Полиморфные маркеры генов, ассоциированные с психологическими признаками и риском развития психических расстройств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Монахов, Михаил Владимирович

• Монахов, Михаил Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Монахов, Михаил Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. МЕТОДЫ ПСИХИАТРИЧЕСКОЙ ГЕНЕТИКИ.

2. ГЕНЫ И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОЛИМОРФИЗМЫ, АССОЦИИРОВАННЫЕ С РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ АНОРМАЛЬНОГО ПОВЕДЕНИЯ.

2.1. СЕРОТОНИНОВАЯ СИСТЕМА.

2.2. ДОФАМИНОВАЯ СИСТЕМА.

2.3. ФЕРМЕНТЫ, ИНАКТИВИРУЮЩИЕ НЕЙРОМЕДИАТОРЫ.

2.4. ДРУГИЕ ГЕНЫ.

3. АЛКОГОЛИЗМ И ФЕРМЕНТЫ, УТИЛИЗИРУЮЩИЕ ЭТАНОЛ.

5. ГЕНЕТИКА ВНИМАНИЯ.

6. ВЫВОДЫ ИЗ ОБЗОРА ЛИТЕРАТУРЫ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. ВЫБОРКА БОЛЬНЫХ ШИЗОФРЕНИЕЙ.

2. ВЫБОРКА, ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ПРИ ПОИСКЕ ГЕНОВ, АССОЦИИРОВАННЫХ С ИЗБИРАТЕЛЬНЫМ ВНИМАНИЕМ.

3. ВЫБОРКА, ИССЛЕДОВАННАЯ С ПОМОЩЬЮ ЛАБОРАТОРНОЙ ИГРЫ «ДИКТАТОР». ОПИСАНИЕ ИГРЫ.

4. ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ КРОВИ.

5. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ НАБОРА «ДНК-СОРБ-А».!.

6. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ВОЛОСЯНЫХ ЛУКОВИЦ.

7. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ОБРАЗЦОВ КРОВИ ФЕНОЛ-ХЛОРОФОРМНЫМ МЕТОДОМ.

8. 5'-НУКЛЕАЗНЫЙ АНАЛИЗ.

8.1. ГЕПОТИПИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ 5'-НУКЛЕАЗНОГО АНАЛИЗА.

8.2. НУКЛЕОТИДНЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ЗОНДОВ И ПРАЙМЕРОВ.

9. АЛЛЕЛЬ-СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПЦР.

9.1. ГЕНОТИПИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ АЛЛЕЛЬ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПЦР.

10. HRM.

10.HR M.

10.1. ГБНОТИПИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА HRM.

11. ПРОЦЕДУРА УДЛИНЕНИЯ ПРАЙМЕРОВ (PEP).

11.1. ГБНОТИПИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА PEP.

12. АНАЛИЗ МИКРОСАТЕЛЛИТОВ С ПОМОЩЬЮ ПЦР С

ФЛУОРЕСЦЕНТНО МЕЧЕНЫМИ ПРАЙМЕРАМИ С ПОСЛЕДУЮЩИМ КАПИЛЛЯРНЫМ ЭЛЕКТРОФОРЕЗОМ.

13. СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. ОБЩИЙ ХОД РАБОТЫ.

2. РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДИК ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ПОЛИМОРФНЫХ ЛОКУСОВ.

2.1. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ГЕНОТИПИРОВАНИЯ С ПОМОЩЬЮ 5'-НУКЛЕАЗНОГО АНАЛИЗА. ПРОВЕРКА ТОЧНОСТИ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ С ПОМОЩЬЮ ПРЯМОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ ГЕНОМНОЙ ДНК.

2.2. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ГЕНОТИПИРОВАНИЯ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА HRM.

2.3. АНАЛИЗ ПОЛИМОРФНОГО МАРКЕРА C861G ГЕНА HTR1B С ПОМОЩЬЮ АЛЛЕЛЬ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПЦР.

2.4. АНАЛИЗ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ ГЕНОВ СОМГ, DRD4, IGF2, SNAP-25 С ПОМОЩЮ ПРОЦЕДУРЫ УДЛИНЕНИЯ ПРАЙМЕРОВ.

2.5. РЕЗУЛЬТАТЫ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ.

3. АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ И ГАПЛОТИПОВ

ГЕНА DRD2 С ШИЗОФРЕНИЕЙ, АЛКОГОЛИЗМОМ И АЛЬТРУИСТИЧЕСКИМ ПОВЕДЕНИЕМ.

4. АССОЦИАЦИЯ МАРКЕРА G444A ГЕНА DBH С ИЗБИРАТЕЛЬНЫМ ЗРИТЕЛЬНЫМ ВНИМАНИЕМ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Полиморфные маркеры генов, ассоциированные с психологическими признаками и риском развития психических расстройств»

Функционирование центральной нервной системы определяется взаимодействием большого числа различных белков и белковых комплексов, включая рецепторы нейромедиаторов и нейромодуляторов, ферменты, обеспечивающие синтез и распад этих веществ, трансмембранные переносчики, поддерживающие необходимые концентрации нейромедиаторов в клеточных компартментах и синаптических щелях, факторы роста нейронов и многие другие. Первоочередное значение имеет активность таких нейротрансмитте-ров, как моноамины (дофамин, серотонин, норадреналин, глутамат) и гамма-аминомасляной кислоты. Их воздействие на различные нейроны определяет выраженность всевозможных психических проявлений, включая особенности темперамента и когнитивные функции, а нарушения в работе моноами-ноергических систем являются причиной развития ряда психических заболеваний, например, аддиктивных, тревожных и личностных расстройств, а также эндогенных психозов (биполярного аффективного расстройства и шизофрении).

За последнее время появилось много работ, в которых были получены доказательства связи между генами моноаминоергических систем и психическими проявлениями. Были обнаружены конкретные полиморфные участки в этих генах, с которыми эти проявления ассоциированы. Так, показано, что полиморфизмы гена, кодирующего дофаминовый рецептор D4 вносят вклад в межиндивидуальные различия по чертам личности, связанным с экстраверсией и поиском новизны, а полиморфизм Vall58Met гена, кодирующего фермент катехол-0-метилтрансферазу, который принимает участие в распаде дофамина в передней коре, связан с функциями внимания и рабочей памяти, а также ассоциирован с шизофренией. Выявлены аллельные варианты генов серотонинергической системы, в том числе переносчика серотонина и рецепторов серогонина типа 2А и 2С, которые связаны с выраженностью признаков тревожного ряда, а также предрасположением к развитию клинической депрессии.

Следует отметить, что одни и те же полиморфизмы исследованных генов могут быть связаны с различными сферами психики и соответственно с нарушениями в функционировании этих сфер. Этот факт свидетельствует в пользу теорий единого механизма, лежащего в основе разных психических нарушений, которые выдвигаются в последнее время в психиатрии. Активно обсуждается проблема генетической общности эндогенных психозов, в том числе, шизофрении и биполярного аффективного расстройства.

Учитывая исключительную сложность нервной системы, очевидно, что подтверждение этих гипотез требует проведения большого числа исследований. В частности, информативность такого рода исследований может быть повышена, если определенный набор молекулярных маркеров будет проверен на ассоциацию как с различными психическими проявлениями в норме, так и с психическими болезнями.

Для анализа такого набора маркеров в больших выборках необходима надежная и воспроизводимая методика генотипирования. Современные методы молекулярной биологии, такие как ПЦР в режиме реального времени и другие технологии, основанные на ПЦР, позволяют с большой точностью различать аллельные варианты различных полиморфных сайтов.

Целью данной работы являлся генетический анализ полиморфных маркеров набора генов кандидатов, связанных с функционированием центральной нервной системы, в выборках психически здоровых людей, а также в выборках больных шизофренией, биполярным расстройством, алкоголизмом и лиц, совершивших самоубийство.

Были поставлены следующие задачи:

1. Выбрать полиморфные локусы, имеющие ключевое значение для функционирования нейрохимических систем, либо локусы, сцепленные с предполагаемыми функциональными вариантами.

2. Разработать методы определения генотипов данных полиморфных маркеров.

3. Провести генотипирование образцов ДНК и установить распределение частоты аллелей генетических вариантов в используемых выборках.

4. Провести статистический анализ полученных данных для выявления ассоциации между генетическими, вариантами и психическими нарушениями, а также для оценки вклада генетических вариантов в вариативность психологических признаков.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Наследуемость особенностей поведения и психических заболеваний давно не вызывает сомнений. Несмотря на то, что поведение формируется под влиянием различных факторов, в том числе воспитания и социального окружения, генетическая составляющая также вносит свой вклад, величина которого зависит от рассматриваемого признака.

Например, наследуемость шизофрении достигает 85%, СДВГ - 76% и т.д.

Однако мало известно о конкретных вариантах ДНК, вызывающих те или иные нарушения, несмотря на то, что в последние годы было проведено огромное количество исследований, пытающихся обнаружить такую взаимосвязь. В общем случае ставится задача найти гены, полиморфные маркеры которых ассоциированы с тем или иным нарушением поведения либо с определёнными психологическими признаками. Однако, психические расстройства и психологические признаки зависят от нарушения сложных функций нервной системы, а их формирование зависит от взаимодействия множества генов. Вместе с тем мутации генов нервной системы имеют сложный и плейотропный эффект. Они приводят к большой гетерогенности психических нарушений, начиная от слабо выраженных и заканчивая значительными, полностью дезорганизующими поведение.

Всё это резко затрудняет исследования. Результат зависит от применяемого метода обработки данных, от выбора групп пациентов, от используемых психологических тестов.

Во многих работах демонстрируется, что исследуемый ген так или иначе связан с определённым психическим расстройством, но как правило отсутствуют чёткие выводы, позволяющие прогнозировать болезнь по генетическим признакам.

Практически в случае каждого кандидатного гена, способного регулировать поведение, встречаются взаимно противоречащие выводы о влиянии определённого полиморфизма на психику. Чем дольше изучается тот или иной полиморфный локус, тем больше имеется работ, подтверждающих его ассоциацию с тем или иным заболеванием, и работ, эту ассоциацию опровергающих.

Даже если выводы положительны, редко можно утверждать, что один из аллелей гена вызывает определённое поведение. Скорее следует говорить о вероятности встретить нарушения среди носителей аллеля. Часто эта вероятность не очень велика по сравнению с вероятностью для контрольной выборки.

Если число работ, затрагивающих определённый полиморфизм, достаточно велико, появляется возможность провести мета-анализ, то есть статистическое исследование, охватывающее несколько выборок, проверенных ранее. Но зачастую даже результаты мета-анализа не позволяют подтвердить наличие ассоциации. Например, мета-анализ был проведён для генов сероти-нэргической системы в работе (Anguelova, Benkelfat et al. 2003) но ни в одном случае не выявил достоверной ассоциации. В чём причина этой неудачи? Вероятно, для выявления взаимосвязи между генотипом и поведенческим фенотипом необходимо учитывать полиморфизм не одного гена, а нескольких, а также эффекты взаимодействия между ними.

Логичным будет предположить, что человек, несущий одновременно мутации генов рецептора и транспортёра серотонина, будет обладать другим фенотипом, нежели носитель лишь одной мутации. Также можно предположить, что мутация одного гена компенсирует в некоторых случаях эффект мутации другого гена.

Вместе с тем, одни и те же психические расстройства (особенно такие полиморфные как шизофрения), вероятно, могут быть вызваны различными мутациями, что опять же делает предпочтительным анализ определённого набора полиморфизмов. мутациями, что опять же делает предпочтительным анализ определённого набора полиморфизмов.

Помимо того, надо учитывать, что в большинстве случаев анализируются полиморфизмы, изменяющие структуру белка. Однако, существуют данные, указывающие, что функциональное значение могут иметь и другие полиморфизмы, например, меняющие пространственную структуру мРНК, или расположенные в генах, кодирующие регуляторные нетранслируемые РЕК. Так показано, что полиморфизмы С957Т и С1101А гена DRD2 меняют стабильность и скорость трансляции мРНК DRD2 (Perkins, Jeffries et al. 2005).

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Монахов, Михаил Владимирович

выводы

1. Проведено генотипирование 21 полиморфного маркера генов DRD2, СОМТ, HT2CR, NPY, DBH, DTNBP1, GABRA6, DAAO, INMT, HTR1B, DISCI, предположительно связанных с психологическими признаками и риском развития психических расстройств, в выборках психически здоровых людей и больных психическими заболеваниями из российской популяции.

2. Обнаружена ассоциация полиморфных маркеров гена рецептора дофамина D2 (rs 1800498, Ser311Cys, С939Т, С957Т, TaqlA) с шизофренией, идентифицированы аллели, генотипы и гаплотипы, связанные с риском развития этого заболевания.

3. Показано, что полиморфизм гена рецептора дофамина D2 rs 1800498 ассоциирован с алкоголизмом.

4. Выявлены гаплотипы гена рецептора дофамина D2, связанные с альтруистическим поведением.

5. Показано, что полиморфный маркер G444A гена DBH ассоциирован с избирательным зрительным вниманием как у больных шизофренией, так и у здоровых людей.

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ п.о. - пара оснований ДНК

ПЦР - полимеразная цепная реакция

СДВГ - синдром недостатка внимания с гиперактивностью (attention deficit/hyperactivity disorder) BD - bipolar disorder (биполярное расстройство, маниакально-депрессивный синдром)

СОМТ- ген катехол-О-метилтрансферазы DRD2 - ген дофаминового рецептора №2 DTNBPI — ген дистобревинсвязывающего белка 1

HRM - high resulution melt (распознавание фрагментов ДНК по температуре плавления)

HT2CR - ген серотонинового рецептора «2С»

HTR1B - ген серотонинового рецептора «1В»

MDD — major depresive disorder (общий депрессивный синдром)

NRG1 - ген нейрегулина 1

OR - odds ratio (соотношение шансов)

PEP - primer extension procedure (аллель-специфическое удлинение праймера на один нуклеотид)

R6G - 6-карбоксиродамин, флуоресцентный краситель SB - suicidal behavior (суицидальное поведение)

SNP - single nucleotide polymorphism (полиморфизм, выраженный в замене одного нуклеотида)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Были разработаны методы определения аллельных вариантов с помощью 5'-пуклеазного анализа, аллель-специфической ПЦР, ПЦР с распознаванием температур плавления ампликонов. Надёжность методов подтверждена с помощью прямого секвенирования и процедуры однонуклеотидного удлинения праймеров (PEP).

Впервые было проведено генотипирование ряда полиморфных локусов генов DRD2, DTNBP1, DBH, 2-HTCR, 2-HTRB, DISCI и других в выборках из российской популяции. Данные полиморфные маркеры были проанализированы в выборках больных шизофренией, алкоголизмом, биполярным расстройством, людей, совершивших самоубийство. Была проверена ассоциация между маркерами и различными характерными симптомами данных расстройств. Методами генетического анализа рассчитаны частоты гаплотипов и исследован характер сцепления между маркерами. Для нескольких маркеров была обнаружена ассоциация с риском развития шизофрении, алкоголизма, с различными когнитивными характеристиками.

Впервые был проведён анализ ассоциации ряда маркеров гена DRD2 с результатами экономической лабораторной игры «Диктатор». Выявлена ассоциация с гаплотипами.

Полученные результаты свидетельствую о корреляции между рядом генетических полиморфизмов и психическими заболеваниями. При подтверждении универсального характера данных корреляций в рамках определённой популяции результаты могут быть использованы при диагностике психических заболеваний, в генетическом консультировании, а также при медицинском обследовании лиц, профессиональная деятельность которых требует повышенной стрессоустойчивости.

Работа демонстрирует применимость методов 5'-нуклеазного анализа и HRM для генотипирования широкого спектра полиморфных маркеров типа SNP.

Работа апробирована на лабораторном семинаре в Лаборатории структуры и функции хромосом ИМБ РАН им. В.А.Энгельгардта. Результаты работы были представлены:

1) на 10-й Международной конференции «Стресс и поведение», Санкт-Петербург, Россия, 16-20 мая 2007 года;

2) на Конференции молодых учёных, аспирантов и студентов по молекулярной биологии и генетике, Киев, Украина, 20-22 сентября 2007 года;

3) на 15-м Всемирном конгрессе по психиатрической генетике, Нью-Йорк, США, 7-11 октября 2007 года;

4) на 1-й Конференции международного сообщества по исследованиям шизофрении, Венеция, Италия, 21-25 июня 2008 года.

По материалам диссертации опубликовано 3 статьи.

1. Монахов М.В., Голимбет В.Е., Чубабрия К.В., Зыков В.В., Ковтун А.Л., Карпов В.Л.Анализ ассоциации полиморфизма С939Т гена рецептора дофамина DRD2 с шизофренией. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова, 2007; 107: 10: 58-60.

2. Monakhov М, Golimbet V, Abramova L, Kaleda V, Karpov VL. Association study of three SNPs in the dopamine D2 receptor gene and schizophrenia in Russian population. Schizophrenia Research. 2008; 100 (1-3) 302307.

3. Монахов M.B., Алфимова M.B., Голимбет B.E., Чубабрия К.В., Шемякина Т.К., Юматова П.Е., Карпов В.Л. Полиморфный маркер G444A гена DBH ассоциирован с избирательным зрительным вниманием у больных шизофренией и психически здоровых людей. Медицинская генетика, 2008; 5: 26-29.

Также в сборниках материалов конференций были опубликованы следующие тезисы:

1. Monakhov М, Golimbet V, Chubabria К, Karpov V. Association between the C939T polymorphism of the dopamine receptor D2 gene and schizophrenia in Russian population. 10-th Jubilee Midtidisciplinary International Conference of Neuroscience and Biological Psychiatiy "Stress and Behaviour", St-Petersburg, Russia, May 16-20, 2007.

2. Monakhov M, Golimbet V, Alfimova M, Borozdina S, Evdokimova O, Karpov V. Association study of working memory and variants of genes DTNBP1, COMT, DBH and HT2CR. Conference for young scientists, PhD students and students on molecular biology and genetics. Kyiv, Ukraine, September 20-22, 2007.

3. Monakhov M, Golimbet V, Alfimova M, Borozdina S, Evdokimova O, Karpov V. Schizophrenia and polymorphisms of the genes DRD2, COMT, DBH, DTNBP1: association with diagnosis and selective attention in Russian population. XV Congress on Psychiatric Genetics, New York City, USA, October 7-11, 2007.

4. Mikhail Monakhov, Vera Golimbet, K. Chubabria, D. Dmitriev, A. Barkha-tova, N. Ivanova, Vadim Karpov. Association of DRD2 Ser311Cys polymorphism and DRD2 haplotypes with schizophrenia in Russians. 1st Schizophrenia International Research Society Conference, Venice, Italy, June 21-25, 2008.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Монахов, Михаил Владимирович, 2009 год

1. Голимбет В.Е. (2004). "Геномика в психологии и психиатрии" Молекулярная биология 2004.-38.-№1.-165-170.

2. Aberg, К., P. Saetre, et al. (2006). "Human QKI, a potential regulator of mRNA expression of human oligodendrocyte-related genes involved in schizophrenia." Proc Natl Acad Sci U S A 103(19): 7482-7.

3. Abi-Dargham, A., J. Rodenhiser, et al. (2000). "Increased baseline occupancy of D2 receptors by dopamine in schizophrenia." Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97: 8104-8109.

4. Allen, N., S. Bagade, et al. The SchizophreniaGene Database. Schizophrenia Research Forum. Available at:http://www.schizophreniaforum.org/res/sczgene/default.asp. Accessed date of access.

5. Anguelova, M., C. Benkelfat, et al. (2003). "A systematic review of association studies investigating genes coding for serotonin receptors and the serotonin transporter: I. Affective disorders." Molecular Psychiatry 8: 574-591.

6. Aoyama, N., N. Takahashi, et al. (2006). "Association study between kynurenine 3-monooxygenase gene and schizophrenia in the Japanese population." Genes. Brain & Behavior 5(4): 364.

7. Apud, J., V. Mattay, et al. (2007). "Tolcapone improves cognition and cortical information processing in normal human subjects." Neuropsychophar-macobgy 32(5): 1011-20.

8. Arinami, Т., M. Gao, et al. (1997). "A functional polymorphism in the promoter region of the dopamine D2 receptor gene is associated with schizophrenia." Hum Mol Genet. 6(4): 577-82.

9. Bellivier, F., P. Chaste, et al. (2004). "Association Between the TPH Gene A218C Polymorphism and Suicidal Behavior: A Meta-Analysis." American Journal of Medical Genetics Part В (Neuropsychiatric Genetics) 124B: 8791.

10. Blasi, G., V. Mattay, et al. (2005). "Effect of catechol-O-methyltransferase vall58met genotype on attentional control." J Neurosci 25(20): 5038-45.

11. Bobb, A. J., A. M. Addington, et al. (2005). "Support for Association Between СДВГ and Two Candidate Genes: NET1 and DRD1." American Journal of Medical Genetics Part В (Neuropsychiatric Genetics) 134B(67-72).

12. Bogaert, A. V. D., J. Schumacher, et al. (2003). "The DTNBP1 (Dysbindin) Gene Contributes to Schizophrenia, Depending on Family History of the Disease." Am. J. Hum. Genet. 73: 1438-1443.

13. Bourgeron, T. and B. Giros Genetic Markers in Psychiatric Genetics. Methods in Molecular Medicine, vol. 77: Psychiatric Genetics: Methods and Reviews. M. Leboyer and F. Bellivier. Totowa, NJ, Humana Press Inc.

14. Breen, G., J. Brown, et al. (1999). "-141 С del/ins polymorphism of the dopamine receptor 2 gene is associated with schizophrenia in a British population." Am J Med Genet. 88(4): 407-10.

15. Brennan, M. and J. Condra (2005). "Transmission disequilibrium suggests a role for the sulfotransferase-4Al gene in schizophrenia." Am J Med Genet В Neuropsvchiatr Genet. 139(1): 69-72.

16. Brookes, K.-J., X. Xu, et al. (2005). "No evidence for the association of DRD4 with СДВГ in a Taiwanese population within-family study." BMC Medical Genetics 6: 31.

17. Burdick, К., T. Lencz, et al. (2006). "Genetic variation in DTNBP1 influences general cognitive ability." Hum Mol Genet. 15(10): 1563-8.

18. Caldu, X., P. Vendrell, et al. (2007). "Impact of the COMTV all08/158 Met and DAT genotypes on prefrontal function in healthy subjects." Neuroimage 37(4): 1437-44.

19. Callicott, J. H., R. E. Straub, et al. (2005). "Variation in DISCI affects hip-pocampal structure and function and increases risk for schizophrenia." PNAS 102(24): 8627-8632.

20. Chen, J., В. K. Lipska, et al. (2005). "Functional analysis of genetic variation in catechol-O-methyltransferase (COMT): effects on mRNA, protein, and enzyme activity in postmortem human brain." Am J Hum Genet 75(5): 807-21.

21. Collier, D. A. and T. Li (2003). "The genetics of schizophrenia: glutamate not dopamine?" European Journal of Pharmacology 480: 177- 184.

22. Courtet, P., F. Jollant, et al. (2005). "Suicidal Behavior: Relationship Between Phenotype and Serotonergic Genotype." American Journal of Medical Genetics Part С (Semin. Med. Genet.) 133C: 25-33.

23. Craddock, N., M. C. O'Donovan, et al. (2005). "The genetics of schizophrenia and bipolar disorder: dissecting psychosis." J Med Genet 42: 193-204.

24. Cubells, J., D. v. Kammen, et al. (1998). "Dopamine beta-hydroxylase: two polymorphisms in linkage disequilibrium at the structural gene DBH associate with biochemical phenotypic variation." Hum Genet 102(5): 533-40.

25. Cucherat, M., J. Boissel, et al. (1997). "EasyMA: a program for the metaanalysis of clinical trials." Computer Methods and Programs in Biomedecine 53: 187-190.

26. Damberg, M., С. Berggard, et al. (2003). "Transcription Factor AP-2? Genotype associated with Anxiety-Related Personality Traits in Women." Neuropsychobiology 48: 169-175.

27. Dong, E., R. C. Agis-Balboa, et al. (2005). "Reelin and glutamic acid decar-boxylase67 promoter remodeling in an epigenetic methionine-induced mouse model of schizophrenia." PNAS 102(35): 12578-12583.

28. Duan, J., M. S. Wainwright, et al. (2003). "Synonymous mutations in the human dopamine receptor D2 (DRDI) affect mRNA stability and synthesis о Г the receptor." Human Molecular Genetics 12(3): 205-216.

29. Dubeitret, C., L. Gouya, et al. (2004). "The 3' region of the DRD2 gene is involved in genetic susceptibility to schizophrenia." Schizophr Res 67(1): 75-85.

30. Dudbridge, F. (2008). "Likelihood-Based Association Analysis for Nuclear Families and Unrelated Subjects with Missing Genotype Data." Human Heredity 66: 87-98.

31. Erblich, J., C. Lerman, et al. (2004). "Stress-induced cigarette craving: effects of the DRD2 TaqI RFLP and SLC6A3 VNTR polymorphisms." The Pharmacogenomics Journal 4: 102-109.

32. Excoffier, L., G. Laval, et al. (2.005). "Arlequin ver. 3.0: An integrated software package for population genetics data analysis." Evolutionary Bioin-formatics Online 1: 47-50.

33. Faraone, S. V., R. H. Perlis, et al. (2005). "Molecular Genetics of Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder." BIOL PSYCHIATRY 25(11): 1313-23.

34. Faul, Т., M. Gawlik, et al. (2005). "ZDHHC8 as a candidate gene for schizophrenia: analysis of a putative functional intronic marker in case-control and family-based association studies." BMC Psychiatry 5: 35.

35. Fehr, C., N. Grintschuk, et al. (2000). "The HTR1B 861G>C receptor polymorphism among patients suffering from alcoholism, major depression, anxiety disorders and narcolepsy." Psychiatry Research 97: 1-10.

36. Fehr, С., T. Sander, et al. (2006). "Confirmation of association of the GABRA2 gene with alcohol dependence by subtype-specific analysis." Psychiatric Genetics 16(1): 9-17.

37. Freedman, R. Electrophysiological Phenotypes. Methods in Molecular Medicine, vol. 77: Psychiatric Genetics: Methods and Reviews. M. Leboyer and F. Bellivier. Totowa, NJ, Humana Press Inc.

38. Funke, В., С. Т. Finn, et al. (2004). "Association of the DTNBP1 Locus with Schizophrenia in a U.S. Population." Am. J. Hum. Genet. 75: 891-898.

39. Gerra, G., L. Garofano, et al. (2005). "Serotonin transporter promoter polymorphism genotype is associated with temperament, personality traits and illegal drugs use among adolescents." J Neural Transm 112(10): 1397-410.

40. Glatt, S., S. Faraone, et al. (2004). "DRD2 -141C insertion/deletion polymorphism is not associated with schizophrenia: results of a meta-analysis." Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 128(1): 21-3.

41. Glatt, S. and E. Jonsson (2006). "The Cys allele of the DRD2 Ser31 ICys polymorphism has a dominant effect on risk for schizophrenia: evidence from fixed- and random-effects meta-analyses." Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 141(2): 149-54.

42. Golimbet, V., M. Aksenova, et al. (2001). "Dopamine receptor gene (.DRD2) polymorphism in patients with endogenous psychoses with regard to their clinical heterogeneity." Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova. 101(11): 503.

43. Golimbet, V., M. Aksenova, et al. (2003). "Analysis of the linkage of the Taql A and TaqlB loci of the dopamine D2 receptor gene with schizophrenia in patients and their siblings." Neurosci Behav Physiol 33(3): 223-5.

44. Gornick, M., A. Addington, et al. (2005). "Dysbindin (DTNBP1, 6p22.3) is Associated with Childhood-Onset Psychosis and Endophenotypes Measured by the Premorbid Adjustment Scale (PAS)." J Autism Dev Disord. 35(6): 831-8.

45. Hanninen, К., H. Katila, et al. (2006). "Association between the C957T polymorphism of the dopamine D2 receptor gene and schizophrenia." Neu-roscience Letters 407: 195-198.51 .Hashimoto, R., T. Numakawa, et al. (2006). "Impact of the DISCI

46. Ser704Cys polymorphism on risk for major depression, brain morphology, and ERK signaling." Hum Mol Genet.: Epub ahead of print.

47. Heils, A., A. Teufel, et al. (1996). "Allelic Variation of Human Serotonin Transporter

48. Gene Expression." J. Neurochem 66(6): 2621.

49. Heinrichs, R. (2004). "Meta-analysis and the science of schizophrenia: variant evidence or evidence of variants?" Neurosci Biobehav Rev 28(4): 37994.

50. Himei, A., J. Koh, et al. (2002). "The influence on the schizophrenic symptoms by the Z}KZ)2Ser/Cys311 and -141C Ins/Del polymorphisms." Psychiatry Clin Neurosci 56(1): 97-102.

51. Hinrichs, A., J. Wang, et al. (2006). "Functional variant in a bitter-taste receptor (hTAS2R16) influences risk of alcohol dependence." Am J Hum Genet 78(1): 103-11.

52. Hirvonen, J., T. v. Erp, et al. (2005). "Increased caudate dopamine D2 receptor availability as a genetic marker for schizophrenia." Arch Gen Psychiatry. 62(4): 371-8.

53. Hodgkinson, С. A., D. Goldman, et al. (2004). "Disrupted in Schizophrenia 1 (DISCI): Association with Schizophrenia, Schizoaffective Disorder, and Bipolar Disorder." Am. J. Hum. Genet. 75: 862-872.

54. Hoenicka, J., M. Aragues, et al. (2006). "C957T DRD2 polymorphism is associated with schizophrenia in Spanish patients." Acta Psychiatr Scand 114: 435-438.

55. Huang, Y.-y., S. P. Cate, et al. (2004). "An Association between a Functional Polymorphism in the Monoamine Oxidase A Gene Promoter, Impulsive Traits and Early Abuse Experiences." Neuropsychopharmacology 29: 1498-1505.

56. Huang, Y.-y., M. A. Oquendo, et al. (2003). "Substance Abuse Disorder and Major Depression are Associated with the Human 5-HT1B Receptor Gene

57. СHTR1B) G861C Polymorphism." Neuropsychopharmacology 28: 163-169.

58. Jonsson, E. G., A. Sille'n, et al. (2003). "Dopamine D2 Receptor Gene Ser31 ICys Variant and Schizophrenia: Association Study and Meta-Analysis." American Journal of Medical Genetics Part В (Neuropsychiatric Genetics) 119B: 28-34.

59. Katsu, Т., H. Ujike, et al. (2003). "The human frizzled-3 (FZD3) gene on chromosome 8p21, a receptor gene for Wnt ligands, is associated with the susceptibility to schizophrenia." Neuroscience Letters 353(1): 53-56.

60. Kieling, С., T. Roman, et al. (2006). "Association between DRD4 gene and performance of children with СДВГ in a test of sustained attention." Biol Psychiatry 60(10): 1163-5.

61. Kitahama, K., N. Sakamoto, et al. (1996). "Dopamine-beta-hydroxylase and tyrosine hydroxylase immunoreactive neurons in the human brainstem." J Chem Neuroanat 10(2): 137-46.

62. Kobayashi, K., Y. Kurosawa, et al. (1989). "Human dopamine beta-hydroxylase gene: two mRNA types having different З'-terminal regions are produced through alternative polyadenylation." Nucleic Acids Res 17(3): 1089-102.

63. Konradi, С., M. Eaton, et al. (2004). "Molecular Evidence for Mitochondrial Dysfunction in Bipolar Disorder." Arch Gen Psychiatry. 61: 300-308.

64. Kopeckova, M., I. Paclt, et al. (2006). "Polymorphisms of dopamine-beta-hydroxylase in СДВГ children." Folia Biol (Praha) 52(6): 194-201.

65. Kotler, M., P. Barak, et al. (1999). "Homicidal behavior in schizophrenia associated with a genetic polymorphism determining low catechol O-methyltransferase (COMT) activity." Am J Med Genet 88(6): 628-633.

66. Kukreti, R., S. Tripathi, et al. (2006). "Association of DRD2 gene variant with schizophrenia." Neuroscience Letters 392(1-2): 68-71.

67. Kunugi, H., R. Hashimoto, et al. (2006). "Possible association between non-synonymous polymorphisms of the anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene and schizophrenia in a Japanese population." J Neural Transm: Epub ahead of print.

68. Lawford, В., R. Young, et al. (2005). "The C/C genotype of the C957T polymorphism of the dopamine D2 receptor is associated with schizophrenia." MdzophrRes^73(1): 31-7.

69. Lencz, Т., D. Robinson, et al. (2006). "DRD2 promoter region variation as a predictor of sustained response to antipsychotic medication in first-episode schizophrenia patients." Am J Psychiatry 163(3): 529-31.

70. Lerer, В., F. Macciardi, et al. (2001). "Variability of 5-HT2C receptor cys23ser polymorphism among European populations and vulnerability to affective disorder." Molecular Psychiatry 6: 579-585.

71. Li, C., Y. Zheng, et al. (2006). "A family-based association study of kinesin heavy chain member 2 gene (KIF2) and schizophrenia." Neuroscience Letters Epub ahead of print.

72. Li, D., D. Collier, et al. (2006). "Meta-analysis shows strong positive association of the neuregulin 1 (NRG1) gene with schizophrenia." Hum Mol Genet. 15(12): 1995-2002.

73. Lindemann, L. and M. C. Hoener (2005). "A renaissance in trace amines inspired by a novel GPCR family." TRENDS in Pharmacological Sciences 26(5): 274-281.

74. Lo, W.-S., M. Harano, et al. (2006). "GABRB2 Association with Schizophrenia: Commonalities and Differences Between Ethnic Groups and Clinical Subtypes." Biological Psychiatry: Article in Press, Corrected Proof.

75. Lowe, N., A. Kirley, et al. (2004). "Joint Analysis of the DRD5 Marker Concludes Association with Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder Confined to the Predominantly Inattentive and Combined Subtypes." Am. J. Hum. Genet 74: 348-356.

76. MacDonald, A., C. Carter, et al. (2007). "COMT val 158Met and executive control: a test of the benefit of specific deficits to translational research." J Abnorm Psychol 116(2): 306-12.

77. Malhotra, A., L. Kestler, et al. (2002). "A functional polymorphism in the COiVIT gene and performance on a test of prefrontal cognition." Am J Psychiatry 159(4): 652-4.

78. Mannuzza, S., R. G. Klein, et al. (1998). "Adult Psychiatric Status of Hyperactive Boys Grown Up." Am J Psychiatry 155: 493-498.

79. Manuck, S. В., J. D. Flory, et al. (2000). "A regulatory polymorphism of the monoamine oxidase-A gene may be associated with variability in aggression, impulsivity, and central nervous system serotonergic responsivity." Psychiatry Research 95: 9-23.

80. Marino, C., L. Vanzin, et al. (2004). "An Assessment of Transmission Disequilibrium Between Quantitative Measures of Childhood Problem Behaviors and DRD2/Tac\i and DRD4/48bp-repeat Polymorphisms." Behavior Genetics 34(5): 495-502.

81. Massat, I., D. Soueiy, et al. (2004). "Association between COMT (Vall58Met) functional polymorphism and early onset in patients with major depressive disorder in a European multicenter genetic association study." Molecular Psychiatry 10(6): 598-605.

82. Massat, I., D. Soueiy, et al. (2002). "Excess of allelel for ?3 subunit GABA receptor gene (GABRA3) in bipolar patients: a multicentric association study." Molecular Psychiatry 7: 201-207.

83. Matsumoto, С., T. Shinkai, et al. (2005). "Association between three funcitional polymorphisms of the dopamine D2 receptor gene and polydipsia in schizophrenia." Int J Neuropsychopharmacol. 8(2): 245-53.

84. McGorry, P., C. Mihalopoulos, et al. (1995). "Spurious precision: procedural validity of diagnostic assessment in psychotic disorders." Am J Psychiatry. 152(2): 220-3.

85. Muhle, R., S. V. Trentacoste, et al. (2005). "The Genetics of Autism." Pediatrics 113: 472-486.

86. Munafo, M. R., L. Bowes, et al. (2005). "Lack of association of the COMT Vail 58/108 Met) gene and schizophrenia: a meta-analysis of case-control studies." Molecular Psychiatry advance online publication,: 1-6.

87. Munafo, M. R., E. C. Johnstone, et al. (2005). "Association between the DRD2 gene TaqlA (C32806T) polymorphism and alcohol consumption in social drinkers." Pharmacogenomics Journal 5: 96-101.

88. Mundo, E., M. A. Richter, et al. (2000). "Is the 5-HT1D? Receptor Gene Implicated in the Pathogenesis of Obsessive-Compulsive Disorder?" Am J Psychiatry 157: 1160-1161.

89. Nakamura, К., K. Yamada, et al. (2006). "Evidence that variation in the peripheral benzodiazepine receptor (PBR) gene influences susceptibility to panic disorder." Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 141(3): 222-6.

90. Nakazono, Y., H. Abe, et al. (2005). "Association between neuroleptic drug-induced extrapyramidal symptoms and dopamine D2-receptor polymorphisms in Japanese schizophrenic patients." Int J Clin Pharmacol Ther 43(4): 163-71.

91. New, A. S., J. G. Goodman, et al. (2001). "Suicide, Impulsive Aggression, and HTR1B Genotype." Biol Psychiatry 50: 62-65.

92. Noble, E. P. (2003). "D2 Dopamine Receptor Gene in Psychiatric and Neurologic Disorders and Its Phenotypes." Journal of Medical Genetics Part В (Neuropsychiatry Genetics) 116B: 103-125.

93. Oades, R., B. Ropcke, et'al. (2005). "Neuropsychological measures of attention and memory function in schizophrenia: relationships with symptom dimensions and serum monoamine activity." Behavioral and Brain Functions 1: 14.

94. Oh, K., D. Shin, et al. (2003). "Dopamine transporter genotype influences the attention deficit in Korean boys with СДВГ." Yonsei Med J 44(5): 787-92.

95. Ohara, К., M. Nagai, et al. (1998). "Functional polymorphism of -141С Ins/Del in the dopamine D2 receptor gene promoter and schizophrenia." Psychiatry Res. 81(2): 117-23.

96. Opgen-Rhein, C., A. Neuhaus, et al. (2008). "Executive Attention in Schizophrenic Males and the Impact of COMT Vail08/158Met Genotype on Performance on the Attention Network Test." Schizophr Bull article in press.

97. Parasuraman, R., P. Greenwood, et al. (2005). "Beyond heritability: neurotransmitter genes differentially modulate visuospatial attention and working memory." Psychol Sci 16(3): 200-7.

98. Payton, A., J. Holmes, et al. (2001). "Susceptibility genes for a trait measure of attention deficit hyperactivity disorder: a pilot study in a nonclinical sample of twins." Psychiatry Res. 105(3): 273-8.

99. Perkins, D. О., C. Jeffries, et al. (2005). "Expanding the 'central dogma': the regulatory role of nonprotein coding genes and implications for the genetic liability to schizophrenia." Molecular Psychiatry 10: 69-78.

100. Preisig, M., F. Bellivier, et al. (2000). "Association Between Bipolar Disorder and Monoamine Oxidase A Gene Polymorphisms: Results of a Multicenter Study." Am J Psychiatry 157: 948-955.

101. Riley, B. and K. S. Kendler (2006). "Molecular genetic studies of schizophrenia." European Journal of Human Genetics 14: 669-680.

102. Rodriguez-Jimenez, R., J. Hoenicka, et al. (2006). "Performance in the Wisconsin Card Sorting Test and the C957T polymorphism of the DRD2 gene in healthy volunteers." Neuropsychobiology 54(3): 166-70.

103. Sabol, S. Z., S. Hu, et al. (1998). "A functional polymorphism in the monoamine oxidase A gene promoter." Hum Genet 103: 273-279.

104. Sazci, A., E. Ergul, et al. (2003). "Methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphisms in patients with schizophrenia." Molecular Brain Research 117: 104-107.

105. Scharfetter, J. (2004). "Pharmacogenetics of dopamine receptors and response to antipsychotic drugs in schizophrenia—an update." Pharmacogenomics. 5(6): 691-8.

106. Schmidt, L. G., H. Harms, et al. (1998). "Modification of Alcohol Withdrawal by the A9 Allele of the Dopamine Transporter Gene." Am J Psychiatry 155: 474-478.

107. Schwab, S. G., M. Knapp, et al. (2003). "Support for Association of Schizophrenia with Genetic Variation in the 6p22.3 Gene, Dysbindin, in Sib-Pair Families with Linkage and in an Additional Sample of Triad Families." Am. J. Hum. Genet. 72: 185-190.

108. Severinsen, J., T. Als, et al. (2006). "Association analyses suggest GPR24 as a shared susceptibility gene for bipolar affective disorder and schizophrenia." Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 141(5): 524-33.

109. Shimizu, H., Y. Iwayama, et al. (2006). "Genetic and expression analyses of the STOP (MAP6) gene in schizophrenia." Schizophrenia Research 84(2-3): 244-252.

110. Spurlock, G., J. Williams, et al. (1998). "European Multicentre Association Study of Schizophrenia: a study of the DRD2 Ser31 ICys and DRD3 Ser9Gly polymorphisms." Am J Med Genet. 81(1): 24-8.

111. Stefansson, H., J. Sarginson, et al. (2003). "Associationof-Neuregulin 1 withSchizophreniaConfirmedinaScottish Population." Am.J.Hum.Genet. 72: 83-87.

112. Stefansson, H., E. Sigurdsson, et al. (2002). "Neuregulinl andSuscep-tibilitytoSchizophrenia." Am.J.Hum.Genet. 71: 877-892.

113. Straub, R., В. Lipska, et al. (2007). "Allelic variation in GAD1 (GAD67) is associated with schizophrenia and influences cortical function and gene expression." Mol Psychiatry 12(9): 854-69.

114. Straub, R. E., Y. Jiang, et al. (2002). "Genetic Variation in the 6p22.3 Gene DTNBP1, the Human Ortholog of the Mouse Dysbindin Gene, Is Associated with Schizophrenia." Am. J. Hum. Genet. 71: 337-348.

115. Sullivan, P. F. (2005). "The Genetics of Schizophrenia." PLoS Medicine 2(7): 614-8.

116. Talkowski, M., H. Seltman, et al. (2006). "Evaluation of a susceptibility gene for schizophrenia: genotype based meta-analysis of RGS4 polymorphisms from thirteen independent samples." Biol Psychiatry 60(2): 15262.

117. Ucok, A., H. Alpsan, et al. (2007). "Association of a serotonin receptor 2A gene polymorphism with cognitive functions in patients with schizophrenia." Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet 144(5): 704-7.

118. Walss-Bass, C., W. Liu, et al. (2006). "A Novel Missense Mutation in the Transmembran Domain of Neuregulin 1 is Associated with Schizophrenia." BIOL PSYCHIATRY 60(6): 548-53.

119. Wang, E., Y.-C. Ding, et al. (2004). "The Genetic Architecture of Selection at the Human Dopamine Receptor D4 (DRD4) Gene Locus." Am. J. Hum. Genet. 74: 931-944.

120. Wang, Z., J. Wei, et al. (2006). "A review and re-evaluation of an association between the NOTCH4 locus and schizophrenia." Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet.: Epub ahead of print.

121. Webster, R. A. (2001). Schizophrenia. Neurotransmitters, Drugs and Brain Function. R. A. Webster. New York, John Wiley & Sons Ltd: 351374.

122. Woodward, N., K. Jayathilake, et al. (2007). " COMT vail 08/15 8met genotype, cognitive function, and cognitive improvement with clozapine in schizophrenia." Schizophr Res 90(1-3): 86-96.

123. Wu, S.-n., R. Gao, et al. (2006). "Association of DRD2 polymorphisms and chlorpromazine-induced extrapyramidal syndrome in Chinese schizophrenic patients." Acta Pharmacologica Sinica 27(8): 966.

124. Xu, H., C. Kellendonk, et al. (2007). "DRD2 C957T polymorphism interacts with the COMT Vail58Met polymorphism in human working memory ability." Schizophr Res 90(1-3): 104-7.

125. Yang, J., T. Si, et al. (2003). "Association study of the human FZD3 locus with schizophrenia." Biological Psychiatry 54(11): 1298-1301.

126. Yang, J. Z., Т. M. Si, et al. (2003). "Association study of neuregulin 1 gene with schizophrenia." Molecular Psychiatry 8(7): 706-709.

127. Zai, C., R. Hwang, et al. (2006). "Association study of tardive dyskinesia and twelve DRD2 polymorphisms in schizophrenia patients." Int J Neuropsychopharmacol. 10(5): 639-51.

128. Zhang, H., G. Ju, et al. (2006). "A combined effect of the KPNA3 and KPNB3 genes on susceptibility to schizophrenia." Neuroscience Letters 402(1-2): 173-175.

129. Zhao, J., E. Boerwinkle, et al. (2005). "An Entropy-Based Statistic for Genomewide Association Studies." Am. J. Hum. Genet. 77: 27-40.

130. Zhao, X., Y. Shi, et al. (2004). "A case control and family based association study of the neuregulinl gene and schizophrenia." J. Med. Genet. 41: 31-34.

131. Zhu, Q.-s., J. Grimsby, et al. (1992). "Promoter Organization and Activity of Human Monoamine Oxidase (MAO) A and В Genes." The Journal of Neuroscience 12(11): 4437-4446.1. БЛАГОДАРНОСТИ

132. Я хочу поблагодарить своих научных руководителей Вадима Львовича Карпова и Веру Евгеньевну Голимбет — за помощь и поддержку, которую они оказывали мне в течение нескольких лет работы.

133. Также я благодарен всем сотрудникам, аспирантам и студентам лаборатории Структуры и функции хроматина ИМБ РАН лаборатории Клинической генетики НЦПЗ РАМН за дружеское отношение и участие в обсуждении результатов.

134. Выражаю благодарность Анатолию Леонидовичу Ковтуну за неоценимую помощь в проведении работы.

135. Отдельное спасибо хотелось бы сказать Вере Николаевне Сенченко и Андрею Борисовичу Полтараусу, а также их студентам и аспирантам Екатерине Анедченко, Анне Кудрявцевой, Софье Малахо и другим - за помощь при генотипировании.

136. Спасибо всем участникам форума www.molbiol.rn, в частности Игорю Орловскому, которые оказывали мне помощь при работе с литературой.

137. Благодарю П.Л. Иванова за любезно предоставленную методику выделения ДНК из волосяных луковиц.