Получение моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам тюленя и некоторые аспекты их применения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Неверова, Марина Сергеевна

• Неверова, Марина Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 1992

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Неверова, Марина Сергеевна

Введение

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. Структура иммуноглобулинов млекопитающих ж ее изменение в филогенезе

1.1. Основные данные о структуре и функции иммуноглобулинов млекопитающих

1.2. Филогенез иммуноглобулинов

1.3. Иммуноглобулины тюленя < •

Глава 2. Методы изучения иммуноглобулинов. Физико-химические ж биологические характеристики сывороточных белков тюленя

Глава 3. Моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам тюленя как инструмент анализа для решения прикладных задач

Часть П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. Материалы и методы

4.1. Материалы

4.2. Методы

4.2.1. Экспериментальные методы

4.2.2. Физико-химически© методы

4.3. Объем исследований

Глава 5. Разработка методов получения очищенных иммуноглобулинов из сыворотки тюленя

5.1, Иммунохжмжческая характеристика белкового состава сыворотки тюленя, использованной для выделения шмуногло булинов

5.2. Оценка различных методов фракционирования сыворотки тюленя

- 3 г

5.2.1. Фракционирование методом гельфильтрацш

5.2.2. Фракционирование методом ионообменной хроматографии

5.2.3. Фракционирование с помощью сульфата аммония, капржловой кислоты, полиэтилен-гликоля

5.3. Методы получения очищенных иммуноглобулинов с использованием традиционных способов выделения сывороточных белков

5.3.1. Получение.иммуноглобулина М

5.3.2. Получение иммуноглобулина А -

5.3.3. Получение ишуноглобулина G

5.4. Новые методы получения очищенных шщуно-глобулинов

Глава 6. Получение моноспецифических антисывороток к ищуноглобулинам и СЗ компоненту комплемента сыворотки тюленя

6.1. Получение антисывороток путем иммунизации очищенными шшуноглобулинамж Ю

6.2. Получение антисывороток путем иммунизации нерастворимыми иммунными комплексами

6.2.1. Типы иммунных комплексов, используемых для иммунизации •

6.2.2. Получение антисывороток путем иммунизации преципитатами, полученными методом; йммуноэлектрофореза ж линейного жммуно-электрофореза

6.2.3. Получение антисывороток с использованием антительного сорбента, содержащего белок А

6.2.4. Получение антисывороток к СЗ компоненту комплемента путем иммунизации комплексом "зимозан + СЗ" П

- 4

Глава 7. Использование полученных моноспецифических антисывороток для количественного к качественного анализа иммуноглобулинов и СЗ компонента комплемента

7.1. Количественное исследование уровня имщу-ноглобулинов в сыворотке тюленя:

7.2. Использование моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам тюленя в прикладных целях

7.2.1. Выявление антигенного родства сывороточных белков тюленя, человека и ряда лабораторных животных

7.2.2. Оценка шмунохимической чистоты иммуно-активных препаратов полипептитдной природы из тимуса тюленя

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам тюленя и некоторые аспекты их применения»

Развитие медицинской биотехнологии, включающее фундаментальные теоретические исследования и масштабные практические разработки, создало основу крупного промышленного производства разнообразных биологически активных соединений, в частности, гомологичных и гетерологичных препаратов иммуномодулято-ров белковой природы из различных видов биологического сырья. В эксперименте и клинической практике из тимусов различных млекопитающих успешно применяются препараты тимозин, тимбпо-этин, тактивин, тимоптин, которые помогают корректировать нарушения имщунной системы. Установлено, что аминокислотная последовательность одинакова для действующей субстанции di -тимозина, полученного из ткани тимуса человека, крупного рогатого скота, свиньи, овцы. В то же время замечена видовая специфичность гуморальных тимических факторов наземных млеко-.питающих,. и при этом установлена более низкая дамуностщдули-рующая активность этих веществ по сравнению с известным тимо-зином из тимуса телят. Показана перспективность использования новых препаратов из тимуса гренландского тюленя (в прошлом -отхода зверобойного промысла) наряду или вместо аналогичных коммерческих препаратов из тимуса телят.

Предполагают, что молекулы иммуноглобулинов и тимусных гормонов являются предшественниками иммунорегуляторных пептидов, а наличие VH -последовательностей иммуноглобулинов на Т-супреесорных клетках тимуса доказано экспериментально. Очевидно , что выявление гомологичных иммуноглобулиновых детерминант позволит расширить критерии оценки имдаостимулирующей активности препаратов из тимуса млекопитающих, а также объяснить природу алафилактогенных свойств, характерных для гете— рологичных препаратов при внутривенном введении. Однако иммунная система морских млекопитающих, в частности тюленя, мало изучена, и ее исследование представляет самостоятельный интерес.

Ослабление иммунной системы под влиянием антропогенных факторов создает необходимость оценки уровня иммуноглобулинов тюленя в целях контроля сырья и конечных продуктов медицинской биотехнологии, а также для успешного конструирования диагностических тест-систем и проведения вакцинации животных.

Методы серологической систематики убедительно доказали монофилетическую природу таксона ластоногих и выявили высшее 100% содержание - подгруппы вариабельности тяжелой цепи среди многих позвоночных, что позволяет использовать IgG тюленя в системах серологического типироваяия подгрупп Й- цепи млекопитающих, в частности, проводить анализ нормальных иммуноглобулинов , миеломных белков, иммунных и других антител, a. также ме мбранных^ лшфоцит о в человека.

Очевидно, что указанные исследования требуют анализа им-мунохимической природы изотилов иьшуноглобулинов тюленя и, следовательно, диагностических реагентов для их определения -моноспецифических антисывороток. Сведений б коммерческом выпуске или экспериментальном производстве подобных антисывороток нет, хотя в литературе подчеркнута актуальность использования антител к сывороточным белкам ластоногих для решения прикладных и научных задач.

Целью настоящего исследования, выполненного в рамках Общегосударственной комплексной программы исследования и исполь-. зованш Мирового океана на 1986-1990 гг. и на период до 2QQQ г., явилась разработка методов получения новых препаратов - кроличьих моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам Q^ Д1 м тюленя Pagophilas gr-oenlandUc^ для иммунохимическо-го анализа в биотехнологии (контроль качества препаратов -иммуномодуляторов), ветеринарии (конструирование диагностических тест-систем), научных исследованиях (шмунотаксономия, изучение структуры и функции иммуноглобулинов человека и животных) .

В задачи исследования входило :

1. Разработать методы получения иммунохимически чистых TgG, IgАIgM из сыворотки тюленя, подобрать оптимальную- схему фракционирования сыворотки.

2. Разработать методы получения моноспецифических антисывороток, не требующих адсорбции, используя принцип ишуни-зации жшунными комплексами. .

3. Апробировать полученные антисыворотки для качественной и количественной характеристики иммуноглобулинов тюленя.

4. Провести выявление и анализ антигенного родства сывороточных белков тюленя, человека и ряда лабораторных животных.

5. Изучить возможности использования полученных моноспецифических антисывороток для оценки иммунохимической чистоты иммуноактивных препаратов полипептидной природы из тимуса тюленя.

В результате проведенных исследований впервые разработана технология лабораторного получения кроличьих моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам G, А, М тюленя, в которую включены новая схема получения иммуноглобулинов тюленя и новые эффективные способы иммунизации.

- 8

Получены новые данные о практической реализации аффинитета сывороточных белков тюленя к белку А стафилококка, про-тамину, jL-фенилаланину и полисахариду зимозану.

Выявленные ранее неизвестные серологически родственнные тюленю белковые антигены человека и ряда лабораторных животных в разных зонах электрофоретической подвижности представляют как теоретический интерес для молекулярной филогении, так и практическое значение при разработке не требующих адсорбции способов иммунизации иммунными комплексами.

Предложен новый способ контроля иммуноактивных препаратов полипептидной природы из тимуса тюленя с помощью антител к сывороточным белкам животного - продуцента тимуса.

- 9

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AT антитело

ЗЙ? - забуференный физиологический раствор

ЙЭФ - шшуноэлектрофорез

ЛИЭФ - линейный иммуноэлектрофоре з

ЛВП - липопротеины высокой плотности

ММ - молекулярная масса "

ОП - оптическая плотность

ПААГ - полиакриламидный гель

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РВД - радиальная иммунодиффузия

ЭФ - электрофорез

- 10

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Неверова, Марина Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Впервые получены кроличьи моноспецифические антисыворотки к иммуноглобулинам М тюленя fagophtlus; groBnlAhdic^ для иммунохимического анализа в биотехнологии (контроль качества препаратов-иммуномодуляторов), ветеринарии (конструирование диагностических тест-систем), научных исследованиях (иммуно-таксономия, изучение структуры и функции иммуноглобулинов человека и животных).

2. Предложены две схемы фракционирования сывороточных иммуноглобулинов. Первая схема позволяет выделить иммуноглобулины с помощью осаждения ПЭГ, гельфильтрации на Ультрагеле АсА-22 и ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-тоэпале. Вторая схема предусматривает использование методов аффинной хроматографии на протаминсефарозе, протеин А-сефарозе, гидрофобной хроматографии на ^-фенилаланинсефарозе.

3. Разработан новый способ получения моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам и СЗ компоненту комплемента сыворотки тюленя, основанной на иммунизации нерастворимыми иммунными комплексами: преципитатами типа "иммуноглобулин + + антииммуноглобулин", комплексом "зимозан + СЗ".

4. Разработан новый способ иммунизации иммунными комплексами на основе антительного стафилококкового сорбента типа "стафилококк/АТ к IgA/JgAk " и "стафилококк/АТ к FgM/IgM"*

5. По результатам экспериментальных исследований разработана технология лабораторного получения кроличьих моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам Д тюленя,

- 150 включающая сочетание методов имь/унизации антигенами и. нерастворимыми иммунными комплексами.

6. Показана возможность использования полученных моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам G-, А > И и СЗ компоненту комплемента сыворотки тюленя в реакциях преципитации (ИЭФ, РИЛ) для качественной и количественной характеристики иммуноглобулинов тюленя, а также идентификации Г^б- человека, мыши, хомяка, собаки, Л^к собаки, кошки, Г^К человека, крупного рогатого скота, собаки, кошки, СЗ собаки.

7. Моноспецифические антиоыворотки к иммуноглобулинам тюленя могут быть использованы в качестве реагентов для оценки имдунохимической чистоты препаратов полипептидной природы из тимуса тюленя. г 151

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Неверова, Марина Сергеевна, 1992 год

1. Алёшкин В.й. Получение моноспецифических антисывороток к иммуноглобулинам мыши и некоторые аспекты их применения: Дисс. . канд. мед, наук.: М., 1981. 181 с.

2. Амброзиус Р., Рихтер Р., Фибич Г. Филогенетические аспекты структуры иммуноглобулинов// Молекулярная биология. Киев., 1972. г- Вып. 8. - С. 77-88.

3. Анбиндер Е.М. Кариология и эволюция ластоногих. М«: Наука, 1980. - 152 с.

4. Бойд Дж. Основы иммунологии. М.: Мир, 1969. - 647 с.

5. Борисов В.И. Применение реакции преципитации для .изучения филогении и систематики ластоногих и хищных// Зоологический журнал, 1969.- Т. 48, Вып. 2. С. 249-255.

6. Брок И. Выделение иммуноглобулина// Иммунологические методы/ Под ред. Г.Ф. Фримеля. М.: Мир, 1979 - G. 287-292.

7. Васильченко В.Н. Гормональные препараты тимуса// Молекулярная биология. Киев.,1976. - Вып. 12. - С. 59-76.

8. Гаврилова Е.М., Егоров A.M., Шаханина К.I. Изучение физико-химических и антигенных свойств мономерной и полимерной форм человека// Успехи иммунологии: Сб. ст. М,, 1977. - С. 137-140.

9. Глазова Т.Н. Физиологическая и биохимическая характеристики крови гренландского тюленя Pagophiltts groen Untilca// Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1977. - Т. 13.3. С. 362-366.

10. Говалло В.И. Трансплантация тканей в клинике. М.: Медицина, 1979. - 287 с.

11. Гущин И.С. Немедленная аллергия клетки. М.: Медицина, 1976. - 174 с.

12. Елфимова Т.Б,, Мишин В.Л. Диагностика, лечение и профилактика некоторых заболеваний ластоногих в неволе. Апатиты.: Мурман. морской биол. ин-т, 1989. - 34 с.

13. Засыпкин М.Ю. Генетическая структура популяций настоящих тюленей подсемейства PhoelnaS Охотского моря, Сообщ, I. Методика электрофореза, описание и интерпретация неферментных белков// Генетика. 1987. - Т. 23. - - С. 336343.

14. Иммунобиология гормонов тимуса/ под ред. Гриневича Ю,А,, Чеботарева В.Ф. Киев.: Здоровье, 1989. - 152 с.

15. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология,- М.: Агропромиз-дат, 1986. - 272 с.

16. Кульберг А.Я. Антииммуноглобулины. М.: Медицина, 1978.- 181 с.

17. Кульберг А.Я, Иммуноглобулины как биологические регуляторы. М.: Медицина, 1975. - 197 с.

18. Литман Г., Кихоу Д. Филогенетическое происхождение структуры иммуноглобулинов// Иммуноглобулины/ Под ред. Литме-на Г. и Гуда Р. М.: Мир, 1981 - С. 278-309.

19. Любинская М.М., Алешкин В.А. Использование моноспецифических антисывороток к сывороточным белкам мыши для анализа соответствующих белков представителей отряда Roctaw iia // Иммунология,„1984 I 2. - С. 15-19.

20. О происхождении ластоногих// Природа. 1989. - № 10. -С. II2-II3.

21. Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. - 536 с.

22. Пастер Е.У. Иммунология. Киев.: Вища школа, 1989.- 304 с. ' .

23. Пуриче С. Комплемент и иммунные реакции, в которых он участвует// Иммунобиология, иммунохимия, иммунопатология/ Под ред. Месробяну И#, Берчану Ш. Бухарест.: Изд-во Акад. Социалист. Респ. Румыния, 1977 - С. 176-193.

24. Разработка технологии производства иммуноактивного препарата тимозин из отходов промысла гренландского тюленя.

25. Отчет НИР (заключительный),/ Научно-исследовательская лаб-рия биологически активных веществ гидробионтов (НИЛ БАВГ). Руководитель О.Г. Сакандвлидзе. Тема 044-90.~ М., 1991 20с, Отв. исполнитель А,П. Тарасов.

26. Рекламный лист НПО "Вектор" (Новосибирск) М.: Выставка "Биофарм", 1992, 12-18 марта.

27. Сахаров И.Ю. Изоформы, аминокислотный и углеводный состав щелочной фосфатазы из слизистого тонкого кишечника тюленя// Биохимия. 1989. - Т. 54, - Ш 2. - С. 250-255,

28. Соколов В.Е. Редкие и исчезающие виды млекопитающих СССР, M.t Наука, 1990 - 127 с,

29. Способ получения коллагеназы: А.С. X34359I СССР, МКИ3 СХ2 d 13/10.

30. Способ получения основы питательных сред для культивирования микроорганизмов: А.С. I4026I6 СССР, МКИ3 CI2 N11/20.

31. Способ получения тимозина: А.С. 975017 СССР, МкАбХ к 35/36.

32. Способ получения фосфатидилхолина: А.С. .1102603 СССР, МКИ3 A6I к 35/30.

33. Стефани Д. В, Иммуноглобулины человека и их роль в ин -фекционной патологии// Ж» микробиол. 1971 - № 61. С. 126-130.

34. Ткач Б. Электрофорез белков в пластинках полиакршгамид-ного геля// Методы исследований в иммунологии/ Под ред. Лефковитса И., Перниса Б. М.: Мир, 1981 - С. 95-119.

35. Улитин А.А., Поляков В«Ф* Белки крови гренландского Ш-леня в период ювенальной линьки// Повышение продуктивности звероводства и охотничье-промысловой фауны.: Тр. ВС1И30 М., 1980. - С. 56-63.

36. Федосеев Г.А. Некоторые итоги и современные проблемыизучения ластоногих// Зоология позвоночных/Под, ред. Ябло-кова А.В. и Познанина 1.П, М.: ВИНИТИ, 1974 - Т.6,-С.87-137.

37. Фьюденберг X, Пинк Дж., Стейтс Д. Введение в иммуногенети-ку. М.:Мир, 1975 - 221 с. " •

38. Хмелевский Ю.В., Усатенко О.К, Основные биохимические константы человека в норме и при патологии. Киев.: Здоровье, 1984. - 120 с.

39. Холчев Н,В. Гамма-глобулин (методы получения и стандартизации). Доклад, обобщающий опубликованные труды, представленные для защиты на соискание ученой степени доктора биол. наук. М. , 1965 - 42 с,

40. Холчев Н.В,, Колесникова A.M. J0 методах получения и стандартизации гамма-глобулина// Материалы 13-го съезда' гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, инфекционистов I., 1959.

41. Чернохвостова Е.В. Биологические особенности антител, принадлежащих к разным классам иммуноглобулинов//Усп. совр. биол.- 1972.- Т.73. Вып. 3 - С* 447-457.

42. Чернохвостова Е.В, Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов в инфекционной и неинфекционной патологии человека//!, микробиол,.-1975.- № 3 G. 3-10.

43. Чернохвостова Е.В, Система секреторных иммуноглобулинов (обзор)//Вестник АМН СССР.-1974. № 3 - С. 81-90,

44. Чернохвостова Е.В,, Герман Г.П., Гольдерман С.Я. Количественное определение иммуноглобулинов метвдом радиальной им-мунодиффузии в геле. М., 1975. 35 с,

45. Чернохвостова Е.В,, Герман Г.П., Малунас Э.З. Исследование антигенных связей иммуноглобулинов животных и человека с помощью антисывороток к иммуноглобулинам человека// Ж. микробиол. 1978,- $ 2 - С. 41-45,- 156

46. Шварцман Я.С», Хазенсон Л.Б. Местный иммунитет. Ленинград: Медицина, 1978. - 222 с.51» Adinolfv M.D., Mellisoh P.L., Polly Ph.D. A-blood group 'antibodies // J.exptl. rned. -1966. P. 123-127•

47. Allen P.Z., Dalton E.I. Studied on equine immunoglobulins. IY. Immunoglobulins of the donkey // Immunol.-1975*- P.187-197.

48. A^nheim N. Evolution of protein. // The Antigens / Sela M. -- Ж-J., 1973. Vol.1 - P. 347 - 476.

49. Blumberg B.S., Allison A.C., Garry В. The haptoglobins, hemoglobins and serum proteins of.the Alaskan fur s © al.% groUD-d. squirrel and marmot .// J.cell. сотр. Physiol.ч- . 1960. Vol . 55- - P . 61-71. • . .^

50. Bourke B.S., Moss I.K. Maini R.N. Measurement of the .coBiple-ruent 03 breakdown product 03d by rocket imm.unoelectroph.ore-sis // J. .Immunol.Meth. 1982.- Vol.48,- . - P.97-108.

51. Boyd J.W. The relationship between seruin immune globuline deficiency and disease in calves // A farm Survey Vet.

52. Rec. -•1972.- Vol. 90, P. 645.

53. Brandslund I., Siersted H.O., Svehag S.-E. Double-decker rocket Immunoelectrophoresis for direct quantitation of complement 03 split prod-ucts with 03d specificities in plasma // J .Immunol. Meth. 1981. -Vol. 44. - №1.. P. 63-71 V ■'; ■■ V- ■ .-.

54. Breuer E.M. et al. Seal deaths in the Wad den Sea by Sylt in 1988: significance of the high-degree of the- -lungworm-r-Ga-r ses with a hypersensitivity reaction. // Zentrablt. Veterinarmed /В/. 1988. - B*35. - № 6. - S.467-473.

55. Capra J.D., Klapper D.G. Complete amino--.acid , s-e«uQnee-.-ofthe variable domains of two human IgM anti-gamine globu-, lins (Lay/Pom) with shared idiotypic secificities // Scand.

56. J. Immunol. 1976. - Vol. 5. - P.677-684.69» Capra J.D., Klapper D.G. Distribution and association of heavy 'and light chain variable region subgroup among .: . human IgM immunoglobulins // La Riceria Clin. Lab. - 1976. -: Vol. 6. - P.34-44.

57. Capra J.D., Wasserman R.L., Kehoe J.M. Phylogenetically associated-residues within the V^III•subgroup of seve--ral mammalian species: Evidence for a "paueigene" basis,.-, for antibody diversity ff J. Exp. Med. 1973. - Vol.138.: P.410-427.

58. Cavagnolo R.Z. and Vedros U.A. Identification and-characterization of three immunoglobulin classes in the Northern Pur seal Callorhinus ursinus //Developmental•, and- Comparative • Immunology 197£ » - Vol. 2 £89-697-->

59. J. Immunol. 1971» -Vol. 107. - P.1-11.

60. Cousins D.V. EIISA for detection of tuberculosis .in•■.seal-// Vet. Rec. 1987. - Vol. 121. 13. - P.30-5

61. Davies D.R., Padian E.A.-, Segal D-.-M.: .Three dimensional'.,--„ •> structure:of.immunoglobulins // Annu. Rev. Biochem. 1975*- Vol. 44. P. 639-667. . - -- .

62. Doellgast G.J., Plant A.G. Purification of Human IgA 'by salt-modiated Hydrophobic Chromatography. 1976. - Vol.13«1. P. 135-139.

63. Edelman G.M. The сovalent structure of ел entire

64. G iimmmoglobuline molecule // Proc. latl. Acad. Sci. USA. 1969. Vol. 63. -P. 78-85.

65. Edelman C.M., Gall Н.Б. The antibody- problem // Ann. Rev. Biochem. 1969. - Vol. 38. - P.415-490.

66. Edelman С.M., Poulik M.D. Studies on structural unite of the ^-globulins // J. Exp. Med. 1961. - Vol. 113.-. P. 861-884, \ '

67. Fahey J.L., Wonderlich J., Mishell R. The- immimoglo-.bulins of-mice. I Pour таз or classes of immunoglobulins: 7SJ2 Т31 1a ( 2A)- and 18Sj1M globulins // J. ,Exptl. Med-. - 1964. - Vol. 120. - P.223-242.

68. Porsgren A., Hordstrom K.Protein A. of Staphylo-coccus aureus. The biological.significance of■ its reaction with IgG //Ann. H.Y. Acad. Sci. -1974. -Vol.236. P. 252-266.

69. Frommel D., Litman G.W., Finstad J. Evolutionof the immune response-XI,IiMunoglobulin-s , of the-'kQrr ned shark* Purification-,:;:oh^£aQt$rizationrsjjd^l3i9l©gi-cal properties J J J. Immunol. 1971* - Vol. 106. -P.1234-1243. .—

70. Heldemann ?vr.H., Reddy A.L. Phylogeny of imm'une responsiveness marine invertebrated //.Ped. Proc. 1973». Vol. 32. P.2188.

71. Henney C.S., Stanworth D.K. Effect of antigen on the -structural configuration of homologous antibody following antigen-antibody combination // Nature.- 1966.• Vol. 210. P. 1071-1072. .

72. Hill R.L., Deleney K., Lebovitz H.E.-Studies on -the amino acid sequence of heavy. chains from rabbit immunoglo-r bulin Q // Proc. Roy. Soc. Ser. В 1966. - Vol. 166. -P. 159-164. .

73. Hobbs J.K. Immunoglobulins in clinical' chemistry // Adv. . clin. chem. 1971. - Vol.14. - P.219-317.

74. Hood L., Barstad ,P., Loh E. Antibody diversity: An assessment // The Immune system: Genes,

75. Receptors, Signals / Sercarz. WillieiJisgnN AvE;»^ /ilpx/'.

76. C.F., eds. New York: -Academie, press, .1-974-» Л49-—B9 •

77. Hood В., Prahl JThe imuae--system-j-'A models£or-di.ffет* rentiation in higher, orgahisms // Adv. Immunol. 19T1 • —

78. Vol. -14. P. 291-351. . .-.

79. Hosumi If., Tonegawa S . Evidence for---somatic rearran-gime-nt of immunoglobulin genes coding for variable and CQja^tsuitv regions //■ Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1976. - Vol. 73.• P. 3628-3632. .:. ;.„,yr .,.

80. Ishizaka K., Ishizaka T. Specific structural features ■ of 7gE елЪ\Ьо£1е8 specific-reception //. Antib., Antigen an б Cell. 1973. - P. 69-79. . .

81. Jabiki Т., Kashiwazaki M ., Mamioka S . Quantitative- ana— -lysis of three classes of immunoglobulins in serum pf newborn pigs and milk of,sons // Am, J.Vet.Res. - 1974.• ■ . Vol. 35. -.P. 1483-1489.

82. Jacobska K.L. The mammary gland and lactation // :Duke''s.th

83. Physiology of Dofflestic Animals / Swenson M.J. ed(8- ed)-- Hew York: Constock Pub. Assoc., 1970. P. 1356-1382.

84. Ка1рак&оуГоп Р.К., Hong ,R.-, Good K.-A. The fiwe-olasses-- —^ of immunoglobueins in normal C^H.and BASb/c mice. //'1шт-no-logy. 1973. - Vol. 24. - №2-.- P.303-314. .

85. Kehoe J'.ffi., Capra J.D. Sequence relationship smong the variable regions of immunoglobulin heavy chains from, various mammalian species // Proc. Natl. Aca.d. Sci. USA -1972. Vol. 69. - P.2052-2055.

86. New-York: Plenum Press, 1979. P.87-121.115» Kohler H. Three variable gene pools common to ■ . - ' ■• IgM, IgG and IgA // Nature. - 1970. - Vol. 227. - P.13181320.

87. Kronvall G., Seal U.S., Finstad I.A. Phylog-enet iсinsight into;evelution of mammalian fragment.of IgG globulin-using.staphylococal protein A //J. of Immunology.-------1970. Vol. 104. - P. 140-147.

88. Kronvall G., Williams R.C. Differences in antiprotein A activity among IgG subgroups // J.Immunol. 1969.-164,.,.: Vol". 103• Я°4. - P.828-834. .— —

89. Kroll -I. Од- the iimimoelect-roph.oretIca-1^d^ntifi-Qatieua and qu-antitation . of serum-proteins '//,3салй. G. Clin. ЪаЪ.

90. Invest. 1968. IP 22. - P. 79-112.^^^

91. ЕгоЗ.,1 I . r Anderson -M-.M-. -Specific aritisor-a, -produoed^fey.immunization with, precipition lines: •// -J, Immunol. "Methods. -1976. Vol. . 13r — • — P. 125-130.—.-------~

92. Hoppeseyler's 2 // Phyziol. Chem. 1968. - H°349.-: ; S.945-951 .

93. Leone C.A. and Wiens A.L. Comparative serology of carnivores //.J. Mammal. -1956. Vol. -37. - P.11-23

94. Leslie G.A., Clem L.W. .Phylogeny of immunoglobuline-, structure and function. VI. 17S, 7s5S.and 5,7S enti- • DHP of■the turtle,-Pseudeneys seripta. If J. Immunol. -1972. Vol. 108. - P. 1656-1664. .-"■■ ■■ \

95. Lin H.H., Caywood B.E., Rowlands D. T. Jr. Primary.andvsecondary Immune responces of the marine toad* Bufo marl-. -nus, to Bacteriophage f 2 // Immunology 1971. - Vol. 20.1. P. 373 . ■ ■ ■■ . .

96. Litman G-.WChartrand S-.j -Pinstaad.,Active.-л-' --stes of turtle.and duck antibody to- 2,4 --dinitrophenol.//Immunochemistry. 1973. - Vol. 1С. - P.323-32$% .л

97. Litman G.W., Wang A.C., Fudenberg H.M. U-ter- .minal amino acid sequence of African lung fish immunoglo-bulin light chains // Proc. Nate Acad. Sci. USA 1971. -Vol. 68. P.2321-2324. . , .

98. Low T.L.K., Liu Y. S.V.,■ .-Putnam P.W-. Structure function and evolutionary relationships of -P--- domains of human■- 1 -C - ■ , - ■ ;immunoglobulins A,G,M. and E // Science. 1976. - Vol. 191.-P. 390-392. -, ■■

99. Lykasis J.J. The production of two molecular classes of antibody In the toad, Xenopus laevis, homologous with mammalian 2TG, (?S) .immunoglobulins if Immunology. 1969 » • , Vol. 16. -'i>.:-91-. . .: .->.-,. .,.,,

100. Marchaloni-s J.J. Isolation and characterization -of-iaaamu----.-. "noglobulin like proteins of the Australian -lungfi^h^ (Sreo-ceratodus forsteri) // Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. -1969- - Vol. 47. - P. 405-419.

101. Marchalonis J.J-.-, Cohen Ж. Isolation and partial characterization of immunoglobulin, from a urodele amphibian

102. Immunology. 1973. - Vol. .24. - P. 395- 407.

103. Marchalonis J., Edelman G.M. Polypeptide chanes of immunoglobulins from the smooth dogfish . (Kustelus<canis)//Science. 1966. -Vol. 154. - P.1567-1568.

104. Margni R.A., Hajos S.E., Mercado M.R. Antarctic Seal-Serum Proteins, Glycoproteins and Lipoproteins // Experientia -1572. Vol. 26. - P. 862. -.-.

105. Martinson K. Preparation of Antisera against Different

106. Ajninal Serum Protein using cross reacting specific Anti-Human Sera // Zbl. Vol. Med. 1974. - Vol. 21. -P. 302-306. . . - .- . , , ,.

107. McDermid E.M., Vos G.H., Bowing H.J. Blood groups, red cell enzymes and serum proteins of baboons and verv-ets. -// Folia Primatol. 1973. - Vol. 19. - P. 312-326.

108. McHabb Т., Koh T.J,, DorringtonK.J.

109. Mchaelson Т.Е., Wis-loff F., Natvig J.B. Structu-.sral requirments in the F -region of rabbit IgG anti- -bodies necessary .to induce cytotoxicity by Ьииел. l:yц^phocytes .// Scand J. .Immunol. 1975. - Vol. 4* - P.71.

110. Mordineg M.R. , Muller-Eberhard H.J, Mousey ,- G glo-' bulin production of antiserum and characterisation in . -the complement reaction // J. Immunol. - 1965. - № 94.1. P. 877. ■ ■ ■ ■

111. Morrel A., Gerber H., Lopes V. Zum Macinzeis von Ben-168-., -. ;■ 'v < .ce-Jones-Protein // Schweis med. Wehschr. 1369* - №'99• s. 876-885. , ./.1.—:.

112. Naevdal G.; .Protein , polymorphism-used for id^n.tifiQatien--. of harp seal.populations // Univ. Bergen Arb. Mat. Natur.1966. N °9. .■■■ .

113. NashD.R. and Mach J .p . Immunoglobulin-classes \ in aquatic mammals //-J. Immunology. 1971. - Vol. 107. - №5u, p. 1424-1430. ' . .

114. Hash D.R., Voerman J.F., Berlin H. Identi- ——~ . fi cat ion of. IgA in rat зегшпелб. secretione /V J. Immunology. -.1969» Vol, 103- ~H°1. ~ p. 145-148. ■ .

115. Nisonoff A.-, Hopper-J.F.v -Spring S;.B-.--The antibody mole, cule. -.Hew-Yorkг Academic press-,■ 1975* -.351 Р»-'X

116. Nisonoff A.-, Wissler P.C-.-, Lipman- С .-Ж .,. S epa-.-• - - . — -ration "ofunivalent -fragments fromthe-bivalent- rabbit antibody molecule by reduction of„disulfide - bonds ,

117. Sang. 1972. - E"°23. - P.163-175. . ,. —171. foljak R.J., Amsel L.M., Phizackerley R.P. Studies on.the three-dimensional structure of immunoglobulins // Prog. Biophys. Molec. Biol. 1976. - Vol. 31. - P. 67-93.

118. Porter R.R. The-hydrolysis of rabbit ^-globulin-, -and antibodies with crystalline papain // Biochem. J.1959. Я° 73. - P. 119.

119. Porter R.R., Press P.M. Immunochemistry // Ann. Rev. Biochem. 1972. Vol. 31. - P. 621-652.-171177» Pcstis J.L., Сое J.E'. IgM. The secretory immunoglobulin of reptiles and amphibians if Nature 1975- - Vol. 258. . . . p. 547-548.

120. Prato O.K. Serological evidence of calieivirustransmission between marine end terrestrial mammals . // Nature, 1974. - Vol. 249. - P. 255-256.179» Ramasamy R., Secher D.S., Adetugbo К. СдЗ domain of

121. J.M. On the specificity of antibodies // Science. 1975. -: Vol. 187. - P. 130-137.

122. Roubab W.T., Etlinger H.M., Hodgins H.O. Spin label studies of a hapten-combining site of rainbow trout antibody // J. Immunol. 1974. Vol. 113. - P. 309-315.

123. Powe D.S., Hug K., Form L. Immimoglobulin D as a lymphocyte receptur. // J. Exp. Med. 1973. - Vol. 138. - P. 965972. :.

124. Salkie M.Ii., Kelker D.H. An investigation into the relationships between serum. Iave3bs of 03., 04 and CH50 // Vox.sang, 1981Vol. 41, №5-6. - P. 282-286.

125. Sarich M. Pinniped phylogeny // Syst. Zool* 1969. -Vol. 18. № 4. - P. 416-422.

126. Scheidegger I.I. Une micro-methode de l'immunoelectrophore-sis // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1955» - Vol. 7» -P. 103- 110.

127. Sehulkind M.L., Robbins J.B., Clem l.W. Reactivities of shark 19S and 7S antibodies to Salmonella, typhimurium// Nature New Biol. 1971 • - Vol. 230./ - P* 182-183«

128. Schultz-R.D. Immunological cisorders in the dog and cat // Vet. Clinic of Nort. America 1974. - Vol. 4,1. P. 153-160.

129. Schumacher K. Isolierung vom 19S-Antikorpern su durch Gelfitration und Saulehelektrophorese // Klin Wechr. -1967. -Б45. S.1045-1048.

130. Schur P.H. //Progress in Clinical Immunology. Vol. 1 Schwartz R. ed - New-York: Grune a. Stratton, 1972. - P.71.

131. Science tools. 1974. - V.24. - № 2. - P.31.

132. Seal- U.S., Frikson A.V., Siniff D.B. Biochemical, population, genetic, phylogenetic and cytоlogical studies of Antarctic seal species // Simposium of Antarctic ice and water masses Tokyo, - 1970. - P. 77-95.

133. Silverton E.W., KaviaM.A., Davie's D.R. Threedimensional structure of an infact human immunpglobulin // Proc. Hatl. Acad. Sci. USA. 1977. - Vol. 74. - P. 5140-5144.

134. Sledge C.,. Clem L.W., Hood L. Antibody structure: Amino terminal sequences of nurse shark light and heavy chains

135. SC. Immunol. 1974. - Vol. 112. - p. 941-948. 199* Smith A.W. Preliminary report on potentially pathogenic microbiol agents recently isolated from pinniped.

136. J. Wildlife Dis. 1974* - Vo1* 10* ~ 54»

137. Smith G.P. The Variation and Adoptive Expresion of Antibodies .-Cambridge, Massachusetts; Harvard University1. Press, 1973. 21 OP.

138. Spiegelberg H.X. Biological activities of immunoglobulins of different classes end. subclasses // Adv. Immunol. -1974. Vol. 19. - P. 259-294.

139. Stechschulte D.J./Ansten K.F. Immunoglobuline of rat colostrum // J. Immunol. 1970. - 104. - P. 1052-1062.

140. Steinbuch Iff., Audran R. The isolation of IgG from mammalian sera with the aid of caprylic acid // Arch. Biochem. and Biophys. 1969. - Vol. 134. - N° 2. - P. 279-283.

141. Steinbuch M., Audran R., Bejandier L. Preparation.ofan IgM and. IgA enriched fraction for clinical use. //3?repar. Biochem. 1973. - Я°3(4). -P. 363-373.

142. Tack B.P., Morris S.C., Prahl J.W. Third component of human complement. Structural analysis of the polypeptide chains of C3 and C3b // Biochemistry. 1979. - Vol.18.1. P. 1197-1505.

143. Takatsu К., Ishizaka Т. Biological significanceof disulfide bonds in human IgE molecules J J J.Immunol. -,1975. -Vol* 114. P. 1838-1845.

144. Terry W.D., Fahey J.L., Steinberg A.G. G1 and IЖЧ factors in subclasses of human IgG If J. Exp. Med. 1965» - Vol. 122. - P. 1087-1102.

145. Voss E.W., Kissel W.J., Sigel M.M. Purification and binding properties of nurse shark antibody // Biochemistry. -1969. Vol. 8.-3?. 4866-4872.

146. Warner h.l., Marchalonis j.j. Structural differences in mouse IgA myeloma proteins of different allotypes // J. Immunol. 1972. -№109. - P. 657-661.

147. Wasserman Ril., Kehoe J.M., Capra J.D. The VjjIII Subgroup of immunoglobulin heavy chains: Phylogenetically associated residues in several avian species // J. Immunol. 1974.1. Vol. 113. P. 954-957.

148. Wickerhauser M., Hao J.I. barge scale preparation ofmacroglobulins // Vox. Sang. 1972. - Vol. 23. - P.119-125.

149. Wu T.T., Kabat E.A., Bulofsky H. Similarities among hypervariable segments of immunoglobulin chains // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -.1975. Vol. 72. - P.5107- 5110.2'I5. Yasmeen D., Ellerson J.R., Dorrington H.J.

150. R.H. Evidence for the domain hypothesis. Location of the site of cytophilic activity toward guinea pig macrophs,-ges in the homology region of human immunoglobulin Ст. // J. Immunol. 1973. - Vol. 110. - P. 1706-1709.

151. Yasmeen D.f Ellerson J.R,, Dorrington K.I.