Молекулярно-генетическое изучение зависимости от психоактивных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат биологических наук Фасхутдинова, Гульназ Габдулахатовна

• Фасхутдинова, Гульназ Габдулахатовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фасхутдинова, Гульназ Габдулахатовна

Введение

Глава 1. Литературный обзор \ i

1.1. Эпидемиология алкоголизма и опийной наркомании \ i

1.2. Патогенез зависимости от ПАВ

1.3. Гены предрасположенности к зависимости от ПАВ

1.3.1. Гены ферментов метаболизма этанола

1.3.2. Гены нейромедиаторных систем мозга

1.3.3. Гены эндогенной опиоидной системы мозга

1.4. Роль микроРНК в норме и в патологии

1.4.1. Роль мкРНК в развитии и функционировании нервной системы

1.4.2. МикроРНК и нейропсихические заболевания

1.4.3. Алкоголь и микроРНК

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Материалы исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1. Выделение геномной ДНК

2.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК

2.2.3. Рестрикционный анализ

2.2.4. Метод электрофореза

2.2.5. Эксперименты на модельных объектах

2.2.6. Выделение тотальной РНК

2.2.7. Синтез кДНК с помощью реакции обратной транскрипции

2.2.8. Полимеразная цепная реакция в реальном времени

2.2.9. Статистическая обработка полученных результатов

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов rsl229984 гена ADH1B и rs698 гена ADH1С с хроническим алкоголизмом

3.2. Анализ полиморфного варианта rs 1229984 гена алкогольдегидрогеназы ADH1B в различных популяциях России

3.3. Анализ ассоциаций гаплотипов генов алкогольдегидрогеназ, составленных на основе полиморфных вариантов rs2066701 гена ADH1B и rsl789920, rs 1693425, rs698 гена ADH1C, с хроническим алкоголизмом

3.4. Анализ ассоциаций полиморфного VNTR локуса гена DRD4 с хроническим алкоголизмом и опийной наркоманией

3.5. Анализ ассоциаций полиморфного варианта rs6318 гена HTR2C с хроническим алкоголизмом и опийной наркоманией

3.6. Анализ ассоциаций полиморфного варианта rs3823010 гена OPRM1 с хроническим алкоголизмом и опийной наркоманией

3.7. Анализ ассоциаций полиморфного VNTR локуса гена PDYN с хроническим алкоголизмом и опийной наркоманией

3.8. Анализ уровня экспрессии генов микроРНК при воздействии этанола

3.9. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов, расположенных в сайтах связывания микроРНК, с зависимостью от ПАВ

3.9.1. Анализ ассоциаций полиморфного варианта rs7928656 в гене KCTD14, находящегося в сайте связывания мкРНК-9, с хроническим алкоголизмом

3.9.2. Анализ ассоциаций полиморфного варианта rs3453 в гене KCNE1, находящегося в сайте связывания мкРНК-153 и мкРНК-368, с хроническим алкоголизмом

3.9.3. Анализ ассоциаций полиморфного варианта rs2235749 в гене PDYN, находящегося в сайте связывания мкРНК-448 и мкРНК-567, с хроническим алкоголизмом и опийной наркоманией

3.10. Анализ межгенных взаимодействий в формировании наследственной предрасположенности к развитию хронического алкоголизма и опийной наркомании

3.10.1. Анализ межгенных взаимодействий в формировании предрасположенности к развитию хронического алкоголизма и опийной наркомании у русских из РБ

3.10.2. Анализ межгенных взаимодействий в формировании предрасположенности к развитию хронического алкоголизма у татар из РБ

3.10.3. Анализ межгенных взаимодействий в формировании предрасположенности к развитию хронического алкоголизма у якутов из РС(Я)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическое изучение зависимости от психоактивных веществ»

Зависимости от психоактивных веществ (ПАВ) - хронические психические расстройства, лечение которых на сегодняшний день проходит с применением малоэффективных методов вследствие их нецеленаправленного действия.

Согласно мировой статистике аддиктивные расстройства входят в первую десятку причин смертности и представляют важную социальную проблему в большинстве стран мира. Показатель заболеваемости хронического алкоголизма (ХА) в Российской Федерации по итогам 2008 года составил 1513,1 на 100 тысяч населения, показатель распространенности составил 1593,3 на 100 тысяч населения, или 1,9% от общей численности населения [Тумусов и соавт., 2009]. Согласно Всемирному докладу по наркотическим веществам [World Drug Report, 2009] показатель потребления опийных наркотиков в Российской Федерации намного превышает таковой в большинстве Азиатских и Европейских стран и составляет 1,64% населения в возрасте от 15 до 64 лет.

Высокая распространенность и неуклонный рост зависимости от ПАВ, а также высокая степень развития тяжелой инвалидизирующей психической патологии (деменции) у больных наркоманией определяют важное социально-экономическое и медицинское значение этой проблемы, необходимость исследования механизмов развития данного заболевания с целью разработки эффективных методов профилактики и патогенетической терапии.

Несмотря на общепринятые представления, большинство людей, пробующих наркотики, не приобретают зависимость от них. Однако существует группа индивидов, которые легко становятся зависимыми от ПАВ, причём, они характеризуются наличием определённых коморбидных состояний: таких, как высокий уровень стремления к новым впечатлениям и антисоциальное поведение [Hiroi and Agatsuma, 2005]. Обширнейшая информация по семейным, близнецовым исследованиям, методу приёмных детей, свидетельствует, что генетические факторы играют значительную роль в возникновении зависимости от ПАВ. Подсчитано, что коэффициент наследуемости алкоголизма варьирует от 39% до 60% (в различных исследованиях), наследуемость кокаиновой зависимости (КЗ) составляет 50%, а опийной наркомании (ОН) - 40% [Ball et al., 2004].

За предрасположенность к развитию зависимости от ПАВ отвечают множество генов, взаимодействующих между собой и с факторами окружающей среды. Полиморфные варианты генов, которые кодируют белки, вовлечённые в механизм действия наркотиков, особенно, если в результате их экспрессии образуются отличные количества белка или возникает иная его форма, могут быть ответственны за наблюдаемые различия между индивидами в их физиологических, биохимических и поведенческих реакциях на действие наркотиков. Изучение структурных особенностей генома, предрасполагающих к развитию различных многофакторных заболеваний, особенно, с использованием значительного числа полиморфных локусов, позволяет оценить их вклад в этиопатогенез и разрабатывать профилактические мероприятия [Uhl et al., 2001; Bierut et al., 2010].

Формирование зависимости от ПАВ рассматривается сейчас и на уровне клеточных и субклеточных механизмов - экспрессии генов, изменения активности внутриклеточных ферментов, концентрации ионов в клетке. К настоящему времени выяснены функции нескольких сотен генов, экспрессирующихся в клетках головного мозга, и определены возможные кандидатные гены, что даёт широкие возможности для исследования молекулярно-генетических основ алкоголизма и наркомании [Бочков и соавт. 2003; Kalsi, 2008]. Благодаря исследованиям, проведенным путем сравнения экспрессии генов у больных и в контроле с помощью биочипов, обнаружено изменение экспрессии многих генов в ответ на употребление наркотиков, в различных областях головного мозга [Rhodes et al., 2005; Pignataro et al., 2009]. Подобные нарушения могут быть обусловлены изменением в клетках уровня микроРНК (мкРНК) - недавно открытых регуляторов генной экспрессии [Рогаев, 2008]. Структурная идентификация кластеров генома, вовлеченных в экспрессию при наркомании и алкоголизме, доказана в отношение рецепторов и ферментов метаболизма нейромедиаторов, белков, вовлеченных в процессы экзоцитоза нейромедиаторов, а также ионных каналов. Нарушения экспрессии генома, индуцируемые наркотиками, выявлены для белков, имеющих отношение к пластическим процессам, системам детоксикации [Rhodes et al., 2005; Worst, Vrana, 2005].

Плодотворным подходом к исследованию наследственной предрасположенности к ХА и ОН является изучение ассоциаций между полиморфными локусами генов-кандидатов и заболеваниями с учетом этнической принадлежности исследованных [Bishop et al., 2000]. Известно, что генетическая структура этноса включает сумму частот вариантов самых разных генов, а частота того или иного генотипа является результатом отбора по какому-либо признаку, зависящему от социально-демографических, климатических и прочих факторов. В настоящее время доказано существование расовых различий в реакциях на психоактивные вещества, наиболее распространенными из которых являются алкоголь и опиаты. Так, у лиц южно-азиатской расы снижена переносимость этанола [Brennan, 2004; Eng, 2007]. Негроиды и некоторые этнические группы Юго-Восточной Азии отвечают возбуждением на те опийные алкалоиды, которые вызывают седацию у белых [Каплан, Сэдок, 1994; Пятницкая, 1994].

Число работ, посвященных анализу ассоциаций ДНК-полиморфных локусов с риском развития ХА и ОН в Республике Башкортостан (РБ) и в Республике Саха (Якутия) (РС(Я)) невелико [Юрьев, 2001; Горбунова, 2002; Гареева, 2002; Куличкин, 2009] и учитывая этническое разнообразие населения указанных регионов, проведение таких исследований является особенно актуальным.

В связи с вышеизложенным, были определены цели и задачи исследования.

Цель работы:

Анализ роли полиморфных вариантов генов нейромедиаторных систем, ферментов метаболизма этанола, калиевых каналов в развитии зависимости от психоактивных веществ в четырех популяциях России и оценка уровня экспрессии ряда генов микроРНК под воздействием алкоголя. Задачи исследования:

1. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов:

- полиморфных вариантов генов ферментов метаболизма этанола ADH1B (rsl229984, rs2066701), ADH1C (rs 1789920, rsl693425, rs698), рецептора D4 дофамина DRD4 (120 n.o. VNTR), рецептора 2C серотонина HTR2C (rs6318), опиоидного рецептора Ml OPRM1 (rs3823010), продинорфина PDYN (68 n.o. VNTR) у больных хроническим алкоголизмом и в соответствующих контрольных группах;

- полиморфных вариантов генов рецептора D4 дофамина DRD4 (120 и.о. VNTR), рецептора 2С серотонина HTR2С (rs6318), опиоидного рецептора Ml OPRM1 (rs3823010), продинорфина PDYN (68 n.o. VNTR) у больных опийной наркоманией и в соответствующих контрольных группах.

2. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов:

- полиморфных вариантов, располагающихся в сайтах связывания микро-РНК генов продинорфина PDYN (rs2235749) у больных хроническим алкоголизмом, опийной наркоманией и в соответствующих контрольных группах; генов калиевых каналов

KCTD14 (rs7928656), KCNE1 (rs3453) у больных хроническим алкоголизмом и в соответствующих контрольных группах.

3. Провести анализ ассоциаций исследованных полиморфных вариантов генов с риском развития хронического алкоголизма и опийной наркомании, а также анализ ассоциаций гаплотипов в генах ADH1B (rs 1229984, rs2066701) hADHIC (rs 1789920, rsl693425, rs698) с риском развития хронического алкоголизма в популяциях русских, татар, башкир и якутов.

4. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта rs 1229984 гена фермента метаболизма этанола ADH1B в популяциях русских, татар, башкир из РБ, якутов из PC (Я) и балкарцев, черкесов, абхазов, аварцев из Кавказа.

5. Провести анализ роли межгенных взаимодействий изученных полиморфных вариантов генов в развитии хронического алкоголизма и опийной наркомании.

6. Провести анализ экспрессии генов 6 микроРНК (let-7c, мкРНК-9, мкРНК-21, мкРНК-129, мкРНК-153, мкРНК-320) в поясной извилине головного мозга мышей, получавших этанол, и в контроле.

Научная новизна исследования.

В популяциях русских, татар, башкир и якутов впервые охарактеризованы частоты генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов ADH1B, ADH1C, DRD4, HTR2C, OPRM1, PDYN. Выявлены генетические маркеры повышенного и пониженного риска развития хронического алкоголизма в данных популяциях. При изучении полиморфных локусов генов DRD4, HTR2C, OPRM1, PDYN выявлены генотипы/аллели, ассоциированные с опийной наркоманией у русских и татар. Впервые изучены полиморфные локусы в сайтах связывания микро-РНК генов калиевых каналов (KCTD14, KCNE1) и продинорфина (.PDYN) у больных с зависимостью от ПАВ и в контроле. Впервые показано изменение уровня экспрессии генов мкРНК-9 и мкРНК-320 в поясной извилине головного мозга мышей под воздействием этанола. Установлены межгенные взаимодействия полиморфных вариантов генов ADH1B, ADH1C, PDYN, DRD4, HTR2C, OPRM1, KCTD14, KCNEJ, детерминирующие риск развития ХА в популяциях русских, татар, башкир и якутов. Анализ межгенных взаимодействий обнаружил, что основу генетической предрасположенности к опийной наркомании у русских из РБ составляет взаимодействие генов HTR2C, OPRM1, PDYN.

Практическая значимость работы

Полученные данные представляют интерес для понимания молекулярно-генетических механизмов формирования хронического алкоголизма и опийной наркомании в этнических группах русских, татар и башкир из РБ и якутов из PC (Я). Также, на основе полученных данных можно предложить новые направления в разработке методов лечения, диагностики и формирования групп риска данных патологий. Полученная информация может быть использована в области генетической эпидемиологии, в популяционной и эволюционной генетике для углубленного описания генофонда народонаселения РБ и PC (Я). Также результаты могут быть использованы в преподавании спецкурсов по медицинской генетике на медицинских и биологических факультетах, на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Фасхутдинова, Гульназ Габдулахатовна

ВЫВОДЫ

1. Установлена существенная гетерогенность популяций русских, татар, башкир из РБ, якутов из PC (Я) и черкесов, балкарцев, аварцев и абхазов из Кавказа по распределению частот генотипов и аллелей полиморфного локуса rsl229984 (Arg47His) гена ADH1B.

2. Выявлено, что маркерами повышенного риска развития хронического алкоголизма у русских являются аллель KCNE1 *С полиморфного локуса rs3453 в сайте связывания мкРНК-153 и мкРНК-368 в гене KCNE1, аллель PDYN*A полиморфного варианта rs2235749 в сайте связывания мкРНК-448 и мкРНК-567 гена PDYN, галотипы TGGT, CGGG полиморфных локусов rs2066701 гена ADH1B и rs698, rsl693425, rs 1789920 TQuaADHlC.

3. Маркерами повышенного риска развития хронического алкоголизма с коморбидным острым алкогольным психозом у русских является аллель DRD4*S, у татар - генотип DRD4*S/*S полиморфного VNTR локуса гена DRD4.

4. У татар маркерами повышенного риска развития хронического алкоголизма являются генотип PDYN*3/*3 и аллель PDYN*3 полиморфного VNTR локуса в гене PDYN.

5. Обнаружено, что маркерами повышенного риска развития хронического алкоголизма у башкир является гаплотип С GAG полиморфных локусов rs2066701 гена ADH1B и rs698, rsl693425, rsl789920 гена ADH1C, у якутов - аллель ADH1B*A полиморфного лоукса rs 1229984 TQnaADfflB.

6. Маркерами повышенного риска развития опийной наркомании у русских являются аллель HTR2C*G полиморфного варианта rs6318 гена HTR2C, генотип OPRMl*G/*G и аллель OPRMl*G полиморфного локуса rs3823010 гена OPRM1, аллель PDYN*А полиморфного варианта rs2235749 в сайте связывания мкРНК-448 и мкРНК-567 генаР£>Ш.

7. Установлены модели межгенного взаимодействия ДНК-локусов, влияющие на развитие хронического алкоголизма у русских: 1) ADH1B rs2066701, PDYN rs2235749; 2) KCTD14 rs7928656, KCNE1 rs3453; 3) ADH1C rs698, DRD4 VNTR, HTR2C rs6318; у татар: ADH1C rs698, OPRM1 rs3823010; у якутов: 1) ADH1C rs698, PDYN VNTR; 2) ADH1B rs2066702, PDYN VNTR, OPRM1 rs3823010.

8. Установлена модель межгенного взаимодействия ДНК-локусов, влияющая на развитие опийной наркомании у русских: HTR2C rs6318, OPRM1 rs3823010, PDYN VNTR.

9. Обнаружено повышение уровня экспрессии генов мкРНК-9 и мкРНК-320 в головном мозге у мышей, получавших инъекцию этанола, по сравнению с контролем.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Механизмы, лежащие в основе индивидуальной предрасположенности к зависимости от психоактивных веществ — комплексные, причем, генетические факторы играют значительную роль в превращении простого употребления наркотиков в зависимость. Исследования с применением генетических методов продолжают расширять наши знания в области понимания этиологии зависимости от ПАВ и в идентификации новых мишеней для лечения.

На данный момент установлена общность биологических механизмов зависимости от алкоголя и наркотиков, причем, не имеет значения тип психоактивного вещества (алкоголь, опиаты, каннабиноиды, кокаин и т.д.). В рамках настоящего исследования проведен анализ молекулярно-генетических основ формирования ХА и ОН в популяциях РБ и РС(Я). Нами было изучено 9 полиморфных вариантов генов ADH1B, ADH1C, DRD4, HTR2C, OPRM1, PDYN, относящихся к серотонинергической, дофаминергической, опиоидной системам мозга и к ферментам метаболизма алкоголя, и проведен поиск ассоциаций данных полиморфных маркеров с риском развития зависимости от ПАВ в РБ и РС(Я). Проведен анализ 3 однонуклеотидных полиморфных локусов, находящихся в сайтах связывания мкРНК в З'-области генов калиевых каналов KCTD14, KCNE1, и опиоидного пептида PDYN с целью оценки их роли в развитии предрасположенности к зависимости от ПАВ в популяциях РБ и PC (Я). Кроме того, определены профили экспрессии генов шести мкРНК (let-7c, мкРНК-9, мкРНК-21, мкРНК-129, мкРНК-153, мкРНК-320) в поясной извилине мозга мышей при воздействии этанолом.

По локусам генов ADH1B (rs 1229984), ADH 1С (rs 1789920, rs 1693424, rs698), DRD4 (120 n.o. VNTR), OPRM1 (rs3823010), PDYN (68 n.o. VNTR, rs2235749), KCTD14 (rs7928656), KCNE1 (rs3453) выявлены популяционные различия между этническими группами из РБ и PC (Я) и впервые показаны отличия в генетических предпосылках развития зависимости от ПАВ, обусловленные разной этнической принадлежностью больных.

Среди множества факторов ХА долгое время развитие данного заболевания связывали с разными вариантами алкогольдегидрогеназ — ферментов, участвующих в метаболизме этанола. Анализ полиморфного варианта rs 1229984 в гене ADH1B обнаружил у лиц татарской и якутской этнической принадлежности статистически значимые различия в распределении частот аллелей между больными ХА и здоровыми донорами. Аллель ADH1B*A является маркером пониженного риска развития заболевания у татар (OR=Q,3; 95%С1=0,09-0,96) и якутов (OR=0,47; 95%С1 0,25-0,87). Проведенный анализ распределения частот генотипов полиморфного варианта rs 1229984 гена ADH1B позволил определить, что в группе татар гетерозиготный генотип ADH1B*A/*G является протективным к развитию ХА. В результате исследования полиморфного варианта rs698 в гене ADH1С установлено, что гомозиготный генотип ADH1C*A/*A (OR=0,28; 95%CI 0,085-0,86) и аллель ADH1C*A (OR=0,54; 95%CI 0,30-0,97) являются протективными к развитию ХА, осложненного ОАП у индивидов татарской этнической принадлежности.

В нашей работе определены частоты встречаемости генотипов и аллелей полиморфного локуса rsl229984 (Arg47His) гена алкогольдегидрогеназы ADH1B в популяциях русских, татар, башкир из РБ, , якутов из РС(Я) и черкесов, балкарцев, абхазов и аварцев, проживающих на территории Кавказа. Показано, что частоты протективного к развитию алкоголизма аллеля ADHlB*47His у русских, татар и башкир из РБ находятся в диапазоне, характерном для народов средней полосы Европы; частоты аллелей в исследованных кавказских популяциях и у якутов являются промежуточными между таковыми у народов Европы и Юго-Восточной Азии.

Исследование гаплотипов, которые включают несколько тесно . сцепленных полиморфных локусов — наиболее перспективный метод для изучения многофакторных заболеваний, так как он имеет большую мощность, по сравнению с анализом индивидуальных полиморфных локусов. Нами проведен анализ распределения гаплотипов на основе четырех полиморфных локусов в кластере ADH у больных ХА и в контроле, в зависимости от этнической принадлежности. Установлено, что полиморфные варианты rs2066701 tqwlADHIB и rs698, rsl693425, rs 1789920 гена ADH1C находятся в неравновесии по сцеплению (D'>0,3) как в группе больных, так и в группе здоровых доноров среди русских, татар, башкир, и в контрольной группе якутов. У якутов, больных ХА, обнаружено сильное (D'~l) неравновесие по сцеплению между полиморфными локусами rs698, rsl693425, rsl789920 гена ADH1C, в то время как между маркером rs2066701 гена ADH1B и всеми остальными локусами неравновесия по сцеплению не выявлено. В результате проведенного гаплотипического анализа полиморфных локусов rs2066701 гена ADH1B и rs698, rs 1693425, rs 1789920 гена ADH1C показано, что у русских гаплотипами риска развития ХА являются TGGT, CGGG. У башкир выявлен гаплотип повышенного риска развития ХА — CGAG, а гаплотип CAGT оказался протективным к развитию заболевания в данной этнической группе.

Дофаминергическая система играет важную роль в процессе развития зависимости от ПАВ. В настоящем исследовании проведен анализ полиморфного локуса 120 п.о. VNTR гена рецептора D4 дофамина DRD4 у больных ХА и ОН и в соответствующих контрольных группах из РБ и РС(Я). Были обнаружены статистически значимые различия в распределении частот генотипов этого локуса между больными ХА с коморбидным ОАП и контрольной группой татарской этнической принадлежности. Гомозиготный генотип DRD4*S/*S был чаще представлен в группе больных и являлся маркером повышенного риска развития ХА с ОАП (R=10,49; 95%С1 1,0550,18). Кроме того, статистически значимые различия в распределении частот аллелей изученного локуса были показаны между больными ОАП и контрольной группой русской этнической принадлежности. Аллель DRD4*S является маркером повышенного риска развития алкоголизма с коморбидным ОАП у русских (OR=l,95; 95%С1 1,004-3,79).

Алкоголь стимулирует "систему подкрепления" мозга, одно из центральных мест в которой занимает серотонинергическая нейромедиация. Нами был изучен полиморфный вариант rs6318 гена рецептора 2С серотонина (HTR2C) у больных ХА и ОН и в соответствующих контрольных группах из РБ и РС(Я). У русских была выявлена ассоциация аллеля HTR2C*G с развитием ОН (OR=5,85, 95%С1 1,43-27,65).

Полученные нами данные указывают также на вовлеченность генов эндогенной опиоидной системы мозга (OPRM1 и PDYN) в развитие предрасположенности к зависимости от ПАВ в изученных группах.

Исследование полиморфного локуса rs3823010 в гене OPRM1 выявило, что гомозиготный генотип OPRMl*G/*G (OR=2,4; 95%CI 1,2-4,84) и аллель OPRMl*G (OR=l,98; 95%CI 1,1-3,58) являются маркерами повышенного риска опийной наркомании, а гетерозиготный генотип OPRM1 *A/*G (OR=0,43; 95%CI 0,21-0,88) является фактором устойчивости к развитию данного заболевания у русских из РБ. Проведенный анализ ассоциаций полиморфного локуса 68 п.о. VNTR в гене PDYN позволил определить маркеры повышенного (генотип PDYN*3/*3 (OR=2,9, 95%CI 1,34-6,14) и аллель PDYN*3 (OR=1,90; 95%CI 1,16-3,12)) и пониженного (аллель PDYN*2 (OR=0,52; 95%CI 0,32-0,86)) риска развития ХА у татар.

Проведен анализ профиля экспрессии 6 генов мкРНК в поясной извилине мозга мышей при воздействии этанола. В результате биоинформационного анализа баз данных TargetScan, Pictar, MiRanda для настоящего исследования были отобраны мкРНК let-7c, мкРНК-9, мкРНК-21, мкРНК-129, мкРНК-153, мкРНК-320 имеющие гены-мишени, которые опосредуют индивидуальные различия в предрасположенности к формированию зависимости от психоактивных веществ. Сравнительный анализ уровня экспрессии отобранных генов выявил повышение экспрессии мкРНК-9 и мкРНК-320 в головном мозге у мышей, получавших инъекцию этанола, по сравнению с контролем (мкРНК-9: Р<0,05, мкРНК-320: Р<0,01). Изменение уровня мкРНК-9 и мкРНК-320 в нейронах после воздействия этанола, подавляет экспрессию мРНК определенного класса генов-мишеней, вовлеченных в процессы нейрональной физиологии, что может представлять собой один из механизмов адаптации нейронов к алкоголю.

Новым направлением в молекулярно-генетических исследованиях мультифакториальных заболеваний является изучение однонуклеотидных полиморфных локусов, находящихся в сайтах связывания микро-РНК и в генах пре-мкРНК [Saunders et al., 2006; Iwai, 2006; Georges et al., 2006; Рогаев и др.,2008]. Проведено исследование полиморфных локусов в сайтах связывания микро-РНК генов калиевых каналов KCTD14 (rs7928656), KCNE1 (rs3453) и продинорфина PDYN (rs2235749) у больных с зависимостью от ПАВ и в контроле.

В результате проведенного анализа полиморфного локуса rs3453 гена KCNE1 выявлено, что аллель KCNE1*C, связанный с образованием нового сайта связывания для мкРНК-153 и -368, является маркером повышенного риска развития ХА в этнической группе русских (OR=l,69; 95%С1 1,02-2,82).

Анализ распределения частот генотипов полиморфного варианта rs2235749 гена PDYN продемонстрировал увеличение частоты генотипа PDYN*G/*G в контрольной группе русских, по сравнению с больными ХА (C)R=0,35; 95%С1 0,18-0,7) и ОН (OR=0,45; 95%С1 0,21-0,94) той же этнической принадлежности, что свидетельствует о протективном характере этого генотипа. В то же время, у русских была выявлена ассоциация аллеля PDYN*A (приводящего к потере сайтов связывания для мкРНК-448 и мкРНК-567) с ХА (OR-2,28; 95%С1 1,28-4,1) и ОН (OR=2,03; 95% 1,09-3,79) (Рис. 3.17,3.18).

При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных локусов изучаемых генов у русских из РБ были определены модели межгенного взаимодействия ДНК-локусов влияющие на формирование ХА: 1) ADH1B rs2966701, PDYN rs2235749; 2) KCTD14 rs7928656, KCNE1 rs3453; 3)ADH1C rs698, DRD4120 VNTR, HTR2C rs6318 и OH: 1) HTR2C rs6318, OPRM1 rs3823010, PDYN 68 n.o. VNTR. При оценке межгенных взаимодействий в этнической группе татар с помощью метода MDR при использовании Forced search algorithm, была установлена статистически значимая модель взаимодействия полиморфных маркеров генов: 1) ADH1C rs698 х OPRM1 rs3823010. Анализ межгенных взаимодействий у якутов из РС(Я) позволил установить статистически значимые (Р<0,05) модели взаимодействия генов, влияющие на формирование ХА: 1) ADH1C rs698, PDYN 68 n.o. VNTR; 2) ADH IB rs2966701, PDYN 68 n.o. VNTR, OPRM1 rs3823010.

Таким образом, анализ межгенных взаимодействий показал, что проявление патологических эффектов полиморфных аллелей и генотипов генов существенно зависит от характера их взаимодействия. Так, совместная комплексная оценка влияния полиморфных вариантов изученных генов на риск развития алкогольной зависимости позволила не только подтвердить результаты, полученные в ходе анализов распределения изученных полиморфных локусов генов по отдельности, но и показать, что основу генетической предрасположенности к зависимости от ПАВ составляет взаимодействие генов ADH1B, ADH1C, DRD4, HTR2C, OPRM1, PDYN, KCTD14, KCNEL Причем, характер взаимодействия между локусами в большинстве случаев статистически значимо выявленных моделей свидетельствует об эпистатических взаимодействиях генов.

Таким образом, полученные нами данные представляют интерес для понимания молекулярно-генетических механизмов развития хронического алкоголизма и опийной наркомании, а также позволяют предложить новые направления в разработке методов лечения, диагностики и формирования групп риска данных патологий. Выявление новых генетических факторов риска заболеваний способствуют внедрению молекулярно-генетических тестов в реальную клиническую практику. Данные об ассоциации определенных генотипов и аллелей локусов генов ADH1B, ADH1C, DRD4, HTR2C, OPRM1, PDYN, KCNE1 с развитием хронического алкоголизма и опийной наркомании у русских, татар, башкир и якутов позволят использовать генотипирование по этим локусам для определения риска развития заболеваний с учетом этнической принадлежности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фасхутдинова, Гульназ Габдулахатовна, 2010 год

1. Анохина И.П. Биологические механизмы зависимости от психоактивных веществ (патогенез) // Лекции по наркологии. М.: Медпрактика. 2001. -С. 13-32.

2. Боринская С.А., Гасемианродсари Ф., Кальина Н.Р., Соколова М.В., Янковский Н.К. Полиморфизм гена алкогольдегидрогеназы ADH1B в Восточнославянских и ираноязычных популяциях // Генетика. — 2005. — Том 41. №11. - С. 1563-1566.

3. Бочков Н.П., Асанов А.Ю., Аксенова М.Г., Новиков А.В., Демикова Н.С. Генетические факторы в этиологии и патогенезе наркоманий (обзор литературы) // Медицинская генетика. Т.2., № 6. - 2003. - С. 238-247.

4. Бурмистрова О.А., Гольцов А.Ю., Абрамова Л.И., Каледа В.Г., Орлова В.А., Рогаев Е.И. МикроРНК при шизофрении: генетичекский анализ и экспрессия гена miR-130b (22qll) // Биохимия. 2007. - V. 72. - С. 860866.

5. Гареева А.Е. Исследование ассоциаций полиморфных вариантов генов переносчиков и рецепторов серотонина и дофамина с опийной наркоманией // Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.м.н. Уфа, 2002.

6. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., Практика. - 1999. -459с.

7. Горбунова Е.В. Исследование ряда генов кандидатов с острым алкогольным психозом // Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.б.н. - Уфа, 2002.

8. Егоров В.Ф., Корчагина Г.А., Кошкина Е.А., Шамота А.З. Наркологическая ситуация в России (по данным официальной медицинской статистики за 1996) // Русский медицинский журнал. 1998. - Т.6. - №2. - С. 109-114.

9. Иванец Н.Н. Лекции по наркологии. М.: «Нолидж». 2000. - С. 435.

10. Казанцева А. В. Молекулярно-генетические основы черт темперамента и личности // Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.б.н. Уфа, 2008.

11. Каплан Г.И., Сэдок Б.Дж. Клиническая психиатрия. В 2 т. Т.1. М.: Медицина. 1994. 672 с.

12. Котельников Р.Н., Шпиз С.Г., Калмыкова А.И., Гвоздев В.А. Белки, связывающие РНК, в процессах РНК-интерференции // Мол. биология. -2006.-V. 40.-С. 595-608.

13. Куличкин Степан Степанович Молекулярно-генетическое изучение наследственной предрасположенности к хроническому алкоголизму в популяциях якутов и эвенков Республики Саха (Якутия) // Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.б.н. — Уфа, 2009.

14. Немцов А. В. Алкогольная смертность в России: масштаб и география проблемы // Алкогольная катастрофа и потенциал алкогольной политики в снижении алкогольной сверхсмертности в России / Отв. ред. Д. А. Халтурина, А. В. Коротаев. М.: УРСС, 2008. С. 78-84.

15. Пятницкая И.Н. Наркомании: Руководство для врачей. М.: Медицина. 1994. 544 с.

16. Рогаев Е.И. Малая РНК в развитии и заболеваниях мозга человека // Биохимия. -2005. Т. 70. - С. 1404-1407.

17. Рогаев Е.И., Боринская С.А., Исламгулов Д.В., Григоренко А.П. МикроРНК человека в норме и паталогии // Молекулярная биология. — 2008. Т. 42. - № 5. - С. 751-764.

18. Спицын В.А., Спицына Н.Х. Генетическая дифференциация башкир на разных уровнях иерархической структуры // Сравнительная антропология башкирского народа. Уфа. 1990. - С. 78-84.

19. Тумусов П.С., Баишев М.А., Смоленская Е.В. Основные показатели наркологической службы Республики Саха (Якутия). Якутск.: Минздрав РОД), 2009.-46 с.

20. Федорова С.А. Этногеномика коренных народов Республики Саха (Якутия): Автореф. дис. на соискание ученой степени д-ра биол. наук. — Москва, 2008. 49 с.

21. Хуснутдинова Э.К. Молекулярная этногенетика народов Волго-Уральского региона. Уфа: Гилем. 1999. — С. 238.

22. Хуснутдинова Э.К., Вахитов В.А. Современные проблемы молекулярной этногенетики на примере исследований Волго-Уральского региона // В кн.: Многоликость современной генетики человека. (Ред. Шишкин С.С.) Уфа: "Гилем". 2000. - С. 154-197.

23. Юрьев Е.Б. Анализ генетических ассоциаций полиморфизма в генах-кандидатах нейромедиаторной системы с острым алкогольным психозом. Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.б.н. — Уфа, 2001.

24. Adamson M.D., Kennedy J., Petronis A., Dean M., Virkkunen M., Linnoila M., Goldman D. DRD4 dopamine receptor genotype and CSF monoamine metabolites in Finnish alcoholics and controls // Am J Med Genet. 1995. - V. 60(3).-P. 199-205.

25. Agarwal D.P. Genetic polymorphisms of alcohol metabolizing enzymes // Pathol Biol (Paris). 2001. - V. 49(9). - P. 703-709.

26. Amaral P.P., Dinger M.E., Mercer T.R., Mattick J.S. The eukaryotic genome as an RNA machine // Science. 2008. - V. 319. - P. 1787-1789.

27. Arango V., Huang Y.Y., Underwood M.D., Mann J.J. Genetics of the serotonergic system in suicidal behavior // J Psychiatr Res. 2003. - V. 37(5). -P. 375-386.

28. Asghari V., Sanyal S., Buchwaldt S., et al. Modulation of intracellular cyclic AMP levels by different human dopamine D4 receptor variants // J Neurochem. 1995. — V. 65(3).-P. 1157-1165.

29. Ball D., Collier D. Substance misuse // Psychiatric Genetics and Genomics. Edited by McGuffin P., Owen M.J., Gottesman I.I.: Oxford University Press. -2004.-P. 267-302.

30. Barr C.L., Feng Y., Wigg K.G., et al. 5'-untranslated region of the dopamine D4 receptor gene and attention-deficit hyperactivity disorder // Am J Med Genet.-2001a.-V. 105(1).-P. 84-90.

31. Barr C.L., Xu C., Kroft J., et al. Haplotype study of three polymorphisms at the dopamine transporter locus confirm linkage to attention-deficit/hyperactivity disorder // Biol Psychiatry. -2001b. V. 49(4). - P. 333339.

32. Barrett J.C., Fry В., Mailer J., Daly M.J. Haploview: analysis and visualization of LD and haplotype maps // Bioinformatics. 2005. - Jan 15. -P. 263-265.

33. Bilen J., Liu N., Bonini N.M. A new role for microRNA pathways: modulation of degeneration induced by pathogenic human disease proteins // Cell Cycle. 2006. - V. 5. - P. 2835-2838.

34. Bishop Т., Sham P. Analysis of multifactorial disease.//BIOS Ltd. 2000. 345 P

35. Blum K., Trachtenberg M.C. Alcoholism: Scientific basis of a neuropsychogenic disease // Int. J. Addict. 1988. - Vol. 23(8). - P. 781-796.

36. Bookman E.B., Taylor R.E., Adams-Campbell L., et al. DRD4 promoter SNPs and gender effects on Extraversion in African Americans // Mol Psychiatry. -2002. V. 7(7). - P. 786-789.

37. Borinskaya S., Kal'ina N., Marusin A., Faskhutdinova G., Morozova I., Kutuev I., Koshechkin V., Khusnutdinova E., Stepanov V., Puzyrev V.,

38. Yankovsky N., and Rogaev E. Distribution of the Alcohol Dehydrogenase ADHlB*47His Allele in Eurasia // The American Journal of Human Genetics. -2009.-V. 84.-P. 89-94.

39. Boyd S.D. Everything you wanted to know about small RNA but were afraid to ask // Laboratory Investigation. 2008. - V. 88 (6). - P. 569-578.

40. Brennecke J., Hipfner D.R., Stark A., Russell R.B., Cohen S.M. bantam encodes a developmentally regulated microRNA that controls cell proliferation and regulates the proapoptotic gene hid in Drosophila // Cell. — 2003. V. 113. -P. 25-36.

41. Brodie M.S., Scholz A., Weiger T.M., Dopico A.M. Ethanol interactions with calcium-dependent potassium channels // Alcohol Clin Exp Res. 2007. - V. 31(10). P. 162516-32.

42. Bustin S.A. Absolute quantification of mRNAusing real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays // J. Mol. Endocrinol. — 2000. -V.25. P.169-193.

43. Chen C.C., Lu R.B., Chen Y.C., et al. Interaction between the functional polymorphisms of the alcohol-metabolism genes in protection against alcoholism // Am. J. Hum. Genet. 1999. - Vol. 65. - P. 795-807.

44. Chen K., Rajewsky N. Natural selection on human microRNA binding sites inferred from SNP // Nature genetics. 2006. - V. 38(12). - P. 1452-1456.

45. Clancy S.M., Chen В., Bertaso F., Mamet J., Jegla T. KCNE1 and KCNE3 beta-subunits regulate membrane surface expression of Kvl2.2 K(+) channels in vitro and form a tripartite complex in vivo // PLoS One. 2009. - V. 4(7).

46. Cloninger C.R., Svrakic N.M., Svrakic D.M. Role of personality self-organization in development of mental order and disorder // Dev Psychopathol. 1997.-V. 9.-P. 881-906.

47. Colvis C.M., Pollock J.D., Goodman R.H., Impey S., Dunn J., et al. Epigenetic Mechanisms and Gene Networks in the Nervous System // The Journal of Neuroscience. 2005. - Vol. 25(45). - P. 10379-10389.

48. Comings D.E., MacMurray J.P. Molecular heterosis: a review // Mol Genet Metab.-2000.- V. 71(1-2).-P. 19-31.

49. Conaco C., Otto S., Han J.J., Mandel G. Reciprocal actions of REST and a microRNA promote neuronal identity // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2006. -V. 103.-P. 2422-2427.

50. Daniels J., Williams J., Mant R., Asherson P., McGuffin P., Owen M.J. Repeat length variation in the dopamine D4 receptor gene shows no evidence of association with schizophrenia //Am J Med Genet. 1994. - V. 54(3). - P. 256-258.

51. D'Souza U.M., Russ C., Tahir E., et al. Functional effects of a tandem duplication polymorphism in the 5'flanking region of the DRD4 gene // Biol Psychiatry. 2004. - V. 56(9). - P. 691-697.

52. Dulawa S.C., Grandy D.K., Low M.J., et al. Dopamine D4 receptor-knock-out mice exhibit reduced exploration of novel stimuli // J Neurosci. 1999. - V. 19(21).-P. 9550-9556.

53. Ebstein R.P. Saga of an adventure gene: novelty seeking, substance abuse and the dopamine D4 receptor exon III repeat polymorphism // Mol. Psychiatry. — 1997b.-V. 2.-P. 381-384.

54. Ebstein R.P. The molecular genetic architecture of human personality: beyond self-report questionnaires // Mol. Psychiatry. 2006. - V.l 1(5). - P. 427-445.

55. Ehlers C.L., Gilder D.A., Wall T.L., Phillips E., Feiler H., Wilhelmsen K.C. Genomic screen for loci associated with alcohol dependence in Mission Indians // Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 2004. - V. 129. - P. 110-115.

56. Eng M.Y., Luczak S.E., Wall T.L. ALDH2, ADH1B, and ADH1C genotypes in Asians: a literature review // Alcohol Res Health. 2007. - V. 30(1). P. 2227.

57. Evans J., Reeves В., Piatt H., et al. Impulsiveness, serotonin genes and repetition of deliberate self-harm (DSH) // Psychol Med. 2000. - V. 30(6). -P. 1327-1334.

58. Fallin D., Schork N.J. Accuracy of Haplotype Frequency Estimation for Biallelic Loci, via the Expectation-Maximization Algorithm for Unphased Diploid Genotype Data // Am. J. Hum. Genet. 2000. - V. 67. - P. 947-959.

59. Falzone T.L., Gelman D.M., Young J.I., et al. Absence of dopamine D4 receptors results in enhanced reactivity to unconditioned, but not conditioned, fear // Eur J Neurosci. 2002. - V. 15(1). - P. 158-164.

60. Frohmader K.S., Wiskerke J., Wise R.A., Lehman M.N., Coolen L.M. Menthamphetamine acts on subpoplations of neurns regulating sexual behavior in mali rats // Neuroscience. 2010. - V. 166(3). - P. 771 -784.

61. George S.R., Cheng R., Nguyen Т., Israel Y., O'Dowd B.F. Polymorphisms of the D4 dopamine receptor alleles in chronic alcoholism // Biochem Biophys Res Commun. 1993. -V. 196(1). P. 107-114.

62. Grzywacz A., Kucharska-Mazur J., Samochowiec J. Association studies of dopamine D4 receptor gene exon 3 in patients with alcohol dependence // Psychiatr Pol. 2008. - V. 42(3). - P.453-461.

63. Ghosh Т., Soni K., Scaria V., Halimani M., Bhattacharjee C., Pillai B. MicroRNA-mediated up-regulation of an alternatively polyadenylated variant of the mouse cytoplasmic {beta}-actin gene // Nucleic Acids Res. -2008. V. 36(19).-P. 6318-6332.

64. Gilder F.J., Hodgkinson S., Murray R.M. ADH and ALDH genotype profiles in Caucasians with alcohol-related problems and controls // Addiction. —1993. -V. 88(3).-P. 383-388.

65. Goedde H.W., Harada S., Agarwal D.P. Racial differences in alcohol sensitivity: a new hypothesis // Hum Genet. 1979. - V. 51(3). - P. 331-334.

66. Gurevich I., Tamir H., Arango V., et al. Altered editing of serotonin 2C receptor pre-mRNA in the prefrontal cortex of depressed suicide victims // Neuron. 2002. - V. 34(3). - P. 349-356.

67. Gutierrez В., Arias В., Papiol S., et al. Association study between novel promoter variants at the 5-HT2C receptor gene and human patients with bipolar affective disorder//Neurosci Lett. 2001. - V. 309(2). - P. 135-137.

68. Hahn M.K., Blakely R.D. The Functional Impact of SLC6 Transporter Genetic Variation // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2006.

69. Han Y., Gu S., Oota H., Osier M.V., Pakstis A.J., Speed W.C., Kidd J.R., Kidd K.K. Evidence of positive selection on a class I ADH locus // Am J Hum Genet. 2007. - V. 80. - P. 441-456.

70. Harada K., Yamaji Т., Matsuoka N. Activation of the serotonin 5-HT2C receptor is involved in the enhanced anxiety in rats after single-prolonged stress // Pharmacol Biochem Behav. 2008. - V. 89(1). - P. 11-16.

71. Hartig P.R. In: Baumgarten H.G., Gothert M. (eds.) Serotoninergic neurons and 5-HT receptors in the CNS // Handbook of Experimental pharmacology. — 1997.-V. 129.-P. 175-221.

72. Hobert O. Gene regulation by transcription factors and microRNA // Science. -2008.-V. 319.-P. 1785-1786.

73. Hill S.Y., Steinhauer S.R., Zubin J., Baughmann T. Event-related potentials as markers for alcoholism risk in high density families // Alcoholism (NY). -1988. -V. 12(4). P. 545-554.

74. Himei A., Kono Y., Yoneda H., Sakai Т., Koh J., Sakai J., Inada Y., Imamichi H. An association study between alcoholism and the serotonergic receptor genes // Alcohol Clin Exp Res. 2000. - V. 24(3). - P. 341-342.

75. Hiroi N., Agatsuma S. Genetic susceptibility to substance dependence // Molecular Psychiatiy. 2005. - V. 10. - P. 336-344.

76. Hopf F.W., Bowers M.S., Chang S.J., Chen B.T., Martin M., Seif Т., Cho S.L., Туе К., Bonci A. Reduced nucleus accumbens SK channel activityenhances alcohol seeking during abstinence // Neuron. 2010. - V. 65(5). - P. 682-694.

77. Hurd Y.L., Herman M.M., Hyde T.M., Biegelow L.B., Weinberger D.R., and Kleinman J.E. Prodynorphin mRNA expression is increased in the patch vs matrix compartment of the caudate nucleus in suicide subjects // Mol. Psychiatry. 1997. - V. 6. - P. 495-500.

78. Iwai N., Naraba H. Polymorphisms in human pre-miRNAs // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2005. - V. 331. - P. 1439-1444.

79. Iwamoto K., Kato T. RNA editing of serotonin 2C receptor in human postmortem brains of major mental disorders // Neurosci Lett. 2003. - V. 346(3).-P. 169-172.

80. John В., Enright A.J., Aravin A., Tuschl Т., Sander C., Marks D.S. Human MicroRNA targets // PLoS Biol. 2004. - V. 2. - P. 363.

81. Kim J., Inoue K., Ishii J., Vanti W.B., Voronov S.V., Murchison E., Hannon G., Abeliovich A.A. MicroRNA feedback circuit in midbrain dopamine neurons // Science. 2007. -V. 317. - P. 1220-1224.

82. Kim Y. and Lee C. Haplotype analysis revealed a genetic influence of osteopontin on large artery atherosclerosis // Journal of Biomedical Science. — 2008.-V. 15.-P. 529-533.

83. Kosik K.S. The neuronal microRNA system. Nature Rev // Neurosci. 2006. -V. 7.-P. 911-920.

84. Kreek M.J., Bart G., Charles Lilly., Laforge K.S., Nielsen D.A. Pharmacogenetics and human molecular genetics of opiate and cocaine addictions and their treatments // Pharmacological Reviews. 2005. — Vol. 57(1).-P. 1-26.

85. Krichevsky A.M., Sonntag K.C., Isacson O., Kosik K.S. Specific microRNAs modulate embryonic stem cell-derived neurogenesis // Stem Cells. 2006. - V. 24.-P. 857-864.

86. Kustanovich V., Ishii J., Crawford L., et al. Transmission disequilibrium testing of dopamine-related candidate gene polymorphisms in ADHD: confirmation of association of ADHD with DRD4 and DRD5 // Mol Psychiatry. -2004. -V. 9(7). P. 711-717.

87. Lappalainen J., Dean M., Charbonneau L., et al. Mapping of the serotonin 5-HT1D beta autoreceptor gene on chromosome 6 and direct analysis for sequence variants // Am J Med Genet. 1995a. - V. 60(2). - P. 157-161.

88. Lappalainen J., Zhang L., Dean M., et al. Identification, expression, and pharmacology of a Cys23-Ser23 substitution in the human 5-HT2c receptor gene (HTR2C). Genomics. 1995b May 20;27(2):274-9.

89. Laura L. Peoples Will,Anterior Cingulate Cortex, and Addiction // Science. -2002.-V. 296.-P. 1623-1624.

90. LeMarquand D., Pihl R.O., Benkelfat C. Serotonin and alcohol intake, abuse, and dependence: findings of animal studies // Biol Psychiatry. — 1994. — V. 36(6).-P. 395-421.

91. Lerer В., Macciardi F., Segman R.H., et al. Variability of 5-HT2C receptor cys23ser polymorphism among European populations and vulnerability to affective disorder // Mol Psychiatry. 2001. - V. 6(5). - P. 579-585.

92. Lewis B.P., Burge C.B., Bartel D.P. Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates that thousands of human genes are microRNA targets // Cell.-2005.-V. 120.-P. 15-20.

93. Li Т.К., Bosron W.F., Dafeldecker W.P., Lange L.G., Vallee B.L. Isolation of pi-alcohol dehydrogenase of human liver: is it a determinant of alcoholism // Proc Natl Acad Sci USA. 1977. - V. 74. - P. 4378-4381.

94. Li Т., Zhu Z.H., Liu X., et al. Association analysis of polymorphisms in the DRD4 gene and heroin abuse in Chinese subjects // Am J Med Genet. 2000. -V. 96(5).-P. 616-621.

95. Li Т., Chen C.-K., Ни X., et al. Association analysis of the DRD4 and COMT genes in methamphetamine abuse // Am J Med Genet. 2004. - Vol. 129B (1). -P. 120-124.

96. Lichter J.B., Barr C.L., Kennedy J.L., et al. A hypervariable segment in the human dopamine receptor D4 (DRD4) gene // Hum Mol Genet. 1993. - V. 2(6).-P. 767-773.

97. Lim L.C., Nothen M.M., Korner J., Rietschel M., Castle D., Hunt N., Propping P., Murray R., Gill M. No evidence of association between dopamine D4 receptor variants and bipolar affective disorder // Am J Med Genet. 1994. -V. 54(3).-P. 259-263.

98. Lim L.P., Lau N.C., Garrett-Engele P., Grimson A., Schelter J.M., Castle J., Bartel D.P., Linsley P.S., Johnson J.M. Microarray analysis shows that some microRNAs downregulate large numbers of target mRNAs // Nature. 2005. -V. 433.-P. 769-773.

99. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2A(-AACt) Method // METHODS. 2001. - V.25. —P.402-408.

100. Lowe N., Kirley A., Mullins C., et al. Multiple marker analysis at the promoter region of the DRD4 gene and ADHD: evidence of linkage and association with the SNP -616 // Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. -2004.-V. 131B(1).-P. 33-37.

101. Ma L.L., Xue Y.L., Liu Y., et al. Polymorphism study of seven SNPs at ADH genes in 15 Chinese populations // Hereditas 2005. - 142 - P. 103-111.

102. Mague S.D., Blendy J.A. OPRM1 SNP (A118G): Involvement in disease development, treatment response, and animal models // Drug Alcohol Depend. -2010.-Jan 12.

103. Makeyev E.V., Zhang J., Carrasco M.A., Maniatis T. The MicroRNA miR-124 promotes neuronal differentiation by triggering brain-specific alternative pre-mRNA splicing // Mol. Cell. 2007. - V. 27. - P. 435-448.

104. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in molecular biology // Ed. Walker J.M. N.Y.; Haman press. 1984. — V.2. - P. 31-34.

105. Martin K.C., Barad M., Kandel E.R. Local protein synthesis and its role in synapse-specific plasticity // Curr. Opin. Neurobiol. 2000. - V. 10. - P. 587592.

106. Melchior C.L., Tabakoff B. Modification of environmentally cued tolerance to ethanol in mice // J Pharmacol Exp Ther. 1981. - V. 219(1). - P. 175-180.

107. Mitsuyasu H., Hirata N., Sakai Y., et al. Association analysis of polymorphisms in the upstream region of the human dopamine D4 receptor gene (DRD4) with schizophrenia and personality traits // J Hum Genet. 2001. -V. 46(1).-P. 26-31.

108. Moore J.H., Williams S.M. New strategies for identifying gene-gene interactions in hypertension // Ann. Med. 2002. - V.34. - P.88-95.

109. Mottagui-Tabar S., McCarthy S., Reinemund J., Andersson В., Wahlestedt C., Heilig M. Analysis of 5-hydroxytryptamine 2c receptor gene promoter variants as alcohol-dependence risk factors // Alcohol Alcohol. 2004. - V. 39(5). - P. 380-385.

110. Muchowski P.J., Wacker J.L. Modulation of neurodegeneration by molecular chaperones // Nat. Rev. Neurosci. 2005. - V. 6. - P. 11-22.

111. Muramatsu Т., Higuchi S., Murayama M., et al. Association between alcoholism and the dopamine D4 receptor gene // J Med Genet. 1996. - 33(2). - 113-118.

112. Naranjo C.A., Sellers E.M., Lawrin M.O. Modulation of ethanol intake by serotonin uptake inhibitors // J. Clin. Psychiatry. 1986. - V. 47(4). - P. 16-22.

113. Nestler E. J. Molecular mechanisms of drug addiction // Neuropharmacology. -2004. — Y. 47.-P. 24-32.

114. Neumark Y.D., Friedlander Y., Thomasson H.R., Li Т.К. Association of the ADH2*2 allele with reduced ethanol consumption in Jewish men in Israel: a pilot study // J Stud Alcohol. 1998. - V. 59. - P. 133-139.

115. Nichols D.E., Nichols C.D. Serotonin receptors // Chem Rev. 2008. - V. 108(5).-P. 1614-1641.

116. Oroszi G., Goldman D. Alcoholism: genes and mechanisms // Pharmacogenomics. 2004. - V. 5(8). - P. 1037-1048.

117. Osier M., Pakstis A .J., Kidd J.R., Lee J.F., Yin S.J., Ко H.C., Edenberg H .J., Lu R.B., Kidd K.K. Linkage disequilibrium at the ADH2 and ADH3 loci and risk of alcoholism // Am J Hum Genet. -1999. V 64. - P. 1147-1157.

118. Osier M.V., Pakstis A.J., Soodyall H., Comas D., Goldman D., Odunsi A., Okonofua F., Parnas J., Schulz L.O., Bertranpetit J., Bonne-Tamir В., Lu R.

119. B., Kidd J.R., and Kidd K.K. A Global Perspective on Genetic Variation at the ADH Genes Reveals Unusual Patterns of Linkage Disequilibrium and Diversity // Am. J. Hum. Genet. 2002. - V. 71. - P. 84-99.

120. Parsian A., Chakraverty S., Fisher L., Cloninger C.R. No association between polymorphisms in the human dopamine D3 and D4 receptors genes and alcoholism // Am J Med Genet. 1997. - V. 74(3). - P. 281-285.

121. Paus T. Primate anterior cingulate cortex: where motor control, drive and cognition interface // Nat Rev Neurosci. 2001. - V. 2(6). - P. 417-424.

122. Perkins D.O., Jeffries С., Sullivan P. Expanding the 'central dogma': the regulatory role of nonprotein coding genes and implications for the genetic liability to schizophrenia // Mol. Psychiatry. 2005. - V. 10. - P. 69-78.

123. Pignataro L., Varodayan F.P., Tannenholz L.E., Harrison N.L. The regulation of neuronal gene expression by alcohol // Pharmacol Ther. 2009. - 124(3). -P. 324-335.

124. Pratt O.E., Rooprai H.K., Shaw G.K., Thomson A.D. The genesis of alcoholic brain tissue injury // Alcohol Alcohol. 1990. - Vol. 25(2-3). - P. 217-230.

125. Ramchandani V.A., Bosron W.F., Li Т.К. Research advances in ethanol metabolism // Pathol Biol (Paris). 2001. - V. 49(9). - P. 676-682.

126. Reich Т., Edenberg H.J., Goate A., Williams J.T., Rice J.P., Van Eerdewegh P., et al. Genome-wide search for genes affecting the risk for alcohol dependence // Am J Med Genet. 1998. - V. 81(3). - P. 207-215.

127. Reich Т., Edenberg H.J., Goate A., Williams J.T., Rice J.P., Van Eerdewegh P., et al. Genome-wide search for genes affecting the risk for alcohol dependence // Am J Med Genet. 1998. - 81(3). - P. 207-215.

128. Rhodes J.S., Crabbe J.S. Gene expression induced by drugs of abuse // Current Opinion in Pharmacology. 2005. - V. 5. - P. 26-33.

129. Rivera-Meza M., Quintanilla M.E., Tampier L., Mura C.V., Sapag A., Israel Y. Mechanism of protection against alcoholism by an alcohol dehydrogenase polymorphism: development of an animal model // FASEB J. 2010. - V. 24(1).-P. 266-274.

130. Rogaev E., Islamgulov D., Grigorenko A. Current Perspectives in microRNAs (miRNA) // MicroRNA in Neuropsychiatric Diseases. 2008. - Chapter 13. -P. 225-244.

131. Rogeness G.A., Maas J.W., Javors M.A., Macedo C.A., Fischer C., Harris W.R. Attention deficit disorder symptoms and urine catecholamines // Psychiatry Res. 1989. - V.27(3). - P. 241-251.

132. Rogers G., Joyce P., Mulder R., et al. Association of a duplicated repeat polymorphism in the 5'-untranslated region of the DRD4 gene with novelty seeking // Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 2004. - V. 126B(1). -P. 95-98.

133. Roura-Ferrer M., Etxebarria A., Sole L., Oliveras A., Comes N., Villarroel A., Felipe A. Functional implications of KCNE subunit expression for the Kv7.5 (KCNQ5) channel // Cell Physiol Biochem. 2009. - V. 24(5-6). - P. 325-334.

134. Roy A., Virkkunen M., Linnoila M. Reduced central serotonin turnover in a subgroup of alcoholics? // Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. — 1987.-V. 11(2-3).-P. 173-177.

135. Rubinstein M., Phillips T.J., Bunzow J.R., et al. Mice lacking dopamine D4 receptors are supersensitive to ethanol, cocaine, and methamphetamine // Cell. 1997. - V. 90(6). -P. 991-1001.

136. Saunders M.A., Liang H., and Li W.-H. Human polymorphism at microRNAs and microRNA target sites // PNAS. 2007. - V. 104(9). - P. 3300-3305.

137. Seaman M.I., Fisher J.B., Chang F., et al. Tandem duplication polymorphism upstream of the dopamine D4 receptor gene (DRD4) // Am J Med Genet. -1999. V. 88(6). - P. 705-709.

138. Serretti A., Drago A., De Ronchi D. HTR2A gene variants and psychiatric disorders: a review of current literature and selection of SNPs for future studies. Curr. Med. Chem. 2007 - 19 - P. 2053-2069.

139. Schaefer A., O'Carroll D., Tan C.L., Hillman D., Sugimori M., Llinas R., Greengard P. Cerebellar neurodegeneration in the absence of microRNAs // J. Exp. Med. 2007. - V. 204. - P. 1553-1558.

140. Schlesselman J., Case-control studies. Design, conduct, analysis // New York, Oxford: Oxford University Press. 1982. - P.58-96.

141. Schratt G.M., Tuebing F., Nigh E.A., Kane C.G., Sabatini M.E., Kiebler M., Greenberg M.E. A brain-specific microRNA regulates dendritic spine development // Nature. 2006. - V. 439. - P. 283-289.

142. Shidara M., Richmond B.J. Anterior cingulate: single neuronal signals related to degree of reward expectancy // Science. 2002. - V. 296(5573). - P. 17091711.

143. Stefanis N.C., Bresnick J.N., Kerwin R.W., et al. Elevation of D4 dopamine receptor mRNA in postmortem schizophrenic brain // Brain Res Mol Brain Res. 1998. - V. 53(1-2). - P. 112-119.

144. Sun F., Tsuriati I., Yamada Y. Contribution of genetic polymorphisms in ethanol-metabolizing enzymes to problem drinking behavior in middle-aged Japanese men // Behav. Genet. 2002. - Vol. 32. - P.229-236.

145. Sun W., Xue Y., Huang Z., Steketee J.D. Regulation of cocaine-reinstated drug-seeking behavior by kappa-opioid receptors in the ventral tegmental area of rats // Psychopharmacology (Berl). 2010. - Epub ahead of print.

146. Szantai E., Kiraly O., Nemoda Z., et al. Linkage analysis and molecular aplotyping of the dopamine D4 receptor gene promoter region // Psychiatr Genet. 2005. - V. 15(4). - P. 259-270.

147. Tochigi M., Hibino H., Otowa Т., et al. No association of 5-HT2C, 5-HT6, and tryptophan hydroxylase-1 gene polymorphisms with personality traits in the Japanese population // Neurosci Lett. 2006. - V. 403(1-2). - P. 100-102.

148. Tsai N.P., Lin Y.L., Wei L.N. MicroRNA mir-346 targets the 5'-untranslated region of receptor-interacting protein 140 (RIP 140) mRNA and up-regulates its protein expression // Biochem J. 2009. - V. 424(3). - P. 411-418.

149. Tyndale R. Genetics of alcohol and tobacco use in humans // Annals of Medicine. 2003. - Vol.35. - P. 94-121.

150. Uhl G.R., Liu Q.R., Walther D., Hess J., Naiman D. Polysubstance abuse-vulnerability genes: genome scans for association, using 1,004 subjects and1,494 single-nucleotide polymorphisms // Am J Hum Genet. — 2001. — Vol. 69(6).-P. 1290-1300.

151. Van Tol H.H., Bunzow J.R., Guan H.C., Sunahara R.K., Seeman P., Niznik H.B., Civelli O. Cloning of the gene for a human dopamine D4 receptor with high affinity for the antipsychotic clozapine // Nature. 1991. - V. 350(6319). -P. 610-614.

152. Vasudevan S., Tong Y., Steitz J.A. Switching from repression to activation: microRNAs can up-regulate translation // Science. 2007. - V. 318. - P. 19311934.

153. Vaswani M., Prasad P., Kapur S. Association of ADH1B and ALDH2 gene polymorphisms with alcohol dependence: a pilot study from India // Hum Genomics. 2009. - V. 3(3). - P. 213-220.

154. Visvanathan J., Lee S., Lee В., Lee J. W., Lee S. K. The microRNA miR-124 antagonizes the anti-neural REST/SCP1 pathway during embryonic CNS development // Genes Dev. 2007. - V. 21. - P. 744.

155. Vogt L.J., Sim-Selley L.J., Childers S.R., Wiley R.G., and Vogt B.A. Colocalization of Opioid Receptors and Activated G-Proteins in Rat Cingulate Cortex // The J of pharmacology and experimental therapeutics. -2001 Vol. 299(3). - P. 840-848.

156. Wang G., Wang X., Wang Y., Yang J.Y., Li L., Nephew K.P., Edenberg H.J., Zhou F.C. and Liu Y. Identification of transcription factor and microRNA binding sites in responsible to fetal alcohol syndrome // BMC Genomics. — 2008.-V. 9.-S19.

157. Wang Y., Yang H., Li L., Wang H., Zhang C., Yin G., Zhu B. Association between CYP2E1 genetic polymorphisms and lung cancer risk: a meta-analysis // Eur. J Cancer. 2010. - V. 46(4). P. 75 8-64.

158. World drug report of United Nations Office on Drug and Crimes. New York: United Nations. 2009. - 308 P.

159. Worst T.J., Vrana K.E. Alcohol and gene expression in the central nervous system // Alcohol and alcoholism. Vol. 40. №1. - 2005. - P. 63-75.

160. Xie X., Lu J., Kulbokas E.J., Golub T.R., Mootha V., Lindblad-Toh K., Lander E.S., Kellis M. Systematic discovery of regulatory motifs in human promoters and 3' UTRs by comparison of several mammals // Nature. 2005. — V. 434.-P. 338-345.

161. Xing Q.H., Wu S.N., Lin Z.G., et al. Association analysis of polymorphisms in the upstream region of the human dopamine D4 receptor gene in schizophrenia // Schizophr Res. 2003. - V. 65(1). - P. 9-14.

162. Xu K., Liu X., Nagarajan S., Gu X.-Y., Goldman D. Relationship of the delta-opioid receptor gene to heroin abuse in a large Chinese case/control sample // American Journal of Medical Genetics. 2002. - Vol. 110. - P. 45-50.

163. Xu P., Vernooy S.Y., Guo M., Hay B.A. The Drosophila microRNA Mir-14 suppresses cell death and is required for normal fat metabolism // Curr. Biol. -2006.-V. 13.-P. 790-795.

164. Xuei X., Dick D., Flury-Wetherill L., Tian H.-J., Agrawal A., Bierut L., et al. Association of the к-opioid system with alcohol dependence // Molecular Psychiatry.-2006.-Vol. 11.-P. 1016-1024.

165. Yoo A.S., Staahl B.T., Chen L., Crabtree G.R. MicroRNA-mediated switching of chromatinremodelling complexes in neural development // Nature. 2009. - V. 460. - P. 642-646.

166. Yuferov V., Levran O., Proudnikov D., Nielsen D.A., and Kreek M.J. Search for genetic markers and functional variants involved in the development of opiate and cocaine addiction and treatment // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2010. — V. 1187.-P. 184-207.

167. Zhang H.B., Wang Y.F., Li J., Wang В., Yang L. Association between dopamine beta hydroxylase gene and attention deficit hyperactivity disorder complicated with disruptive behavior disorder // Zhonghua Er Ke Za Zhi. -2005.-V. 43(1).-P. 26-30.

168. Zimprich A., Kraus J., Woltje M., Mayer P., Rauch E., Hollt V. An allelic variation in the human prodynorphin gene promoter alters stimulusinduced expression // J Neurochem. 2000. - V. 74(2). - P. 472-477.