Поиск молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с артериальной гипертонией, на модели крыс линии НИСАГ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Кривенко, Анжелика Анатольевна

• Кривенко, Анжелика Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кривенко, Анжелика Анатольевна

1.1. Генетические аспекты изучения артериальной гипертонии человека

1.2. Стресс и гипертония

1.3. Белки теплового шока и артериальная гипертония

1.4. Экспериментальные модели артериальной гипертонии

1.5. Молекулярно-генетические подходы к изучению экспериментальной гипертонии.

1.5.1. Метод генов-кандидатов.

1.5.2. Скрининг генома

Глава II. Материалы и методы

11.1. Экспериментальные животные 40 II. 1.1. Объект исследования - крысы линии НИСАГ

11.2. Измерение артериального давления

11.3. Выделение ДНК из печени крыс

11.4. Выделение тотальной РНК из тканей крыс

11.5.1. Саузерн блот-гибридизация

11.5.2.Нозерн блот-гибридизация 46 II.6. Полимеразная цепная реакция с произвольными

AP-PCR) праймерами на геномной ДНК крыс

И.7. Дифференциальный дисплей суммарной мРНК

11.8. Элюция из высушенного ПААГ

11.9. Элюция из агарозного геля 49 II. 10. Реакция лигирования продуктов ПЦР в pT7Blue Т- Vector (Noyagen, США)

II. 11. Трансформация компетентных клеток E.coli

NovaBlue (Novagen, США)

11.12. Отбор рекомбинантов

11.13. Выделение плазмидной ДНК

11.14. Определение нуклеотидной последовательности клонированного вpT7Blue Т-Vector фрагмента кДНК

11.15. Компьютерный анализ

Глава III. Результаты и обсуждение

III. 1. Анализ генома крыс нормо- и г'ипертензивных линий методом геномного фингерпринтинга

111.2. Анализ косегрегации молекулярно-генетических маркёров с величиной АД у крыс гипертензивной линии НИСАГ

111.2.1.Результаты анализа гибридной популяции В1 с использованием микросателлитного зонда (CA С)

111.2.2.Изучение полиморфизма с помощью полимеразной цепной реакции со случайными праймерами (AP-PCR)

111.3. Полиморфизм гена белка теплового шока HSP

111.4. Дифференциальный дисплей мРНК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Поиск молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с артериальной гипертонией, на модели крыс линии НИСАГ»

Многие широко распространенные заболевания человека, к числу которых относится гипертоническая болезнь, представляют собой патологические состояния со сложным типом наследования. Диагноз - "гипертоническая болезнь" по сути дела объединяет разные клинико-генетические варианты патологии. Кроме того, проявление заболевания зависит не только от генетических, но и от средовых факторов. Поэтому для установления природы гипертонической болезни важно правильно оценить вклад каждого компонента.

Хотя многие физиологические системы, вовлеченные в регуляцию артериального давления, известны, но из-за сложного их взаимодействия как между собой, так и с внешними факторами, трудно определить, какая же из систем претерпела изменения в каждом отдельном случае болезни. Поэтому еще и сегодня артериальную гипертонию во всех клиниках мира в основном лечат эмпирически. Более глубокое понимание природы различных генетико-физиологических механизмов этого заболевания привело бы к специфическому лечению в каждом конкретном случае заболевания.

Создание экспериментальных генетических моделей артериальной гипертонии (линий крыс и мышей) открывает новые возможности для идентификации генов, ответственных за формирование данной патологии и для изучения генетико-физиологических механизмов, лежащих в основе разных ее форм. Одна из таких моделей, которая явилась объектом нашего исследования, - гипертензивная линия крыс НИСАГ (наследственная индуцированная стрессом артериальная гипертония) - была получена в Институте цитологии и генетики СО РАН в результате многолетней селекции по реакции артериального давления в условиях мягкого эмоционального стресса (Маркель, 1985).

Сочетание методов классической генетики с использованием экспериментальных моделей животных и современных молекулярно-генетичес-ких подходов позволяет детально изучать генетические факторы, отвечающие за возникновение и развитие разных форм гипертонической болезни. Использование крыс линии НИСАГ имеет целью исследовать причины и механизмы развития стресс-зависимой или стресс-чувствительной формы артериальной гипертонии. Выявленные морфологические и функциональные изменения сердца, сосудов, и нейро-эндокринной регуляторной системы, возникающие в результате развития артериальной гипертонии у крыс линии НИСАГ, а также особенности генетической селекции данной линии, которая осуществлялась на провокационном фоне, создаваемом эмоциональным стрессом, привлекают особое внимание к механизмам стрессового ответа организма и, в частности, к системе стрессовых белков или белков теплового шока, которым посвящен один из разделов диссертации.

Методом геномной дактилоскопии с использованием мультилокус-ного микросателлитного зонда (САС)5 нами были получены первые результаты, свидетельствующие о высокой степени генетической гомогенности крыс линии НИСАГ, что является одной из основных предпосылок при использовании моделей животных в генетических экспериментах.

Цели и задачи исследования.

Целью настоящей работы были поиск и идентификация молекулярно-генетических маркеров стресс-зависимых гипертензивных состояний на модели стресс-зависимой артериальной гипертонии - крысах линии НИСАГ.

Были определены следующие конкретные задачи:

1) дать сравнительную характеристику ДНК крыс линий с разным гипертензивным статусом - как нормотензивных WAG и Wistar, так и гипертензивных - SHR и НИСАГ, используя методы геномной дактилоскопии, а именно, гибридизационный тест с молекулярным зондом (САС)5 и полиме-разную цепную реакцию со случайными праймерами (AP-PCR);

2) изучить полиморфизм гена белка теплового шока hsp70 у животных линий НИСАГ и SHR, моделирующих разные варианты возникновения артериальной гипертонии, а также нормотензивных линий WAG и Wistar;

3) провести сравнительный анализ геномной ДНК крыс гипертензив-ной линии НИСАГ, нормотензивной линии Wistar и их гибридов с целью выявления ДНК-маркёров артериальной гипертонии;

4) оценить изменения спектра мРНК при стрессе у крыс линии НИСАГ и нормотензивной линии WAG методом дифференциального дисплея.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Кривенко, Анжелика Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Характеристика генома крыс линии НИСАГ методом геномного фингерпринтинга выявила высокую степень гомозиготности линии, что делает возможным использовать её для генетического анализа и поиска генов, участвующих в детерминации артериальной гипертонии.

2. Сравнительный анализ геномов 4-х линий крыс (НИСАГ, SHR, WAG, Wistar) методом геномного фингерпринтинга показал, что разные модели артериальной гипертонии отличаются как друг от друга, так и от нор-мотензивных линий по картине полиморфизма микросателлитных районов ДНК. Не было обнаружено одиночных ДНК-маркёров, которые бы отличали обе гипертензивные линии (НИСАГ и SHR) от исследованных нормотен-зивных (WAG, Wistar), однако, были найдены специфические комбинации таких маркёров. Эти данные подтверждают концепцию полигенной детерминации и генетической гетерогенности артериальной гипертонии.

3. Проведен сравнительный анализ геномной ДНК крыс гипертензив-ной линии НИСАГ, нормотензивной линии Wistar, а также гибридных популяций Fi и беккроссов, полученных путём возвратного скрещивания гибридов Fi с крысами линии Wistar. Методами геномной дактилоскопии с использованием олигонуклеотидного зонда (САС)5 и полимеразной цепной реакции со случайными праймерами (AP-PCR) выявлены молекулярно-гене-тические маркёры, ассоциированные с артериальной гипертонией у крыс линии НИСАГ.

3.1. Анализ популяции бэккроссов выявил полиморфизм геномной ДНК. Для животных с высоким базальным уровнем АД при молекулярной гибридизации их ДНК, рестриктированной эндонуклеазой НаеШ, с мульти-локусным микросателлитным зондом (САС)5 было показано наличие фрагмента длиной 4,8 т.п.н. Вклад этого локуса в детерминацию величины базального АД у крыс линии НИСАГ составляет 50%.

3.2. При сравнении 2-х групп крыс-бэккроссов с низкими и высокими значениями АД при эмоциональном стрессе методом AP-PCR был обнаружен фрагмент ДНК длиной 700 п.н., косегрегирующий с повышением АД при стрессе. Данный фрагмент присутствует у всех особей гипертензивной линии НИСАГ и не выявлен у крыс линии Wistar.

4. Проведено изучение полиморфизма длин рестрикционных фрагментов гена hsp70 в линиях с повышенным и нормальным АД. Для BamHI рестрикционных фрагментов 4100, 2900 и 1200 п.н. показано наличие межлинейного полиморфизма. Гипертензивная линия SHR имеет фрагмент 2900 п.н., для которого ранее была показана связь с гипертензивным статусом, тогда как для другой гипертензивной линии НИСАГ характерен фрагмент 4100 п.н., ранее выявленный только у животных с нормальным уровнем АД. Таким образом, связь полиморфизма гена hsp70 с гипертонией наблюдается не во всех экспериментальных моделях артериальной гипертонии.

5. Методом дифференциального дисплея проведен анализ изменения спектра мРНК при стрессе в печени самцов нормотензивной линии WAG и гипертензивной линии НИСАГ. Обнаружен и клонирован фрагмент кДНК размером 240 п.н., который при гибридизации с мРНК крыс линии НИСАГ выявляет транскрипт, образующейся как при индукции стрессом, так и в контроле, а у линии WAG только при стрессе.

5.1. Определена первичная структура выявленного фрагмента кДНК. Компьютерный анализ нуклеотидной последовательности показал, что имеется гомология данного фрагмента с LTR-подобным участком ORR1A ретротранспозона - представителя суперсемейства - Mammalian apparent LTR-retrotransposone. Учитывая повышенную стресс-реактивность крыс линии НИСАГ (что может быть связано с перманентной экспрессией описанного фрагмента), полученные данные перспективны в плане изучения участия ретротранспозонов в осуществлении стрессовой реакции.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Утверждение о том, что гипертоническая болезнь поистине является болезнью века, не является оригинальным, но мы вынуждены повторить это, так как медицинская статистика свидетельствует о чрезвычайно широком распространении данного заболевания: артериальное давление повышено примерно у 24% взрослого населения. Начинаясь исподволь и обычно не сопровождаясь какими-либо пугающими симптомами, гипертоническая болезнь постепенно делает свое дело, приводя к развитию тяжелых осложнений (инсульт, инфаркт миокарда) и неумолимо сокращая срок человеческой жизни. В то же время успехи медицины в борьбе с гипертонической болезнью отнюдь не пропорциональны тем усилиям, которые в этом направлении прилагаются. Такое положение объясняется прежде всего сложностью задачи, которую предстоит решить. Эту задачу можно сформулировать следующим образом. Необходимо выяснить, какова причина (или причины) первичной или эссенциальной гипертонии (гипертонической болезни) и, далее, каковы наиболее оптимальные и эффективные методы предупреждения и лечения этого заболевания и вызываемых им осложнений. Исследованию некоторых аспектов первой части данной проблемы и посвящена диссертация.

Были получены следующие основные результаты: а) С помощью ДНК-фингерпринтинга дана сравнительная характеристика 4-х линий крыс: двух гипертензивных - НИСАГ и SHR, и двух нормо-тензивных - WAG и Wistar. В качестве молекулярного зонда использовали синтетический олигонуклеотид (САС)5, гомологичный гипервариабельным микросателлитным повторяющимся последовательностям. Показана высокая генетическая гомогенность инбредных линий НИСАГ, SHR и WAG. Аутбредная линия Wistar несёт 30% полиморфных аллелей. При сравнении линий не было найдено одиночных ДНК-маркёров, которые могли бы отличить гипертензивные линии от нормотензивных, однако были установлены комбинации фрагментов, которые встречались у номотензивных линий WAG и Wistar, но отсутствовали у гипертензивных крыс НИСАГ и SHR.

Для анализа ассоциации выявленных полиморфных фрагментов ДНК с АД была использована популяция беккроссов, полученная при скрещивании гибридов F1 (Wistar х НИСАГ) с крысами линии Wistar. При гибридизации ДНК, гидролизованной эндонуклеазой НаеШ, с микросателлитным зондом (САС)5 была обнаружена косегрегация базального АД с полиморфным ДНК-фрагментом размером 4,8 т.п.н. Причем, с уровнем АД при стрессе этот фрагмент не косегрегирует. Оценка его вклада в повышение базального АД у крыс НИСАГ по сравнению с Wistar составляет около 50%. б) На той же популяции крыс-бекроссов и у родительских линий проведено изучение полиморфизма с помощью полимеразной цепной реакции со случайными праймерами (AP-PCR). Скрининг геномной ДНК показал, что 3 из 20 использованных праймеров выявляли межлинейный полиморфизм. В работе использованы 2 из них как наиболее информативные. Показана косегрегация одного из полиморфных ДНК-фрагментов размером 700 п.н. с величиной прироста АД при стрессе. Ассоциации данного маркёра с базальным АД не найдено. в) Повышенная стресс-реактивность крыс линии НИСАГ и известная из литературы связь между белками теплового шока и АД послужили основанием для исследования локуса, кодирующего один из главных стрессовых белков HSP70. Структура гена hsp70 исследована путем анализа полиморфизма рестрикционных фрагментов. Зондом служила вставка из плаз-миды p68(N-N), содержащая 5'-концевой район гена hsp70 крысы. У гипер-и нормотензивных линий при рестрикции эндонуклеазой BamHI обнаружено 2 типа сочетания ДНК-фрагментов: 1-ый тип включает фрагменты размером 12200, 6500, 4100 и 1600 п.н., 2-ой тип- 12200, 6500, 2900, 1600 и

1200 п.н. При анализе межлинейного полиморфизма выяснилось, что фрагменты 2900 и 1200 п.н. сцеплены и либо образуются, либо не образуются (и тогда присутствует фрагмент 4100 п.н.) в зависимости от наличия или отсутствия точечной мутации А>Т в лидерной последовательности гена на расстоянии +35 п.н. от начала транскрибируемого района в сайте узнавания BamHI. Фрагменты 2900 и 1200 ассоциированы с повышенным АД только у крыс линии SHR. У крыс НИСАГ имеется 1-ый гаплотип. Отсюда можно сделать вывод, что полиморфизм гена hsp70 либо не имеет отношения к артериальной гипертонии, либо его эффект, о наличии которого пишут Хамет и соавторы (Hamet et al., 1990), проявляется лишь при некоторых её формах. г) Проведен анализ экспрессии генов в ткани печени в покое и при стрессе у крыс линий НИСАГ и WAG методом дифференциального дисплея (arbitrarily primed reverse transcription-coupled PCR). Обнаружен фрагмент, присутствующий у крыс линии НИСГ как в контроле, так и при стрессе. У крыс линии WAG данный фрагмент выявляется только после стессовой стимуляции и отсутствует в контроле. Экспрессируемая последовательность клонирована и секвенирована. Показана её гомология с LTR ретротранспозона ORR1A, который является представителем суперсемейства Mammalian apparent LTR-retrotransposone. Учитывая повышенную стресс-реактивность крыс линии НИСАГ (что может иметь отношение к перманентной экспрессии описанного фрагмента), полученные данные перспективны в плане изучения участия ретротранспозонов в осуществлении стрессовой реакции.

Обобщая полученные результаты, можно прийти к следующему заключению. Артериальная гипертония обусловлена не одной, а в разных случаях и в разных экспериментальных моделях разными генетическими причинами, которые к тому же могут действовать как изолированно, так и во взаимодействии друг с другом и с некоторыми способствующими проявлению болезни обстоятельствами. В комплексе причин, приводящих к развитию артериальной гипертонии, велико значение генетической компоненты. Экспериментальные исследования показали, "что гипертоническая болезнь не является моногенной патологией, но типичным полигенным заболеванием, развитие которого связано с определённой констелляцией генов, каждый из которых вносит свой вклад в повышение артериального давления. Помимо полигении, для состояния артериальной гипертензии характерно наличие генетической гетерогенности, то-есть такого положения, когда в разных моделях заболевания повышение артериального давления может детерминироваться разными наборами полигенов, часть которых всё же может быть общей для некоторых моделей. Кроме эндогенных (генетических) факторов формированию заболевания могут способствовать некоторые внешние причины, в частности, психоэмоциональный стресс. Как показала наша работа, действие стресса приводит к повышению артериального давления в случае, если имеется обусловленная генотипом повышенная чувствительность к действию психоэмоционального стресса.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кривенко, Анжелика Анатольевна, 1999 год

1. Агол В.И., Богданов A.A., Гвоздев В.А., Грагеров А.И., Колчинский A.M., Мирзабеков А.Д., Никифоров В.Г. Молекулярная биология // М.: Высшая школа. 1990.-229 с.

2. Адаричев В.А., Корохов Н.П., Остапчук Я.В., Дымшиц Г.М., МаркельА.Л. Характеристика линий крыс с нормотензивным и гипертензивным статусом методом геномного фингерпринтинга // Генетика. 1996.- Т.32 - №10.- С.1-4

3. Антонов А.Р., Маркель А.Л., Якобсон Г.С. Функциональная активность щитовидной железы у крыс с наследственной артериальной гипертензией в динамике инфаркта миокарда // Актуальные проблемы кардиологии. -Тезис, конфер. Томск - 1994. - С. 237. .

4. Барбашина Н.Е., Маркель А.Л., Шошенко К.А. Новые данные к пониманию механизмов артериальной гипертензии // Патофизиологический анализ факторов риска артериальной гипертензии и атеросклероза. Тезис, конфер. - Новосибирск - 1992. - С.8.

5. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев стистики в медико-биологических исследованиях. 1973. - Л. - Медицина -150 с.

6. Иванов П.Л., Семиохина А.Ф., Рысков А.П. Геномная дактилоскопия крыс Rattus norvegicus: новый подход к генетическому маркированию. // Генетика. 1989. - T.XXV - №2 - С.23 8-249.

7. Калачиков С.М., Адаричев В.А., Дымшиц Г.М. Иммобилизация ДНК на микропористых мембранах с помощью УФ-облучения // Биоорг. химия. -1992. Т.18 - № 1. - С.52-62.

8. Котлобай A.A. Некоторые биохимические и физиологические характеристики крыс с наследственной, индуцируемой стрессом артериальной гипертензией: Дис. . канд. биол. наук.- М.: Изд-во МГУ 1989.-214 с.

9. Лопина О.Д., Котлобай A.A., Камерницкий A.B., Павлова-Гришина Н.С. и др. Na-K-АТФ-аза почек крыс с наследственной гипертонией, индуцируемой стрессом // Укр. Биохим. Журн.- 1991.-Т.63 вып. 3. - С.45-52(а)

10. Мазин A.B., Кузнеделов К.Д., Краев A.C. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука. - 1990. - С.40-41.

11. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. -Молекулярное клонирование. М.: Мир. - 1984. - 490 с.

12. Маркель А.Л. Генетическая модель индуцированной стрессом артериальной гипертонии // Известия АН СССР. 1985. - №3.- С.466-469.

13. Маркель А.Л. Особенности поведения крыс с наследственно обусловленной артериальной гипертензией // Журн. Высш. Нервн. Деят. 1986. -T.XXXVI - вып.5 - С.956-962.

14. Маркель А.Л. Характеристика новой линии крыс с наследственно обусловленной артериальной гипертензией. В кн.: Проблемы сохранения и поддержания генетических коллекций лабораторных животных. АН СССР -Институт биофизики. Пущино. - 1991. - С.88-92

15. Осадчук А. В., Маркель А. Л., Хусаинов Р. А., Науменко Е.В., БеляевД.К. Проблемы генетики стресса. Сообщение 4. Генетический анализ уровня вегетативной реактивности при эмоциональном стрессе у крыс // Генетика. -1979. Т.15. - №10. - С.1847-1857.

16. Петрова Г.В. Особенности стресс-реактивности у крыс с наследственной индуцированной стрессом артериальной гипертензиейю Автореф. канд. дисс. - Новосибирск - 1997 - 16 с.

17. Петрова Г.В., Адаричев В.А., Кривенко A.A., Дымшиц Г.М., МаркельА.Л., Якобсон Г.С. Содержание основного белка теплового шока

18. HSP70 у крыс с наследственной, индуцируемой стрессом артериальной гипертензией // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1997. Т. 124 - №8 - С.171-174.

19. Петрова Г.В., Кривенко A.A. Сравнительная оценка устойчивости крыс гипертензивной линии НИСАГ и нормотензивной линии Вистар к тепловому стрессу. // Материалы научной конференции "Механизмы адаптации организма" Томск, 3-5 декабря - 1996 - С.34-35.

20. Петрова Г.В., Кривенко A.A. Сравнительная характеристика устойчивости крыс гепертензивной линии НИСАГ и нормотензивной линии Вистар к тепловому стрессу // В кн.: Механизмы адаптации организма. Томск. -1996.-С. 17-18.

21. Пиянзин А.И., Маркель А.Л. Уровень серотонина и 5-гидроксииндол-уксусной кислоты в отделах мозга у линии крыс с-наследственной индуцируемой стрессом артериальной гипертензией // Извест. Сибир. Отдел. АН СССР. Серия биол. 1989. - вып.2. - С. 121-123.

22. Свечников К.В., Попова Н.К., Маркель А.Л. Изменения в периферической серотонинэргической системе у крыс с наследственной артериальной гипертензией // Пат. Физиол. Эксперим. Терапия. 1988. - №33. - С.29-32.

23. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме.- М.:Медгиз 1960. - 207с.

24. Ali S., Muller C.R., Epplen J.T. DNA fingerprinting by oligonucleotide probes specific for simple repeats // Human Genetics. 1986. - V.74 - P.239-243.

25. Altschul S.F., Gish W, Miller W, Myers E.W. Lipman D.J. // J. Mol. Biol. -1990. V.215 - P.403-410.

26. Aderem A. The MARCKS brothers: a family of protein kinase С substrates. // Cell. 1992. - V.27. - № 71 - P.713-716.

27. Aguilera G., Kiss A., Luo X., Akbasak B.-S. The renin angiotensin system and the stress response // In Stress. Basic mechanisms and clinical implications. Ed. Chrousos G.P. et al. 1995. - V.771. - P.173-186.

28. Ben-Ishay D., Saliternik R., Welner A.Separation of two strains of rats with inbred dissimilar sensitivity to Doca-salt hypertension. // Experientia. 1972. -V.15. - №28. - P.1321-1322.

29. Bianchi G., Fox P., Imbasciati E. The development of a new strain of spontaneously hypertensive rats. // Life Sci. 1974. - V.14. - P.339.

30. Birkenhager W.H., Reid J.L. (Eds.) Experimental and Genetic Models of Hypertension. 1984. - Elsevier. - Amsterdam - 549p.

31. Blake M.J., Klevay L.M., Halas E.S., Bode A.M. Blood pressure and heat shock protein expression in response to acute and chronic stress. // Hypertension.- 1995. V.25. - №4. - Pt.l. - P.539-544.

32. Bohlender J., Fukamizu A., Lippoldt A., Nomura T., Dietz R., Menard J., Murakami K., Luft F.C., Ganten D. High human renin hypertension in transgenic rats. // Hypertension. 1997. - V.29. - № 1. - Pt.2 - P.428-434.

33. Bongrazio M., Comini L., Gaia G., Bachetti T., Ferrari R. Hypertension, aging, and myocardial synthesis of heat-shock protein 72. //Hypertension. 1994.- V.24 № 5. - P.620-624.

34. Bonnardeaux A., Davies E., Jeunemaitre X., Fery I., Charru A., Clauser E., Tiret L., Cambien F., Corvol P., Soubrier F. Angiotensin II type 1 receptor gene polymorphism in human essential hypertension. // Hypertension. -1994. V.24. -№1. - P.63-69.

35. Bouhnik J., Richoux J.P., Huang H., Savoie F., Baussant T., Alhenc-Gelas F., Corvol P. Hypertension in Dahl salt-sensitive rats: biochemical and immunohistochemical studies. // Clin. Sci. (Colch). 1992 V.83. - P. 13-22.

36. Bruschi G., Bruschi M.E., Caroppo M., Orlandini G., Pavarani C., Cavatorta A. Intracellular free Ca2+. in circulating lymphocytes of spontaneously hypertensive rats. // Life Sci. 1984. - V.35 - №5. - P.535-542.

37. Bunag R.D. Measurement of blood pressure in rats. // In: Handbook of hypertension. Experimental and genetic models of hypertension. Ed. De Jong W.Amsterdam-New York-Oxford: Elsevier. 1984. - V4. - P. 1-13.

38. Burke T., Dolf G., Jeffereys A.J., Wolff R. (Eds.) DNA Fingerprinting: Approaches and Applications Basel: Birkhauser Verlag."- 1991. - 400p.

39. Caddle M.S., Lussier R.H., Heintz N.H. Intramolecular DNA triplex, bent DNA and DNA unwinding elements in the initiation region of an amplified dihydrofolate reductase replicon. // J. Mol.Biol. 1990. - V.211. - P. 19-33.

40. Cicila G.T., Rapp J.P., Wang J.M., St Lezin E., Ng S.C., Kurtz T.W. Linkage of 11 beta-hydroxylase mutations with altered steroid biosynthesis and blood pressure in the Dahl rat. // Nat. Genet. 1993. - V.3. - P.346-353.

41. Dahl L.K. Excessive salt intake and hypertension : a dietary and genetic interplay. // Brookhaven Lecture Ser. 1962. - V.12. - P.20.

42. Dahl L.K., Heine M., Tassinari L. Effects of chronic excesssalt ingestion: evidence that genetic factors play an important role in susceptibility to experimantal hypertension. // J. Experim. Med. 1962 - V.l 15 - P. 1173-1177.

43. Dene H., Mcllwain C., Rapp J.P. Quantitation of renal renin and renin mRNA in Dahl rats in response to provocative stimuli. // Clin. Exp. Hypertens. 1989. -V.ll. - P.1585-1594.

44. Deng AY, Dene H, Rapp JP. Mapping of a quantitative trait locus for blood pressure on rat chromosome 2. // J. Clin. Invest. 1994. - V.94 - №1. - P.431-436.

45. Deng Y., Rapp J.P. Cosegregation of blood pressure with angiotensin converting enzyme and atrial natriuretic peptide receptor genes using Dahl saltsensitive rats. // Nat. Genet. 1992. - V.l - №4. - P.267-272.

46. Devynck M.A., Pernollet M.G., Nunez A.M., Meyer P. Analysis of calcium handling in erythrocyte membranes of genetically hypertensive rats. // Hypertension. 1981. - V.3 - №4. - P.397-403.

47. Doggrell S.A., Brown L. Rat models of hypertension, cardiac hypertrophy and failure. // Cardiovasc. Res. 1998. - V.39 - № 1. - P.89-105.

48. Dorn II G. W., Davis M.G., D'angelo D.D. Gene expression during phorbol ester-induced differentiation of cultured human megakaryoblastic cells // The American Physiological Society. 1994. - V.l. - P. 1231-1239.

49. Dupont J., Dupont J.C., Froment A., Milon H., Vincent M. Selection of three strains of rats with spontaneously different levels of blood pressure // Biomedicine. 1973. - V.19. - P.36.

50. Duru K., Farrow S., Wang J.M., Lockette W., Kurtz T. Frequency of a delition polymorphism in the gene for angiotensin cnverting enzyme is increased in African-Americans wiht hypertention. // Am. J. Hypertens. 1994. - V.7. - №8.-P.759-762.

51. Ely D.L. Organization of cardiovascular and neurohumoral responses to stress. Implications for health and disease. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1995. - V.29. - № 771. - P.594-608.

52. Feinberg A.P., Vogelstein B. A Technique for Radiolabeling DNA Restriction Endonuclease Fragments to High Specific Activity // Anal. Biochem. 1983. -V.132. - P.6-13.

53. Ferrari P., Ferrandi M., Torielli L., Canessa M,. Bianchi G. Relationship between erythrocyte volume and sodium transport in the Milan hypertensive rat and age-dependent changes. //J. Hypertens. 1987. - V.5. - №2. - P. 199-206.

54. Friedman M., Rosenman R. Type A behavior and your heart. Knopf - N.Y. 1974.-273p.

55. Ganten D. Role of animal models in hypertension research. // Hypertension. -1987.- V.9.-№1-p.I-2 -1-4.

56. GardnerK., Bennett V. A new erythrocyte membrane-associated protein with calmodulin binding activity. Identification and purification. // J. Biol. Chem. -1986. V.261. №3. - P.1339-1348.

57. Gardner K., Bennett V. Modulation of spectrin-actin assembly by erythrocyte adducin. // Nature. 1987. - V. 328. - №6128. - P.359-362.

58. Hamet P. Environmentally-regulated genes of hypertension. // Clin. Exp. Hypertens. 1996. - V18. - №3-4 - P.267-278.

59. Hamet P., Malo D., Hashimoto T., Tremblay J. Heat stress genes in hypertension // J. Hypertension.- 1990.- V.8 (suppl 7). P.47-52.

60. Hamet P., Malo D., Tremblay J. Increased transcription of a major stress gene in spontaneously hypertensive mice. // Hypertension. 1990. - V.15. - №6. - Pt.2. - P.904-908.

61. Hard E., Carlsson S.G., Jern S., Larsson K. et al. Behavioral reactivity in spontaneously hypertensive rats. // Physiology & Behavior.-1985.- V.35.- P.487-492.

62. Harris E.L., Dene H., Rapp J.P. SA gene and blood pressure cosegregation using DahLsalt-sensitive rats. // Am. J. Hypertens. 1993. - V.6. - №4. - P.330-334.

63. Hashimoto T., Mosser R.D., Tremblay J., Hamet P. Increased accumulation of hsp 70-kD mRNA due to enhanced activation of heat-shock transcription factor in spontaneously hypertensive rats. // J. Hypertens. 1991.- V.9. - №6. - P. 170171.

64. Hendley E.D., Wessel D.J., Atwater D.G., Gellis J. et. al. Age, sex and strain differences in activity and habituation in SHR and WKY rats // Physiology & Behavior. 1985- V.34. - P.379-383.

65. Holmes D.S., Quigley M. A rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmids.//Anal. Biochem. 1981. - V.l 14. - P. 193-197.

66. Iwai N., Inagami T. Isolation of preferentially expressed genes in the kidneys of hypertensive rats.//Hypertension. 1991. - V. 17. - №2. - P. 161-169.

67. Iwai N., Kurtz T.W., Inagami T. Further evidence of the SA gene as a candidate gene contributing to the hypertension in spontaneously hypertensive rat. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. - V.188. - №1. - P.64-69.

68. Izumo S., Nadal-Ginard B., Mahdavi V. Protooncogene induction and reprogramming of cardiac gene expression produced by pressure overload. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988.- V.85. - №2. - P.339-343.

69. Jacob H.J., Lindpaintner K., Lincoln S.E., Kusumi K., BunkerR.K., Mao Y.P., Ganten D., Dzau V.J., Lander E.S. Genetic mapping of a gene causing hypertension in the stroke-prone spontaneously hypertensive rat.// Cell.- 1991. -V.67-№l.-P.213-224.

70. Jeffreys A.J., Turner M., Debenham P. The efficiency of Multilocus DNA Fingerprinting Probes for Individualization and Establishment of Family Relationships, Determined from Extensive Casework. // Am. J .Hum. Genet. -1991.- V.48 P.824-840.

71. Jeunemaitre X., Soubrier F., Kotelevtsev Y.V., Lifton R.P., Williams C.S., Charru A.,Hunt S.C., Hopkins P.N.,Williams R.R., Lalouel J.M., Corvol P. Molecular basis of human hypertention:role of angiotensinogen.// Cell. 1992.-V.71- №1 - P.169-180.

72. John S.W., Krege J.H., Oliver P.M., Hagaman J.R., Hodgin J.B., Pang S.C., Flynn T.G.,Smithies O. Genetic decreases in atrial natriuretic peptide and saltsensitive hypertension. // Science. 1995. - V.3. - № 267(5198). - P.679-681

73. Joseph R., Dou D., Tsang W. Molecular cloning of a novel mRNA (neuronatin) that is highly expressed in neonatal mammalian brain // Biochemical and Biophysical Research Communications. 1994. - V.201. - P. 1227-1234.

74. Jurka, J., Walichiewicz, J., Milosavljevic, A. Prototypic sequences for human repetitive DNA. // J. Mol. Evol. 1992. - V.35 - P.286-291.

75. Kamitani A., Rakugi H., Higaki J., Yi Z., Mikami H., Miki T., Ogihara T. Association analysis of a polymorphism of the angiotensinogen gene with essential hypertension in Japanese.// J. Hum. Hypertens. 1994 - V.8 - №7 -P.521-524.

76. Karin M. The regulation of AP-1 activity by mitogen-activated protein kinases. // J. Biol. Chem. 1995.- V.270. - P.16483-16486.

77. Kaufmann S.H.E. Heat shock proteins and the immune responcee.// Immunology Today. 1990. - V.l 1. - P. 129-136.

78. Kravtsov G.M., Dulin N.O., Postnov Y.V. Activity of protein kinase C in erythrocytes in primary hypertension. // J. Hypertens. 1988. - V.6 - №11 -P.853-857.

79. Kravtsov G.M., Dulin N.O., Postnov Iu.V. Protein kinase C activity in the brain tissue of spontaneously hypertensive rats. // Biull. Eksp. Biol. Med. 1989.- V.l 08 №7-P. 42-44.

80. Kunes J., Poirier M., Tremblay J., Hamet P. Expression of hsp70 gene in lymphocytes from normotensive and hypertensive humans.// Acta Physiol. Scand.- 1992. V.146-№3-P.307-311.

81. Kurtz T.W, Simonet L., Kabra P.MÏ, Wolfe S., Chan L, Hjelle B.L. Cosegregation of renin allele of spontaneously hypertensive rat with increase in blood pressure. //J. Clin.invest. 1990. - V.85 - №4 - P.1328-1332.

82. Lander E., Schork J. Genetic dissection of complex traits. // Science. 1994 -V.265 - P.2037-2048.

83. Langheinrich M., Lee M.A., Bohm M., Pinto Y.M., Ganten D., Paul M. The hypertensive Ren-2 transgenic rat TGR (mREN2)27 in hypertension research. Characteristics and functional aspects. // Am. J. Hypertens. 1996. - V.9 - № 5 -P.506-512.

84. Liang P., Averboukh L., Pardee A. B. Distribution and cloning of eukariotic mRNAs by means of differential display: refinements and optimization // Nucl. Acids Res.- 1993. V. 21 - P.3269-3275.

85. Liang P., Pardee A.B. Differential display of eukariotic messenger RNA by means of the polymerase chain reaction // Science. 1992. - V.257. - P.967-971.

86. Lifton R.P. Molecular genetics of human blood pressure variation // Science. -1996. V.272. - P.676-680.

87. Lindpainter K. Blood pressure and heridity. Is it all in the genes, or not? // Hypertension. 1993. - V.22. - P.147-149.

88. Lisowska K., Wisniewski J. and Krawczyk Z. Isolation of a gene coding for a major heart shock protein HSP71 in rat // Acta Biochimica Polonica. 1990. -V.37 - №1 - P.55-58.

89. Litt M., Luty J.A. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene.// Am. J. Hum. Genet. 1989. - V.44 - №3 - P.397-401.

90. Lopez M.J., Wong S.K., Kishimoto I., Dubois S., Mach V., Friesen J., Garbers D.L., Beuve A. Salt-resistant hypertension in mice lacking the guanylyl cyclase-A receptor for atrial natriuretic peptide. // Nature. 1995. - V.2 -№378(6552) -P.65-68.

91. Mackinnon M.J., Georges M.A.J. The effects of selection on linkage analysis for quantitative traits. // Genetics. 1992 - V. 132 - P. 1177-1185.

92. Malo D., Schlager G., Tremblay J., Hamet P. Thermosensitivity, a possible new locus involved in genetic hypertension. // Hypertension. 1989. - V.14 - №2 - P.121-128.

93. Markel A.L. Development of a new strain of rats with inherited stress-induced arterial hypertension.// Genetic Hypertension. 1992. - Ed. Sassard colloque INSERM/John Libbey eurotex Ltd. - V.218 - P.405-407.

94. McInnes L.A., Freimer N.B. Mapping genes for psychiatric disorders and behavioral traits. // Current Opinion in Genetics and Development. 1995 - V.5 -P.376-381.

95. Morimoto R.I. Cells in stress: transcriptional activation of heat shock genes. // Science 1993. - V. 259 -P. 1409-1410. ;

96. Morimoto R.I., Santoro M.G. Stress-inducible responses and heat shock proteins: new pharmacologic targets for cytoprotection. // Nat. Biotechnol. -1998. V.16 - №.9 - P.833-838.

97. Morris BJ. Chromosome 17q23: a locus for cardiovascular disease. // Clin .Exp. Pharmacol. Physiol. 1993. - V.20 - №5 - P.279-282.

98. Morris B.J. Identification of essential hypertension genes // Journal of Hyper-tension. 1993. - V.l 1 - P.l 15-120.

99. Mullins L.J., Morley S.D., Mullins J.J." Transgenics and essential hypertension. // J.Hum.Hypertens. 1996. - V. 10 - № 10. - P.627-631.

100. Munro S., Pelham H.R.B. An Hsp70-like Protein in the ER: Identity with the 78 kd Glucose-Regulated Protein and Immunoglobulin Heavy Chain Binding Protein // Cell. 1986. - V.46 - P.291-300.'

101. Naftilan A.J., Williams R., Burt D., Paul M., Pratt R.E., Hobart P., Chirgwin J., Dzau V.J. A lack of genetic linkage of renin gene restriction fragment length polymorphisms with human hypertension. // Hypertension. 1989. - V.l4 - №6 -P.614-618.

102. Okamoto K., Aoki K. Development of a strain of spontaneously hypertensive rats // Jpn.Circ.J. 1963. - V.27 - P.282-293.

103. Okamoto K., Yamori Y., Nagaoka A. Establishment of the stroke-prone spontaneously hypertensive rat.// Circ. Res. 1974. - V.34-35 - P.143-153.

104. Okura T., Kitami Y., Hiwada K. Restriction fragment length polymorphisms of the human renin gene:association study with a family history of essential hypertension.// J. Hum. Hypertens. 1993. - V.7 - №5 - P.457-461. .

105. Okura T., Kitami Y., Wakamiya R., Iwata T., Hiwada K. Renin gene restriction fragment length polymorphisms in a Japanese family with a high incidence of essential hypertension.// Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. Suppl. -1992. V.20-P.17-19.

106. Pearson W.R., Lipman D.J. // Proc. Natl. Acad. Sci, USA. 1988. - V.85 -P.2444-2449.

107. Pinto Y.M., Paul M., Ganten D. Lessons from rat models of hypertension: from Goldblatt to genetic engineering. // Cardiovasc. Res. 1998. - V.39 - № 1 -P.77-88.

108. Postnov Y.V. An approach to the explanation of cell membrane alteration in primary hypertension.// Hypertension. 1990. - V.15 - №3 - P.332-337.

109. Pravenec M., Klir P., Kren V., Zicha J., Kunes J. An analisis of spontaneous hypertension in spontaneously hypertensive rats by means of new recombinant inbred strains // J. Hyperts. 1989. - V.7 - P.217-222.

110. Pravenec M., Simonet L., Kren V., Kunes J., Levan G., Szpirer J., Szpirer C., Kurtz T. The rat renin gene: assignment to chromosome 13 andlinkage to the regulation of blood pressure. // Genomics. 1991. - V.9 - № 3 - P.466-472.

111. Pravenec M., Sun Y.L., Kunes J., Kong D., Kren V., Klir P., Tremblay J., Hamet P. Environmental Susceptibility in Hypertension: Potential Role of HSP70 and TNFa Genes // J. Vascular Medicine and Biology. 1991. - V.3 - P. 297-302.

112. Rapp J.P. The search for the genetic basis of blood pressure variation in rats. // In. Hypertension: Pathophysiology, Diagnosis, and Management Second

113. Edition Ed. J.H. Laragh and B.M. Brenner. - Raven Press Ltd. - New York. -1995. -P.1289-1299.

114. Rapp J.P., Dahl L.K. Adrenal steroidogenesis in rats bred for susceptibility and resistance to the hypertensive effect of salt.// Endocrinology. 1971. - V.88 -№1 - P.52-65.

115. Rapp J.P., Dahl L.K. Mandelian inheritance of 18- and 11 beta-steroid hydroxylase activities in the adrenals of rats genetically susceptible or resistant to hypertension.// Endocrinology. 1972. - V.90 - №6 - P. 1435-1446.

116. Rapp J.P., Dahl L.K. Possible role of 18-hydroxy-deoxycorticosterone in hypertension. //Nature. 1972. - V.237 - №5354 - P.338-339.

117. Rapp J.P., Dahl L.K. Mutant forms of cytochrome P-450 controlling both 18-and 11 beta-steroid hydroxylation in the rat.// Biochemistry. 1976. - V.15 - №6 -P.1235-1242.

118. Rapp J.P., Dene H. Development and characteristics of inbred strains of Dahl salt-sensitive and salt-resistant rats. // Hypertension. 1985. - V.7 - №.3 - Pt.l -P.340-349.

119. Rapp J.P., Dene H., Deng A.Y. Seven renin alleles in rats and their effects on blood pressure. // J. Hypertens. 1994. - V.12 - №4 - P.349-355.

120. Rapp J.P., Deng A.Y. Detection and positional cloning of blood pressure quantitative trait loci: is it possible? Identifying the genes for genetic hypertension. // Hypertension. 1995. - V.25 - №6 - P. 1121-1128.

121. Rapp J.P., Wang S.M., Dene H. A genetic polymorphism in the renin gene of Dahl rats cosegregates with blood pressure. // Science. 1989. - V.243 - P.542-544.

122. Rapp J.P., Wang S.M., Dene H. Effect of genetic background on cosegre-gation of renin alleles and blood pressure in Dahl rats. // Am. J. Hypertens. -1990. V.3 - №5 - Pt.l - P.391-396.

123. Reitz M.S., Wu A.M., Callo R.C. Sythesis of type C virus particles from murine cultured cells induced by iodeoxyuridine. Biosythesis of reverse transcriptase // J. Cancer. 1977. - V.20 - P.67-74.

124. Resnick L.M. Calcium metabolism in hypertension and allied metabolic disorders. // Diabetes Care. 1991 - V.14 - P.505-520.

125. Richards R.I., Sutherland G.R. Dynamic mutations: a new class of mutations causing human disease.// Cell. 1992. - V.70 - №5 - P.709-712.

126. Risch N., Merikangas K. The Future of Genetic Studies of Complex Human Diseases. // Science. 1996. - V.273 - P.1516-1517.

127. Ruchlow K.E., Lautenberger J.A., Reddy E.P., Sousa Z.M., Balude M.A. Chirikjan J.G., Papas T.S. Nucleotide sequence analysis of the long terminal repeat of avian myeloblastosis virus and adjacent host sequence // J. Virol. -1982. V.42 - P.840-842.

128. Sargent C.A., Dunham J., Campbell R.D. Identification of multiple HTF-island associated genes in the human major histocompatibility class III region // EMBO J. 1989. - V.8 - №8 - P.2305-2312.

129. Schlager G. Selection for blood pressure levels in mice.// Genetics. 1974. -V.76 - P.537-549.

130. Schlesinger M.J. Heat shock proteins. // J. Biol. Chem. 1990. - V.25 -'65(21) -P. 12111-12114.

131. Schoel B. and Kaufmann S.H.E. The unique role of heat shock proteins in infections. // In Stress Proteins in Medicine. Ed. Van EdenW. and Young D.B. Marcel Dekker, Inc. - 1996. - P.27-51.

132. Schork N.J., Nath S.P., Lindpaintner K.? Jacob H.J. Extensions to quantitative trait locus mapping in experimental organisms. // Hypertension -1996 V.28 - №6-P.l 104-1 111.

133. Serikawa T., Kuramoto T., Hilbert P., Mori M., Yamada J., Dubay C.J., Lindpainter K., Ganten D., Guenet J.L., Lathrop G.M., et al. Rat gene mapping using PCR-analyzed microsatellites.// Genetics. 1992. - V.131 - - P.701-721.

134. Smirk F.H., Hall W.H. Inherited hypertension in rats // Nature. 1958. -V.152 - P.727.

135. Sorger P.K. Heat shock factor and the heat shock response. // Cell. 1991.-V.65 - №3- P.363-366.

136. Sorger P.K., Pelham H.R.B. Cloning and expression of a gene encoding hcs73, the major hsp70-like protein in unstressed rat cells // EMBO J. 1987. -V.6 - JVs4 - P.993-998.

137. Soubrier F.,Corvol P. Clinical implication of the molecular biologyof the renin-angiotensin system. // Eur. Heart J. 1990 - V.l 1 - P.3-10.

138. Sun Y.L., Kong D., Pravenec M., Kren V., Kunes J., Tremblay J., Hamet P. Genes of stress in experimental hypertension. // Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 1994. - V.21 - №11 - P.907-911.

139. Takaori K, Itoh S, Kanayama Y, Takeda T Protein kinase C activity in platelets from spontaneously hypertensive rats (SHR) and normotensive Wistar Kyoto rats (WKY). // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1986. - V.141 - №2 -P.769-773.

140. Tanase H., Suzuki Y., Ooshima A., Yamori Y., Okamoto K. Genetic analisis of blood pressure in spontaneously hypertensive rats // Jap. Circ. J. 1970. - V.34 -P.l 197-1212.

141. Thibonnier M., Schork N.J. The genetics of hypertension // Current Opinion in Genetics and Development. 1995. - JST25 - P.362-370.

142. Varmus H.E. Form and function of retroviral proviruses // Science. 1982. -V.216-P.812-820.

143. Weber J.L., May P.E. Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction. // Am. J. Hum. Genet. 1989. -V.44 - №3 r P.388-396.

144. Welsh J., Mc Clelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Nucl. Acids. Res. 1990. - V.18 - P.7213-7218.

145. Whitworth C.E., Fleming S., Cumming A.D., Morton J.J., Burns N.J., Williams B.C., Mullins J.J. Spontaneous development of malignant phase hypertension in transgenic Ren-2 rats. // Kidney Int. 1994. - V.46 - №6 -P.1528-1532.

146. Wick G. Is atherosclerosis an immunologically mediated disease? // Immunol. Today. 1995. - V.6 - P.27-33.

147. Williams J.G.K, Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A. and Tingey S.V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. //Nucl. Acids Res. 1990. - V.18 - №22 - P.6531-6535.

148. Wood D.L., Sheps S.G., Elveback L.R., Schirger A. Cold pressor test as a predictor of hypertension.//Hypertension. 1984. - V.6 - №3 - P.301-306.

149. Xu Q., Fawcett T.W., Udelsman R., Holbrook N.J. Activation of heat shock transcription factor 1 in rat aorta in response to high blood pressure. // Hypertension. 1996. - V.28 - №1 - P.53-57.

150. Xu Q., Li D.G., Holbrook N.J., Udelsman R. Acute hypertension induces heat shock protein 70 gene expression in rat aorta. // Circulation. 1995.- V.92 -№5 -P.1223-1229.

151. Young, R.A. and Elliot, T.J. Stress proteins, infection and immune surveillance. // Cell. 1989. - V.59 - P.5-8. ;

152. Zhang Q.Y., Dene H., Deng A.Y., Garrett M.R., Jacob H.J., Rapp J.P. Interval mapping and congenic strains for a blood pressure QTL on rat chromosome 13. //Mamm. Genome. 1997. - V.8 - №9 - P.636-641.