Программируемая гибель клеток и окислительный стресс, вызванные ингибиторами митохондриальных функций тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Изюмов, Денис Сергеевич

• Изюмов, Денис Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Изюмов, Денис Сергеевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна работы.

Практическая ценность работы.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Общие положения о программированной смерти клеток.1Г

Участие каспаз в апоптозе.

Активация апоптоза с участием рецепторов./

Митохондриалъный путь активации каспаз.

Проапоптозные белки митохондрий.

Независимая от каспаз гибель клеток.

Роль белков семейства Bcl-2 в апоптозе.

Участие кальция в апоптозе.

Активные формы кислорода и азота.

Роль комплекса I дыхательной цепи в продукции АФК,.

Роль комплекса III дыхательной цепи в продукции АФК.

Антиоксидантные системы клетки.

Влияние А ФК на гибель клеток.

Регуляция апоптоза с помощью АФК и А ФА.

Продукция АФК при фото динамической обработке клеток.

Механизмы гибели клеток, индуцированной истощением АТР.

Сенсоры уровня АТР в клетках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Использованные культуры клеток.

Использованные реагенты.

Приготовление растворов и сред для культивирования клеток.

Приготовление фосфатного буфера.

Приготовление безглюкозной поддерживающей среды Рингера-Кребса.

Приготовление растворов трипсина и ЭДТА.

Приготовление питательной среды Игла, модифицированной Дальбекко.

Методы работы.

Пересев клеток.

Замораживаие и размораживание клеточных культур.

Пересев клеток для экспериментов.

Определение концентрации клеток с помощью камеры Горяева.

Определение жизнеспособности клеток.

Определение жизнеспособности клеток с использованием флуоресцентных красителей.

Определение продукции АФК.

Регистрация дыхания клеток.

Иммунофлуоренсцентное окрашивание клеток.

Регистрация выхода цитохрома с с помощью Western блота.

Истощение уровня АТР в клетках и его восстановление.

Разделение фрагментированных молекул ДНК с помощью электрофореза.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Измерение дыхания клеток линий Hela и HeLa-Bcl-2.

Влияние митохондриальных ингибиторов на гибель клеток.

Влияние биоэнергетических функций митохондрий на апоптоз клеток, индуцированный стауроспорином.

Влияние биоэнергетических функций митохондрий на апоптоз клеток, индуцированный фактором некроза опухолей-а. олигомицин ингибирует апоптоз клеток hela, индуцированный ФНО-а.

Окислительный стресс, индуцируемый ФНО-а и действие митохондриальных ингибиторов.

Исследование продукции АФК митохондриями клеток Hela, индуцированной фотоактивацией флуоресцентного красителя Mitotracker Red.

Исследование окислительного стресса и апоптоза, индуцированных временным снижением уровня АТР в клетках HELA.

Комбинация 2-ДОГ и митохондриальных ингибиторов вызывает снижение уровня АТР в клетках

HeLa.

Временное снижение уровня АТР вызывает гибель клеток HeLa.

Апоптоз клеток HeLa, вызванный временным снижением уровня АТР в клетках, сопровождается транслокацией белка Вах и выходом цитохрома с из митохондрий.

Дробление молекул ДНК при апоптозе.

Апоптоз клеток HeLa, вызванный временным падением уровня АТР, сопровождается окислительным стрессом.

Глубокое снижение уровня АТР вызывает преимущественно некротическую гибель клеток HeLa.

Вляние удаления сыротки из среды инкубации на гибель клеток HeLa, индуцированную митохондриальными ингибиторами.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.ОШИБКА! ЗАКЛАДКА НЕ ОПРЕДЕЛЕНА.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Программируемая гибель клеток и окислительный стресс, вызванные ингибиторами митохондриальных функций»

Актуальность проблемы в последние годы мы стали свидетелями революционных событий в митохондриологии. Привычное представление о митохондриях как об энергетических станциях клетки, производящих АТР, общие принципы действия которых известны (хемиосмотическая теория сопряжения), сменилось на представление о них, как об органеллах, в котором заключены факторы, определяющие судьбу клетки. Ранее роль митохондрий в развитии патологий ограничивалось нарушением энергообеспечения при токсических и гипоксических повреждениях. Теперь на передний план вышли "побочные" процессы, в которых участвуют митохондрии, такие как продукция активных форм кислорода (АФК), нарушение внутриклеточной передачи сигналов и выход из митохондрий белков, способных активировать программу гибели клеток (апоптоз) (Черняк и др., 2005).Среди этих белков центральное место занимает цитохром с, который, оказавшись в цитоплазме, участвует в образовании апоптосомы, катализирующей активацию каспаз - специфических протеаз, участвующих в апоптозе.Окислительный стресс считается основным компонентом в развитии многих серьезных патологий и естественного старения организма. АФК, производимые митохондриями, рассматриваются в качестве одного из факторов, усиливающих внутриклеточный окислительный стресс. Исследования последних лет прояснили многие детали механизмов генерации АФК в митохондриях, но общая картина процесса пока не ясна. Нехватка фактических данных пока еще не позволяет достаточно полно обосновать представления о роли митохондрий в окислительном стрессе. Кроме того вклад именно митохондриальных АФК предстоит продемонстрировать в случае различных патологий (Андреев и др., 2005).Митохондрии способны воспринимать разнородные сигналы, поступающие из внеклеточной среды (через специфические рецепторы, как в случае цитокинов, или без них, как при физических стрессах) и от других клеточных структур (ядра, цитоскелета, ретикулума и др.), перерабатывать их и выдавать сигнал, который может практически неизбежно привести клетку к гибели. На каждой из этих стадий не установлены многие принципиальные механизмы, не идентифицированы все компоненты сигнальных путей, не прослежена их связь и соотношение этих процессов с основными биоэнергетическими функциями митохондрий.Практически ко всем компонентам окислительного фосфорилирования были найдены селективные ингибиторы (в основном антибиотики), а затем были расшифрованы механизмы их действия. Использование этих ингибиторов позволило прояснить механизмы многих биоэнергетических процессов.Таким образом, исследования в описанной области являются, без сомнения, достаточно актуальными. Прояснение роли биоэнергетических процессов ^ митохондрий в развитии окислительного стресса и программируемой гибели клеток (ПКС) позволит человеку более эффективно бороться с заболеваниями, в основе которых лежит повышенная продукция АФК и нарушения реализации апоптоза.Цель и задачи исследования Целью данной работы являлось исследование роли биоэнергетических функций митохондрий в апоптозе и окислительном стрессе клеток HeLa, активируемых через рецепторы плазматической мембраны (ПМ), ингибирование протеинкиназ, путем фотодинамической обработки клеток и временным iky снижением уровня АТР в клетках.Задачи исследования: 1. Исследование действия митохондриальных ингибиторов на апоптоз и окислительный стресс клеток HeLa, индуцируемые фактором некроза опухолей-а (ФНО-а) и стауроспорином (СТ).2. Исследование действия митохондриальных ингибиторов на продукцию АФК в митохондриях, индуцированную фотодинамической обработкой клеток HeLa.Ц 3. Исследование механизмов окислительного стресса и гибели клеток HeLa, вызванных временным снижением уровня АТР. Научная новизна работы в работе проведено исследование влияния митохондриальных ингибиторов на гибель клеток HeLa и окислительный стресс, активируемые в различных экспериментальных моделях, лежащих в основе развития многих патологий человека. Установлено, что ингибиторы электронтранспортной цепи (ЭТЦ) митохондрий, разобщители окислительного фосфорилирования не вызывают гибели клеток HeLa в исследуемые промежутки времени. Кроме этого они не влияли на окислительный стресс и апоптоз клеток, вызванные обработкой клеток ФНО-а и СТ. Экспрессия белка Вс1-2 подавляла окислительный стресс и апоптоз, индуцированные действием ФНО-о; и СТ. Ингибитор АТР-синтазы олигомицин подавлял все проявления апоптоза (продукцию АФК, фрагментацию ядра и выход цитохрома с из митохондрий), индуцированные ФНО-о; но не СТ. Предполагается, что защитное действие олигомицина опосредовано ингибированием ^v неспецифической митохондриальной гигантской поры (ГП) и не связано с ингибированием АТР-синтазы и влиянием олигомицина на трансмембранный потенциал митохондрий.Разработана модель митохондриальной продукции АФК, индуцированной фотоактивацией специфического митохондриального красителя Mitotracker Red. В этой модели показано, что ингибиторы комплекса I (ротенон и пиерицидин А) и комплекса III (миксотиазол) дыхательной цепи митохондрий значительно стимулировали продукцию АФК комплексом I. Этот процесс подавлялся при добавлении ингибитора флавинов дифенилениодония (DPI) и антиоксидантов NJ , ацетилцистеина и митохондриально-направленного mitoQ. Полученные данные позволяют предположить, что источником АФК в данном случае являлся флавиновый компонент комплекса I.Показано, что временное снижение уровня АТР в клетках, вызванное одновременным ингибированием гликолиза (с помощью конкурентного ингибитора гликолиза 2-дезокси-В-глюкозы (ДОГ)) и окислительного фосфорилирования вызывает апоптоз клеток HeLa. В качестве митохондриальных ингибиторов использовали олигомицин, миксотиазол и разобщитель ^ окислительного фосфорилирования FCCP. Глубина падения уровня АТР (примерно на 60% от исходного уровня) и гибель клеток не зависели от типа используемого митохондриального ингибитора. Апоптоз сопровождался повышенной продукцией АФК, но не был чувствителен к действию антиоксидантов. Более глубокое или более длительное снижение уровня АТР в клетках вызывало преимущественно некротическую гибель клеток, которая в отличие от апоптоза не была чувствительна к экспрессии белка Вс1-2 и не подавлялась ингибитором каспаз у zVADfmk. Предполагается, что существуют некоторые "АТР-метры", отслеживающие изменения уровня АТР в клетках и запускающие сигнал к гибели.Практическая ценность работы Исследование роли митохондрий в развитии окислительного стресса и апоптоза в последнее время приобретает все большее значение. Этот интерес связан с возрастающим количеством доказательств участия этих процессов в развитии многих патологий человека. Большее понимание механизмов окислительного стресса и гибели клеток, понимание роли митохондрий в этих процессах поможет обрести новые средства борьбы с различными заболеваниями, такими как инсульт, инфаркт, нейродегенеративные заболевания и др.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Изюмов, Денис Сергеевич

1. Ингибиторы дыхания (ротенон, миксотиазол) и разобщители (2, 4-

динитрофенол, FCCP), снижающие мембранный потенциал митохондрий, не вызывали гибели клеток HeLa в течение 24-48 ч, а в условиях длительного подавления гликолиза вызывали некроз.2. Ингибиторы дыхания и разобщители не влияли на выход цитохрома с из митохондрий в цитоплазму, апоптоз клеток HeLa, индуцированный фактором некроза опухолей-се (ФНО-а), стауроспорином и на антиапоптозное действие белка Вс1-2. Олигомицин подавлял апоптоз, индуцированный ФНО-о, но не стауроспорином. Эффект олигомицина не был связан с торможением активности митохондриальной АТР-синтазы и был, вероятно, обусловлен ингибированием выхода цитохрома с из митохондрий.3. Апоптоз, индуцированный ФНО-о, сопровождался повышенной продукцией активных форм кислорода (АФК), которая не блокировалась ингибитором комплекса I ротеноном и ингибитором комплекса III миксотиазолом.Продукция АФК подавлялась при добавлении олигомицина и при сверхэкспрессии белка Вс1-2. Предполагается, что образование АФК происходит в результате повреждения митохондрий при участии комплекса I дыхательной цепи.4. Исследована продукция АФК в клетках HeLa при фото динамической активации митохондриального красителя хлорметил-Х-розамина (Mitotracker Red). Ингибиторы комплексов I и III дыхательной цепи стимулировали темповую продукцию АФК в митохондриях. Предполагается, что основным источником АФК при фотодинамической обработке клеток являлись восстановленные компоненты комплекса I.5. Временное (3 ч) подавление гликолиза и окислительного фосфорилирования приводило к апоптозной гибели клеток HeLa через 24-48 ч. Апоптоз сопровождался транслокацией белка В ах к митохондриям и выходом цитохрома с из митохондрий и подавлялся при экспрессии белка Вс1-2.Апоптоз, вызванный снижением уровня АТР, сопровождался повышенной продукцией АФК, однако антиоксиданты не защищали клетки от апоптоза.Гибель клеток не зависела от типа митохондриального ингибитора.Предполагается, что основным сигналом, запускающим гибель клеток, являлось снижение уровня АТР.

6. Массовый апоптоз клеток HeLa наблюдался при временном снижении уровня АТР (на 60% от исходного уровня). Более длительное или более глубокое снижение уровня АТР с последующим его восстановлением приводило преимущественно к некротической гибели клеток. Выдвигается гипотеза о существовании особых систем ("АТР-метров"), запускающих программированную гибель клеток при снижении уровня АТР в клетках.Благодарности Автор выражает глубокую признательность своему научному руководителю д. б. н.профессору В. Д. Самуилову и научному консультанту к. б. н. ведущему научному сотруднику Б. В. Черняку за полученные знания, заботу, внимание и ценные советы, полученные мной во время выполнения данной работы. Особую благодарность выражаю к. б. н. ведущему научному сотруднику О. Ю. Плетюшкиной.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Изюмов, Денис Сергеевич, 2005 год

1. Андреев А. Ю., Кушнарева Ю. Е., Старков А. А. (2005) Метаболизм активных форм кислорода в митохондриях. Биохимия, 2, 246-264.

2. Новиков Б. П., Новожилова А. П., Плужников Н. Н. (1996) Программированная клеточная смерть (под ред. Новикова В. С) , СПб, Наука.

3. Самуилов В Д., Олескин А. В., Лагунова Е. М. (2000) Программируемая клеточная смерть. Биохимия, 65, 1029-1046.

4. Скулачев В.П. (1989) Энергетика биологических мембран. М.: Наука

5. Черняк Б. В., Плетюшкина О. Ю., Изюмов Д. С , Лямзаев К. Г., Аветисян А. В. (2005) Биоэнергетика и смерть. Биохимия, 70, 294-301.

6. Щепина Л. А., Попова Е. П., Плетюшкина О. Ю., Черняк Б. В. (2002) Апоптоз клеток HeLa и антиапоптозное действие белка Вс1-2 не зависят от дыхания и мембранного потенциала митохондрий. Биохимия, 67, 265-270.

7. Adams Jr. J. D., Chang M. L., Klaidman L. (2001) Parkinsons disease- redox mechanisms. Curr. Med. Chem., 8, 809-814.

8. Adams and Cory (2002) Apoptosomes: engines for caspase activation. Curr. Opin. Cell Biol., 14, 715-720.

9. Agostinis P., Vantieghem A., Merlevede W., de Witte P. A. (2002) Hypericin in cancer treatment: more light on the way. Intern. J. Biochem. Cell Biol., 34, 221-241.

10. Aksenov M. Y., Aksenova M. V., Butterfield D. A., Geddes J. W., Markesbery (2001). Protein oxidation in the brain in Alzheimers disease. Neuroscience, 103, 373-383.

11. Aon M. A., Cortassa S., Marban E., O'Rourke B. (2003) Synchronized whole cell oscillations in mitochondrial metabolism triggered by a local release of reactive oxygen species in cardiac myocytes. J. Biol. Chem., 278, 44735-44744.

12. Amoult D., Gaume В., Karbowski M., 8Ьафе J. C , Cecconi F., Youle R. J. (2003) Mitochondrial release of AIF and EndoG requires caspase activation downstream of Bax/Bak-mediated permeabilization. The EMBO Journal, 11, 4385-4399.

13. Bai J., Rodriguez A. M., Melendez J. A., Cederbaum A. L. (1999) Overexpression of catalase in cytosolic or mitochondrial compartment protect HepG2 cells against oxidative injury. J. Biol. Chem., 274, 26217.

14. Bamham K. J., Masters С L., Bush A. I. (2004) Neurodegenerative diseases and oxidative stress. Nat. Rev. Drug Discov., 3, 205-214.

15. Betarbet R., Sherer T. B, MacKenzie G., Garcia-Osuna M., Panov A. V. Grrenmyre J. T. (2000) Chronic systemic pesticide exposure reproduces features of Parkinson's disease. Nature Neur о science, 3, 1301-1306.

16. Bauer G. (2000) Reactive oxygen and nitrogen species: efficient, selective, and interactive signals during intercellular induction of apoptosis. Anticancer Research, 2{S,An5-A\A(i.

17. Bauer G. (2002) Signaling and proapoptotic functions of transformed cell- derived reactive oxygen species. Prostaglaglandins Leucot. Essen. Fatty Acids, 66, 41-56.

18. Beckman J. S., Koppenol W. H. (1996) Nitric oxide, superoxide and peroxynitrite: the good, the bad , and the ugly. Am. J. Physiol. Cell Physiol, 271, C1424-1437.

19. Bossy-Wetzel E., Newmeyer D. D., Green D. (1998) Mitochondrial cytochrome с release in apoptosis occurs upstream of DEVD-specific caspase activation and independently of mitochondrial transmembrane depolarization. The EMBO Journal, 17, 37-49.

20. Bratton S. В., Cohen G. M. (2001) Apoptotic death sensor: an organelle's alter ago? Trends Pharmacol. Sci, 22, 306-314.

21. Bringold U., Ghafourifar P., Richter C. (2000) Peroxynitrite formed by mitochondrial NO synthase promotes mitochondrial Ca release. Free Rad. Biol. Med, 29, 343.

22. Bruckdorfer R. (2005) The basics about nitric oxide. Mol. Aspects Med., 26, 3-31.

23. Cai J., Jones D. P. (1998) Superoxide in Apoptosis. Mitochondrial generation triggered by cytochrome с loss. J. Biol. Chem., 273, 11401-11404.

24. Carmody R. J., McGowan A. J., Gotter T. G. (1999) Reactive oxygen species as mediators of photoreceptor apoptosis in vitro. Exp. Cell Res., 248, 520-530.

25. Carmody R. J., Cotter T. G. (2000) Oxidative stress induces caspase- independent retinal apoptosis in vitro. Cell Death Differ., 7, 282-291.

26. Chandel N. S., Schumacker P. Т., Arch R. H. (2001) Reactive Oxygen Species Are Downstretim Products of TRAF-mediated Signal Transduction. J. Biol. Chem., 276, 42728-42726.

27. Chandra J., Samali A., Orrenius S. (2000) Triggering and modulation of apoptosis by oxidative stress. Free Radic. Biol. Med., 29, 323-333.

28. Chang H. Y., Yang X. (2000) Proteases for Cell Suicide: Functions and Regulation of Caspases. Microbio. Mol. Biol. Rev., 64, 821-846.

29. Chen Q., Vazquez E. J., Moghaddas S., Hoppel C. L., Lesnefsky E. J. (2003) Production of Reactive Oxygen Species by Mitochondria. Central role of complex III. J. Biol. Chem., 278, 36027-36031.

30. Cheng E. H., Kirsch D. G., Clem R. J., Ravi R., Kastan M. В., Bedi A., Ueno K., Hardwick J. M. (1997) Conversion of Bcl-2 to a Bax-like death effector by caspases. Science, 278, 1966-1968.

31. Clement M. V., Pervaiz S. (1999) Reactive oxygen intermediates regulate cellular response to apoptotic stimuli: an hypothesis. Free Radic. Res., 30, 247-252.

32. Cleveland J. L., Kastan M. B. (2000) A radical approach to treatment. Nature, 401, 309-3 n.

33. Cory S., Huang D. C , Adams J. M. (2003) The Bcl-2 family: roles in cell survival and oncogenesis. Oncogene, 22, 8590-8607.

34. Creagh E. M., Carmody R. J., Gotter T. G. (2000) Heat shock protein 70 inhibits caspase-dependent and -independent apoptosis in Jurkat T Cells. Exp. Cell Res., 151, 5^-66.

35. Cryns v. , Yuan J. (1998) Ptoteases to die for. Genes Dev., 12, 1551-1570.

36. Curtin J. F., Donovan M., Gotter T. G. (2002) Regulation and measurement of oxidative stress in apoptosis. J. Immunol. Methods, 265, 49-72.

37. D'Acquisto F., de Cristofano F., Maiuri M. C , Tajana G., Camuccio R. (2001) Protective role of nuclear factor kappa В against nitric oxide-induced apoptosis in J774 macropahges. Cell Death Differ., 8, 144151.

38. Da Silva Xavier G., Leclerc I., Salt I. P., Doiron В., Hardie D. G., Kahn A., Rutter G. A. (2000) Role of AMP-activated protein kinase in the regulation by glucose of islet beta cell gene expression. PNAS, 97, 4023-4028.

39. Davis R. J. (2000) Signal Transduction by the JNK Group of MAP Kinases. Cell, 103, 239-252.

40. Dawson T. L., Gores G. J., Nieminen A. L., Herman В., Lemasters J. J. (1993) Mitochondria as a source of reactive oxygen species during reductive stress in rat hepatocytes. Am. J. Physiol. Cell Physiol, 264, C961-C967.

41. Debatin K. M., Krammer P. H. (2004) Death receptors in chemotherapy and cancer. Oncogene, 20, 2950-2966.

42. Demin O. V., Kholodenko B. N., Skulachev V. P. (1998) A model of Oj-" generation in the complex III of the electron transport chain. Mol. Cell. Biochem., 184,21-33.

43. Dennis P. В., Jaeschke A., Saitoh S. L., Fowler В., Kozma S. C , Thomas G. (2001) Mammalian TOR: a homeostatic ATP sensor. Science, 294, 1102-1105.

44. Djavaheri-Mergny M., Javelaud D., Wietzerbin J., Besancon F. (2004) NF- KB activation prevents apoptotic oxidative stress via an increase of both thioredoxin and MnSOD levels in TNFa-treated cells. FEBSLett., 578, 111-115. I l l

45. Duchen М. R. (1999) Contributions of mitochondria to animal physiology: from homeostatic sensor to calcium signalling and cell death. J. Physiol, 516, 1-17.

46. Eguchi Y., Tomaselli K. J., Shimizu S., Tsujimoto Y. (1999) ATP- dependent steps in apoptotic signal transduction. Cancer Research, 59, 2174-2181.

47. Fariss M. W. (1997) in Handbook of synthetic antioxidants (Packer L., Cadenas E.). Dekker, New York, pi39-175.

48. Finkel T. (2000) Redox-dependent signal transduction. FEBSLett, 476, 52- 54.

49. Fiorucci S., Mencarelli A., Palazzetti В., Del Soldato P., Morrelli A., Ignarro L. J. (2001) An NO derivative of ursodeoxycholic acid protects against Fas-mediated liver injury by inhibiting caspase activity. PNAS, 98, 2652-2657.

50. Fleury C , Mignotte В., Vayssiere J.-L. (2002) Mitochondrial reactive oxygen species in cell death signaling. Biochimie, 84, 131-141.

51. Gatenly R. A., Gawlinski E. T. (2003) The glycolytic Phenotype in Carcinogenesis and Tumor Invasion: Insights through Mathematical Models. Cancer Research, 63, 3847-3854.

52. Gille L., and Nohl H. (2001) The ubiquinol/bcl redox couple regulates mitochondrial oxygen radical formation. Arch. Biochem. Biophys., 388, 34-38.

53. Goglia F., Skulachev V. P. (2004) A function for novel uncoupling proteins: antioxidant defense of mitochondrial matrix by translocating fatty acid peroxides from the inner to the outer membrane leaflet. FASEB, 17, 1585-1591.

54. Gorman A. M., Heavey В., Creagh E., Cotter T. G., Samali A. (1999) Antioxidant-mediated inhibition of the heat shock response leads to apoptosis. FEBSLett., 445, 9S-\02.

55. Green D. R. (1998) Apoptotic pathways: the roads to ruin. Cell, 94, 695- 698.

56. Halliwell В., Clement M. V., Ramalingam J., Long L. H. (2000) Hydrogen Peroxide. Ubiquitous in Cell Culture and In vivo? JUBMIB, Life, 50, 251-257.

57. Hampton M. В., Orrenius S. (1997) Dual regulation of caspase activity by hydrogen peroxide: implications for apoptosis. FEBSLett., 414, 552-556.

58. Hanahan D., Weinberg R. A. (2000) The hallmarks of cancer. Cell, 100, 57- 70.

59. Hardie D. G., Carling D., Carlson M. (1998) The AMP-activated/SNFI protein kinase subfamily: metabolic sensors of the eukayotic cell? Ann. Rev. B/oc/zew., 67, 821-855.

60. Haunstetter A., Izumo S. (1998) Apoptosis. Basic Mechanisms and Implications for Cardiovascular Disease. Circulation Research, 82, 1111-1129.

61. Haynes V., Elfering S., Traaseth N., Giulivi С (2004) Mitochondrial nitric- oxide synthase: enzyme expression, characterization, and regulation. J. Bioenerg. Biomembr. 36, 341-346.

62. Heigold S., Bauer G. (2002) Raw 264.7 macrophages induce apoptosis selectively in transformed cells: intercellular signaling based on reactive oxygen species. JLeukoc. Biol, 11, 554-563.

63. Izyumov D. S., Avetisyan A. V., Pletjushkina O. Yu., Sakharov D. V., Wirtz K. W., Chemyak B. V., Skulachev V. P. (2004) "Wages of Fear": transient threefold decrease in intracellular ATP level imposes apoptosis. Biochim. Biophys. Acta, 1658, 141-147.

64. Jacobson M. D., Raff M. С (1995) Programmed cell death and Bcl-2 protection in very low oxygen. Nature, 374, 814-816.

65. Jacobson M. D., Weil M., Raff M. С (1997) Programmed cell death in animal development. Cell, 88, 347-354.

66. Jaustin M. L., Meier Т., Smith R., Murphy M. (2003) Mitochondria- targeted antioxidants protect Friedreich Ataxia fibroblasts from endogenous oxidative stress more effectively than untargeted antioxidants. FASEB, 17, 1972-1974.

67. Jou M. J., Jou S. В., Chen H. M., lin С H., Peng T. I (2002) Critical role of mitochondrial reactive oxygen species formation in visible laser irradiation-induced apoptosis in rat brain astrocytes (RBA-1). J. Biomed. Set., 9, 507-516.

68. Jaattela M., Tschopp J. (2003) Caspase-independent cell death in T lymphocytes. Nat. Immunol, 4,416-423. 1^

69. Kane D. J., Sarafian R., Anton H., Hahn H, Gralla E., Valentine J., Ord Т., Bredesen D. (1993) Bcl-2 inhibition of neural death: deceased generation of reactive oxygen species. Science, 262, 365-369.

70. Kelso G. F., Poteous С M. (2001) Selective targeting of a redox-active ubiquinone to mitochondria within cells. J. Biol. Chem., 276, 4588-4596.

71. Kemp B. E., Mitchelhill K. I., Stapleton D., Michell B. J., Chen Z. P., Witters L. A. (1999) Dealing with energy demand: the AMP-activated protein kinase. Trends Biochem. Sci., 24, 22-25.

72. Kessel D., Luo Y. (1999) Photodynamic therapy: a mitochondrial inducer of apoptosis. Cell Death Differ, 6, 28-35.

73. Kharbanda S., Pandey P., Schefield L., Israels S., Roncinske R., Yoshida K., Bharti A., Yuan Z-M. Saxena S., Weichselbaum R., Nalin C , Kufe D. (1997) PNAS, 94, 6932-6942.

74. King A., Gottlieb E., Brooks D. G., Murphy M. P., Dunaief J. L. (2004) Mitochondria-derived reactive oxygen species mediate blue light-induced death of retinal pigment epithelial cells. Photochem. Photobiol, 79, 470-475.

75. Kowaltowski A. J., Castilho R F. Vercesi A. E. (2001) Mitochondrial permeability transition and oxidative stress. FEBSLett., 495, 12-15.

76. Krasilnikov M. A. (2000) Phospatidylinositol 3-kinase dependent pathways: the role in control of cell growth, survival, and malignant transformation. Biochemistry (Moscow), 65, 59-67.

77. Kushnareva Y., Murphy A. N., Andreev A. (2002) Complex I-mediated reactive oxygen species generation: modulation by cytochrome с and NAD(P)^ oxidation-reduction state. Biochem. J., 368, 545-553.

78. Kuwana Т., Newmeyer D. D. (2003) Bcl-2 proteins and the role of mitochondria in apoptosis. Curr. Opin. Cell Biol., 15, 691-699.

79. Kuznetsov A. V., Janakiraman M., Margreiter R., Troppmair J. (2004) Regulating cell survival by controlling cellular energy production: novel functions for ancient signaling pathways? FEBS Letters, 577, 1-4.

80. Lam M., Oleinick N. L., Nieminen A. L. (2001) Photodynamic therapy- induced apoptosis in epidermoid carcinoma cells. Reactive oxygen species and mitochondrial inner membrane permeabilization. J. Biol. Chem., 276, 47379-47386.

81. Lambert A. J., Brand M. D. (2004) Inhibitors of the quinone-binding site allow rapid superoxide production from mitochondrial NADHiubiquinone oxidoreductase (complex I). J. Biol. Chem., 279, 39414-39420.

82. Latta M., Kunstle G., Leist M., Wendel A. (2000) Metabolic depletion of ATP by fructose inversely controls CD95- and tumor necrosis factor receptor 1-mediated apoptosis. J. Exp. Med., 191, 1975-1985.

83. Leeuwenburgh C , Hansen P., Shaish A., Holloszy J. O., Heinecke J. W. (1998) Markers of protein oxidation by hydroxyl radical and reactive nitrogen species in tissues of aging rats. Am. J. Physiol. Cell Physiol.. 274, 453-461.

84. Le Goffe C , Vallette G., Charrier L., Candelon Т., Bou-Hanna C., Bouhours J.-F., Laboisse C. L. (2002) Metabolic control of resistance of human epithelial cells to H2O2 and NO stresses. Biochem. J., 364, 349-359.

85. Leff T. (2003) AMP-activated protein kinase regulates gene expression by direct phosphorylation of nuclear proteins. Biochem. Soc. Trans., 31, 224-227.

86. Lewis Т. S., Shapiro P. S., Ahn N. G. (1998) Signal transduction through MAP kinase cascades. Adv. Can. Res., 74, 49-139.

87. Li P. F., Dietz R., von Harsdorf R. (1997) Differential effect of hydrogen peroxide and superoxide anion on apoptosis and proliferation of vascular smooth muscle cells. Circulation, 96, 3602-3609.

88. Li P. F., Dietz R., von Harsdorf R. (1999) p53 regulates mitochondrial membrane potential through reactive oxygen species and induces cytochrome c-y^ independent apoptosis blocked by Bcl-2. The EMBO Journal, 18, 6027-6036.

89. Li F., Mao H. P., Ruchalski K. L., Wang Y. H., Choy W., Schwartz J. H., Borkan S. С (2002) Heat stress prevents mitochondrial injury in ATP-depleted renal epithelial cells. Am. J. Physiol. Cell Physiol, 283, C917-C926.

90. Li C , Wright M. M., Jackson R. M. (2002) Reactive species mediated «1 injury of human lung epithelial cells after hypoxia-reoxigenation. Exp. Lung Res., 28, 373-389.

91. Li N., Ragheb K., Lawler G., Sturgis J., Rajwa В., Melendez J. P., Robinson J. P. (2003) DPI induces mitochondrial superoxide-mediated apoptosis. Free Radic. Biol. Med, 34, 465-411.

92. Linsinger, G., Wilhelm, S., Wagner, H., and Hacke, G. (1999) Uncouplers of oxidative phosphorylation can enhance a Fas death signal. Molecular Cell Biology, 19,3299-3311.

93. Liu В., Andrieu A. N., Levade Т., Zhang P., Obeid L. M., Hannun Y. A. (1998) Glutathione regulation of neuronal sphingomyelinase in tumor necrosis factor-alpha-induced cell death. J. Biol. Chem., 273, 11313-11320.

94. Liu Y., Peterson D. A., Kimura H., Schubert D. (1997) Mechanism of cellular 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction. J. Neurochem., 69, 581-593.

95. Lundberg A. S., Hahn W. C , Gupta P., Weinberg R. A. (2000) Genes hjr involved in senescence and immortalization. Curr. Opin. Cell Biol., 12, 705-709.

96. Madesh, M., and Hajnoczky, G. (2001) VDAC-dependent permeabilization of the outer mitochondrial membrane by superoxide induces rapid and massive cytochrome с release, y. Cell Biol, 155, 1003-1016.

97. Marchetti P., Decaudin D., Macho A., Zamzami N., Hirch Т., Susin S., Щ Kroemer G. (1997) Redox regulation of apoptosis: impact of thiol oxidation status on mitochondrial function. Eur. J. Immun., 27, 289-296.

98. Marchetti P., Susin S. A., Decaudin D., Gamen S., Castedo M., Hirsch Т., Zamzami N., Navai J., Senik A., Kroemer G. (1996) Apoptosis-associated derangement of mitochondrial function in cells lacking mitochondrial DNA. Cancer Research., 56, 2033-2038.

99. McClintock D. S., Santore M. Т., Lee V. Y., Brunelle J., Budinger G. R., Zong W. X., Thompson C. В., Hay N., Chandel N. S. (2002) Mol. Cell. Biol, 12, 94-104.

100. McPherson B. C , Yao Z. (2001) Signal transduction of opioid-induced cardioprotection in ischemia-reperfusion. Anesthesiology, 94, 1082-1088.

101. Mignotte В., Vayssiere J.-L. (1998) Mitochondria and apoptosis. Eur. J Biochem, 252, 1-15.

102. Mikhailov V., Mikhailova M., Pulkrabek D. J., Dong Z., Venkatachalam M. A., Sailumar P. (2001) Bcl-2 prevents Bax oligomeization in the mitochondrial outer membrane. J. Biol. Chem., lib, 18361-18374.

103. Mikhailov V., Mikhailova M., Degenhardt K., Venkatachalam A., White E., Saikumar P. (2003) Association of Bax and Bak Homo-oligomers in Mitochondria. J. Biol. Chem., IIH, 5367-5376.

104. Minamikawa Т., Sriratana A., "Williams D. A., Bowser D. N., Hill J. S., Nagley P. (1999) Chloromethyl-X-rosamine (MitoTracker Red) photosensitizes mitochondria and induce apoptosis in intact human cells. J. Cell Sci., 112, 2419-2430.

105. Miwa S., St-Pierre J., Partridge L., Brand M. D. (2003) Superoxide and hydrogen peroxide production by Drosophila mitochondria. Free Radic. Biol. Med, 35, 938-948.

106. Moan J., Berg K. (1991) Photochemotherapy of cancer: experimental research. Photochem. PhotobioL, 53. 549-553.

107. Moor A. С E. (2000) Signalling pathways in cell death and survival after photodymanic therapy. J. Photochem. PhotobioL, B57, 1-13.

108. Mosser D. D., Caron A. W., Bourget L., Denis-Larose C , Massie B. (1997) Role of the human heat shock protein hsp70 in protection against stress-induced apoptosis. Mol. Cell. Biol, 17, 5317-5327.

109. Murphy T. H., De Long M. J., Coyle J. T. (1991) Enhanced NAD(P)H: quinine reductase activity prevents glutamate toxicity produced by oxidative stress. J. Neurochem., 56, 990-995.

110. Murphy K. M., Streips U. N., Lock R. B. (2000) Bcl-2 inhibits a Fas- induced conformational change in the Bax N terminus and Bax mitochondrial translocation. J. Biol. Chem., 215, 17225-17228.

111. Nedergaard J., Golozoubova V., Matthias A., Asadi A., Jacobsson A., Cannon B. (2001) UCPl; the only protein able to mediate adaptive non-shivering thermogenesis and metabolic inefficiency. Biochim. Biophys. Acta, 1504, 82-106.

112. Novgorodov S. A., Gudz T. I., Mohr Yu., Goncharenko E. N. Yaguzhinski 1.. S. (1989) ATP-synthase complex: the mechanism of control of ion fluxes induced by cumene hydroperoxide in mitochondria. FEBS Lett., 247, 255-258.

113. Nylandsted J., Rohde K., Bastholm L., Elling F., Jaatela M. (2000) Inhibition of Hsp70 synthesis activates a novel caspase-independent and Bcl-2 resistant death pathway in breast cancer cells. PNAS, 97, 7871-7876.

114. Oda Т., Sadakata N., Komatsu N., Muramatsu T. (1999) Specific efflux of glutathione from the basolateral membrane domain in polarized MDCK cells during ricin-induced apoptosis. J. Biochem. (Tokyo), 126, 715.

115. Oleinick N. L., Evans H. H. (1998) The photobiology of photodynamic therapy: cellular targets and mechanisms. Radiat. Res., 150, 146-156.

116. Oleinick N. L., Morris R. L., Belichenko I. (2002) The role of apoptosis in response to photodynamic therapy: what, where, why, and how. Photochem. Photobiol. Sci., 1, 1-21.

117. Ott M., Robertson J. D., Gogvadze V., Zhivotovsky В., Orrenius S. (2002) Cytochrome с release from mitochondria proceeds by a two-step process. PNAS, 99, 1259-1263.

118. Owuor E. D., Kong A.-N. T. (2002) Antioxidants and oxidants regulated signal transduction pathways. Biochem. Pharmac, 64, 765-770.

119. Pap E. H., Drummen G. P., Winter V. J., Kooij T. W., Rijken P., Wirtz K. W., Op den Kamp J. A., Hage W. J., Post J. A. (1999) Ratio-fluorescence microscopy of lipid oxidation in living cells using Cll-BODIPY (581/591). FEBS 1.ett., 453, 278-282.

120. Parthasarathi K., Ichimura H., Quadri S., Issekutz A., Bhattacharya J. (2002) Mitochondrial Reactive Oxygen Species Regulate Spatial Profle of Proinflammatory Responses in Lung Venular Capillaries. J. Immunol, 169, 7078-7-86.

121. Pastorino, J.G., Simbula, G., Yamamoto, K., Glascott, P.A., Rothman, R.J., and Farber, J. (1996) The cytotoxicity of tumor necrosis factor depends on induction of the mitohondrial permeability transition. J. Biol. Chem., 271, 29792-29798.

122. Paul K., Bauer G. (2001) Promyelocytic HL60 cells induce apoptosis specifically in transformed cells: involvement of myeloperoxidase, nitric oxide and target cell-derived superoxide anions. Anticancer Research, 21, 3237-3246.

123. Peachman K. K., Lyles D. S., Bass D. A. (2001) Mitochondria in eosinophils: functional role in apoptosis but not respiration. PNAS, 98, 1717-1722.

124. Pereverzev M. O., Vygodina T. V., Konstantinov A. A., Skulachev V. P. (2003) Cytochrome c, an ideal antioxidant. Biochem. Soc. Trans., 31, 1312-1315.

125. Perez D., White E. (2000) TNF-a Signals Apoptosis through a Bid- Depeandent Conformational Change in Bax that is Inhibited by ElB 19K. Mol. Cell, 6, 53-63.

126. Pinton P., Ferrari D., Rapizzi E., Magalhaes P., Schulze-Osthoff K., Di Virgillio F., Pozzan Т., Rizzuto R. (2000) A role for calcium in Bcl-2 action? J. Cell Biol., 148,^57-^62.

127. Proskuryakov S. Y., Konoplyannikov A. G., Gabai V. L. (2003) Necrosis: a specific form of programmed cell death? Exp. Cell Res., 283, 1-16.

128. Raff M. (1998) Cell suicide for beginners. Nature, 396, 119-122.

129. Raha S., Robinson B. H. (2000) Mitochondria, oxygen free radicals, disease and ageing. Trends in Biochem. ScL, 25, 502-508.

130. Ramsay R., Singer T. P. (1992) Relation of superoxide generation and lipid peroxidation to the inhibition of NADH-Q oxydoreductase by rotenone, piericidin ^ A, and MPP^. Biochem. Biophys Res Com, 189, 47-52.

131. Rizzuto R., Pinton P., Ferrari D., Chami M., Szabadkai G., Magalhaes P. J., Di Virginio F., Pozzan T. (2003) Calcuim and apoptosis: facts and hypotheses. Oncogene, 22, 8619-8627.

132. Robinson B. H. (1996) Use of fibroblast and lymphoblast cultures for detection of respiratory chain defects. Methods Enzymol., 264, 454-464.

133. Ruiz-Ruiz C , Robledo G., Font J., Izquierdo M., Lopez-Rivas A. (1999) Protein Kinase С inhibits CD95 (Fas/APO-l)-mediated apoptosis by at least two different mechanisms in Jurkat T cells. J. Immunol, 163, 4737-4746.

134. Ruiz-Steward L, Tiyyagura S. R., Lin J. E., Kazerounian S., Pitari G. M., Schulz S., Martin E., Murad F., Waldman S. A. (2004) Guanyl cyclase is an ATP sensor coupling nitric oxide signaling to cell metabolism. PNAS, 101, 37-42.

135. Saikumar P., Dong Z., Patel Y., Hall K., Hopfer U., Weinberg J. M., Venkatachalam M. A. (1998) Role of hypoxia-induced Bax translocation and cytochrome с release in reoxigenation injury. Oncogene, 17, 3401-3415.

136. Sakharov D. V., Bunschoten A., van Weelden H., Wirtz K. W. A. (2003) Photodynamic treatment and H202-induced stress result in different patterns of cellular protein oxidation. Eur. J. Biochem., 270, 4859-4865.

137. Sambandam N., Lopaschuk G. D. (2003) AMP-activated protein kinase (AMPK) control of fatty and glucose metabolism in the ischemic heart. Prog. 1.ipid Res., 42, 23S-256.

138. Saran M., Bors W. (1994) Signalling by Ог'' and NO: how far can either radical, or any specific reaction product, transmit a message under in vivo conditions? Chemico-biological interactions, 90, 35-45.

139. Scorrano L., Ashiya M., Buttle K., Weiler S., Oakes S. A., Mannelle C. A., Korsmeyer S. J.(2002) A distinct pathway remodels mitochondrial cristae and ,% mobilizes cytochrome с during apoptosis. Dev. Cell, 2, 55-67.

140. Semenza G. L. (2003) Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) activates the transcription of genes that are involved in crucial aspests of cancer biology, including angiogenesis, cell survival, glucose metabolism. Nature Review. Cancer, 3,721-732.

141. Shi Z. Z., Osei-Frimpong J., Kala G., Kala S. V., Barrios R. J., Habib G. M., Lukin D. J., Danney С M., Matzuk M. M., Lieberman M. W. (2000) Glutathione synthesis is essential for mouse development but not for cell growth in culture. PNAS, 97, 5101.

142. Shoffner J. M., Wallance D. С (1995) Oxidative phosphorylation diseases. In The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease (7 edition)(Scriver С R., Beaudet A. L., Sly W. S., Valle D.), pp. 1535-1629. McGraw Hill.

143. Sidoti-de Fraisse С , Rincheval V., Rister Y., Mignotte В., Vayssiere J.-L. (1998) TNF-alpha activates at least two apoptotic signalling cacades. Oncogene, 17,1639-1651.

144. Single В., Leist M., Nicotera P. (2001) Differential Effects of Bcl-2 on Cell Death Triggered under ATP-Depleted Conditions. Exp. Cell Res., 262, 8-18.

145. Skulachev V. P. (2000) Mitochondria in the programmed death phenomena; a principle of biology:"It is better to die than to be wrong". lUBMMLife, 49, 365-373.

146. Skulachev V. P. (2001) Mitochondrial filaments and clusters as intracellular power-transmitting cables. Trends Biochem Sci, 26, 23-29.

147. Skulachev V. P. (2002) Programmed death phenomena: from organelle to organism. Ann. N. Y. Acad. Sci., 959, 214-237.

148. Sobolev A. S., Jans D. A., Rozenkranz A. A. (2000) Targeted intracellular delivery of photosensitizers. Prog. Biophys. Mot. Biol., 73, 51-90.

149. Starkov A. A., Fiskum G. (2001) Myxothiazol induces H2O2 production from mitochondrial respiratory chain. Biochem. Biophys Res. Com. 281, 645-650.

150. Sugano, N., Ito, K., and Murai, S. (1999) Cyclosporin A inhibits H2O2- induced apoptosis of human fibroblasts. FEBS Lett., 441, 274-276.

151. Suh Y-A., Arnold R. S., Lassegue В., Shi J., Xu X., Sorescu D., Chung A. В., Griendling K. K., Lambeth J. D. (1999) Cell transformation by the superoxide-generating oxidase Mox-1. Nature, 401, 79-82.

152. Susin S. A., Lorenzo H. K., Zamzami N., Marzo I., Brenner C , Larochette N., Prevost M. C , Alzari P. M., Kroemer G. (1999) Mitochondrial release of caspase-2 and -9 during the apoptotic process J. Exp. Med., 189, 381-394.

153. Tanito М., Nishiyama A., Tanaka Т., Masutani H., Nakamura H,, yodoi J., Ohira A. (2002) Change of redox status and modification by thiol replenishment in retinal photooxidative damage. Investig. Ophtalmol. Vis. Sci., 43, 2392-2400.

154. Taylor S. W., Fahy E., Murray J. (2003) Oxidative Post-translational modification of Tryptophan Residues in Cardiac Mitochondrial Proteins. J. Biol. Chem., lis, 19587-19590.

155. Therade-Matharan S., Laemmel E., Duranteau J., Vicaut E. (2004) Reoxigenation after hupoxia and glucose depletion causes reactive oxygen species production by mitochondria in HUVEC. Am. J. Regul. Integr. Сотр. Physiol., 287, 1037-1043.

156. Tokunaga C , Yoshino K.-i., Yonezawa K. (2004) mTOR integrates amino acid- and energy-sensing pathways. Biochem. Biophys. Res. Commun., 313, 443-446.

157. Tome M. E., Baker A. F., Powis G., Payne С M., Briehl M. M. (2001) Catalase-overexpressing thymocytes are resistant to glucocorticoid-induced apoptosis and exhibit increased net tumor growth. Cancer Research, 61, 2766.

158. Trunpower B. L. (1990) The protonmotive Q cycle. Energy transduction by coupling of proton translocation to electron transfer by the cytochrome bcl complex. J. Biol. Chem., 265, 11409-11412.

159. Varfolomeev E. E., Ashkenazi A. (2004) Tumor Necrosis Factor: An Apoptotic JuNKie? Cell, 116, A^\-\91.

160. Vazquez-Laslop, N., and Dreyfus, G. (1990) The native mitochondrial Fi - inhibitor protein complex carries out uni- and multisite ATP hydrolysis. J. Biol. Chem.,265, 19002-19006.

161. Voehringer D. W., McConkey D. J., McDonnell T. J., Brisbay S., Meyn R. E. (1998) Bcl-2 expression causes redistribution of glutathione to the nucleus. PNAS, 95, 2956-2960.

162. Wajant H., Pfizenmaier K., Scheurich P. (2003) Tumor necrosis facror signalling. Cell Death Differ., 10, 45-65.

163. Weber Т., Dalen H. (2003) Mitochondria Play a Central Role in Apoptosis Induced by oTocopheryl Succinate an Agent with Antineoplastic Activity: Comparison with Receptor-Mediated Pro-Apoptotic Signaling. Biochemistry, 42, 4277-4291.

164. Wu J., Seregard S., Sprangberg В., Oskarsson M., Chen E. (1999) Light- induced apoptosis in rat retina. Eye, 13, 577-583.

165. Xu G., Kwon G., Cruz W. S., Marshall С A., McDaniel M. L. (2001) Metabolic regulation by leucine of translation initiation through the mTOR-signalling pathway by pancreatic beta-cells. Diabetes, 50, 353-360.

166. Xu K., Thomalley P. J. (2001) Involvement of glutathione metabolism in the cytotoxisity of the phenethyl isothiocyanate and its cysteine conjugate to human leukaemia cells in vitro. Biochem. Pharmacol, 61, 165-177.

167. Yaglom J. A., Ekhterae D., Gabai V. L., Sherman M. Y. (2003) Regulation of Necrosis of H9c2 Myogenic Cells upon Transient Energy Deprivation. J. Biol. С/гет., 278, 50483-50496.

168. Yethon J. A., Epand R. F., Leber В., Epand R. M., Andrews D. A. (2003) Interaction with a Membrane Surface Triggers a Reversible Conformational Changew in Bax Normally Associated with Induction of Apoptosis. J. Biol. С/гет., 278, 48935-48941.

169. Yi X., Yin X. M., Dong Z. (2003) Inhibition of Bid-induced apoptosis by Bcl-2. tBid insertion, Bax translocation, and Bax/Bak oligomerization suppressed. J. Biol. Chem., 278, 16992-16999.

170. Zhang L., Yu J., Park B. H., Kinzler K. W., Vogelstein B. (2000) Role of Bax in the Apoptotic Response to Anticancer Agent. Science, 290, 989-992.