Подходы к разработке наносомальной лекарственной формы рифампицина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Оганесян, Ерванд Александрович

• Оганесян, Ерванд Александрович
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Оганесян, Ерванд Александрович

Список основных сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Биораспределение коллоидных систем при внутривенном вве- 11 дении. Влияние поверхностно-активных веществ на фармакоки-нетику коллоидных систем.

1.2. Коллоидные носители лекарственных веществ - способ повы- 17 сить эффективность противотуберкулезных агентов.

1.2.1. Внесосудистое введение

1.2.2. Внутривенное введение

1.3. Наночастицы из ПАЦА как носители лекарственных средств.

2. Материал и методы

3. Результаты и их обсуждение

3.1. Получение экспериментальной лекарственной формы

3.1.1. Изучение стабильности экспериментальной лекарственной 39 формы, разработка методов анализа

3.1.2. Влияние технологических параметров на свойства наноча- 53 стиц

3.2. Изучение фармакокинетики наносомального рифампицина

3.2.1. Сравнительная фармакокинетика свободного и наносомаль- 69 ного рифампицина

3.2.2. Влияние модификации поверхности наночастиц на биораспределение наносомального рифампицина.

3.2.2.1. Влияние полоксамера 407 на фармакокинетику нано- 77 сомального рифампицина

3.2.2.2. Влияние полоксамина 908 на фармакокинетику наносомального рифампицина

3.2.3. Накопление наносомального рифампицина в селезенке

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Подходы к разработке наносомальной лекарственной формы рифампицина»

Лечение внутриклеточных инфекций является серьезной проблемой, одним из решений которой может стать направленный транспорт антибиотиков в инфицированные клетки. Многие возбудители внутриклеточных инфекций, такие как Mycobacteria, Salmonella, Staphylococcus aureus и др., способны выживать и размножаться в макрофагах, естественной функцией которых является захват и уничтожение микроорганизмов. В этом случае макрофаги становятся нишей для патогенных микроорганизмов и мишенью для химиотерапии, а результативность лечения, очевидно, зависит от того, удается ли доставить лекарственное вещество в макрофаги в эффективных концентрациях.

Одним из путей решения этой проблемы является применение коллоидных систем доставки JIB на основе наночастиц. Хорошо известно, что нано-частицы обеспечивают эффективный транспорт адсорбированных JIB в макрофаги. Попадая в кровяное русло, наночастицы фактически повторяют путь бактерий, то есть фагоцитируются резидентными макрофагами и циркулирующими моноцитами. Во внутриклеточной среде частицы подвергаются деградации под действием ферментов и выделяют JIB, что позволяет достичь высоких внутриклеточных концентраций и, таким образом, обеспечить повышение терапевтической эффективности. Кроме того, наночастицы способны проникать и накапливаться в очагах патологии, для которых характерны повышенная проницаемость капилляров и нарушения лимфотока (зоны воспаления и опухолевого роста). Эти свойства наночастиц, наиболее выраженные при внутривенном введении, легли в основу концепции о возможном повышении эффективности противобактериальных JIB с помощью наночастиц. Действительно, было показано, что наночастицы значительно повышают эффективность антибиотиков при лечении экспериментальных инфекций, для которых характерна внутриклеточная локализация возбудителей, таких как, например, сальмонеллез или листериоз (77).

В последнее время в литературе появились также данные о высокой активности наносомальных препаратов при лечении туберкулеза у мышей (75). Однако эта область применения наночастиц мало изучена. В то же время, можно полагать, что создание наносомальных лекарственных форм позволит повысить эффективность и снизить токсичность применяемых в клинической практике противотуберкулезных средств. Это направление исследований приобретает особую актуальность в условиях значительного роста заболеваемости туберкулезом легких во всех странах мира.

Среди синтетических биодеградируемых полимеров, используемых для получения наночастиц, интерес представляют полиалкилцианокрилаты. На-ночастицы из полиалкилцианокрилатов обладают низкой токсичностью и эффективно сорбируют различные JIB [52, 101]. В водных растворах эти на-ночастицы образуют устойчивые коллоидные системы, пригодные для парентерального введения; препараты на их основе можно стерилизовать и хранить в лиофилизированном виде. Таким образом, наночастицы из полиалкилцианокрилатов являются перспективным носителем для создания коллоидных систем доставки JIB.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Разработать подходы к созданию наносомальной лекарственной формы рифампицина для внутривенного введения на основе наночастиц из полибу-тилцианоакрилата (ПБЦА); изучить фармакокинетику этой лекарственной формы.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи.

1. Разработать методику получения наносомальной формы рифампицина на основе наночастиц из ПБЦА; изучить влияние различных параметров процесса на характеристики наночастиц.

2. Изучить стабильность рифампицина в условиях полимеризации бу-тилцианоакрилата.

3. Разработать методику анализа рифампицина в наносомальной форме и в биологических образцах.

4. Сравнить фармакокинетику наносомального рифампицина и стандартной лекарственной формы рифампицина.

5. Изучить влияние модификации поверхности наночастиц на фармакокинетику наносомального рифампицина.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые разработан подход к созданию наносомальной лекарственной формы на примере полибутилцианоакрилатных наночастиц с рифампицином.

Впервые изучены параметры процесса получения наносомальной лекарственной формы рифампицина путем анионной полимеризации бутил-цианоакрилата в присутствии рифампицина.

Впервые изучена фармакокинетика наносомальной лекарственной формы рифампицина на основе наночастиц из ПБЦА. Показано, что модификация наночастиц поверхностно-активными веществами (полоксамер 407 и полоксамин 908) позволяет целенаправленно менять биораспределение наносомального рифампицина.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ

Показано, что применение наночастиц позволяет целенаправленно изменять фармакокинетику наносомального рифампицина, способствуя его распределению в органы ретикулоэндотелиальной системы. Можно полагать, что эта лекарственная форма будет эффективна при лечении инфекций, для которых характерна локализация возбудителей в органах РЭС (в том числе, туберкулеза).

Экспериментальные подходы, разработанные для оптимизации методов получения наносомальной формы рифампицина, могут быть использованы при создании других наносомальных препаратов.

Сформулирован ряд критериев для стандартизации наносомальных лекарственных форм для внутривенного введения и предложены соответствующие методы контроля качества.

Результаты фармакокинетического исследования могут быть использованы при выборе доз и режимов лечения в последующих биологических испытаниях наносомальной формы рифампицина.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

Российском Национальном Конгрессе «Человек и Лекарство» (Москва, 2004);

VII Российском съезде фтизиатров «Туберкулез сегодня» (Москва,

2003);

III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва,

2004);

1-ой Международной Конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2004 год)

31st Meeting of the Controlled Release Society (Honolulu, USA, 2004)

ПУБЛИКАЦИИ

Основное содержание диссертации опубликовано в 6 печатных работах.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы «Результаты и их обсуждение», заключения и выводов. Диссертация изложена на 109 листах машинописного текста и содержит 34 рисунка, 3 таблицы. Список литературы состоит из 108 наименований.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Оганесян, Ерванд Александрович

ВЫВОДЫ

1. Разработаны подходы к стандартизации экспериментальных на-носомальных лекарственных форм. Для стандартизации предложены следующие параметры и аналитические методы контроля: размер частиц (фотонная корреляционная спектроскопия), степень сорбции (спектрофотомет-рическое определение свободного рифампицина после отделения наночастиц методом ультрафильтрации); количественное определение рифампицина (ВЭЖХ или спектрофотометрия после растворения полимерной матрицы и других ингредиентов).

2. Отработана методика получения наносомальной лекарственной формы рифампицина на основе биодеградируемых наночастиц из полибу-тилцианоакрилата. Оптимизация ряда технологических параметров (рН полимеризационной среды, концентрация рифампицина, концентрация ПАВ) позволила получить лекарственную форму, удовлетворяющую установленным нами критериям: размер частиц не превышал 1 мкм при степени сорбции 60%.

3. Показано, что рифампицин стабилен в процессе полимеризации; наносомальный препарат можно лиофилизировать.

4. Применение неионогенного ПАВ (плюроник F68) в качестве стабилизатора позволяет значительно снизить размеры НЧ, однако в случае РИФ приводит также к снижению степени сорбции.

5. Впервые изучена фармакокинетика наносомальной лекарственной формы рифампицина на основе наночастиц из ПБЦА. Показано, что применение наночастиц позволяет модифицировать фармакокинетику антибиотика при внутривенном введении. Основным местом локализации наносомального рифампицина при внутривенном введении являются печень и селезенка. Интегральные показатели накопления AUC по сравнению со свободным рифампицином возрастают в печени в 2 раза, в селезенке в 2,5 раз.

Интегральный показатель накопления в плазме повышается в 1,3 раза по сравнению со стандартным рифампицином.

6. Впервые показано, что модификация поверхности наночастиц полоксамером 407 позволяет повысить уровень антибиотика в легких (в 1,8 раз), при этом значительно снижается накопление наносомального рифампицина в печени. Аналогичный эффект получен при модификации наночастиц полоксамином 908: накопление рифампицина в легких повышается в 1,5 раза.

7. Наносомальный рифампицин, модифицированный полоксамером 408, можно рекомендовать для дальнейшего изучения возможности доставки антибиотиков в легочную ткань.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что распределение лекарств в организме можно целенаправленно менять как на клеточном, так и на тканевом уровне, используя различные системы доставки. В последние годы отмечается возрастающий интерес к коллоидным системам доставки лекарственных веществ (JIB): липосомам, микрочастицам, наночастицам. Идея внутривенного использования таких систем для повышения избирательности действия противоинфекционных лекарственных средств основана, во-первых, на их способности накапливаться преимущественно в тканях с повышенной проницаемостью капилляров, во-вторых, на том, что коллоидные частицы повторяют путь бактерий, захваты-ваясь инфицированными макрофагами. Цель настоящего исследования - разработка методики получения противотуберкулезного антибиотика рифампицина, ассоциированного с наночастицами из ПБЦА, сравнительное изучение фармакокинетики свободного и наносомального рифампицина, изучение возможности использования ПАВов для направленной модификации биораспределения наносомального рифампицина.

Наночастицы из ПБЦА получают в «мягких» условиях: при комнатной температуре, нормальном давлении, без использования органических растворителей. Тем не менее, синтез проводится в кислой среде, поэтому было важно контролировать стабильность рифампицина в полимеризационной среде. Нами показано, что в этих условиях распадается не более 3% рифампицина, то есть при использовании предложенной методики в готовом продукте не будет значительного количества примесей.

Размер наночастиц не превышал 500-600 нм, т.е. был приемлем для внутривенного введения. Известно, что размер наночастицы из ПАЦА можно лиофилизовать и хранить длительное время в сухом виде. Растворитель (вода для инъекций) добавляется непосредственно перед использованием лекарственной формы. Мы показали, что размер наночастиц после ресуспендирования не меняется в течение 24 часов, что свидетельствует о безопасности внутривенного введения наносомального рифампицина.

Свойства наночастиц из ПАЦА зависят от большого числа технологических параметров, важнейшими из которых являются рН полимеризационной среды, концентрация стабилизатора/ПАВа, концентрация лекарственного вещества. Размер наночастиц понижался при повышении рН с 2 до 3, снижалась и степень сорбции. Скорость полимеризации тем выше, чем выше рН среды, и при более высоком рН к моменту добавления рифампицина в среде остается меньше мономера, на котором антибиотик может впоследствии сорбироваться. Повышение же размера наночастиц при использовании разных рН связано, скорее всего, с нуклеофильными свойстами рифампицина.

С целью уменьшения размеров наночастиц была изучена возможность применения ПАВа - плюроника Ф68 в качестве стабилизатора наночастиц. Действительно, при рН 2 размер частиц существенно снижался, что, возможно, связано с солюбилизацией. Однако снижалась и степень сорбции рифампицина, по-видимому, в связи с солюбилизацией антибиотика, «вымыванием» его из наночастиц. Поэтому на данном этапе мы отказались от использования ПАВа.

Концентрация рифампицина в полимеризационной среде - важнейший технологический параметр, определяющий свойства наносомальной лекарственной формы. Чем выше соотношение JlB/полимер, тем менее будет выражена токсичность полимера, однако с повышением концентрации JIB может наступить насыщение полимерной матрицы, что приведет к снижению степени сорбции. Мы показали, что в диапазоне концентраций 0,27 - 2,7 мг/мл изотерма сорбции примерно линейна, то есть насыщения полимерной матрицы не достигается. При концентрациях рифампицина выше 1,5 мг снижалась фильтруемость суспензии, повышался размер наночастиц, вероятно, вследствие низкой растворимости рифампицина при таких концентрациях, а также в связи с его нуклеофильными свойствами. Необходимо отметить, что при исходной концентрации рифампицина 1,5 мг/мл соотношение JIB/полимер очень высоко и составляет примерно 1/6.

Таким образом, была отработана методика получения наносомальной формы рифампицина; следующей задачей было фармакокинетическое исследование, в котором определяли накопление рифампицина в плазме основных РЭС-органах.

Наносомальный рифампицин накапливался в РЭС-органах более интенсивно по сравнению со стандартным. Площадь под кривой увеличилась в 2 раза для печени и в 1,3 раза для легких. Эти результаты легко объясняются особенностями биораспределения коллоидных систем. Одним из главных побочных эффектов рифампицина является гепатотоксичность, поэтому нужно искать способы снижения концентрации рифампицина в печени.

Как указано выше, ПАВы являются эффективными модификаторами распределения лекарственных веществ. Располагаясь на поверхности частиц, они придают поверхности гидрофильные свойства и создают эффективный стерический барьер, предотвращающий опсонизацию и фагоцитоз. Следовательно, понижается захват наночастиц макрофагами печени, увеличивается время циркуляции лекарственного вещества в кровотоке и за счет этого лекарственное вещество перераспределяется между РЭС-органами. Действительно, использование полоксамера 407 в качестве ПАВа позволило повысить уровень рифампицина в плазме в 1,5-2 раза, в легких - в два раза по сравнению со стандартным рифампицином. Очень важно отметить, что при использовании полоксамера 407 уровень рифампицина в печени снизился в два раза по сравнению с немодифицированным наносомальным рифампицином и был сопоставим с уровнем свободного рифампицина.

Схожие результаты получены для другого ПАВа — полоксамина 908. Уровень модифицированного полоксамином 908 наносомального рифампицина в плазме и легких был повышен в 1,5 раза по сравнению с немодифицированными наночастицами, в печени же накопление рифампицина снижалось до уровня свободного антибиотика.

Значительное повышение концентрации антибиотика в легких, печени и селезенке позволяет предположить, что модифицированная наносомальная лекарственная форма рифампицина проявит высокую активность при лечении туберкулеза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Оганесян, Ерванд Александрович, 2005 год

1. Рифампицин кристаллический порошок НД 42-9301-98

2. Рифампицин Ферейн®, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 0,15г. ФСП 420053171901

3. Рифампицин 0,05г и 0,15г в капсулах. ФС 42-2058-97

4. Adams LB, Sinha I, Franzblau SG, Krahenbuhl JL, Mehta RT. Effective treatment of acute and chronic murine tuberculosis with liposome-encapsulated clofazimine. Antimicrob Agents Chemother. 1999 Jul;43(7): 1638-43

5. Ahsan F, Rivas IP, Khan MA, Torres Suarez Al. Targeting to macrophages: role of physicochemical properties of particulate carriers—liposomes and microspheres~on the phagocytosis by macrophages. J Control Release. 2002 Feb 19;79(l-3):29-40. Review.

6. Ain Q., Sharma S, Khuller GK, Garg SK. Alginate-based oral drug delivery system for tuberculosis: pharmacokinetics and therapeutic effects. J Antimicrob Chemother. 2003 Apr;51(4):931-8. Epub 2003 Mar 13.

7. Ain Q., Sharma S., Garg S.D., Khuller G.D. Role of poly(DL-lactide-co-glycolide) in development of a sustained oral delivery system for antitubercular drug(s). International Journal of Pharmaceutics 239 (2002) 37-46

8. Araujo L., Lobenberg R., Kreuter J. Influence of the surfactant concentration on the body distribution of nanoparticlesJ Drug Targeting 6 (1999) 373385

9. Arias JL, Gallardo V, Gomez-Lopera SA, Plaza RC, Delgado AV. Synthesis and characterization of poly(ethyl-2-cyanoacrylate) nanoparticles with a magnetic core. J Control Release. 2001 Dec 13;77(3):309-21.

10. Bain DF, Munday DL, Cox PJ Evaluation of biodegradable rifampicin-bearing microsphere formulations using a stability-indicating high-performance liquid chromatographic assay: Eur J Pharm Sci. 1998 Dec;7(l):57-65

11. Barrow EL, Winchester GA, Staas JK, Quenelle DC, Barrow WW. Use of microsphere technology for targeted delivery of rifampin to Mycobacterium tuberculosis-infected macrophages. Antimicrob Agents Chemother. 1998 Oct; 42(10):2682-9.

12. Beaulac C, Sachetelli S, Lagace J. Aerosolization of low phase transition temperature liposomal tobramycin as a dry powder in an animal model of chronic pulmonary infection caused by Pseudomonas aeruginosa. J Drug Targeting 1999; 7: 33-41.

13. Behan N, Birkinshaw C, Clarke N. Poly n-butyl cyanoacrylate nanoparticles: a mechanistic study of polymerisation and particle formation Biomate-rials. 2001 Jun; 22(11):1335-44.

14. Brigger I, Chaminade P, Desmaele D, Peracchia MT, d'Angelo J, Gurny R, Renoir M, Couvreur P. Near infrared with principal component analysis as a novel analytical approach for nanoparticle technology. Pharm Res. 2000 Sep; 17(9): 1124-32.

15. Brigger I, Morizet J, Aubert G, Chacun H, Terrier-Lacombe MJ, Couvreur P, Vassal G. Poly(ethylene glycol)-coated hexadecylcyanoacrylate nanospheres display a combined effect for brain tumor targeting. J Pharmacol Exp Ther. 2002 Dec; 303 (3):928-36.

16. Calvo P, Gouritin B, Chacun H, Desmaele D, D'Angelo J, Noel JP, Geor-gin D, Fattal E, Andreux JP, Couvreur P. Long-circulating PEGylated poly-cyanoacrylate nanoparticles as new drug carrier for brain delivery. Pharm Res. 2001 Aug; 18 (8 ):1157-66.

17. Conley J, Yang H, Wilson T, et al. Aerosol delivery of liposome-encapsulated ciprofloxacin: aerosol characterization and efficacy against Fran-cisella tularenis infection in mice. Antimicrobial Agents Chemother 1997; 41: 1288-1292.

18. Demoy M., Andreux J.-P., Weingarten C., Gouritin В., Guilloux V., Couvreur P. Spleen Capture of Nanoparticles: Influence of Animal Species and Surface Characteristics. Pharmaceutical Research, vol. 16 No. 1. 1999

19. Deol P, Khuller GK Lung specific stealth liposomes: stability, biodistribu-tion and toxicity of liposomal antitubercular drugs in mice Biochim Biophys Acta. 1997 Mar 15; 1334 (2-3):161-72

20. Deol P, Khuller GK, Joshi K. Therapeutic efficacies of isoniazid and rifampin encapsulated in lung-specific stealth liposomes against Mycobacteriumtuberculosis infection induced in mice. Antimicrob Agents Chemother. 1997 Jun; 41 (6): 12.11-4

21. Dhillon J, Fielding R, Adler-Moore J, Goodall RL, Mitchison D. The activity of low-clearance liposomal amikacin in experimental murine tuberculosis. J Antimicrob Chemother. 2001 Dec;48(6):869-76.

22. Donald PR, Sirgel FA, Venter A, Smit E, Parkin DP, Van de Wal BW, Mitchison DA The early bactericidal activity of a low-clearance liposomal amikacin in pulmonary tuberculosis J Antimicrob Chemother. 2001 Dec;48(6):877-80

23. Douglas S.J., Ilium L., and Davis S.S. Particle size and size distribution fo poly(butyl 2-cyanoacrylate) nanoparticles. II. Influence of stabilizers. Journal of Colliid and Interface Science. Vol. 103 No. 1 January 1985.

24. Douglas S.J., Ilium L., Davis S.S., and Kreuter J. Particle size and size distribution of poly(butyl-2-cyanoacrylate) nanoparticles I. Influence of physico-chemical Factors. Journal of Colloid and Interface Science. Vol. 101, No. 1, September 1984

25. Duchene D, Ponchel G, Wouessidjewe D. Cyclodextrins in targeting. Application to nanoparticles. Adv Drug Deliv Rev. 1999 Mar l;36(l):29-40.

26. Dutt M, Khuller GK Chemotherapy of Mycobacterium tuberculosis infections in mice with a combination of isoniazid and rifampicin entrapped in Poly (DL-lactide-co-glycolide) microparticles J Antimicrob Chemother. 2001 Jun;47(6):829-35

27. Dutt M, Khuller GK. Sustained release of isoniazid from a single injectable dose of poly (DL-lactide-co-glycolide) microparticles as a therapeutic approach towards tuberculosis. Int J Antimicrob Agents. 2001 Feb; 17(2): 115-22.

28. Dutt M, Khuller GK. Therapeutic efficacy of Poly(DL-lactide-Co-Glycolide)-encapsulated antitubercular drugs against Mycobacterium tuberculosis infection induced in mice. Antimicrob Agents Chemother. 2001 Jan;45(l):363-6.

29. Elder AC, Gelein R, Oberdorster G, Finkelstein J, Notter R, Wang Z. Efficient depletion of alveolar macrophages using intratracheally inhaled aerosols of liposome-encapsulated clodronate. Exp Lung Res. 2004 Mar; 30 (2 ): 105-20.

30. Emary WB, Toren PC, Mathews B, Huh K. Disposition and metabolism of rifapentine, a rifamycin antibiotic, in mice, rats, and monkeys. Drug Metab Dispos. 1998 Aug;26(8):725-31.

31. Fattal E, Youssef M, Couvreur P, Andremont A. Treatment of experimental salmonellosis in mice with ampicillin-bound nanoparticles. Antimicrob Agents Chemother 1989; 33: 1540-3

32. Fawaz F., Bonini F., Maugein J., Lagueny A.M. Ciprofloxacin-loaded polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles: pharmacokinetics and in vitro antimicrobial activity. International Journal of Pharmaceutics 168 (1998) 255-259

33. Fawaz F., Guyot M., Lagueny A.M., Devissaguet J.Ph. Ciprofloxacin-loaded polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles: preparation and characterization. International Journal of Pharmaceutics 154 (1997) 197-203

34. Gaspar MM, Neves S, Portaels F, Pedrosa J, Silva MT, Cruz ME. Therapeutic efficacy of liposomal rifabutin in a Mycobacterium avium model of infection. Antimicrob Agents Chemother. 2000 Sep;44(9):2424-30.

35. Gipps E., Groscurt P., Kreuter J., Speiser P.P. The effects of poly(alkylcyanoaciylate) nanoparticles on human normal and malignant nesen-chymal cells in vitro. Int. J. Pharm. 40 (1987) 23-31

36. Gulyaev AE, Gelperina SE, Skidan IN, Antropov AS, Kivman GY, Kreuter J. Significant transport of doxorubicin into the brain with polysorbate 80-coated nanoparticles. Pharm Res. 1999 Oct;16 (10):1564-9

37. Henry-Michelland S, Alonso MJ, Andremont A, Maincent P, Sauzieres J, Couvreur P. Attachment of antibiotics to nanoparticles: preparation, drug release and antimicrobial activity in vitro. Int J Pharm 1987; 35: 121-7

38. Ilium L., Khan M.A., Мак E., and Davis S.S. Evaluation of carrier capacity and releaxe characteristics for poIy(butyl 2-cyanoacryIate) nanoparticles. International Journal of Pharmaceutics 30 (1986) 17-28.

39. Kabanov A.V., Lemieux P., Vinogradov S., Alakhov V. Pluronic® block copolymers: novel functional molecules for gene therapy. Advanced Drug Delivery Reviews 54 (2002) 223-233

40. Kabanov AV, Batrakova EV, Miller DW. Pluronic block copolymers as modulators of drug efflux transporter activity in the blood-brain barrier. Adv Drug Deliv Rev. 2003 Jan 21;55(l):151-64. Review.

41. Kante В., Couverur В., Dubois-Krack G., De Meester C., Guiot P., Roland M., Vercier M., Speiser P. (1982). Toxicity of polyalkylcyanoacrylate nanoparticles. I. Free nanoparticles. J. Pharm. Sci. 71: 786

42. Kreuter J. Colliodal drug delivery systems. N.Y.: Marcel Dekker Inc, 1994.-352p

43. Labana S, Pandey R, Sharma S, Khuller GK. Chemotherapeutic activity against murine tuberculosis of once weekly administered drugs (isoniazid and rifampicin) encapsulated in liposomes Int J Antimicrob Agents. 2002 C)ct;20(4):301-4.

44. Leemans JC, Juffermans NP, Florquin S, van Rooijen N, Vervoordeldonk MJ, Verbon A, van Deventer SJ, van der Poll T. Depletion of alveolar macrophages exerts protective effects in pulmonary tuberculosis in mice. J Immunol. 2001 Apr 1; 166(7): 4604-11.

45. Lenaerts V., Nagelkerke J.F., van Berkel N.J.C., Couvreur P., Grislain L., Roland M., and Speiser P. (1984). Toxicity and association of polycyanoacry-late nanoparticles with hepatocytes. J. Microencapsul. 1: 253

46. Lenaerts V., Raymond P., Juhasz J., Simard V.A., and Jolicoeur C. New method for the preparation of cyanoacrylic nanoparticles with improved colloidal properties. Journal of Pharmaceutical Sciences Vol. 78, No. 12, December 1989.

47. Lherm C., Muller R., Puisieux F., Couvreur P. PP. Cytotoxicity of cyanoacrylate nanoparticles with different alkyl chain length. Int. J. Pharm. 84 (1992) 13-22

48. Li YP, Pei YY, Zhou ZH, Zhang XY, Gu ZH, Ding J, Zhou JJ, Gao XJ, Zhu JH. Stealth polycyanoacrylate nanoparticles as tumor necrosis factor-alpha carriers: pharmacokinetics and anti-tumor effects. Biol Pharm Bull. 2001 Jun; 24 (6): 662-5.

49. Magenheim В., Benita S. Nanoparticle characterization: a comprehensive physicochemical approach. S.T.P. Pharma Sciences 1 (4) 221-241 1991.

50. Miyazaki, Т., Kohno, S., Sasayama, K., Inoue, Y., Нага, K., Ogasawara, M., Sato, Т., and Sunamoto, J., Polysaccharide-anchored liposomal amphotericin В for the treatment of murine pulmonary candidiasis. Tohoku J Exp Med, 168:483-490, 1992

51. Moghimi S.M. Re-establishing the long circulatory behaviour of poloxam-ine-coated particles after repeated intravenous administration: applications in cancer drug delivery and imaging. Biochimica et Biophysica Acta 1472 (1999) 399-403

52. Moghimi S.M., Hunter A.C. Poloxamers and poloxamines in nanoparticles engineering and experimental medicine. Trends in Biotechnology, 18 (2000), 412-420

53. Moghimi SM, Hunter AC, Murray JC. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacol Rev 2001; 53: 283-318

54. Moghimi SM, Szebeni J. Stealth liposomes and long circulating nanoparticles: critical issues in pharmacokinetics, opsonization and protein-binding properties. Prog Lipid Res. 2003 Nov; 42 (6):463-78. Review.

55. Moghimi SM. Opsono-recognition of liposomes by tissue macrophages. International Journal of Pharmaceutics 162 (1998) 11 18.

56. Muller R.H., Lherm C., Herbort J., Couvreur P. Propidium-iodide-loaded polyaldylcyanoacrylate particles — labeling conditions and ooading capacity. Colloid Polym Sci 269: 147-152 (1991).

57. O'Hara P, Hickey AJ. Respirable PLGA microspheres containing rifam-picin for the treatment of tuberculosis: manufacture and characterization. Pharm Res. 2000 Aug;17(8):955-61.

58. Page-Clisson M.-E., Pinto-Alphandary H., Ourevitch M., Andremont A., Couvreur P. Develppment of ciprofloxacin-loaded nanoparticles: physico-chemical study of the drug carrier. Journal of Controlled Release 56 (1998) 2332.

59. Pandey R, Zahoor A, Sharma S, Khuller GK Nanoparticle encapsulated an-titubercular drugs as a potential oral drug delivery system against murine tuberculosis Tuberculosis (Edinb). 2003;83(6):373-8

60. Pinto-Alphandary H, Andremont A, Couvreur P. Targeted delivery of antibiotics using liposomes and nanoparticles: research and applications. Int J Antimicrob Agents. 2000 Jan; 13(3): 155-68. Review.

61. Poiani, G.J., Kemnitzer, J.E., Fox, J.D., Tozzi, C.A., Kohn, J., Riley, and D J., Polymeric carrier of proline analogue with antifibrotic effect in pulmonary vascular remodelling. Am J Respair Crit Care Med, 155: 1384-1390, 1997

62. Quenelle DC, Staas JK, Winchester GA, Barrow EL, Barrow WW. Efficacy of microencapsulated rifampin in Mycobacterium tuberculosis-infected mice. Antimicrob Agents Chemother. 1999 May;43(5):l 144-51.

63. Quenelle DC, Winchester GA, Staas JK, Barrow EL, Barrow WW. Treatment of tuberculosis using a combination of sustained-release rifampin-loaded microspheres and oral dosing with isoniazid. Antimicrob Agents Chemother. 2001 Jun;45(6): 1637-44.

64. Seijo В., Fattal E., Roblot-Treupel L., Couvreur P. Design of nanoparticles of less than 50 nm diameter: preparation, characterization and drug loading. International Journal of Pharmaceutics, 62 (1990) 1-7

65. Sethuraman VV, Hickey AJ. Powder properties and their influence on dry powder inhaler delivery of an antitubercular drug. AAPS PharmSciTech. 2002;3(4):E28.

66. Sham JO, Zhang Y, Finlay WH, Roa WH, Lobenberg R. Formulation and characterization of spray-dried powders containing nanoparticles for aerosol delivery to the lung. Int J Pharm. 2004 Jan 28;269(2):457-67.

67. Sharma R., Saxena D., Dwivedi A.D., and Misra A. Inhalable Microparti-cles Containing Drug Combinations to Target Alveolar Macrophages for Treatment of Pulmonary Tuberculosis. Pharmaceutical Research, Vol. 18, No 10, October 2001

68. Shishoo CJ, Shah SA, Rathod IS, Savale SS, Kotecha JS, Shah PB. Stability of rifampicin in dissolution medium in presence of isoniazid Int J Pharm. 1999 Nov 10; 190( 1): 109-23

69. Sihorkar V, Vyas SP Potential of polysaccharide anchored liposomes in drug delivery, targeting and immunization J Pharm Pharmaceut Sci (www.ualberta.ca/~csps) 4(2): 138-158, 2001

70. Skidan IN, Bobruskin Al, Guliaev AE, Shalkharbaeva SD, Severin SE, Steinniger S, Kreuter J, Gel'perina SE. Optimization of "Photosens" pharma-kokinetics by biodegradable nanospheres Antibiot Khimioter. 2001;46(4):6-10

71. Skidan IN, Gel'perina SE, Severin SE, Guliaev AE Enhanced activity of rifampicin loaded with polybutyl cyanoacrylate nanoparticles in relation to in-tracellularly localized bacteria Antibiot Khimioter. 2003;48(l):23-6

72. Sommerfeld P., Schroeder U., Sabel B.A. Long-term stability of PBCA nanoparticles suspensions suggests clinical usefulness. International Journal of Pharmaceutics 155 (1997) 201-207

73. Sommerfeld P., Schroeder U., Sabel B.A. Sterilization of unloaded polybu-tylcyanoacrylate nanoparticles. International Journal of Pharmaceutics 164 (1998) 113-118

74. Steiniger SC, Kreuter J, Khalansky AS, Skidan IN, Bobruskin Al, Smir-nova ZS, Severin SE, Uhl R, Коек M, Geiger KD, Gelperina SE. Chemotherapy of glioblastoma in rats using doxorubicin-loaded nanoparticles. Int J Cancer. 2004 May l;109(5):759-67;

75. Suarez S, O'Hara P, Kazantseva M, Newcomer CE, Hopfer R, McMurray DN, Hickey AJ. Airways delivery of rifampicin microparticles for the treatment of tuberculosis. J Antimicrob Chemother. 2001 Sep;48(3):431-4.

76. Sunamoto J., and Sato T. Improved drug delivery directed to specific tissue using polysaccharide-anchored liposomes, in Tsuruta, T: Nakajima, A (eds), Multiphase Biomedical Materials. The Netherlands, pp. 169-171, 1989

77. Takada M., Yuzuriha Т., Katayama K., Iwamoto K., and Sunamoto J. Increased lung uptake of liposomes anchored with polysaccharides. Biochim Bio-phys Acta, 802: 237-244, 1984

78. Torchilin V.P. Drug targeting. European Journal of Pharmaceutical Sciences 11 Suppl. 2 (2000) S81 S91

79. Tseng Y.C., Hyon S.H., Ikada Y. Modification of the synthesis and investigation of properties for 2-cyanoacrylates, Biomaterials 11 (1990) 73-79

80. Vauthier C, Dubernet C, Fattal E, Pinto-Alphandary H, Couvreur P. Poly(alkylcyanoacrylates) as biodegradable materials for biomedical applications : Adv Drug Deliv Rev. 2003 Apr 25;55(4):519-48

81. Vauthier C., Schmidt C., Couvreur P. Measurement of the density of polymeric nanoparticulate drug carriers by isopycnic centrifugation. Journal of Nanoparticle Research 1: 411-418, 1999

82. Verdun C, Brasseur F, Vranckx H, Couvreur P, Roland M. Tissue distribution of doxorubicin associated with polyisohexylcyanoaciylate nanoparticles. Cancer Chemother Pharmacol. 1990;26(l):13-8.

83. Vinogradov Serguei V., Bronich Tatiana K., Kabanov Alexander V. Nanosized cationic hydrogels for drug delivery: preparation, properties and interactions with cells. Advanced Drug Delivery Reviews; 54 (2002) 135-147

84. Vyas SP, Kannan ME, Jain S, Mishra V, Singh P. Design of liposomal aerosols for improved delivery of rifampicin to alveolar macrophages. Int J Pharm. 2004 Jan 9;269(l):37-49.

85. Watnasirichaikul S, Rades T, Tucker IG, Davies NM. Effects of formulation variables on characteristics of poly (ethylcyanoacrylate) nanocapsules prepared from w/o microemulsions. Int J Pharm. 2002 Mar 20;235(l-2):237-46.

86. Whitehead TC, Lovering AM, Cropley IM, Wade P, Davidson RN. Kinetics and toxicity of liposomal and conventional amikacin in a patient with mul-tidrug-resistant tuberculosis. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1998 Nov; 17(11):794-7

87. Zhang Q, Liao GT, Wei DP, Zhang CJ. Increase of gentamicin uptake in cultured mouse peritoneal macrophage and rat hepatocytes when used in the form of nanoparticles. International Journal of Pharmaceutics 164 (1998) 21 -27.