Биодеградирующие и биосовместимые полимерные наночастицы как лекарственная форма антибиотиков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат биологических наук Абдрахманов, Серик Амиржанович

• Абдрахманов, Серик Амиржанович
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Абдрахманов, Серик Амиржанович

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Материал и методы исследования

2.1. Препараты, бактерии

2.2. Выделение лейкоцитов из периферической крови человека

2.3. Выделение альвеолярных макрофагов экспериментальных животных

2.4. Изучение взаимодействия антибиотиков с макрофагами кролика и опухолевыми клетками.

2.5. Антимикробное действие препаратов в отношении бактерий, локализованных внутриклеточно.

2.6. Изучение эффективности химиотерапии экспериментальной инфекции.

2.7. Определение активности антибиотиков в биосредах

2.8. Изучение взаимодействия доксорубицина на наночастицах с альвеолярными макрофагами и опухолевыми клетками.

2.9 Изучение цитотоксичности доксорубицина ассоциированного поли-н-бутилцианоакрилата.

2.10. Изучение противоопухолевой активности доксорубицина ассоциированного с наночастицами.

2.10.1. Перевиваемая опухоль Эрлиха у мышей.

2.10.2. Оценка результатов опытов на мышах с перевиваемыми опухолями.

2.11. Количественное определение доксорубицина.

2.12. Электронномикроскопическое исследование.

2.13. Кристаллографическое исследование.

2.14. Исследование острой неспецифической токсичности.

2.15. Статистический анализ полученных результатов

Глава 3. Взаимодействие наночастиц, содержащих антибиотики, с изолированными клетками макроорганизма.

Глава 4. Химиотерапевтическая активность наночастиц, содержащих антибиотики.

4.1. Химиотерапевтическая активность наночастиц, содержащих антибиотики, на клеточном уровне.

4.2. Химиотерапевтическая активность наночастиц, содержащих антибиотики, на уровне организма.

Глава 5 Токсичность поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц

5.1. Острая неспецифическая токсичность наночастиц

5.2. Цитотоксичность поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

RES — Ретикуло-эндотелиальная система

МПК — Минимальная подавляющая концентрация

МБК — Минимальная бактерицидная концентрация

К/В — Отношение клеточной концентрации к внеклеточной

Р — Доверительный полуинтервал

X — Средняя арифметическая величина i — Сумма вариантов п — Количество Константа скорости элиминации

А — Линейный коэффициент

Со — Кажущаяся начальная концентрация

Tl/2ß — Период полувыведения

Т1/2абс — Время полувсасывания

Тмакс — Время достижения максимальной концентрации

MRT — Среднее время удерживания

Vi — Кажущийся объем распределения

С1 — Общий клиренс

AUC — Площадь под фармакокинетической кривой

S.E. — Стандартная ошибка

F — Интенсивность перехода (АиСткани/А11Скрови)

НЧ — Наночастицы(-ц,-цах), используется в таблицах

Я — Ядро

Kl — Митохондрии

ГЭР — Гранулярный эндоплазматический ретикулум

Л — Лизосомы

ФЛ — Фаголизосомы

ФВ — Фагоцитарная вакуоль

ПП — Пиноцитозные пузырьки

ЦВ • — Цитоплазматический вырост

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биодеградирующие и биосовместимые полимерные наночастицы как лекарственная форма антибиотиков»

Актуальность темы

Для современной фармакологии, безусловно, одной из наиболее привлекательных идей является создание лекарственных форм обеспечивающих направленную доставку препаратов к месту действия. К настоящему времени весьма интенсивно ведутся исследования возможности использования коллоидных систем носителей лекарственных веществ в виде наночастиц. Под термином наночастицы принято понимать коллоидные частицы размером от 10 до 1000 нанометров, состоящие из макромолекулярного биодеградирующего и биосовместимого материала, в который активно внедрено лекарственное вещество. Считают, что своей структурой наночастицы имитируют вирусы или ли-попротеины, это обеспечивает их поглощение (пиноцитоз, фагоцитоз) фагоцитирующими клетками. Вместе с наночастицей ассоциированное лекарственное вещество может попадать во внутриклеточную среду. Активность препарата в клетке будет восстанавливаться при биодеструкции полимерной основы наночастицы, предположительно, в фаголизосоме. Гипотетически, таким образом, с помощью наночастиц можно обеспечить пассивно направленный транспорт лекарств во внутриклеточную среду фагоцитирующих клеток, т.е. в систему мо-нонуклеарных фагоцитов, ранее называвшуюся РЭС и в опухолевые трансформированные клетки, отличающиеся повышенной способностью к эндоцитозу. Очевидно, что более всего это было бы привлекательно для антимикробных препаратов в противобактриальной химиотерапии при инфекциях с внутриклеточной локализацией возбудителей и в противоопухолевой химиотерапии при лечении опухолевых заболеваний.

В целом, неудовлетворенность результатами традиционной химиотерапии является в настоящее время побудительным мотивом поиска новых лекарственных форм антибиотиков, обеспечивающих хотя бы относительную селективность распределения, т.е. направленный транспорт активного вещества в биофазу процесса.

Однако, проблема направленного транспорта антибиотиков с помощью полимерных наночастиц ввиду малочисленности, разрозненности и противоречивости фактических данных по фармакокинетике и химиотерапевтической активности к настоящему времени не решена. Это обстоятельство препятствует появлению новых лекарственных форм антибиотиков и передаче их для исследования в клинику.

Определение возможностей наночастиц как переносчиков антибиотиков, обеспечивающих относительную селективность распределения их в организме является, очевидно, актуальной темой исследований.

Цель работы:

Определение возможности использования полимерных поли-н-бутилциано-акрилатных наночастиц в качестве лекарственных форм для повышения доставки противобактериальных и противоопухолевых антибиотиков в биофазу.

Задачи исследования:

1. Определение параметров наночастиц как новых лекарственных форм антибиотиков.

2. Изучение клеточной фармакокинетики поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц содержащих ампициллин, гентамицин, доксициклин, диклоксациллина и доксорубицин.

3. Изучение химиотерапевтической активности антибиотиков на на-ночастицах.

4. Изучение цитотоксичности наночастиц.

5. Изучение острой неспецифической токсичности поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц.

Научная новизна работы

Впервые доказана возможность использования наночастиц как универсальных лекарственных форм для антибиотиков. Описана клеточная фармакокине-тика (связывание препаратов изолированными клетками макроорганизма) наночастиц, содержащих противоопухолевый антибиотик доксорубицин, противо-бактериальные антибиотики доксициклин, диклоксациллин. Уточнены характеристики фармакокинетики наночастиц с ампициллином и гентамицином. Для антибиотиков, ассоциированных с наночастицами, описана химиотерапевтиче-ская активность во внутриклеточной среде и на уровне организма. Предложена гипотеза, объясняющая роль сурфактанта Твин-80 в модификации результатов взаимодействия наночастиц с макрофагами. Впервые определена острая неспецифическая токсичность поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц и их цито-токсичность.

Практическое значение работы:

Результаты настоящей работы могут быть основой материала передаваемого в Фармакологический комитет для решения вопроса о клинических испытаниях наночастиц с антибиотиками.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Полибутилцианоакрилатные наночастицы могут быть лекарственными формами антибиотиков.

2. Наночастицы увеличивают доставку антибиотиков во внутриклеточную среду макрофагов и опухолевых клеток способных к эндоцитозу. 7

3. Антибиотики, доставленные наночастицами в клетки, проявляют высокую химиотерапевтическую активность во внутриклеточной среде.

4. Острая неспецифическая токсичность поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц и их цитотоксичность невелики.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на международной конференции "Médical raw material and phytopreparations for medicine and agriculture" (Караганда, 1999 г.), на пленуме правления Российского научного общества фармакологов «Фармакология и современная медицина» (1999 г.), на заседании проблемной комиссии «медико-биологические дисциплины» и межкафедральном заседании в Карагандинской медицинской академии.

Публикации

Основное содержание диссертации опубликовано в 9 печатных работах.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав, содержащих собственные результаты, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация изложена на 97 листах машинописного текста, содержит 35 рисунков, 24 таблиц. Список литературы включает 140 наименований.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Абдрахманов, Серик Амиржанович

ВЫВОДЫ

1. Установлены параметры острой неспецифической токсичности биоде-градирующих поли-н-бутилцианоакрилатных наночастиц размером 250 нм на белых мышах: DL^ =292 мг/кг DL^n =428 мг/кг DLgn =604 мг/кг. In vitro в концентрации 600 мкг/мл наночастицы не снижают жизнеспособность изолированных альвеолярных макрофагов кролика или асцитных клеток карциномы Эрлиха у мышей. Покрытие наночастиц Твином-80 приводит к снижению летальных доз на 15-20%. При включении в состав наночастиц доксору-бицина DL50 этого антибиотика возрастает в 17 раз.

2. Использование наночастиц обеспечивает увеличение концентрации ампициллина, диклоксациллина, доксициклина, гентамицина, доксорубицина в полиморфноядерных лейкоцитах, лимфоцитах и моноцитах крови человека, а также альвеолярных макрофагах кроликов до уровня превышающего внеклеточный в 1,6-8 раз при инкубации клеток с препаратами in vitro.

3. Покрытие наночастиц сурфактантом Твин-80 протектирует частицы от взаимодействия с белком, это приводит к уменьшению в 7 раз захвата наночастиц альвеолярными макрофагами.

4. Противобактериальные антибиотики ампициллин, диклоксациллин, доксициклин, гентамицин, ассоциированные с наночастицами, имеют в 10 раз больший по сравнению со свободным антибиотиком потенциал активности во внутриклеточной среде в отношении Salmonella typhimurium. Противоопухолевый антибиотик доксорубицин, ассоциированный с наночастицами проявляет высокую активность в отношении трансформированных клеток аденокарциномы молочной железы MCF резистентных к свободному препарату.

5 Противобактериальные антибиотики ампициллин и гентамицин, содержащиеся в составе наночастиц, почти в 10 раз более эффективны при лечении сальмонеллеза чем свободные препараты, а противоопухолевый антибиотик доксорубицин в составе наночастиц в 1,4-1,9 раза эффективнее в лечении опухоли Эрлиха за счет повышения биодоступности внутриклеточных мишеней.

6. Биодеградирующие поли-н-бутилцианоакрилатные наночастицы в качестве лекарственных форм для относительно селективной доставки антибиотиков во внутриклеточную среду организма характеризуются относительной стабильностью в удерживании связанного антибиотика в растворе in vitro при изменении температуры (4°- 45° С), pH (1,5 - 8,6), концентрации (10 - 1000 мкг/мл), размеров полимера (120 - 800 нм).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Биодеградирующие поли-н-бутилцианоакрилатные наночастицы среднего размера в 250 нм рекомендуется представить на рассмотрение Фармакологическому комитету в качестве лекарственных форм для направленного транспорта антибиотиков.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Абдрахманов, Серик Амиржанович, 2000 год

1. Кивман Т.Я., Рудзит Э.А., Яковлев В.П. Фармакокинетика химиотерапев-тических препаратов. М.: Медицина, 1982.- с. 255.

2. Холодов Л.Е., Яковлев В.П. Клиническая фармакокинетика. М.: Медицина. -1985.- 464 с.

3. Фирсов A.A. Зависимость «концентрация-эффект» применительно к анализу антимикробного действия антибиотиков // Фармакокинетические исследования при создании и применении лекарственных средств. Каунас 1987.-ч. 1.-с. 24-28.

4. Kitzes R. The pharmacodynamics of anti-infective agents (beta-lactams and aminoglycosides) // Abs. 3rd Jerusalem conf. Pharm. Sei. Clin. Pharm.- 1996.-P.18.

5. Van der Auwera P., Prinz G., Petrikkos G. Activity of intracellular antibiotics // Infection .- 1991.- №4.- P.5216-5223.

6. Венгеров Ю.Я. Антибактериальные средства в лечении инфекционных болезней // Тез. докл. I Российского национального конгресса «Человек и лекарство» 12-16 апреля 1992 года, Москва. М., 1992.-е. 11.

7. Vidal S.M., Pinner Е., Lepage Р., et al. Natural resistance to intracellular infections: Nrampl encodes a membrane phosphoglycoprotein absent in macrophages from susceptible (Nrampl dl69) mouse strains // J. Immunol. -1996.-v. 157.-P. 3559-3568.

8. Hof H. Macrolide eine gruppe von antibiotika mit breitem wirkungsspektrum // Immunol. Infekt. 1994.- №2.- P. 66-71.

9. Barker J., Brown M.R. Speculations on the influence of infecting phenotype on virulence and antibiotic susceptibility of Legionella pneumophila // J. Antimicrob. Chemother.- 1995.-№1.-P.7-21.

10. Susa M., Hacker J., Marre A.D. De novo synthesis of Legionella pneumophila antigenes during intracellular growth in phagocytic cells // Infect. Immun. -1996.-v. 64.-P. 1679-1684.

11. Laochumroonvorapong P., Paul S., Elkon K.B., Kaplan G. H О induces monocyte apoptosis and reduces viability of Mycobacterium avium-M intracellulare within cultured human monocytes // Infect. Immunol.- 1996.-№2.- P. 452-459.

12. Perronne C. Azitromycine et infection a mycobacterium avium // Pathol. Biol. Paris. 1995.- №6.- P.565-567.

13. Kalayjian R.C., Toossi Z.,Tomashefsky J.F. et al. Pulmonary disease due to infection by Mycobacterium avium complex in patients with AIDS // Clin. Infect. Dis. 1995.- №5 .- P. 1186-1194.

14. Mandell G. L. Delivery of antibiotics by phagocytes // Clin. Infect. Dis. -1994.-№5.- 922-925.

15. Van den Broeck P.J.,Seymonsbergen E.M. The influence of human granulocytes and monocytes on the antibacterial activity of Cefetamet against Staphylococcus aureus // J. Antimicrob. Chemother.- 1995.- №5.-P.611-622.

16. Kobayashi J., Hasegawa M., Nishida M. Alteration of serotype and drug susceptibility of some Pseudomonas aeruginosa isolates by exposure to human serum and polymorphonuclear leukocytes // Kansenshogaku Zasshi 1994.-№4.- P. 500-507.

17. Osterlund A. Are penicillin treatment failures in Arcanobacterium haemolyticum pharyngotonsillitis used by intracellulary resing bacteria? // J. Infect. Dis. 1995.- №2.- P. 131-134.

18. McOrist S., Mackie R.A., Lawson G.H. Antimicrobial suscepibility of ideal symbiot intracellular isolated from pigs with proliferative enteropathy // J. Clin. Microbiol. 1995.-№5.- P. 1314-1317.

19. Torlkovic E., Hibbs J.R., Miller J.S., Lits C.E. Intracellular bacteria in blood smears in patients with central venous catheters // Arch. Inter. Med. 1995.-№14.- P. 1547-1550.

20. Кивман Г.Я., Гуляев A.E. Клеточная фармакокинетика антибиотиков // Тез. докл. I Российского национального конгресса «Человек и лекарство» 12-16 апреля, М.: 1992.- с. 12.

21. Donowitz G.K. Tissue directed antibiotics and aintracellular parasites: complex interaction of phagocytes, phatogens, and drugs // Clin. Infect. Dis. -1994.- №5.- P.926-930.

22. Гуляев A.E., Кивман Г.Я. Клеточная фармакокинетика: состояние, перспективы, прикладное значение (на примере химиотерапевтических препаратов).- М.: ВНИИСЭНТИ, 1990.- Вып. 6.- с. 38.

23. Maurin М., Raoult D. Optimum treatment of intracellular infection // Drugs.- 1996.- v.52.- P. 45-59.

24. Garlia I., Pascual A., Conejo M.C., Perea E.J. Intracellular penetration of 5 quinolones into non-phagocytic cells // Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. -1996.- v. 14.- P. 167-170.

25. Лохвицкий C.B., Кивман Г.Я., Гуляев A.E., Ермекбаева Б.А. Направленный транспорт антибиотиков: варианты в эксперименте и клинике // Тез. докл. IV Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-М., 1997.- с.255.

26. Франкфурт О.С. Клеточные механизмы химио-терапии опухолей. М. Медицина 1976, 392с.

27. Goormaghtigh Е., Brasseur R., Huart P., Ruyssehaert J.M. Study of the Adriamycin Cardiolipin Complex Structure Using Attenuated Total Reffection Infrared /Spectroscopy, Biochemistry, 1987, 26, 1789-1794.

28. Kreuter J Colloidal drug delivery systems .- N.Y.: Marcel Dekker INC, 1994.-352 P.

29. Torchilin V.P. Polymer-coated long-circulating microparticulate pharmaceuticals // J. MicroencapsuL- 1998.- 15, №1.- P. 1-19.

30. Duchene D, Wouessidjewe D, Ponchel G. Cyclodextrins and carrier systems.-J Controlled Release.- 1999.- v.62, (1-2). P. 263-268

31. Kreuter J. Drug targeting with nanoparticles // Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1994.- v. 19.- P. 253-256.

32. Kreuter J. Evaluation of nanoparticles as drug-delivery systems H Compasison of the body distribution of nanoparticles with the body distribution of microspheres ( diameter lmk ), liposomes, and emulsions. Pharm. Acta. Helv.-1983.- v. 58.- P. 217-221.

33. Known G.S. Diblock copolymer nanoparticles for drug delyvery // Crit. Rev. Ther. Carrier Syst. 1998.- 15, №5.- 481-512.

34. Tice, T.R., and Gilley, R.M. Preparation of injectable controlledrelease microcapsules by a solvent-evaporation process. // J. Controleed Rel.-1985.-№ 2.-P. 343-345.

35. Fessi, H., Puisieux, F., Devissaguet, J. Ph., Ammoury, N., Benita, S. Nanocapsule formation by interfacial polymer deposition following solvent displacement // Int. J. Pharm.- 1989.- v. 55.- P. 1-6.

36. Matsumoto J., Nakada Y., Sakurai K., Nakamura T., Takahashi Y. Preparation of nanoparticles consisted of poly(L-lactide)-poly(ethylene glycol)-poly(L-lactide) and their evaluation in vitro. Int. J. Pharm.- 1999.- v. 185, №1.- P.93-101.

37. Couvreur P., Kante B., Roland M., Speiser P. Adsorbtion of antineoplastic drugs to polyalkylcyanoacrylate nanoparticles and their release in calf serum // J. Pharm. Sei. 1979.- v.68.- P. 1521-1527.

38. Kreuter J. Evalyation of nanoparticles as drug delivery systems. I. Preparation methods // Pharm. ActaHelv. - 1983.- v. 58.- P. 196- 199.

39. Grislain L., Couvreur P., Lenaerts V., et al. Pharmacokinetics and distribution of biodegradable drug- carrier // Int. J. Pharm. 1983.- v. 15.- P. 335-342.

40. Luck M, Schroder W, Harnisch S. et al., Identification of plasma proteins facilitated by enrichment on particulare surfaces: analysis by two-dimensional electrophoresis and N-terminal microsequencing//Electrophoresis.-1998.-18, №15.- 2961-2967.

41. Harnisch S, Muller R.H. Plasma protein adsorbtion pattern on emulsion for parenteral administration: establishment of a protocol for two-dimensional Polyacrylamide electrophoresis // Electrophoresis .-1998.- 19,№2.- 349-354.

42. Lamprecht A, Ubrich N, Hombreiro Perez M, Lehr C, Hoffman M, Maincent P. Biodegradable monodispersed nanoparticles prepared by pressure homogenization-emulsification.- Int J Pharm.- 1999 .- v. 184 .- P 97-105 .

43. Tribet C. Hydrophobically driven attachment of synthetic polymers onto surfaces of biological interest: lipid bilayers and globular proteins // Biochimie.- 1998.- 80,№5-6.- 461-473.

44. Kreuter J. Factors influencing the body distribution of polycrylic nanoparticles // Drug Targeting (P. Buri, A. Gumma , eds.) .- Amsterdam: Elsiver, 1985.- P. 51-68.

45. Muller R.H., Lherm C., Herbot J. et al., Alkylcyanoacrylate drug carrier // Int. J. Pharm. 1992.- v. 84.- P. 1-8.

46. Gref R., Minamitake Y., Peracchia M.T. et al. Biodegradable long-circulating polymeric nanospheres // Science.- 1994.- №263.- P.1600-1603.

47. Passirani C., Barratt G., Devissaguet J.P., Labarre D. Interations of nanoparti-cles bearing heparin or dextran covalently bound to poly(methyl methacrilate) with the complement system // Life Sei.- 1998.- 62, № 8.- P.775-785.

48. Osvald P,Clement 0,Chabon C et al. Liver positive enhancement after injection of superparamagnetic nanoparticles: respective role of circulating and up-taken particles.// Magn. Reson Imaging. -1997.- v. 15. № 9. - P. 1025- 1031

49. Demoy M., Gibaud S., Andreux J.P. et al. Splenic trapping of nanoparticles: complementary approaches for in situ studies // Pharm. Res. 1997 .- v. 14.-P. 463-468.

50. Demoy M., Andreux J.P., Weingarten C., et al. Spleen capture of nanoparticles: influence of animal species and surface characteristics // // Pharm. Res. 1999 .- v. 16.- P. 37-41.

51. Ermekbaeva B.A., Gulyaev A.E. The peculiarities of the pharmacokinetics of nanoparticle-bound gentamicin upon endolymphatic injection // Abs. 3rd Jerusalem conf. Pharm. Sei. Clin. Pharm.- 1996.- P.30.

52. Berton M, Benimetskaya L, Allemann E, Stein CA, Gurny R Uptake of oligonucleotide-loaded nanoparticles in prostatic cancer cells and their intracellular localization. Eur J Pharm Biopharm .- 1999 v.47, № 2. - P. 119123.

53. Kreuter J. Nanoparticles preparation and applications .- Fla.: CRC Press.-1992.- 125 P.

54. Bousquet Y., Swart P.J., Schmitt-Colin N. et al. Molecular mechanisms of the adsorbtiion of a model pritein (human serum albumin) on poly(methylidene malonate 2.1.2) nanoparticles //Pharm. Res.- 1999.-v.16.- P.141-147.

55. Barrat G. Long-circulating drug delivery systems // Adv. Drug Del. Rev. -1995.-v. 16.-P. 125-348.

56. Borchard G, Kreuter J. Iteraction of serum components with poly(methylcyanoacrilate) Nanoparticles and the resulting body distribution after intravenous injection in rats // J. Drug. Target. 1993.- v.l.- P. 15-22.

57. Scieszka J.F., Maggiora L.L., Wright S.D. et al. Role of complements C3 and C5 in the phagocytosis of liposomes by human neutrophils // Pharm. Res. -1991,-v. 8.-P.65-71.

58. Berton M., Benimetskaya L., Alleman E. Uptake of oligonucleotide-loated nanoparticles in prostatic cancer cells and their intracellular localization.- Eur. J. Pharm. Biopharm.- 1999.- v. 47, №2.- P. 119-123.

59. Troster S.D., Kreuter J. Contact angles of surfactants with a potential to alter the body distribution of coloidal drug carriers on poly(methylmetacrylate) surfaces // Int. J. Pharm.- 1988.- v.45.- P. 91-98.

60. Roser M., Fischer D., Kissel T. Surface-modified biodegradable albumin nano-and microspheres . II: effect of surface charges on in vitro phagocytosis and biodistribution in rats // Eur. J. Pharm. Biopharm.- 1998.- 46, №3.- P.255-263.

61. Borchard G., Kreuter J. The role of serum complement on the organ distribution of intravenously administered poly (methyl methacrylate)nanoparticles: effects of pre-coating with serum complement // Pharm. Res . -1996.-v. 13.-P. 1055-1058.

62. Labhasetwar V., Song C., Humphrey W., et al. Arterial uptake of biodegradable nanoparticles: effect of surface modifications // J. Pharm. Sci.- 1998.- 87, № 10.-P. 1229-1234.

63. Ilium L., Davis S.S., Muller R.H., Mak E., and West P. The organ distrbution and circulation time of intravenously injected colloidal carriers sterically stabilized with a blockcopokymer poloxamine 908.// Life. Set.- 1987.- v. 40.-P. 367-371.

64. Troster S.D., Kreuter J. Influence of the surface properties of low contact angle surfactants on the body distributions of C-poly(methyl methacrilate) nanoparticles // J. Microencapsul. 1992.-v.9.-P. 19-26.

65. Sestier C., Da-Silva M.F., Sabolovic D. et al. Surface modification of superparamagnetic nanoparticles (Ferrofluid) studied with particle electrophoresis: application to the specific targeting of cells // Electrophoresis .- 1998.- 19, № 7.-P.1220-1226.

66. Araujo L, Lobenberg R, Kreuter J. Influence of the surfactant concentration on the body distribution of nanoparticles.- J Drug Target.- 1999.- v.6, № 5.- P. 373-385.

67. Borchard G., Kenneth L., Fenglin Sh., Kreuter J. Uptake of surfactant coated poly( methyl methacrilate) - nanoparticles by bovine brain microvessel endothelial cell monolayers // Int. J. Pharm. - 1994.- №110.- P. 29-35.

68. Schroeder U., Sommerfeld P., Sabel B.A. Efficacy of oral dalargin-loaded nano-particle delivery across the blood-brain barrier // Peptides.- 1998.- 19, №4.- P.777-780.

69. Cremaschi D., Porta C., Ghirardelli R. Different linds of polypeptides and polypeptide- coated nanoparticles are accepted by the selective transcytosis shown in the rabbit nasal mucosa//Biochim. Biophys. Acta. 1999.- v. 12.- P.31-38.

70. Yang SC, Lu LF, Cai Y, Zhu JB, Liang BW, Yang CZ. Body distribution in mice of intravenously injected camptothecin solid lipid nanoparticles and targeting effect on brain. J Controlled Release.- 1999.- v.59, №3.- P.299-307.

71. Landry F.B. Bazile D.V., Spenlehauer G. Peroral administration of 14C-poly(D,L-lactic acid) nanoparticles coated with human serum albumin or polyvinil alcohol to guinea pigs // J. Drug Target. 1998.- v. 6.- P.293-307.

72. Maincent P., Thouvenot P., Amicable C., et al. Lymphatic targeting of polymeric nanoparticles after intraperitoneal administration in rats // Pharm. Res. 1992.- v.9.- P. 1534-1539.

73. Kreuter J. Physicochemical characterization of nanoparticles and their potential for vaccine preparation // Vaccine Res. 1992.-v. 1.-P. 93-101.

74. Mclntire G.L.,Bacon E.R., Toner J.L., et al. Pulmonary delivery of nanoparticles of insoluble, iodinated CT X-ray contrast agents to lung draining lymph nodes in dogs // J. Pharm. Sci.-1998.- 87, №11.- P. 1466-1470.

75. Ketai L.H., Muggenberg B.A., Mclntire G.L., et. al. CT imaging of intrathoracic lymph nodes with bronchoscopically administered iodinated nanoparticles // Acad. Radiol. 1999.- 6, №1.- P.49-54.

76. McClean S., Prosser E., Meehan E. et al. Binding and uptake of biodegradable poly-DL-lactide micro and nanoparticles in intestinal epithelia // Eur. J. Pharm. Sei. -1998.-6, №2.-P. 153-163.

77. Jani P., Haibert G.W., Langridge J., Florence A.T. Nanoparticle uptake by the rat gastrointestinal mucosa: quantitation and particle size dependency // J. Pharm. Pharmacol. 1990.- № 42.- P. 821-826.

78. Bargoni A., Cavalli R., Caputo O., et. al. Solid lipid nanoparticles in lymph after duodenal administration to rats // Parm. Res. 1998.- 15, №5.- P.745-750.

79. Desai M.P., Labhasetwar V., Amidon G.L., Levy R.J. Gastrointestinal uptake of biodegradable microparticles: effect of particle size // Pharm. Res. 1996.-v. 13.-P 1883-1845.

80. Couvreur P., Fattal E., Alphandary H., et al. Intracellular targeting of antibiotics by means of biodegradable nanoparticles // J. Controlled Rel. -1992.-v. 19.-P. 259- 264.

81. Fontana G., Pitaressi G., Tomarchio V., et. al. Preparation, characterization and in vitro antimicrobial activity of ampicillin-loaded polyethylcyanoacrylate nanoparticles //Biomaterials .- 1998.- 19, № 11-12.- P. 1009-1017.

82. Zhang Q.,Liao G.T. Studies on in vitro release kinetics of gentamicin sulfate polybutylcyanoacrylate nanoparticles // Yao Hsueh Hsueh Pao .- 1995.- v.30.-P. 459-465.

83. Fresta M., Puglisi G., Giammona G., et al. Pefloxacine mesilate- and ofloxacin -loated polyethylcyanoacrylate nanoparticles: characterization of the colloidal drug carrier formulation // J. Pharm. Sei. 1995.- v. 84.- P. 895-902.

84. Page-Clisson M.E., Pinto-Alphandary H., Ourevitch M., et al. Development of cip-rofloxacin-loaded nanoparticles: physicochemical study of the drug carrier // J. Controlled Release. 1998.- 4, №1-3.- P.23-32.

85. Sen N., Samanta A., Baidya S., et al. Development of amphotericin B loaded nanoparticles //Boll. Chim. Farm. 1998.- 137, № 8.-P. 295-297.

86. Leo E., Arletti R, Forni F., Cameroni R. General and cardiac toxicity of doxorubi-cin-loaded gelatin nanoparticles // Farmaco .-1997.- 52, №6-7.- P.385-388.

87. Fattal E., Rojas J., Andremont A., Couvreur P. Liposome entrapped ampicillin in the treatment of experimental murine listeriosis and salmonellosis // Antimicrob. Agents Chemother. - 1991.- v. 35.- P. 770-777.

88. Page-Clisson ME, Pinto-Alphandary H, Chachaty E, et al. Drug targeting by polyalkylcyanoacrylate nanoparticles is not efficient against persistent Salmonella.// Pharm. Res.- 1998. v. 15. - № 4. p. 544-549

89. Oh I., Leep K., Kwon H. Y., Lee Y.B., Shin S.C., Cho C.S., Kim C.K. Release of adriamycin from poly(gamma-benzyl-L-glutamate)/poly(ethylene oxide) nanoparticles. Int J Pharm.- 1999 v. 181, №1.- P. 107-115.

90. Yoo H.S., Oh J.E., Lee K.H., Park T.G. Biodegradable nanoparticles containing doxorubicin-PLGA conjugate for sustained release.- Pharm. Res.-1999.- v. 16, №7.- P. 1114-1118.

91. Gibaud S., Weingarten C., Andreux J.P, Couvreur P. Targeting bone marrow with the help of polyalkylcyanoacrylate nanoparticles.- Ann. Pharm. Fr .1999.- v.57, №4.- P324-331.

92. Lherm C., Couvreur P., Loiseau P., et al. Unloaded polyisobutylcyanoacrylate nanoparticles: Efficacy against bloodstream trypanosomes // J. Pharm. Pharmacol. 1987.- v.39.- P.650-655.

93. Schroeder U., Säbel B.A., Schroeder H. Diffusion enhancement of drugs by loaded nanoparticles in vitro. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry.-1999,-v. 23,№5.-P. 941-949.

94. Hoffmann F., Cinatl J., Kreuter J., Stieneker F. Preparation, characterization and cytotoxicity of methylmethacrylate copolymer nanoparticles with a permanent positive surface charge.- Int. J. Pharm. 1997.- v.157, №2.- P.189-198.

95. Gipps E.M., Groscurth P., Kreuter J., Speiser P.P. The effects of polyalkylcyanoacrilate nanoparticles on human normal and malignant mesenchymal cells in vitro // Int. J. Pharm. 1987.- v. 40.- P. 23-31.

96. Schafer V., Bliesen H., Rubsamen-Waigmann H. et al. Phagocytosis and degradation of human microphages // JMicroencasul.- 1994.-v. 67.-P.18-23.

97. Fernandes Urrusino R., Fattal E., Rodrigues J.M. et al. Effect of polymeric nanoparticle administration on the clearance activity of the mononuclear phagocyte system in mice // J. Biomed. Mater. Res. - 1996.- v.31.- P. 401408.

98. Cruz T., Gaspar R., Donato A., Lopes C. Interaction between polyalkylcyanoacrylate nanoparticles and peritoneal macrophages : MTT metabolism, NBT reduction, and NO production // Pharm. Res. 1997.- v. 14.- P.73-79.

99. Simionova M., Chorbadjiev K., Antcheva M. Study of the effect of polybu-tylcyanoacrylate nanoparticles and their metabolism on the primary immune response in mice to sheep red blood cells // Biomaterials. 1998 .- 19, №23.- P. 2187-2193.

100. Fernandez-Urrusino R, Fattal E., Feger J. et al. Evaluation of hepatic antioxidant system after intravenous administration of polymeric nanoparticles // Biomaterials .- 1997.- v. 18.- P. 511-517.

101. Fattal E., Yousef M., Couvreur P., et al. Treatment of experimental salmonellosis in mice with ampicillin-bound nanoparticles // Antimicrob. Agents Chemother. 1989.- v.33.- P. 1540-1546.

102. Навашин C.M., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. Справочник. М. Медицина, 1982.- 496с.

103. Boym A. Isolation of mononuclear cells and dranulocytes from human blood // Scand. J. Invest. 1968.- v.91.- P. 77-89.

104. Будкер В.Г., Вахрушева Л.Л., Киселева И.П. Получение липосом с лекарственными препаратами //Хим.-Фарм. Журнал. -1987.- N 3.- с. 347-352.

105. Преображенский С.И., Репин B.C., Иванов В.О. Липопротеины низкой плотности как средство химич. о-ва им. Д.И. Менделеева. -1987.-Т.32, N 5.-е. 67-70.

106. Lowry О.Н., Roseuberough N.J., Fan* A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. -1952.- v. 193.- P 265-276.

107. Mandell G. L. Interaction of intraleukocytic bacteria and antibiotics // J. Clin. Invest. 1973.- v. 52.- P. 1673-1679.

108. Wagner R. Intracellulare antibacterielle wirksamkeit der antibiotika in polymorphkernigen leikoziten // Diss. Doct. Med. Fak.Teoh.Univ.- Munchen.-1988.- 76 S.

109. Першин Г.Н. Экспериментальная химиотерапия M.: Медицина.- 1971 .- 430 с.

110. Гров Д.С., Рендалл В.А., Руководство по лабораторным исследованиям антибиотиков. М.: Медгиз, 1958.- с. 296.

111. Takimoto М., Voshioka Н. Two dimentional diffusional methods for determining antimicrobial agents // Jap. J. Antibiot.- 1979.- v. 32.- P. 630635.

112. Louvois J. Factors influence the assay of antimicrobial drugs in clinical samples by the agar plate diffusion method // J. Antimicrob. Chemother.-1982.- v.9.- P. 253-265.

113. Государственная Фармакопея СССР.- XI издание. Т. 2.- М.: Медицина, 1990.- с. 398.

114. Дмитриева B.C., Семенов С.М. Микробиологический контроль активности антибактериальных препаратов. М.: Медицина, 1965.- с. 363.

115. Тебякина А.Е., Дружинина Е.И. Микробиологические методы определения активности антибиотиков и испытание их стерильности // Методы экспериментальной химиотерапии. М., 1971.- С. 507-523.

116. Методы кристаллографических исследований в биологических субстратах при хронической интоксикации соединениями фосфора и свинца / Н.Ж Орманов, К.Д. Мендыбаев, Д.А. Адильбекрва и др. Методические рекомендации. - Шымкент, 1992. - 16 с.

117. Базарный В.В. Зыкина О.В., Трифонова Е.В. Оценка структурно-оптических свойств сыворотки крови: патогенетическое и диагностическое значение // Клиническая и лабораторная диагностика.- 1997.- №6.-с.24-25

118. Справочник по прикладной статистике. В 2-х т.: Пер. с англ. / Под ред. Ллойда, У. Ледермана, Ю.Н.Тюрина. —М.: Финансы и статистика, 1989.—510 е.: ил.

119. Малета Ю.С., Тарасов В.В. Математические методы статистического анализа в биологии и медицине. М.: МГУ, 1981.- 179 с.

120. Porte F., Liautard J. P., Kohler S. Early acidification of phagosomes containing Brucella suis is essential for intracellular survival in murine macrophages // Infect. Immun. 1999.- v.67.- P.4041-4047

121. Sugiyama T, Sadzuka Y, Nagasawa K, Ohnishi N, Yokoyama T, Sonobe T. Membrane transport and antitumor activity of pirarubicin, and comparison with those of doxorubicin // Jpn. J. Cancer Res.- 1999.- v. 90.- P.775-780.

122. Weinrauch Y, Zychlinsky A. The induction of apoptosis by bacterial pathogens // Annu. Rev. Microbiol. 1999.- v.53.- P. 155-187.

123. Walters J.D, Zhang F., Nakkula R.J. Mechanisms of fluoroquinolone transport by human neutrophils // Antimicrob. Agents Chemother.- 1999.-v.43, №11.-P. 2710-2715.

124. Гуляев A.E., Кивман Г.Я. Клеточная фармакокинетика антибиотиков // Первый Российский конгресс «Человек и лекарство», (12-16 апреля 1992 г., Москва).- М., 1992.- с. 12.

125. Blagoeva P.M., Balansky R.M., Mircheva TJ. Diminisched genotoxicity of mitomycin С and farmarubicin included in polybutylcyanoacrylate nanoparti-cles // Mutat. Res. 1992.- v. 268, N 1.- P.77-82.

126. Leo E., Arletti R., Forni F. Genaral and cardiac toxicity of doxorubicin-loaded gelatin nanoparticles // Farmaco.- 1997.- v.52.- P.385-388.

127. Muller R.H., Ruhl D., Runge S., Schulze-Forster K. Cytotoxicity of solid lipid nanoparticles as a function of the lipid matrix and the surfactant // Pharm. Res. 1999.- v.14.- P.458-462.

128. Borchard G., Kreuter J. Role of serum complement on the organ distribution of intravenously administered poly(methyl metacrilate) nanoparticles: ef97feet of pre-coating with plasma and with serum complement // Pharm. Res. -1996.-v. 13.-P. 1055-1058.

129. Armstrong T.I., Davis M.C., Ilium L. Human serum albumin as a probe for protein adsorption to nanoparticles: relevance to biodistribution // J. Drug Target. 1997.- v.4.- P. 389-398.

130. Скидан И.Н., Тритэк B.C., Гельперина С.Э. Покрытие наночастиц по-лисорбатом 80 ускоряет их проникновение в фагоцитирующие клетки // Тез. докл. VI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» .М, 1999.- с.470.