические особенности кислотоустойчивых углеводородокисляющих микроорганизмов, выделенных из нефтешлама. I

2. Провести сравнительную оценку жизнеспособности и динамики развития микроорганизмов Dietzia maris АМЗ и Bacillus sp. УН 2/5 при их интродукции в загрязнённые нефтью кислые и нейтральные почвы. Изучить стабильность свойств реизолятов штамма D. maris АМЗ.

3. Исследовать влияние интродукции нефтеокисляющих микроорганизмов на характер микробиологических и биохимических процессов в загрязнённой почве и деструкцию-рефтяных углеводородов.

4. Разработать и апробировать иммунохимические методы анализа для мониторинга штамма D. maris АМЗ в нефтезагрязнённой почве в процессе биоремедиации.

5. Провести сравнительное исследование функционирования микробных сообществ почвы с разным сроком нефтяного загрязнения при самоочищении и использовании приёмов биостимуляции и биоаугментации.

6. Выявить оптимальные показатели для мониторинга процессов микробной ремедиации почв и разработать метод биотестирования для оценки уровня токсичности почвы после очистки.

7. Разработать и апробировать оригинальный способ активизации-аборигенных .углеводородокисля'ющих микроорганизмов для очистки нефтезагрязнённой почвы и воды.

Научная новизна. Впервые из микробного сообщества, существующего в экстремальных условиях нефтешлама (pH 1,1.5), выделены и изучены 13 штаммов бактерий, идентифицированные как (Sorynebacterium spp:,, D. maris и Bacillus sp.,. способные к деструкции углеводородов в широком диапазоне pH. Получены доказательства плазмидной локализации генов, детерминирующих свойства? биодеградации? нефтяных углеводородов и ацидотолерантности у данных -.штаммов, что может обеспечить.,: преимущества? микроорганизмов сообщества при существовании в экстремальных условиях.

Впервые подробно изучен и охарактеризован-штамм £).- maris АМЗ как, эффективный и стабильный деструктор алкановых и- ароматических углеводородов в широком« диапазоне pH (4-9) ш температуры (10-40°G),. обладающий эмульгирующей активностью по отношению; к нефтепродуктам и содержащий г трансмиссивную плазмидную ДНК. Установлено,, что после культивирования штамма на. углеводородных субстратах увеличивается гидрофобность его клеток и нефтеокйсляющаятктивность.

Разработаны иммунохимические. методы анализа для выявления, и количественной оценки штамма D. maris АМЗ в-нефтезагрязнённой почве в процессе биоремедиацйи: Установлены особенности. развития интродуцированных микроорганизмов D. maris АМЗ и Bacillus sp; УН 2/5 в нефтезагрязнённых кислых и нейтральных почвах, подтверждена их высокая* конкурентная способность по отношению, к: микроорганизмам- естественных почвенных сообществ, жизнеспособность и нефтеокисляющая активность. С помощью метода твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) показано, что максимальное развитие штамма D. maris АМЗ в почве происходит через 7-14 сут. интродукции и зависит от свойств почвы и загрязнителя.

На основании выявленных особенностей функционирования естественных микробных сообществ загрязнённых почв и интродуцированных нефтеокисляющих микроорганизмов разработаны научные основы применения и совершенствования технологий микробной ремедиации нефтезагрязнённых почв. Научно аргументирована и экспериментально доказана перспективность использования, штаммов D. maris АМЗ и Bacillus sp. УН' 2/5 для очистки почв со свежим нефтяным загрязнением, которые не только ускоряют очистку в два раза в течение первого месяца ремедиации' по*сравнению с приёмом стимуляции, но также повышают биологическую активность, почвы и способствуют снижению её токсичности.

Установлено, что' эффективность ремедиации при стимуляции естественного микробного сообщества почвы со свежим нефтяным загрязнением выше, чем при самоочищении, что выражается в увеличении степени, деструкции нефтяных углеводородов и биологической- активности почвы и снижении её токсичности. В случае* многолетнего загрязнения показана одинаковая убыль нефтяных углеводородов при стимуляции аборигенной микрофлоры,й интродукции штамма!), maris АМЗ, который на определённых этапах ремедиации повышает биологическую активность и 1 снижает токсичность почвы.

Выявлены диагностические показатели по ферментативной активности для оценки эффективности апробируемых биоремедиационных приёмов. Разработан метод определения токсичности нефтезагрязнённой почвы после биоремедиации по дегидрогеназной активности бактерий. Предложена новая комбинация добавок, . стимулирующих развитие аборигенных углеводородокисляющих микроорганизмов в образцах загрязнённой почвы, для получения биопрепаратов в виде почвенной суспензии.

Практическая значимость. Выделенные и охарактеризованные ацидотолерантные нефтеокисляющие бактерии Corynebacterium spp., D. maris и Bacillus sp. могут быть использованы для ремедиации нефтезагрязнённых почв с повышенной кислотностью. Бактериальные культуры D. maris АМЗ и Bacillus sp. УН 2/5 могут быть рекомендованы для ускорения и улучшения очистки почвы от свежего нефтяного загрязнения. Высокая жизнеспособность, " ' конкурентоспособность и углеводородокисляющая активность позволяет применять эти штаммы в условиях, когда естественное микробное сообщество почвы малочисленно или не способно полноценно функционировать. Для очистки почв с многолетним загрязнением разработан, способ- стимуляции аборигенной микрофлоры путём внесения минерального удобрения, структуратора, ПАВ и использования агротехнических приёмов. Результаты- по способам, очистки почвы,от нефтяных загрязнений защищены,двумя патентами РФ:

Метод твёрдофазного ■ ИФА может4 быть рекомендован* для практического применения при проведении > биоремедиационных работ в1 качестве способа учёта численности интродуцированных микроорганизмов. Анализ показателей активности почвенных ферментов: дегидрогеназ, каталаз, липаз и уреаз может быть использован для оценки эффективности приёмов биоремедиации. Предложен метод определения токсичности нефтезагрязнённой почвы после биоремедиации по дегидрогеназной активности бактерий.

Разработан способ получения, и использования, биопрепаратов в виде почвенной суспензии, основанный на активизации аборигенных углеводородокисляющих микроорганизмов в образцах загрязнённой почвы.

Результаты применяются при проведении лекционных и практических занятий по курсу «Экологическая токсикология», «Механизмы обезвреживания токсичных соединений», подготовке курсовых и дипломных работ в ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени

H.Г. Чернышевского» и ИБФРМ РАН. Материалы диссертации использованы при подготовке учебно-методических пособий «Руководство к практическим занятиям по экологической токсикологии» (Саратов, изд-во Сарат. ун-та, 2006); «Общая биология: Материалы к гос. аттестации выпускников по спец. 011600 - «Биология»» (Саратов, изд-во Сарат. ун-та, 2006); «Экология. Материалы к государственной аттестации выпускников по специальности -«Экология»» (Саратов, изд-во Сарат. ун-та, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту:

I. В состав микробного сообщества нефтешлама с экстремальной кислотностью (pH 1,15) входят микроорганизмы. Gorynebacterium spp., D. maris и Bacillus sp., осуществляющие деструкцию нефтяных углеводородов в кислой и нейтральной среде. Свойства' ацидотолерантности у бактерий Corynebacterium< spp. и деградации нефтяных углеводородов у D. maris АМЗ, детерминируемые1 плазмидными генами, способствуют устойчивому функционированию микробного сообщества- нефтешлама.

2. Штамм D. maris АМЗ обладает рядом функциональных и экологических преимуществ, связанных со способностью к существованию» в широком диапазоне pH и температуры, наличием биоэмульгирующей и деструктивной'активности по отношению к алкановым и ароматическим углеводородам нефти и присутствием трансмиссивной катаболической плазмиды, характеризующейся высокой стабильностью. Адаптационным механизмом при культивировании D. maris АМЗ на углеводородах является увеличение гидрофобности его клеток.

3. Интродуцированные микроорганизмы D. maris АМЗ и Bacillus sp. УН 2/5 характеризуются высокой жизнеспособностью в нефтезагрязнённых кислых и нейтральных почвах, они ускоряют очистку почв от свежего нефтяного загрязнения, повышая численность гетеротрофных и углеводородокисляющих микроорганизмов в естественном сообществе, интенсифицируя биологическую активность почвы и снижая ее токсичность.

4. Для выявления D. maris АМЗ в почве в процессе биоремедиации и; количественной оценки динамики его численности применимы иммунохимические методы анализа. С помощью метода твердофазного иммуноферментного анализа установлено, что при интродукции штамма D. maris АМЗ в почву, его максимальное развитие происходит через 714 суток (на 1-3 порядка в зависимости от свойств почвы и загрязнителя).

5. Способ стимуляции естественного микробного сообщества в чернозёме южном со свежим, нефтяным: загрязнением имеет существенные преимущества по сравнению с самоочищением. В случае многолетнего загрязнения; показана одинаковая убыль нефтяных углеводородов при стимуляции аборигенной микрофлоры и интродукции, штамма D. maris АМЗ .

6. Показатели активности почвенных ферментов: дегидрогеназ, каталаз, липаз и уреаз отражают направленность процессов- биодеградации нефтяных углеводородов, обусловленных- развитием и активизацией аборигенных и интродуцированных микроорганизмов в почве, и могут, быть использованы для оценки эффективности приёмов биоремедиации. Показатель дегидрогеназной активности бактерий может использоваться для тестирования токсичности очищенной почвы.

7. Активизация аборигенных углеводородокисляющих микроорганизмов в образцах загрязнённой почвы . с помощью стимулирующих добавок обеспечивает получение эффективных биопрепаратов в виде почвенной суспензии для использования в процессе биоремедиации. I

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены в виде стендовых и устных сообщений на Международной конференции

Микробное разнообразие: состояние, стратегия, экология, проблемы»

Пермь, 1996); II International Symposium on Biosorption and Bioremediation

Prague, Czech Republic, 1998);. 9th European Congress on Biotechnology ч / .

Brussels, Belgium, 1999); 7th и 8th International FZK/TNO Conference on Contaminated Soil (Leipzig, Germany, 2000; Gent, Belgium, 2003); II и V съездах Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Санкт-Петербург, 2000; Москва, 2009); 9th International Symposium on Microbial Ecology (Amsterdam, The Netherlands, 2001); конференции «Экобиотехнология: борьба с нефтяным загрязнением окружающей среды» (Пущино, 2001); X International Congress of Bacteriology and Applied Microbiology (Paris, France, 2002); 3rd International Conference OIL POLLUTION: Prevention, Characterization, Clean Technology (Gdansk, Poland, 2002); I-IV межрегиональных конференциях молодых учёных «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с, окружающей средой» (Саратов,, 2002, 2004, 2006, 2008); Всероссийских научно-практических конференциях, посвящённых 115-летию и 117-летию со дня; рождения академика Н.И. Вавилова: (Саратов, 2002, 2004); I-III Международных конгрессах «Биотехнология, — состояние и перспективы развития» (Москва, 2002, 2003, 2005); International Symposium Biochemical Interactions of Microorganisms and Plants with Technogenic Environmental Pollutants (Saratov, Russia, 2003); II Международной научной конференции «Биотехнология -охране окружающей среды» (Москва, 2004); Международной научной конференции «Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды» (Саратов, 2005); II Международной конференции «Микробное разнообразие: состояние, стратегия сохранения, биологический потенциал» (Пермь-Казань, 2005); Всероссийской Молодёжной школе-конференции «Актуальные проблемы современной . микробиологии» (Москва, 2005); Международной научной конференции «Микробные биотехнологии» (Одесса, 2006); Международной научной конференции «Микроорганизмы и биосфера» (Москва,. 2007); EGU General Assembly

Vienna, Austria, 2008); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биоэкологии» (Москва, 2008); IV Всероссийской научно-практической конференции» «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2009); IV Всероссийской научно-практической' конференции с международным участием «Экологические проблемы промышленных городов» (Саратов; 2009); Первых Международных научно-практических Беккеровских чтениях (Волгоград, 2010); XXII зимней молодёжной научной школе «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, 2010); Московской международной научно-практической конференции^ «Биотехнология: экология крупных городов». (Москва, 2010); II Всероссийской научной интернет-конференции «Научное творчество XXI века» с международным участием (2010).

Публикации. По. теме- диссертации опубликовано^ 62 научные работы, из них 10 публикаций в изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК РФ, включая!два патента РФ.

Структура и объём' диссертации: Диссертация, состоит из введения, обзора литературы, описания-материалов и методов исследования, 5 глав с изложением результатов работы и их обсуждением, заключения; выводов, списка цитируемой литературы, включающего 443 источника. Диссертация изложена на 358 страницах машинописного текста,, включая приложение, содержит 85-рисунков и 29 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Экология (по отраслям)», Плешакова, Екатерина Владимировна

выводы

1. Выделенные из микробного сообщества нефтешлама (pH 1,15) 13 штаммов, идентифицированные как Corynebacterium spp., Dietzia maris и Bacillus sp., являются умеренными ацидофилами, утилизирующими нефтяные углеводороды в широком диапазоне pH.

2. Новый штамм D. maris АМЗ обладает рядом функциональных и экологических преимуществ, к которым относятся: рост в широком 1 диапазоне pH (4-9) и температур (10-40°С), в присутствии 10% NaCl, способность к деструкции алкановых и ароматических углеводородов нефти, биоэмульгирующая активность по отношению к нефти, наличие трансмиссивной катаболической плазмиды с высокой стабильностью. После культивирования на углеводородных субстратах увеличивается гидрофобность клеток и нефтеокисляющая активность штамма D. maris АМЗ. Ч

3. Свойство ацидотолерантности у бактерий Corynebacterium spp. и деградации нефтяных углеводородов у штамма D. maris АМЗ, входящих в микробное сообщество нефтешлама, детерминируется плазмидными генами.

4. Микроорганизмы D. maris АМЗ и Bacillus sp. УН 2/5, интродуцированные в нефтезагрязнённые кислые и нейтральные почвы, отличаются высокой жизнеспособностью. Интродукция штаммов в почву со свежим нефтяным загрязнением ускоряет очистку в 2 раза в течение первого месяца ремедиации по сравнению с приёмом стимуляции, интенсифицирует биологическую активность почвы и способствует снижению её токсичности. 1

5. Иммунохимические методы анализа применимы для выявления штамма D. maris АМЗ в почве в процессе биоремедиации и количественной оценки динамики его численности. С помощью твёрдофазного иммуноферментного анализа установлено, что при интродукции штамма

D. maris АМЗ в почву, его максимальное развитие происходит через 7-14 ч t суток (на 1-3 порядка в зависимости от почвы и загрязнителя).

6. При свежем нефтяном загрязнении приём стимуляции естественного микробного сообщества почвы способствует более эффективной убыли нефтяных углеводородов, активизации биологической активности почвы и снижению её токсичности по сравнению с самоочищением, а в случае многолетнего загрязнения этот приём сравним по степени деструкции нефтепродуктов с интродукцией штамма D. maris АМЗ, который на определённых этапах ремедиации повышает биологическую активность и снижает токсичность почвы.

7. Показатели активности почвенных ферментов: дегидрогеназ, катал аз, липаз и уреаз, отражающие направленность процессов биодеградации 1 нефтяных углеводородов в почве, обусловленных развитием и активизацией аборигенных и интродуцированных микроорганизмов, а также показатели токсичности очищенной почвы, определяемые по дегидрогеназной активности тест-микроорганизма, являются индикаторными для мониторинга процессов биоремедиации.

8. Оптимальная комбинация стимулирующих добавок, включающая нефть, минеральные компоненты и % CMC, активизируя аборигенные углеводородокисляющие микроорганизмы в образцах загрязнённой почвы, способствует получению биопрепаратов в виде почвенной суспензии, которые эффективно очищают нефтезагрязнённую почву и воду.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований были выявлены особенности функционирования естественных микробных сообществ нефтезагрязнённых почв и интродуцированных в почву специализированных микроорганизмов при использовании приёмов биоремедиации

При изучении уникального микробного сообщества нефтешлама с рН 1,15 нами были выделены микроорганизмы, которые не только обладали кислотоустойчивостью, но и отличались способностью к деструкции нефтяных углеводородов в условиях повышенной кислотности. Выделенные бактерии были отнесены к родам Corynebacterium, Dietzia и Bacillus.

Известно, что большинство бактерий-деструкторов нефти относятся к родам наиболее типичных обитателей почвы: Pseudomonas, Bacillus,

Arthrobacter, Micrococcus, Achromobacter, Nocardia и Rhodococcus (Ившина и др., 1995; Стабникова и др., 1995; Гирич и др., 2001; Vasudevan, Rajaram,

2001; Hamzah et al., 2010). Как правило, представители этих родов к отличаются высокой жизнеспособностью при действии неблагоприятных факторов, в том числе, могут переносить кислую среду. Это, главным образом, нокардиоформные и коринеподобные бактерии. В связи с этим, в состав изученного нами экстремального микробного сообщества также входили вышеназванные микроорганизмы. Несмотря на известные свойства кислотоустойчивости у отдельных почвенных микроорганизмов, изучению деградации органических загрязнителей, в том числе нефти, бактериями в кислых почвах до последнего времени уделялось недостаточно внимания. Корректировка рН в закисленных объектах достигалась добавлением извести.

На основе выделенных микроорганизмов нами была создана оригинальная коллекция ацидотолерантных нефтеокисляющих штаммов. Бактерии были охарактеризованы как умеренные ацидофилы, способные к утилизации спектра углеводородных субстратов, которая у большинства штаммов происходила более эффективно в кислой среде, чем в нейтральной. Из 13 штаммов, выделенных из микробного сообщества нефтешлама, 12 содержали плазмидные ДНК: у 10 штаммов.Corynebacterium spp. выявлены плазмиды размером около 45-50 т.п.н., у 2 штаммов D. maris — близко расположенные 2 плазмидные ДНК размером около 54 т.п.н. Это указывало, во-первых, на вероятную локализацию на плазмидах генов, способных обеспечивать преимущества данных микробных штаммов при существовании в экстремальных условиях (например, использование более широкого круга субстратов, возможность расти в кислой среде), а во-вторых, на возможный горизонтальный перенос плазмид в микробном сообществе нефтешлама.

На основании высокой (12,5%) частоты индуцированной элиминации свойства ацидотолерантности и корреляции между исчезновением этого свойства и утратой плазмидной молекулы из штаммов Corynebacterium spp. нами высказано предположение о контроле функции ацидотолерантности у данных бактерий плазмидными генами. Таким образом, устойчивость бактерий сообщества нефтешлама к низким значениям рН, связанная, вероятно, с резистентностью их белоксинтезирующей системы, контролируется, как впервые показано; плазмидными генами.

При изучении наиболее перспективных штаммов было установлено, что D: maris АМЗ способен к деструкции как алкановых, так и ароматических углеводородов нефти, что является редким сочетанием ферментативных систем в одном микроорганизме-деструкторе. Как показали эксперименты, штамм D. maris АМЗ был способен деградировать гексадекан на 53% и толуол на 80,6% за 7 сут. культивирования в жидкой среде. Также данный штамм обладал биоэмульгирующей активностью по отношению к нефти (экзогенная Е24=49,3% и Е48=37,3%), что свидетельствовало о возможных преимуществах штамма в процессах утилизации нефтепродуктов, т.к. биоэмульгирующая активность микроорганизма в сочетании с биодеградирующей способностью может обеспечить большую биодоступность углеводородов в различных условиях.

К особым свойствам у D. maris АМЗ добавляется также возможность осуществления деструкции нефтяных углеводородов в условиях повышенной кислотности. Так, по данным газовой'хроматографии деструкция гептадекана (25 г/л) в жидкой среде за 7 сут. культивирования составила 53,6% при pH 7,0 и 51,5% при pH 4,6. В то время как по данным других исследователей (Жуков и др., 2007) процессы разложения дизельного топлива и роста бактерий для штаммов Rhodococcus erythropolis и R. rubber практически останавливались при достижении в среде культивирования значений pH 4,75 и 5,65 соответственно.

Кроме широкого диапазона pH, D. maris АМЗ хорошо рос в диапазоне температуры: 10-40°С как на полноценной питательной среде, так на агаризованной минеральной среде" с нефтью в качестве единственного источника углерода и энергии, и в присутствии 10% NaCl.

Были получены доказательства участия плазмидных генов

D. maris АМЗ в процессе биодеградации нефтяных углеводородов. Это высокая (14%) частота индуцированной элиминации свойства деградации нефти, корреляция между утратой экстрахромосомных элементов в элиминантных клонах и снижением их способности к деструкции сырой нефти (в 2-5 раз), толуола (в 3-7 раз) и декалина (в 2-3 раза) по сравнению с исходным штаммом. В ходе экспериментов установлена высокая стабильность плазмидных ДНК штамма D. maris АМЗ, а также показана их конъюгативность. Показано, что признак деструкции толуола передавался при конъюгативном переносе плазмидных молекул D. maris АМЗ в реципиентные бесплазмидные штаммы Rhodococcus sp. 261 и R. terrae А73 и при передаче плазмидных ДНК с помощью трансформации в бесплазмидные клетки D. maris АМЗ. Результаты этих экспериментов указывали на детерминацию признака деструкции толуола плазмидными генами

D. maris АМЗ. Обнаруженная у штамма D. maris АМЗ трансмиссивная плазмида биодеградации углеводородов позволяет рассматривать данный it штамм как источник распространения генетических элементов, ответственных за процессы разрушения ксенобиотиков, что может способствовать повышению метаболического потенциала микробного сообщества нефтешлама.

Генетическая и функциональная стабильность D. maris АМЗ была подтверждена; при исследовании характеристик его реизолятов после культивирования штамма на углеводородных субстратах в жидкой минеральной среде, а также почве и грунте. У реизолятов показана высокая стабильность плазмидных молекул и эмульгирующей активности по отношению к нефти. Было обнаружено увеличение гидрофобности клеток, коррелирующее с повышением деструктивной активности в отношении нефтяных углеводородов, а также повышение неспецифической антибиотикорезистентности D. maris АМЗ. Эти изменения связаны, скорее всего, с модификациями-в гидрофобном липидном слое клеточной оболочки штамма при культивировании его на углеводородах и благоприятны, для штамма; являющегося-активным нефтеокисляющим микроорганизмом:

Вышеперечисленные физиологйческие, биохимические и генетические особенности делают штамм D. maris АМЗ чрезвычайно ¡ перспективным для его практического использования в биоремедиации нефтезагрязнённых природных объектов. В целом, вся коллекция ацидотолерантных нефтеокисляющих штаммов, выделенных из микробного сообщества нефтешлама, представляет несомненный интерес для очистки нефтезагрязнённых объектов окружающей среды, характеризующихся повышенной кислотностью. Полученные новые сведения о генетической регуляции свойств деградации нефтяных углеводородов и ацидотолерантности у данных микроорганизмов могут применяться для улучшения основных параметров: биотехнологического процесса микробной очистки, в том числе, путём направленных генетических модификаций.

В связи с вышесказанным, в дальнейших экспериментах (4 лабораторных и 1 микрополевой) исследовали возможность использования D: maris АМЗ для ремедиации нефтезагрязнённой почвы и грунта. В исследованиях было показано, что нефтеокисляющий штамм D. maris АМЗ обладал высокой конкурентной'. .способностью по отношению к микроорганизмам естественных почвенных сообществ.

Эффективность очистки напрямую связана с поведением штамма-интродуцента в природной среде, поэтому в ходе настоящих исследований были апробированы иммунохимические методы для мониторинга D. maris АМЗ в очищаемой почве. Продемонстрировано, что иммунохимический тест на основе полученных поликлональных кроличьих антител, специфичных к углеводным антигенам клеточной поверхности данного штамма, позволяет быстро и однозначно идентифицировать интродуцированный в почву D. ' maris АМЗ. Было показано, что поверхностный антиген, на который получены антитела, экстрагируется бактериями в окружающую среду, что позволило разработать высокочувствительный метод мониторинга данного штамма на основе иммуноферментного анализа.

Данные, полученные с помощью двух методов исследования численности D. maris АМЗ (ИФА и микробиологический анализ), существенным образом коррелировали независимо от типа почв, особенностей углеводородного загрязнения и условий ремедиации. При этом обнаружено, что' максимальная численность штамма регистрировалась с помощью микробиологического анализа через 7 сут., а с помощью ИФА -через 14 сут., что, на наш взгляд, связано с периодом накопления специфического антигена в почве. Результаты этих экспериментов позволяют рекомендовать метод ИФА для практического использования при проведении биоремедиационных работ для мониторинга интродуцированных микроорганизмов, что существенно улучшит прогнозируемость хода и эффективности очистки.

В целом, динамика развития D. maris АМЗ в чернозёме южном, тёмно-серой лесной почве со свежим нефтяным загрязнением и смешанном грунте с многолетним загрязнением нефтепродуктами имела сходные тенденции. I

Максимальное развитие штамма происходило через 7-14 сут., затем наблюдалось снижение его численности до исходного уровня внесения. Тот факт, что во всех проведённых экспериментах титр D. maris АМЗ до конца обработки сохранялся на достаточно высоком уровне (около 107 кл/г почвы), свидетельствовал о жизнеспособности данного интродуцента в различных загрязнённых почвах. На развитие 'штамма влияли, как было показано, свойства почвы, скорее всего, содержание доступных органических и минеральных элементов, так, в чернозёме южном численность D. maris АМЗ максимально увеличилась в 373 раза через 14 сут. после внесения, в других почвах увеличение численности происходило лишь на порядок, наименьшее развитие D. maris АМЗ наблюдалось в смешанном грунте с многолетним загрязнением нефтепродуктами.

Численность D. maris АМЗ влияла, в свою очередь, на количество ОГМ и УОМ, особенно в период максимального развития интродуцента (первый месяц ремедиации). Этот период отличался также максимальным развитием аборигенной и интродуцированной микрофлоры в почве, активностью почвенных дегидрогеназ и максимальной скоростью деструкции нефтяных углеводородов.

Увеличение численности ОГМ и УОМ в нефтезагрязнённой почве при использовании биотехнологий, как было показано, зависит от стимулирующих добавок, свойств почвы, типа и срока действия загрязнителя. В чернозёме южном при стимуляции и аугментации содержание ОГМ и УОМ увеличивалось более отчётливо, чем в других ч почвах.

В процессе биоремедиации увеличивалась интенсивность почвенной респирации, являющейся интегральным показателем общей биологической активности почвы, активность дегидрогеназ в почве и грунте, принимающих непосредственное участие в разложении углеводородов, особенно в период максимального развития микроорганизмов почвенного сообщества и высокой интенсивности процессов биодеградации нефтяных углеводородов.

Активность почвенных каталаз также увеличивалась при очистке почвы и грунта от нефтяных ингредиентов, что связано, как мы полагаем, с активизацией аэробных процессов в ходе ремедиации. Увеличение липазной активности в почве и грунте происходило на последних этапах ремедиации. Это связано, по нашему мнению, с индукцией активности почвенных липаз продуктами распада нефтяных углеводородов и увеличением метаболической активности и биомассы микроорганизмов, утилизирующих липиды. Активность уреаз в почве повышалась с ходом очистки, что может свидетельствовать о более высокой интенсивности гидролитических процессов в очищаемой почве и, следовательно, о биодеградационных процессах.

Таким образом, динамика исследованных показателей биологической активности нефтезагрязнённой почвы и грунта отражала характер процессов очистки, выявляла преимущества различных технологий ремедиации, что даёт возможность использовать эти показатели для мониторинга процессов очистки почв от углеводородных загрязнителей.

В настоящих исследованиях была не только доказана применимость ферментативных показателей для оценки биоремедиационных процессов, но разработан и апробирован новый' метод определения токсичности ' нефтезагрязнённой почвы по дегидрогеназной активности тест-микроорганизма D. maris АМЗ, который отличался высокой чувствительностью, простотой исполнения и возможностью анализировать в почве токсичные продукты биоразложения углеводородов. Проведённое биотестирование с помощью разработанного метода показало наличие сходных тенденций с результатами фитотестирования: средняя степень токсичности почвы через 30 сут. ремедиации, распределение степени токсичности почвы в ряду способов очистки: аугментация<стимуляция<самоочищение. Различия обнаруживались на < последнем этапе ремедиации: почва была нетоксичной для растений, но ещё токсичной для микробных ферментов, что свидетельствует о необходимости использования нескольких оптимальных биотестов для достоверной оценки токсичности почвы после биоремедиации.

В ходе экспериментов обнаружено, что при самоочищении почвы от свежего нефтяного загрязнения не происходило существенного увеличения содержания ОГМ и УОМ, активности дегидрогеназ и каталаз, численность денитрификаторов и нитрификаторов, активность липаз и уреаз в почве была меньше, чем при использовании приёма стимуляции. Токсичность этой почвы, напротив, была выше, чем при стимуляции. В связи с этим, убыль нефтяных углеводородов при самоочищении почвы на всём протяжении эксперимента была ниже на 13-15%, чем при стимуляции естественного микробного сообщества. Таким образом, на основании эффективности очистки почвы от свежего нефтяного загрязнения показано преимущество приёма стимуляции аборигенной микрофлоры перед самоочищением.

Внесение штамма D. maris А'МЗ в почву со свежим нефтяным загрязнением способствовало убыли общих нефтяных углеводородов на 39% в почве за 30 сут. и на 66% за 60 сут., в смешанный грунт с многолетним загрязнением нефтепродуктами - на 48% за 90 сут. Такая степень разложения углеводородов, согласно известным литературным данным, наблюдается у ряда микроорганизмов, входящих в состав биопрепаратов (Логинов и др., 2004; Мурыгина, Калюжный, 2005). В то же время, было установлено, что по сравнению с приёмом стимуляции аборигенного микробного сообщества, интродукция D. maris АМЗ ускоряла процесс очистки чернозёма южного от свежего нефтяного загрязнения в 2 раза в течение первого месяца ремедиации. Это преимущество D. maris АМЗ при необходимости может использоваться специалистами-биотехнологами для ускорения ремедиации в климатических зонах с коротким тёплым сезоном.

Убыль нефтепродуктов при использовании технологий ремедиации происходила в основном за счёт разложения парафино-нафтеновых углеводородов, хорошо разрушались моно- и бициклические ароматические соединения. При внесении D. maris АМЗ в почву со свежим нефтяным загрязнением эффективнее разрушалась фракция ПАУ (41 против 18% при стимуляции) и спирто-бензольных смол (41. против 23% при стимуляции). Кроме того, D. maris АМЗ на всём протяжении ремедиации улучшал по сравнению со стимуляцией такие показатели биологической активности свежезагрязнённой почвы как: численность ОГМ, УОМ, почвенное дыхание, активность дегидрогеназ, липаз и уреаз и более эффективно способствовал снижению токсичности почвы.

Ускорение и улучшение качества очистки загрязнённой почвы под влиянием штамма D. maris АМЗ позволяет рекомендовать его для ремедиации почв от свежего нефтяного загрязнения.

В смешанном грунте с многолетним загрязнением нефтепродуктами внесение D. maris АМЗ не ускоряло очистку, при использовании приёмов стимуляции и аугментации наблюдалась одинаковая, степень разложения нефтяных углеводородов. Мы полагаем, что в условиях свежего загрязнения нефтью аборигенной микрофлоре необходимо время для адаптации к загрязнителю, поэтому внесение активного штамма-деструктора ускоряло процесс очистки в первый месяц. Многолетнее загрязнение, выступающее в роли селективного фактора для УОМ,' создало повышенный деструктивный потенциал микробных сообществ, который реализовался при использовании

Vf оптимального.комплекса стимулирующих мероприятий. f

В то же время, положительное влияние штамма-интродуцента проявлялось на биологической активности грунта, на определённых этапах ; ремедиации такие показатели как: численность ОГМ и УОМ, почвенное дыхание, активность каталаз и липаз были выше в варианте с аугментацией, чем со стимуляцией. Также существенным было снижение фитотоксичности очищенного грунта под влиянием D. maris АМЗ, что связано, вероятно, с t ингибирующим действием данного штамма на фитопатогенные ' микромицеты.

Таким образом, полученные результаты показали, что в случае многолетнего загрязнения использование приёмов стимуляции аборигенной микрофлоры и интродукции нефтеокисляющего штамма D. maris АМЗ способствует одинаковой скорости и степени разложения нефтяных углеводородов. И при выборе способа очистки приём стимуляции может быть рекомендован как экономически более выгодный. Однако, как показали исследования, штамм-интродуцент D. maris АМЗ влияет на качество очистки, что отражается на повышении биологической активности и снижении токсичности почвы, что, в свою очередь, является немаловажным для восстановления плодородия почв. Поэтому не исключается применение штамма D. maris АМЗ для очистки почвы или грунта от многолетнего нефтяного загрязнения.

К несомненным преимуществам D. maris АМЗ при использовании его в практике биоремедиационных работ следует также отнести высокую жизнеспособность, данного микроорганизма в различных почвах и способность к деструкции нефтяных углеводородов при повышенной кислотности среды, что позволяет применять 'D. maris АМЗ в условиях, когда естественные микробные сообщества малочисленны или не способны полноценно функционировать.

Из коллекции ацидотолерантных нефтеокисляющих микроорганизмов был выбран ещё один перспективный штамм Bacillus sp. УН2/5, жизнеспособность и деструктивная активность которого исследована в почве. Данный микроорганизм, как было установлено, отличался высокой 4 жизнеспособностью в нейтральной и кислой почве в условиях нефтяного загрязнения. Его развитие в нефтезагрязнённом чернозёме южном без дополнительных стимулирующих мероприятий происходило примерно на порядок, что сравнимо с ростом D. maris АМЗ в чернозёме южном, используемом вторично после экспериментов с растениями, и смешанном грунте с многолетним нефтяным загрязнением при дополнительном внесении различных добавок. Интродукция Bacillus sp. УН2/5 способствовала более высокой численности ОГМ и УОМ, чем стимуляция естественного микробного сообщества и степени деградации нефти (49,5% за 15 сут.), которая в 2 раза превышала степень деградации при стимуляции. Эти данные также совпадали с результатами, полученными при изучении эффективности очистки почвы со свежим нефтяным загрязнением с помощью штамма D. maris АМЗ.

Таким образом, оба исследованных штамма хорошо развивались в нефтезагрязнённой почве в зависимости от свойств почвы и сопутствующих агротехнических приёмов и эффективно разлагали нефтяные углеводороды в кислой и нейтральной почве.

В ходе проведенных исследований была отработана ещё одна из технологий биоремедиации, основанная' на обогащении образцов загрязнённой почвы в лабораторных условиях аборигенными УОМ и индукции их ферментативных систем, катализирующих деградацию углеводородов нефти. Было установлено, что для стимуляции развития почвенных УОМ при культивировании их в виде почвенной суспензии оптимальным является следующий комплекс добавок, г/л: нефть (5,0), минеральные компоненты (10,0) и CMC (0,2). Количество УОМ возрастало на пять порядков (до величин кратных 109 клеток) по сравнению с исходным содержанием. Повторное внесение питательных субстратов, особенно L-бульона и мелассы по отдельности и' в различных комбинациях, стимулировало увеличение в среде УОМ в среднем на два порядка. Эффективность использования биопрепарата на основе почвенной суспензии, подготовленного вышеописанными стимулирующими добавками, подтверждена в экспериментах по очистке загрязнённой почвы и воды. Степень очистки с помощью биопрепарата была выше по сравнению с контролем в 4-8 раз в почве и в 18-24 раза в воде в зависимости от концентрации в них нефти (5 и 50 г/л(кг)). Такой способ может иметь большие перспективы для практического использования, он экологически безопасен, достаточно экономичен и легко осуществим для очистки загрязнённых объектов даже большого масштаба.

Таким образом, проведённые исследования, основанные на комплексной оценке изменений, происходящих в почве и её микробных сообществах в условиях нефтяного загрязнения при использовании технологий биоремедиации, продемонстрировали пути повышения эффективности различных приёмов микробной очистки нефтезагрязнённых почв. Одним из них является внесение исследованных уникальных нефтеокисляющих микроорганизмов D. maris АМЗ и Bacillus sp. УН2/5, способных ускорять очистку и улучшать её качество. Использование специализированных углеводородокисляющих бактерий для ликвидации нефтяного загрязнения в кислых почвах отличается научной новизной. Установленная в ходе исследований целесообразность применения штаммов

D. maris АМЗ и Bacillus sp. УН2/5. для очистки почв, различающихся по своим свойствам и по срокам нефтяного загрязнения, значительно расширила современные представления о возможностях нефтеокисляющих t микроорганизмов.

Полученные новые данные о биологических и эколого-функциональных свойствах микробного сообщества нефтешлама с низким значением pH, в том числе, обнаруженная плазмидная детерминация свойств ацидотолерантности и деструкции нефтяных углеводородов у микроорганизмов сообщества, способствуют пониманию устойчивого функционирования естественных микробных сообществ в экстремальных условиях и создают предпосылки для использования природных процессов в технологиях очистки.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Плешакова, Екатерина Владимировна, 2010 год

1. Агроэкология. Методология, технология, экономика / Под ред. В.А. Черникова, А.И. Чекереса. Ш: КолосС, 2004. - 400 с.

2. Азнаурьян Д.К. Изменение эколого-биологических свойств почв Юга России при загрязнении нефтью: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Ростов н/Д, 2009. 22 с.

3. Алексеева Т.П., Бурмистрова Т.И., Терещенко H.H. и др. Перспективы использования торфа для очистки нефтезагрязненных почв // Биотехнология. 2000. - № 1. - С. 58-64.

4. Андреева И.С., Емельянова Е.К., Загребельный С.Н. и др. Психротолерантные штаммы-нефтедеструкторы для биоремедиации почв и водной среды // Биотехнология. 2006. - № 1. - С. 43-52.

5. Андреюк Е.И., Иутинская Г.П., Дульгеров П.Н. Почвенные микроорганизмы и интенсивное землепользование. — Киев: Наукова думка, 1988.- 192 с.

6. Андронов Е.Е., Петрова С.Н., Чижевская Е.П. и др. Влияние внесения генетически модифицированного штамма Sinorhizobium meliloti АСН-5, на структуру почвенного сообщества микроорганизмов // Микробиология. -2009. Т. 78, № 4. - С. 525-534.

7. Анохина Т.О., Кочетков В.В., Зеленкова Н.Ф. и др. Биодеградация фенантрена ризосферными плазмидосодержащими бактериями рода Pseudomonas в модельных растительно-микробных ассоциациях // Прикл. биохим. и микробиол. 2004. - Т. 40, № 6. - С. 654-658:

8. Арзамасцев А.П. Основы экологии и охрана природы. М.: Медицина. -416 с.

9. Аристархова В.И. Нокардиоподобные микроорганизмы. М.: Наука, 1989.-248 с.

10. A.c. №1629319 СССР, МКИ С12 Ql/06, С12 N 1/20. Способ определения численности углеводородокисляющих бактерий / В.П. Чекалов. — Опубл. Бюл. № 7. 1991. - С. 63.

11. Ахметов Л.И., Иванова Е.С., Пунтус И.Ф. и др. Горизонтальный переносtплазмиды биодеградации нафталина в процессе микробной1 деструкции дизельного топлива и нефти в открытом проточном биореакторе // Биотехнология. 2006. - № 4. - С. 19-Ш

12. Безбородов A.M. Биотехнология продуктов микробного синтеза. -М.: Агропромиздат, 1991. С. 6-31.

13. Белоусова Н.И., Барышникова Л.М., Шкидченко А.Н. Отбор микроорганизмов, способных к деструкции нефти и нефтепродуктов при пониженных температурах // Прикл. биохим. и микробиол. 2002. -Т. 38, № 5.-С. 513-517.

14. Беляков В.Д., Ряпис Л.А., Илюхин В.И. Псевдомонады и псевдомонозы. М.: Медицина, 1990. - 224 с.

15. Бердичевская М.В. Особенности' физиологии родококков разрабатываемых нефтяных залежей // Микробиология. — 1989. -Т. 58, № 1. С. 60-65.

16. Биодиагностика экологического состояния почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами / С.И. Колесников, К.Ш. Казеев, В.Ф. Вальков и др. — Ростов н/Д: Изд-во Ростиздат, 2007. 192 с.

17. Биологическая диагностика и индикация почв: Кр. курс лекций / Под ред. И.Н. Безкоровайной. Красноярск: Краснояр. гос. аграр. ун-т., 2001. -40 с.

18. Болдырев В.А., Пискунов В.В. Полевые исследования морфологических признаков почв: Учеб. пособие. — Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2006. — 60 с.

19. Бондаренко А.Н. Оценка нефтяного загрязнения почв аридных территорий (на примере Астраханской области): Автореф. дис. канд. географ, наук. Астрахань, 2008. - 23 с.

20. Борзенков И.А., Милехина Е.И., Готоева М.Т. и др. Свойства углеводородокисляющих бактерий, изолированных из нефтяных месторождений Татарстана, 'Западной Сибири и Вьетнама // Микробиология. 2006. - Т. 75, № 1. - С. 82-89.

21. Браун Д., Флойд А., Сейнзбери М.' Спектроскопия органических веществ. М.: Мир, 1992. - 300 с.

22. Бреус И.П., Мищенко A.A., Неклюдов С.А. и др. Сорбция углеводородов черноземом выщелоченным // Почвоведение. 2003. - №3. - С. 317-327.

23. Буланова A.B., Грецкова И.В., Муратова О.В. Исследование сорбционных свойств сорбентов, применяемых для очистки почв от нефтяных загрязнений // Вестник СамГУ. Естественнонаучная серия. — 2005.-№3(37).-С. 150-158.

24. Бурмистрова Т.И., Алексеева Т.П., Перфильева В.Д. и др. Биодеградация нефти и нефтепродуктов в почве с использованием мелиорантов на основе активированного торфа // Химия растительного сырья. — 2003. — №3. — С. 69-72.

25. Бельков B.B. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы // Биотехнология. 1995. - №3-4. - С. 20-27.

26. Ветрова A.A., Овчинникова A.A.; Пунтус И.Ф. и др. Интенсификация биодеградации нефти плазмидосодержащими штаммами Pseudomonas в модельных почвенных системах // Биотехнология.—2009. — №4. — С.82-90.

27. Возняковская Ю.М., Курдюков Ю.Ф., Попова Ж.П., Лощинина Л.П. Оценка биологического состояния южного чернозема под разными севооборотами // Почвоведение. — 1996. — № 9. — С. 1107-1111.

28. Войно Л.И. Биодеградация нефтезагрязнений почв и акваторий // Фундаментальные исследования. — 2006. № 5. - С. 48.

29. Волченко Н.Н Влияние условий культивирования на поверхностно-активные свойства углеводородокисляющих актинобактерий: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Ставрополь, 2006. 20 с.

30. Вопросы метаболизма почвенных микроорганизмов / Под ред. И.Л. Клевенской. Новосибирск: Наука, 1981. - 191 с.

31. Восстановление нефтезагрязненных почвенных экосистем: Сб. науч. тр. / Под ред. М.А. Глазовской. М.: Наука, 1988. - 254 с.

32. Временные методические рекомендации по контролю загрязнения почв: В 2 ч. Ч. 2. / Под ред. С.Г. Малахова. М.: Московское отделение гидрометеоиздата, 1984. - 61 с.

33. Габбасова И.М., Абдрахманов Р.Ф., Хабиров И.К. Хазиев Ф.Х. Изменение свойств почв и состава грунтовых вод при загрязнении нефтью и нефтепромысловыми сточными водами в Башкирии //Почвоведение. — 1997.-№ 11.-С. 1362-1372.

34. Габбасова И.М., Хазиев Ф.Х., Сулейманов P.P. Оценка состояния почв с давними сроками загрязнения сырой нефтью после биологической рекультивации // Почвоведение. 2002. - № 10. - С. 1259-1273.

35. Габбасова И.М. Деградация и рекультивация почв Башкортостана. -Уфа: Гилем, 2004. 284 с.

36. Галиев P.A. Фиторемедиация нефтешлама: Автореф. дис. канд. биол. наук. Казань, 2007. - 19 с.

37. Галимов P.A., Харлампиди Х.Э., Гайфуллин A.A. Окисление алканов до синтетических жирных кислот: Учеб. пособие. — Казань: КГТУ, 2007. — 143 с.

38. Галиулин Р.В., Башкин В.Н., Галиулина P.A., Лебедева А.Т. Оценка загрязнения почв бенз(а)пиреном и их биологической активности// Агрохимия. 1993. - № 12. - С. 62-65.

39. Галстян А.Ш. Ферментативная активность почв Армении. Ереван: Айастан, 1974.-276 с.

40. Гафарова Е.В., Зарипова С.К. Влияние цеолитсодержащей породы и эспарцета на биологические параметры выщелоченного чернозема, загрязненного смесью углеводородов // Вестник СамГУ — Естественнонаучная серия. 2005. - № 6(40). - С. 146-157.

41. Голодяев Г.П., Костенков Н.М., Ознобихин В.И. Биоремедиация нефтезагрязненных почв методом компостирования // Почвоведение. -2009.-№8.-С. 996-1006.

42. Голубев С.Н. Криптические миниплазмиды азоспирилл: разработка эффективных методов выделения и характеристика репликонов: Дис.л.канд. биол. наук. Саратов, 2002. - 209 с.

43. ГОСТ 26483-85. Почвы. Приготовление солевой вытяжки и определение ее pH по методу ЦИНАО.

44. Государственный контроль качества воды. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ИПК Издательство стандартов, 2003. - 776 с.

45. Градова Н.Б., Диканская Э.М., Михалева В.В. Использование углеводородов дрожжами: Обзор.'— М.: ОНТИТЭИ микробиологической промышленности, 1971. — 120 с.

46. Градова Н.Б., Горнова И.Б., Эддауди Р., Салина Р.Н. Использование бактерий Azotobacter при биоремедиации нефтезагрязненных почв // Прикл. биохим. и микробиол. 2003. - Т. 39, № 3. - С. 318-321.

47. Грищенков В.Г., Гаязов P.P. Бактериальные штаммы-деструкторы топочного мазута: характер деградации в лабораторных условиях // Прикл. биохим. и микробиол. — 1997. Т. 33, № 4. - С. 423-427.

48. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий: Учеб. пособие. Л.:ч,

49. Изд-во Ленинградского университета, 1989. — 248 с.

50. Гузев B.C., Левенцев C.B., Селецкий Г.И. Роль почвенной микробиоты в рекультивации' нефтезагрязненных почв // Микроорганизмы и охрана почв / Под ред. Д.Г. Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1989. - С. 129-151.

51. Гузев B.C., Левин C.B. Перспективы эколого-микробиологической экспертизы состояния почв при антропогенном воздействии // Почвоведение. 1991. - № 9. - С. 50-62.

52. Гузев B.C., Халимов Э.М., Волде М.И., Куличевская И.С. Регуляторное действие глюкозы на активность углеводородокисляющих микроорганизмов в почве // Микробиология. 1997. — Т. 66, № 2. - С. 154159.

53. Джамбетова П.М., Реутова Н.В., Ситников М.Н. Влияние нефтезагрязнений на морфологические и цитогенетические характеристики растений // Экологическая генетика. 2005 - Т. Ill, № 4. — С. 5-10.

54. Донец A.A. Физико-химические аспекты десорбции нефти из пор песчаника и известняка: Автореф. дис. канд.хим.наук.- Тверь,2007. — 19с.

55. Донец Е.В. Влияние нефти на прорастание семян основных лесообразующих видов древесных растений подзоны южной тайги Омской области: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Омск:, 2008. — 22 с.

56. Драчук C.B. Фотогетеротрофные пурпурные бактерии в почвах, загрязнённых углеводородами: Автореф. дис. канд. биол. наук. -Тюмень, 2004. 17 с.

57. Другов Ю.С., Родин A.A. Экологические анализы при разливах нефти и нефтепродуктов, практическое руководство. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2007. - 270 с.

58. Дуган И.Н., Головлев Е.Л. Индукция диоксигеназ ароматических субстратов у родококков при лимите питательных веществ // Микробиология. 1983. - Т. 52, № 6. - С. 951-955.

59. Евдокимова Г.А., Мозгова Н.П., Корнейкова М.В. и др. Воздействие загрязнения почв дизельным топливом на растения и ризосферную микробиоту на Кольском Севере // Агрохимия. 2007. - № 12. - С. 49-55.

60. Егеревская Л.В., Яранцева Л.Д. О влиянии на растения загрязнений почвы при бурении и разведке на нефть и газ // Растения и промышленная среда. Киев: Наукова думка, 1976. — С. 73-75.

61. Егорова Д.О., Плотникова Е.Г. Грамположительные бактерии -деструкторы хлорированных бифенилов, перспективные для использования при биоремедиации загрязненных почв // Биотехнология. — 2009.-№3.-С. 72-79.

62. Ермоленко З.М., Холоденко В.П., Чугунов В.А. и др. Биологическая характеристика штамма микобактерий, выделенного из нефти Ухтинского месторождения // Микробиология. 1997. - Т. 66, № 5. - С. 650-654.

63. Ермоленко З.М., Чугунов В.А., Герасимов В.Н. и др. Влияние некоторых>факторов окружающей среды на выживаемость внесенных бактерий, разрушающих нефтяные углеводороды // Биотехнология. 1997. - № 5. -С. 33-38.

64. Жариков Г.А., Соколов М.С., Дядищев Н.Р. Эколого-токсикологическая оценка мероприятий по ремедиации почв //Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды: Матер. Междунар. конф. Саратов, 2005. - С. 128-130.

65. Жданова Н.В., Киреева H.A.; Матыцина О.И. Некоторые пути интенсификации биодеструкции нефти в почве // Нефтепромысловое дело. 1994. -№ 5. -С. 31-32.

66. Жуков Д.В., Мурыгина В.П., Калюжный C.B. Кинетические закономерности биодеградации алифатических углеводородов бактериями Rhodococcus rubber и Rhodococcus erythropolis II Прикл. биохим. и микробиол. 2007. - Т. 43, № 6. - С. 657-663.

67. Зеленкова Н.Ф., Аринбасаров М.У. Анализ продуктов микробиологической деградации толуола методом обращено-фазной жидкостной хроматографии // Прикл. биохим. и микробиол. — 2003. —1. Т. 39, №2.-С. 199-201.

68. Звягинцев Д.Г., Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: МГУ,2005.-448 с.

69. Иванова Е.С., Есикова Т.З., Гафаров А.Б., Шкидченко А.Н. Мониторинг интродуцированных микроорганизмов-нефтедеструкторов в открытых системах // Биотехнология. 2006. - № 3. - С. 74-78.

70. Иванченко О.Б., Ильинская О.Н., Карамова Н.С., Костюкевич И.И. Мутагенный потенциал как комплексный показатель загрязненности почванефтепродуктами // Почвоведение. — 1996. — № 11. — С. 1394-1398.

71. Ившина И.Б., Бердичевская М.В., Зверева JI.B. и др. Фенотипическая характеристика алканотрофных родококков из различных экосистем // Микробиология. 1995. - Т. 64, № 4. - С. 507-513.

72. Ившина И.Б., Пешкур Т.А., Коробов В.П. Эффективное извлечение цезия клетками бактерий рода Rhodococcus II Микробиология. — 2002. — Т. 71, №3.-С. 418-423.

73. Игнатова A.A., Ветрова A.A., Лисов A.B. и др. Динамика численности ивзаимодействия псевдомонад, стимулирующих рост растений иразрушающих нафталин в ризосфере горчицы белой // Биотехнология. 2006.-№6.-С. 35-43.

74. Измалкова Т.Ю., Сазонова О.И., Соколов C.JT. и др. Разнообразие генетических систем биодеградации нафталина у штаммов Pseudomonas ßuorescens II Микробиология. 2005. - Т. 74, № 1. - С. 70-78.

75. Иларионов С.А., Иларионова С.Ю., Назаров A.B., Калачникова И.Г. Восстановление почвенного бйоценоза, подвергнутого нефтяному загрязнению // Письма в Международный научный журнал «Альтернативная энергетика и экология». — 2005. № 1. - С. 56-59.

76. Ильина А., Кастилю Санчес М.И., Винареаль Санчес Х.А. и др. Получение препарата на основе бактерий, выделенных из почвы, для биоремедиации нефтяных загрязнений // Вестн. Моск. ун-та. Сер. 2. Химия. 2003. - Т. 44, № 1. - С. 88-91.

77. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т. Нго и Г. Ленхоффа. — М.: Мир, 1988.-446 с.

78. Исмаилов Н.М. Нефтяное загрязнение и биологическая активность почв

79. Добыча полезных ископаемых и геохимия природных экосистем. — М.:i1. Наука, 1982.-С. 227-235.

80. Исмаилов Н.М. Влияние нефтяного загрязнения на круговорот азота в почве // Микробиология. 1983. - Т. 52, № 6. - С. 227-235.

81. Исмаилов Н.М. Ремедиация нефтезагрязненных почво-грунтов и буровых шламов. Баку: Элм, 2006. - 142 с.

82. Калюжин В.А, Лушников С.В., Завгороднев К.Н. Очистка воды и почвыот нефти и нефтепродуктов с помощью культуры микробов-деструкторов>http://www.priborservice.ru/ecology031 .html.

83. Карасевич Ю.Н. Основы селекции микроорганизмов, утилизирующих синтетические органические соединения. — М.: Наука, 1982. — 144 с.

84. Каталог штаммов региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов / Под ред. И.Б. Ившиной. М.: Наука, 1994.-163 с.

85. Квасников Е.И., Айзенман Б.Е., Соломко Э.Ф. и др. Рост и образование антибиотиков бактериями рода Pseudomonas на среде с низкомолекулярными н-алканами // Микробиология. — 1975. Т. 44, № 1. -С. 55-60.

86. Квасников В.И., Клюшникова Т.М. Трансформация углеводородов нефти в биосфере // Структура и функции микробных сообществ почв с различной антропогенной нагрузкой. — Киев: Наукова думка, 1982. — С. 5-8.

87. Квеситадзе Г.И., Хатисашвили 'Г.А., Садунишвили Т.А., Евстигнеева З.Г. Метаболизм антропогенных токсикантов в высших растениях. -М.: Наука, 2005. 199 с.

88. Киреева H.A. Микробиологические процессы в нефтезагрязненных почвах. Уфа: БашГУ, 1994. - 172 с.

89. Киреева H.A. Биодеструкция нефти в почве культурами углеводородокисляющих микроорганизмов // Биотехнология. — 1996. — №1.-С. 51-54.

90. Киреева H.A. Биохимическая индикация почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Защита от коррозии и охрана окружающей среды. -1998.-№3.-С. 11-14.

91. Киреева H.A., Водопьянов В.В., Мифтахова A.M. Биологическая активность нефтезагрязненных почв. Уфа: Гилем, 2001. — 376 с.

92. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Ямалетдинова Г.Ф. Активность оксиредуктаз в нефтезагрязненных и рекультивируемых почвах // Агрохимия. 2001. - № 4. - С. 53-59.и

93. Киреева H.A., Мифтахова A.M., Кузяхметов Г. Влияние загрязнения нефтью на фитотоксичность серой лесной почвы // Агрохимия. — 2001. — №5. С. 64-69.

94. Киреева H.A., Новоселова Е.И., Онегова Т.С. Активность каталазы и дегидрогеназы в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами // Агрохимия. 2002. - № 8. - С. 64-72.

95. Киреева H.A., Тарасенко Е.М., Онегова Т.С., Бакаева М.Д. Комплексная биоремедиация нефтезагрязненных почв для снижения токсичности // Биотехнология. 2004. - № 6. - С. 63-70.

96. Киреева H.A., Бакаева М.Д., Водопьянов В.В. Комплексы почвенных микромицетов в условиях техногенеза. — Уфа: Гилем, 2005. — 360 с.

97. Киреева H.A., Мифтахова A.M., Салахова Г.М. Рост и развитие растений яровой пшеницы на нефтезагрязненных почвах и при биоремедиации // Агрохимия. 2006. - № 1. - С. 85-90.

98. Киреева H.A., Тарасенко Е.М., Шамаева A.A., Новоселова Е.И. Влияниеч tнефти и нефтепродуктов на активность липазы серой лесной почвы //Почвоведение. 2006. - № 8.-С. 1005-1011.

99. Классификация и диагностика почв СССР. М.: Колос, 1977. - 220 с.

100. Клонирование ДНК. Методы: Пер. с англ. / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1988 -538 с.

101. Колесников С.И., Казеев К.Ш., Велигонова Н.В. и др. Изменение комплекса почвенных микроорганизмов при загрязнении чернозема обыкновенного нефтью и нефтепродуктами // Агрохимия. — 2007. — № 12. -С. 44-48.

102. Колодяжный A.B., Ковальчук Т.Н., Коровин Ю.В. Антонович В.П. Определение микроэлементного состава нефтей и нефтепродуктов. Состояние и проблемы (Обзор) // Методы и объекты химического анализа.- 2006. Т. 1, № 2. - С. 90-104. '•Ч t

103. Коломынцева М.П., Соляникова И.П., Головлев Е.Л., Головлева Л.А. Гетерогенность Rhodococcus opacus 1СР как ответ на стрессовое воздействие хлорфенолов // Прикл. микробиол. и биохим. 2005. — Т. 41, №5.-С. 541-546.

104. Коробкин В.И. Экология: учебник для вузов. Ростов/Д: Феникс, 2008.- 602 с.

105. Коронелли Т.В. Поступление углеводородов в клетки микроорганизмов // Успехи микробиологии. 1980. - Вып. 15. - С. 99-111.

106. Коронелли Т.В. Микробиологическая деградация углеводородов и еёч tэкологические последствия // Науч. докл. Высш. шк. Биол. Науки. — 1982. -№3. -С. 5-13.

107. Коронелли Т.В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов. М.: Изд-во МГУ, 1984. - 160 с.

108. Коронели Т.В., Комарова Т.И., Игнатченко A.B. Взаимодействие бактерий в культуре, содержащей Pseudomonas и Micobacterium в связи с окислением углеводородов // Микробиология. — 1984. — Т. 53,№2.—С. 213-217.

109. Коронелли Т.В., Нестерова Е.Д. Экологическая стратегия бактерий, использующих гидрофобный субстрат // Микробиология. 1990. — Т. 59, вып. 6. - С. 993-997.

110. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Батраков С.Г. Образование миколатов трегалозы родококками в зависимости от возраста клеток и источника углерода // Микробиология. 1990. - Т. 59, Вып. 5. - С. 777-781.

111. Коронелли Т.В., Ильинский В.В., Семененко М.Н. Нефтяное загрязнение и стабильность морских экосистем // Экология (Владивосток). 1993. - № 4. - С. 78-91.

112. Коронелли Т.В., Дермичева С.Г., Ильинский В.В. и др. Видовая структура углеводородокисляющих бактёриоценозов водных экосистем разных климатических зон // Микробиология. — 1994. — Т. 63, № 5. — С. 917-922.

113. Коронелли Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде //Прикл. биохим. и микробиол. 1996. - Т. 32, № 6. - С. 579-586.

114. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Ильинский В.В. и др. Интродукциял tбактерий рода Rhodococcus в тундровую почву, загрязненную нефтью

115. Прикл. биохим. и микробиол. 1997. - Т. 33, № 2. - С. 198-201.- 1

116. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Поршнева О.В., Дермичева С.Г. Изменение липидного состава клеток R- и S-вариантов Rhodococcus erythropolis при длительном хранении на лабораторной среде // Микробиология. 1998. - Т. 67, №5. - С. 718-720.

117. Критерии отнесения отходов к классам опасности для окружающей природной среды. Приказ МПР РФ № 511 от 15.06.2001. 13 с.

118. Кувшинская JI.B. Изменение свойств дерновоподзолистых почв при загрязнении нефтью // Вестник Пермского госуд. ун-та. Биология. — 2001.- Вып. 4. С. 63-70.

119. Кузнецов А.Е., Градова Н.Б. Научные основы экобиотехнологии. — М.: Мир, 2006. 504 с.

120. Кузякина Т.И., Хайнасова Т.С., Левенец О.О. Биотехнология извлечения металлов из сульфидных руд // Вестник КРАУНЦ. Серия: Науки о Земле.- 2008. Т. 2, № 12. - С. 76-86.

121. Куличевская И.С., Гузев B.C., Паников Н.С. Популяционная динамика углеводородокисляющих дрожжей, интродуцированных в нефтезагрязненную почву // Микробиология. 1995. - Т. 64, № 5. — С. 668-673.

122. Куценко С.А. Основы токсикологии: Разделы: токсикометрия, токсикокинетика, токсикодинамика, экотоксикология и др.: Учеб. пособие для мед. вузов Санкт-Петербурга, 2004. 720 с.

123. Куюкина М.С., Ившина И.Б., Рычкова М.И., Чумаков О.Б. Влияние состава клеточных липидов на формирование неспецифической антибиотикорезистентности алканотрофных родококков // Микробиология. 2000. - Т. 69, № 1. - С. 62-69.

124. Ларионова H.A., Семенова E.H., Бреус В.А. и др. Экстракция и анализ углеводородов, содержащихся в загрязненных почвах // Технология нефти и газа. 2005. - № 4. - С. 39-49.

125. Ленёва H.A., Коломынцева М.П., Баскунов Б.П., Головлёва Л.А. Деградация фенантрена и антрацена бактериями рода Rhodococcus II Прикл. биохим. и микробиол. 2009. - Т. 45, № 2. - С. 188-194.

126. Логинов О.Н., Нуртдинова Л.А., Бойко Т.Ф. и др. Оценка эффективности нового биопрепарата Ленойл для ремедиации нефтезагрязненных почв // Биотехнология. — 2004. № 1. - С. 77-82.

127. Лозановская И.Н., Орлов Д.С, Садовникова Л.К. Экология и охрана биосферы при химическом загрязнении. -М: Высшая школа, 1998. 120 с.

128. Лысак Л.В., Сидоренко H.H. О видовом разнообразии родококков в городских почвах // Микробиология. — 1997. Т. 66, № 4. - С. 574-575.

129. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. М.: Мир, 1984. - 480 с.

130. Маркарова М.Ю. Использование углеводородокисляющих бактерий для восстановления нефтезагрязненных земель в условиях Крайнего Севера: Автореф. дис. канд. биол. наук. Пермь, 1999. - 26 с.

131. Марченко С.А., Кожевин П.А. Функциональная реакция микробного сообщества почвы как индикатор загрязнения стойкими органическими загрязнителями // Arpo XXI. 2008. - № 7-9. - С. 31-33.

132. Маячкина Н.В., Чугунова М.В. Особенности биотестирования почв с целью их экотоксикологической оценки // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. 2009. - № 1. - С. 84-93.

133. Методические рекомендации по выявлению деградированных и загрязненных земель. М.: Изд-во РЭФИА, 1995. - 50 с.

134. Методические указания МУК 4.2. 1890-04. Определениеiчувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004.—74 с.

135. Методические указания по санитарно-микробиологическому исследованию почвы. Утв. Минздравом СССР 19.02.1981 № 2293-81.

136. Методы анализа органического вещества пород, нефти и газа / Под ред. A.B. Рылькова. Тюмень: Западно-Сибирский НИГНИ, 1977. - 122 с.

137. Методы контроля качёства почвы. Учебно-методическое пособие для вузов / Под ред. Д.Л. Котова и др. — 2007. Воронеж. - 106 с.

138. Методы молекулярной генетики и генной инженерии / A.B. Мазин, К.Д. Кузнеделов, A.C. Краев. Новосибирск: Наука, 1990. - 248 с.

139. Методы общей бактериологии. В 3-х Т. / Под ред. Ф. Герхардта. — .у>: Мир, 1984.

140. Микробиологическая рекультивация нефтезагрязненных почв / H.A. Киреева, В.В. Водопьянов, Е.И. Новоселова и др. — М.: ОАО «ВНИИОЭНГ», 2001. 40 с.

141. Микроорганизмы и охрана почв / Под ред. Д.Г. Звягинцева. M.: IVETY, 1989.-206 с.

142. Милехина Е.И., Борзенков И.А., Звягинцева И.С. и др. Эколого-физиологические особенности аэробных эубактерий из нефтяных месторождений Татарстана // Микробиология. — 1998. Т. 67, № 2. — С. 208-214.

143. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике. — М.: Мир, 1976. -440 с.

144. Мирошниченко H.H. Принципы регламентации углеводородного загрязнения почв Украины // Почвоведение. — 2008. № 5. - С. 614-622.

145. Мишустин E.H., Перцовская М.И., Горбов В.А. Санитарная микробиология почвы. М.: Наука, 1979. - 304 с.

146. Мурыгина В.П., Калюжный C.B. Применение биопрепарата-нефтедеструктора «Родер» в северных регионах России // Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды: Матер. Междунар. конф. — Саратов: Изд-во Науч. книга, 2005. — С. 82-83.

147. Назаров A.B., Иларионов С.А. Изучение причин фитотоксичностинефтезагрязненных почв // Письма в Международный научный журнал1

148. Альтернативная энергетика и экология». 2005. - № 1. - С. 60-65.

149. Назарько М.Д., Романова К.Н. Трансферные технологии в биоремедиации нефтезагрязненных почв // Вестник ОГУ. Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала».- 2009. Ч. III. - С. 469-470.

150. Назина Т.Н., Шестакова Н.М., Еригорьян A.A. и др. Филогенетическое разнообразие и активность анаэробных микроорганизмов высокотемпературных горизонтов нефтяного месторождения Даган (КНР) // Микробиология. 2006. - Т. 75, № 1. - С. 70-81.

151. Нестеренко O.A., Квасников Е.И., Ногина Т.М. Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии. — Киев: Наукова думка, 1985. — 336 с.

152. Нефтяные и синтетические нафтеновые кислоты, их свойства и производные / Зейналов Б.К, Сидорчук И.И., Кошелева JI.M., Бродская Е.С.; Баку, ИНХП АНАзССР, 1980. 118 с. - Деп. в ВИНИТИ, № 605-80.

153. Нечаева И.А., Филонов А.Е., Ахметов Л.И. и др. Стимуляция микробной деструкции нефти в почве путем внесения бактериальной ассоциации и минерального удобрения в лабораторных и полевых условиях // Биотехнология. 2009. - № 1. - С. 64-70.

154. Никитина Е.В., Якушева О.И., Гарусов A.B., Наумова Р.П. Биоремедиация отходов нефтехимического производства с использованием компостирования // Биотехнология. 2006. - № 1. - С. 5361.

155. Николаев А.Я. Биологическая химия. 3-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицинское информационное агентство, 2004. 566 с.

156. Новоселова Е.И. Экологические аспекты трансформации ферментного пула почвы при нефтяном загрязнении и рекультивации: Автореф. дис. докт. биол. наук. Воронеж, 2008. - 41 с.

157. Новоселова Е.И., Тухватуллина А.Ф. Роль ферментативной активности в осуществлении почвой трофической функции в условиях нефтяного загрязнения // Вестник ОГУ. 2009. - №6(100). - С. 592-593.

158. Определитель бактерий Берджи: В 2 т. / Дж. Хоулт., Н. Криг, П. Снит и др. М.: Мир, 1997. - 1232 с.

159. Орлов Д.С., Садовникова Л.К., Суханова Н.И. Химия почв. — М.: Высшая школа, 2005. 560 с.

160. Осипов В.М., Белова Т.Д. Спектрофотометрический метод определения содержания нефтепродуктов в сточной воде // Химия и технология топлив и масел. 1968. — №1. — С. 58-59.

161. Основные микробиологические и биохимические методы исследования» почвы. Методические рекомендацйи / Под ред. Ю.М. Возняковской. -Ленинград, 1987. 16 с.

162. ОСТ 38.01378-85 Охрана природы. Гидросфера. Определение содержания нефтепродуктов в сточных водах методом ИК-спектроскопии. -М.: Изд-во стандартов, 1991. 6 с.

163. Остроумов С.А. Некоторые аспекты оценки биологической активности ксенобиотиков // Вестн. Моск. ун-та. Сер. 16, Биология. 1990. — № 2. -С. 27-34.

164. Очистка окружающей среды от углеводородных загрязнений / В.Ж. Арене, А.З. Саушин, О.М. Гридин, А.О. Гридин. — М.: Интербук, 1999.-370 с.

165. Патент на изобретение РФ № 2129604, МПК: C12N1/20 C02F3/34 В09С1/10 C12N1/20 C12R1:06 C12R1:38 / Закрытое акционерное общество «Экогеос-1».

166. Патент на изобретение РФ №2174496, МПК: 7 C02F3/34, В09С1/10, C12N1/26, C12N1/26 / Мурыгина В.П.

167. Патент на изобретение РФ № 2115727, МПК: C12N 1/26, C02F 3/34, В09С1/10, C12N1/26, C12R1:00, C12R1:06 / Капотина Л.Н., Морщакова Г.Н., Дедовец С.А.

168. Патент на изобретение РФ № 2193533, МПК: C02F3/34 C12R1:32 В09С1/10 C12N1/20 C12N1/20 C12Rl:0r C12N1/20 / Государственный научный центр прикладной микробиологии.

169. Патент на изобретение РФ № 2191643, МПК: В09С1/10 C12N1/20 C12N1/20 C12R1:01 / Закрытое акционерное общество "Полиинформ".

170. Петрикевич С.Б., Кобзев E.H., Шкидченко А.Н. Оценка углеводородокисляющей активности микроорганизмов // Прикл. биохим. и микробиол. 2003. - Т. 39, № 1. - С. 25-30.

171. Петухов В.Н., Фомченков В.М., Чугунов В.А., Холоденко В.П. Биотестирование почвы и воды, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, с помощью растений // Прикл. биохим. и микробиол. — 2000. Т. 36, № 6. - С. 652-655.

172. Пиковский Ю.И. Природные и техногенные потоки углеводородов в окружающей среде. М.: Изд-во МГУ, 1993. - 208 с.

173. Пиковский Ю.И., Геннадиев А.Г., Чернянский С.С., Сахаров Г.Н.

174. Проблема диагностики и нормирования загрязнения почв нефтью инефтепродуктами // Почвоведение. — 2003. — № 9. С. 1132-1140.

175. Плешакова Е.В., Муратова А.Ю., Турковская О.В. Деградациякминерального масла штаммом Acinetobacter calcoaceticus II Прикл. биохим. и микробиол. 2001. - Т. 37, № 4. - С. 398-405.

176. Плешакова Е.В., Дубровская Е.В., Турковская О.В. Приемы стимуляции аборигенной нефтеокисляющей микрофлоры // Биотехнология. — 2005. — №1.-С. 42-50.

177. Пономарева JI.B., Крунчак В.Г., Торгованова В.А. и др. Биоремедиация нефтезагрязненной почвы с использованием биопрепарата "БИОСЭТ" и пероксида кальция // Биотехнология. — 1998. № 1. - С. 79-84.

178. Почва. Город. Экология. / Под ред. Г.В. Добровольского. М.: Фонд «За экономическую.грамотность», 1997. — 320 с.

179. Почвы мегаполисов, их экологическая оценка, использование и создание (на примере г. Москвы) / В.И. Савич, Ю.В. Федорин, Е.Г. Химина и др. М.: Агробизнесцентр, 2007. - 660 с.

180. Практикум по агрохимии / Под ред. Б.А. Ягодина. — М.: Агропромиздат, 1987.-512 с.

181. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, JI.M. Захарчук и др. — М.: Академия, 2005. 608 с.

182. Практикум по микробиологии 7' Под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд-во МГУ, 1976.-307 с.

183. Пырченкова И.А., Гафаров А.Б., Пунтус И.Ф. и др. Выбор и характеристика активных психротрофных микроорганизмов-деструкторов нефти // Прикл. биохим. и микробиол. 2006. — Т. 42, № 3. - С. 298-305.

184. Рахимова Э.Р., Осипова A.JL, Зарипова С.К. Очистка почвы от нефтяного загрязнения с использованием денитрифицирующих углеводородокислюящих микроорганизмов // Прикл. биохим. и микробиол. 2004. - Т. 40, № 6. - С. 649-653.

185. РД 52.18.647-2003. Методические указания определение массовой доли нефтепродуктов в почвах. Методика выполнения измерений гравиметрическим методом / Разр. «Тайфун». Утв. Росгидрометом 18.03.2003. Введен. 01.06.2003. 16 с.

186. Рогозина Е.А., Шиманский В.К. Некоторые теоретические аспекты восстановления нефтзагрязненных почвенных экосистем //Нефтегазовая геология. Теория и практика. 2007. - № 2. - 16 с.

187. Рубан E.JI. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. -M.: Наука, 1986.-200 с.

188. Ручай Н.С., Конев C.B. Биохимия и микробиология. М.: Экология, 1992.-237 с.

189. Рэуце Н., Кырста С. Борьба с загрязнением почвы. М.: Агропромиздат, 1986.-241 с.

190. Сахарова З.В., Ибрагимова С.И. Влияние низкого значения pH на химический состав хемостатной культуры Bacillus megaterium II Микробиология. 1975. - T. 44, № 1. - С. 91-96.

191. Сваровская Л.И., Алтунина Л.К. Активность почвенной микрофлоры в условиях нефтяных загрязнений // Биотехнология. 2004.- №3. - С. 63-69.1. Ч I

192. Седых В.Н., Игнатьев JI.A. Влияние отходов бурения и нефти на физиологическое состояние растений // Сибирский экологический журнал. 2002. - № 1.-С. 47-53.

193. Селивановская С.Ю., Латыпова В.З. Создание тест-системы для оценки токсичности многокомпонентных образований, размещаемых в природной среде // Экология. 2004. - № 1. - С. 21-24.

194. Селифанов С.А., Слепенький A.B., Аданин В.М. и др. Катаболизм аценафтена штаммами Alcaligenes eutrophus и Alkaligenes paradoxus //Микробиология. 1993. - Т. 62, № 1. - С. 120-128.

195. Семенов A.M., Куличевская И.С., Халимов Э.М. и др. Лабораторные тесты для оптимизации интродукции в почву микроорганизмов-деструкторов нефти // Прикл. биохим. и микробиол. — 1998. — Т. 34, № 5. — С. 576-582.

196. Серебрякова Е.В., Дармов И.В., Медведев Н.П. и др. Оценка гидрофобных свойств бактериальных клеток по адсорбции на поверхности капель хлороформа // Микробиология. 2002. - Т. 71, № 2. - С. 237-239.

197. Сидоров Д.Г., Борзенков И.А1, Ибатуллин P.P. и др. Полевой эксперимент по очистке почвы от нефтяного загрязнения с использованием углеводородокисляющих микроорганизмов // Прикл. биохим. и микробиол. 1997. - Т. 33, № 5. - С. 497-502.

198. Сморкалов И.А. Роль фотогетеротрофных пурпурных бактерий в самоочищении почв от углеводородов: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Уфа, 2009. 25 с.

199. Соловьев В.И., Пушкина В.А., Кожанова Г.А., Гудзенко Т.В.

200. Медицинские аспекты и санитарно-гигиеническая оценка бактериальных 'к.

201. Справочник биохимика / Под ред. Р. Досон, Д. Элиот. М.: Мир, 1991. -543 с.

202. Стабникова Е.В., Селезнева М.В., Рева О.Н., Иванов В.Н. Выбор активного микроорганизма-деструктора углеводородов для очистки нефтезагрязненных почв // Прикл; биохим. и микробиол. 1995. — Т. 31, №5.-С. 534-539.

203. Стом Д.И., Потапов Д.С., Балаян А.Я., Матвеева О.Н. Трансформация нефти в почве микробиологическим препаратом и дождевыми червями // Почвоведение. 2003. - № 3. - С. 359-361.

204. Сулейманов P.P., Ситдиков Р.Н. Рекультивация нефтезагрязнённых почв и грунтов с использованием моющего средства промышленного назначения // Нефтяное хозяйство. 2003. - № 12. - С. 115-117.

205. Сулейманов P.P., Габбасова И.М., Ситдиков Р.Н. Изменение свойств1. V»нефтезагрязнённой серой лесной' почвы в процессе биологической рекультивации // Известия РАН. Серия биологическая. 2005. - JSfo i. С. 109-115.

206. Сулейманов P.P., Абдрахманов Т.А., Жаббаров З.А., Турсунов JI.T. Ферментативная активность и агрохимические свойства лугово-аллювиальной почвы в условиях нефтяного загрязнения // Самарская Лука. 2007. - Т. 16, № 3(21). - С. 575-580.

207. Тен Хак Мун, Кириенко O.A., Имранова Е.Л. Влияние фотосинтезирующих бактерий и компоста на деградацию нефтепродуктов в почве // Прикл. биохим. и микробиол. 2004. - Т. 40, № 2. - С. 214-219.

208. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. — М.: Колос, 1993. 175 с.

209. Терехова В.А., Арчегова И.Б., Хабибуллина Ф.М. и др. Экотоксикологическая оценка биосорбента нефти с целью сертификации // Экология и промышленность России. 2006. — № 3. - С. 34-37.

210. Терещенко H.H., Лушников C.B., Пышьева Е.В. Рекультивация нефтезагрязненных почв // Экология и промышленность. 2002. — № ю. -С. 17-20.

211. Тлехас З.Р. Изменение биологических свойств почв республики Адыгея при химическом загрязнении: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Ростов-на-Дону, 2008. 26 с.

212. Токсикологическая химия: учеб:,для вузов / Под ред. Т.В. Плетеневой. — 2-е изд., исп. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. 512 с.

213. Уткин И.Б., Якимов М.М., Козляк Е.И., Рогожин И.С. Деструкция токсичных органических соединений микроорганизмами // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Сер. Биологическая химия. — 1991. С. 1-100.

214. Учебно-методическое пособие по генетике бактерий / Саратов: СГУ. -1979.- 17 с.

215. Фатеев А.И., Мирошниченко H.H., Панасенко Е.В., Христенко С.И. Изменение агрохимических и микробиологических свойств нефтезагрязненного чернозема в рекультивационный период // Агрохимия. 2004. - № 10. - С. 53-60.

216. Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ с изменениями от 30.12.2001 г., 10.01.2003 г., 30.06.2003 г., 22.0.2004 г., 09.05.2005 г. С.-Пб.: Изд-во Деан, 2005.

217. Финкельштейн З.И., Баскунов Б.П., Головлев E.JI. и др. Зависимость превращения хлорфенолов родококками от положения и числа атомов хлора в 1 ароматическом кольце // Микробиология. 2000. - Т 69, № 1. — С. 49-57.

218. Фитотоксичность антропогенно'загрязненных почв / H.A. Киреева, Г.Г. Кузяхметов, A.M. Мифтахова, В.В. Водопьянов Уфа: Гилем, 2003. — 266 с.

219. Фомченков В.М., Ирхина И.А., Новиков И.А. и др. Исследование интегральной токсичности водной среды, загрязненной нефтью и нефтепродуктами, с использованием бактериальных тестов // Прикл. биохим. и микробиол. — 2000. Т. 36, № 6. — С. 656-660.

220. Фримантл М. Химия в действии: В 2 ч. — Москва: Мир, 1998. 620 с.

221. Хабибуллина Ф.М., Шубаков A.A., Арчегова И.Б., Романов Г.Г. Исследование способности нефтёокисляющих бактерий утилизировать углеводороды нефти // Биотехнология. — 2002. — № 6. — С. 57-62.

222. Халимов Э.М., Левин C.B., Гузев B.C. Экологические и микробиологические аспекты повреждающего действия нефти нач свойства почвы // Вест. Моск. ун-та. Сер. 17. Почвоведение. 1996. - № 2. - С. 5964.

223. Хазиев Ф.Х. Методы почвенной энзимологии. М.: Наука, 2005. -252 с.

224. Химия нефти и газа: Учеб. пособие для вузов / А.И. Богомолов, A.A. Гайле, В.В. Громова; Под ред. В.А. Проскурякова, А.Е. Драбкина. -Л.: Химия, 1989.-424 с.

225. Хоменков В.Г., Шевелёв А.Б., Жуков В.Г. и др. Организация метаболических путей и молекулярно-генетические механизмы биодеградации ксенобиотиков у микроорганизмов (обзор) // Прикл. биохим. и микробиол. 2008. - Т. 44, № 2. - С. 133-152.

226. Хомякова Д.В., Ботвинко И.В., Нетрусов А.И. Выделение психроактивных углеводородокисляющих,бактерий из нефтезагрязненных почв // Прикл. биохим. и микробиол. — 2003. — Т. 39, № 6. — С. 661-664.

227. Хроматографический анализ окружающей среды: Пер. с англ. / Под ред. В.Г. Березкина. М.: Химия, 1979. - 608 с.

228. Шамаева A.A. Исследование процессов биоремедиации почв и объектов, загрязненных нефтяными углеводородами: Автореф. дис. канд. биол. наук. — Уфа, 2007. 23 с.

229. Широких И.Г. Микробные сообщества кислых почв Северо-Востока Европейской части России: Дис. д-ра биол. наук. Москва, 2004. — 394 с.

230. Шорина Т.С. Влияние нефтяного загрязнения на биологическую активность черноземов Оренбургской области // Вестник ОГУ. — 2009. — №6(100).-С. 651-653.

231. Экологическая химия. Основы и концепции. Пер. с нем. / Ф. Корте, М. Бахадир, В. Клайн и др. М.: Мир, 1997 - 204 с.

232. Экология микроорганизмов / Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Наука, 2004.- 165 с.

233. Янкевич М.И. Формирование ремедиационных биоценозов для снижения антропогенной нагрузки на водные и почвенные экосистемы: Автореф. дис. д-ра биол. наук. М., 2002. - 50 с.

234. Ягафарова Г.Г., Скворцова И.Н. Новый нефтеокисляющий штамм бактерий Rhodococcus erythropolis II Прикл. биохим. и микробиол. — 1996. Т. 32, № 2. - С. 224-227.7 I

235. Ягафарова Г.Г. Экологическая биотехнология. Уфа: Изд-во УГНТУ, 2001.-213 с.

236. Яранцева М.М., Фахрутдинов • А.И. Антагонистические взаимоотношения культур прокариотных и эукариотных микроорганизмов // Экология. 2007. - С.243-244.

237. Яскович Г.А., Елькин Г.Э. Характеристика гидрофобности поверхности клеток микроорганизмов // Микробиология. -1995.- Т. 64,№ 1. С. 137-139.

238. Яскович Г.А., Яковлева Е.П. Изучение гидрофобности поверхности штаммов клеток бактерий // Микробиология. —1996.- Т. 65, №4. С. 569-571.

239. Adam G., Duncan H J. Effect of diesel fuel on growth of selected plant species // Environ. Geochem. and Health. 1999. - Vol. 21. - P. 353-357.

240. Aldrett S., Bonner J.S., McDonald T.J. et al. Degradation of crude oil enhanced by commercial microbial cultures // Proc. of Intern, oil spill conference. American Petroleum Institute, 1997. - P. 995-996.

241. Alexander M. Biodégradation and bioremediation. San Diego, California, USA: Academic Press, Inc., 1999. - 302 p. '

242. Allard A-S., Neilson A.H. Bioremediation of organic waste sites: A critical review of microbiological aspects // Intern. Biodeteriorat. and Biodégradation. -1997. Vol. 39, N 4. - P. 253-285.

243. Arthurs P., Stiver W.H., Zytner R.G. Passive volatilisation of gasoline from soil;// J. Soil Contaminai. 1995. - Vol. 4. - P. 123-135.

244. AssadiM.M., Mathur R.P. Applicability of an HPLS system in the analysis of biodegraded crude oil components// J. Liquid chromatogr: — 1991. Vol. 14, N 19.-P. 3623-3629.

245. Barkay T., Nazaret S., Jeffrey W". Degradative genes in the environment //Microbials transformation and degradation5 of toxic organic chemicals / Eds. L.Y. Young, C.E. Cerniglia. Wiley-Liss., 1995. - P. 545-577.

246. Becker B., Lechevalier M .P., Gordon- R.E., Lechevalier H.A. Rapiddifferentiation betweQn Nocarciia and Streptomyces by paper chromatography*of whole-cell hydrolysates // Appl. Microbiol. —1964. Vol. 12. - P. 421-423;

247. Belkin S.M., Stieber A., Tiehm F.H. et al. Toxicity and genotoxicity enhancement during polycyclic aromatic hydrocarbons biodégradation //Environ; Toxicol; and Water Quality. 1994.- Vol. 9. -P. 303-309;

248. Benitez E., Melgar R, Nogales R. Estimating soil resilience to a toxic organic waste by measuring enzyme activities // Soil Biol, and Biochem. — 2004. — Vol. 36.-P. 1615-1623.

249. Bento F.M., Camargo F., Okeke B., Frankenberger-Junior W. Bioremediation of soil contaminated by diesel oil // Brazil. J. Microbiol. 2003. — Vol. 34. — P. 17-20.

250. Bento F., Camargo F., Okeke B., Frankenberger W. Comparative bioremediation of soils contaminated with diesel oil by natural attenuation, biostimulation and bioaugmentation // Bioresourse Technol. — 2005. — Vol. 96, N 9. -P.1049-1055.

251. Bergey's manual, systematic bacteriology. — Baltimore, London: Williams, Wilkins, 1984-1986. 1599 p.

252. Bernick F.C, Stafford D.A. Waste oil disposal by microbial technology // Process Biochem. 1985. - Vol. 20, N 6. - P. 175-180.

253. Beyer L., Wachendorf C., Eisner D., Knabe R. Suitability of dehydrogenase activity as an index of soil-biological activity // Biol. Fert. Soils. — 1993. — Vol. 16. —N 1. — P. 52-56.

254. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alcaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA // Nucl. Acids Res. -1979. Vol. 7. - P. 11513-1523.

255. Blankenship D.W., Larson R.A. Plant growth inhibition,by the water extract of a crude oil // Water, Air and Soil Pollut. -1978. Vol. 10; N4. - P.47M73.

256. Bollag J.M., Mertz T., Otjen I. Role of microorganisms in soil bioremediation // Bioremediation through rhizosphere technology. 1994. - P. 2-10.

257. Bosecher K., Teschner M., Wehner H. Biodégradation of crude oils // Schiftenr, Ver. Wasser, Boden und Lufthyg. 1998. - № 80. - P. 91-117.

258. Broadway N.M., Dickinson F.M., Ratledge C. The enzymology of dicarboxylic acid formation by Corynebacterium sp. strain 7E1C grown on n-alkanes //J. Gen. Microbiol. 1993. - Vol. 139. - P. 1337-1344.

259. Broughton L.C., Gross K.L. Patterns of diversity in a plant and soil microbial communities along a productivity gradient in a Michigan old-field // Oecologia. -2000.-Vol. 125.-P. 420-427.

260. Bundy J.G., Paton G.I., Campbell C.D. Microbial communities in different soil types do not converge after diesel contamination // J. Appl. Microbiol. -2002. Vol. 92. - P. 276-288.1. A t

261. Caldwell B.A. Enzyme activities as a component of soil biodiversity:

262. A review // Pedobiologia. 2005. - Vol. 49, N 6. - P. 637-644.i

263. Cameron D.R., Cooper D.G., Neufeld R.J. The mannoprotein Saccharomyces cerevisiae is an effective bioemulsifier // Appl. Environ. Microbiol. 1988. — N6.-P. 1420-1425.

264. Carberry J.B., Wik J. Comparison of ex situ and in situ bioremediation of unsaturated soils contaminated by petroleum // J. Environ. Sci. Health. Part A Tox. Hazard Subst. Environ. Eng. -2001. Vol. 36; N 8. - P. 1491-1503.

265. Garcia C., Hernandez T., Costa F:.Potential use of dehydrogenase activity as an index of microbial activity in degraded soils // Commun. Soil Sci. Plant Anal. 1997. - Vol". 28. - P. 123-134.

266. Casellas M., Grifoll M., Sabate J., Solanas A.M. Isolation and characterization of a 9-fluorenoned-degrading bacterial strain and its role in synergistic degradation of fluorine by a consortium // Can. J. Microbiol. — 1998.- Vol. 44. P. 734-742.

267. Cerna M. Vliv organickych Latek a pomeru C:N na dehydrogenazovon activitu v pude // Rostl. Vyr. 1973. - Vol. 19, N 9. - P. 923- 930.

268. Cerniglia C.E., Yang S.K. Stereoselective metabolism of anthracene and phenanthrene by Cunnningbatella elegans II Appl. Environ. Microbiol. — Vol. 47, N 1.- P. 119-124.

269. Chakrabarty A.M. Genetic engineering applied aspects // Ind. J. Microbiol.- 1980.-Vol. 20, N 1. — P. 103-108.

270. Christofi N., Ivshina I.B. Microbial surfactants and their use in field studies of soil remediation // J. Appl. Microbiol. 2002. - Vol. 93. - P. 915-929.

271. Churchill S.A., Harper J.P., Churchill P.F. Isolation and characterization of a Mycobacterium species capable of degrading three- and four-ring aromatic and aliphatic hydrocarbons // Appl. Environ. Microbiol.- 1999.- Vol.65. P.549-552.

272. Cooper D.G., Zajic J.E., Gracey D.E.F. Analysis of corynomycolic acids and other fatty acids produced by Corynebacterium lepus grown on kerosene // J. Bacteriol. 1979. - Vol. 137. - P. 795-801.

273. Cooper D.G., Goldenberg B.G. Surface active agents from two Bacillus species // Appl. Environ. Microbiol. 1987. - Vol. 53, N 2. - P. 224-229.

274. Cunningham C.J., Philp J.C. Comparison of bioaugmentation and biostimulation in ex situ treatment of diesel contaminated soil // Contamination & Reclamation. 2000. - Vol. 8, N 4. - P. 261-269.

275. Dehorter B., Blondeau R. Extracellular enzyme activities during humic acid degradation by the whiterot fungi Phanerochaete chrysosporium and Trametes versicolor // FEMS Microbiol. Lett. 1992. - Vol. 94. - P. 209-216.

276. Del Arco J.P., Franca F.P. Influence of oil contamination levels on hydrocarbon biodégradation in sandy sediment // Environ. Pollut. — 2001. — Vol. 110.-P. 515-519.

277. Demque D.E., Biggar K.W., Kèroux J.A. Land treatment of diesel contaminated soil // Can. Geotech. J. 1997. - Vol. 34. - P. 421-431.

278. Déni J., Penninckx M.J. Nitrification and autotrophic bacteria in a hydrocarbon-polluted soil // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - Vol. 65. — P. 4008-4013.

279. Dibble J.T., Bartha R. The effect of environmental parameters on thebiodégradation of oil sludge // Appl. Environ. Microbiol. 1979. - Vol. 37. —i1. P. 729-739.

280. Directive 2004/54/EC on the protection of workers from risks related totexposure to biological agents at work // Official J. European Communities. — 2000.-Vol. 262.-P. 21-33.

281. Dobler R., Saner M., Bachofen R. Population changes of soil microbial communities induced by hydrocarbon and metal contamination // Biorem. J. — 2000.-Vol. 4.-P. 41-56.

282. Dorn P.B., Salanitro J.P. Temporal ecological assessment of oil contaminated soils before and after bioremediation // Chemosphere. 2000. - Vol. 40. — P. 419-426.

283. Dott W., Feidieker D., Kampfer P. Comparison of autochthonous bacteria and commercially available cultures with respect to their effectiveness in fuel oil degradation // J. Ind. Microbiol. 1989. - Vol. 4, N 5. - P. 365-374.

284. Douglas L.A., Bremner J.M. A rapid method of evaluting different compounds as inhibitors of urease activity in soils // Soil Biol. Biochem. — 1971. Vol. 3, N 4. -P. 309-315.

285. Eurosoil 2008: soil society - environment / Eds. W.H. Blum, M.H. Gerzabek, M. Vodrazka. - Vienna: BOKU, 2008. - 400 p.

286. Falatko D.M., Novak J.T. Effect of biologically produced surfactants on the mobility and biodégradation of petroleum hydrocarbons // Water Environ. Res. 1992. - Vol. 64. - P. 163-169.

287. Fleck L.C., Bicca F.C., Ayub M.A.Z. Physiological aspects of hydrocarbon emulsification, metal resistance and DNA profile of biodegrading bacteria isolated from oil polluted sites // Biotechnol. Lett. 2000. - Vol. 22, N 4. -P. 1573-6776.

288. Foght J.M., Westlake D.W.S. Bioremediation of oil spills // Spill Technol. Newslett. 1992. - Vol. 17, N 3. - P. 1-10.

289. Foght J., Semple K., Gauthier C. et al. Effect of nitrogen source on biodégradation of crude oil by a defined bacterial; consortium incubated under cold, marine conditions // Environ. Technol. 1999. - Vol. 20. - P. 839-849.

290. Frankenberger W.T., Johanson Jr., Johanson J.B. Influence of crude oil and refined petroleum products on soil dehydrogenase activity // J. Environ. Qual. -1982. Vol. 11, N 4. - P. 602-607.

291. Freijer J.I. Mineralization of hydrocarbon in soils under decreasing oxygen availability // J. Environ. Qual. 1996. - Vol. 25. - P. 296-304.

292. Eritsche W., Hofrichter M. Aerobic degradation by microorganisms //Biotechnology. Environmental Processes / Eds. H.-J. Rehm, G. Reed. -Wiley-VCI-I, Weinheim, 1999.-Vol. lib. P. 145-167.

293. Gallego J.L.R., Loredo J., Llamas J.F. et al. Bioremediation of diesel-contaminated soils: Evaluation of potential in situ techniques by study of bacterial degradation // Biodégradation. 2001. - Vol. 12.- P. 325-335.

294. Genovese M., Denaro R., Cappello S. et al. Bioremediation of benzene, toluene, ethylbenzene, xylenes-contaminated soil: a biopile pilot experiment //J. Appl. Microbiol.-2008:-Vol. 105,N5.-P. 1694-1702.

295. Gianfreda L., Rao M:A. Potential of extra cellular enzymes in remediation of polluted soils: a review // Enz. Microb. Technol: -2004. Vol.35.- P.339-354.

296. Gianfreda L., Mora M.L., Diez M.C. Restoration of polluted soils by means of microbial and enzymatic processes / R.C. Suelo Nutr. Veg. 2006. — Vol. 6, N1.-P. 20-40.

297. Goodfellow M., Orchard V.A. Antibiotic sensitivity of some nocardioform bacteria and its value as a criteria for taxonomy // J. Gen. Microbiol. — 1974. — Vol. 83, N2.-P. 375-387.

298. Goodfellow M., Minikin D.E. The'genera Nocardia and Rhodococcus II The Procaryotes. A Handbook on habitats, isolation and identification of bacteria /Eds. P. Starr et al. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag, 1981. -Vol. 2.-P. 2016-2027.

299. Gramms G., Voigt K.D., Kirsche B. Oxidoreductase enzymes liberated by plant roots and their effects on soil humic material // Chemosphere. — 1998. -Vol. 38.- 1481-1506.

300. Habe H., Omori T. Genetics of polycyclic aromatic hydrocarbon metabolism in diverse aerobic bacteria // Biosci. Biotechnol. Biochem. — 2003. — Vol. 67, N2.-P. 225-243.

301. Haddock J.D. Aerobic degradation of aromatic hydrocarbons: enzyme structures and catalytic mechanisms // Handbook of Hydrocarbon and Lipid Microbiology / Ed. Kenneth N. Timmis. Springer Berlin Heidelberg, 2010. -P. 1057-1069.

302. Hamamura N., Olson S.H., Ward D.M., Inskeep W.P. Microbial population dynamics associated with crude-oil biodégradation in diverse soils // Appl. and Environ. Microbiol. 2006. - Vol. 72, N 9. - P. 6316-6324.

303. Hamzah A., Rabu A., Farzarul R. et al. Isolation and characterization of bacteria degrading Sumandak and South Angsi oils // Sains Malaysiana. — 2010. -Vol. 39, N2.-P. 161-168.

304. Harvey P.J., Xiang M., Palmer J.M. Extracellular enzymes in the rhizosphere // Proc. of Inter-Cost Workshop on Soil-microbe-root interactions: maximizing phytoremediation/bioremediation. — Grainau, Germany, 2002. — P. 23-25.

305. Hawle-Ambrosch E., Riepe W., Dornmayr-Pfaffenhuemer M. et al. Biodégradation of fuel oil hydrocarbons by a mixed bacterial consortium in sandy and loamy soils // Biotechnol. J. 2007. - Vol. 2. - P. 1564-1568.

306. Heath D.J., Lewis C.A., Rowland S.J. The use of high temperature gas chromatography to study the biodégradation of high molecular weight hydrocarbons // Org. Geochem. 1997. - Vol. 26, N 11-12. - P. 769-785.

307. Holland H.L. Khan S.H., Richards D., Riemlands E. Biotransformation of polycyclic aromatic compounds by fungi // Xenobiotica. 1986. — Vol. 16, N 8. -P. 733-741.

308. Hund K., Traunspurger W. Ecotox-evaluation strategy for soil bioremediation exemplified for a PAH-contaminated' site // Chemosphere. 1994. - Vol. 29. -P. 371-390.

309. Pollut: 2000. - Vol. 107. - P. 217-223.

310. Iwamoto T., Tani K., Nakamura K. et ai. Monitoring impact of in situ biostimulation treatment on groundwater bacterial community by DGGE // FEMS Microbiol: Ecol. 2000. - Vol. 32. - P. 129-141.

311. Jing W., Hongke X., Shaohui G. Isolation and characteristics of a microbial consortium for effectively degrading phenanthrene // Petroleum Sci. — 2007. — Vol. 4, N3.-P. 68-75.

312. Jorgensen K.S., Puustinen J., Suortti A.-M. Bioremediation of petroleum hydrocarbon-contaminated soil by composting in biopiles // Environ. Pollut. — 2000. Vol. 107. - P. 245-254.

313. Juteau P., Bisaillon J.-G., L'epine F. et al. Improving the biotreatment ofhydrocarbons-contaminated soils by addition of activated sludge taken from theiwastewater treatment facilities of an oil refinery // Biodégradation. — 2003. -Vol. 14.-P. 31-40.

314. Kandeler E., Pennerstorfer C., Bauer E., Braun R. Microbiological control of the biological decontamination of soils // Zeitschr. Pflanzenernähr, und Bodenk. 1994. - Bd. 157. - P. 345-350.

315. Kao C.M., Chen S.C., Liu J.K., Wang Y.S. Application of microbial enumeration technique evaluate the occurrence of natural bioremediation //Wat. Res.-2001.-Vol. 35, N8.-P. 1951-1960.

316. Kim S.-J., Choi D.H., Sim D.S., Oh Y.-S. Evaluation of bioremediation effectiveness on crude oil contaminated soil // Chemosphere. 2005. —Vol. 59. -P. 845-852.

317. Kim Y., Ingran L.O., Shanmugan K.T. Dihydrolipoamide dehydrogenase mutation alters the NADY sensitivity of pyruvate dehydrogenase complex of Escherichia coli K-12 // J. Bacteriol. 2008. - Vol. 190. - N 11. - P. 18313858.

318. Kucharski J., Jastrzebska E. Effect of heating oil on the activity of soil enzymes and the yield of yellow lupine // Plant Soil Environ. 2006. - Vol. 52, N5.-P. 220-226.

319. Kurola J. Microbial activities in boreal soils: Biodegradation of organic contaminants at low temperature and ammonia oxidation: AcademicI

320. Dissertation in Environmental Ecology. Helsinki, 2006. - 53 p.

321. Larkin M.J., De Mot R., Kulakov L.A., Nagy I. Applied aspects of Rhodococcus genetics // Antonie van Leeuwenhoek. J. 1998. - Vol. 74. — 133-153.

322. Larkin M.J., Kulakov L.A., Allen C.R. Biodegradation and Rhodococcus -masters of catabolic versatility // Curr. Opinion in Biotechnol. 2005. -Vol. 16.-P. 282-290./

323. Leahy J.G., Colwell R.R. Microbial degradation of hydrocarbons in the environment // Microbiol. Rev. 1990. - Vol. 54. - P. 305-315.

324. Lechevalier M.P. Lechevalier H. Chemical composition as a criterion in the classification of aerobic Actinomycetes / Intern. J. Syst. Bacteriol. 1970. -Vol. 20, N. 4.-P. 435-443.

325. Loibner A.P., Szolar O.H.J., Braun R., Hirmann D. Toxicity testing of 16 priority polycyclic aromatic hydrocarbons using Lumistox II Environ. Toxicol, and Chem. 2004. - Vol. 23, N 3. P. 557-564.

326. Locci R., Sharpies G.P Morphology // The Biology of the Actinomycetes /Eds. M. Goodfellow, M. Mordarski, S.T. Williams. New York: Academic Press, 1984.-P. 165-199.

327. Magor A., Warburton J., Trower'M., Griffin M. Comparative study of the ability of three Xanthobacter species to metabolize cycloalkanes // Appl. and Environ. Microbiol. 1986. - Vol. 52, N 4. - P. 665-671.

328. Maila M.P., Cloete T.E. The use of biological activities to monitor the removal of fuel contaminants — perspective for monitoring hydrocarbon contamination: a review // Intern. Biodeterioration & Biodégradation. 2005. — Vol. 55.-P. 1-8.

329. Margesin R., Schinner F. Bioremediation of diesel-oilcontaminated alpine soil at low temperatures // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1997. - Vol. 47. -P. 462-468.

330. Margesin'R., Zimmerbauer A., Schinner F. Soil lipase activity a useful indicator of oil biodégradation // Biotechnol.'Techniques. - 1999. — Vol. 13. — P. 859-863.

331. Margesin R., Zimmerbauer A., Schinner F. Monitoring of bioremediation by soil biological activities // Chemosphere. 2000. - Vol. 40, N 4. - P. 339-346.

332. Margesin R., Walder G., Schinner F. The impact of hydrocarbon remediationv,diesel oil and polycyclic aromatic hydrocarbons) on enzyme activities and microbial properties of soil // Acta Biotechnol. 2000. - Vol. 20. - P. 313-333.

333. Martinkovâ L., Uhnâkovâ B., Pâteka M. et al. Biodégradation potential of the genus Rhodococcus II Environ. Intern. — 2009. Vol. 35, N 1. - P. 162-177.

334. Martinho E., Abreu M.M., Pampulha M.E. et al. An experimental study of the diesel biodégradation effects on soil biogeophysical parameters // Water, Air and Soil Pollut. 2009. - Vol. 206, N 1-4. - P. 139-154.

335. Masai E., Sugiyama K., Iwashita N. et al. The bphDEF metacleavage pathwaygenes involved in biphenyl/polychlorinated biphenyl degradation are located oni.

336. Mercade E., Koberti Mï, Espyny M.I. et. al. New surfactant isolated from Pseudomonas 42A2 // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1988. - Vol. 65, N 12. -P. 1915-1916.

337. Minai-Tehrani D., Shahriari M-H., Savaghebi-Firoozabadi G. et al. Effect of light crude oil-contaminated soil on growth and germination of Festuca arundinaceae II J. Appl. Sci. 2007. - Vol! 7, N 18. - P. 2623-2628.

338. Minnikin D.E., Alshamaony L., Goodfellow M. Differentiation of14

339. Mycobacterium, Nocardia and related taxa by thin-layer chromatographic analysis of whole-organism methanolysates // J. Gen. Microbiol. — 1975. -Vol. 88.-P. 200-204.

340. Mishra S., Jyot J., Kuhad R.C., Lai B. Evalution of inoculum addition to stimulate in situ bioremediation of oily-sludge-contaminated soil // Appl. and Environ. Microbiol.-2001.-Vol. 67, N4.-P. 1675-1681.

341. Moller J., Gaarn H., Steckel T. et al. Inhibitory effects on degradation of diesel oil in soil microcosms by a commercial bioaugmentation product//Bull. Environ. Contaminat. and Toxicol. 1995. - Vol. 54. - P. 913-918.

342. Murygina V.P., Markarova M.Y., Kalyuzhnyi S.V. Application of biopreparation Rhoder for remediation of oil polluted polar marshy wetlands in Komi Republic // Environ. Intern. 2005. - Vol. 31. - P. 163-166.

343. Ouchterlony O., Nilsson L.-A. Immunodiffusion and' immunoelectrophoresis // Handbook of experimental immunology. Vol. I. Immunochemistry / Ed. D.M. Weiz. Oxford: Alden Press, 1979. - P. 19-33:

344. Obuekwe C.O., Al-Muttawa E.M: Self-immobilized bacterial cultures with potential for application as ready-to-use seeds for petroleum bioremediation //Biotechnol. Lett. -2001. -N. 23. P. 1025-1032.

345. Ouyang W., Liu H., Murygina V. et al. Comparison of bio-augmentation and composting., for remediation of oily sludge: A field-scale study in China //Process Biochem. —2005. Vol. 40: - P. 3763-3768.

346. Park S-H., Ko Y-J:, Kim C-K. Toxic effects of catechol and 4-chlorobenzoate stresses on bacterial cells// J. Microbiol. 2001. - Vol. 39; N 3. - P. 206-212.

347. Pascual J.A, García C., Hernandez T. et al. Soil microbial activity as a biomarker of degradation and remediation processes // Soil Biol. Biochem. -2000.-Vol. 32.-P. 1877-1883.

348. Pepper I.L., Gentry T.J., Newby D.T. et. al The role of cell bioaugmentation and gene bioaugmentation in the remediation of co-contaminated soils // Environ. Health Perspect. Suppl. 2002. - Vol. 110, N 6. - P. 943-946.

349. Phillips T.M., Liu D., Seech A.G., Lee H., Trevors J.T. Monitoring bioremediation in creosote-contaminated soils using chemical analysis and toxicity tests // J. Industrial Microbiol, and Biotechnol. 2000. - Vol. 24. -P. 132-139.

350. Philp J.C., Kuyukina M.S., Ivshina L.B. et al. Alkanotrophic Rhodococcus ruber as a biosurfactant producer // Appl. Microbiol. Biotechnol. — 2002. — Vol. 59.-P. 318-324.

351. Pignatello J., Xing B. Mechanisms of slow sorption of organic chemicals to natural particles // Environ. Sci. and Technol. 1996. - Vol. 30. - P. 1-11.

352. Pineda-Flores G., Boll-Argiiello G., Lira-Galeana C., Mesta-Howard A.M. A microbial consortium isolated from a crude oil sample that uses asphaltenes as a carbon and energy source // Biodegrádation. 2004. - Vol. 15. - P. 145-151.

353. Plaza G, Ulfig K, Hazen T.C, Brigmon R.L. Use of molecular techniques in bioremediation // Acta Microbiol. Pol. 2001-. - Vol. 50, N 3-4. - P. 205-218.

354. Pritchard P.H. Use of inoculation in bioremediation // Curr. Opinion in Biotechnol. 1992. - Vol. 3. - P. 232-243.

355. Quatrini P., Scaglione G., De Pasquale C. et al. Isolation of Gram-positive n-alkane degraders from a hydrocarbon-contaminated Mediterranean shoreline // J. Appl. Microbiol. 2008. - Vol. 104, N 1. - P. 251-259.

356. Radwan S.S., Sorkoh N.A., El-Nemr I.M., El-Desouky A.F. A feasibility study on seeding as a bioremediation practice for the oil Kuwaiti desert // J. Appl. Microbiol. 1997. - Vol. 83. - P. 353-358.

357. Radwan S. Microbiology of oil-contaminatéd desert soils and coastal areas in the Arabian Gulf Region // Soil Biology. Microbiology of extreme soils / Eds.

358. P. Dion, C.S. Nautiyai. Berlin, Heidelberg: Springer, 2008. - Vol. 13. -P. 275-298.

359. Rainey F.A., Klatte S., Kroppenstedt R.M., Stackebrandt E. Dietzia, a new genus including Dietzia maris comb, nov., formerly Rhodococcus maris II Intern. J. Syst. Bacteriol. 1995. - Vol. 45, N 1. - P. 32-36.

360. Rajaram P. Bioremediation of oil sludge-contaminated soil // Environ. Intern. -2001.-N26.-P. 409-411.

361. Ramsay M.A., Swannell R.P.J., Shipton W.A. et al. Hill effect of bioremediation on the microbial community in oiled mangrove sediments //Marine Pollut. Bull. 2000. - Vol. 41/-N 7. - P. 413-419.

362. Rao M., Sannino F., Nocerino G. et al. Effect of air-drying treatment on enzymatic activities of soils affected by anthropogenic activities // Biol. Fert. Soils. 2003. - Vol. 38. - P. 327-332.

363. Romantschuk M., Sarand I., Petanen T. et al. Means to improve the effect of in situ bioremediation of contaminated soil: an overview of novel approaches // Environ. Pollut. 2000. - Vol. 107. - P. 179-185.

364. Rosenberg E., Gutnick D.L. The hydrocarbon-oxidising bacteria // The Prokaryotes. A Handbook on Habitats, Isolation, and Identification of Bacteria / Eds. M.P. Starr, H. Stolp, H.G. Truper et al. Heidelberg: Springer-Verlag, 1986.-P. 903-912.

365. Rosenberg E., Legman R., Kushmaro A. et al. Oil bioremediation using insoluble nitrogen source // J. Biotechnol. 1996. - Vol. 51, N 3. - P. 273-278.

366. Roy R., Greer Ch.W. Hexadecane mineralization and denitrification in two diesel fuel-contaminated soils // FEMS Microbiol. Ecol. 2000: - Vol. 32. -P. 17-23.

367. Rothschild L.J., Mancinelli R.L. Life in extreme environments // Nature. — Vol. 409.-P. 1092-1101.

368. Rusansky S., Avigal R., Michaeli S., Gutnick D. Involvement of a plasmid in growth and dispersion of crude oil by Acinetobacter calcoaceticus RA57 //Appl. and Environ. Microbiol. 1987. - Vol. 53, N 8. - P. 1918-1923.

369. Sabate J., Grifoll M., Vinas M., Solanas A.M. Isolation and characterization of a 2-methylphenantrene utilizing bacterium: identification of ring cleavage metabolites // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999. - Vol. 52. - P. 704-712.

370. Sayler G.S., Layton A.C. Environmental application of nucleic acid hybridization // Annu. Rev. Microbiol. 1990. - Vol. 44. - P. 625-648.

371. Schaebber T.L., Cantwell S.G., Brown J.L. et al. Microbial growth on hydrocarbons: terminal branching inhibits biodégradation // Appl. and Environ. Microbiol. 1979. - Vol. 38, N 4. - P. 742-746.

372. Schmidt S.K., Colores G.M., Hess T.F., Radehaus P.M. A simple method for quantifying activity and survival of microorganisms involved in bioremediation processes // Appl. Biochem. Biotechnol. 1995. - Vol. 54, N 1-3. - P. 259-270.

373. Schwartz E., Scow K.M. Repeated inoculation as a strategy for the remediation of low concentrations of phenanthrene in soil // Biodégradation. — 2001.-Vol. 12.-P. 201-207.

374. Shakir H., Safwat H., Weaver R.W. Earworm survival in oil contaminated soil // Plant and Soil. 2002. - Vol. 240, N 1. - P. 127-132.

375. Sharma S.L., Pant A. Biodégradation and conversion of alkanes and crude oil by a marine Rhodococcus sp. // Biodégradation: -2000. Vol. 11.- P.289-294.

376. Shen G., Cao L., Lu Y., Hong j: Influence of phenanthrene on cadmium toxicity to soil enzymes and? microbial growth // ESPR — Environ Sci. & Pollut. Res. 2005. - Vol. 12, N 5. - P. 259-263.

377. Siciliano S.D., Germida J.J., Headley J.V. Evaluation of,prairie grass species as bioindicators of halogenated aromatics in soil //Environ. Toxicol, and Chèm. 1997. - Vol. 16. - P. 521-527.

378. Siciliano S.D., Germida*, J.J; Mechanism of phytoremediation: biochemical. ' and'ecological interactions between plants and bacteria // Environ. Rev. — 1998.-Vol. 6.-P. 65-79. .

379. Sikkema J., de Bont J .A.M., Pool man B. Mechanisms of membrane toxicity of hydrocarbons // Microbiol: Rev. 1995; - Vol. 59. - P. 201-222.408; Singh A., Ward O.P. Biodégradation and bioremediation (V.2). — Berlin,.

380. Heidelberg: Springer-Verlag, 2004. -309 p. 409: Skujins-J:.History of abiotic soil enzyme research // Soil-Enzymes / Ed. Burns R.G. San Diego: Academic Press Inc., 1978. - P. 1-49.

381. Smith M.R. The biodégradation of aromatic hydrocarbons by bacteria //Biodégradation; 1990: - Voh 1. - P: 191-206;

382. Soil pollutioniand soiFprotection / M:G; Keizer, R. de Goede. — Wageningen:k t

383. Wageningen University, 2007. 320. p.

384. Soil quality / Th.W. Kuyper, W.H. van Riemsdijk, E.J.M. Temminghoff. — Wageningen: Wageningen University, 2008. — 320 p.

385. Souta L, Sada M. Isolation of acid- and aluminium-tolerant bacteria and theiralleviating acidification. // Abstr. of ISEB 97-meeting bioremediation. 11.ipzig, Germany, 1997.-P: 135.

386. Stapleton R.D., Savage D.C., Sayler G.S., Stacey G. Biodégradation of aromatic hydrocarbons in an extremely acidic environment // Appl. and Environ. Microbiol: 1998.-Vol. 64, N. 11. - P. 4180-4184.

387. Steffen K.T., Hatakka A., Hofrichter M. Removal and mineralization of polycyclic aromatic hydrocarbons by litter-decomposing basidiomycetous fungi // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. - Vol. 60, N 1-2. - P. 212-217.u t

388. Steinberg S.M., Poziomek E.J., Englemann W.H., Rogers K.R. A review of environmental application of bioluminescent measurement // Chemosphere. -1995. Vol. 30, N 11. - P. 2155-2197.

389. Stroud J.L., Paton G.I. Semple K.T. Microbe-aliphatic hydrocarbon interactions in soil: implications for biodégradation and bioremediation //J. Appl. Microbiol. 2007. - Vol. 102, N 5. - P. 1239-1253.

390. Trindade P:V.O., Sobral E.G., Rizzo A.C.L. et al. Evalution of the biostimulation and bioaugmentation techniques in the bioremediation process of petroleum hydrocarbons contaminated soil // http: ipec.utulsa.edu/ lpec/Conf 2002.

391. Vasudevan N., Rajaram P. Bioremediation of oil sludge-contaminated soil // Environ. Intern. 2001. - N 26. - P. 409-411.

392. Verstaeten L.M.J. Interaction between urease activity and soil characteristics // Agrochimica. 1978. - Vol. 22, N5/6. - P. 455-464.

393. Vinas M., Grifoll M., Sabate J., Solanas A.M. Biodégradation of a crude oilby three microbial consortia of different origins and metabolic capabilitiesi

394. J. Industrial Microbiol, and Biotechnol. 2002. - Vol. 28. - P. 252-260.

395. Vitale AA, Viale AA. A decalin-consuming bacterial community // Rev. Argent Microbiol. 1994. - Vol. 26, N 1. - P. 28-35.

396. Vogel T.M. Bioaugmentation as a soil bioremediation approach // Curr. Opinion in Biotechnol. 1996. - Vol. 7. - P. 311-316.

397. Volkering F., Breure A.M., Rulkens W.H. Microbiological aspects of surfactant use for biological soil remediation // Biodégradation. 1998. — Vol. 8.-P. 401-417.

398. Wackett L.P. Pseudomonas putida — a versatile biocatalyst // Nature Biotech. -2003.-Vol. 21.-P. 136-138.

399. Wallace W.H., Sayler G.S. Catabolic plasmids in the environment // Encyclopedia of Microbiology. 1992. - Vol. 1. - P.417-430.

400. Wang X., Bartha R. Effects of bioremediation on residues, activity and toxicity in soil contaminated by fuel spills // Soil Biol. Biochem. 1990. -Vol. 22.-P. 501-505.

401. Wang W., Freemark K. The use of .plants for environmental monitoring and assessment // Ecotoxicol. and Environ. Safety. 1995. — Vol. 30. - P. 289-301.

402. Wenderoth D.F, Rosenbrock P, Abraham W.R et al. Bacterial community dynamics during biostimulation and bioaugmentation experiments aiming at chlorobenzene degradation in groundwater // Microbial Ecol. 2003. — N 6. — P. 137-148.

403. Whyte L.G., Hawari J., Zhou E-., et al. Biodégradation of variable-chain-length alkanes at low temperatures by a psychrotrophic Rhodococcus sp. // Appl. and Environ. Microbiol. 1998. - Vol. 64, N 7. - P. 2578-2584.

404. Wyszkowska J., Kucharski J. Biochemical properties of soil contaminated by petroleum // Pol. J. Environ. Stud. 2000. - Vol. 9, N 6. - P. 479-485.

405. Wyszkowska J., Wyszkowski M. Activity of soil dehydrogenases, urease, and' acid and alkaline phosphatases in soil polluted with petroleum // J. Toxicol. Environ. Health. Part A. 2010. - Vol. 73, ^ 17. - P. 1202-1210.

406. Xu R., Obbard J. Effect of nutrient amendments on indigenous hydrocarbon biodégradation in oil-contaminated beach sediments // J. Environ. Qual. — 2003. -Vol. 32.-P. 1234-1243.

407. Yemashova N.A, Murygina V.P., Zhukov D.V. et al. Biodeterioration of crude oil and oil derived products: a review // Rev. Environ. Sci. Biotechnol. — 2007. -Vol. 6, N 4. P. 1569-1705.

408. Zhang Y., Miller R.M. Effect of rliamnolipid (biosurfactant) on solubilization and biodégradation of n-alkanes // Appl. and Environ. Microbiol. 1995. -Vol. 61.-P. 2247-2251.